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REGULACION NEUROENDOCRINA DE LA FUNCION OVARICA G. Rivera Introduccin. Control de la secrecin de gonadotrofinas La secrecin de gonadotrofinas hipofisarias (LH y FSH), es el principal factor que regula la funcin ovrica. Neuronas hipotalmicas especializadas (decapeptidrgicas), producen y secretan la hormona liberadora de gonadotrofinas (GnRH), que controla la funcin hipofisaria. A su vez, otros sistemas de neuronas (catecolaminrgicas y opioidrgicas) integran la informacin del medio externo (luz, temperatura, olores, interacciones sociales) e interno (concentracin de esteroides), y convergen sobre la neurona decapeptidrgica para regular su funcin (KALRA y KALRA, 1984). La GnRH es secretada en forma de pulsos discretos (CLARKE, 1988), que -va sistema porta-hipofisario- alcanzan la adenohipfisis. Los pulsos de GnRH determinan la secrecin tpica de pulsos de LH/FSH. Los esteroides ovricos afectan la secrecin de LH/FSH a travs de un mecanismo de retroaccin negativa (GOODMAN y KARSCH, 1980; CLARKE, 1988; PRICE y WEBB, 1988). La progesterona (P4) inhibe la liberacin de LH, que es secretada en pulsos caractersticos de baja frecuencia (1 c/6-8 h) y gran amplitud durante la fase luteal (RAHE, 1980). Cuando se produce la lutelisis, la concentracin de P4 en sangre disminuye y aumenta la frecuencia de los pulsos de LH. Estos, estimulan la produccin de andrgenos tecales, que son convertidos a E2 en las clulas granulosas. El E2 estimula la secrecin de pulsos de LH de alta frecuencia, pero de baja amplitud (GOODMAN y KARSCH, 1980; KARSCH, 1987). En el control de la secrecin de FSH interviene, adems de E2, la inhibina que es un pptido de origen ovrico (FINDLAY y CLARKE, 1987).

Regulacin endocrina de la funcin ovrica El ciclo estral (CE) de la vaca tiene una extensin media de 21 das. El celo dura aproximadamente 18 h y la ovulacin tiene lugar 15 h despus de la finalizacin del mismo. El CL se desarrolla y la secrecin de P4 aumenta entre el 4 y 12 da del ciclo y permanece constante hasta la lutelisis. La regresin del CL es variable y ocurre entre el 15 -20 da del CE (HANSEL y ECHTERNKAMP, 1972; LUQUE y col., 1983). Con el objeto de hacer un anlisis detallado de las interacciones endocrinas durante el CE, es conveniente dividirlo en 3 etapas (HANSEL y CONVEY, 1983): - fase folicular o de regresin luteal - fase periovulatoria - fase luteal

Fase folicular o de regresin luteal Las concentraciones de P4 en sangre, decaen abruptamente a niveles 1 ng/ml entre las 24-36 h de iniciada la lutelisis, ya sea en forma natural (DIELEMAN y col., 1986) o inducida por PGF2 (SCHAMS, 1987). La cada de las concentraciones de P4 por debajo de un determinado nivel "umbral", en presencia de concentraciones bajas de E2, elimina la retroaccin negativa sobre la secrecin de gonadotrofinas. Consecuentemente, aumenta la frecuencia de la descarga de LH y, en menor grado, la de FSH (SCHAMS, 1987). En esta fase, la hipfisis secreta aproximadamente 1 pulso de LH/FSH cada 60 min. El incremento en la frecuencia de pulsos de LH/FSH estimula el desarrollo de un folculo grande, que secreta cantidades crecientes de E2. El E2 se secreta en forma de pulsos, que son detectados en la vena cava (SCHAMS, 1987), concomitantes o inmediatamente despus de los pulsos de LH. El grado de desarrollo folicular al momento de la lutelisis determina el tiempo que transcurre hasta que un folculo completa su crecimiento y es capaz de producir cantidades suficientes de E2 como

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para iniciar el celo y la onda preovulatoria de LH (IRELAND y ROCHE, 1987). DIELEMAN y col. (1986) determinaron que un folculo con un dimetro <8 mm alcanza un tamao preovulatorio (20 mm) durante los 2,5 das previos a la onda de LH.

