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La mitosis es un proceso por el cual una celula se divide en dos clulas idnticas, con la misma informacin gentica que la celula original. Mediante la mitosis los seres vivos crecen y reemplazan sus clulas muertas. El proceso mittico es igual en todos los organismos y comprende una serie de cuatro fases: Profase, Metafase, Anafase y Telofase, caracterizadas por los cambios que ocurren principalmente en los cromosomas. OBJETIVO Observar las distintas fases de la mitosis en clulas de cebolla MATERIALES Microscopio ptico Portaobjetos Cubreobjetos Bulbo de la cebolla Palillo de dientes Navaja de afeitar o bistur Papel absorbente Colorante de acetocarmin o carmin actico Aceite de inmersin Mechero de bunsen Alcohol
PROCEDIMIENTO 1. Seleccionar un bulbo de cebolla pequeo (de 5 a 7 cm de dimetro). Insertar tres o cuatro palillos en la cebolla, de tal manera que se pueda suspender en un vaso con agua. La base de la cebolla debe tocar la superficie del agua. 2. Observar directamente hasta que las races crezcan cerca de 2 cm., de largo y entonces cortar con el bistur la mitad inferior (alrededor de 1cm o menos) de la raz 3. Colocar la punta de la raz en el tubo de ensayo y agregar colorante de acetocarmin hasta que la cubra. Caliente el tubo de 2 a 3 minutos cuidando que no hierva el liquido y evitando el contacto con el colorante la inhalacin de los vapores, ya que es toxico 4. Tomar una muestra de la parte mas teida y colocarla en un portaobjetos, agregue una gota de colorante. Con la navaja o bistur desmenuce finamente esa porcin y coloque en un cubreobjeto 5. Absorber el exceso de colorante con el papel y con un borrador de un lpiz, presione uniformemente la preparacin 6. Observar la preparacin al microscopio, localizar clulas en diferentes fases de la mitosis (comprelas con los esquemas que se muestra en el capitulo correspondiente)
1. BIBLIOGRAFA
2 cebollas paiteas 2 ajos enteros 2 tomates 2 rbanos 2 tallos de apio Agua destilada Sal de mesa (NaCl) Bicarbonato sdico Detergente lquido o champ Alcohol isoamlico a 0C (se pueden poner todo el curso de acuerdo para adquirirlo) Licuadora Nevera Centrfuga Vasos Tubos de ensayo Varillas fina Pipetas
4. MTODO 1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un bao de hielo triturado: 120 ml de agua, si es posible destilada. 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. 5 g de bicarbonato sdico. 5 ml de jabn lquido o champ. 2. Cortar la muestra vegetal en cuadraditos.
3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas a la accin del detergente. 4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos o agitar con la mano, dejar reposar un momento y despus pipetear el sobrenadante. 5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre el tampn. 6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extrem con el aspecto de un copo de algodn mojado.