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Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear

Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear

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metabólica y funcional seriadas en enfermedades del sistema nervioso central que complementan los estudios convencionales. .sodio-23.carbono-13. utilizando gradientes magnéticos y análisis de frecuencia. Posteriormente se aplico en procesos metabólicos de órganos prefundidos y en la actualidad. todo ello fue el inicio de la ESPECTROSCOPIA por resonancia magnética nuclear. junto con la posibilidad de estudiar en forma directa algunos procesos metabólicos sin interferir en ellos ni utilizar para ello técnicas agresivas. Lauterbur logrando la primera imagen. en 1973 se inicio el desarrollo de la MRI como técnica tomográfica debido a la idea de P.)Y considerando un tipo de núcleo en función de la molécula en la que esta integrado. la ribonucleasa. mediante imanes de 1. hace de la MRS una herramienta de trabajo con grandes posibilidades en él diagnostico médico. La oportunidad de obtener espectros con suficiente resolución y sensibilidad.etc.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 2 INTRODUCCIÓN La Espectroscopia por resonancia magnética (MRS) es una técnica diagnostica que ofrece una valoración bioquímica. se obtienen espectros de órganos “in vivo”. Paralelamente. se publico el primer estudio mediante RM sobre la estructura de una macromolécula. Desde el descubrimiento del fenómeno físico de la resonancia magnética por el grupo Bloch y Purcell numerosos equipos de investigación trabajaron en el estudio de las variaciones de la frecuencia de resonancia en función del tipo de núcleo observado (Hidrógeno-1. en 1957. básicamente imanes más potentes y con una estabilidad mayor. cada vez fue posible estudiar moléculas de mayor peso molecular.5 Tesla (T).fósforo-31.

en un estado de mayor energía denominado estado de espín . los espines nucleares se orientan al azar. Esta situación se da en los átomos de 1H. 13C. En 1951. 19F y 31P. Sin embargo cuando una muestra se coloca en un campo magnético (Figura 1). en un estado de mínima energía denominado estado de espín . Esta técnica espectroscópica puede utilizarse sólo para estudiar núcleos atómicos con un número impar de protones o neutrones (o de ambos).Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 3 FUNDAMENTOS FÍSICOS DE LA ESPECTROSCOPIA DE RMN La espectroscopia de RMN fue desarrollada a finales de los años cuarenta para estudiar los núcleos atómicos. los núcleos con espín positivo se orientan en la misma dirección del campo. En ausencia de campo magnético. los químicos descubrieron que podía ser utilizada para determinar las estructuras de los compuestos orgánicos. Estados de espín . Figura 1. es decir poseen espín. Este tipo de núcleos son magnéticamente activos. igual que los electrones. mientras que los núcleos con espín negativo se orientan en dirección opuesta a la del campo magnético.

Representación del aumento de la diferencia energética entre los estados de espín con el aumento de la fuerza del campo magnético. Esta radiación se encuentra en la región de las radiofrecuencias (rf) del espectro electromagnético por eso se le denomina radiación rf. Como se observa en la figura 2. los núcleos en el estado de espín  son promovidos al estado de espín . ESPECTRO DE RMN Cuando una muestra que contiene un compuesto orgánico es irradiada brevemente por un pulso intenso de radiación. Cuando los núcleos vuelven a su estado inicial emiten señales cuya frecuencia depende de la diferencia de energía (E) entre los estados de espín  y . . depende de la fuerza del campo magnético aplicado H0.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 4 Existen más núcleos en el estado de espín  que en estado de espín  pero aunque la diferencia de población no es enorme sí que es suficiente para establecer las bases de la espectroscopia de RMN. El espectrómetro de RMN detecta estas señales y las registra como una gráfica de frecuencias frente a intensidad. que es el llamado espectro de RMN. Figura 2. mayor diferencia energética habrá entre los dos estados de espín. Cuanto mayor sea el campo magnético. la diferencia de energía entre los dos estados de espín  .

