Enzimas:mecanismo,cinticayregulacin

Enzimas:mecanismo,cinticayregulacin
Concepto y clasificacin
Propiedades y caractersticas
Clasificacin de enzimas
Velocidad y orden de reaccin

Mecanismo de accin de las enzimas

Energa de activacin y velocidad de reaccin

Sitio activo y energa de unin
Mecanismos de catlisis
Coenzimas y cofactores

Cintica enzimtica
Modelo de Michaelis-Menten
Cintica mutisustrato
Mecanismos de inhibicin

Regulacin de la actividad enzimtica

Mecanismos generales de regulacin
Regulacin alostrica y cooperatividad
Regulacin de rutas metablicas

Para Enrique Castro

Los trabajos de terceros
retienen su licencia original

2011 Enrique Castro

Propiedadesdelosenzimas
Propiedadesdelosenzimas
Protenas
Ribozimas son excepcin

Catalizadores
No alteran la posicin del equilibrio (Keq, G)

Eficacia
Aceleran enormemente la velocidad de reaccin

Especificidad
Una nica reaccin
Sin reacciones colaterales
No absoluta: varios sustratos

Papana: inespecfica
Tripsina: muy especfica (R,K)
Trombina: absolutamente especfica
(R en secuencia definida)

Estereoselectivas
Complementariedad 3D

2011 Enrique Castro

DHAP
Dihidroxiacetona-fosfato

GA3P
L-gliceraldehdo-3-fosfato 2

Nomenclaturayclasificacindeenzimas
Nomenclaturayclasificacindeenzimas
Clases

Subclases

D-Glucosa + ATP

1: Oxidoreductasas

D-Glucosa-6-P + ADP

Hexoquinasa
ATP:glucosa fosfotransferasa
EC 2.7.1.1
2: Transferasa
7: Fosfotransferasa
1: grupo aceptor -OH
1: compuesto aceptor

H: Deshidrogenasas
O2 : Oxigenasas (mono-, di-)

2: Transferasas
P: quinasas
NH2: aminotransferasas
(transaminasas)
Ac: acetil-transferasas

2011 Enrique Castro

Componentesadicionales:Cofactores
Componentesadicionales:Cofactores
Cofactor
No proteico, termoestable, bajo Mrr
Unido permentemente
In metlico esencial para catlisis

Covalente:
grupo prosttico

Cofactores aportan
reactividad qumica especial

Holo-enzima =
apo-enzima + cofactor
Xantina oxidasa

Coenzima
Molcula orgnica esencial para catlisis
Unin transitoria: co-sustrato

2011 Enrique Castro

Curvasdeprogresodereaccin
Curvasdeprogresodereaccin
Keq
v =

k1

k-1

Constante
de velocidad

d [ A]
d [P]
=
= k 1[ A] k 1[ P ]
dt
dt

Curva exponencial

Ecuacin de velocidad

[ A]=[ A]0ekt

En el equilibrio
no hay ms reaccin neta: vAP = vPA

v eq = k 1[ A]eq k 1[ P ]eq =0 ;

K eq =

k 1 [ P ]eq
=
k 1 [ A]eq

Velocidad inicial

v0

Elimina dependencia de [P]

v0 =

d [ A]0
d [ P ]0
=
= k 1[ A]0 k 1[ P ]0
dt
dt

[P]0=0

v0

v 0 = k 1[ A]0

2011 Enrique Castro

Velocidadyordendereaccin
Velocidadyordendereaccin
Reacciones de orden 0

No depende de [A]

v 0=

d [ P]
= k
dt

[k] = Ms-1

Reacciones de 1er orden (orden 1)

Dependencia lineal de [A]

A
v0=
ln

d [ A]
=k[ A]
dt

[k] = s-1

[ A]
=kt ; [ A]=[ A]0ekt
[ A]0

Reacciones de 2 orden (orden 2)

Reacciones bimoleculares reales

A+B
2A

k
k

P
P

d[P]
= k[ A][ B]
dt
d [P]
v 0=
= k[ A]2
dt
v 0=

Pseudo 1er orden

[k] = M-1s-1

[B] constante (ej. Agua)

v 0=

d [ P]
=k [ B][ A]=k '[ A]
dt
k ' =k [ B]

Etapa limitante monomolecular

A+A
A*
2011 Enrique Castro

k
k'
k>>k'

A + A*
P
6

Enzimas:mecanismo,cinticayregulacin
Enzimas:mecanismo,cinticayregulacin
Concepto y clasificacin
Propiedades y caractersticas
Clasificacin de enzimas
Velocidad y orden de reaccin

