Trabajos Originales:

METRONIDAZOL EN EL TRATAMIENTO DE PERIODONTITIS EXPERIMENTALES. ESTUDIO HISTOMORFOMTRICO

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Recibido para arbitraje: 12/01//2004 Aceptado para publicacin: 23/03/2004 Gordillo Maria, Profesora Consulta de la Facultad de Odontologa de la Universidad Nacional de Tucumn., Hector Meheris, Profesor Titular de la Ctedra de Histologa de la Facultad de Odontologa de la Universidad Nacional de Tucumn. Nora Ruiz Holgado, Maria Pani, Laura Lopez Miranda Juan Garat , Jefes de Trabajos Prcticos de la Ctedra de Histologa de la Facultad de Odontologa de la Universidad Nacional de Tucumn.. Agradecimientos: Este trabajo fue subsidiado por el Consejo de Investigaciones de la Universidad Nacional de Tucumn. CIUNT. Direccin para correspondencia: Dr. Juan Garat. Facultad de Odontologa.Universidad Nacional de Tucumn. Av. Benjamn Araoz 800. 4000 San Miguel de Tucumn. Argentina. E-mail: jugarat@fo.unt.edu.ar Resumen El metronidazol es una droga perteneciente al grupo de Nitroimidazoles, que ejerce su efecto sobre tricomonas, espiroquetas y microorganismos anaerbicos. Es ampliamente conocido que la enfermedad periodontal no solo est determinada por la cantidad y calidad de microorganismos, sino tambin por el importante rol que desempean los anaerobios Gram negativos, frente a las diferentes respuestas del hospedero. Desde ese marco son numerosos los trabajos clnicos y bacteriolgicos que estudiaron la accin del metronidazol en el tratamiento de esta afeccin. Este trabajo fue diseado para estudiar por mtodos histomorfomtricos la respuesta del hueso alveolar frente a una peridontitis experimental inducida por la colocacin de una ligadura cervical en los primeros molares inferiores de rata durante 21 das. La periodontitis fue luego tratada con irrigaciones en la bolsa periodontal con 0.5ml de metronidazol cada 48 horas durante los quince das posteriores al retiro de la ligadura cervical. Concludas las experiencias los animales fueron sacrificados, los maxilares inferiores fueron disecados y procesados para microscopa ptica. En cortes mesiodistales y coloreados con H&E, los siguientes parmetros morfomtricos: porcentaje de superficie de formacin y reabsorcin sea, prdida sea y volumen seo, fueron evaluados en el hueso interradicular de los controles y experimentales. Los resultados indicaron que los animales con periodontitis y tratados con metronidazol mostraron incrementos del volumen seo y reduccin estadsticamente significativa de la prdida sea con respecto al grupo con periodontits.

Palabras claves: Periodontitis experimental. Prdida sea. Metronidazol. Histomorfometra. Abstract Metronidazole, a nitromidazole compound, is a drug that exerts its effects on Trichomonas, Spirochetes and anaerobic bacteria. It is known that periodontal disease is not only determined by the amount and quality of microorganisms, but also by the important role that exert the anaerobic gramnegative bacteria, respect to different host responses. From this background clinical and bacteriological reports were made in order to study the action of metronidazole in the treatment of this afection. In the present work we presented an histomorphometric study of alveolar bone response following an experimental periodontitis, induced by a cervical wire ligature in the lowers first molars of rats during 21 days. Periodontitis were then treated with irrigations in periodontal pockets with 0.5ml of 5% metronidazole every 48 hours during 15 days following removing the wire ligature. The animals were then sacrificed, the lower jaws were disected and processed for light microscopy. In mesio-distals sections stained with H&E the following morphometrics parameters: percentage of bone formation and bone resorption, bone loss and bone volume, were assesed in the interradicular bone, in controls and experimentals groups. The results indicated that the animals with periodontitis and treated with metronidazole showed an increases of bone volume and a statistically significant reduction of bone loss respect to the group with periodontitis only. Key words: Experimental periodontitis. Bone loss. Metronidazole. Histomorphometry.

Introduccin La concepcin moderna en la etiologa de la periodontitis establece un modelo multifactorial. Desde el punto de vista del tratamiento de esta afeccin, y especialmente en las modalidades teraputicas con quimioterpicos, la investigacin en animales de experimentacin permite estudiar histolgica e histomorfomtricamente el comportamiento de los tejidos periodontales luego del control de la infeccin. El Metronidazol es una droga perteneciente al grupo de los Nitroimidazoles que ejerce su efecto sobre Trichomonas vaginalis, espiroquetas y adems una accin bactericida sobre microorganismos anaerbicos (1). A menudo la enfermedad periodontal esta asociada a bacterias anaerobias y en consecuencia, el metronidazol fue usado para evaluar su eficacia en el tratamiento de sta afeccin en estudios clnicos y experimentales (2, 3, 4, 5, 6 y 7 ). Los resultados obtenidos fueron variables y dependieron del rgimen de tratamiento y de la eficacia de la instrumentacin mecnica cuando fueron usadas en forma conjunta. En nuestro conocimiento no se han reportado estudios hitomorfomtricos dirigidos a evaluar el efecto de esta droga en el tratamiento de periodontitis experimentales. El objetivo del presente trabajo fue evaluar distintos parmetros morfomtricos del hueso alveolar luego de la administracin local de metronidazol en ratas con periodontitis experimentales.