Fase periovulatoria Durante este perodo se producen importantes fenmenos: inicio del celo, onda preovulatoria de gonadotrofinas y ovulacin. El intervalo entre el inicio de la lutelisis y el comienzo del celo es de 58-60 h aproximadamente (DIELEMAN y col., 1986). Los niveles de E2 aumentan desde la regresin luteal hasta alcanzar un plateau el da previo al inicio del celo. Dicha elevacin del E2 provoca el comportamiento propio del celo (HURNIK, 1987) y desencadena la onda preovulatoria de LH. Esta, tiene una duracin de 6-10h, se inicia junto con el celo y alcanza su valor mximo (pico) 4-5 h ms tarde (RAHE y col., 1980; DIELEMAN y col., 1986). Mediante la toma de muestras de sangre c/5 min se determin que el intervalo entre pulsos de LH/FSH previo a la onda gonadotrfica es de 38-40 min (WALTERS, 1984). Durante la onda preovulatoria, tanto la descarga de LH (RAHE y col., 1980; WALTERS y SCHALEMBERGER, 1984), como la de FSH siguen un patrn pulstil (WALTERS y SCHALEMBERGER, 1984). El E2 acta mediante los siguientes mecanismos para desencadenar la secrecin preovulatoria de LH: * Aumenta la sensibilidad hipofisaria al estmulo de la GnRH (KESNER y col., 1981). * Aumenta el nmero de receptores para GnRH en las clulas hipofisarias (SCHOENEMANN y col., 1985). * Estimula la sntesis de gonadotrofinas, dado el incremento que se observa en el contenido de ARNm para estas hormonas previo y durante la onda de LH (LANDEFELD, 1985). * Aumenta el efecto "preparador" (self-primming effect) de la GnRH (KESNER y col., 1981; PADMANABHAN y col., 1981), esto es, el proceso mediante el cual la GnRH incrementa la respuesta hipofisaria a exposiciones sucesivas de esta hormona. * Establece un mecanismo a nivel hipotalmico que culmina en la liberacin de una onda de GnRH, que a su vez induce la onda de gonadotrofinas (HANSEL y CONVEY, 1983). Las observaciones de WALTERS y SCHALEMBERGER (1984) determinaron que las concentraciones de E2 disminuyen al menos durante los 60 min previos al comienzo de la onda de LH y aumentan con su iniciacin. Los mismos autores propusieron que esta disminucin en los niveles de E2 es la seal que dispara la onda de LH, al remover su efecto inhibitorio sobre el hipotlamo. Despus de la onda preovulatoria, no se detectan pulsos de LH durante 6-12h (WALTERS y SCHALEMBERGER, 1984), lo que refleja el agotamiento del contenido pituitario de esta hormona. Sin embargo, la secrecin de FSH contina y se produce un segundo pico de la misma (HANSEL y CONVEY, 1983; IRELAND y ROCHE, 1987; WALTERS y SCHALEMBERGER, 1984), que parece deberse a la remocin del feed-back negativo de la inhibina al destruirse su fuente de produccin (folculo) al momento de la ovulacin.

Fase luteal El CL se desarrolla completamente durante la primera semana post-ovulacin y la concentracin de P4 en plasma aumenta hasta alcanzar un pico al dia 10 del ciclo (HANSEL y col., 1973). Un segundo pico de E2 se produce en este momento, cuyo origen es la presencia de folculos estrgeno activos en el ovario (IRELAND y ROCHE, 1987). La secrecin de LH contina en forma de pulsos, que son menos frecuentes a medida que avanza la fase luteal (WALTERS y col., 1984). Las concentraciones elevadas de P4 determinan una pulsatilidad de LH de baja frecuencia y gran amplitud (RAHE y col., 1980). Durante la fase luteal media la frecuencia de secrecin de pulsos de FSH es mayor que la de LH

