Objetivo : Conocer y describir los principales sntomas y signos de enfermedades a hongos.

. Reconocer las estructuras reproductivas y vegetativas de los hongos fitopatgenos. Identificar los principales hongos fitopatgenos.

Metodologa : La prctica de hongos se realizar en dos clases, en la primera se trabajar con las clases Plasmodiophoromycetes, Oomycetes, Zygomycetes y Basidomycetes; en la segunda con Ascomycetes y Deuteromycetes. Cada clase prctica consisitir en observar y describir sntomas y signos de enfermedades a hongos. Adems se analizarn algunos de los ciclos ms caractersticos. Para la realizacin de la actividad prctica se deber formar grupos entre 4 y 6 personas . Bibliografa: Agrios, G.N. 1995. Fitopatologa. 2a.ed. Mxico, Uthea. 838p. Kimati, H.; Bergamin Filho, A.; Amorim, L. 1995. Manual de Fitopatologa. Principios e conceitos.V.1. 3a ed. Sao Paulo. Ceres. 919 p.

PRINCIPALES SNTOMAS Y SIGNOS DE ENFERMEDADES CAUSADAS POR HONGOS Las enfermedades causadas por hongos producen en sus hospederos una amplia variedad de tipos diferentes de sntomas. Entre otros los los hongos fitopatgenos pueden producir manchas clorticas y necrticas, cribados, cancros, tiznes, podredumbres hmedas o secas, momias, agallas, abolladuras, costras, ahogamientos, marchitaminentos y pstulas. Fotos con principales sntomas y signos

TCNICAS PARA LA IDENTIFICACIN DE LOS HONGOS Para la identificacin de hongos fitopatgenos es necesario la observacin de sus estructuras somticas y reproductivas. Mediante la tcnica de cmara hmeda y/o aislamiento es posible inducir la aparcin de estas estructuras. La observacin de las caractersticas de las estructuras producidas y el uso de claves taxonmicas son necesarias para determinar el gnero y la especie del hongo patgeno.

RECONOCIMIENTO DE ESTRUCTURAS VEGETATIVAS Y REPRODUCTIVAS :

I) ESTRUCTURAS VEGETATIVAS Plasmodio: Se refiere al cuerpo o soma vegetativo de algunos hongos inferiores, el cual est constitudo por una masa multinucleada, sin pared

celular. Son escasos los hongos fitopatgenos que poseen soma vegetativo de tipo plasmodial. Micelio: La mayora de los hongos poseen cuerpo filamentoso provisto de pared celular. . A los filamentos que constituyen el cuerpo o soma vegetativo se les denomina hifas. Al conjunto de hifas se le denomina micelio. Cuando las hifas no presentan septas, el micelio es denominado cenoctico o no tabicado y cuando las presenta el micelio se dice que es tabicado.

Micelio cenoctico. Estas hifas pertenecientes a hongos inferiores no presentan tabiques.

Micelio tabicado. Los tabiques se observan con claridad sobre la hifa que cruza en diagonal la imagen.

Micelio de Phytophthora sp. sobre fruto de tomate.

Micelio de Sclerotium rolfsii en la base del tallo de morrn.

Esclerotos: Los esclerotos son estructuras de resistencia formados por compactacin de hifas. Estos esclerotos pueden tener diferentes formas y tamaos. A continuacin se muestran diferentes tipos de esclerotos:

Sclerotos de Sclerotinia sclerotiorumformndose sobre una hoja de morrn.

Esclerotos de Sclerotinia sclerotiorum. Se caracterizan por su forma irregular, color negro y tamao variable pudiendo llegar a 1 o 2 centmetros de longitud.

Esclertos de Sclerotium rolfsii, esfricos de color castao formndose sobre un bulbo de cebolla

Esclerotos de Botrytis squamosa sobre escapo floral en cebolla

Esclerotos de Rizoctonia solani sobre tubrculo de papa. Su apariencia se confunde con la tierra.

