DETERMINACION DE TRANSAMINASAS

SIGNIFICACION CLINICA Las transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente difundidas en el organismo con elevada concentracin en corazn, hgado, msculo esqueltico, rin y eritrocitos. La actividad srica en condiciones normales es baja o nula. Un dao o enfermedad en cualquiera de estos tejidos conduce a un aumento en los niveles sricos. As, luego de un infarto de miocardio se produce en suero un marcado aumento de la actividad de GOT (abundante en msculo cardaco). En hepatitis virales y otras formas de enfermedad heptica que involucren necrosis tisular, predominar la actividad srica de GPT (abundante en tejido heptico). Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse tambin en traumas accidentales o quirrgicos y en distrofias musculares o miositis. FUNDAMENTOS DEL METODO La GOT cataliza la siguiente reaccin: L-aspartato + alfa cetoglutarato GOT L-glutamato + oxalacetato La GPT cataliza la siguiente reaccin: L-alanina + alfa-cetoglutarato GPT L-glutamato + piruvato El piruvato formado (el oxalacetato es inestable y se transforma en piruvato), reacciona con la 2,4-dinitrofenilhidracina producindose, en medio alcalino, un compuesto coloreado que se mide a 505 nm. IV. PARTE EXPERIMENTAL.A. REACTIVOS PROVISTOS Sustrato GOT: Solucin con 100 mM de L-aspartato y 2 mM de alfa-cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mM, pH 7,4. Sustrato GPT: Solucin con 200 mM de L-alanina y 2 mM de alfa-cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mM, pH 7,4. Reactivo 2,4-DNFH: Solucin conteniendo 1 mmol de 2,4-dinitrofenilhidracina en cido clorhdrico 1 mol/l. Diluyente para Enzimas concentrado: Solucin de hidrxido de sodio 4 mol/l. Standard: Solucin de piruvato de sodio 2 mmol/l. Para efectuar la curva de calibracin. PRECAUCIONES Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro". B. MUESTRA Debe usarse nicamente suero fresco, no hemolizado.

D. DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD DE TRANSAMINASAS GOT Y GPT EN SUERO. TCNICA: Preparar la siguiente batera de tubos:

TUBOS

BLANCO GPT 500 uL

MUESTRA GPT 500 uL

BLANCO GOT ---

MUESTRA GOT ---

Sustrato de GPT Sustrato de GOT

---

---

500 uL

500 uL

Colocar en bao de agua a 37oC unos dos minutos. Suero Agua destilada --100 uL 100 uL ----100 uL 100 uL ---

Mezclar por agitacin suave e incubar exactamente 30 minutos y agregar:

Reactivo 2,4DNFH 500 uL 500 uL 500 uL 500 uL

Mezclar. Dejar 10 minutos a 37oC. Luego agregar: Diluyente de Enzimas (NaOH 0.4 mol/L) 5,0 mL 5,0 mL 5,0 mL 5,0 mL

Mezclar por inversin y leer la absorbancia en espectrofotmetro a 505 nm.

CALCULO DE LOS RESULTADOS Los clculos de la actividad de las Transaminasas GOT y GPT se realizara haciendo uso de una curva de calibracin para cada una de las transaminasas

VALORES DE REFERENCIA GOT GPT: Hasta 12 U/L