UAM3282

UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA
DIVISION DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y
IZTAPAL APA
DE L A SALUD
CASA ABIERTA AL TIEMPO
//.. CAMBIOS EN LA EXCIT.\BILlDAI)
NEURONAL DI< LA
RATA Y E T , RATON PRODUCIDOSPOR EL TRATAMIENTO NEONATAL CON GLUTXMATO MONOSODICO" I
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EXPERIMENTAL
N
A:
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CESAR
ARMANDO
CASTELLANOS_ -_ PEREZ,
MEXICO, D.F.,
1995
UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA IZTAPALAPA

DIVISION DE CIENCIAS BIOLOGICASY DE LA SALUD
ftCAMBIOSEN LA E X C I T A B I L I D A D NEURONAL DE LA RATA Y E L CON RATON PRODUCIDOS POR E L TRATAMIENTO NEONATAL GLUTAMATO MONOSODICO" ! \
TUTOR DE LA TESIS: ASESORES:
Prof
Inv
ALFONSO
EFRAIN CAMPOS SEPULVEDA
C J O S E ANTONIO GALINDO MORALES M en M en C GABRIEL ROLDAN ROLDAN Dr RUBEN ROMAN RAMOS
ALUMNO:
BIOLEXP CESAR
ARMANDO
CASTELLANOS
PEREZ
SITIO
EN
SE REALIZO LA TESIS: DONDE
Laboratorio de Toxicologa del Departamento de Farmacologa Facultad de Medicina, UNAM y Laboratorio de Formacin Reticular, Unidad de Investigaciones Cerebrales, Ins ti tuto Nacional de Neurologa y Neurociruga, "Dr Manuel Velasco Surez" Secretara de Salud. Mxico,D. F.
LaMaestria enBiologiaExperimentalcuentaconelapoyodeCONACyT segn e l convenio PFPN/66/92 por considerarse con e l n i v e l de excelencia.

" 1 p . . . -
"
. " " . . .
"
DEDICATORIA
A M I PADRE: RICARDO CASTELLANOS VELASCO
A M I MADRE: A L I C I A PEREZ DE CASTELLANOS
A TODOS LOS QUE CON SU P R E C I O S AA YUD HA ICIERO PN OSIBLE LA REALIZACION DE ESTA TESIS: EE'RAIN CAMPOS. CLAUDIA GOMEZ, ALVARO Ma. de LOURDES SANVICENTE, GABRIEL ROLDAN. VARGAS. ANTONIO VIDAL. JOAQUINMANJARREZ Y RAULALVARADO.
CASTORENA MUY ESPECIALMENTE A G L O R I A tie LOURDES ENERGIANECESARIAPARACONCLUIR ESTE T R A B A J O .
POR
DARME
LA
Y ESPECIALMENTE A LAS RATAS Y A LOS REALIZAR ESTOS ESTUDIOS.
RATONES
QUE
DIERON SU VIDA PARA
Agradezco a CONACyT el apoyo econmico que me brind durante mis 81598 estudios, a travs de la beca con nmero de registro
RESUMEN
Los aminocidos excitatorios ( A B ) , estan involucrados en procesos jisiolgicos tales como el aprendizaje, la memoriayen el desarrollo de plasticidad neuronal.Perobajo condiciones patolgicas tambin estn involucrados en neuropatologas agudas como: hipoxidisquemia y trauma hipoglucmico y neuropatologas crnico-degenerativas como: Alzheimer, Huntington, epilepsia, Parkison y esclerosis multiple. Por todo lo anterior, se consider de interes estudiar la sensibilidad de los roedores tratados en la etapa neonatal con glutamato monosdico (GMS) a la estimulacin elctrica hipocampal en la rata y al "kindling" inducido qumicamente con pentilenetetrazol (PTZ) en el ratn. Se emplearon ratas wistar y ratones taconic, ambos machos,reciennacidos, los cuales se separaronentresgrupos, I experimental, 1 1 controlsalino (solo las ratas)y III controlabsoluto (solo ratones).A los animales del grupo I se les administr 2mg/g SC de GMS el 20. y 40. diu y 4mg/g el 60., 80. y IO da postnatal. El grupo 1 1 recibi con el mismo calendario solucin jisiolgica salina (O.Olml/g) y el grupo 111 no recibitratamientoalguno. En la etapa adulta las ratas se sometieron a ciruga estereotxica, se hicieron cuatro trepunos,el primero (Anteroposterior (M) -3.3 mm, Lateral (L) -2 mm, Vertical ( v ) -3.5mm], con respecto a bregma (giro dentado del tres en la zona frontoparietal lateral (corteza hipocampo (GDH)), y los otros somatosensorial(CSS)). Se coloc un electrodo de acero inoxidable en cada uno delos trepanos. Se hizo el anlisis de Ji.ecuencias del electroencefalograma (EGG espectral) del GDH y CSS y as observarposibles anormalidades en la excitabilidad neuronalde las ratas tratadas con GMS. Se estimul el GDH (100 Hz, I mseg, 250 p4) cada 20 min, 1O veces,antesydepus del estmulo del GDH y corteza se registro el electroencefalograma por 2 min. Los ratones, en la etapa adulta se les administr YTZ en las siguientes dosis: 40, 50, y 60 mg/kg sc cada 24 hrs durante I O das y depus de aplicada la inyeccin se evalu la latencia ala primera mioclona M, nmero de M , latencia a la primera crisis parcial (CP), nmero de CP, latencia a la primera crisis generalizada (CC) y nmero de CG durante 30 min. Los resultados indican que las ratas tratadas en la etapa neonatal con el GMS presentan alteraciones en el analisis del espectro de EEG en GDH y de la CSS mostrando un incremento signljicativo en la actividad de ondas delta y menor actividad de ondas a r a y beta (P<O.05). los ratones tratados en la etapa neonatal con GMS son signykativamente ms sensibles al PTZ manifestada por un mayor nmero de M , CP y CG (P<O.05) como una menor latencia a las mismas que los ratones control. Concluimos que la exposicin de los roedoresestudiadosen la etapaneonatalal aminocido excitatorio determina una disminucinen el umbral de excitabilidad neuronal en la etapa aldulta que da lugar a una facilitacin en la induccin del "kindling"por P E .
CONTENIDO
2 . NEUROINTOXICACION CON GLUTAMATO 2.1 2.2 2.3 3.4
......2 2 Antecedentes .............................. Sndrome del glutamato monosdico .........3 Mecanismos de laneurotoxicidad ...........4
MONOSODICO P a t o l o gr e al sa c i o n ac do an s la 6
excitotoxicidad
...............................
. LOS
RECEPTORES A GLUTAMAT0
3.1 El receptor 3.2 El receptor 3.3 El receptor 3.4 El receptor
....................... 7 NMDA ............................ 8 ............................ 8 AMPA kainato ......................... 9 metabotrpico ...................9

........16
. LOS AMINOACIDOS
.
EXCITATORIOS Y LA EPILEPSIA
5 ELHIPOCAMPO 5.1 5.2
....................................... 18 18 Anatoma hipocampal ......................... Plasticidad neuronaly el hipocampo .........20
. MODELOS ANIMALES DE EPILEPTOGENESIS ................21

6.1 El ttKindlingll como modelo de epileptognesis 6.2 Modelo
.................................. 22 de epiepsia con pentilenetetrazol .....26
7 HIPOTESIS
...........................................
28
. OBJETIVO ............................................
29
9.MATERIALYMETODOS
..................................
neonatal con glutamato
30
9.1 Tratamiento
monosdico en roedores
.......................... 9.1.1Enlas ratas .......................... 9.1.2 E n l o s ratones ........................

Ciruga estereotxica de electrodos en de
30 30 31
9.2
implantacin
crnica
las ratas ................ 31
9.3 Induccin del ltkindlingn1 qumico con pentilenetetrazol

9.4
Anlisis
............................... estadstico .......................
35 35
10. RESULTADOS 10.1
........................................
de
las bandas del dela rata
36 EEG 36
Actividad relativa
en el GDH y CSS 10.2 por
......................
de
Sensibilidad a la induccin PTZ 10.2.1 en los ratones
Itkindlingtt 37
..........................
la
Latencia presentar a
primera 37 primera 38
mioclonia 10.2.2 crisis 10.2.3 con
.................................
a presentar la
Latencia parcial
............................
Incidencia en el nmero de mioclonias PTZ
...................................
38
10.2.4
Nmero de crisis parciales
y crisis
40
generalizadas
..............................
11.DISCUSIONDERESULTADOS
............................
41
12
. CONCLUSIONES ....................................... . BIBLIOGRAFIA .......................................
45
13
46
_""
" "
-. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1. INTRODUCCION.
El Acido Glutmico (Glu) es un aminocido no esencial que forma parte del 20% de las protenas de la dieta normal humana. Este aminocido tiene mltiples funciones biolgicas. En los
animales forma parte del metabolismo del carbn y del nitrogen0 y segn las necesidades d e l organismo sirve como fuente de energa. Tambin participa como precursor de molculas como el
y glutatin
de grandes molculas como son Igualmente se ha caracterizado
los pptidos y las protenas.

como un neurotransmisor excitatorio
(CURTIS Y WATKINS, 1960).
El Glu se localiza selectivamente, pero no exclusivamente en

terminaciones nerviosas de algunas regiones del Sistema Nervioso Central (SNC) cuya funcin es mediada por receptores del tipo NMETIL-D-ASPARTATO (NMDA) y no-NMDA (WENTHOLD, 1992; LODGE,1990). En diversos organismos animales el Glu el es aminocido intracelular ms abundante. Su concentracin es particularmente alta en el
cerebro de los mamferos, encontrndose las concentraciones ms altas en estructuras regin tallo cerebrales tales como en la el corteza, ncleo en el del
caudad0 y en la hipotlamo y el
hipocampal, y menores cerebral. El Glu
concentraciones es el
tambin cido
precursor
principalneurotransmisor inhibitorio, el
(GABA). De este modo, el Glu tiene en
gamma-aminobutrico funciones
el SNC dos
y otra primordiales una func.in como neurotransmisor excitatorio
comoprecursordelGABA,elneurotransmisorinhibitorioms abundante de los vertebrados.
En condiciones normales, la neurotransmisin sinptica glutamatrgica da lugar de a efectos excitatorios y metabotrpicos que
participan en procesos
aprendizaje,
memoria y en el desarrollo
de plasticidad neuronal.. Pero bajo la administracin exgena del Glu o sus agonistas, ACID0 KAINICO ( K A ) , ACID0 QUISQUALICO (QA) y N-METIL-D-ASPARTATO (NMDA) el efecto que se manifiesta es de neurotoxicidad (KIZER, 1978; COYLE,1983; WINN, 1991).
2. NEUROINTOXICACION
2.1 Antecedentes
CON GLUTAMATO MONOSODICO.
El
glutamato
monosdico (GMS) cuya
frmula
semicondensada es,
HOOC CH(NH,) -CH,-CH, COONa,
dePM 169.12, es la sal monosdica del
Glu. El GMS es obtenido por la accin del Micrococus glutamicus (KINOSHITA). El GMS posee propiedades de saborizante y se le emplea
como aditivo alimenticio para la carne, propiedad descubierta por primera vez en 1908 por Ikeda. En 1950 aparece en el mercado y hasta ahorasu uso se ha incrementado en la industria alimentaria,
producindose toneladas de esta sustancia para el consumo humano. LUCAS y NEWHOUSE (1957), fueron que la administracin. neonatal de
los primeros en demostrar
GMS, a roedores da lugar a
neurotoxicidad; posteriormente OLNEY (1969)
ampli estas
observaciones y carac.teriz las lesiones producidas por el GMS. Dentro de los daos p:roducidosen diversas reas del SNC podemos destacar, la eminencia media del
el ncleo hipotlamo,
arqueado
del
hipotlamo, el ncleo del tracto solitario, (OLNEY, 1972), el rea postrema (OLNEY, 1977)' y la retina (LUCAS, 1957).
2.2 Sndrome del glutamato monosdico.
Los daos
producidos
por
el
GMS
fueron
ampliamente
confirmado
por otros autores, en otras especies animales. Dichas lesiones se manifiestan como importantes alteraciones endcrinas, metablicas
y conductuales,
que en su
conjunto,
se
les
identifica el con nombre