EL ESPECTRÓMETRO DE RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR Figura 3. 400. Si el espectrómetro de RMN posee un imán potente. 500 y 600 MHz. los núcleos pasan de un estado de espín a otro como respuesta a la radiación rf a la que son sometidos. Hoy en día los espectrómetros de RMN trabajan a 200. éste debe trabajar a una mayor frecuencia puesto que el campo magnético es proporcional a dicha frecuencia.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 5 El término resonancia magnética nuclear procede del hecho de que los núcleos están en resonancia con la radiofrecuencia o la radiación rf. 300. Es decir. Equipo para medidas de Resonancia Magnética Nuclear .

2.  En los aparatos modernos.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 6 Componentes de un equipo para medidas de resonancia magnética nuclear: 1.  El tubo con la muestra se hace girar alrededor de su eje vertical. Un ordenador y un registrador para realizar las gráficas que constituyen el espectro de RMN.  La intensidad de esta frecuencia disminuye con el tiempo a medida que todos los núcleos vuelven a su estado inicial. Un espectro FT-RMN puede registrarse en 2 segundos utilizando menos de 5 mg de muestra. esto es lo que se conoce con el nombre de transformada de Fourier (FT-RMN). .  Como el corto pulso de radiofrecuencia cubre un amplio rango de frecuencias los protones individualmente absorben la radiación de frecuencia necesaria para entrar en resonancia (cambiar de estado de espín). Un detector para medir la absorción de energía de radiofrecuencia de la muestra. el campo magnético se mantiene constante mientras un breve pulso de radiación rf excita a todos los núcleos simultáneamente. Un imán estable. con un controlador que produce un campo magnético preciso. Un transmisor de radiofrecuencias.  A medida que dichos núcleos vuelven a su posición inicial emiten una radiación de frecuencia igual a la diferencia de energía entre estados de espín. Para obtener un espectro de RMN:  Se coloca una pequeña cantidad del compuesto orgánico disuelto en medio mililitro de disolvente en un tubo de vidrio largo que se sitúa dentro del campo magnético del aparato. 3. 4. capaz de emitir frecuencias precisas.  Un ordenador recoge la intensidad respecto al tiempo y convierte dichos datos en intensidad respecto a frecuencia.

Estos electrones protegen parcialmente a su núcleo del campo magnético externo al que son sometidos. Se debe entender que a nivel atómico todas las moléculas poseen una nube electrónica circundante en constante movimiento que genera una corriente inducida que se opone al campo magnético externo. para que el núcleo entre en resonancia. Esquema del fenómeno de Apantallamiento de una molécula de metanol . dicho de otra manera. las características de su ambiente electrónico le brindan un apantallado característico. el campo externo debe ser mayor. como una interacción del mismo con sus electrones circundantes. se encuentran apantallados de forma particular y única.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 7 APANTALLAMIENTO O PROTECCIÓN ELECTRONES MAGNÉTICA POR MEDIO DE El concepto de resonancia de un núcleo determinado debe entenderse no como un fenómeno aislado. los electrones se mueven generando un pequeño “campo magnético inducido” que se opone al campo magnético externo. por tanto. por tanto. Es importante recalcar que los protones. se dice que el núcleo está apantallado. Desde el punto de vista experimental este concepto cobra real importancia pues el campo magnético efectivo (Hef) que siente un protón dentro de una molécula es siempre menor al campo magnético externo. al estar en entornos distintos. Figura 4. sino más bien. Como resultado de este fenómeno tenemos que el campo magnético que realmente llega al núcleo es menor que el campo magnético externo.

