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Prctica No. 8 INFLUENCIA DEL pH URINARIO EN LA EXCRECIN DE FRMACOS OBJETIVO y y Determinar las variables farmacocinticas.

Determinar la influencia del pH urinario en la excrecin de frmacos a travs de la cuantificacin de cido acetilsaliclico en orina. FUNDAMENTO La medicin de frmacos en orina se ha venido utilizando principalmente para la investigacin y la determinacin de ciertos problemas renales (diagnostico). El anlisis de frmacos en fluidos biolgicos constituye una de las bases del desarrollo de las ciencias farmacuticas. De acuerdo al propsito buscado en el anlisis de frmacos van a variar los requerimientos que deben de cumplir los mtodos analticos a aplicar. Entre los fluidos biolgicos ms comnmente utilizados se encuentra la orina y debido a que sta es muy variable en su composicin, volumen y pH, la mayora de los mtodos analticos exigen una preparacin previa de la muestra. FUNCIONES DEL RION Las principales funciones del rin son: 1. Regulacin del volumen y composicin del lquido corporal. 2. Equilibrio acido-bsico. 3. Metabolismo y excrecin de materiales no esenciales, incluso drogas. 4. Elaboracin de renina, la cual participa en los mecanismos reguladores extrarrenales.

Funcin del glomrulo y los tbulos La filtracin glomerular produce cerca de 180 L de lquido glomerular cada da. La filtracin no requiere gasto de energa metablica, sino que se debe a un equilibrio entre la fuerza hidrosttica y onctica. La membrana glomerular tiene poros de carga negativa que permiten el paso de agua y iones de carga negativa menores de unos 40 y 80 (peso molecular menor de 15 000). Las sustancias entre 40 no se filtran. El ndice de (peso molecular aproximado de 40 000) pasan de manera ordinaria, si

tienen carga neutra. Las sustancias mayores de 80 filtracin glomerular normal es de 125 ml por minuto.

La funcin tubular reduce los 180 litros de lquido filtrado por da hasta cerca de un litro diario de lquido excretado; altera su composicin por medio de transporte activo y pasivo. El transporte es pasivo cuando se debe a fuerzas fsicas, como gradientes elctricos o de concentracin. Cuando el mecanismo de transporte se realiza en contra de gradientes electroqumicos o de concentracin, se requiere de energa metablica y el proceso se denomina transporte activo. Las sustancias pueden reabsorberse o secretarse a travs de los tbulos; ambos procesos pueden ser activos o pasivos. Tambin, es posible que las sustancias se muevan en ambas direcciones por medio de transporte tanto activo como pasivo. La direccin del trnsito de las sustancias que se reabsorben es del tbulo al intersticio y a la sangre; las sustancias que se excretan tienen un trnsito inverso. La secrecin es la principal va de eliminacin para frmacos y toxinas, especficamente cuando estn unidos a protenas plasmticas. Debemos recordar que el pH de la orina puede modificar el grado de ionizacin de numerosos frmacos, lo que se traduce como una mayor o menor facilidad para poder ser reabsorbidos y pasar a la sangre o ser excretados en la orina. A la vista de todo lo anterior, se puede afirmar que la velocidad de excrecin

renal de un frmaco es igual a la velocidad de filtracin ms la secrecin, menos la velocidad de reabsorcin. Concentracin y dilucin de la orina. Las asas de Henle permiten la formacin de orina hipertnica en relacin con el plasma. Mientras mayor sea la longitud de las asas, la orina puede concentrarse ms. La produccin de orina hipertnica requiere de la presencia y funcin normal de asas de Henle. Para una mayor eficiencia del mecanismo de concentracin de la orina en los tbulos se requiere del transporte activo de iones y del equilibrio osmtico del agua. El transporte pasivo de agua se conoce como multiplicacin de la concentracin a contracorriente. A partir del glomrulo, el equilibrio de las fuerzas hidrosttica y onctica favorece la filtracin del plasma a un ritmo cercano a 180 litros por da. En el tbulo contorneado proximal, el sodio pasa de manera pasiva a favor de un gradiente de concentracin hacia el ambiente deficiente de sodio de las clulas que recubren el tbulo contorneado proximal. El cloro lo sigue de manera pasiva para mantener la neutralidad elctrica, al igual que el agua, como respuesta a los gradientes osmticos. En seguida, el sodio se transporta activamente contra un gradiente de concentracin hacia el intersticio renal. La mayora de los datos existente acerca de las caractersticas biofarmacuticas y farmacocinticas del cido acetilsaliclico (AAS) se basan en datos obtenidos gracias al anlisis de salicilatos totales. Este hecho se debe en parte a la rpida hidrlisis del AAS y otra, a que los distintos productos obtenidos por metabolizacin del AAS tienen generalmente, una actividad teraputica parecida al AAS. La constante de absorcin tiene una gran variabilidad interdividual y est influenciada por las condiciones fisiolgicas del tracto gastrointestinal. Se calcula