1974; KRIEGER,
del llSndrome del Glutamat0 Monosdico" (BURDE,

1979; ANTONI, 1982).
Desde por al GMS
el da
punto lugar
de a
vista cambios
endcrino, en la
la
neurotoxicidad
produci
y/o en la liberacin sntesis
diversas de hormon.as, dentro las que destacan: de adrenocorticotrpica (ACTH) (STERMAN, 19881, la del crecimiento (ANTONI, 1982), estimulante de la tiroides, luteinizante,
1969) y de la insulina (SCALLET, estimulante del folculo (OLNEY, 1986; ABE, 1990). Estas
alteraciones
se
traducen
hipotiroidismo,
hipogonadismo metablicas que
esterilidad; asimismo, ocurren alteraciones se manifiestan como obesidad, disminucin del de
crecimiento, incremento de las concentraciones plasmticas triglicridos y alteraciones en la termorregulacin (TOKUYAMA,

1986).
Se
han
reportado
alteraciones
en
el
aprendizaje
de
conducta
y alimento (BODNAR, 19861, en la actividad en la ingesta de agua
locomotora y en la
(ZHANG, 1988).
conducta
sexual,
as
como en el
patrn
de
sueo
Por otro
lado, el ncleo arqueado del hipotlamo ha
sido
involucradoen l a sntesis y liberacin de pptidos opioides
(encefalinas, endorfimas y dinorfinas), por lo que la necrosis ocasionada por el tratamiento neonatal con GMS da lugar a una
disminucin en la
sntesis
GMS
de
pptidos
opioides. En este
sentido
la
neurotoxicidadporel experimental para
hasidodeutilidadcomomodelo la participacin de las
caracterizar
opiopeptinas
en diversas funciones endcrinas, metablicas y conductuales. Algunos estudios sealan que la analgesia producida por pptidos
y i3-endorfina) y por la opioides (Met-encefalina, Leu-encefalina,

administracin de morfina se ve modificada por la accin del GMS
YOUNG, 1983). Tambin se ha reportado la existencia (BODNAR, 1985;
de alteraciones en las vas colinrgicas, adrenrgicas dopaminrgicas.
2.3 Mecanismos
de la neurotoxicidad.
Alafechaelmecanismoporelcualesteaminocido excitatorio y sus congeneres inducen neurotoxicidad no est
plenamente establecidcl,
sin embargo existe evidencia de la
participacin del ion calcio (Ca") intracelular como evento que contribuye a producir neurointoxicacin, provocando el hinchamiento
de las dendritas, axonesy soma de la neurona, desencadenando su muerte (OLNEY, 1979; ROTHMAN, 1992). Tambin se ha encontrado una correlacin entre neurotoxicidad y el fenmeno excitatorio, as como de la existencia de una relacin estructura-actividad con su
receptor (SCHAWARCZ,1979; STONE, 1981). Se ha propuesto que dicha neurotoxicidad no

sl-o se debe
a la accin excitatoria del
aminocido, sino que tambin contribuyen las alteraciones metabotrpicas que se manifiestan como cambios en
los niveles,
energticos intracelulares entre ellos, disminucin de compuestos
de enlace fosfato de alta energa (TRIFOSFATO
DE ADENOSINA y
FOSFOCREATINA) y un aumento importante de las concentraciones de metabolitos de la glucBlisis como en el caso del lactato (RETZ, 1982; JACQUIN, 1988; ZEEVALK, 1990; YOUNG, 1991). Los agonistas de]Los receptores NMDA, tales como Glu y NMDA tienen la capacidad de estimular sintetasa (NOS) dando como
la enzima xido ntrico la produccin de xido ntrico
resultado
(NO") y con ello la formacin de guanosin monofosfato cclico
(GMP,). Emperosereportqueel (KIEDROWSKI, 1992). La enzima
QA noestimulaala guanilato ciclasa es
NOS
activada ya que
el NO" se une al grupo hem0 de dicha enzima estimulando la produccin de GMP,. Los inhibidores de la NOS tales NG-nitro-Lcomo Arginina (NOArg)
y p--monometil-L-Arginina (N-Arg) previenen la
'
neurotoxicidad, esta evidencia sugiere que el NO" pudiera ser el causante de la

y muerte neurotoxicidad
celular
provocada
por
el
Glu
(DAWSON 1991, BONDY 1993). Por otro lado se ha informado que las neuronas que poseen receptores NMDA tambin suelen expresar a la NOS. Estas neuronas estn en contacto con la mayora de las neuronas corticales neurotoxicidad de
y ellopodraestarrelacionadoconla
las mismas, a causa de la produccin de
radica
libres (DAWSON, 1993). No solo el radical NO" es responsable de la muerte celular sino tambin el radical superxido ( O , " ) que es producido tras la activacin del receptor NMDA. La activacin del receptor a kainato
no parece producir
O,". Por otro lado se observ que
el 1-
oxido,5,5-dimetilpir:rolina (DMPO) , es el agente ms eficaz para
"
-"."-
evitar la muerte neuronal, an ms que la NOArg, pues esta sustancia no parece evitar la neurotoxcidad (LAFON-CAZAL, 1993).
El aspecto en donde se involucra a
los radicales libres como
principales inductores de intoxicacin neuronal no est del todo
, demostraron claro ya que estudios realizados por PAUWELS (1992)

NOS, enzima responsable de la produccin del que an bloquendo la
radical NO" clulas de hipocampo de la rata. Los antecedentes mencionados sugieren que la neurotoxicidad producida por agonistas glutamatrgic'os son la consecuencia de
los
diversos
factores
la clula, causando dao irreversible cuando que se despliegan en

los receptores
al
glutamato
son
estimulados.
2.4 Patologas relacionadas con la excitotoxicidad.
La excitotoxicidad provocada por el GMS tambin afecta a algunas enzimas disminuyendo su actividad. Tal es el caso de la descarboxilasa del cido glutmico (GAD)
y lacolinaacetil
transferasa (CAT), mientras que la actividad de la enzima hidroxilasa de la tirosina ( T H ) se ve aumentada de acuerdo a la
Lo anterior determina, una cantidad de excittoxilco administrado.
disminucin considerable en el contenido de neurotransmisores en las neuronas GAE3Argicas y colinrgicas, en tanto que los niveles de la dopamina no est afectada (COYLE,
lo que concierne 1976). Por los aminocidos
a las alteraciones
en la neurotransmisin de
excitatorios se les ha relacionado con cuadros neuropatolgicos agudos tales como hipoxia,
y trauma anoxia
hipoglucmico, y algunos
transtornos crnicos neurodegenerativos como la esquizofrenia, la
7 corea de Huntingtong, la enfermedad de
y de Alzheimery Parkinson
en la gnesis de la epilepsia (COYLE ZEEVALK, 1990) .
1976, GREENAMYRE, 1986;
3. LOS RECEPTORES
AL GLUTAMATO
MATHIS (1992) comunic que las excitotoxinas K A , NMDA Y QA
podan
inducir que
diferentes cada uno
patrones de estos
de
actividad
elctrica
cerebra tienen
proponiendo
agonistas
glutamatrgicos
diferentes mecanismos de accin y por tanto diferentes tipos de receptores caracterizados por respuestas bioqumicas y electrofisiolgicas con diferente densidad diferentes,
y
encontrndose
en
las
mismas la
clulas
funcin. Este aspecto apoy
identificacin de los diferentes tipos de receptores hasta ahora conocidos.

A
la fecha se han caracterizado 5 tipos de receptores al Glu receptor NMDA, el receptor AMPA, el receptor (mGluR). al
l o s cuales son: el
kainato, el
receptora l . L-AP4 y el
receptor
metabotrpico
Los receptores NMDA, AMPA Y kainato estn acoplados a canales

inicos por lo que tambin son conocidos como receptores
ionotrpicos. El receptor L-AP4 est relacionado con procesos de inhibicin

El receptor presinptica.
metabotrpico
est
acoplado a
efectores celulares a travs de protenas reguladoras de nucletidos de guanina (protenas G) que

o disminuyen los aumentan
segundos mensajeros (trifosfato de inositol (IP,), diacilglicerol (DAG) y calcio intracelular) .
a
3 . 1 E l receptor NMDA.
El receptor
NMDA es llamado
as
porque
el
ligando
selectivo es N-
un aminocido sernisintgtico derivado del cido asprtico el metil-D-aspartato (NMDA). El receptor NMDA est distribuido ampliamente en el SNC especialmente en
el hipocampo y corteza
los
cerebral. Este receptor est relacionado con plasticidad

y en el fenmeno neuronal
procesos de a largo plazo
de
potenciacin
(LTP), as como en el proceso de la induccin de epileptognesis (SHIN, 1992; LAHTINEN,:L993). El receptor NMDA interacta conl o s iones Na+,K' y ciertos receptores al canal isomorfos acoplado interactan Ca", con el al receptor actuando como
ion Mg" puede
bloquear
1990; WATKINS, 1990). Tambin se ha un antagonista. (COLLIMGRIDGE,
reportado que no resultado con en la el
solo
la estimulacin del receptor da como sino de que tambin est
fenmenos
excitatorios,
relacionado como de
regulacin la de liberacin caso de la liberacin de
otros
neurotransmisores (NE) del
norepinefrina
hipocampo
la rata (PITTALUGA, 1992).
3 . 2 E l receptor AMPA.
El receptor a AMPA se de los receptores NMDA.
expresa
paralelamente
la
distribucin
Este receptor est relacionado con el

y con el fenmeno de
potencial postsinptico excitatorio
LTP
(COLLINGRIDGE, 1990; WATKINS,1990). Se han identificado dos tipos de respuestas diferent'es al estimular el receptor AMPA de
neuron
se caracteriz por un hipocampales de rata. La primera respuesta

incremento moderado de la permeabilidad Ca++ al intracelular en un
I_..
-.
" " " " " -
rectificadordecorriente-voltajesaliente.
En
contraste,la
respuesta tipo dos se caracteriz por una gran permeabilidad de corriente entrante de (:a++ (OZAWA, 1993).
3.3 El receptor kainato.
El
receptor
kainato
se
localiza en pocas
reas
especficas
del SNC y NMDA/AMPA. el
su distribucin es complementaria a Se encuentra localizado
los receptores
principalmente en el estriado y con los iones Na'/K+
hipocampo.Estereceptorinteracta
1990).
(COLLINGRIDGE, 1990; WATKINS,
Al igual que para el receptor
AMPA se han identificado 2 tipos de respuesta al activar en el receptor kainato. a Estas repuestas tienen las mismas caractersticas del receptor al AMPA (OZAWA, 1991). Recientemente se ha reportado que a l estimular el receptor al kainato de las clulas hipocampales de la regin CAl/CA4 de la rata con agonista principal K A , produce degeneracin neuronal inhibe la expresin de la subunidad alfa para
su
y tambin
lo el GABA receptor
cual indica que este cambio podra jugar
un papel clave en la
produccin de crisis convulsivas y la consiguente excitotoxicidad
(FRIEDMAN, 1994).
3.4 El receptor
metabotrpico.
7 subtipos diferentes de receptores
Se han identificado metabotrpicos, todos
ellos
estn
acoplados
efectores
celulares.
Los mGluR no poseen agonistas ni antagonistas selectivos pero la

