DETERMINACION DE COLIFORMES: PREUBAS DE IDENTIFICACION IMVIC Fundamento Consiste en la determinacin de 4 pruebas que permitirn identificar cules son los

tiempos de microorganismos responsables de contaminacin fecal. Esta prueba IMVIC est basada en: PRUEBA DEL INDOL El indol, un bencilpirrol, es uno de los productos de degradacin metablica del aminocido triptfano. Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptfano con produccin de indol, acido pirvico y amoniaco La produccin de indol es una caracterstica importante para la identificacin de muchas especies de microorganismos. La prueba de indol est basada en la formacin de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo p-dimetilaminobenzaldehido. Este es el principio activo del reactivo de Kovac y Erlich Debe emplearse un medio rico en triptfano Inocular el caldo peptonado con el organismo en estudio e incubar a 37C durante 18 a 24 horas. Al finalizar este periodo aadir 5 gotas del reactivo por la pared del tubo El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interface del reactivo y el caldo segundos despus de aadir el reactivo indica la presencia de indol y es una prueba positiva. PRUEBA DEL ROJO DE METILO El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo de 6.0 (amarillo) y 4.4 (rojo). EL pH al cual el rojo de metilo detecta acido es considerablemente menor que el de otros indicadores utilizados en medios de cultivo bacteriolgicos. Por ende a fin de provocar un cambio de color, el organismo en estudio debe producir grandes cantidades de cido a partir de un sustrato hidrocarbonado que emplea La prueba de rojo de metilo sirve para detectar la produccin de cido y requiere de organismos positivos que produzcan cidos fuertes (lctico, frmico, actico) a partir de glucosa, por la va de fermentacin acida mixta. Inocular el caldo MRVP con un cultivo puro del organismo en estudio. Inocular el caldo a 37C durante 24 horas, finalizado este periodo aadir 5 gotas del reactivo rojo de metilo.

El desarrollo de un color rojo estable en la superficie indica que la produccin de cido es suficiente como para bajar el pH a 4.4 y es positiva PRUEBA DE VOGES PROSKAUER La reaccin de voges proskauer recibe el nombre de los microbilogos que trabajaron a comienzos del siglo XX y los primeros en observar la reaccin de color rojo producida en medio de cultivo apropiado por tratamiento con hidrxido de potasio. Posteriormente se descubri que el principio activo formado en el medio por metabolismo bacteriano es el acetilmetilcarbinol, un producto de la va butilenglicol. El cido pirvico, componente fundamental formado en la degradacin fermentativa de la glucosa es metabolizado luego a travs a varias vas, de acuerdo con los sistemas enzimticos que poseen las diferentes bacterias. Una de dichas vas lleva a la produccin de acetoina (acetilmetilcarbinol), un subproducto de la reaccin neutra. Los organismos que producen acetoina como principal subproducto del metabolismo de la glucosa y forman cantidades menores cidos mixtos. En presencia de oxigeno atmosfrico e hidrxido de potasio al 40%, la acetoina se convierte en diacetilo y el alfa naftol acta como catalizador para revelar un complejo de color rojo. Inocular un tubo de caldo MRVP como un cultivo puro del organismo e incubar a 37C por 24 horas, al finalizar este periodo transferir alfa naftol e hidrxido de potasio al 40%, agitar el tubo el tubo para exponerlo al oxgeno y dejarlo en reposo por 10 minutos. Una prueba positiva est indicada de color rojo a los 10 minutos de aadir los reactivos, revelando la presencia de diacetilo, producto de la oxidacin de acetoina CITRATO DE SIMMONS El citrato de sodio es una sal de cido ctrico, un compuesto simple que construye uno de los metabolitos del ciclo de Krebs. Algunas bacterias pueden obtener energa por va distinta de la fermentacin de hidratos de carbono, utilizando citrato como nica fuente de carbono. La determinacin de esta caracterstica importante para la identificacin de muchas enterobacterias. Tomar una colonia bien aislada de las superficies de un medio e inocular en una sola estra en el pico de agar citrato e incubar a 37C por 24 a 48 horas El desarrollo de un color azul intenso de 24 a 48 horas indica una prueba de positiva y revela que el organismo ha sido capaz de utilizar el citrato contenido en el medio, con la formacin de productos alcalinos. RESULTADOS DE IMVIC INDOL ROJO METILO VOGES PROSKAUER CITRATO

SHIGELLA ESCHERICHIA SALMONELLA ARIZONA CITROBACTER KLEBSIELLA ENTEROBACTER SERRATIA HAFNIA PROTEUS PROVIDENCIA

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RESULTADOS OBTENIDOS DEL ENSAYO

STREPTOMETYRIA PRUEBA PARA DETERMINAR LA PRESENCIOA O AUSENCIA DE STREPTOCOCCUS FAECALIS ENTEROCOCO Fundamento Streptococcus faecalis corresponde a cocos Gram positivos aerobios o anaerobios facultativos, catalasa negativo y fermentadores de glucosa con la consiguiente produccin de cido a 37C y en un tiempo mximo de 48 horas. Posteriormente se realiza la tabulacin NMP estreptococos Material Pipetas estriles y graduadas Estufa de cultiva a 37C Medio de cultivo de Rothe en donde la presencia de azida sdica en su composicin va a inhibir a todas las bacterias Gram negativas y gran parte de las Gram positivas. Permitiendo el crecimiento de Streptococcus faecalis Muestra de agua Tcnica Se dispondr de una gradilla con serie de medios de cultivo de Rothe

Con la pipetas estriles se tomaran los volmenes indicados y se vierten en condiciones de total esterilidad la muestra de agua. Igual al procedimiento del NMP de coliformes pero sin tener la campana de Durham Una vez sembrados se incubaran a 37C por un mximo de 48 horas. Interpretacin Se consideraran positivos aquellos tubos que presenten turbidez o sedimento, posteriormente de acuerdo con los resultados, se recontara el nmero de streptococos con la tabulacin de NMP en maysculas a partir de los tubos, si se desea se puede realizar pruebas de confirmacin sembrando en agar sangre y agras streptococcus K, realizando la prueba de catalasa, tincin de Gram OBSERVACION DEL PROCEDIMIENTO

RESULTADOS OBTENIDOS

RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS Fundamento Consiste en la siembra de agua en medio solido OGY que impide el crecimiento de bacterias y facilita el de hongos y levaduras Material Muestra problema Pipetas graduadas estriles Asa de Digrasky Medio OGY

Tcnica Sembrar con pipeta graduada estril unos 0.5 ml de inoculo en el medio solido OGY que impedir el crecimiento bacteriano.

Extender inoculo en la placa con el asa de Digrasky en condiciones de total esterilidad e incubar a temperatura ambiente por 5 das Interpretacin resultados Visualizacin de las colonias formadas RESULTADOS DEL ANALISIS

ANALISIS BACTERIOLOGICO DEL AGUA AEROBIOS MESOFILOS TOTALES

ANALISIS BACTERIOLOGICO DE AGUAS

COLIOFORMES TOTALES Y FECALES

TABLA DEL NUMERO MAS PROBABLE