que aproximadamente un 30% de la dosis de AAS administrado por va oral se metaboliza a cido saliclico (AS) antes de su distribucin sistmica. La excrecin urinaria de AS sin metabolizar depende del pH y puede oscilar entre un 2 y un 30% aunque existe una gran variabilidad interdividual.

PROCEDIMIENTO:

A) El estudio de realizar en tres equipos:

EQUIPO No. 1: Estudiar la excrecin de aspirina en un pH urinario alcalino. EQUIPO No. 2: Estudiar la excrecin de aspirina en un pH urinario cido. EQUIPO No. 3: Estudiar la excrecin de aspirina en un pH normal. Dentro del mismo equipo se nombrar un voluntario, el cual tomara una dosis de 500 mg de cido acetilsaliclico V.O. y proceder de acuerdo al protocolo experimental.

B) Criterios de inclusin y/o exclusin.

Criterios de inclusin.

i. Jvenes sanos de 18 a 30 aos de edad. ii. Sexo indistinto. iii. Estar sanos. iv. Respetar el protocolo experimental, mismo que se le dar a leer y explicar antes de iniciarse la prctica. v. Firmar carta de consentimiento informado, antes de iniciar el estudio.

Criterios de exclusin.

i. Padecer algn tipo de enfermedad crnica. ii. Padecer alguna reaccin alrgica o de hipersensibilidad al frmaco en estudio. iii. Padecer enfermedades de tipo renal, heptico o gastrointestinal. iv. Haber consumido, al menos una semana antes y durante el experimento, algn frmaco teraputico, social o de abuso. v. Haber consumido bebidas alcohlicas al menos 3 das antes y durante el experimento.

PROTOCOLO EXPERIMENTAL 1. Los voluntarios permanecern en ayuno a partir de las 22 h del da anterior al estudio. 2. El da del experimento cada voluntario vaciar completamente la vejiga a las 5:30 am. Llevar a cabo la miccin en un vaso de precipitado. Tomar el ph de la orina, anotar el valor en la hoja correspondiente y desechar la orina. 3. Ingerir 250 mL de agua 1.5 h antes de la administracin del medicamento. 4. Antes de ingerir el medicamento vaciar la vejiga completamente y guardar una muestra de 10 mL en un tubo de ensaye con tapn de rosca. Esta muestra corresponde al tiempo cero y se utilizara como blanco. 5. Tomar una tableta de cido acetilsaliclico de 500 mg con 250 mL de agua natural. Anotar en la hoja correspondiente la hora exacta de la toma del medicamento. 6. A las 7:00 am tomar las siguiente solucin: a. Equipo No. 1 (orina alcalina): tomar 2 g de bicarbonato de sodio. b. Equipo No. 2 (orina cida): tomar 2 g de cido ascrbico. c. Equipo No. 3 (control): tomar 250 mL de agua natural.