estimulacindecadaunodeellostieneefectoscelulares
10
diferentes. La estimulacin
del
mGluR
por
algunos
de
sus
agonistas
especficos como el 1Sf3R-ACDP, provoca la produccin diferencial de monofosfato cclico de adenosina (AMP,), primero en el hipocampo
seguido por la amgdala/corteza piriforme
y la neocorteza. La
y en el produccin de AMP,es ms discreta en el bulbo olfatorio
estriado. En el cerebeloy en el puente/mdula, no se dectect un incremento en la produccin del nucletido cclico.
El mGluR es activado discretamente por Glu, en el caso de ratas adultas;
s se estimula el mGluR de ratas neonatas (6-8 pero

y aumentan considerablemente l o s
das) la respuesta es intensa
niveles de AMP, y la hidrlisis de fosfoinostidos, por varios autores han propuesto que el efecto resultante de
lo que la
activacin de mGluR es variable en algunas zonas del cerebro y en diferentes etapas del desarrollo postnatal de la rata 1993). Los mGluR1, mGluR2, mGluR3,
y mGluR4 mGluR5,
(WINDER,
estn
acoplados
a la fosfolipasa C. Los mGluR2, mCluR3, mGluR4, mGluR6 y mGluR7 estn acoplados negativamente AMP,. con la adenilato ciclasa inhibiendo
la producci de
Este aspecto tambin se ha obsevado en
clulas de la glia (PREZEAU, 1994). Este tipo de receptores tambin estn involucrados en el fenmeno de LTP ya que
l a
estimulacin qumica pero no elctrica se induce este fenmeno en la regin CA1 del hipocampo de la rata la cual depende de las
hipocampales CA3-CA1 y tambin por la estimulacin elctrica del receptor NMDA (BORTOLOTTO, de! un 1993). Este aspecto se ve ya apoyado que
la administracin
antagonista, el
S ) -alfa-metil-4(R,
carboxifenil-Glicina (MCPG) del mGluR en el giro dentado del
11
hipocampo (GDH) de la rata previene el desarrollo de LTP (RIEDEL, 1993). En este mismo sentido McDONALD report estimulacin qumica por un agonista del en 1993 que la mGluR, 1S,3Rel
receptor
ACPD poda producir dao neuronal y crisis convulsivas en forma dosis-dependiente en ratas administrando intracelular. neonatasy se evitaba el dao neuronal de la movilizacin de calcio por
dantroleno, un inhibidor El anlisis
los tejidos microscpico de
afectados neuronal.
el lS,3R-ACPD mostraron
El
hinchamientoy degeneracin
y
mGluRlinteractaconprotenasG que intervienen el la
susefectores disponibilidad las neuronas de Ca2+
principales son IP,/DG intracelular. Este
receptor se identific en todas
del
giro dentado de hipocampo poblacionesneuronalesdeltipo
(GDH), predominantemente en las CA2-CA4. DelmGluRl
se han
mGluR1-alfa, mGluRli3 y el identificado 3 variantes las cuales son mGluRlc (SHOEPP,1993; WATSON, 1993). Se puede inducir la expresin diferencial de este recleptor slo cuando se estimula elctricamente
y se observan manifestaciones conductuales en la
rata. Tambin se
ha informado de la regulacin hacia abajo del receptor mGluRl despus de aplicar estimulacin elctrica tipo I1kindlingl1 24 hs despus, tambin se observa una regulacin hacia abajo de
los
receptores al kainato y al AMPA. Dicha expresin del mGluRl se
y en el GDH cuando se manifiesta en el hipocampo dorsal (CA1-CA4)

1993). estimula a la rata por electrochoque mximo (WONG,
El
mGluR2
se
dist:ribuye
en
el
SNC
de
la
rata
en
las
clulas
Golgi del cerebelo, en clulas mitrales accesorias del bulbo olfatorio, neuronas externas del bulbo olfatorio, neuronas
12
piramidales de la corteza y en la regin cortical parasubicular. Este receptor se encuentra en menor cantidad el en las El en estructuras patrn el de
cngulo,
cortezas del
subicular y retropineal y en mGluR2 revela funciones
GDH.
distribucin
especficas
sistema
glutamatrgico del cerebro (OHISHI,1993). El mGluR3 tiene secuencia de aminocidos semejantes al mGluR2
y tambin reacciona de manera semejante a diversos agonistas

glutamatrgicos como son: l-GLu> trans-l-aminociclopentano-l,3El mGluR3 se expresa en
dicarboxilato> ibotenato> quisqualato.
clulas de la glia y en neuronas de estructuras cerebrales tales como, la corteza cerebral, el
y clulas putamen-caudad0
granulares
del GDH . El mGlur4 puede ser el est involucrado en equivalente al receptor L-AP4, el cual
procesos de inhibicin presinptica L-2-amino-4la L-serina-O-fosfato. rata est especialmente
. (WATSON,1993)
Estereceptorreaccionaconel
fosfonobutirato (L-AP4)ymoderadamernte con La localizacin del mGl.uR4 en elSNC de la
en el cerebelo, bulbo olfatorio y el tlamo (TABANE, 1993). La expresin del mGluR4 es diferencial, se incrementa en varias estructuras cerebrales tales como la corteza parietal y el ncleo talmico posteromedial despus de inducir isquemia experimental.
Los otros receptores (mGluR1, mGluR2 y mGluR5) disminuyeron por

esta maniobra experimental. Estos resultados sugieren que las neuronas reccionan de diferente manera al aumentarel glutamato extracelular por regulacin diferenciada los de mGluR de la rata localizados (IVERSEN, 1994) .
pre- y postsinpticamente
en el cerebro
13
Los efectores principales para el mGlur5 son receptor el rea se localiza principalmente en las
los IP,/DG. Este
clulas ncleo
piramidales, olfatorio
en
celular CA1-CA4 del GDH, bulbo
olfatorio,
anterior, tubrculo olfatorio, corteza cerebral, sptum lateral, estriado, ncleo acumbens, colculo inferior, ncleo espinal del trigmino,
y
su
localizacin es principalmente nivel a
postsinptico (SHIGEMOTO, 1993). El mGluR6 es similar en su secuencia a los residuos de
El mGluR6 interacta selectivamente con el aminocidos al mGluR4.

L-AP4. Este receptor se localiza principalmente en la barrera interna de la retina de la rata (NAKAJIMA, 1993).
El
mGluR7esunreceptoranlogoen
su
secuenciade
aminocidos a los mGluR4 y mGluR6. Tiene accin reguladora en el SNC al igual que el receptor L-AP4, mGluR4 y mGluR6 e inhibe la sntesis de AMP, (OKAMOTO, 1994). Se ha reportado adems otro tipo de receptor mGluR, el cual
identific en la mdula espinal de la rata recin nacida. La estimulacin qumica de dicho receptor causa despolarizacin postsinptica de las motoneuronas, la cual se reduce conforme aumenta la edad de la rata (SAITOH, 1993).
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16
4. LOS AMINOACIDOS EXCITATORIOS Y LA EPILEPSIA.
Las carcter el de papel
alteraciones en la eminentemente que
neurotransmisin
glutamatrgica y el ha relacionado en la la con
excitatorio Glu, del se
los aminocidos juegan

y en elctrica
excitatorios gnesis que de
induccin Otro
hiperactividad que se
la es
epilepsia. asprtico
aspecto
debe
destacar
y el cido el Glu
(Asp) se encuentran en altas concentraciones en el cerebro, y ambos aminocidos son potentes excitatorios en el SNC. La amplia
distribucin de estos dos aminocidos dicarboxlicos en el sistema

y su participacin nervioso
en
el
metabolismo
intermedio
enmascaran las acciones estos de aminocidos como neurotransmisores. OLNEY (1974),demostr que cuando administraba
KA por va oral subcutnea a ratones jvenes y adultos, se induca y un incremento en la actividad En elctrica relacin cerebral, con
y
temblor
convulsiones
generalizadas.
estas frmacos
observaciones
ZACZEK(1981)demostrquealgunosanestsicos anticonvulsivantes efectos prot.egan los de
neurotxicos
causados
por el KA en el sitio de la inyeccin. Posteriormente se inform que l a administracin experimental
de Glu, Asp y KA en la amgdala induce el desarrollo progresivo de convulsiones, similares a las observadas por el "kind:Ling" BEN-ARI, 1980; elctrico1980; (OLNEY,
ZACZEK,1982; MORI, 1989; CROUNCHER, 1990). SLOVITER (1983) demostr que el dao producido por la estimulacin elctrica en
el hipocampo y corteza entorrinal es similar al dao producido porfrmacosproconvulsivantes,sugiriendoquelascrisis epilpticas producidas por estos dos modelos estn asociadas al
17
dao provocado por la liberacin de aminocidos excitatorios.
i n vitro del hipocampo Este aspecto se ve apoyado con estudios

de la rata, demostrando que el fenmeno de epileptognesis est mediado por los receptores NMDA (SHIN, 1992). HIKIJI en 1993, report que al inducir "kindling" amigdalino
en ratas, aumentan en un 25% los receptores a kainato en la regin hipocampal CA3 pero no en otras reas hipocampales como
y la corteza en la regin CA1, el GDH, el ncleo de la amgdala

piriforme.Tambinseobservquenohubomodificaciones importantes en la densidad de receptores: NMDAl, mGluR1. En este mismo sentido estudios hechos en ratas llkindleadasll con pentilenetetrazol ( P T Z ) , 6 0 mg/kg ip, durante
10 das mostraron ms afinidad al L-glutamato tritiado (L-[HI
GluR-2 o
Glu) en reas corticales y el hipocampo, que las ratas control

y que
las
tratadas
con
una
dosis PTZ de 6 0 mg/kg, ip. Este hecho
sugiere que la estimulacin porPTZ por un tiempo determinado incrementa la densidad de receptores a Glu en reas corticales
y en
el
hipocampo
(SCHRODER,
1993) . Los resultados por de LAHTINEN receptores la
anteriores
se
correlacionan con los obtenidos observan CA1 cambios en la el densidad GDH
(1993) los cuales en NMDA de las zonas
y en hipocampal
tras
estimulacin los receptores de
NMDA. La densidad de receptores NMDA en la zona CA1 se ve disminuida y un aumento moderado en la densidad de receptores NMDA en el GDH, reflejando una actividad elctrica aumentada. Dichos cambios en la densidad de receptores son
los comparables
detectados en la epilepsia del lbulo temporal en los humanos. Asimismo se ha reportado que la etimulacin elctrica tipo "kindling1I produce el fenmeno LTP de y que los responsables de
18
LTP son los receptores a Glu tales como el receptor NMDA y el receptor AMPA, ya que se observ un incremento considerable de dichos receptores cuando se estimulaban zonas especficas como el hipocampo (MAREN, 1993; SMIRNOVA, 1993; WONG, 1993).
5 . EL HIPOCAMPO
5.1 Anatoma Hipocampal
El
hipocampo
es
una
de
las
estructuras
cerebrales
mejo
caracterizadas en cuanto a su organizacin sinptica y funcin neuronal. El hipocampo forma parte del sistema lmbico. Estudios neurofisiolgicos sugieren que el hipocampo juega un papel clave en ciertos aspectos tales como el aprendizaje y la memoria. Tambin se sabe que existe una correlacin entre patologas bien hipocampales como la
y cambios epilepsia
estructurales
definidos.
El hipocampo es una estructura cilndrica cuyo eje
longitudinal forma
un semicrculo alrededor del tlamo. La
posicin del hipocampo en relacin con otras estructuras del cerebro,
algunos grados de posicin interna, muestra
variacionessignificativasentrelasespeciesanimales.
El
hipocampo puede ser dividido en cuatro regiones las cuales son tradicionalmente designadas como CA1-CA4 (del cornus Latn Amrnon
o cuerno de ammon porque ste es parecido al cuerno carnero).