II) ESTRUCTURAS REPRODUCTIVAS

A) HONGOS INFERIORES Y PSEUDOHONGOS Cuerpos fructferos representativos de los hongos inferiores y pseudohongos: Los hongos inferiores se caracterizan por poseer micelio cenoctico. Segn su reproduccin sexual estos hongos pueden pertenecer a dos diferentes clases: Clase: Oomycetes:

Esta clase de hongos sexualmente producen oosporas, las que se originan por la unin de dos gametos diferentes, el oogonio y el anteridio. Estas oosporas son esfricas y de pared gruesa. Estos hongos se reproducen asexualmente producen esporas flageladas, denominadas zoosporas. Estas zoosporas se encuentran contenidas en cuerpos fructferos denominados zoosporangios. .

Zoosporangio de Phytophthora sp.

Oospora

Para ver otras imgenes de Zoosporas de Phytophthora puede visitar la siguiente pgina perteneciente a la Universidad de Carolina del Norte: http://www.cals.ncsu.edu/course/pp728/Phytophthora/motilezoospores.jpg

Para ver imgenes de zoosporangios en cadena puede visitar la pgina en espaol del Departamento de Botnica de la Universidad de Catania (Italia): http://www.dipbot.unict.it/sistematica_es/Albugo.html
Clase: Zigomycetes: Esta clase de hongos Produce esporas asexuales no mviles contenidas en cuerpos fructferos denominados esporangios. Sexualmente producen esporas denominadas zigosporas

Para ver imgenes de Zygosporas (esporas sexuales) puede visitar la pgina en espaol del Departamento de Botnica de la Universidad de Catania (Italia):http://www.dipbot.unict.it/sistematica_es/Rhizopu.html

Esporangio (reproduccin
asexual)

de Rhizopus sp.

B) HONGOS SUPERIORES Estructuras representativas de la clase Ascomycetes. Clase: Ascomycetes

La clase ascomycetes se caracteriza por poseer micelio tabicado y producir esporas de origen sexual denominadas Ascosporas. Estas ascosporas se producen dentro de sacos llamados ascas.
Las ascas pueden encontrarse en forma libre o contenidas en cuerpos fructferos. Los cuerpos fructferos pueden ser de dos tipos: Apotecios y Cleistotecios. A continuacin se muestran ejemplos de estas estructuras: Ascas libres:

Ascas libres de Taphrina deformans en corte de hoja de duraznero.

Ascas en Apotecios:

Ascosporas dentro de ascas libres Hojas de duraznero de Taphrina deformans en corte de presentando sntomas de hoja de duraznero. ataque por Taphrina deformans.

Los apotecios son cuerpos fructferos con forma de copa. Normalmente de colores marrones claros, se pueden producir a partir de la germinacin de esclerotos o del mismo material vegetal invadido por el hongo. Algunos alcanzan ms de un centmetro de dimetro. Un corte de la copa permite observar bajo el microscopio la presencia de ascas conteniendo ascosporas.

Apotecios sobre ramas de frambuesa

Apotecios germinando a Apotecios de Sclerotinia partir de esclerotos sclerotiorum. deSclerotinia sclerotiorum.

Apotecios de Monilinia fruticola formados sobre fruto momificado en el suelo.

Corte de un apotecio de Monilinia fruticola mostrando las ascas.

Ascas de Monilinia fruticolaconteniendo cada una 8 ascosporas.

Acas en Peritecio:
Los peritecios son cuerpos fructferos con forma de pera y con una abertura para la salida de las ascosporas. Generalmente se producen sobre el tejido vegetal colonizado por el hongo. A simple vista pueden observarse como puntuaciones negras.

Ascas en Peritecios de en hojas de manzano

Peritecio mostrando las ascasde Venturia inaequalis con 8 ascosporas cada una.

En otoo caen las hojas del manzano y es en ellas que el hongo formar los peritecios.

Ascas en Cleistotecio:

Los Cleistotecios son cuerpos fructferos con forma con forma esfrica y que no poseen abertura para la salida de las ascosporas, por lo tanto deben romperse para que estas se liberen. Generalmente se producen sobre el tejido vegetal colonizado por el hongo. A simple vista pueden observarse como puntuaciones negras.

Signo de Erisiphe sp. sobre hojas de pltano

Cleistotecio de Erisiphe sp

Para ver imgenes de Cleistotecios puede visitar la pgina en espaol del Departamento de Botnica de la Universidad de Catania (Italia): http://www.dipbot.unict.it/sistematica_es/Uncinula.html
Estructuras representativas de la clase Basidiomycetes. Clase: Basidiomycetes La clase basidiomycetes se caracteriza por por tener micelio tabicado y reproducirse sexualmente mediante la produccin de basidioporas. Estas son producidas exgenamente sobre una estructura llamada basidio. Los basidios pueden ser septados o no.