Por ser el silicio menos electronegativos que los radicales de la molécula. debidas al apantallamiento. Dado que el apantallamiento de cada protón es diferente entre moléculas de distinto origen. Estas variaciones de frecuencia de absorción de resonancia. tendremos distintas frecuencias de emisión. acorde a la configuración de su nube electrónica. el espectro de RMN es una gráfica de la intensidad de señal en función de la frecuencia de la energía electromagnética que liberan los núcleos de una muestra. el oxígeno retira densidad electrónica del entorno que rodea al protón del OH. Así pues. De la imagen a la izquierda observamos que la molécula es asimétrica en su disposición atómica dada la naturaleza distinta de sus radicales.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 8 A modo de ejemplo. tal como sigue: El compuesto de referencia estandarizado más utilizado en RMN es el “tetrametilsilano” que corresponde a un átomo de silicio con cuatro radicales metilo [Si(CH3) 4] . ese átomo de hidrógeno está menos apantallado que sus homólogos del grupo metilo (CH3) dando como consecuencia que el protón del hidroxilo resuene a un campo magnético menor que en los del grupo metilo. en el grupo hidroxilo (OH). Oxígeno y Carbono. un alcohol simple compuesto de tres especies iónicas distintas: Hidrógeno. El resultado de esto es un espectro de diversas frecuencias donde cada conjunto de núcleos específicos origina una señal única de RMN. consideremos el caso de la molécula de metanol. De este modo. En particular. medidos en unidades δ o ppm. los . reciben el nombre de desplazamientos químicos. por lo tanto. En la práctica es muy difícil medir el campo magnético al que un protón absorbe con exactitud para distinguir protones individuales pues las absorciones varían en sólo unas pocas milésimas. el método más exacto para determinar los desplazamientos químicos es determinar el valor respecto a un compuesto estandarizado de referencia que se añade a la muestra.

. tenemos la diminución del apantallamiento. los anillos aromáticos se oponen al campo magnético externo en una primera instancia. para el caso de los aromáticos tenemos que el campo magnético externo induce una corriente en el anillo aromático que se opone a dicho campo. llamada escala delta o δ en donde la absorción del tetrametilsilano (TMS) se define como 0. al llegar a las puntas del anillo el campo inducido se curva y se suma al campo magnético externo. no obstante ello. la escala δ aumenta hacia los campos menores. Por ejemplo. las líneas de campo se curvan dando como resultado que en la parte exterior del anillo se potencie el campo y no se disminuya. los protones absorben a una intensidad de campo mayor que el resto de los protones enlazado al carbono o a otros elementos. Consecuencia de esto. de manera que casi la totalidad de señales de resonancia magnética aparecen a campos más bajos. por ejemplo. Otro aspecto de importancia a considerar es que tanto los dobles enlaces como los anillos aromáticos producen efectos desprotectores en sus protones vinílicos o aromáticos respectivamente. En base a esto se ha configurado una escala referencial.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 9 grupos metilo poseen mayor densidad electrónica lo que hace que sus protones estén fuertemente apantallados. Como la mayoría de los protones absorben a campos menores que el TMS . Figura 5. las señales de los protones varían entre 0 y 12 δ mientras que las señales de carbono varían desde 0 hasta 250 δ. Si bien es cierto. Como resultado.00 δ.

Y por último para saber el número de H de cada señal se multiplica por su valor anterior con lo que se obtienen 9H (9 protones) para la señal más intensa (tres metilos de la estructura) y 2(H) para la de menor magnitud (metileno).2-dimetilpropano 1) Curvas de Integración: Corresponde a la curva superpuesta a las señales de un espectro.0cm + 1.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 10 ESPECTRO DE RMN DE 1H La interpretación de un espectro de RMN se realiza en base al análisis de las curvas de integración.6cm = 8.6 cm. .0 cm y 1. Luego para calcular el numero de átomos de hidrógeno se deben sumar las dos integraciones (7. Por ejemplo: En la figura anterior la altura para cada escalón es de 7. donde la altura del escalón permite calcular el número de átomos de hidrógeno que dan origen a cada señal. el desacoplamiento spin-spin y las constantes de acoplamiento. como lo apreciable en la figura 6.6cm) y dividir por el número total de hidrógenos de la estructura (11H) lo que daría como resultado 1. Figura 6: Espectro de resonancia magnética nuclear de 1-bromo-2.28H/cm.