Otra nomenclatura, introducida por Cajal, divide al hipocampo en
regin superior e inferior.El GDH, el subiculum y la corteza entorrinal son incluidas generalmente dentro de la formacin
y CA3 constituyen ms propiamente hipocampal. Las regiones CA1
19
el hipocampo. La regin CA2 es la ms pequea e indistinta en algunas especies en donde es frecuentemente
El rea ignorada.
del
CA3 es llamada regin GDH y del estrato granuloso de la regin
polimrfica o hilar, o simplemente hilus.

El hipocampo y el GDH estn formados fundamentalmente por
tres capas. Las fundamentales del hipocampo son la polimrfica, la piramidaly la molecular. El GDH consiste de una polimrfica
( h i l u s ) , una granular
( s t r a t ug mr a n u l o s u m ) ,
y la molecular
(stratum olecularel
. La barrera molecular del dentado es

la del son hipocampo. la corteza Las principales la conexiones regin del
continuidad
con
hipocampo y del
GDH
entorrinal,
septal
y el hipocampo contralateral. (LOTHMAN, 1991). (ver figura 1)
El rea entorrinal se proyecta dentro de la formacin

hipocampal. El hipocampo se conecta con el frnix al cuerpo mamilar, en donde las sinapsis de las neuronas llegan por el tracto mamilotalmico hacia el ncleo del tlamo anterior. El ncleo anterior es un relevo especfico que el ncleo proyecta hacia el cngulo. Las neuronas del giro cingulado se conectan
co
el rea entorrinal. embargo axones existen se
As se cierra el circuito formado. Sin
muchos
puntos lo a largo estructuras
de
la
va en donde los del circuito. Por
conectan con otras
fuera
ejemplo un hipocampo se conecta con travs de la comisura hipocampal,
el contralateralmente a
la cual est formada por
axones
que cruzan de distribuye en
un hemisferio a otro.
El frnix no slo se
el cuerpo mamilar sino tambin en el sptum
cumisural, al preptico, al ncleo hipotalmico anterior y
El giro cingulado directamente a el ncleo anterior del tlamo.

se proyecta a la formacin reticular del tallo cerebral as como

O-
5 a J
5 % U
.-
*I-
s=aJ
WaJ
L
3
20
el
rea
entorrinal. La actividad
del
hipocampo
puede
ser
medida
o rastreada en amplias regiones del cerebro (WILLIS Y GROSSMAN,

1997).
5.2 Plasticidad
neuronal y el hipocampo
El hipocampo es conocido como una de las regiones del

cerebro neuronal. en la Por cual se manifiestan la LTP es diferentes fcilmente tipos de
plasticida en
ejemplo,
establecida
varia
vas aferentes, tanto i nv i v o relacionado es en una la con los procesos de
como i n v i t r o del
fenmeno que se ha memoria. La LTP
aprendizaje y la neuronal
forma respuesta
plasticidad
caracterizada un aumento por despus de una
sinptica un estmulo a
constante
estimulacin tetnica (BLISS, mantiene por tiempos
1973). Debido a que la LTP se
relativamente
largos
en
el
hipocampo
(aunque
no exclusivamente)
y su correlacin con el aprendizaje de
conductas, la LTP se sugiere como un componente de la consolidacin de la memoria asociativa, o procesos "adaptativos"
en el sistema nervioso. El aumento inmediato de la respuesta sinptica despus del tren de estmulos tetanizantes (dentro del
primer minuto)es la denominada potenciacin postetnica (PPT), es decir,un aumento en la excitabilidad a muy corto plazo, la cualsepiensaesdebidoa presinptica LTP de un aumentoenlaliberacin excitatorios, mientras que la
neurotransmisores un
es considerado que
evento postsinptico. Una de las a la LTP de la PPT es su
caractersticas siendo mucho
distingue en la
duracin
mayor ha
primera. la plasticidad neuronal asociada
Como ya se
mencionado,
al aprendizaje, como la
LTP, es considerada como un proceso
21
fisilgico, el
mientras
que
otras como
manifestaciones
de
plasticidad en
hipocampo son consideradas
responsables los de procesos
patolgicos, tales como la epileptognesis (FISHER, 1989). Por estas razones, los estmulos elctricos, semejantes a los que inducen la LTP, utilizados y aplicados iterativamente al rea CA3
del hipocampo, adems de producir potenciacin sinptica en la capa en de clulas piramidales dan como de CA3, estos trenes de de la estimulacin actividad
..
S '
forma
iterativa
resultado
descargas
y espontneas, las cuales son muy parecidas de espigas evocadas
.1
I
a las descargas epilpticas o interictales (McNAMARA, 1980) . Las neuronas piramidales de la regin CA1 son sensibles a
: ./-
<
la
c',
anoxia
e isquemia. Las neuronas piramidales pueden presentar cambios
5,
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t. -,:I . "
..
degenerativos en casos de isquemia cerebral y en algunos casos y de epilepsia del lbulo temporal. Los pacientes con crisis psicomotoras presentan degeneracin neuronal en la regin CA1
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hipocampo (WILLIS,Jr., GROSSMAN, 1977) .
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4
cI
c)
c
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,-
6. MODELOS
ANIMALES DE EPILEPTOGENESIS
Para el estudio de
los mecanismos de induccin de la
epilepsia se utilizan modelos animales. Se pueden escoger diversos pregunta ahora modelos a dependiendo los de factores, los objetivos o la investigacin. induccin de Se han descrito que se en hasta pueden la en
responder en una de
msde 50 modelos en:1) Crisis
epilepsia se
dividir
parciales
simples. que
basan
la aplicacin de agentes convulsivantes tpicos, estimulacin elctrica aguda, metales implantados corticalamente, dao por
criogenia. 2 ) Crisis parciales complejas.
que se inducen con
22
la administracin de cido kanico, txina del ttanos, inyecciones de convulsivantes elctrico, en dentro reatempesta,llkindlingll del
lasrebanadasdehipocampoderoedores,en
preparaciones de clulas aisladas y neurociruga de tejidos humanos.

3)
Las crisis generalizadas (tnico-clnicas) se
los gerbos y estudian en: diversas cepas de ratones, las ratas, el babuinos genticamente predispuestos a las crisis, induccin de va electrochoque sistmicay por mximo, la la administracin de de convulsivantes metablicas. 4) por
inducin
alteraciones
Las crisis generalizadas de ausencia se pueden observar en: la estimulacin talmica, en la induccin de focos corticales bilaterales, con la administracin de penicilina sistmica, la administracin de opioides de gamma-hidroxi-butirato, la con administracin utilizacin de modelos de ratas
intraventriculares, predispuestas. de
genticamente El
modelo
litio-pilocarpina,
homocistena y el modelo para inducir estatus
de
estimulacin
epil epticus.
repetitiva
los ms son
usados
6.1 El nnkindlingl' como modelo
de epileptognesis.
El
"kindling"
llencendimientoll es un modelo de
epileptognesis en donde la estimulacin elctrica de tipo tetanizante diaria, aparicin postdescargas de registro undel en electroencefalograma (EEG), las cuales progresivamente aumentan en duracin, hasta manifestar crisis convulsivas generalizadas.
(250-1000 PA, 60 Hz, 0.1 ms) provoca la
El llkindlingll es considerado tambin como un modelo de plasticidad neuronal en la induccin

LTP y cambios de
23
que se cree participan en los procesos de epileptognesis, as como en la memoria y el aprendizaje (FISHER, 1989). Las crisis convulsivas son eventos en donde las descargas son sincronizadas
en una poblacin bien localizada de neuronas en el cerebro. La epilepsia es un desorden crnico caracterizado por crisis recurrentes. Las descargas elctricas que se producen en una crisis convulsiva son fcilmente diferenciables de la actividad
elctrica de un cerebro eventos dinmicos Los
llnormalll. Las crisis convulsivas son a procesos celulares que de la aparecen se
asociados mecanismos
despliega de
y desaparecen.
induccin
crisis
convulsivas parecen deberse a tres factores interactivos: 1) La capaciad de las neuronas para generar descargas intrnsecas de salvas, este aspecto es un factor importante en la iniciacin, amplificacin y sincronizacin de la actividad elctrica. 2) La capacidad inhibitoria GABArgica, mecanismo que reprime desarrollo y la propagacin activacin de generacin de salvas, y que controla la regulando
los
el
excitatoria
los circuitos de
corticales
la
los receptores NMDA. 2) La capacidad de

transmisin sinptica va excitatoria, en
promotores en la las sinapsis
particular son
glutamatrgicas,
receptores NMDA, los cuales
los responsables de generar y propagar las descargas excesivas

en una crisis convulsiva (McNamara, 1992). Por otra parte
los tipos de epilepsia se clasifican en
crisis parciales y crisis generalizadas. Las crisis parciales surgen por de zonas especficas ("foco epilptico") es
o por sensaciones
identificable convulsivos
desrdenesen las
movimientos
de partes del cuerpo. Las crisis parciales pueden ser llamadas simples si no hay alteracin de la conciencia y crisis
__" " - " " . -
complejas
."
."---"---"---""---.-."".-.""
24
si
la
conciencia es alterada o perdida. crisis parciales complejas estn ligadas a estructuras
Las
lmbicas. En el pasado se deca que los pacientes con crisis parciales complejas, tenan epilepsia del lbulo temporal, ahora
se conoce que las crisis parciales complejas pueden tambin surgir del lbulo frontal, especialmente de estructuras tales como la corteza orbital frontal y de regiones cinguladas que pueden ser consideradas lmbicas; el EEG de pacientes con crisis
parcialesmuestrancaractersticamenteespigasinterictales espontneas (SIE) (McNAMARA, 1980). Las crisis generalizadas involucran grandes reas del cerebro, las manifestaciones iniciales estn asociadas con el deterioro de la conciencia. Ellas se hacen presentes en forma de
crisis de ausencias (prdida de la conciencia) manifestaciones
o con sutiles
o con motoras
convulsiones
generalizadas
(tonico-
clnico o tnicas) . Una es en de el las principales de anormalidades en una epilepsia parcial Las
patrn
excitabilidad
neuronal,
observndose
SIE.
SIE se pueden observar en registros de EEG de humanos con epilepsia y en numerosos modelos de epilepsia en animales. Las el electrodo sino SIE no slo ocurre en el rea estimulada por que tambin ocurre en otras regiones distales. importanteesqueentre
Un aspecto
los perodosdeestimulacin,la
aparicin de SIE ocurre durante y despus del desarrollo del efecto ltkindlingl1.
4
La
mxima
frecuencia
de
SIE
ocurre
durante
el
estado 3 y
del desarrollo del "kindling". Un criterio para
obtener un buen modelo de epilepsia animal es que la actividad elctrica ocurra espontneamente, de aqu que la definicin de
25
epilepsia
implica
la
presencia
de
actividad
elctrica
espontnea.
Estas espigas aparecen primero en las reas lmbicas, particularmente en la amgdala estimulada y despus alcanzan a la amgdala contralateral seguidael por hipocampo pero muy poco
a la formacin reticular y a la corteza. No todas las zonas del cerebro al ser estimuladas producen encendimiento. La amgdala es una estructura muy sensible a la estimulacin elctrica requirindose "relativamente" poca estimulacin para inducir "kindlingll. La jerarquizacin con respecto a la sensibilidad al
estmulo elctrico (progresando de ms a menos sensibilidad) de varios sitios del cerebro fue caracterizada por Goddard (1969) y es como sigue: amgdala, globus pallidus, corteza piriforme, rea olfatoria, neocorteza anterior, corteza entorrinal, bulbo olfatorio,reaseptal,reapreptica,putamencaudad0 hipocampo.
e
El llkindling" puede ser establecido en numerosas especies