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(WALTERS y col., 1984) y aquellos son seguidos por pulsos de P4. Esto indicara que la FSH tambin es un importante estmulo para la secrecin de P4 en la vaca y que los esteroides ovricos modulan la secrecin de FSH en menor extensin que la de LH. Funcin del cuerpo lteo El cuerpo lteo ocupa una posicin central en el proceso reproductivo de los mamferos. La P4 es el producto de secrecin endocrino primario, aunque el CL secreta prostaglandinas (PG), una variedad de hormonas peptdicas y proteicas (relaxina, oxitocina, vasopresina) y en algunas especies estradiol (NISWENDER y NETT, 1988; SCHAMS y col., 1987). La P4 prepara el endometrio para la implantacin y mantiene la gestacin. Si no hay fecundacin la funcin luteal declina y se reanuda el ciclo ovulatorio, lo que indica que una segunda funcin del CL es bloquear la ovulacin. El CL est formado por dos tipos de clulas esteroidognicas; las clulas luteales grandes y las pequeas. Las primeras derivan de las clulas de la granulosa y las segundas de las clulas tecales (HANSEL y DOWD, 1986; AULETTA y FLINT, 1988). No obstante se observa una poblacin de clulas grandes que derivaran de clulas pequeas de origen tecal, dado que unen anticuerpos monoclonales dirigidos contra antgenos tecales (ALILA y HANSEL, 1986). Las caractersticas principales de cada tipo celular pueden resumirse como sigue (SMITH, 1986; AULETTA y FLINT, 1988; NISWENDER y NETT, 1988): si bien ambos tipos celulares producen P4 in vitro, las clulas pequeas son ms sensibles a la LH, poseen mayor cantidad de receptores para esta hormona y la respuesta es mediada por el sistema AMPc-adenilato ciclasa. Las clulas luteales grandes poseen menos receptores para LH (la mayor parte de los receptores son para PGF2 y E2) y producen oxitocina (OT). A diferencia de las clulas luteales pequeas, en stas la produccin de P4 sera controlada (al menos parcialmente) por el sistema Ca++ - fosfatidil inositol quinasa C. La regulacin de la funcin luteal es un proceso complejo. En ella intervienen factores trficos y lticos que estan presentes en forma concurrente durante todo el ciclo estral y por lo tanto la estimulacin o la inhibicin de la sntesis y secrecin de P4 depende del balance entre estos factores. Factores luteotrficos Numerosos estudios in vivo e in vitro han demostrado que la LH es el factor luteotrfico ms importante en la vaca (HANSEL y CONVEY, 1983; SMITH, 1986; NISWENDER y NETT, 1988). La administracin de LH in vivo prolonga la vida del CL (DONALDSON y HANSEL, 1965; HANSEL, 1967) e in vitro estimula la secrecin de P4 (HANSEL; 1967), mientras que el suero anti-LH provoca lutelisis in vivo (HOFFMAN y col., 1974). En un estudio detallado de la fase luteal (WALTERS y col., 1984), se observ secrecin de pulsos adicionales de FSH (en relacin a los de LH) que fueron seguidos por pulsos de P4. Por otra parte, se ha descrito la presencia de receptores para FSH en el CL bovino (MANSS y col., 1984). En conjunto estas observaciones demuestran que tanto la LH como la FSH ejercen una importante accin luteotrfica en la vaca. A diferencia de los animales de laboratorio, la prolactina no tiene accin luteotrfica en la especie bovina (HOFFMAN y col., 1974). Algunos compuestos derivados del metabolismo del cido araquidnico (AA) tambin tienen accin trfica sobre el CL (HANSEL y DOWD, 1986). La metabolizacin del AA (MILVAE, 1986) produce -va cicloxigenasa- 3 compuestos principales: PGI2 (prostaciclina), PGF2 y tromboxano A2. A travs de la va lipoxigenasa se generan diversos metabolitos, siendo los ms importantes los leucotrienos y las lipoxinas. La PGI2 estimula la sntesis de P4 in vivo e in vitro (MILVAE y HANSEL, 1980b). El contenido y la biosntesis de PGI2 en el tejido luteal es mayor en los estadios tempranos del CE (MILVAE y HANSEL,