Materiales y Mtodos Se utilizaron para este estudio 20 ratas Sprague Dawley de 250gr de peso mantenidas en condiciones normales de laboratorio y distribuidas en grupos de cinco, denominados grupos 1, 2, 3 y 4. Los animales del grupo 1 fueron utilizados como controles absolutos. A los de los grupos 2, 3 y 4 se les colocaron bajo anestesia general (inyeccin intraperitoneal de etil uretano, en una dosis de 1gr/Kg de peso) una ligadura cervical de alambre de acero coaxial de dimetro 5-0 en el primer molar inferior derecho, el da 21 de la experiencia se retiraron las ligaduras. Los animales del grupo 2 fueron sacrificados inmediatamente despus del retiro de la ligadura. Los de los grupos 3 y 4 fueron sacrificados el da 36 de la experiencia. Entre los das 21 y 36 se realizaron irrigaciones en la bolsa periodontal cada 48 horas con 0,5ml de agua destilada en el grupo 3 y 0,5ml de Metronidazol al 5% en el grupo 4. Luego del sacrificio por inhalacin de cloroformo, los maxilares inferiores fueron disecados, fijados en formol al 10%, descalcificados en EDTA al 10% (pH 7.2) e incluidos en parafina. Se realizaron cortes mesiodistales de los primeros molares y se colorearon con H-E. Se obtuvieron esquemas a partir de las proyecciones de los cortes histolgicos y el estudio histomorfomtrico fue realizado en el espacio interradicular (Fig 1). Las zonas de reabsorcin y formacin sea observadas al microscopio, fueron luego transferidas a las zonas correspondientes en los esquemas. Los siguientes parmetros morfomtricos fueron analizados segn los principios de la estereologa (8): a. Porcentajes de superficies de reabsorcin y formacin sea en la superficie periodontal del hueso interradicular. b. Perdida sea, considerada como el porcentaje que ocupa el espacio periodontal comprendido entre la furcacin de las races y la cresta del hueso interradicular, en la altura total del espacio interradicular (Fig 1). c. Volumen seo, considerado como la razn entre el volumen trabecular y el volumen seo total, en el tercio cervical. (Fig. 1)

Figura 1. Para la definicin del rea de estudio, sobre la proyeccin de los cortes histolgicos se traz el segmento AB tangente a los pices de las races mesial y distal. Desde el punto medio de AB, se traz hacia el punto medio de la furcacin el segmento CD. Este a su vez se dividi en tres segmentos iguales por los puntos E y F por los que se trazaron dos lneas paralelas a AB, las que dividieron al espacio interradicular en los tercios cervical, medio y apical. El segmento CD, determin el punto G en su interseccin con la cresta del hueso interradicular. La prdida sea se determin sobre el segmento CD segn la siguiente relacin: PO = CG/CD x100

Para el anlisis estadstico de los datos obtenidos en este estudio se utiliz el test de Kruscall-Wallis.

Figura 2. Media y desviacin estndar de los valores de prdida sea en los diferentes grupos.*p< 0.05 con respecto al grupo 2. Test de Kruscall-Wallis.

Resultados Anlisis Histolgico En condiciones normales el ligamento periodontal y el hueso alveolar de los molares de rata presentan caractersticas similares a las del humano (Fig. 3). Los animales del grupo 2 presentaron bolsas periodontales profundas sin insercin del epitelio de unin sobre la superficie dentaria, infiltrado inflamatorio subyacente a la acumulacin de placa bacteriana entre las clulas epiteliales de la bolsa. El epitelio de la bolsa mostr acantosis, el infiltrado celular ocup tambin el corion gingival y el ligamento periodontal. Se observaron zonas hemorrgicas, necrticas y de tejido de granulacin en el ligamento periodontal y en los espacios medulares del hueso interradicular La superficie sea periodontal present reas erosivas e incrementos del nmero de osteoclastos (Fig. 4). Los grupos 3 y 4 presentaron bolsas periodontales poco profundas. Hubo una importante reduccin del infiltrado inflamatorio en densidad y extensin en corion y ligamento periodontal en relacin al grupo 2 (Figs 6 y 7). Se

observ adems una ancha zona de insercin del epitelio de unin a la superficie del cemento.

Figura 3. Caso perteneciente al grupo control. H&E 10x

Figura 4. Periodontitis de 21 das de evolucin, ntese la reabsorcin de la cresta sea interradicular. H&E 10x

Figura 5. Caso perteneciente al grupo irrigado con agua destilada. Ntese la presencia de un infiltrado inflamatorio y congestin en la zona interradicular. H&E 10x

Figura 6. Caso perteneciente al grupo irrigado con 0,5 ml de metronidazol. Ntese la reduccin del cuadro inflamatorio y de la prdida sea.