animales, incluyendo la rana, los reptiles, el ratn, la rata, el conejo, el perro, el gato, el mono rhesus y el gibn,
existiendo diferencias en cuanto a sensibilidad al estmulo elctrico y por tanto a la induccin llkindlingll. del
El desarrollo y establecimiento del llkindlingll se da en

cinco estados: Durante el estado 1 aparece la mioclonia facial, caracterizada por movimientos masticatorios, el estado caracteriza por la aparicin de clonus de la cabeza, con estado 3 se presentan al clonus los de miembros de anteriores,
2 se
el
primero
contralaterales
sitio
estimulacin y despus
bilaterales,
en el estado4 se presentan mioclonias de miembros posteriores

y en el estado
5
se presenta la convulsin tnico-clnico
26
generalizada que se caracteriza por la prdida del equilibrio. Cada estado incluye la presentacin del estado precedente. Una vez que el animal ha llegado hasta el estado sensibilizado
5, este queda
lo largo a
del
tiempo y si
el
animal
es
estimulado
nuevamente responde al estmulo ms rpidamente. El "kindling" es un proceso dinmico, que finalmente lleva a permanente, que se le denomina "kindling un cambio en el cual
establecidoIt,
las crisis generalizadas y la duracin de la postdescarga se manifiestan espontneamente. El "kindling" y el "kindling
establecido" son los mejores modelos de crisis convulsivas lmbicas (crisis parcial compleja) . El fenmeno llkindlinglr adems
puede ser de utilidad para el desarrollo de nuevos frmacos anticonvulsivantes o de frmacos que potencialmente puedan tener
accin anticonvulsiva y de alguna manera se pueda prevenir o atenuar la progresin l a de s crisis convulsivas causadas por este
modelo de epileptognesis.
6.2 El modelo
de
epilepsia
con
pentilenetetrazol
Numerosos compuestos qumicos pueden producir crisis generalizadas cuando son administrados por va sistmica. Uno de
esos compuestos es el pentilenetetrazol (PTZ, metrazol). El PTZ es un derivado del tetrazol con accin convulsivante en el ratn,
la rata, el gato y en los primates, administrado por va parenteral. El PTZ inicialmente produce sacudidas mioclnicas, las cuales pueden ser sostenidas generalizadas tnico-clnicas. registro elEn del electroencefalograma aparecen espigas tratamiento con PTZ con dosis
" " . ~ ~
" . ~ ' l " " ~ _ l _ l l l l l l " ~ , ~ -
desarrollar crisis
poliespigas. por
~. , , .. , ^ " "
El
subconvulsivantes
."-.,_.
I. ,
varios
das
27
ratas
jvenes
modifica
la
sensibilidad conducira
al a
mismo lo PTZ que la
por de
tal
modificacin en la
sensibilidad
induccin
"kindling qumico" o encendimiento (McCAUGHRAN, 1982) . Tambin se ha demostrado que cuando se induce qumicoll "kindling con PTZ,
se inducen cambios neuronales que se traducen a un proceso inflamatorio del tejido nervioso de la rata (RODIN, 1979) . El mecanismo de accin del PTZ es parcialmente conocido; algunos estudios sugieren que su efecto es principalmente a nivel de corteza, la sin embargo otros estudios han demostrado La que acta de en gamma-
formacin
reticular
mesenceflica.
administracin
vinil-GABA, un inhibidor de la degradacin del GABA, dentro de la formacin reticular, el hipotlamo medio anterior hipotlamo caudal bloquea la induccin de crisis
y el
convulsivas por
el PTZ. A nivel sinptico el PTZ parece actuar a nivel del complejo receptor [GABA-benzodiazepinas-ionforode cloro] que presumiblemente disminuye
los
potenciales inhibitorios
produciendo crisis convulsivas. En rebanadas de la regin CA3 hipocampal del cobayo, hiperpolariza
y depolarizaneuronas
desencadenando salvas epilpticas. Estas salvas son producidas por corrientes de calcio que median la
El de PTZ GABA. inhibicin
ha sido utilizado como modelo para cernimiento y desarrollo de frmacos anticonvulsivantes por su capacidad de producir crisis
parciales (FISHER, 1989).
28
7 . HIPOTESIS
Los aminocidos excitatorios estn involucrados en la gnesis

de por la epilepsia. Un aumento o disminucin desuso deun neurotransmisor que se traduce
denervacino por
conduce un a efecto
a una hipersensibilidad a ese neurotransmisor (TRENDELENBURG,

1962). Por
otro
lado los roedores tratadosen la
etapa
neonatal
con GMS presentan alteraciones
en las vas GABArgicas por
deficienciadelaenzimaglutamatodescarboxilasa,enzima limitante de la sntesis GABA

(JENNES, 1984). Por lo tanto
podemos inferir quelos roedores tratados'en la etapa neonatal con GMS muestran cambios un en el umbral de excitabilidad neuronal
quesetraducea
incrementoenlasensibilidadala
SNC y al
estimulacin elctrica de regiones especificas del efecto de frmacos proconvulsivantes.
29
7. OBJETIVOS
1) OBJETIVO GENERAL.
Estudiar la sensibilidad de roedores tratados
en la etapa
neonatal con GMS a al estimulacin elctrica hipocampal y al

(PTZ) . "kindling" qumico inducido con Pentilentetrazol
2) OBJETIVOS ESPECIFICOS.
a) Estudiar
las
diferencias
que
se
presentan en el EEG de las ratas
del GDH y de la corteza somatosensorial
(CSS)
tratadas en la etapa neonatal con GMS con respecto a las ratas control.
b) Estudiar l o s cambios producidos en el EEG por la
estimulacin
elctrica
hipocampal
repetida en las
ratas
tratadas
en la etapa neonatal con GMS con respecto a las ratas control.
c) Estudiar
la
sensibilidad los de ratones al efecto convulsivo
tratados
en
la etapa neonatal con GMS
del PTZ.
d) Estudiar la induccin "kindling" qumico producido
y el establecimiento de
por el PTZ.
30
9. MATERIAL Y METODOS
9.1 Tratamiento
neonatal
con OMS en los roedores.
9.1.1 En las ratas.
Se utilizaron Ratas hembra adultas de 200-300 g de peso corporal de la cepa Wistar de se aparearon con de ratas macho, (cuatro de
hembras y un macho). A l cabo separar las hembras de
tres
semanas
apareamiento,
los machos, y se formaron dos grupos
aleatorios de hembras preadas que se designaron como grupos: I

o experimental, I1 o control salino.
Las
cras
del
grupo
experimental
se
trataron
con
GMS
bajo
el siguiente esquema: el recibieron das

6" 2
2" y 4" da despus del nacimiento
mg/g
de
GMS
(SIGMA)
disuelto
en
agua y destilada los
, 8" y 10" depus del nacimiento las cras recibieron 4
mg/g de GMS(0.01 ml/g de peso corporal sc) (YOUNG 1983). Las cras del grupo control salino recibieron slamente solucin fisiolgica salina (O.O 1 ml/g de peso corporal sc), siguiendo el mismo calendario de administracin del grupo experimental.
A l
cabo
deun mes sexos,
de se
nacidas,
las
cras en
se
destetaron y se luz/obscuridad de
separaron
12x12 hs.
por
mantuvieron
ciclos
La alimentacin fue ad libitum
31
9.1.2 En los ratones.
Ratones hembra de la
cepa Taconic
de 25-30g
depeso cepa,
(4
corporal se aparearon con ratones macho de la misma
hembras y un macho) . Al cabo de 2 semanas de apareamiento, se separaron las hembras delos machos
y se formaron 2 grupos de
I1
hembras preadas. EL grupo I o experimental y el grupo control absoluto. A las cras del
4"
222473
grupo experimental se les administr 2 mg/g da despus del nacimiento y los das
de GMS (SIGMA) el 2" y

6",
8" y 10" despus del nacimiento las cras recibieron 4 mg/g

(0.01 ml/g de peso corporal, sc)
(YOUNG,
GMS
1983) . El grupo alguno. Al cabo se alimentacin de un
control de
absoluto las
no cras
recibi de
tratamiento grupos de se
nacidas
ambos
y sexaron, destetaron
hs. La
mantuvieron en ciclos fue ad libitum.
luz/obscuridad
12x12
9.2 Ciruga estereotxica de implantacin crnico de
electrodos para las ratas.
Cuando
las
ratas
macho
cumplieron
de
cinco
siete
meses
de
edad se sometieron a anestesia con pentobarbital sdico (32 mg/kg, la ip). Una se vez que las la ratas llegaron al plano de profundo
anestesia,
realiz
tricotoma
de y la se regin practic
los tejidos blandos,y se una incisin en la piel. Se separaron
hicieron
cuatro
trpanos
segn
el
atlas
estereotxico de PAXINOS
Y WATSON (1982). El primero, anteroposterior (AP) -3.3mm, con respecto a bregma, lateral (L) -2.O mm con respecto a bregma,
(GDH) , y los otros 3 vertical ( V ) 3.5 mm con respecto a bregma
electrodos
"."
en
la zona frontoparietal lateral (corteza

..
- ...
. I " " " " " " " " -
32 somatosensorial, CSS) (ver figura 2) . Se coloc un electrodo de acero inoxidable en cada uno de los trpanos, se le coloc un conector y se dejoen recuperacin de la ciruga un porperodo
de siete das.
Despus de siete das de recuperacin postquirrgica, las ratas se se sometieron la a estimulacin elctrica hipocampal. dos Primero
amplific a
y se seal
obtuvo un registro Grass
de EEG durante
minutos
travs
de un polgrafo
modelo 78D.
La seal del
registro se digitaliz y se captur en una computadora PC a travs del programa

