Universidad Autónoma de Nuevo León

Facultad de Ciencias Químicas

Licenciado en Química Industrial

Fundamentos de Microbiología y
Bioquímica

Paecilomyces
Fumosoroseus
Leyda Elizabeth López García Septiembre de 2010
 Características
• Reino: Fungi
• Phylum: Ascomycota
– Se les conoce como hongos de saco, sus ascas o bolsas
producen una catidad determinada de esporas en su interior.
• Clase: Eurotiomycetes
– Producen estructuras en forma de saco que contienen
ascosporas ya sea en un cerrado cuerpo fructífero
(ascocarpo) o bolas de esporas
• Orden: Eurotiales
– Hongos del saco con ascosporas dextrinoides, fases
imperfectas con fialósporas
• Familia: Trichocomaceae
– Son saprobios con estrategias de colonización agresiva,
adaptable a condiciones ambientales extremas.
• Género: Paecilomyces
– Es un género de hongos nematófagos que mata nematodos
nocivos por patogenia, causa enfermedad en los nematodos.
• Paecilomyces tiene alrededor de 35 especies diferentes.
• Es hongo filamentoso e imperfecto que habita en el suelo,
las plantas decadentes, productos alimenticios, papel y
tabaco.
• Paecilomyces es normalmente considerado como un
contaminante.
• Son importantes industrialmente como productores de
ácido cítrico y glucónico, antimicóticos y antibióticos (por
ejemplo, variotin).
• Algunas especies también son importantes la agricultura,
ya que pueden estimular el crecimiento de cultivos
importantes como la cebada y el maíz.
• El color de la colonia y ciertas características
microscópicas ayudan en la diferenciación de
las especies Paecilomyces unos de otros.
• Otra característica que ayuda en la
identificación de especies es que Paecilomyces
fumosoroseus y variotii son termófilas y pueden
crecer bien a temperaturas tan altas como 50
°C y 60 °C.
 Características microscópicas
• Presentan hifas hialinas, amarillosas,
septadas de paredes delgadas.
• Conidióforos son a menudo verticiliados o
irregularmente ramificados con un tamaño
que va desde 3 hasta 4 x 400 a 600 micras
y llevan fiálides en las puntas de cada rama,
las cuales pueden estar en grupos o
solitarias.
• Fiálides constan de una proporción basal
cilíndrica, hinchados en sus bases, alargada
y delgada en las puntas para formar un
cuello muy notorio, y suelen agruparse en el
cepillo - estructuras como en los extremos
de los Conidióforos.
• Las conidias en forma de ovoide,
unicelulares, hialinas a color oscuro, lisa o
rugosa, y aparecen en largas cadenas.
• Clamidosporas a veces están presentes.
 Características macroscópicas
• La tasa de crecimiento es rápida y
las colonias son planas, en polvo o
en la textura aterciopelada y
maduran dentro de tres días.
• El color de las colonias inicialmente
superficie es blanca y se vuelven
amarillo, amarillo - verde, amarillo -
café, aceite de oliva - marrón, rosa o
violeta, dependiendo de la especie,
mientras que atrás está sucio, piel
de ante blanco o marrón.
• Se pueden distinguir del género
Penicillium relacionados muy de
cerca por tener largos y delgados
fiálides divergentes y colonias que
no son típicamente de color verde o
azul - verde.
 Nutrición
Los hongos Paecilomyces poseen
características muy especiales que les permiten
sobrevivir en forma parasítica sobre los insectos
y en forma saprofita sobre material vegetal en
descomposición. El crecimiento saprofito puede
dar como resultado la producción de
conidióforos, conidias y desarrollo miceliano.
Esta característica permite que el hongo pueda
ser cultivado en el laboratorio utilizando técnicas
de producción en masa de bajo costo.
 PAPA DEXTROSA AGAR (PDA)
• Es un medio muy usado que sirve para aislar todo tipo de hongos
Beauveria, Paecilomyces, Lecanicillium (Verticillium) y Metarhizium, los
más importantes hongos parásitos de insectos, al igual que los parásitos
de plantas y los hongos saprofitos crecen muy bien y esporulan en este
medio.
• Cuando se aíslan hongos a partir de insectos colectados del suelo, es
recomendable acidificar el medio con ácido láctico al 25%. Se agregan 3
ó 4 gotas sobre el agar solidificado de la placa con el objeto de evitar el
desarrollo de bacterias.
• Con los mismos ingredientes, excluyendo el agar, se obtiene el medio
líquido de Papa Dextrosa (PD), muy utilizado para la preparación del
inóculo en forma masiva.
• Composición:
Papa sin pelar 200 g, Dextrosa 10 g, Agar 18 g, Agua destilada 1 litro
• Preparación:
Lavar las papas, cortarlas y hacerlas hervir en un litro de agua destilada
por 20 minutos, colar y disolver en el líquido la dextrosa y el agar.
Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presión.
 Papa Agar Levadura
• Composición por litro:
papas cortadas 300.0g
glucosa 20g
agar 15g
Extracto de levadura 5,0 g