Para ver imgenes de Basidios y basidiosporas puede visitar la pgina en espaol del Departamento de Botnica de la Universidad de Catania (Italia): http://www.dipbot.unict.it/sistematica_es/Copr_bdi.html
Basidos septados: Royas:

Pstulas con uredosporas Pstulas con teliospora en en hoja de ajo hoja de ajo de Puccinia de Puccinia allii allii

Pstula con teliospora de Puccinia sp.

Agallas en ramas de ceibo producidas por Raveneliaspp.

Carbones:

Espigas de Cynodon con carbn. Las semillas estn sustituidas por masas de teliosporas carbonosas.

Espigas de trigo con carbn.

Basidios no septados

Basidiocarpo en postes de eucaliptus

Basidiocarpos sobre tronco de duraznero

Clase: Deuteromycetes Esta Clase incluye a los hongos superiores (micelio tabicado) a los que no se les conoce la reproduccin sexual. En algunos casos por no tener reproduccin sexual, o si la tienen esta se produce rara vez, o simplemente porque no se le conoce an. Estos hongos se reproducen de forma asexual formando esporas denominadas conidios. Estos conidios pueden producirse en forma libre o dentro de cuerpos fructferos. Los conidios pueden tener diferentes formas y tamaos. Pueden ser hialinos u obscuros. Pueden ser unicelulares o multicelulares. Pueden estar sueltos o agrupadosnen ramilletes o cadenas.

Estructuras representativas de la clase Deuteromycetes: Conidios libres o expuestos:

Conidos de Monilia fructicola sobre frutos de durazno

Conidos unicelulares dispuestos en cadena Monilia fruticola

Manchas necrticas con anillos concntricos de Alternaria solani en hoja de tomate

Conidios septados de Alternaria solani

Para ver conidios de Alternaria solani dispuestos en forma de cadena puede visitar la pgina del Departamento de Botnica de la Universidad de Toronto (Canad): http://www.botany.utoronto.ca/ResearchLabs/MallochLab/Malloch/Moulds/Alternaria.ht ml

Esporulacin de Penicillium expansum sobre frutos de manzana

Conidiforo y conidios de Penicillium expansum.

Eporulacin de Botrytis cinerea sobre frutos de tomate

Conidios de Botrytis cinerea agrupados en forma de racimo

Para observar imgenes con la disposicin de los conidiforos de Botrytis cinerea se puede visitar la pgina:http://www.bioimages.org.uk/html/P154008.HTM

Micelio y esporas de Fusarium sp. en fruto de zapallo

Conidios septados de Fusarium sp. Se trata de conidios hialinos, multicelulares y con forma caracterstica de "banana"

Conidios en cuerpos fructferos: Acrvulos: Los acrvulos son estructuras abiertas sobre la superficie del vegatal que dejan expuestos a los conidios.

Acrvulos de Pestalotia sp. en ramas de arndano

Cirros de conidios de Pestalotia sp., formados a partir de los acrvulos en ramas de arndano

Conidios septados de Pestalotia sp.

Para ver fotografas de acrvulos se puede visitar la pgina del Departmento de Patologa de Plantas de la Universidad de Wisconsin (EE.UU.):http://www.plantpath.wisc.edu/pp300/docs/collet.html

Picnidios: Los picnidios son curpos fructferos que poseen una abertura por la que liberan los conidios producidos en su interior.

Picnidios de Phomopsis viticola con cirros de conidio en sarmientos de vid

Picnidios de Fusicoccum sp.con cirros de conidios en ramas de durazno

MESAS DE TRABAJO RECONOCIMIENTO DE SNTOMA Y SIGNOS En cada muestra o fotografa: 1) Describir el sntoma y clasificarlo de acuerdo al glosario (anexo 1) 2) Para aquella muestras que presentan signo: determinar como est constitudoque implicancias tiene en la diseminacin 3) indicar si es un endo o ectoparsito TCNICAS PARA IDENTIFICACIN DE HONGOS Cmara hmeda 1) A partir de la muestra identifique cul es el sntoma? 2) Qu estructuras reproductivas puede observar? Son de origen sexual o asexual? 3) Observe al microscopio las estructuras encontradas y realice un esquema.