produciendo desdoblamiento (cabe mencionar que cuando esta interacción ocurre se dice que los protones se encuentran acoplados magnéticamente) de la señal.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 11 2) Desacoplamiento spin-spin: Figura 7= Espectro de 1.1 dicloroetano Un protón en RMN está expuesto a un campo magnético externo y a un campo inducido por los electrones que lo rodean (apantallantes). En resumen (por ejemplo) si un vecino a 2 H produce una señal triplete. Por ejemplo para el caso de la figura 7(C2H4Cl2) la señal más pequeña (Ha) se debe al protón del carbono unido a los dos átomos de cloro (CH3CHCl2). aparece a ς=5.1 y está formada por dos líneas (dobletes) correspondiente a los tres átomos de hidrógeno del grupo metilo. un H vecino a un H una señal doblete (regla N + 1). a su pequeño campo magnético se le verá afectada la frecuencia de absorción de los protones.85 (producto del desapantallamiento provocado por 2 átomos adyacentes de cloro) y está formada por un conjunto de cuatro señales (cuadruplete= 4 picos). Si hay otros protones cercanos. Mientras que la señal de mayor intensidad aparece a ς=2. . Entonces protones vecinos interactúan sobre el spin de otro protón.

dobles o triples enlaces. La unidad de esta medición es Hertzios (Hz) y se simboliza como Jab (en el caso de medir la distancia de acoplamiento entre Ha y Hb). El número de instauraciones se calcula según la siguiente expresión: . INTERPRETACIÓN DE LOS ESPECTROS DE RMN DE 1H : La interpretación correcta de los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN) requiere de mucha práctica y de los siguientes pasos a seguir: 1. Calcular el número de insaturaciones que posee el compuesto. A partir de la fórmula molecular: a.1 dicloroetano Las distancias entre los picos de multipletes (o protones acoplados) pueden dar información estructural permitiendo por ejemplo poder distinguir entre los posibles isómeros que posee un compuesto.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 12 3) Constantes de acoplamiento: Figura 8 = Constantes de acoplamiento de 1. este número de instauraciones puede indicar la presencia de anillos.

8. Mediante el valor de la constante de acoplamiento se puede deducir si la olefina es cis o trans. este isótopo posee un número par de protones y neutrones. La presencia de una señal alrededor de 2. 3. 5. ESPECTROSCOPÍA DE RMN DE 13C Como se mencionó anteriormente. 6. Si el singulete ancho se encuentra más allá de 10 ppm es probable que se trate de un –OH de ácido. por lo tanto.5 y 2.nº átomos N)/2 b. 2. Las señales que aparecen entre 8 y 7 δ indican la presencia de un anillo aromático. La presencia de un singulete ancho (número de H) en el espectro podría deberse a protones de –NH o –OH.5 δ se debe al protón de un alquino terminal. es por esto que la espectroscopia de 1 13 C es complementaria a la de H. Las señales que aparecen entre 2. La gran mayoría de los átomos de carbono en una muestra natural (aprox. Relacionar las áreas de integración de los peaks con el número total de protones de la estructura para obtener el número de protones que representa cada peak individual.(nº átomos H + nº átomos halógeno . 4. 99%) son de 12 C. 7. La espectroscopia de RMN de 13C determina el entorno magnético de los átomos de carbono.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 13 g = Nº átomos de C +1. la espectroscopia por RMN de 1H se utiliza para deducir la estructura del esqueleto carbonado observando los entornos magnéticos de los átomos de hidrógeno. Las señales entre 6 y 5 δ indican la presencia de protones olefínicos.1 δ pueden indicar la presencia de protones adyacentes a un grupo carbonilo. Las señales entre 10 y 9 δ son indicativas de la presencia de un aldehído. no tiene . Las señales entre 4 y 3 δ indican que hay protones en un carbono unido a un grupo electronegativo como es el oxígeno o un halógeno.

