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El trmino Proteoma fue usado por primera vez por Wilkins et al. (1996) para
describir el conjunto de protenas que se expresan a partir de un genoma en un
momento dado. El Proteoma es un elemento altamente dinmico, cuyos componentes
varan en un organismo, tejido, clula o compartimento subcelular, como consecuencia
de cambios en su entorno, situaciones de estrs, administracin de drogas, seales
bioqumicas o su estado fisiolgico o patolgico.
La Protemica se ha definido como la ciencia o conjunto de tecnologas que
estudian el proteoma.
La electroforesis bidimensional en geles de poliacrilamida (2D PAGE) es la
herramienta ms empleada para el anlisis global y la separacin de los componentes
del proteoma. Dicha tcnica permite la separacin de cientos o miles de protenas
(spots) en un nico gel, mostrando un patrn caracterstico.
La Separacin de Protenas mediante 2D PAGE pasa por las siguientes
etapas:
Preparacin de la muestra:
(Solicitud de anlisis www.proteored.org ). Consultar Gua de Usuario.
Es el paso ms crtico y clave en el xito del experimento. En l se
emplean agentes caotrpicos, surfactantes y agentes reductores. Los
agentes caotrpicos como la urea y tiourea, provocan la desnaturalizacin
de las protenas por ruptura de puentes de hidrgeno, dejando expuestos los
residuos hidrofbicos que son solubilizados por los agentes surfactantes.
Los agentes reductores como el DTT (aunque tambin se emplean otros
reductores alternativos no cargados), completan la desnaturalizacin
proteica por ruptura de puentes disulfuro.
Separacin en la 1 Dimensin (Isoelectroenfoque):
(Solicitud de anlisis www.proteored.org ). Consultar Gua de Usuario.
Equipo de Isoelectroenfoque:
Protean IEF cell (BioRad)
Una vez que las protenas han sido separadas en funcin de sus
propiedades elctricas, pasamos a separarlas en funcin de su tamao o
peso molecular mediante la electroforesis en geles de acrilamida en
presencia de dodecil-sulfato sdico (SDS).
Estas dos separaciones sucesivas permiten aislar prcticamente
todas las protenas de un proteoma en una matriz bidimensional
(electroforesis bidimensional).
Tincin:
(Solicitud de anlisis www.proteored.org ). Consultar Gua de Usuario.
Gel Bidimensional:
Tincin Coomassie Blue
Adquisicin y Anlisis de Imagen:
(Solicitud de anlisis www.proteored.org ). Consultar Gua de Usuario.
Escner de Fluorescencia:
FX ProPlus (BioRad)
Densitmetro :
GS-800 (BioRad)