Aislamiento e Identificacin 1) De las cajas de petri que se le presentan Cul corresponden a una siembra? y Cul a un repique? 2) Con que objetivo se realizan los repiques? 3) Observe los conidios en los preparados; intente determinar el gnero al que

pertenecen. En caso de poder identificarlo Qu otra informacin requiere?

EJEMPLOS DE ENFERMEDADES

Plasmopora viticola Ver ciclo patolgico del mildiu de la vid producido por Plasmopora viticola (Agrios, G. N. Fitopatologa) 1) A qu clase pertenece este hongo? Por qu? 2) Cmo se llama el sntoma que produce? 3) Cul es el inculo primario y cul su fuente? 4) Esa esporoulacin que usted observa en la foto, a qu tipo de inculo corresponde? 5) El cultivo de vid se puede estar conducido en espaldera baja (1 metro de altura) o parral entre otros. Qu implicancia tiene esto en la diseminacin inicial de la enfermedad? Rhizopus spp. Ver ciclo patolgico de la pudricin blanda de los frutos y hortalizas producido por Rhizopus spp. (Agrios, G. N. Fitopatologa) 1) Observe las estructuras del hongo 2) A qu subdivicin pertenece el gnero Rhizopus? 3) Qu caractersticas de este hongo consider para clasificarlo? 4) Cul es el sntoma que produce?

Puccinia graminis f.sp. tritici Ver ciclo patolgico de la roya del tallo del trigo producida por Puccina graminis f.sp. tritici (Agrios, G. N. Fitopatologa) 1) A qu clase pertenece este hongo? 2) Identifique en el ciclo las diferentes esporas que produce 3) Describa el ciclo de la enfermedad que se da durante el ciclo de cultivo 4) La roya del trigo es autoica o heteroica? Por qu? 5) En qu parte del ciclo se produce la mayor cantidad de propgulos? 6) Cules son las eporas que constituyen el mayor riesgo para el cultivo de trigo en Uruguay 7) Qu implicancias tiene para el hongo la ausencia del husped alternativo en Uruguay?

Carbones

Ver ciclo patolgico de los carbones voladores del trigo y de la cebada producidos por Ustilago tritici y U. nuda, respectivamente (Agrios, G. N. Fitopatologa) 1) Cules son las fuentes de inculo primario y secundario del carbn volador del trigo? 2) Por qu patgeno es producido? 3) Cmo se disemina? 4) Cmo se da la infeccin primaria? 5) Cuntos ciclos se producen durante el ciclo del cultivo?

Podredumbre de madera 1) A qu clase pertenece el hongo de la muestra? 2) Cul es el signo? 3) Dnde se forman las esporas? Penicillium spp. 1) Cul es el sntoma? 2) Cmo se denominan las esporas y de que origen son? 3) Realice un preparado y observe al microscopio los conidios. Qu conclusiones saca con respecto a la va de dispersin?

Botrytis cinerea; Botryotinia fuckeliana Ver ciclo patolgico Moho gris producido por Botrytis (Agrios, G. N. Fitopatologa) 1) Explique por qu este hongo tiene dos nombres y por qu normalmente se lo llama por el segundo 2) De qu origen es la esporulacin que observa tanto en la muestra como en las fotografas? 3) Cmo es con respecto al rango de huspedes?

Glomerella sp.; Colletotricum sp. 1) Cmo se llaman los cuerpos fructferos que agrupan los conidios de estos hongos? 2) Qu diferencia morfolgica existe entre Colletotricum y Gloesporium? 3) Qu grado de especificidad tiene este hongo? 4) Cmo se llama el sntoma que produce?

Claviceps sp - Sphacelia sp

1 Qu sntomas presentan las espigas de la muestra? 2 Cmo se denominan los cuerpos fructferos que contienen las esporas sexuales y en qu estructuras se forman? 3 Realice un esquema de dicha estructura 4 Qu estructura de resistencia produce este hongo? Cmo se dispersa?