no tiene un número par de neutrones. A continuación se da una tabla de valores aproximados de desplazamientos químicos en un espectro de resonancia magnética nuclear de 13C: . no hay desdoblamientos de espín-espín. existe una probabilidad muy pequeña de que un núcleo de 13 13 C esté adyacente a otro núcleo de C. igual al del protón. Además. Por ejemplo. El isótopo de C.4 ppm en el espectro de 1H mientras que el carbono de carbonilo absorbe a 180 ppm en el espectro de 13 C. menos abundante. ya que solo un 1% de los átomos de carbono tiene espín y además la frecuencia de resonancia del 13C es la cuarta parte de la frecuencia de RMN de 1H. es decir. Los desplazamientos químicos del carbono son de 15 a 20 veces mayores que los del hidrógeno debido a que el carbono está directamente unido a los átomos que resultan ser bien apantallantes o desapantallantes.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 13 14 espín magnético y no puede generar señales de RMN. Esto hace que sea menos sensible que la espectroscopia de 1H. las señales en el espectro de 13 C son líneas verticales. por lo que tiene un espín magnético de 172. Esto se debe a que sólo el 1% de los átomos de carbono entran en resonancia. el protón de un aldehído absorbe a 9. y por tanto.

En algunos tumores aparece un aumento del lactato. Se podría decir que una de las detecciones más útiles con esta técnica. esto puede ser generado por una necrosis. En los tumores se aparece una caída del NAA. también porque el crecimiento del tumor provoca la destrucción del parénquima cerebral y de neuronas en zonas cercanas. para satisfacer la excesiva demanda de energía que se produce (Figura 9). o también. Aumento de colina. por un crecimiento tan acelerado que sobrepasa la vía oxidativa y el cerebro debe recurrir a la glicólisis anaeróbica.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 15 APLICACIONES Referente a las distintas aplicaciones en patologías clínicas que se puede obtener de la espectroscopía por resonancia magnética se destaca:  Tumores cerebrales: Hoy en día la resonancia magnética convencional permite detectar tumores gracias a la mejora de la sensibilidad. es el aumento de la colina detectado. con disminución de NAA y pico de lactato. porque el tumor no se compone de neuronas (que son las únicas que contienen NAA). producto del incremento de la proliferación celular (tumor) que genera un recambio de la membrana celular donde la colina se encuentra como fosfatidilcolina. cuyo producto final es el lactato. el factor que no le favorece es que su aumento en sensibilidad no es acompañado por un aumento de de la especificidad Con la espectroscopia se hace posible evaluar el espectro metabólico de la lesión lo que posibilita discernir con gran especificidad si se trata de una lesión tumoral o no. característicos de proceso tumoral . Figura 9: Ubicación del voxel en la lesión.

sin aumento de la colina. debido a que la falta de oxigenación en los tejidos. pero sus resultados pueden ser muy variables. esto lo hace a expensas de acumular lactato. En el infarto se observa una disminución NAA y de la relación NAA/Cr. tanto de manera inmediata como en los estadios posteriores que siguen al evento isquémico agudo. con la condición de que: Todas o la mayoría de las crisis se origen en el lóbulo temporal. este enfoque tradicional ha sido modificado por las técnicas de neuroimágenes: tanto la RM convencional como y el PET se han usado con algún éxito para la lateralización del foco epileptógeno.  Epilepsia La epilepsia en lóbulo temporal es la forma más común de crisis epilépticas parciales y es resistente al tratamiento en aproximadamente 40% de los pacientes. se observa además un pico de lactato bastante elevado'. Este lactato o la acidosis que se asocia al mismo pueden exacerbar el daño neuronal. La lateralización de las crisis se ha basado generalmente en la información clínica y electroencefalográfica. con la consiguiente acumulación de lactato. El NAA puede utilizarse par evaluar la extensión del daño neuronal. Se produce además necrosis que también origina un aumento de este metabolito. El lóbulo temporal restante pueda compensar la función del lado extirpado. Muchos de estos pacientes pueden ser ayudados con una remoción quirúrgica del foco epileptógeno. En aquellos pacientes que no han tenido convulsiones por al menos seis meses después de una . En espectroscopia la detección de una disminución de NAA en uno o ambos lóbulos temporales se compara muy ventajosamente con las técnicas descritas y es el método más sensible y específico de lateralización de epilepsia del lóbulo temporal. producida por la isquemia hace que se utilice la glicólisis anaeróbica para el metabolismo de la glucosa.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 16  Infarto Cerebral Aunque el cerebro puede metabolizar glucosa en forma anaeróbica por breves periodos de tiempo.