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1983). Adems, la relacin PGI2/PGF2alfa como la produccin de P4 disminuyen con el envejecimiento del cuerpo lteo (MILVAE y HANSEL, 1983). La administracin de indometacina, un inhibidor de la va cicloxigenasa entre los das 4-6 del ciclo estral, reduce la secrecin de P4 y la vida del CL (MILVAE y HANSEL, 1985). La informacin precedente demuestra que la prostaciclina es un importante regulador de la funcin luteal. En forma directa, actuara sobre las clulas luteales estimulando la produccin de P4 a travs de un aumento intracelular en los niveles de AMPc (HANSEL y DOWD, 1986) indirectamente mediante su accin angiognica y aumentando el flujo sanguneo hacia el ovario (SMITH, 1986). Factores luteolticos An no se conocen exactamente los mecanismos que provocan la lutelisis ni cul es la seal que la inicia. La regresin luteal es consecuencia de una compleja interaccin entre receptores y hormonas, donde intervienen por lo menos la PGF2alfa, la oxitocina y el E2 (AULETTA y FLINT, 1988). La PGF2alfa parece ser el factor uterino endgeno que inicia la lutelisis en los rumiantes (INSKEEP y MURDOCH, 1980; NISWENDER y NETT, 1988). El tratamiento de animales intactos con inhibidores de la sntesis de prostaglandinas tales como la indometacina (TROXEL y KESLER, 1984) o la inmunizacin pasiva contra PGF2 (FAIRCLOUGH y col., 1981; COPELIN y col., 1989) bloquea la lutelisis espontnea en la vaca. ARMSTRONG y HANSEL (1959) observaron que la administracin de oxitocina entre los 2-6 d del ciclo estral provoc lutelisis y retorno al celo en vacas intactas pero no en animales histerectomizados. En aqullas con histerectoma unilateral la oxitocina indujo lutelisis slo cuando el cuerno uterino remanente era ipsilateral al ovario con CL (GINTHER y col., 1967), lo que sustenta la hiptesis de un mecanismo de transferencia tero-ovrico local. No obstante, no hay evidencias concluyentes sobre la presencia de tal mecanismo en la vaca. Si bien la administracin de OT durante la fase luteal temprana indujo un aumento en las concentraciones de PGF2 en la vena uterina y una declinacin en las de P4 en yugular, los niveles de PGF2alfa en la arteria ovrica permanecieron bajos y fueron semejantes a los observados en circulacin perifrica (MILVAE y HANSEL, 1980a). La lutelisis en la vaca es consecuencia de una interaccin entre la secrecin de OT luteal y la de PGF2alfa endometrial (AULETTA y FLINT, 1988). La OT luteal es producida por las clulas luteales grandes en el bovino (SCHALLEMBERGER y col., 1984; O'SHEA, 1987). La tasa de sntesis es mayor en la fase luteal temprana y luego se almacena, de tal forma que el contenido de OT en el tejido luteal aumenta en la fase luteal media-tarda. Al iniciarse la lutelisis la secrecin de OT se incrementa en forma paralela a los niveles de PGF2 (SCHAMS, 1987; PETER y col.1989). La PGF2alfa estimula la secrecin de OT luteal (SCHAMS, 1987) y sta a su vez, induce la secrecin de PGF2alfa endometrial (MILVAE y HANSEL, 1980a). Este mecanismo de feed-back positivo es responsable de la regresin del CL (AULETTE y FLINT, 1988). La sensibilidad del mecanismo mencionado est condicionada por el medio esteroidal endgeno. En vacas ovariectomizadas el E2 estimula y la P4 deprime la secrecin de PGF2 inducida por OT (LAFRANCE y GOFF, 1988). En vaquillonas, las concentraciones de P4 no caen por debajo de 1 ng/ml hasta 32 h posteriores a la aplicacin de PGF2 durante la fase luteal media, mientras que durante la fase luteal temprana o tarda la declinacin se produce dentro de las 24 h (BERARDINELLI y ADAIR, 1989). SILVIA y TAYLOR (1989), observaron una relacin positiva entre la magnitud de la respuesta a OT y la tasa de E2/P4 en la fase luteal temprana y tarda, pero no en la fase luteal media. Aparentemente la variacin en la respuesta a la OT est relacionada con la fluctuacin en la cantidad de sus receptores endometriales a lo largo del CE. Los receptores para OT alcanzan una concentracin mxima durante el celo, disminuyen a niveles casi indetectables durante la fase luteal media y aumentan nuevamente entre los das 18-19 del CE (SCHAMS y col., 1987). En ovejas el E2 induce la formacin de receptores para OT (Mc CRAKEN, 1984). Durante la fase luteal la P4 bloquea la acumulacin nuclear de receptores de E2 y en consecuencia, la capacidad de E2 para mantener la sntesis de receptores para OT. Cuando la accin de la P4 sobre el tero comienza a disminuir (fase

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luteal tarda), el E2 estimula la sntesis de receptores para oxitocina. Las concentraciones basales de sta interactan con sus receptores uterinos, lo que amplifica la liberacin endometrial de PGF2alfa y desencadena la lutelisis (Mc CRAKEN, 1984; SCHALEMBERGER y col., 1984; SCHAMS y col., 1987). La PGF2alfa ejercera sus efectos luteolticos a travs de los siguientes mecanismos (AULETTA y FLINT, 1988; NISWENDER y NETT, 1988): disminucin rpida del flujo sanguneo luteal, desacople del complejo receptor LH-adenilato ciclasa, y accin citotxica sobre las clulas luteales. Numerosos experimentos demuestran que el E2 es un potente factor luteoltico en la vaca (HANSEL y col., 1973). El E2 administrado en forma sistmica durante la fase luteal media provoca lutelisis (ELEY y col., 1979) y la destruccin folicular mediante irradiacin X prolonga la funcin luteal (VILLA-GODOY y col., 1981). La secrecin de PGF2 aumenta en respuesta al suministro de E2 en forma local o sistmica (TATCHER y col., 1984), lo que demuestra una interaccin entre estas hormonas durante la lutelisis en rumiantes. En relacin a la lutelisis inducida por PGF2alfa intervienen dos factores principales en la variabilidad asociada a la sincronizacin de celos: el estadio del ciclo estral al momento de la aplicacin y la dosis utilizada. BERARDINELLI y ADAIR (1989), demostraron la existencia de una interaccin entre ambos factores que puede sintetizarse as: con dosis bajas se observa una proporcin creciente de vacas en celo a medida que el estadio del CE avanza (envejecimiento del cuerpo lteo), mientras que con dosis altas la proporcin de vacas en celo es mayor, an en los estadios iniciales del ciclo y mxima en la fase luteal tarda. La confluencia de los factores mencionados explicara la variacin observada en las respuestas a los tratamientos de sincronizacin de celos con agentes luteolticos.