Mecanismo de accin de las enzimas

Energa de activacin y velocidad de reaccin

Sitio activo y energa de unin
Mecanismos de catlisis
Coenzimas y cofactores

Cintica enzimtica
Modelo de Michaelis-Menten
Cintica mutisustrato
Mecanismos de inhibicin

Regulacin de la actividad enzimtica

Mecanismos generales de regulacin
Regulacin alostrica y cooperatividad
Regulacin de rutas metablicas
7

2011 Enrique Castro

Energadeactivacinycatlisis
Energadeactivacinycatlisis
[P]

[S]
G 0=RTln K eq
0

G S P = G RT ln

Ecuacin de Eyring

k B T RTG
k =
e
h

Distribucin
de Boltzmann

Ni
g
= ie k
N
Z

Keq, G indican direccin de la reaccin

NO indican si ocurre rpidamente

Ei
BT

Catalizador reduce G
sin afectar a GO

G indica velocidad de la reaccin

2011 Enrique Castro

Centroactivo
Centroactivo
Regin cataltica especializada

Centro activo de Lisozima

Protena =
andamiaje para
centro activo en
posicin

Hendidura 3D superficial (unin S)

Volumen reducido

Microentorno nico
Agua excluda (salvo reactiva)
pKa especiales

Multiplicidad de enlaces dbiles

Energa de unin alta (15-50 kJmol-1)
Kd baja (10-2-10-9 M)
Unin de sustrato
a RNasa

Especificidad=complementariedad
Forma 3D complementaria E-S
Enlace direccionales
Llave en cerradura / Ajuste inducido
9

2011 Enrique Castro

Mecanismosgeneralesdecatlisis(1)
Mecanismosgeneralesdecatlisis(1)
Estabilizacin del estado de transicin
Desolvatacin del sustrato (sustituye por unin ES)
Distorsin del sustrato (tensin similar a TS)
Alineamiento de grupos catalticos
Reduccin de entropa de reactivos

Estado de
transicin
Energa de unin:
H: Mltiples enlaces dbiles E-S
S: Alineamiento adecuado

La energa de unin GB reduce

la energa de activacin G

2011 Enrique Castro

10

Catlisis:uninalestadodetransicin
Catlisis:uninalestadodetransicin

2011 Enrique Castro

11

Efectosentrpicos:alienamientodegrupos
Efectosentrpicos:alienamientodegrupos
G=H TS
Reduccin de S
requiere
inversin en H

H:
Red de enlaces dbiles E-S

2011 Enrique Castro

12

Mecanismosgeneralesdecatlisis(2)
Mecanismosgeneralesdecatlisis(2)
Catlisis cido-base general
Aporte/secuestro de H+ o pares e Ionizacin de grupos
Ataques nucleoflicos a >C=O
Estado de transicin

Sustrato
(pptido)

Catlisis redox
Cofactores redox: grupos oxidantes/reductores

X: grupo del enzima

Catlisis covalente
Intermediario unido al enzima
Ruta alternativa

AB

H2O
lento

A+B

AB + X:
AX

rpido

H2O
rpido

AX + B:

A + X:

Catlisis por iones metlicos

Reactividad especial de orbitales d

Mg:complejo de
coordinacin octadrico
(6 O)

Enlaces de coordinacin
Actividad redox

13

2011 Enrique Castro

UninES:especificidadyestereoselectividad
UninES:especificidadyestereoselectividad
Complementariedad enzima-sustrato
Llave en cerradura (Fischer)
Estereoselectividad: unin a 3 sitios

lisozima

Ajuste inducido

Hexasacrido substrato

Encaje inducido en la hexoquinasa

Complementario al unirse (Koshland)

Energa de unin : cambio conformacional

2011 Enrique Castro

Inactiva
aa catalticos
descolocados

Activa
aa catalticos en posicin 14

Mecanismoscatalticos:Anhidrasacarbnica
Mecanismoscatalticos:Anhidrasacarbnica
CO2 + HO

HCO3

pKa(H2O) = 14
A pH 7 [HO]= 10-7 M
[HO]/[H2O] = 10-7/55.5 210-9

Dramtico aumento
de acidez de H2O
pKa = 7

B:
BH+

Transfiere H+
a superficie
de protena
(y al medio)

Estabilizacin
por par inico
2011 Enrique Castro

15

Mecanismoscatalticos:sernproteasas
Mecanismoscatalticos:sernproteasas

2011 Enrique Castro

16

Mecanismoscatalticos:sernproteasas
Mecanismoscatalticos:sernproteasas

17

2011 Enrique Castro

Coenzimasdenicotinamida
Coenzimasdenicotinamida
Nicotinamida
reducida

Pliege de Rossmann
en la ADH de hgado

Lactato + NAD+
AMP

Nicotinamida adenina dinucletido, NAD+

Nicotinamida
oxidada

Piruvato + NADH + H+
H+

adenina

2'P en NADP

NAD+

NADH

Coenzimas difusibles
Unin transitoria al enzima
Co-sustratos
2011 Enrique Castro

18

VitaminasB3
VitaminasB3

19

2011 Enrique Castro

Coenzimasdeflavina
Coenzimasdeflavina

Riboflavina
vit. B2

Ac. Succnico

Coenzimas no difusibles
Unin firme al enzima
Grupo prosttico (covalente)
2011 Enrique Castro