aumento de glutamina y leve disminución de NAA  Esclerosis múltiple La espectroscopia muestra que el NAA está substancialmente reducido en las lesiones agudas. que se encuentra mucho más elevada en el lado afectado" y ayuda también en la lateralización de la crisis epilépticas (Figuras 10 y 11). De hecho. En la fase crónica de la EM. Otro hallazgo a mencionar es la presencia de glutamina. Tanto la disminución como la recuperación del NAA tienen una estrecha correlación con las alteraciones neurológicas observadas en pacientes con esclerosis múltiple (EM). Leve disminución de NAA. esta reducción . Figura 10. En la fase aguda también se observa un gran incremento de la Colina debido en gran parte a un movimiento de fosfolípidos de la membrana celular (Figuras 12 y 13). Estos resultados refuerzan la hipótesis de que la disfunción axonal está asociada con la disfunción neurológica y su subsiguiente recuperación en la fase aguda de la EM. Esto debe de significar que la disminución regional interictal del N-acetilaspartato que se detecta. en lugar de una pérdida neuronal irreversible. tiende a normalizarse. Figura 11. asociada con esclerosis del hipocampo. Ubicación del vóxel en ambos hipocampos.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 17 operación al lóbulo temporal anterior. la disminución del NAA en la parte media y posterior. refleja una disfunción neuronal asociada con el estado epiléptico. También puede observarse un moderado incremento del lactato. puede observarse una disminución del NAA no solo en las placas sino también en zonas adyacentes de apariencia normal. esta reducción muestra una recuperación parcial a través del tiempo.

Aumento de colina con disminución del NAA característicos de esclerosis múltiple Figura 13. conocidos com los dedos de Dawson'. .Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 18 del NAA en las zonas aparentemente no afectadas guarda gran correlación con la gravedad de la incapacidad en pacientes con EM crónica. B: Estudio multivoxel mostrando aumento de la relación colina/ creatina en la región periventricular y pericallosa donde se encontraron las lesiones descritas. A: T1 sagital mostrando las lesiones pericallosas de esclerosis múltiples. Figura 12: Ubicación del voxel en la lesión.

Puede ayudar a los médicos a evaluar tanto la estructura de un órgano como su funcionamiento. Permite la detección de anomalías cerebrales. Dichas reacciones por lo general son benignas y de fácil control mediante la medicación. que no puede lograrse con otras técnicas de diagnóstico por imágenes.Espectroscopía por Resonancia Magnética Nuclear 19 CONCLUSIONES Finalmente podemos concluir que la Espectroscopia por Resonancia Magnética     Es una técnica de exploración no invasiva que no implica exposición a la radiación ionizante. así como la evaluación de la anatomía funcional normal del cerebro. También se debe considerar que al realizar una RMN existe un leve riesgo de que se produzcan reacciones alérgicas al inyectar el material de contraste. Otro posible complicación se puede producir en los pacientes con severa disfunción renal por la inyección de material de contraste. . Hace posible descubrir anormalidades que pueden quedar ocultas por los huesos con otros métodos de exploración.

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