Anlisis Morfomtrico Los resultados del anlisis morfomtrico se expresan en la tabla 1.

Tabla 1 Determinaciones Histomtricas Grupos 1 2 3 4 RO% 366 699 4324 4811 FO% 2410 44 166 94 PO% 32 124 53 31* VO 0,60,08 0,70,06 0,60,12 0,80,08

Desvo estndar RO%: Porcentajes de superficies de reabsorcin sea con respecto al total de la superficie periodontal en el hueso interradicular sobre el segmento A-B. (Fig 1). FO%: Porcentajes de superficies de formacin sea respecto al total de la superficie periodontal en el hueso interradicular sobre el segmento A-B. (Fig 1). PO%: Perdida sea, porcentaje que ocupa el espacio periodontal comprendido entre la furcacin de las races y la cresta del hueso interradicular, en el total de la altura del espacio interradicular. VO: Volumen seo, razn entre el volumen trabecular y el volumen seo total, en el tercio cervical. *p<0,05 con respecto al grupo 2. (Test de Kruscall-Wallis)

Discusin El presente trabajo muestra en forma experimental, que en periodontitis tratadas por irrigacin local con metronidazol fue posible observar aumentos en el volumen seo y reduccin de la prdida sea.

La enfermedad periodontal es producida por una variedad de microorganismos, siendo los anaerobios de fundamental importancia en el inicio y evolucin de la periodontitis (9). En muchos casos, esta poblacin microbiolgica no puede ser eliminada por el raspaje y alisado radicular ya que se ubican en bolsas muy profundas, lesiones de furcacin o han invadido los tejidos periodontales. Para subsanar esta dificultad es frecuente el uso de la combinacin de terapias mecnicas y antibiticas. Los microorganismos que colonizan las bolsas periodontales sintetizan lipopolisacaridos y otros productos que inducen a las clulas inflamatorias a la liberacin de diferentes citoquinas tales como la interleuquina 1 (IL1), IL3, IL6, factor de necrosis tumoral a y b y prostaglandina E2 (10, 11). Estos factores activan a los osteoclastos e inhiben a los osteoblastos, lo que da por resultado prdida progresiva del hueso alveolar con reduccin de su volumen. Estudios clnicos y bacteriolgicos en perros (5, 6) han demostrado que el metronidazol administrado en forma sistmica controla la formacin de placa subgingival, el desarrollo de espiroquetas y formas mviles, como as tambin la inhibicin de anaerobios, lo que reduce clnicamente la gingivitis y previene la periodontitis. En el presente trabajo, la aplicacin local de metronidazol, ejercera un efecto similar sobre los citados microorganismos, con la consecuente reduccin en la poblacin de clulas inflamatorias y de la liberacin de factores locales que promueven la reabsorcin sea. Estos resultados indican que el control de los microorganismos de la placa en este modelo experimental reducen la inflamacin gingival, se reestablece el equilibrio entre la formacin y reabsorcin sea, y disminuye en consecuencia la prdida sea.

Referencias 1. Litter M. Compendio de Farmacologa. Cuarta Edicin. Bs. As. Ed El Ateneo. 1992. 2. Van Oosten M.A, Mikx F.H, Rengli H.H. : Microbial and clinical measurement of periodontal pocket during sequential periods of non treatment, mecanical debridementand metronidazol therapy. J Clinic Periodontol.(1987);14:197-204. 3. Venkins W.M.M, Mac Farlane T.M, Gilmour W.N, Ransay I, Mac Kenzie D. Sistemic metronidazole in the treatment of periodontitis. J Clinic Periodontol. (1989);16:443-450. 4. Loesche N.J, Giordano J.R, Hujopel P. Metronidazol in periodontitis: Reduced need of sugeri. J Clinic Periodontol. (1992); 19: 103-112 5. Heijl L, Lindhe J. The efects of metronidazole on the development of plaque and gingivitis in the beagle dogs. J Clinic periodontol.(1979); 6:197-209 6. Dahlen G, Heijl L, Moller H. Development of plaque and gingivitis following antibiotic therapy in dogs. J Clinic Periodontol. (1982); 9: 223-238. 7. Heijl L, Lindhe J. Effect of selective antimicrobial therapy on plaque and gingivitis in the dog. J Clinic Periodontol. (1980); 7: 463-478. 8. Weibel E.R, Kistler G.S, Scherle W.F. Practical stereological methods for

morphometric citology. J Cell Biol. (1966); 30: 24-37. 9. Greenstein G. The role of Metronidazole in the treatment of periodontal diseases. J Periodontol. (1993); 64: 1-14. 10. Schwartz Z, Goultschin J, Dean D, Boyan B. Mechanism of alveolar bone destruction in periodontitis.Periodontology 2000.(1997); 14:158-172. 11. Baker P. The rol of immune responses in bone loss during periodontal disease. Microb and infect. (2000); 2: 1181-1191.