7. Asegurarse de tomar 250 mL de agua cada hora, las primeras 6 horas postadministracin. Despus de las 6 horas consumir agua al gusto. 8. Durante el experimento no consumir ninguna otra clase de lquido (bebidas carbonatas, agua de frutas, agua con saborizantes, etc.). 9. Colectar la orina durante 8 horas (ltima orina colectada a las 3:00 pm) post-administracin del frmaco. Durante este periodo orinar cada vez que el cuerpo lo requiera. Asegurarse de cada vez de vaciar completamente la vejiga. Depositar la orina en un vaso de precipitado y medir el volumen total en una probeta graduada. No se deber desechar ninguna porcin de orina y en cada intervalo de muestreo grande se recolectar toda la orina de ese intervalo en un solo recipiente. Tomar el pH de la orina. Guardar una licuota de 10 mL y desechar el resto. Anotar volumen de orina, pH urinario y la hora de miccin en la hoja correspondiente. 10. A las 9:00 am consumir un desayuno, el cual consistir de 2 sndwiches; elaborados con una rebanada de jamn y una de queso, una rodaja de tomate y, lechuga y mayonesa al gusto. Adems una manzana de tamao mediano. 11. A las 14:00 consumir una comida al gusto. Incluir una bebida de t helado, mximo de 300 mL. 12. Cuantificar cada una de las muestras siguiendo el procedimiento descrito ms adelante, preparando a la vez un blanco de orina y una curva patrn en orina a las mismas condiciones que las muestras.

NOTA: Los alumnos debern guardar todas las muestras cero y, se recolectar en un solo reciente la orina blanco de todos los voluntarios para formar un pool de orina, el que se diluir 1:3 con agua (esta orina servir para preparar la curva patrn del estudio). Almacenar en el congelador cada muestra hasta el momento de usarse.

MATERIAL y y y y y y y 1 matraz volumtrico de 100 mL 1 matraz volumtrico de 50 mL 1 matraz volumtrico de 25 mL 3 pipetas volumtricas de 1 mL 1 pipeta volumtrica de 5 mL 12 tubos de ensaye de 13 x 120 mm 1 perilla

EQUIPO y y y y Balanza analtica Espectrofotmetro UV visible Centrifuga Agitador vortex.

REACTIVOS y y y y Salicilato de sodio Nitrato frrico nonahidratado Cloruro mercrico cido clorhdrico 1N

MUESTRA BIOLGICA

Orina

SOLUCIONES Reactivo para desarrollar color (reactivo de Trinder): Preparacin: Pesar con exactitud y por separado 4 g de nitrato frrico nonahidratado y 4 g de cloruro mercrico, colocarlos en un matraz volumtrico de 100 mL. Adicionar un poco de agua destilada para disolver, aadir 12 mL de una solucin 1 N de cido clorhdrico y diluir hasta el aforo con agua destilada. Solucin patrn de referencia de salicilato de sodio a concentracin de 100 g/mL: Preparacin: Pesar con exactitud 50 mg de salicilato de sodio y depositarlos en un matraz volumtrico de 50 mL, disolver totalmente en 20 mL de orina libre de medicamentos (diluida 1:1 con agua) y llevar hasta el aforo con la misma orina. De esta solucin tomar con exactitud una alcuota de 2.5 mL y depositar en un matraz volumtrico de 25 mL, llevar al aforo con agua.

 Mtodo analtico para cuantificar salicilatos en orina

1 mL de muestra de orina

Resultados: Tabla I. Curva patrn Concentracin (g/mL) 50 100 250 500 1000 Intercepto (b) Pendiente (m) Correlacin (r) Absorbancia ( 540 nm) -0.0282 0.0318 0.2552 0.5644 1.3001 -0.1053335 0.00139472 0.999540506

Absorbancia ( 540nm)
1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 -0.2 500 1000 1500 Absorbancia ( 540nm) Linear (Absorbancia ( 540nm)) y = 0.001x - 0.105 R = 0.999

Grafica de la curva patrn Tabla II. Resultados de muestreo experimental alcalino


Numero Muestra Hora pH Orina Volumen Excretado (mL) No. de miccin Absorbancia (540 nm) Concentracion de salicilatos

g/ml

Total de salicilatos en la muestra g/ml

Total de salicilatos total g/ml

1 2 3

0 7-8 am 8-9 am

6 6 9

19 29 42

1 1 1 1.2990 1.1693

4084.90566 118462.264 3677.04403 154435.849

4 5 6 7 8 9

9-10 am 1011 11am 12 12am 13 12am 14 14am 15 am

8 8 8 8 8 8

127 49 303 428 326 57

1 1 1 1 1 1

0.4782 0.8510 0.0133 0.0943 0.0745 0.2800

1503.77358 190979.245 2676.10063 131128.931 41.8238994 12672.6415 861161.321 296.540881 126919.497 234.27673 76374.2138 880.503145 50188.6792