• Preparación del medio de cultivo:

Colocar las papas y en un recipiente con 500.0mL de agua
hirviendo por 30 min. Colar con una gasa. Ajuste el volumen a 1.0L
con agua destilada desionizada. Mezclar bien. Añadir el agar.
Calentar suavemente y llevar a ebullición. Añadir 20.0g de la
glucosa. Mezclar bien. Distribuir en tubos o frascos. Esterilizar en
autoclave durante 15 min. a 15 psi de presión a 121 ° C. Verter en
cajas Petri estériles o en tubos.
Uso: para el cultivo y mantenimiento de Paecilimyces
fumosoroseus.
 Crecimiento
• La luz solar es probablemente el factor ambiental que
más afecta la persistenia de Paecilomyces
fumosoroseus; las temperaturas presentes en la
mayoría de los agroecosistemas, las cuales varían entre
10 y 40 °C, generalmente no afectan adversamente a
estos microorganismos, las temperaturas extremas , sin
embargo, pueden afectar cuando han sido influenciados
por otros factores como la luz, agua o agroquímicos. La
humedad relativa (HR) es un requerimiento primordial
para la germinación de las conidias y sobrevivencia de
los hongos.
• Bajo condiciones de laboratorio el desarrollo más rápido
de Paecilomyces fumosoroseus con HR de 100% ocurre
a 30 °C, esporulando a las 72 horas sobre pupas de
mosquita blanca; a 20 °C el desarrollo del hongo declina
significativamente pero completa su ciclo. En general la
temperatura óptima para la germinación y crecimiento
del patógeno en medio artificial es de 25 °C.
• Una disminución de la HR provoca inactivación
significativa de Paecilomyces fumosoroseus sobre el
huésped. La activación inicial de la conidia se observa
en 168 horas a 85% de HR y a 80% de HR no hay
desarrollo. El crecimiento más rápido de l hongo se
obtiene a 100% de HR.
• Forma en la que crecen en un huésped:
El conidio de Paecilomyces fumosoroseus
se adhire al dorso del insecto, el tubo
germinativo penetra y la hifa está
presente en el interior del huésped, el
cual tiene un rango de vida entre 24 y 48
horas después de que el conidio entra en
contacto con el insecto. El micelio de
Paecilomyces fumosoroseus emerge del
cuerpo del huésped en 48 horas y
esporula a las 72 horas. Las conidias de
Paecilomyces fumosoroseus son
producidas en racimos secos los cuáles
son fácilmente dispersados por el viento
originando la infección en huéspedes
sanos.
• Al cultivarlos en Papa Dextrosa más Extracto de
Levadura líquido se puede obtener un crecimiento de
colonia en 15 días.
 Conservación
• La conservación de los hongos consiste en mantenerlos
viables. En la actualidad existen varios métodos para
conservar los hongos por periodos prolongados, los mismos
que implican el uso de material variado.
• Existen dos principios de conservación: 1) donde se reduce el
metabolismo y 2) donde se induce la dormancia de las
conidias o esporas.
• La reducción del metabolismo, incluye la conservación
mediante bajas temperaturas, uso del aceite mineral, agua
estéril, suelo estéril, etc. En la inducción de la dormancia, se
incluye el secado sobre sílica gel y la liofilización.
• Hay otros métodos más económicos, como el uso de aceite
mineral, pero no es seguro, porque el hongo puede seguir
creciendo en condiciones de desventaja, además, no está
garantizada su pureza.
 Colección
• Colectar consiste en recoger insectos vivos o
muertos, en el follaje, tallos, corteza de los
árboles, sobre la superficie o en el interior de
éstos, en el suelo, inclusive en crianzas masivas
de laboratorio; y colocarlo en una placa o frasco,
pero nunca en sobre papel o en medio líquido.
Se deben colectar insectos en diferentes
estados de desarrollo que presenten signos
iniciales o avanzados de estar parasitados.
 Una vez en el laboratorio, las muestras
son procesadas como se describe:
1. Remojar el insecto en hipoclorito de sodio
(0.5% del producto activo) durante 5 minutos.
2. Enjuagar tres a cuatro veces con agua
destilada estéril.
3. Colocar papel de filtro estéril en una caja Petri
esterilizada y agregar agua destilada estéril.
4. Colocar el insecto sobre el papel de filtro
dentro de la caja.
5. Sellar la placa con parafilm.
6. Incubar a 20 °C durante 7 días.
7. Con una aguja de siembra, en la cámara de
flujo laminar, tocar levemente el cuerpo del
insecto donde se vea crecimiento fungoso y
transferir su contenido a medio de cultivo.
 Aislamiento
• Para establecer una colección confiable,
es necesario partir de aislamientos
monospóricos que garanticen la
autenticidad y pureza de los mismos y de
los datos que se consigan. Los
aislamientos monospóricos pueden ser
por colonia o por punta de hifa.
• Sembrar el hongo que se ha aislado
directamente del insecto, en un tubo
inclinado con medio de cultivo e incubarlo a
20 °C durante 5 días.
• Preparar una suspensión de esporas, a
partir del tubo con el hongo en desarrollo.
• Hacer las diluciones que sean necesarias
para tener una suspensión a una
concentración de 50 a 100 esporas por
mililitro.
• Sembrar 100 μl de la concentración deseada
en una placa con medio PDA y distribuirla
con una espátula de Drigalski, dentro de la
cámara de flujo laminar.
• Incubar a 20 °C por espacio de una semana.
• Cortar con una hoja de bisturí estéril una
colonia en formación y transferirla a otra
placa con PDA.
 Identificación
Prueba morfológica:
• Existen varias claves de identificación de
hongos, una de ellas es “CMI descriptions of
pathogenic fungi and bacteria” perteneciente a
la Commonwealth Micological Institute, donde
se encuentran descritas las especies de hongos
entomopatógenos.
• Esta caracterización se basa en la descripción
de la colonia (macroscópica) así como de las
estructuras del hongo (microscópica).
 Descripción de la colonia
1. Con un asa de siembra, tocar ligeramente el
hongo a propagar y sembrar por punción en
ángulo recto en el centro de la placa
conteniendo el medio de cultivo PDA.
2. Incubar a 20 °C durante 15 días.
3. Observar la forma de crecimiento de la colonia,
tamaño (el cual se mide de lado a lado pasando
por el centro en dos puntos de la colonia),
aspecto, textura y coloración de ambas caras y
la producción de pigmentos.
• Colonia : en PDA inicialmente blanca, luego
adquiere un tinte rosado muy tenue. El revés de
la colonia es al comienzo ligeramente
amarillento, pero a medida que pasa el tiempo
se vuelve de color anaranjado intenso.
 Descripción del hongo
Para la descripción del hongo mediante una observación
microscópica de sus estructuras, es necesario realizar
una tinción o coloración, siendo el procedimiento el
siguiente:

1. Sembrar el hongo en una placa con medio de cultivo PDA.

2. Esperar el crecimiento por espacio de 15 días.
3. En una lámina portaobjetos colocar una pequeña muestra del tejido
hifal, dispersarla y colocarle un cubreobjeto.
4. Observar al microscopio las estructuras.
5. Medir la longitud y el diámetro de cualquier estructura de interés.

Este método permite ver las estructuras sin que pierda

su disposición natural y sin perturbar mucho su
morfología.
• Conidióforos: generalmente terminales
pero también se forman en cualquier
parte del micelio. Alcanzan hasta
100μde largo x 1.5 a 3 μ de diámetro.
• Fiálides: son estructuras en cuyo
interior se forman las conidias. Se
insertan en el ápice de los conidióforos
en grupos compactos de tres a seis.
También tienen forma de botella con la
base ancha que se va adelgazando.
Miden de 5 a 7 μm de largo x 2.5 a 3
μm de diámetro, que se reduce a 0.5
μm en el extremo superior.
• Conidia: cilíndrica a fusiforme de
extremos redondeados, miden de 3 a 5
x 1 a 2 μ, se observan en cadenas
largas.
 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA:
Esta caracterización se basa en la evaluación de
rendimiento en número de conidias y viabilidad de las
mismas (porcentaje de germinación).
Número de conidias
1. Sembrar 10 μl de una suspensión de conidias con una
concentración de 106 conidias/ml en medio PDA.
2. Incubar a 20 °C durante 15 días.
3. Realizar diluciones seriadas con un factor de 0.1
4. Cargar la cámara de Neubauer y contar el número de
conidias/ml.
5. Realizar por lo menos cuatro repeticiones por
aislamiento.
6. Realizar los cálculos respectivos para obtener la
información.
 Viabilidad de conidias
1. Sembrar 5 alícuotas de 5μl de una suspensión de
conidias con una concentración de 106 conidias/ml en
medio PDA.
2. Incubar a 20 °C durante 24 horas.
3. Agregar azul de lactofenol para detener la germinación.
4. Cortar la porción de agar conteniendo la alícuota de la
suspensión de conidias y colocarla sobre una lamina
portaobjetos. Cubrir con un cubre objetos.
5. Registrar el número de conidias germinadas (aquellas
cuyo tubo germinativo sea dos veces mayor al diámetro
de la conidia).
6. Por cada aislamiento no se debe hacer menos de cinco
repeticiones. En caso de que el rendimiento sea muy
bajo, debido a la pérdida de sus características por ser un
aislamiento muy viejo, se recomienda reactivarlo en el
insecto hospedante.
 Referencias
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• http://www.siac.net.co/sib/catalogoespecies/especie.do?
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