Oidium sp. 1 Observe la muestra lo que ve es el sntoma o el signo? Descrbalo 2 Indique cmo es este patgeno con respecto a: - localizacin en la planta, - la estructura que utiliza para nutrirse, - se nivel de parasitismo.

Taphrina deformans 1. Qu sntoma observa? 2. A partir de las zonas grisceas de los sntomas, se realizaron cortes histolgicos que se observan en las diapositivas. A qu estructuras corresponde lo que observa en las mismas? 3. De acuerdo a los observado: a qu clase pertenece este hongo?

Leptosphaeria nodorum; Septoria nodorum 1. Este hongo puede formar dos tipos de cuerpos fructferos pririformes, cmo se llaman y en qu se diferencian? 2. Las ascosporas son dispersadas por corrientes de aire; y los conidios? 3. Si no se da la reproduccin sexual cul es el inculo primario? Qu efecto tiene esto sobre la capacidad de dispersin del hongo? 4 En qu parte de la planta buscara las primeras infecciones considerando que la principal fuente de inculo es el rastrojo con estructuras asexuales? por qu?

Sclerotinia sclerotiorum Ver ciclo patolgico de Sclerotinia sclerotiorum (Agrios, G. N. Fitopatologa) 1. A qu clase pertenece este hongo? 2. Cmo sobrevive cuendo se dan las condiciones ambientales favorables? 3. Cules son las dos estructuras que pueden actuar como inculo? Cules son las vas de dispersin para cada una de ellas? Cul de estos tipos de inculo sera ms fcil de cuantificar a

campo?

Preguntas

Qu tipo de organismos son los hongos? Qu estructuras vegetativas pueden presentar los hongos fitopatgenos y qu funciones cumplen cada una de ellas? Qu tipo de reproduccin presentan los hongos fitopatgenos? Todos los hongos se reproducen indistintamente sexual y asexualmente? Qu estructuras vegetativas y/o reproductivas de los hongos presentan valor taxonmico? Qu estructuras reproductivas podemos encontrar en cada subdivisin de hongos? Qu es una cmara hmeda y con qu objetivo se realiza? Cmo se pueden aislar los hongos fitopatgenos?

Problemas 1.- La siguiente es la descripcin del ciclo de vida de un hongo, Venturia inaequalis, ocasionando una conocida e importante enfermedad, la sarna del manzano: Con la cada natural de las hojas en otoo y la presencia de bajas temperaturas, tiene inicio la formacin de seudotecios dentro de las hojas atacadas. La maduracin de las ascosporas ocurre al final del invierno e inicio de la primavera con temperaturas de 16 a 18?C. El nmero de ascosporas por hojas es muy variable. Recuentos hecho en un centmetro cuadrado de hoja revelaron la existencia de hasta 150 seudotecios, conteniendo c/u 60 a 70 ascas con 8 ascosporas. Suponiendo una superficie de 20 a 30 cm2 podran liberarse de 1 a 2 millones de ascosporas por hoja. Despus de la maduracin de las ascas y de las ascosporas, las lluvias de la primavera aumentan la presin dentro de los seudotecios, haciendo que las ascosporas sean liberadas activamente, siendo eyectadas a una distancia de 5 a 15 mm de las hojas y una vez en el aire pueden ser transportadas por los vientos a largas distancias. Cayendo sobre una hoja hmeda la ascospora se reviste de una pelcula de agua, inicia la germinacin y penetra en la cutcula, instalndose entre la misma y las clulas de la epidermis. El perodo de incubacin entre la penetracin del hongo y la aparicin de los sntomas, depende de las condiciones climticas pero su duracin es de aproximadamente 15 a 20 das. Despus de esta infeccin primaria causada por las ascosporas el hongo entra en una fase reproductiva que se repite varias veces durante el ciclo vegetativo y en la cual se producen gran nmero de conidios. Los conidios son liberados y transportados por medio de las lluvias y vientos fuertes. Los sntomas de la sarna del manzano en las hojas son manchas de color olivaceo al principio, que luego se tornan de color negro y toman un aspecto ampollado (plateado). Tambin afecta flores y frutos. a)- Dentro de que subdivisin clasificara a este hongo?

b)- Qu tipo de micelio tiene este hongo? c)- Cul es el inculo primario de esta enfermedad y cul la fuente de inculo? d)- Existen diferencias entre el inculo primario y secundario? Explique. e)- En qu etapa del ciclo de la enfermedad este hongo se reproduce sexualmente y en cul asexualmente? f)- Qu nivel de parasitismo presenta Venturia inaequalis? g)- En que etapas de la patognesis intentara interrumpir el ciclo de la enfermedad?