Tabla. Resultados del muestreo experimental acido


NUMERO DE MUESTR A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 HOR A Ph orin a Volume n extraido (ml) 215 65 42 45 60 166 124 250 184 90 Absorbancia s Concentraci n de salicilatos g/ml Total de salicilatos en la muestra g/ml Total de salicilatos total g/ml

5:35 7 7:49 8:53 9:51 10:50 11:40 12:57 1:54 2:55

7 6 6 6 6 6 6 6 6 6

0.3671 1154.40252 0.8164 2567.2956 1.0797 3395.28302 0.4669 1468.23899 0.5082 1598.11321 0.2872 903.144654 0.3151 990.880503 0.4992 1569.81132

48484.905 7 115528.30 2 1359015.0 203716.98 9 1 243727.67 3 198166.03 8 225786.16 4 182322.01 3 141283.01 9

Tabla .resultados del muestreo experimental control


NUMERO DE MUESTR A 1 2 HOR A Ph orin a Volume n extraido (ml) 116 92 Absorbancia s Concentraci n de salicilatos g/ml Total de Total de salicilatos salicilatos en la total g/ml muestra g/ml 106333.33 3 83089.308 2

7:55 8:40

5 6

0.2915 916.666667 0.2872 903.144654

3 4 5 6 7 8

9:50 11 12:20 13:00 13:50 15:10

6 7 7 7 7 7

120 100 100 110 90 100

0.3189 1002.83019 0.3168 996.226415 0.3321 1044.33962 0.3129 983.962264 0.3120 981.132075 0.3814 1199.37107

120339.62 3 99622.641 5 104433.96 2 108235.84 9 88301.886 8 119937.10 7

830293.71 1

Tabla. Concentracin del frmaco a diferentes tiempos (alcalino)


Muestra 1 2 3 4 5 6 7 8 hora
7-8 am 8-9 am 9-10 am 10-11 am 11-12 am 12-13 am 12-14 am 14-15 am

Concentracin (g/mL)

del

frmaco 1145.47414 468.456113 833.659875 13.0289969 92.3785266 72.9819749 274.294671 1272.53135

Tabla. Concentracin del frmaco a diferentes tiempos (acido)


Muestra 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 hora 5:35 7 7:49 8:53 9:51 10:50 11:40 12:57 1:54 2:55 Concentracin (g/mL) del frmaco

359.619906 799.76489 1057.69984 457.386364 497.844828 281.347962 308.679467 489.028213

Tabla. Concentracin del frmaco a diferentes tiempos (neutro)


Muestra 1 2 3 4 5 6 7 8 hora 7:55 8:40 9:50 11 12:20 13:00 13:50 15:10 Concentracin (g/mL) del frmaco 285.560345 281.347962 312.402038 310.344828 325.333072 306.524295 305.642633 373.628527

CUESTIONARIO COMPLEMENTARIO 1.-Qu otro compuesto se puede utiliza para acidificar la orina? Cloruro de amonio 2.-menciona tres frmacos bsicos y tres cidos con los cuales se favorezca su excrecin al acidificar o alcalinizar la orina. Los alcalinizantes comprenden: bicarbonato de sodio, lactato de sodio, tapn trometamina (THAM) e inhibidores de la anhidrasa carbonica (acetazolamida), que bloquea la excrecin renal de bicarbonato de sodio. Los frmacos utilizados con mayor frecuencia para acidificar la orina, a fin de incrementar la excrecin de bases como estricnina, anfetaminas y fenticinas son el acido ascrbico y cloruro de amonio. Discusin La capacidad de interferir en la excrecin del frmaco segn el pH se vio interferido por la capacidad de una orina cida, bsico y a pH normal lo cual se observo que la cantidad de excrecin se aumenta al tener un pH cido. Lo cual nos dice que esto se ve afectado en la vida media del frmaco. Conclusin: Se cumpli el objetivo de calcula los valores farmacocinticas, as como observar la influencia del pH en la excrecin urinaria del frmaco.