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Biología Molecular de la Piel - Ramiro Esteban Lorente

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Objetivo de la técnica: Amplificar
ARN mensajero (mARN) por PCR. El
ARNm es convertido primero en ADN
complementario y luego se amplifica
por PCR la región especifica a niveles
detectables.

Requerimientos: El material puede
ser ARN celular total (incluyendo ARN
ribosomal, ARN de transferencia y
ARN mensajero) o ARN purificado.

Conceptos sobresalientes

Para facilitar el estudio del ARN,
primero se debe convertir el ARN en
ADN complementario por medio de
una enzima llamada transcriptasa
reversa (es una enzima ADN
polimerasa dependiente de ARN).

Método

La transcripción reversa puede
convertir mARN en cADN a través de
tres métodos diferentes, dependiendo
de los cebadores utilizados para el
paso inicial. (← Figura 41)

1. Cebadores hexamericos al azar,
que contienen 6 nucleótidos (6-mer)
que contienen todas las posibles
combinaciones de dA, dG, dC y dT.
Estos cebadores se hibridaran a la
secuencia

complementaria

correspondiente en el ARN molde.

Biología Molecular de la Piel | LA PIEL: BIOLOGÍA MOLECULAR 31

2. Cebadores de oligonucleótidos
que contienen solo dT e hibridan en la
cadena complementaria de dA
nucleótidos presentes en el extremo
de las moléculas de ARNm (cola poli
A)

3. Cebador que solo hibrida en una
secuencia especifica de mARN

Luego que obtenemos cADN, se
agregan los cebadores que se
hibridaran a una secuencia específica
que permitirá la amplificación por PCR.

Para medir las proteínas producto
del gen mutado, se utiliza la técnica de
Western Blot (Fig. 4.6), también
conocida como Imunoblot, ya que
utiliza anticuerpos para detectar la
proteína de interés. Además esta
técnica nos permite medir el tamaño

de la proteína y revelar si se presenta
en distintas formas.

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