Crecimiento y desarrollo folicular Aspectos morfolgicos La gametognesis en la hembra incluye dos procesos: ovognesis y foliculognesis. Durante la vida fetal (50-130 d de gestacin), se produce la multiplicacin (mitosis) de las ovogonias. Aproximadamente a los 80 das de la gestacin los ovocitos inician la meiosis, detenindose el desarrollo (arresto meitico) en el estadio de dictiotene de la profase I (WASSARMAN, 1988). La meiosis se reanudar slo en algunos ovocitos, despus de una onda preovulatoria de LH en cada CE (animal adulto). La funcin primaria del folculo ovrico en mamferos es la liberacin de un ovocito apto para ser fertilizado. La foliculognesis puede ser definida como la formacin de folculos maduros, preovulatorios (de De GRAAF), a partir de una reserva de folculos primordiales (SPICER y ECHTERNKAMP, 1986). La foliculognesis comienza en la vida fetal con la formacin de los folculos primordiales. Este proceso consiste en: crecimiento del ovocito, diferenciacin de una capa de clulas granulosas (planas) y de una capa celular (teca interna) por fuera de la membrana basal (GREENWALD y TERRANOVA, 1988). Se constituye as una reserva de folculos cuyo crecimiento se encuentra detenido (nongrowing pool). Los folculos primordiales entran a la reserva de folculos en crecimiento (preantrales y antrales) por medio de un estmulo no identificado an, que parece ser independiente de la presencia de las gonadotrofinas (SCHAMS, 1987). Despus de la reanudacin del desarrollo, se forman los folculos primarios, que se caracterizan por poseer una capa de clulas granulosas cuboidales y un mayor desarrollo de la teca interna. Cuando el folculo presenta dos o ms capas de clulas granulosas cuboidales se denomina folculo secundario. Ambos, primario y secundario, son folculos preantrales. El nmero relativamente constante de folculos preantrales presentes en el ovario a travs del CE, se ha descripto frecuentemente, como una evidencia de la independencia de su crecimiento en relacin al nivel de gonadotrofinas. No obstante, diversos estudios (GREENWALD y TERRANOVA, 1988) demostraron que el nmero de folculos preantrales disminuye significativamente luego de la hipofisectoma en varias especies (rata, hamster, oveja), lo que indica que el desarrollo folicular an desde sus estadios iniciales es influenciado por las gonadotrofinas.

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El paso siguiente en la foliculognesis es la formacin del antro, por medio de la coalescencia de pequeas gotas de fluido folicular (FF) secretadas por las clulas granulosas. El nmero de folculos antrales o terciarios depende del nivel de gonadotrofinas. Un porcentaje inferior al 1% de los folculos desarrollar hasta la fase preovulatoria, mientras que el resto sufrir un proceso de regresin o atresia. La atresia puede comenzar en cualquier estadio del desarrollo y se caracteriza por: picnosis y fragmentacin de las clulas granulosas, invasin leucocitaria, prdida de contacto intercelular, aumento de la permeabilidad de la membrana basal, hipertrofia de las clulas tecales y disminucin de la secrecin de E2 (RYAN, 1981; GREENWALD y TERRANOVA, 1988). Dinmica folicular. Su importancia La produccin econmica del nmero mximo de embriones de excelente calidad es uno de los objetivos clave para el xito de los programas de transferencia embrionaria a nivel comercial. Esto tiene una estrecha relacin con la comprensin de los mecanismos que controlan el crecimiento y la maduracin del folculo y del ovocito. Los procesos recurrentes de crecimiento folicular y ovulacin, son regulados por complejas interacciones entre hormonas, factores de crecimiento y sistemas de comunicacin intercelular. La amplia variabilidad observada en respuesta a los tratamientos superovulatorios responde entre otros, a factores inherentes al animal (MAPLETOFT y MURPHY, 1987). Uno de ellos es el estadio del ciclo o "status" ovrico al momento de iniciarse el tratamiento. A continuacin se analiza la dinmica del crecimiento folicular a lo largo del ciclo estral.

Desarrollo folicular durante el ciclo estral GOODMAN y HODGEN (1983), sugirieron el uso de los siguientes trminos para describir la folculognesis: * Reclutamiento: Etapa en la que un grupo o "cohorte" de folculos adquiere la capacidad de responder a las gonadotrofinas y necesita de ellas para seguir creciendo. * Seleccin: Proceso por el cual slo "unos pocos" folculos reclutados escapan a la atresia y continan su desarrollo. * Dominancia: Es el conjunto de mecanismos por los que un folculo alcanza un tamao marcadamente superior a los dems, es responsable de la mayor parte de la secrecin de E2, puede detener el crecimiento de otros folculos y/o adquiere la capacidad de continuar su desarrollo en un medio hormonal adverso para el resto de los folculos. Existe una amplia variacin entre animales en cuanto a la distribucin de los folculos antrales a lo largo del ciclo estral. No obstante, mediante el examen histolgico se ha observado la presencia de un folculo nico (>10mm de dimetro) por par de ovarios, en la mayora de los das de un ciclo. Este folculo posee varios mm de dimetro ms que el que le sucede en tamao. Usualmente lo acompaan en la superficie ovrica, 2 a 4 folculos de 4-8mm de dimetro y 20-40 folculos de 1-3mm (IRELAND, 1987). RAJAKOSKI (1960), fue el primero en sugerir la existencia de "dos ondas" de crecimiento folicular durante el CE bovino. La primera, entre los das 3 y 12 del CE, culmina con el desarrollo de un folculo de tamao ovulatorio que generalmente sufrir atresia. La segunda, desde la mitad del ciclo en adelante, termina con el desarrollo del folculo ovulatorio. No obstante, la evaluacin estadstica de los datos que sustentan esta hiptesis ha sido cuestionada por SPICER y ECHTERNKAMP (1986), quienes propusieron un modelo de desarrollo continuo en el que la tasa de entrada de folculos al crecimiento, la tasa de crecimiento y la tasa de atresia se aceleran a medida que se acerca el momento de la ovulacin. Algunos estudios (DUFOUR, y col., 1972; MATTON y col., 1981) han determinado el recambio (turnover) folicular durante el CE in vivo, mediante la inyeccin de tinta India en el estroma que rodea a los 2 4 folculos ms grandes presentes en el ovario (mediante laparotoma). El folculo

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ms grande marcado dentro de los 3 das que preceden al celo ovul en 8/8 vaquillonas (DUFOUR, y col., 1972). Cuando la marcacin fue previa, algn otro folculo ovul, lo que indica que el folculo ovulatorio puede ser identificado confiablemente slo dentro de los 3 das previos al celo. MATTON y col. (1981), determinaron que uno de los 2 folculos ms grandes por par de ovarios presentes al da 3 del CE, persisti hasta el da 13 y desapareci hacia el da 18. De los 10 folculos ms grandes marcados el da 13, slo uno permaneci como el 2 folculo de tamao ovulatorio del CE. Estos datos refuerzan la hiptesis de las 2 ondas de crecimiento folicular propuesta por RAJAKOSKI (1960). Mediante las tcnicas mencionadas (histologa, marcacin in vivo), la mayora de las observaciones son slo puntuales (en el tiempo y en el animal), lo que dificulta la obtencin de un cuadro exacto de la dinmica del crecimiento y regresin folicular en el ciclo estral. Con el advenimiento de la tecnologa del ultrasonido (ecografa), y con ella la posibilidad de realizar un monitoreo diario sobre el mismo animal, se observ la presencia de 2-3 folculos dominantes durante el ciclo estral (PIERSON y GINTER, 1988; SAVIO y col., 1988). El primer folculo dominante, fue detectado en promedio en el dia 4 del ciclo estral y alcanz un dimetro mximo (13-16mm) hacia el da 6-7. Luego sobrellev un perodo de estabilidad relativa entre los das 6-10, y comenz a involucionar hasta no ser detectable hacia el da 15 del CE. Los folculos medianos "no dominantes" de la 1 onda cesaron su crecimiento cuando se desarroll el FD. El segundo folculo dominante fue detectado hacia el da 10 cuando fue ovulatorio (KNOPF y col., 1989) 12 cuando no lo fue (SAVIO y col., 1988). En este caso regres y no pudo ser identificado hacia el da 19 del ciclo. El tercer folculo dominante (ovulatorio) fue identificado en promedio el da 16, y alcanz su tamao mximo el da 21. El segundo folculo dominante ovul en los ciclos de duracin ms corta (GINTER y col., 1989), lo que sugiere que el momento en que se produce la regresin del cuerpo lteo, determina la presencia de 2 3 FD durante el CE. SAVIO y col. (1988), observaron que la tasa de crecimiento fue mayor para el primero y tercero de los folculos dominantes, lo que implicara que durante la fase luteal media la velocidad de crecimiento disminuye probablemente debido al feed-back negativo de P4 sobre las gonadotrofinas. Este momento quizs sea el de mayor dificultad para estimular el crecimiento folicular, lo que tendra implicancias en las respuestas a los tratamientos superovulatorios iniciados en dicho perodo. Secrecin de E2 durante el ciclo estral Los cambios en la concentracin de E2 en cada vena ovrica durante un CE, constituyen el mejor marcador endocrino para describir los procesos de seleccin y dominancia (IRELAND y ROCHE, 1982). En las especies mono-ovulatorias, la produccin de E2 simtrica es indicativa del proceso de seleccin, mientras que la secrecin asimtrica de E2 lo es de la fase de dominancia. Algunas evidencias indican que un folculo nico es responsable de la mayor parte del E2 secretado durante el CE. Un folculo estrgeno-activo, que posee varios mm ms de dimetro que el que le sigue en tamao, est presente durante el estro, otro durante la fase luteal temprana y otro en la fase luteal media (31). Estos folculos tienen concentraciones de E2 ms altas que las de P4 y andrgenos (E2/P4+A) en el FF. En cambio, los folculos 6 mm de dimetro que acompaan a los anteriores, son estrgeno-inactivos (atrsicos) puesto que las concentraciones de P4+A son mayores que las de E2 en su fluido folicular. Los folculos ms grandes secretaron 500-1000 veces ms de E2 que los pequeos cuando fueron removidos e incubados in vitro (STAIGMILLER y ENGLAND, 1982). A lo largo del ciclo estral se producen 3 picos de E2, tanto en circulacin perifrica como en venas ovricas, que son coincidentes con los perodos de dominancia folicular (IRELAND y ROCHE, 1987). Modelo para la foliculognesis durante el ciclo estral (IRELAND y ROCHE, 1982; IRELAND, 1987) Durante el CE se suceden perodos recurrentes de crecimiento y atresia folicular (turnover)

