Facultad de Ciencias Biolgicas. Laboratorio de Fisiologa Vegetal Mery L. Suni, Blga. M.Sc.; Enoc Jara, Blgo. Mag.

, Rafael La Rosa Blgo. Mag.,

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

(Universidad del Per, Decana de Amrica)

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Laboratorio de Fisiologa Vegetal

GUA DE PRCTICAS DEL CURSO FISIOLOGIA VEGETAL

Para la E.A.P. de Gentica y Biotecnologa

AUTORES: Mery L. Suni Ninataype Blga. Mag. Enoc Jara Pea Blgo. Mag. Rafael La Rosa Loli Blgo. Mag.

SEMESTRE 2013-I

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CONTENIDO

PRCTICA Prctica 1. Prctica 2. Prctica 3. Prctica 4. Prctica 5. Prctica 6. Prctica 7. Prctica 8. Prctica 9.

TEMA Contenido de agua y potencial hdrico del suelo Determinacin del potencial hdrico foliar Estomas y estado hdrico foliar Transpiracin en hojas de lamo Absorcin de micro elementos Contenido de clorofila en la hoja Medicin de la tasa de fotosntesis (Uso del IRGA) Evaluacin del crecimiento de la planta Maduracin de las estructuras reproductivas

PG.

Prctica 10. Introduccin de tabaco a cultivo in vitro Prctica 11. Interaccin de ABA y AG3 en la germinacin de semillas Prctica 12. Regulacin de la germinacin Prctica 13. Embriognesis somtica en zanahoria

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PRCTICA 1.

CONTENIDO DE AGUA Y POTENCIAL HDRICO DEL SUELO

INTRODUCCIN.La capacidad de campo se define como la cantidad de agua que un suelo retiene en contra de la fuerza de la gravedad. Asimismo, la tensin de humedad de un suelo que ha alcanzado la capacidad de campo suele estar comprendida entre 1/10 y 1/3 de atmsfera. En un suelo bien drenado, de estructura y textura uniforme por lo general se llega a este punto aproximadamente a las 48 horas despus del riego, o los tres das despus de una lluvia (Rodrguez y Rodrguez, 2002; Lpez y Lpez, 1985). La capacidad de campo se puede estimar a partir de la textura del suelo y a partir de porcentaje de porosidad. Asimismo, de acuerdo a Villa Garca (1997), en un suelo franco el valor de la capacidad de campo (%) viene a ser la mitad de su porosidad (%) y para suelos ms sueltos o pesados se estima valores por encima o debajo del valor correspondiente al suelo franco. Sin embargo, la capacidad de campo puede ser afectado por los siguientes factores, 1) Textura. Influye directamente en la cantidad de espacios porosos, en los movimientos de agua y circulacin del aire. En cuanto al tamao de partcula, a mayor tamao ser menor el valor de capacidad de campo y viceversa. 2) Estructura. La agregacin aparente o disposicin de los suelos influye en la aeracin, porosidad, densidad aparente. 3) Materia orgnica. Esta ejerce una fuerza de cohesin sobre las partculas inorgnicas, formando agregados dbiles con los que aumenta la cantidad de poros y, por tanto, el suelo retiene mayor cantidad de agua a su capacidad de campo. El potencial hdrico del suelo puede ser medido con un tensimetro. Este mide la succin o fuerza que ejerce el suelo sobre el agua. A medida que el suelo pierde agua la succin aumenta, es decir, el suelo ejerce ms fuerza para retener agua. Por lo tanto observando cmo vara el valor de la succin podemos saber la evolucin del agua en el suelo. Normalmente se instalan dos tensimetros a distintas profundidades de esta forma podramos medir gradientes hidrulicos y por tanto conocer la direccin de los flujos de agua en el suelo. Tiene las siguientes desventajas, limitado rango de accin, no mide potencial osmtico, que en ciertos casos de salinidad puede ser mayor al

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mtrico, lenta respuesta de lectura, no opera en suelos muy secos o de texturas gruesas, requiere mantencin, mide potencial no contenido hdrico.

OBJETIVO.Evaluar el contenido de humedad y potencial hdrico del suelo MATERIALES. Placas Petri Estufa Balanza de precisin Papel filtro Tensimetro

Por cada subgrupo de trabajo (4 estudiantes) 3 Botellas de plstico de 1.5 L 3 Recipientes plsticos de 1 L (Peziduris) con tapa 2 Muestras de suelo 2 Cucharas descartables Cinta Masking tape

MTODO.1. Determinacin de la capacidad de campo por el Mtodo de la columna del suelo Procedimiento.- Para cada muestra de suelo seguir el procedimiento siguiente: a. Retirar mediante corte, aproximadamente 1/3 de una botella de plstico de 1.5 L (de la parte de la base) b. Cubrir la boca de la botella con papel filtro y asegurar con masking type c. En un recipiente plstico con tapa, de un litro (Peziduri), realizar con un sacabocado o una tijera, un hueco del tamao del cuello de la botella en la parte media de la tapa. d. Tapar el recipiente plstico y fijar las botellas invertidas sobre la tapa e. Agregar de 200-300 g de la muestra de suelo a la botella

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f. Aadir agua hasta lograr completamente la saturacin del suelo y luego cubrir las botellas con un plstico polietileno para evitar la evaporacin del agua. g. Pasado los 7 das evaluar el suelo drenado: de la parte media de la botella, tomar 3 muestras de suelo, cada muestra colocar en las placas petri y taparlas h. Pesar las muestras y anotar los valores del peso hmedo i. Secar las muestras de suelo en la estufa hasta peso constante

Clculo de Capacidad de Campo % de Capacidad de campo = Peso hmedo Peso seco ____________________ Peso seco

2. Instalacin del Tensimetro y evaluacin del potencial hdrico del suelo Procedimiento.Tomar en cuenta que antes de enterrar el tensimetro en el suelo es necesario llenarlo de agua eliminando cualquier burbuja de aire. Para ello se introduce en un balde de agua, y quitando el tapn que obtura hermticamente el extremo opuesto al que va situado la cpsula porosa, se llena de agua mediante succin utilizando una bomba de mano. Una vez el agua rebose por el extremo, cerramos de nuevo el tapn. En estas condiciones, el agua que llena la sonda esta a la presin atmosfrica y el vacumetro marca cero. Adems las medidas de presin hidrostticas estn limitadas a potenciales matriciales inferiores a 1 atm. Para tensiones superiores, puede penetrar aire en el interior de la sonda a travs de la cpsula porosa y se rompera la continuidad de la columna lquida. Asimismo los tensimetros funcionan en el rango de 0 a -0,07 Mpa (-70 cb), que corresponde al 50% de la humedad aprovechable aproximadamente. a) Llenar el tubo del tensimetro con agua sin cerrarlo b) Dejar el tensimetro en balde con agua para saturar cpsula porosa c) Hacer un orificio en el suelo con barreta

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d) Disgregar un poco de suelo al fondo, e) Mojar y ubicar el tensimetro f) Llenar espacio entre pared y tubo g) Hacer montculo de suelo alrededor del tubo h) Registrar el valor del potencial hdrico (Se pueden sacar las burbujas de aire con un succionador)

RESULTADO.1. Determinacin de la capacidad de campo por el Mtodo de la columna del suelo

Cuadro 1. Valores de contenido hdrico evaluado en 2 suelos diferentes. Tipo de Suelo Repeticiones(No. de placas/Tratamiento) Suelo arenoso 1 2 3 Promedio Suelo arcilloso o limoso 1 2 3 Promedio Capacidad de Campo (%)

2. Potencial hdrico del suelo:

REFERENCIAS.Lpez R., J y J. Lpez M. 1985. El diagnstico de suelos y plantas. Edit. MundiPrensa, 4ta Edic. Madrid, Espaa. 368 p. Rodrguez F., H y J. Rodrguez A. 2002. Mtodos de anlisis de suelos y plantas. Edit. Trillas. Mxico, 196 p. Villa Garca, S. 1997. Apuntes del curso de fertilidad del suelo. Departamento de Suelos y Fertilizantes. Facultad de Agronoma. Universidad Nacional Agraria La Molina.

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PRCTICA 2.

DETERMINACIN DEL POTENCIAL HDRICO FOLIAR

INTRODUCCIN.Las plantas desempean un papel importante en el movimiento del agua en la naturaleza y son el eslabn intermedio en el flujo del agua desde el suelo a la atmsfera. El cuerpo de las plantas est constituido, al menos, por un 70% de agua. Para que un vegetal est fisiolgicamente activo precisa, entre otras condiciones, de un balance hdrico favorable. La tendencia del agua a ser retenida por un vegetal es la propiedad ms importante para conocer los movimientos del agua en el sistema suelo-planta/atmsfera. El agua siempre se mover, de manera pasiva hacia los lugares del sistema, en donde el potencial hdrico sea ms bajo. tiene dimensiones de presin. Y sus unidades son el megapascal (Mpa), el bar o la atmsfera. Por otra parte, el estado hdrico de la planta influye fuertemente en el crecimiento de la planta y la produccin de biomasa especialmente a travs de su efecto en la expansin de las hojas y crecimiento de sus races. Inclusive la tasa de fotosntesis de la canopia (equivalente a la produccin de biomasa) declinar bajo estrs hdrico debido al cierre de los estomas y el efecto del dficit en los procesos que se llevan a cabo en los cloroplastos.

OBJETIVO.Determinar el potencial hdrico foliar y el contenido hdrico en plantas sometidas a condiciones de dficit hdrico.

MATERIAL.Tubos con tapa Sacabocados 48 Placas petri 10 Frascos Erlenmeyer Soluciones de sacarosa 0.7m 10 Pipetas 10 mL Balanza analtica y estufa rea de cultivo

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Por cada grupo de trabajo: Hojas de la misma edad y especie pero de plantas con diferente condicin hdrica (sometidas a dficit hdrico y otras sin) Pinzas de punta fina 4L Agua destilada a entregar un da anterior a la prctica (por los 2 grupos de prctica) Papel absorbente (toalla) Marcador de tinta indeleble y lpiz Reloj Etiquetas pequeas (opcional)

MTODO.Determinacin del Potencial Hdrico Foliar por el Mtodo Gravimtrico El potencial hdrico de un tejido vegetal mediante el mtodo del volumen constante o mtodo gravimtrico, se fundamenta en la variacin del peso de un tejido vegetal debido al flujo de agua. Preparar 8 frascos Erlenmeyer de soluciones de sacarosa de concentraciones de 0.05 molar, 0.1 molal, 0.2 molal, 0.3 molal, 0.4 molal, 0.5 molal, 0.6 molal, y 0.7 molal. Luego de cada erlenmeyer con la ayuda de una pipeta retirar 10 ml de sacarosa y aplicarlo a placas petri previamente rotuladas para cada concentracin. Luego con la ayuda de un sacabocado obtener 24 discos foliares por cada condicin hdrica, pasamos a un frasco con tapa. Cada subgrupo trabajar con una concentracin de sacarosa. Inmediatamente pesar 3 discos de cada condicin y rotula con el marcador. Repetir para cada concentracin. Estos valores corresponden al peso inicial de muestra, Po. Introducir tres discos de cada condicin hdrica (total 6) a cada placa petri con la sacarosa. Poner el reloj en tiempo 0 (To) en este instante. Trascurridos 15 minutos a partir del tiempo 0, de cada placa petri sacar con unas pinzas los discos, secarlos con el papel toalla y pesar cada disco (P15). En seguida devolver los discos a las placas petri. Repetir este proceso con cada uno de las placas con las concentraciones restantes, siguiendo el mismo orden. A los 45 minutos repetir este proceso completo con todas las placas petri, anotando los

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pesos y estas sern P45. Dado que las soluciones estn a presin atmosfrica el potencial de presin (p) =0. Y el de la solucin depende del s. El potencial osmtico se calcula a partir de la ecuacin de Van Hoff. s=miRT m= i= R= T= molalidad constante de ionizacin del soluto (para sacarosa=1) constante de los gases (0.00831 kg Mpa/`oK mol); temperatura absoluta (oK)= oC+ 273

RESULTADO.1.- Registre sus datos en una tabla y determine en qu concentracin de sacarosa no ocurre cambio de peso del tejido foliar (h). Grafique el porcentaje de cambio de peso inducido por el potencial de soluto de las soluciones de sacarosa versus su potencial osmtico. 2.- Determine el contenido de hdrico de las hojas segn la condicin de estrs y explique.

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Ficha de registro de datos. Determinacin del potencial hdrico foliar

Sacarosa (m) Repetici n s (Mpa) c/Est 0.05 1 2 3 4 5 0.1 1 2 3 4 5 0.2 1 2 3 4 5 0.3 1 2 3 4 5 0.4 1 2 3 4 5 0.5 1 2 3 4 5 0.6 1 2 3 4 5 0.7 1 2 3 4 5 s/Est c/Est s/Est c/Est s/Est c/Est s/Est c/Est s/Est P0 (g) P15 (g) P45(g) (P45 - P0) % Cambio

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PRCTICA 3.

ESTOMAS Y ESTADO HDRICO FOLIAR

INTRODUCCIN.La epidermis posee estomas usualmente ms numerosos en el lado abaxial de la hoja. La epidermis est usualmente cubierta por una capa denominada cutcula. Esta previene de una excesiva prdida de agua por transpiracin. En otras plantas, sin embargo, las hojas pueden estar reducidas o aun estar ausente, como en las xerofitas. Las plantas en s regulan el intercambio de gases a travs de sus estomas permitiendo el control de las relaciones hdricas y la asimilacin del carbono. Por lo tanto la apertura del estoma refleja un compromiso entre el requerimiento fotosinttico de CO2 y la disponibilidad de agua. La cantidad de agua en el vegetal puede ser expresado de diversas maneras. Todas consideran la medida del peso fresco al momento del muestreo (Pf), el peso seco (Ps, usualmente a 80C) y el peso trgido (Pt) de la muestra. Esta ltima medicin se obtiene al flotar hojas o secciones de hojas en agua en condiciones de punto de compensacin de la luz hasta que se alcance el peso constante.

OBJETIVO.Determinar la densidad de estomas en el haz y envs de las hojas de plantas sometidas a estrs y el contenido relativo de agua de sus hojas.

MATERIALES.Ramas foliares de especies sometidas a estrs hdrico y otra a riego normal. Portaobjetos y cubreobjetos Goteros, pinza, estilete Hoja de afeitar y papel lente, esmalte de uas Tubos con tapa Sacabocados 18 Placas Petri

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06 Pipetas 10 mL Balanza analtica Etiquetas para rotulacin rea de incubacin

MTODO.-

1. Observacin del Tejido epidrmico Sin mover a la hoja de su posicin original, aplicar con la ayuda del pincel del esmalte, una o dos capas de esmalte en la superficie superior e inferior de una hoja madura. Permitir que seque. Luego con la ayuda de una pinza de punta fina, levantar desde un extremo la pelcula que se ha formado y preparar una lmina para su observacin con el microscopio. Reconozca las clulas epidrmicas y las de guardia. A 400X contabilice el nmero de estomas que observa y exprselo como densidad de estomas

(nestomas/mm2) o ndice estomtico [(nestomas/nclulas epidrmicas + nestomas) * 100]. Asimismo contabilice el nmero de estomas abiertos y cerrados presentes en la muestra observada.
2. Contenido relativo de agua

Obtener 5 discos de las hojas de cada condicin hdrica con la ayuda del sacabocados y colocarlos en los tubos con tapa. Pesarlos inmediatamente (Pf). Colocar los discos en las placas con agua destilada a 20C por 3 horas en su punto de compensacin de la luz. Cumplido el tiempo secar cuidadosamente entre hojas de papel absorbente y volver a pesar (Pt). Secar las muestras en la estufa a 70C hasta peso constante (Ps). Determine el contenido de agua, contenido relativo de agua, dficit de saturacin de agua, relacin peso trgido-peso seco para los discos segn el tratamiento, en base a las siguientes frmulas: = ((Pf Ps)/Ps) *100 = ((Pf Ps)/ (Pt Ps)) * 100

Contenido de agua

Contenido relativo de agua (R*)

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Dficit de saturacin de agua

= 100 R*

Relacin peso trgido- peso seco

= Pt/Ps

Ficha de registro de datos.- Determinacin del estado hdrico foliar Repetic Pf Ps Pt Df sat Pt/Ps Apert estoma c/Estrs 1 2 3 4 5 s/Estrs 1 2 3 4 5

RESULTADO.Esquematice sus observaciones (o edite sus fotografas) indicando el aumento de la imagen y las caractersticas de las estructuras observadas. Relacione los resultados obtenidos con la especie y el momento de colecta.