Programa de apoyo a la iniciación en la investigación

(PAIN) 2009 – Informe Final del Alumno

CARACTERIZACIÓN DE PRODUCTOS BIOLÓGICOS

MEDIANTE EL USO DE UN MICROSCOPIO DE FUERZA
ATÓMICA (AFM)

Estado de la investigación

Como parte de la caracterización de films de almidón se decidió realizar un trabajo

de amilografía. De esta manera se esperaba complementar la caracterización
morfológica del almidón.

Para este trabajo se usó un microscopio de luz invertida donde se observaron

muestras de distintos tipos de almidón, entre los cuales se encuentran: olluco, oca,
papa, camote, plátano, yuca, garbanzo, maíz, olluco, entre otras. Las imágenes
obtenidas en el microscopio fueron fotografiadas y comparadas con un patrón de
manera que se pudieran obtener datos mediante análisis de imágenes. Este
procedimiento se realizó en dos temperaturas distintas (25º C y 45ºC) para las
variedades de almidón previamente mencionadas.

Asimismo se realizó extrusión de almidón de yuca y de maíz con distintos

porcentajes de plastificante. El producto obtenido se sometió a pruebas de
calorimetría de barrido diferencial (DSC) de manera que se pudieron obtener datos
relativos a la transformación que ocurre en el almidón tras el incremento de
temperatura que ocurre en la extrusora.

Actividades ejecutadas

La primera tarea realizada en la investigación fue la búsqueda bibliográfica. Esta

se realizó tomando en cuenta tanto la seda de araña como el almidón, de manera
que se pueda conocer el estado de investigación en estos productos.

Luego se hizo la recolección de muestras, para lo cual se tuvo que capturar

arañas de la especie Argiope Argentata. Las arañas fueron puestas en un
ambiente especialmente condicionado para ellas. Este ambiente consistía en una
caja con una adecuada entrada de luz y control de humedad. Gracias a esto las
arañas podían tejer un orbe, como lo hacen en la naturaleza. De esta manera su
alimentación, en base a tenebrios vivos, se vio facilitada.

Las muestras de almidón que se usaron para este trabajo fueron obtenidas
directamente de los productos naturales. Los métodos de extracción del almidón
no son parte de esta investigación, sino de otros proyectos realizados por el grupo
POLYCOM. Las muestras incluyen almidón de papa (amarilla, huayro, blanca,
nativa), yuca, maíz, oca, olluco, plátano, etc.

En lo que respecta a preparación de muestras de seda se procedió

cuidadosamente para no dañar a la araña. Se inmovilizó a la araña de manera que
su vientre quedara expuesto, ya que es en esta posición que se facilita la
extracción. Una pinza, en cuyo extremo se coloca cinta adhesiva, se pega al
vientre. La seda que se encuentra en el extremo de la pinza se pega en un
extremo de una lámina de plástico que tiene en su superficie cinta adhesiva de
doble cara. Luego, jalando con cuidado, se dispone la seda a lo largo de la lámina
de plástico, asegurándose de que quede tensa. En caso de que se requiera hacer
hilado forzado para caracterización mecánica, este proceso se realiza a velocidad
constante. En este caso no se utiliza una lámina de plástico, sino que la cinta que
se encuentra en la pinza se coloca en una máquina que sirve para realizar
ensayos de tracción a velocidad constante.

En el caso del almidón fue necesario someterlo a un proceso de extrusión para

luego hacer las pruebas en el calorímetro de barrido diferencial. Lo primero que se
hace es preparar la mezcla entre almidón (en polvo) y agua (plastificante). Para
este proyecto se utilizó una medida de 30% de agua. Luego, la extrusora se
prepara de manera que alcance temperaturas de 70º C, 80ºC, 90ºC y 95ºC, desde
el extremo por donde ingresa la mezcla hasta el extremo por donde sale,
respectivamente. Esto se logra con las resistencias que son parte de la extrusora y
que tienen controladores, de manera que estas temperaturas se mantengan
constantes a lo largo del proceso. De igual manera se trabaja a velocidad
constante, con el tornillo de la extrusora girando a 4.7 rpm.

