Ao de la Inversin para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria

Universidad Nacional de Piura- Sullana

Facultad: Ing. de Minas

Escuela: Ing. Ambiental

Temas:

EFECTOS DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO: CALCULO DEL KM.

Curso: Bioqumica

Profesor: Lic. Cesar Torres Daz

Alumnos: James Calle Garca Jorge Camacho Jimnez

07 de julio de 2013

EFECTOS DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO: CALCULO DEL KM. Fundamento: En las reacciones no catalizadas, la velocidad de reaccin es proporcional ala concentracin de cada uno de los reactantes. Esto es consistente con el hecho de que la velocidad de colisin entre los reactantes es proporcional de la concentracin de cada uno de ellos. Las reacciones catalizadas por enzimas son algo diferente. Cuando se mide el efecto de la concentracin del sustrato de la velocidad de reaccin, en presencia de una cantidad constante de enzimas, se encuentran de ha muy bajas concentraciones de cantidad constante incrementadas de este , causan velocidades marcadamente incrementadas. Mediciones cuantitativas de la actividad enzimtica, son necesarias para comprender su funcin biolgica y para determinar la cantidad presente en muestra biolgicas. Una descripcin cuantitativa completa es compleja desde el punto matemtico, causa de los muchos pasos intermedios es una reaccin enzimtica, pero pueden hacerse simplificaciones utiles. Una de las mas efectivas es asumir que solo los sustratos y no los productos estn presentes, de modo que la reaccin transcurre solo en una direccin. Bajo este supuesto, se pueden hacer estimaciones de la velocidad mxima (V. Max) alcanzables por velocidades mximas de enzimas y las concentraciones de sustrato para conseguir la mitad de esta velocidad mxima. Esta concentracin se conoce la constante de Michaelis Menten (Km) para la enzima. 0 El conocimiento de la constante de Michaelis es til para determinar cunto sustrato habr para agregarse cuando se desea medir una enzima y lo que es importante, es decir una gua para determinar cuan efectivamente una enzima particular este en funcionando en los tejidos de un organismo vivo. Este es uno de los parmetros que frecuentemente se determinan en las enzimas. OBJETIVO: La presente tiene como objetivo estudiar la influencia de la concentracin del sustrato sobre la velocidad de una reaccin enzimtica para la cual se utilizara la enzima glucosa oxidasa.
I. MATERIALES QUE DEBE TRAER EL ALUMNO.

Agua destilada

II.

REACTIVOS Y MATERIAL BIOLOGICO. FENOL 4 AMINOFENAZONA GLUCOSA OXIDASA PEROXIDASA GLUCOSA

III.

PROCEDIMIENTO

A.- efecto de la concentracin del sustrato sobre la actividad de la glucosa oxidasa TUBO Reactivo de trabajo 1 1ml 2 1 ml 3 1ml 4 1ml

Glucosa 10 20 30 40 Mezclar * * * * Incubar a 37C/10 minutos a (C) * * * * MEZCLAR: Leer en el fotocolormetro usando filtro de 505 nm. Determinado de la actividad enzimtica en cada uno de los tubos de incubacin (del 1 al 4), para la cual comparar la lectura corregida de cada tubo con las lecturas de la curva de calibracin que ser proporcionada. Utilizando concentracin molar del sustrato en cada tubo de incubacin y su correspondiente actividad, graficar de acuerdo de la ecuacin de LINEWEAVER BURK y empleando la grafica, calcular el km y la V.MAX.

LECTURA:

Grupo 1 = 0.2 Grupo 6 = 0.22 Grupo 10 = 0.24

Grupo 2 = 0.26 Grupo 7 = 0.36 Grupo 11 = 0.34

Grupo 3 = 0.24 Grupo 8 = 0.34 Grupo 12 = 0.33

Grupo 4 = 0.24 Grupo 9 = 0.29

CALCULOS: Concentracin de la glucosa: F x Absorvancia del tubo problema RESULTADOS

GRUPO G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8 G9 G10 G11 G12

ABSORVANCIA 0,12 0,26 0,24 0,28 0,22 0,36 0,34 0,29 0,24 0,34 0,33

CONSENTRACION DE GLUCOSA 54,51 118,105 109,02 127,19 0 99,935 163,53 154,445 131,7325 109,02 154,445 149,9025

GRAFICOS:

ANEXOS: