UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER FACULTAD DE EDUCACION, ARTES Y HUMANIDADES LICENCIATURA EN BIOLOGIA Y QUIMICA Realizado por: AIDA LUZ

TAPIAS RODRIGUEZ MARLY PAOLA CACERES HERRERA

PRCTICA N 3: RECONOCIMIENTO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO DIGNOSTICO EVALUATIVO

Los estudiantes al ingresar al laboratorio de Biologa debe de identificar las partes que componen el microscopio con el fin de realizar un buen trabajo unitario o en equipo para lograr un excelente aprendizaje.

Hoy en da es importante conocer el buen manejo del microscopio para optimizar la realizacin de las prcticas y as lograr un mejor conocimiento.

OBJETIVOS

Reconocer las partes del microscopio y el poder de resolucin de este frente al ojo humano.

Comprender la importancia del microscopio para toda investigacin cientfica.

Familiarizarse con el manejo del microscopio compuesto.

Realizar un enfoque de una preparacin microscpica

INTRODUCCIN El ser humano posee el sentido de la vista desarrollado. Sin embargo, no se pueden ver a simple vista cosas que midan menos de una dcima de milmetro. Y muchos de los avances en qumica, biologa y medicina no se hubieran logrado si antes no se hubiera inventado el microscopio. El primer microscopio fue inventado, por una casualidad en experimentos con lentes, lo que sucedi de similar manera pocos aos despus con el telescopio de Hans Lippershey (1608). Entre 1590 y 1600, el ptico holands Zacharas Janssen (1580-1638) invent un microscopio con una especie de tubo con lentes en sus extremos, de 8 cm de largo soportado por tres delfines de bronce; pero se obtenan imgenes borrosas a causa de las lentes de mala calidad. Estos primeros microscopios aumentaban la imagen 200 veces. Estos microscopios pticos no permiten agrandar la imagen ms de 2000 veces. En la actualidad los de efecto tnel los amplan 100 millones de veces. Galileo hizo un microscopio en el Siglo XVII. Durante el siglo XVII muchos estudiosos de las lentes y los microscopios hicieron toda clase de pruebas y ensayos para lograr un resultado de mayor precisin. Entre los intentos fue el del italiano Marcello Malpighi (1628-1694) que en 1660 logr ver los vasos capilares de un ala de murcilago. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas: El sistema mecnico est constituido por una palanca que sirve para sostener, elevar y detener los instrumentos a observar. El sistema de iluminacin comprende un conjunto de instrumentos, dispuestas de tal manera que producen las ranuras de luz. El sistema ptico comprende las partes del microscopio permiten un aumento de los objetos que se pretenden observar mediante filtros llamados "de antigel subsecuente". PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

1. PARTE MECANICA. Comprende los siguientes dispositivos. Pie. Base que da soporte y estabilidad al microscopio. Columna. Estructura que une el pie con la platina y el tubo. Sostiene adems el condensador y el diafragma. Platina. Superficie plana para sostener el porta objetos y el cubre-objetos que contienen a las preparaciones. Ganchos de la platina: permiten sujetar la muestra sobre la platina. Tornillo de enfoque: Asociada a dos tornillos, permite el movimiento vertical del tubo o de la platina para obtener la distancia a la cual el objeto puede ser observado ntidamente; es decir, el enfoque preciso para el observador. Tornillo macromtrico. Permite movimientos muy cortos en un ajuste fino del enfoque para lograr una observacin precisa. Este tornillo de mayor tamao. Est ubicado en la parte superior del microscopio. Se usa con los objetivos de 4x y 10x. Tornillo micromtrico: se logra el enfoque exacto y ntido de la preparacin. Este se utiliza para movilizar la platina a distancias muy pequeas, por lo tanto se utiliza principalmente para afinar el enfoque. nico a usarse cuando observamos objetos con el objetivo de magnificacin alta. Da un enfoque preciso de la imagen, se usa con los objetivos de 40x y 100x. Revlver. Sistema giratorio relacionado con el tubo, que porta los lentes objetivos para diversos aumentos, pudiendo utilizarlos alternativamente. 2. PARTE OPTICA: Comprende los lentes oculares, los lentes objetivos y los dispositivos de iluminacin. Oculares. Lentes dispuestos en la parte superior del tubo cercano al ojo del observador. Su aumento puede ser de 6X, 10X y 15X. Objetivos. Son lentes de diferentes aumentos situados en el otro extremo del tubo, en el revlver. El de menor aumento es ms corto (3.2X,4X, 8X y 10X) y el de mayor aumento es ms largo (40X y 44X). Puede existir adems un objetivo de inmersin de 100 a 150 aumentos. Condensador. Lente que concentra el haz luminoso hacia la preparacin. Diafragma. Abertura que regula la cantidad de luz que ingresa hacia la preparacin. Espejo o luz incorporada. Proporciona la luz que llega hasta el objeto a estudiar y el sistema ptico del microscopio.

CARACTERISTICAS DE LA VISION CON EL MICROSCOPIO 1. Grado de Aumento: Es la magnificacin total que sufre la imagen del objeto debido al efecto de los lentes oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el nmero de veces que aumenta el lente ocular por el nmero de veces que aumenta el lente objetivo. Si el objetivo aumenta la imagen de un objeto 40 veces, sta al pasar por la lente ocular ser nuevamente aumentada. Si el ocular aumenta 10 veces, la magnificacin total en este caso ser: 10X x 40X = 400X. Este resultado permite saber cuntas veces ms grande estamos viendo la imagen de un objeto. 2. Poder de Resolucin. Es la posibilidad de distinguir separados dos puntos muy cercanos entre s. Cuanto mayor sea el poder de resolucin, menor ser la distancia entre dos puntos a la cual pueden distinguirse como tales. La distancia lmite en la cual dos puntos pueden ser todava distinguibles se denomina Lmite de Resolucin. El poder de resolucin de un microscopio compuesto depende de la longitud de onda de la fuente luminosa y de la apertura numrica (propiedad ptica de la lente). 3. Distancia de Trabajo. Es la distancia que existe entre el objeto en observacin y el lente objetivo. Esta distancia variar segn el aumento de la lente objetivo con la cual se trabaje. Es inversamente proporcional al grado de aumento; es decir, cuanto mayor sea el aumento del lente objetivo menor ser la distancia de trabajo. Cuando se trabaje con un lente de inmersin la distancia de trabajo ser mnima. En estos casos es necesario usar aceite de inmersin entre el lente objetivo y la preparacin debido a que el ndice de refraccin para este tipo de lente es la del aceite y no la del aire. Esto permite obtener una imagen de gran tamao y al mismo tiempo de gran nitidez. SISTEMA DE ILUMINACIN Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la preparacin u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada. Comprende los siguientes elementos: Fuente de iluminacin: se trata clsicamente de una lmpara incandescente de tungsteno sobre voltada; en versiones ms modernas con leds. Por delante de ella se sita un condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite controlar el dimetro de la parte de la preparacin que queda iluminada, para evitar que exceda el campo de observacin produciendo luces parsitas.

El espejo: necesario si la fuente de iluminacin no est construida dentro del microscopio y ya alineada con el sistema ptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener dos caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cncava se emplea de preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para natural (luz solar). Los modelos ms modernos no poseen espejos sino una lmpara que cumple la misma funcin que el espejo.

Condensador: est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin, formando un cono de luz con el mismo ngulo que el del campo del objetivo. El condensador se sita debajo de la platina y su lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto con la preparacin cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliacin); existen condensadores de inmersin, que piden que se llene con aceite el espacio entre esa lente superior y la preparacin.

Diafragma: el condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el contraste, lo que se hace cerrndolo ms de lo que conviene si se quiere aprovechar la resolucin del sistema ptico.

TRAYECTORIA DEL RAYO DE LUZ A TRAVS DEL MICROSCOPIO El haz luminoso procedente de la lmpara pasa directamente a travs del diafragma al condensador. Gracias al sistema de lentes que posee el condensador, la luz es concentrada sobre la preparacin a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo hasta llegar al ocular, donde es captado por el ojo del observador. Propiedades del microscopio Poder separador. Tambin llamado a veces poder de resolucin, es una cualidad del microscopio, y se define como la distancia mnima entre dos puntos prximos que pueden verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una dcima de milmetro. En el microscopio viene limitado por la longitud de onda de la radiacin empleada; en el microscopio ptico, el poder separador mximo conseguido es de 0,2 dcimas de micrmetro (la mitad de la longitud de onda de la luz azul), y en el microscopio electrnico, el poder separador llega hasta 10 . Poder de definicin. Se refiere a la nitidez de las imgenes obtenidas, sobre todo respecto a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la correccin de las aberraciones de las lentes utilizadas.

Ampliacin del microscopio. En trminos generales se define como la relacin entre el dimetro aparente de la imagen y el dimetro o longitud del objeto. Esto quiere decir que si el microscopio aumenta 100 dimetros un objeto, la imagen que estamos viendo es 100 veces mayor linealmente que el tamao real del objeto (la superficie de la imagen ser 100 , es decir 10.000 veces mayor). Para calcular el aumento que est proporcionando un microscopio, basta multiplicar los aumentos respectivos debidos al objetivo y el ocular empleados. Por ejemplo, si estamos utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la ampliacin con que estamos viendo la muestra ser: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto est ampliada 450 veces, tambin expresado como 450 dimetros.
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MANEJO DEL MICROSCOPIO 1. Limpiar el espejo, condensador y los lentes del microscopio. a. Eliminar el polvo mediante un soplete de aire o pincel fino. b. Frotar sin presionar, con papel de lente, usando este solo una vez. 2. Comprobar si el lente objetivo de menor aumento est a continuacin del tubo; si no es as, debe colocarse en dicha posicin haciendo girar el revolver hasta alcanzar un "tope" que lo indique. 3. Abrir completamente el diafragma y observando a travs del ocular, mover el espejo orientndolo de modo que la luz reflejada se observe en un crculo uniformemente iluminado. Este constituye el "campo ptico". Una vez obtenida la iluminacin mxima, NO SE DEBE CAMBIAR LA POSICION DEL MICROSCOPIO. Con luz incorporada no hay espejo. 4. Ubicar y sujetar el porta-objetos en la platina, procurando que la preparacin se halle en el centro de la abertura circular. 5. Mover el tornillo macromtrico para acercar el lente objetivo de menor aumento hacia la preparacin, hasta llegar a un tope. 6. Observando por el lente ocular, mover nuevamente el tornillo macromtrico en el sentido inverso hasta que aparezca la imagen. 7. Una vez enfocada la imagen girar el tornillo hasta que sea ntida. Nunca se debe usar el tornillo micromtrico para grandes desplazamientos, para ello est el tornillo macromtrico.

8. Cuando los tornillos macro y micromtrico se encuentren incorporados en un solo dispositivo, el ajuste fino se hace solo despus de haber realizado el avance rpido de acercamiento a la preparacin. 9. Antes de pasar al siguiente aumento verificar que la imagen a observar se encuentre en el centro del campo, hacer girar el revolver cambiando el lente objetivo hasta llegar al "tope" y accionar solamente el tornillo micromtrico hasta obtener la nueva imagen. 10. Para observar una muestra con el objetivo de inmersin, se coloca una gota de aceite de cedro encima de la lmina de la preparacin antes de girar el revlver. Esto permite que la imagen se vea con nitidez para realizar la observacin ya que este tipo de lentes requiere que el ndice de refraccin sea similar al del vidrio. 11. Terminada la observacin, girar el revlver para colocar el objetivo de menor aumento en la primera posicin de trabajo. 12. Retirar la preparacin y dejar limpio el microscopio, secando la platina con cuidado. 13. Si us el objetivo de inmersin, debe limpiarse inmediatamente despus de su uso con ayuda del papel de lente. Quitar el grueso del aceite con una hoja, luego limpiar con una segunda impregnada en xylol y finalmente con una tercera, secar el lente. No usar cantidades excesivas de solvente pues pueden disolver el cemento de los componentes de los lentes. 14. Mantener cubierto o guardado el microscopio cuando no est en uso. 15. En sitios con excesiva humedad ambiental deber guardarse el microscopio en una campana de vidrio con un desecante como carbonato TIPOS DE MICROSCOPIOS En el laboratorio de Biologa de la Universidad Francisco de Paula Santander existen diversas clases de microscopios, la cual consiste en: MICROSCOPIO Marca Leica Los microscopios marca Leica ofrecen alta resolucin en imagen y desempeo ptimo, el microscopio que existe en la universidad presenta 3 objetivos de menor aumento u objetivos secos, ellos son 4x tiene una lnea de color rojo, 10 x presenta una lnea amarilla y 40 x de lnea azul, adems

presenta un objetivo de mayor aumento o hmedo que es 100 x, el ocular de este microscopio es de 10. MICROSCOPIO Marca OLIMPUS CX21 El microscopio marca Olimpus cx21, presenta los mismos objetivos y las lneas de colores que el microscopio Leica, tiene mayor calidad de objetivos y presenta luz amarilla y filtro de color azul en el condensador, lo cual no produce cansancio en el visin al momento de observar.

MICROSCOPIO Marca CARL ZEIS JENA Este microscopio tiene mejores oculares hasta 16x, los objetivos son de vidrio (4x, 10x, 40x, 100x) y el aumento de los lentes es de 10. MIROSCOPIO Marca LEITZ Este microscopio no presenta diafragma, tienen un transformador para la luz, presentan objetivos de menor aumento 10x, 40x, 100x y el aumento es de 10. MIROSCOPIO Marca LEITZ DE LAMPARA DIRECTA La luz se le puede regular con el diafragma, presentan objetivos de menor aumento 10x, 40x, 100x y el aumento es de 10.

MIROSCOPIO marca LEITZ DE LAMPARITA No tiene objetivo de inmersin, presenta filtro azul y solo tiene tres objetivos, el de menor aumento es de 3.5 x, 10x y 40x.

ACTIVIDAD PEDGOGICA 1. Indica los tipos de lentes que conozcas. _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ____________________________

2. Qu se entiende por distancia focal de una lente? _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ______________ 3. Los microscopios pticos son instrumentos basados fundamentalmente en dos fenmenos luminosos. Indica cules son stos, y explcalos brevemente. _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ 4. Qu indica el ndice de refraccin de un medio? Describe la Ley de Snell. ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ____________________________________________________________ 5. Indica las partes del microscopio de la siguientes figura y nombra sus componentes

TA 6. Qu nombre recibe la parte del ojo que funciona como una lente? _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ PAGINAS WEB

ROJAS TRIVIO, Alberto. Conceptos y prctica de microbiologa general. (en lnea). Disponible en internet en: http://www.bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.pdf PIA LPEZ, Carmen Eugenia. Gua de laboratorio de biologa. Microscopa. (en lnea). Disponible en internet en: http://canal.unad.edu.co/laboratorio/pdf/manual.pdf FARAS CHAGOYA, Hugo A; VILLASEOR GMEZ, Jos Fernando; MNDEZ GARCA, Francisco; GARCA GARRIDO, Pedro; PREZ MURGUA, Ricardo y LPEZ GARCA, Ramn. Manual de prcticas de la materia de biologa general. (en lnea). Disponible en internet en: http://bios.biologia.umich.mx/files/manualbiologiageneral.pdf