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independientemente de la presencia o ausencia de progesterona. La FSH desempea un papel fundamental en el proceso de reclutamiento folicular, en tanto que niveles basales de esta hormona son suficientes para permitir el crecimiento de una "cohorte" de folculos de 4-8 mm y luego el desarrollo de un folculo dominante. Este, suprime el crecimiento de los otros folculos medianos y grandes que lo acompaan (atresia). Los folculos dominantes que desarrollan en presencia de un CL activo (primero en ciclos c/2 folculos dominantes y segundo en ciclos c/3 FD) tambin sufrirn atresia, debido a la ausencia de un patrn pulstil apropiado de LH capaz de estimular la sntesis de andrgenos y en consecuencia de estrgenos, suficientes como para desencadenar una onda de LH. El FD (no atrsico) presente al momento de la lutelisis, recibir una frecuencia de pulsos de LH adecuada (1 c/40-60 min) que estimular su maduracin final, la secrecin de E2, la descarga preovulatoria de LH y la ovulacin. Las etapas de seleccin y dominancia constituyen un proceso que involucra 3 componentes: * Capacidad de respuesta del folculo preantral a las gonadotrofinas: determinado por el nmero de clulas granulosas y/o tecales o bien por la cantidad de receptores para gonadotrofinas. * Sntesis y secrecin de factores inhibitorios por el folculo dominante: se ha demostrado que el folculo produce factores hormonales y no hormonales que pueden controlar la seleccin modulando la respuesta a las gonadotrofinas. As, el folculo dominante inhibe el desarrollo de los otros folculos que lo acompaan, pero no su propio desarrollo. Uno de los factores implicados es la PRF (protena regulatoria folicular), que bloquea la actividad aromatasa de las clulas granulosas in vitro. En la fase de dominancia, el folculo secreta cantidades elevadas de protena regulatoria, que inhibira la sntesis de E2 en los folculos no dominantes y provocara su atresia. * Establecimiento de un sistema feed-back entre el folculo dominante y la hipfisis: el FD posee en el fluido folicular concentraciones de inhibina y E2 marcadamente superiores a las de otros folculos. Un sistema de feed-back negativo largo clsico se establece entre el folculo dominante y la hipfisis a travs del cual disminuyen los niveles perifricos de FSH, lo que bloquea el reclutamiento de nuevos folculos.

Mecanismos de accin de las gonadotrofinas Los mecanismos de accin de las gonadotrofinas sobre las clulas granulosas y tecales han sido revisados ampliamente (RICHARDS, 1980; IRELAND y ROCHE, 1982; NISWENDER y NETT, 1988). Las clulas granulosas de los folculos preantrales poseen receptores p/FSH, mientras que los receptores p/LH slo aparecen cuando se forma el antro. En cambio, las clulas tecales poseen receptores p/LH desde el estadio preantral, pero nunca desarrollan receptores p/FSH. Durante la foliculognesis, la FSH induce la sntesis de sus propios receptores y luego los de LH en las clulas granulosas. La teora denominada "dos clulas, dos gonadotrofinas" (ERICKSON y col., 1985), es la que mejor explica la biosntesis de esteroides en el ovario. Las gonadotrofinas se unen a sus sitios receptores y activan el sistema de respuesta adenilato ciclasa-AMPc. La adenilato ciclasa posee una subunidad regulatoria (prot G) que es activada por nucletidos de guanina. Posee adems, una subunidad cataltica que metaboliza ATP a AMPc cuando est unida a la prot G. Como resultado del incremento en los niveles intracelulares de AMPc, se produce la activacin de las proten-quinasas que estimulan la fosforilacin de enzimas esteroidognicas y en consecuencia, la sntesis de esteroides. Durante la foliculognesis las clulas de la teca responden a LH, principalmente mediante la activacin de la enzima que cliva la cadena lateral del colesterol (SCC) y las enzimas que intervienen en la biosntesis de andrgenos. Los andrgenos tecales atraviesan la membrana basal y son convertidos a estrgenos (sistema aromatasa) en las clulas granulosas. El desarrollo de un sistema aromatasa activo, regulado por la FSH, constituye un paso clave para la iniciacin de la dominancia folicular. El E2 es un potente amplificador de los efectos de la FSH, aunque otros factores (esteroideos y proteicos) modulan la accin de las gonadotrofinas. La accin de la LH sobre las clulas luteales involucra adems