RHYMTH. Se computarizado
dieron
estmulos
en
el GDH (100 HZ, 250 PA, 1 mSeg) durante 20 segundos, 10 veces a intervalos de20 minutos, conun estimulador GrassS 8 8 . Antes y despus del estmulo se hizo el anlisis de frecuencias EEG del
( E E G espectral) tanto del GDH
y de la
CSS
(ver figura 3). E l
anlisis automatizado de la frecuencia, amplitud o voltaje y duracin, y el resolucin la ondas de uso las de mtodos de computarizados frecuencia grupos pueden EEG. que aumentar Se se la
bandas en
del
pueden
divi
cerebrales
seis
pincipales
muestran
la tabla siguiente.
33
TABLA DE FRECUENCIAS
DE
ONDA
DEL
ELECTROENCEFALOGRAMA.
BANDA
LIMITE INFERIOR
LIMITE SUPERIOR
DELTA THETA ALFA BETA BETA 1 BETA 2
0.75 HZ
4 . 0 0 HZ
8 . 0 0 HZ
3.75 HZ 7.75 HZ 12.75 HZ 20.25 HZ 25.25 HZ 31.00 HZ
13.00 HZ 20.50 HZ 25. 50 HZ
Ritmo
Alfa.
Se define como el ritmo de 8 - 1 3 Hz que ocurre durante el estado de alerta sobre la regin posterior de la cabeza, generalmente con voltajes altos sobre las reas occipitales. La amplitud es variable en su mayor parte, menor de adultos. Se incrementa en sujetos con ojos cerrados
50 mV en
y bajo
mental.
condiciones de relajacin
y relativa fsica
inactividad
Ritmo Beta.
El ritmo beta representa una banda de frecuencia hacia
arriba
13 Hz. de
La
actividad
beta alfa, Su
se el
encuentra en adultos do de
sanos. del adulto
Constituyen normal en
junto con el ritmo estado de
ritmos est
vigilia.
frecuencia
comprendida
entr
34
sincrnico. Su voltaje oscila entre 5-10 mV.
Ritmo Theta.
El trmino
y denota
theta de
fue
introducido
por
WALTER y DOVEY
(1944) origen
el
rango
frecuencias 4-7 de Hz o 4-7.5 Hz. Su
parece ser talmico, con topografa parietal y temporal media, con propagacin por delante hasta las zonas posteriores del el vrtex. lbulo frontaly, por detrs, hasta Las ondas theta son simtricas siempre grado de rtmicas,
y sincrnicas, pero no
lo que por
su al
abundante trazado.
presencia suelen
otorga
cierto en
desorganizacin
Estas
disponerse
brotes de aspecto fusiforme.
Ritmo Delta.
Es el ms lento de todos los ritmos. Su frecuencia siempre est debajo de los 4 Hz. A veces es tal su lentitud, que se inscribe una
o la mitad de una onda por segundo. onda
conociendo
de
antemano se
que
existe que las
una
relacin delta
inversa sean por
ent
frecuencia y voltaje,
comprende
ondas
lo general de gran voltaje y, a la inversa, la frecuencia beta esdebajovoltaje.Enestadosfisilogicossuelenverse asociadas en el sueo y la hiperpnea.
u-\\
h m u
OSCI LOSCOPI o
I
CONVERTIDOR
Figura 3.-
Diagrama del sistema de registro y anlisis de las seales bioelctricas.
35
9.3 Induccin
de
ffKindlingff qumico con pentilenetetrazol.

12
Cuando los ratones machos cepa Taconic, cumplieron semanas de edad se les someti a la induccin de
llkindlingll
y qumico con PTZ a tres niveles de dosis: 40mg/kg, SOmg/kg 60 mg/kg, sc, durante 10 das, una inyeccin cada 24 hs. Despus de aplicada la inyeccin se les hizo la evaluacin conductual durante 30 min y se cuantific6 mioclonia, el a la nmero y latencia primera de la primera nmero
y latencia nmero
crisis
parcial,
y latencia a la primera crisis generalizada y el registro del
porcentaje de muerte por convulsin

1993).
(BECKER,
1991; LOSCHER,
9.4 Anlisis estadstico.
Se aplicaron las pruebas estadsticas de la prueba paramtrica pruebas no deI l t " de Student de para las variables
y las continuas
paramtricas
y " U " de Kruskal-Wallis
Mann-Whitney
para las variables diferencia
no paramtricas. Se consider que exista entre el grupo y control el experimental
significativa
a una PC 0.05.
36
1 0 . RESULTADOS
10.1 Actividad y la CSS de
relativa
de
las
bandas
del el EEG GDH en
la rata.
En la figura 4 y 5 se muestra la actividad relativa delta de la CSS y del GDH de la rata respectivamente depus de la estimulacin elctrica. Se puede observar significativo (PeO.05) ratas de la un actividad en dichas delta etapa incremento estruturas con GMS con
cerebrales en las
tratadas en la
neonatal
respecto al grupo control. En la figura 6 y 7 se muestra la actividad relativa theta de la CSS y del GDH de la rata
los
respectivamente animales control
despus
y
de
la estimulacin elctrica de
experimentales en este caso no se encontraron diferencias significativas (P>O.O5)entre el grupo de las ratas control y el
grupo de las ratas tratadas en la etapa neonatal el GMS. con
En la
8 y 9 se figura
CSS y
muestra
la
actividad
relativa
de
la banda alfa de la despus de la
del GDH respectivamente de la rata elctrica de ambos grupos de
estimulacin
animales
8 ) , no En el caso de la actividad relativa alfa del GDH (figura
se
observaron
diferencias
CSS
significativas
entre los dos
grupos
de
animales. Peroen la
(figura 9 ) , se
obsev una disminucin significativa (Pc0.05) de la actividad alfa de las ratas tratadas con el GMS en la etapa neonatal.
En la beta de la
CSS
figura10 y 11 se
y
muestra
la
actividad
relativa
del GDH respectivamente, despus de la
estimulacin elctrica en ambos grupos de animales. En ambas
37
estruturas
cerebrales de la
rata
tratada
en
la
etapa
neonatal
con
el GMS se observa una disminucin significativa (Pc0.05) de la actividad beta con respecto Estos resultados al grupo de que ratas la control. de ondas de
indican
actividad
alto voltaje (0.75-3.75) estn aumentadas y que las ondas de flbajofl voltaje (8-20 Hz) estn disminuidas en las ratas que se trataron en la etapa neonatal con el GMS. Asimismo, se puede sealar que la estimulacin elctrica a lo largo del experimento
no modific el patrn de actividad elctrica en el electroencefalograma. Sin embargo se observ que

CSS fue ms la
sensible ya que mostr ms alterada su actividad elctrica con respecto al GDH.
10.2 Sensibilidad a la induccin de Ifkindlingff por el PTZ en los ratones.
Los efectos evaluados durante la primera media hora de

aplicado el PTZ fueron la latencia a la primera mioclonia, as como la frecuencia parcial, el de su presentacin, la latencia a la primera nmero de crisis presentadas durante ese
crisis
la
de tiempo; la latencia a la primera crisis generalizada y su incidencia

30 minutos durante
despus
de
administrado
el
frmaco
y la
muerte
por
convulsin en cada
sesin
de llkindlingll.
10.2.1 Latencia
Los ratones
presentarla primera mioclonia.
tratados
en
la
etapa
neonatal
con
GMS
mostraron
una tendencia a una latencia menor a la primera mioclonia para

( 4 0 , 50, y 6 0 mg/kg, PTZ) figuras.- 12, 13 cada una de las dosis
y 14 respectivamente,
sin
embargo slo se
encontraron
diferencias
38
estadsticamente significativas
en
algunas sesiones de
tratamiento para la induccin de Ilkindling" con el PTZ. Con la dosis de

40
mg/kg de PTZ, (figura
12)
slo se observaron
diferencias significativas (Pc0.05) entre el grupo control el y grupo experimental en las sesiones de llkindlinglf: uno, seis y nueve. la dosis En la de figura 13, se muestranlos resultados obtenidos con
50mg/kg de PTZ se observaron diferencias uno,
significativas ( P ~ 0 . 0 5 ) en ~ las sesiones de "kindlingll: tres, cinco,
y diez. seis,
Asimismo
en
la
figura 14, con 6 0 mg/kg
de PTZ se observaron diferencias significativas (Pc0.05) entre

GMS en las sesiones el grupo controly el grupo tratado con el
de
: uno, tres y ocho. "kindling"
En
general los ratones
tratados
en la etapa neonatal conGMS mostraron una mayor incidencia a presentar en menor tiempo mioclonias despus de haber
los ratones control. administrado el PTZ que
10.2.2 Latencia a presentar
la
primera
crisis parcial.
Los ratones mostraron una
tratados con el tendencia a
neurotxico en la presentar en un tiempo
etapa menor
neonatal la primera
crisis parcial despus de haber administrado el PTZ a tres los niveles de dosis estudiados (40, 50 y 60 mg/kg), Figuras 15, 16
y 17 respectivamente, sin embargo no se,

encontramos el grupo diferencias con significativas neurotxico. entre el grupo
y control
tratado
el
10.2.3
Incidencia
en el nmero
de
mioclonias
con PTZ.
El nmero de mioclonias se cuantific en cada sesin de
administracin
de PTZ a los tres
niveles
de
dosis.
Se
encontraron
39
diferencias significativas (Pc0.05)en el nmero de mioclonias presentadas control y el el GMS. En la figura 18 se puede observar que los ratones expuestos durantelos 30 minutos grupo de ratones de observacin entre el grupo con
neurointoxicados
neonatalmente
al GMS en l a etapa neonatal presentaron en promedio para cada sesin de "kindling" con PTZ mioclonias a lo largo que los ratones de las
(40 mg/kg) un mayor nmero de
control
este
fenmeno
fue
consistente
sesiones : uno, tres, cuatro, seis, siete, ocho, diferencias significativas (Pc0.05) ,
*
nueve y diez, que
mostraron
entre ambos grupos en estudio (figura
18) . Asimismo se puede
hacer notar que a medida que se incrementa el nmero de inyecciones con el PTZ se presentan cada vez mayor nmero de mioclonias fenmeno claramente diferenciable entre el grupo
..
, I
. ,
experimental y el control este aspecto se puede apreciar en la figura 19. En el caso de

t .
' .
los ratones que se sometieron a la
50 mg/kg, se induccin de "kindling" con el PTZ a la dosis de
obtuvierondiferenciassignificativas(Pc0.05) sesiones de nmero de "kindling11(figura mioclonias por

201,
en lasdiez
se manifiestaron mayor neurointoxicados
los de animales sesin
en la etapa neonatal con el GMS. Tambin se puede observar que a el medida que se avanza en las sesiones de tratamiento PTZ, con el
nmerodemiocloniasparaambosgruposderatonesse
incrementa (figura 21) . En el caso de los ratones que recibieron l a dosis de