En lo que respecta a caracterización morfológica, los ensayos de seda de araña

en el microscopio de fuerza atómica se realizan tan solo después de lavar las
muestras extraídas de la araña en la lámina. Esto se hace para evitar cualquier
partícula extraña que pudiera dañar el microscopio. La lámina se coloca en el
portamuestras del microscopio, el cual también tiene en su superficie cinta
adhesiva de doble cara. Luego se procede a observar la imagen topográfica
obtenida de la seda.

Para los ensayos de amilografía (caracterización morfológica de almidón) se

preparó una pequeña solución de yodo, lo cual sirvió para darle color al almidón,
de manera que se pudiera observar con mayor facilidad en el microscopio. Tras
mezclar la solución junto con almidón en el portamuestras del microscopio se
proceded a observar y tomar las fotografías que ayuden a realizar luego el análisis
de imágenes. Para este último paso se procede convirtiendo la imagen a blanco y
negro con el uso del software ImageJ. Este mismo software permite analizar las
partículas tras haber incluído la escala a la que se encuentran. Los datos de estos
ensayos se encuentran en los anexos.
Anexos

Imágenes de microscopía de fuerza atómica

Fig 1. Seda de araña a 50µm

Fig 2 Almidón de papa y agua a 50µm

 Fig 3. Films de almidón de maíz, agua y arcilla.

Imágenes de microscopía de luz invertida para almidón a 25ºC

Fig 4. Almidón de papa blanca nativa

Fig 5. Almidón de Camote Jhonatan

 Fig 6. Almidón de Garbanzo

Imágenes anteriores procesadas para el análisis de imágenes

Fig 4.Izquierda: Imagen de papa blanca nativa en modo binario. Derecha:

Imagen que muestra el contorno de los granos de almidón

Fig 5. Izquierda: Imagen de camote Jhonatan en modo binario. Derecha:

Imagen del contorno de los granos de almidón.
Fig 6. Izquierda: Imagen de Garbanzo en modo binario. Derecha: Imagen
del contorno de los granos de garbanzo.

Fig 7. Muestras de almidón extruído

Fig 8. Film de almidón prensado.

Fig 9. Izquierda. Prensa hidráulica usada para producir films de almidón. Derecha:
extrusora utilizada para obtener los tubos sólidos de almidón

Fig 10. Termograma de almidón de maíz húmedo calentado de 15º a 125º

Tablas

Circularida
Área Perímetro d Diámetro de Feret

Papa blanca
nativa

9 574.56 116.74 0.53 37.90

20 657.67 101.46 0.80 37.90
3 666.33 108.23 0.72 35.90
19 583.89 93.81 0.83 32.36
15 436.11 82.31 0.81 31.14
21 316.56 68.66 0.84 23.54
17 126.67 45.54 0.77 16.13
22 105.89 43.69 0.70 15.26
1 114.89 39.80 0.91 12.87
16 68.11 31.28 0.88 11.18
14 0.89 3.89 0.74 1.80
7 0.44 2.55 0.86 1.20
6 0.44 2.55 0.86 1.05

280.95730 56.961384 0.7876923

8 6 1 19.86269231

Tabla 1. Datos completos para la papa blanca nativa

Circularida
Área d Diámetro deFeret

Camote 58.53 0.87 9.24

111.3
Garbanzo 1 0.88 13.33
157.7
Lentejas 7 0.87 16.02
Maca 33.58 0.85 7.46
323.9
Oca 0 0.83 23.83
202.4
Papa amarilla 8 0.89 17.33
280.9
Papa blanca pequeña 6 0.79 19.86
442.6
Papa Huayro 6 0.89 24.89
 283.2
Papa Yungay Chata 6 0.88 20.06
270.2
Plátano 0 0.82 21.69
Yuca 75.83 0.88 9.71
Maiz 51.97 0.88 8.47

Tabla 2 . Datos promedio de distintos tipos de almidón a 25ºC

Circularida
Área d Diámetro de Feret

2504.1
Olluco 1 0.85 64.90
8816.5
Oca 7 0.79 132.69
1839.9
Yuca 7 0.83 51.22
2812.7
Papa amarilla 1 0.83 57.20
1323.5
Papa yungay chata 6 0.89 42.80
1063.2
Papa blanca pequeña 3 0.88 39.73
1581.3
Papa huayro 4 0.89 46.41
2049.6
Plátano 1 0.78 63.20

Tabla 3. Datos promedio de distintos tipos de almidón a 45°C