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del clsico sistema adenilato ciclasa-AMPc, un mecanismo donde interviene el metabolismo de fosfolpidos tales como el fosfatidil-inositol (HANSELy DOWD, 1986; SMITH, 1986; NISWENDER y NETT, 1988). Despus de la unin de la hormona con su receptor, una enzima cliva el fosfatidil-inositol 4-5 difosfato en diacilglicerol (DG) y trifosfato de inositol (IP3). El IP3 libera Ca++ intracelular, mientras que el DG activa una proten-quinasa Ca++ dependiente (quinasa C) que desencadena una respuesta celular. Luego de una serie de conversiones el IP3 y el DG se combinan para resintetizar el fosfatidil-inositol 4-5 difosfato. Este mecanismo parece tener mayor importancia en las clulas luteales grandes.

Otros mecanismos de regulacin Adems del control endocrino, existen mecanismos de regulacin paracrina y autocrina de la funcin ovarica (HAMMOND y col., 1988). El sistema endocrino clsico involucra a diversas glndulas endcrinas que secretan sus hormonas a la circulacin (sangunea o linftica) a travs de la que son transportadas hasta sus rganos blanco. Los mecanismos de regulacin parcrina implican la difusin local de factores de crecimiento o regulacin a las clulas efectoras. Esta forma de comunicacin intercelular tiene gran importancia durante el desarrollo embrionario, previo al establecimiento del sistema circulatorio. La regulacin autcrina es un proceso a travs del cual una clula secreta una hormona, factor de crecimiento o regulacin, para el cual posee receptores funcionales. Diversas sustancias han sido caracterizadas como hormonas intraovricas (factores de regulacin paracrina y autocrina), bajo los siguientes criterios (TSAFRIRI, 1988): a) ser encontrada en ovario sin existir evidencias de un origen extraovrico; y b) demostracin de su efecto biolgico en el ovario in situ, in vitro o en preparaciones de clulas ovricas in vitro. En el FF tanto como en extractos ovricos se han aislado numerosos moduladores de la ovognesis y de la foliculognesis (IRELAND y ROCHE, 1982; TSAFRIRI, 1988), entre los ms importantes se encuentran: inhibidor de la maduracin ovocitaria (OMI); factores de crecimiento y mitognicos: factor de crecimiento epidermal (EGF); factor de crecimiento fibroblstico (FGF); factor de crecimiento de origen plaquetario (PDGF); factores de crecimiento semejantes a insulina (IGF-I/II), protena regulatoria folicular (FRP), factores angiognicos, pptidos semejantes a GnRH, etc. Para muchas de estas sustancias se han determinado receptores en las clulas ovricas. Por ejemplo para el IGF-I, que estimula la mitosis de las clulas granulosas y la esteroidognesis in vitro (HAMMOND y col., 1988). ECHTERNKAMP y col. (1990), demostraron que las vacas genticamente seleccionadas por produccin de mellizos dicigticos, poseen concentraciones de IGF-I en suero y en el fluido folicular ms altas que las no seleccionadas. El IGF-I participa en la regulacin de la foliculognesis y es aparentemente mediador de un componente gentico responsable de las ovulaciones mltiples en la vaca.

Conclusiones El amplio desarrollo de las tcnicas radioinmunolgicas durante los ltimos 20 aos, ha posibilitado conocer detalladamente los ritmos de secrecin endocrina y las interacciones entre los componentes del eje hipotlamo-hipfisis-ovario. El establecimiento de las bases fisiolgicas del proceso reproductivo de la vaca permiti el desarrollo de diversos mtodos para el control del ciclo estral, de gran importancia para el incremento de la eficiencia reproductiva y para los programas de mejoramiento gentico. Asimismo, el estudio de la funcin ovrica mediante la ecografa y las diversas tcnicas de biologa molecular, contribuy a una mejor comprensin de la foliculognesis y de la regulacin luteal.

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A pesar de los esfuerzos realizados, an se desconocen muchos mecanismos fisiolgicos de la actividad neuroendocrina del ovario, como por ejemplo: I) II) III) IV) Factores que controlan la maduracin ovocitaria El ingreso de los folculos con crecimiento detenido al pool de folculos en crecimiento La regulacin de la secrecin de FSH, inhibina y activina Los mecanismos por los que un folculo dominante suprime el crecimiento de los dems folculos durante la fase de dominancia y V) Sistemas de comunicacin intercelular que intervienen en el desarrollo folicular, la esteroidognesis y la regresin luteal.

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