Tincin de gram: La Tincin diferencial de Gram permite identificar la morfologa de la clula bacteriana segun la composicion de la pared celular de la misma,

De acuerdo a este criterio, se puede discriminar entre dos grandes grupos de bacterias: Gram positivas (se tien de color violeta) y Gram negativas (se tien de color rosado) .La diferencia consiste en que la pared de las bacterias gram positivas es gruesa y est formada por varias capas de peptidoglucano aproximadamente 80%90% lo que le permite a la celula retener el colorante primario ( cristal violeta) , mientras que la pared de las bacterias gram negativas est formada por una sola capa delgada de peptidoglucano aproximadamente hasta un 20% la cual est rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolpidos, lipopolisacridos, y lipoprotenas.

APARATOS Y MATERIALES: Ansa goteros Mechero Portaobjetos Pizeta con agua destilada Microscopio compuesto de campo claro

REACTIVOS: Violeta cristal Safranina Lugol Solucin de alcohol-acetona Aceite de cedro (inmersin) Cultivos: Agua sucia Bacterias presente en las manos Yogur en mal estado

Procedimiento: 1. Preparacin del extendido: Con un gotero se coloco una gota de agua en el centro del portaobjeto. Se calent el ansa al rojo vivo para esterilizarla y se extrajo una pequea muestra del cultivo previamente preparado en una caja de petri. Se extendi la muestra hasta formar una fina pelcula sobre el portaobjetos sin tocar los bordes. 2. Fijacin:

Se realizo mediante el mtodo de Koch que consiste en pasar lentamente el preparado por la llama del mechero 3 veces seguidas para secar el portaobjeto , con la precaucin de llevar el extendido hacia arriba. 3. Tincion: Coloracin: Se cubri el extendido con cristal violeta, teniendo la precaucin de teir solamente la porcin del portaobjeto que contena la muestra. Luego de 1 minuto se enjuago la misma con agua destilada. Fijacin: Se trat el extendido con una solucin de lugol para favorecer la retencin el colorante, enjuagando luego con agua destilada al cabo de 30 segundos Decoloracin: Se trat el extendido con alcohol acetona. Coloracin de contraste: Se cubri el extendido con fucsina bsica para poner de manifiesto a las Gram (-), enjuagando luego de 1 minuto. 4. Se repitieron los pasos anteriores con los 3 cultivos realizados

Esquemas: Referencias:

Cultivo de yogur: al realizar la tincin de Gram sobre el extendido de este preparado se observo lo siguiente:

Como puede observarse la muestra contena dos clases de cocos: Staphyloscoccus y Steptoscoccus, prevaleciendo las Bacterias Gram negativa. Cultivo de agua sucia: al realizar la tincin de Gram sobre el extendido de este preparado se observo lo siguiente:

Como puede observarse la muestra contena solo contenia Staphyloscoccus prevaleciendo la especie Gram negativa. Cultivo de Bacterias presente en las manos :al realizar la tincin de Gram sobre el extendido de este preparado se observo lo siguiente:

Nuevamente la muestra contena solo contenia Staphyloscoccus prevaleciendo la especie Gram negativa aunque la proporcin de bacterias en la muestra fue significativamente menor que en los casos anteriores.

Conclusiones: Las coloraciones realizadas en esta experiencia resultaron una herramienta muy til ya que nos brindaron la posibilidad de visualizar las caractersticas mas esenciales de los cultivos analizados tales como estructura celular, formacin de esporas y en el caso de las levaduras, nos permitieron adems observar la reproduccin por gemacin. Los cultivos analizados solo contenas bacterias de la familia de los cocos debido a que las muestras procedan de ambientes pocos agresivos y ricos en nutrientes.