2.- La enfermedad ms importante de la vid en el Uruguay es el "mildi" o "peronspera de la vid", la misma es ocasionada por un hongo llamado Plasmopara viticola. Este hongo produce manchas sobre las hojas que al principio son amarillentas y traslcidas. En el envs de estas manchas aparece una eflorescencia blanquecina constituida por los zoosporangiforos y zoosporangios que salen a travs de los estomas. Estas manchas finalmente se necrosan provocando en ataques severos una fuerte disminucin del rea foliar. Brotes, zarcillos y racimos tambin son atacados y cubiertos de la misma eflorescencia. Entre otros daos provoca la cada del racimo floral. Todos los tejidos verdes son susceptibles ocurriendo varios ciclos de infeccin en la temporada. En el otoo caen las hojas y dentro de ellas se forman oosporas que germinan en la primavera siguiente produciendo zoosporangios. a).- Qu tipo de micelio presenta este hongo? b).- Qu signo presenta esta enfermedad? c).- Qu son y qu funcin cumplen los zoosporangios? d).- Qu es la oospora y que funcin cumple? e).- Cmo se clasifica taxonmicamente a este hongo? f).- Qu factor ambiental considera indispensable para que ocurra la infeccin por Plasmospora viticola? g).- Qu importancia prctica tiene el saber a qu grupo taxonmico pertenece este hongo?

3.- En un cultivo de zapallito aparecen manchas clorticas en las hojas. El productor consulta en una agropecuaria y le venden un fungicida cuyo principio activo (Metalaxil) tiene accin curativa especficamente contra Oomycetes. El tcnico lleva una muestra a un laboratorio donde bajo lupa se observa una eflorescencia blanquecina en las manchas, especialmente en el envs. Al microscopio se observa un micelio que crece sobre la superficie de la hoja y que forma conidios en cadena sobre conidiforos.

a).- Le parece correcta la recomendacin de la agropecuaria? Por qu? b).- Cmo se llamara la enfermedad? Fundamente su respuesta. c).- Cmo se alimenta el hongo causante de la enfermedad?

4.- En frutos de limn provenientes de una planta de empaque se observan manchas oscuras, circulares, deprimidas, no coincidiendo dicha sintomatologa con ninguna de las conocidas sobre dicho hospedero. Luego de efectuar distintas metodologas de aislamiento a los efectos de la deteccin de un factor patognico bitico, aparecen sistemticamente sobre medio de cultivo bsico, colonias fngicas con caractersticas iguales y que presentan las siguientes estructuras: micelio tabicado y acrvulos con setas negras y conidios unicelulares. a).- Segn los datos del problema, a qu subdivisin(es) podra pertenecer el hongo aislado? Fundamente su respuesta. b).-Indique qu paso(s) seguira a los efectos de establecer la relacin de causalidad entre el hongo aislado y los sntomas observados.

5.- Un productor de raigrs que produce su propia semilla, enva una muestra de la misma al laboratorio a los efectos de obtener informacin sobre la calidad y estado sanitario del lote. Si usted fuera el responsable del anlisis sanitario, qu procedimiento(s) seguira a los efectos de establecer el mismo? 6.- En plantas de trbol blanco se observan pstulas de color negro en fololos. a).- Como se llamara la enfermedad? Fundamente su respuesta. b).- Indique qu pasos seguira para lograr el diagnstico de la enfermedad. c).- Qu nivel de parasitismo presenta el agente causal? d).- En caso de ser necesario evaluar la resistencia de distintos cultivares de trbol frente al patgeno, qu metodologa seguira?

7.- En plantas de frutilla se observan manchas sobre fololos que se corresponden con las causadas por un organismo fngico conocido sobre dicho hospedero. Si usted quisiera confirmar el diagnstico a travs de tcnicas de laboratorio, qu procedimientos seguira?