60 mg/kg
de
PTZ del
se
observ
el
mismo
fenmeno, solo que
el
nmero por la
de
ratones
grupo
experimental
fue
disminuyendo
muerte
40
provocada
por
la
convulsin,
medida
que
aumentaban los das
de
tratamiento con
elconvulsivante;estehechomodificel
22);
comportamiento de la curva (figura diferencias significativas
solo se encontraron
(PcO.O5),
para las sesiones de
tlkindlingll: uno, cuatro, seis, siete y ocho.
10.2.4 Nmero
de
crisis
parciales y crisis
generalizadas.
Los ratones tratados en la etapa neonatal con el GMS

mostraron ser ms sensibles a las las crisis dosis parciales de PTZ 4 0de y como
50
se
puede
observar en las
figuras23 y 24 con
mg/kg, respectivamente. Se puede observar que a medida que progresa el nmero de sesiones aumenta significativamente la incidencia de crisis parciales para ambos grupos de ratones; con
preponderencia de los animales neurointoxicados con el GMS. En el caso del nmero de crisis generalizadas se observa el mismo fenmeno. Los ratones neurointoxicados en l a etapa neonatal con el GMS mostraron mayor sensibilidad a las
los animales control. Este aspecto se crisis generalizadas, que

ilustra en las figuras 25 y 26 que corresponden a las dosis de PTZ de50 y 60 mg/kg respectivamente. En el caso de la dosis de
60
mg/kg de PTZ se registr la letalidad producida por la alo largo que de las sesiones el al de "kindling" y se observ neonatal el GMS con con
convulsin
que los ratones fueron
recibieron ms sensibles
tratamiento
claramente
efecto en letal relacin
los animales control (figura 27).
SESION DE ESTIMULACION ELECTRICA
222473
Figura 4.- Muestra el porcentaje de activdad delta de la CSS de l a r a t a depues de cada estimulaci6n electrica (eje de las X). Los puntos corresponden a la actividad del grupo control salino (CS) y las cruces corresponden a la actividad del grupo tratado con el CMS. P<O.O5,1es.
A C T I V I D A DR E L A T I V AD E L T AD EH I P O C A M P O
j +GMS
..-c S
O
SESION DE ESTIMULACION ELECTRICA
Figura B.-Muestra el porcentaje de actividad delta del hipocampo de la rata despues de cada estimulaci6n electrica (eje de las X). Los puntos corresponden a la actividad del grupo control salino (CS) y las cruces corresponden a la actividad del grupo tratado con el CMS. P<O.OS,Ies.
ACTIVIDAD RELATIVA
THETA DE CORTEZA CEREBRAL ..-c S

~
GMS
kl
k2
k4 k5 k6 k? k8 k9 S E S I O N DE ESTIMULACION ELECTRICA
k3
k10
Figura 6.- Se muestra el porcentaje de la actividad theta de la CSS delaratadespesdeestimular electricamente(ejedelas "X"). Los puntoscorrespondenalaactividaddelgrupocontrolsalino (CS) y las cruces corresponden a la actividad del grupo tratado con el CMS. P<0.05,r e s .
ACTIVIDAD RELATIVA THETA
DE HIPOCAMPO
."C S
SESIONDEESTIMULACIONELECTRICA
Figura 7.- muestraelporcentaje de laactividadthetadelhipocampo de la rata desputs de actividad delgrupocontrol estimular eltctricamente (eje de las "X"). los puntoscorrespondenala sallno (CS) y las cruces corresponden a la actividad delgrupo tratado con e l CMS. P<O.OS. I e s .
ACTIVIDAD RELATIVA ALFA DE CORTEZA CEREBRAL
."C S GMS
kl
k2 k3 k4 k5 k6 k7 k8 k9 SESION DE ESTIMULACIONELECTRICA
k10
Figura 8 . - Muestra elporcentajedeactividadalfade la CSS de laratadespues de estimular elCctricamente (eje de las "X"). Los puntoscorrespondenalaactividad para e l grupocontrolsalino (CS) y las cruces corresponden a laactividaddel grupo tratado con el CMS. P<0.05. I e s .
ACTIVIDAD RELATIVA
35,
ALFA DE H I P O C A M P O ..-c S
1
GMS
..........................................................
kl
k2
k5 k6 k7 k8 k9 SESION DE ESTIMULACIONELECTRICA
k3 k4
k10
Figura 9.- Mueatra el porcenta'edelaactividadalfaenelhipocampodelaratadepuesetimular e l 6 c t r i c a m e n t e (eje dela8 Loa puntoscorrespondena la actividaddelgrupocontrolaalino (CS) y lascruceacorrespondenalaactividaddelgrupotratadocon el CMS. P<0.05, es.
T'j.
ACTIVIDAD RELATIVA BETA
DE: C O R T E Z A CEREBRAL
."
ACTIVIDAD RELATIVA BETA
DE H I P O C A M P O
Figura 1 1 . - Muestra el porcentajedeactividadbetadelhipocampo de laratadepues de estimular elbctricamente (eje de las "X"). Los puntoscorrespondena la actividad delgrupo controlsalino (CS) y las cruces corresponden a la actividad del grupo tratado con el C Y S . P<0.05, e s *
M E D I AD EL A SL A T E N C I A S
A LA P R I M E R AM I O C L O N I A
SESIONDEKINDLI.NG
Figura12.-Muestralalatencia en que los ratonea prerentanlaprimeramioclonia depuCs de adminstrarel PTZ (40 mg/kg. 10 dias.c/Z4hr. eje de ].as "X"). Loa puntosrepresentanalgrupo el GMS. P<0.05,1es. grupo tratado con controlabsoluto (CA) y larcrucenrepresentanal
M E D I AD EL A SL A T E N C I A S c
A
O'
I
k2
kl
k3
k4
k5
k6
k7
k8
k9
k10
S E S I O ND EK I N D I J N C
Figura13.-Muestralamediaa la latencia en que se p:resentala prlmera mioclonia en los ratones despuds de adminstrar el PTZ (50mg/kg, LO dlas. c/241hs, eje de l a s "X"). Los puntos corresponden (CA) y las cruces corresponden al grupo al grupo control absouto tratado con el CMS. P<0.05,I e s .
MEDIA DE LAS LATENCIAS
kk 1k 9 0k 8k 7k 6k 5k 4k 32 kl SESION DE KINDLING
Figura 14.-Muestra la latencia a la prlmera mioclonla que presentaron los ratones despubs de admlnlstrado el PTZ ( 6 0 mg/kg. 10 das.c/24hs. e j e de las " X , ) . Los puntos corresponden al grupo CMS. P<O.OS. es. controlabsoluto (CA) y las crucescorresponden al grupotratadoconel
MEDIA DE LAS
r
LATENCIAS -A LA PRIMERACRISISPARCIAL
f
t
0-
k l k3 k2
k5 k4
k7 k6 k10 k9 k8 SESION DE K1ND:LING
Figura 15.- Yuertra 14 latencia a la primera crisia parcial de loa ratoner despuC8 de adminirtrado el PTZ (40 mg/kp, LO dha. c/24, e j e de lar "X"). Los puntos corresponden a1 grupo control abroluto (CA) y la. cruces correrponden a1 grupo tratado con el GYS. p<O.OB. es.

..-C A
A LA PRIMERACRISISPARCIAL
O'
k k10 lk9 k8 k7 k2 k6 k5 k4 k3
SESION DE KINDLING
Flgura 16.- Muestra el promedio de latencias a la primera crlsis parcia1 que presentaron los ratones despues de administrar PTZ ( 5 0 mg/kg. 10 dlas, c/24hs, eje! de las "X"). Los puntos corresponden (CA) y las cruces corresponden al llrupo tratado con e l CMS. pcO.05Xes. al grupo control absoluto

..-C A
A LA PRIMERA CRISISPARCIAL
14
+ GMS
k2
k3
k5k8 k'? k6 SESION DE KINDLING

k4
k9
k10
Figura 17.- Muestralaslatencias a la prlmera crisis parcial que presentaron los ratones despues d e a d m i n l s t r a d o e l PTZ (60 mp/Kp. 10 dfas,c/24hs, eje de las "X"). Los p u n t o s c o r r e s p o n d e n i ( C A ) y las cruces corresponden al grupo tratado con el CMS. p<0.05. l e s . al grupo control absouto
SESIONDEKINDLING
Figura 18.- Muestralamedia'delnmerodemiocloniatsquepresentaronlosratonesdespuesde "X"). Los p u n t o s c o r r e s p o n d e n a l a d m i n i s t r a d o e l PTZ ( 4 0 mg/kg, 10 d l a s , c a d a 24 hs, e j e d e l a s p < 0 . 0 5 , 1e s . grupo control absoluto (CA) y las cruces corresponden al grupo tratado con el CMS.
FRECUENCIA ACUMULADA DE LAS MIOCLONIAS

..-C A
h
4,
'
+GMS
t
I
.....
.....
SESIONDEKINDLJNG
Figura 19.- Muestrala frecuencia acumulada del nme:ro de mioclonias que presentaron los ratones durantelassesionerdeadministracih ( k # ) del PTZ (408 mg/kg, 10 dias,c/24hs,ejedelas "X"). L o s puntos corresponden al grupo control (Cis) y las crucea corresponden al grupo tratado con el CMS.
P R O M E D I OD E LN U M , E R OD EM I O C L O N I A S
200
cn
2 O
u
O
150
5i w
f 2
O
100
P=
E 50 5 z
C
1k l
Figura 20.- Muestra el nmero de mioclonias que presentaron los ratones despuCs de administrado "X"). Los puntoscorrespondenalgrupode el PTZ (50mg/kg, 10 dlas,c/24hs,ejedelas animales control absoluto ( C A ) y las cruces corresponden al grupo tratado con el CMS. p<0.05,
SS.
F R E C U E N C I AA C U M U L A D AD E
LAS M I O C L O N I A S
O
SESIONDEKINDLING
Figura 21.- Muestralafrecuenciaacumuladadelasmiocloni,asquepresentaron los ratones despuCs de administrar el PTZ (50mg/kg. lodias, c/24hs, eje de las "X"). L o s puntos corresponden (CA) y las cruces corresponden al grupo tratado con el CHS. al grupo control absoluto
acumulada de las crisis parciales que presentaron los r a t o n e s Figura 23.- Muestralafrecuencia "X"). Los puntos corresponden despubdeadminstradoel PTZ (40 mg/kg, 10 dfas.c/24hs.ejedelas grupo tratado con el CMS. a los animales control absoluto (CA) y las cruces corresponden al
FRECUENCIA ACUMULADA DE LAS CRISIS PARCIALES

I
loor
80
60
40
20
nC
kl
k2 k3 k4 k5
k'7 SESION DE KINDLING

k6
k8
k9
k10
Figura24.-Muestralafrecuenciaacumuladadelas crisitr parciales que presentaron los ratones despuCa de administrado el PTZ (50 mg/kg. 10 dlas. c/24hs, eje de las "X"). Los puntos corresponden (CA) y las cruces corresponden al grupo tratado con el CMS. al grupo control absoluto
FRECUENCIA ACUMULADA DE LAS CIRISIS GENERALIZADAS

..-C A
k10 k9 k8 k7 k2 k6 k5 k4 k3 k1
SESIONDEKINDLING
Figura25.-Muestralafrecuenciaacumuladadelascrisisgeneralizadasquepresentaron los ratones despues de administrado el PTZ ( 5 0 mg/kg, 10 dlas. c/24hs, eje de las "X"). Los puntos CMS. corresponden al grupo control absoluto (CA) y las cruces corresponden al grupo tratado con el
F R E C U E N C I AA C U M U L A D AD EL A SC R I S I SG E N E R A L I Z A D A S
"
k9 k8 k7 k6 kk5 l k4 k3 k2
k O
SESIONDEKINDIJNG
Figura 26.- Muestra L a frecuencia acumulada de las crirlis generalizadas que presentaron los ratones despub8 de administrar PT2 (60mg/kg, 10 dfas, c/24hs, eje de las "X"). Los p u n t o s el CMS. correponden al grupo control absoluto (CA) y las crucet) corresponden al grupo tratado con
I . . -,-
"-",p .,
...
.. - . . _._
.-
" . l l " . . l . . ~ . " . l
" . l _ . " l .
1 1 1
4
O
W
3
41
11. DISCUSION DE RESULITADOS
De acuerdo
alos resultados obtenid.os se puede sealar que
las ratas expuestas a la excitotoxina en la etapa neonatal presentaron alteraciones en la actividad electroencefalogrfica,
que se manifest como una mayor actividad elctrica de alto voltaje en la zona
y en hipocampal
laCSS. Este
incremento
es
un
indicador de la existencia de alteraciones a nivel de la excitabilidad neuronal. Este aumento de voltaje en la actividad
elctrica neuronal podra manifestarse como facilitacin del fenmeno de LTP que se da cuando actividad elctrica sincronizada elctrica de alto voltaje.
KUBO
un. grupo neuronal tiene

y lo cual genera actividad
222473
en 1993 report que en ratas niveles de dosis, fue
a tres neonatal,
Por otro lado tratadas con GMS en la se produca dao de la
etapa
hipocampal dosis de en
de GMS la
Esta la CA1. regin
alteracin Este GMS
dependiente
administrado. etapa neonatal con el
hallazgo no slo
seal
que los roedores
tratados
tienenalteracionesaniveldelareginparaventricular hipotalmica, sino que tambin presentan alteraciones en otras regiones como la hipocampal
y corteza cerebral que podra
manifestar, como en el presente estudio en alteraciones de la actividad elctrica del electroencefalograma de dichas estructuras. Tambin SLOVITER sometidas a "kindling" en 1983 report que las ratas mostraban alteraciones
y qumico elctrico
neuronales muy parecidas entre s. Dichas alteraciones no se deban sino que a las descargas elctricas ni al frmaco proconvulsivante
los
los mtodos de induccin d.e Itkindling" eran
42
responsables
de
la
liberacin amino6ci.do.s de excitatorios promotores de las alteraciones
siendo neuronales.
estos los principales
Las alteraciones en la CSS de las ratas tratadas en la etapa neonatal con el GMS se podran explicar porque la mayora de las
neuronas de la corteza estn conectadas! a neuronas que poseen receptores al
y al glutamato
aplicar
la
neurotoxina
las
neuronas
glutamatrgicas son afectadas, repercutiendo en las neuronas corticales (DAWSON, 1993).

Los ratones tratados en la etapa neonatal con el GMS
mostraron en general una mayor sensibilidad a excitatorios del
los efectos
PTZ, fenmeno que fue consistente para las
diferentes conductas evaluadas, y para cada una de las dosis. GOMEZ en 1991 report que neonatal con el GMS eran
los ratones! tratados en la etapa

menos susceptibles al efecto sedante e
hipntico del pentobarbital sdico. Este: hecho hace suponer que el umbral de excitabilidad estaba disminuido. Pero tambin
exista la posibilidad de que esta menor susceptibilidad al frmaco depresor fuera

slo
consecu'encia de alteraciones
farmacocinticas debido a la obesidad que presentaban dichos animales. La induccin del "kindlingt1 con PTZ en los ratones neurointoxicados en la etapa neonatal descart tal posibilidad ya que a lo largo de la induccin del "kindling", l o s ratones tratados en etapa la neonatal con GMS el fueron
significativamente (PeO.05) ms sensibles al efecto convulsivo del PTZ. Asimismo se comprob que ambos grupos de animales, controles y experimentales son progresivamente ms sensibles a medida que se avanza en el nmero de sesi6n de l'kindlingrl qumico
inducido por el PTZ lo que indica que el fenmeno kindling se
43
instal para ambos grupos de animales sin embargo los ratones glutamatizados fueron ostensiblemente m i i s sensibles.
Otro antecedente que apoya que neurointoxicadosconelGMSenlaetapaneonataltienen
los
roedores
alteraciones en el umbral de excitabilidad neuronal es el dao

1984) y en la propuesta de en las neuronas GABArgicas (JENNES,
McNAMARA
en
1992,
quien seal que
los
fenmenos de
los
epileptognesis pueden ser debidos a
un desbalance de
neurotransmisores excitatorios/inhibitorios. Tambin

1994 report
FRIEDMAN a kainato del
en produca a
que de
la la
estimulacin sntesis
del
receptor
la
inhibicin
del
pptido
alfa
receptor
y establecimiento de con lo cual se podra explicar el aumento
las crisis causadas por la activacin de1 receptor, a kainato y la disminucin en el nmero el nmero de receptores y por al GABA
consiguiente la produccin del dao neuronal causados por el establecimiento de las crisis convulsivas. Esta disminucin de
los receptores al GABA por el mecanismcl anteriormente descrito
podra del PTZ
explicar
la
mayor
susceptibilidad con las
al
efecto la
convulsivante
de los ratones de alto
tratados de
el y GM:S tambin ratas
actividad con el GMS en
elctrica
voltaje
tratadas
etapa neonatal,en relacin a los animales control. Por otra parte mencionan nervioso, nervio que por la
los trabajos de TRENDELENBURG, en

denervacin de una zona especfica
1962,
del
sistema
desuso, como
o simplemente por diseccin de un qumica
trae
resultado un fenmeno
de
los a hipersensibilidad
neurotrasmisores que normalmente se prclducan y/o liberaban en esa zona denervada en particular. neurointoxicacin con el GMS en la etapa En el caso de la ocurrir
neonatal
podra
44
un fenmeno equivalente. Primero al aplicarGMS, el se denervan qumicamente las

ms susceptibles reas
la
neurotoxina
ya
sea
por la disposicin anatmica para estar en contacto con la neurotoxina y por se produce el la dao cantidad neuronal, de se receptores trata de para la misma. por las Cuando
reparar
neuron
que no fueron afectadas por la excitotoxina compensando las funciones de las otras reas afectadas por medio de cambios plsticos neuronales, observndose fenmeno elde
hipersensibilidad al neurotransmisor suprimido. El fenmeno de plsticidad neuronal glutamatrgica ya ha sido demostrado por diversos autores (MAREN, 1993; SCHRODER,,1993; SMIRNOVA, 1993; LAHTINEN, 1993; HIKIJI, 1993 Y WONG, 1993), estimulando diversos receptores al
y midiendo los cambios glutamato
producidos
en
el
nmero de receptores. La estimulacin, informaron, conduce a alteraciones neuronales que se traducen en un aumento en densidad del nmero de receptores en las zonas cerebrales estimuladas y se la excitabilidad manifiestan neuronal. como una disminucin del umbral en la
45
12. CONCLUSIONES
Los hallazgos del presente trabajo que indican alteracin

de la excitabilidad
losde roedo'res neuronal
tratados
en
la
etapa
neonatal con el
GMS permiten concluir que pueden ser la
consecuencia de varios factores:
1.- Cambios en el
nmero
de
receptores
al
GABA
por
el
dao
neuronal producido en las neuronas GABArgicas y/o en la la
alteracin en
lo que sntesis GABA, de
dara
lugar un a desequilibrio
excitatoria/inhibitoria. neurotransmisin
2.-
Las alteraciones producidas por la neurotoxicidad del
GMS, induciran un el fenmeno de plasticidad neuronal, que se manifestara como un incremento en e : L nmero de receptores
glutamatrgicos, conduciendo a la disminucin del umbral de excitabilidad neuronal.
3. - Se
concluye trabajo,
tambin son
lque o s modelos
experimentales el
la estudio
utilizados en este
confiables
para
de
neurotoxicidad inducido por el GMS, y que son de utilidad para el estudio de otros agentes neurotoxicos.
4.- Finalmente, la perspectiva del estudio seala la
y necesidad de cuantificar el nmero de receptores GABArgicos

glutamatrgicos
y del Glu.
as
como
las
concentraciones
cerebrales
del
GABA
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Seplveda
M en C
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RATA Y E T , RATON PRODUCIDOSPOR EL TRATAMIENTO NEONATAL CON GLUTXMATO MONOSODICO" I

UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA IZTAPALAPA

TUTOR DE LA TESIS: ASESORES:

EFRAIN CAMPOS SEPULVEDA

C J O S E ANTONIO GALINDO MORALES M en M en C GABRIEL ROLDAN ROLDAN Dr RUBEN ROMAN RAMOS

SE REALIZO LA TESIS: DONDE

LaMaestria enBiologiaExperimentalcuentaconelapoyodeCONACyT segn e l convenio PFPN/66/92 por considerarse con e l n i v e l de excelencia.

A M I PADRE: RICARDO CASTELLANOS VELASCO

A M I MADRE: A L I C I A PEREZ DE CASTELLANOS

CASTORENA MUY ESPECIALMENTE A G L O R I A tie LOURDES ENERGIANECESARIAPARACONCLUIR ESTE T R A B A J O .

Y ESPECIALMENTE A LAS RATAS Y A LOS REALIZAR ESTOS ESTUDIOS.

DIERON SU VIDA PARA

2 . NEUROINTOXICACION CON GLUTAMATO 2.1 2.2 2.3 3.4

3.1 El receptor 3.2 El receptor 3.3 El receptor 3.4 El receptor

....................... 7 NMDA ............................ 8 ............................ 8 AMPA kainato ......................... 9 metabotrpico ...................9

5 ELHIPOCAMPO 5.1 5.2

....................................... 18 18 Anatoma hipocampal ......................... Plasticidad neuronaly el hipocampo .........20

. MODELOS ANIMALES DE EPILEPTOGENESIS ................21

.................................. 22 de epiepsia con pentilenetetrazol .....26

.......................... 9.1.1Enlas ratas .......................... 9.1.2 E n l o s ratones ........................

las ratas ................ 31

9.3 Induccin del ltkindlingn1 qumico con pentilenetetrazol

............................... estadstico .......................

10. RESULTADOS 10.1

en el GDH y CSS 10.2 por

Sensibilidad a la induccin PTZ 10.2.1 en los ratones

mioclonia 10.2.2 crisis 10.2.3 con

Incidencia en el nmero de mioclonias PTZ

Nmero de crisis parciales

. CONCLUSIONES ....................................... . BIBLIOGRAFIA .......................................

de grandes molculas como son Igualmente se ha caracterizado

los pptidos y las protenas.

(CURTIS Y WATKINS, 1960).

El Glu se localiza selectivamente, pero no exclusivamente en

hipocampal, y menores cerebral. El Glu

y otra primordiales una func.in como neurotransmisor excitatorio

comoprecursordelGABA,elneurotransmisorinhibitorioms abundante de los vertebrados.

CON GLUTAMATO MONOSODICO.

monosdico (GMS) cuya

HOOC CH(NH,) -CH,-CH, COONa,

dePM 169.12, es la sal monosdica del

GMS, a roedores da lugar a

neurotoxicidad; posteriormente OLNEY (1969)

2.2 Sndrome del glutamato monosdico.

identifica el con nombre

del llSndrome del Glutamat0 Monosdico" (BURDE,

Desde por al GMS

y/o en la liberacin sntesis

hipogonadismo metablicas que

esterilidad; asimismo, ocurren alteraciones se manifiestan como obesidad, disminucin del de

crecimiento, incremento de las concentraciones plasmticas triglicridos y alteraciones en la termorregulacin (TOKUYAMA,

y alimento (BODNAR, 19861, en la actividad en la ingesta de agua

lado, el ncleo arqueado del hipotlamo ha

involucradoen l a sntesis y liberacin de pptidos opioides

neurotoxicidadporel experimental para

hasidodeutilidadcomomodelo la participacin de las

y i3-endorfina) y por la opioides (Met-encefalina, Leu-encefalina,

de alteraciones en las vas colinrgicas, adrenrgicas dopaminrgicas.

Alafechaelmecanismoporelcualesteaminocido excitatorio y sus congeneres inducen neurotoxicidad no est

sin embargo existe evidencia de la