Ac. Fumrico

FAD

FADH2

20

Actividadenzimtica:DependenciadeTypH
Actividadenzimtica:DependenciadeTypH
Dependencia de T
Energa cintica molecular
Q10
Estabilidad de la protena

Q 10 =

Ecuacin de
Arrhenius

V T 10
VT

k = Ae

Curva bifsica asimtrica

Desnaturalizacin
trmica

Ea
RT

20

40

60 80
T, C

100

Dependencia del pH
Titulacin de grupos ionizables esenciales
(Henderson-Hasselbalch)
pKa aa catalticos
Estabilidad de la protena

Grupo
desprotonado
cataltico

Grupo
protonado
cataltico

Curva acampanada
simtrica
2011 Enrique Castro

21

Enzimas:mecanismo,cinticayregulacin
Enzimas:mecanismo,cinticayregulacin
Concepto y clasificacin
Propiedades y caractersticas
Clasificacin de enzimas
Velocidad y orden de reaccin

Mecanismo de accin de las enzimas

Energa de activacin y velocidad de reaccin

Sitio activo y energa de unin
Mecanismos de catlisis
Coenzimas y cofactores

Cintica enzimtica
Modelo de Michaelis-Menten
Cintica mutisustrato
Mecanismos de inhibicin

Regulacin de la actividad enzimtica

Mecanismos generales de regulacin
Regulacin alostrica y cooperatividad
Regulacin de rutas metablicas
2011 Enrique Castro

22

Cinticaenzimtica:curvahiperblicaysaturacin
Cinticaenzimtica:curvahiperblicaysaturacin
Saturacin: Vmax
v no aumenta al [S]

v k[ A]n
Saturacin implica
unin enzima-sustrato

Curva de velocidad
no cannica

v =

k[ S ]
k ' [S ]

E+S

ES

Etapa rpida
cuasi-equilibrio

P+E
Etapa lenta
limitante, acmulo ES
23

2011 Enrique Castro

CinticadeMichaelisMenten
CinticadeMichaelisMenten
E+S

k1
k-1

ES

k2

P+E

1 simplificacin: v0
A t=0, [P]=0 y k-2 no afecta

d [P]
= v 0 = k 2[ ES ]
dt
d [ ES ]
=k 1 [ E ]T [ ES ][ S ] k 1[ ES ] k 2[ ES ]=0
dt
k 1 [ E ]T [S ]
[ E ]T [ S ]
[ ES ]=
; [ ES ]=
k 1 [S ] k 2 k 1
k k
[S ] 2 1
k1
k 2 [ E ]T [S ]
v 0=k 2[ ES ]=
k k
[S ] 2 1
k1
k 2 k 1
K M=
k1
V max=k 2[ E ]T

V [S ]
v 0 = max
K M [S ]

2 simplificacin: Estado estacionario

[ES] no vara (k1>>k2) Permite calcular [ES]
VMax: V cuando [S]

[S] >> KM
Orden 0

[S] << KM
Orden 1

Ecuacin de Michaelis-Menten
2011 Enrique Castro

KM: [S] a la que V=Vmax

24

Parmetroscinticos:K
yk
Parmetroscinticos:KMM,V
,Vmax
ykcat
max
cat
Constante de Michaelis, KM
Afinidad E-S
Kd de ES
Si k2<< k-1 K M =

k 2k 1 k 1

=Kd
k1
k1

Alta KM, baja afinidad

Baja KM, alta afinidad

Velocidad mxima, Vmax

Saturacin.
Actividad enzimtica: [E]T

unidades

V max =k 2[ E ]T

Usuales: mol/min = UI
SI: catal = mol/s

Vmax mide actividad

enzimtica, [E]T

Constante cataltica, kcat

k de paso limitante P
1er orden: N de recambio

k cat =

V max
[ E ]T

Kcat: n de molcula S
convertidas por segundo
25

2011 Enrique Castro

Lmitedevelocidad:Eficienciacataltica
Lmitedevelocidad:Eficienciacataltica
E+S

k1
k-1

ES

k cat[ E ]T [ S ]
v 0=
K M [S ]

k2

Si [S] << KM

kcat baja
KM debe ser bajo
Alta afinidad ES

KM baja
alta afinidad, disociacin lenta
kcat lenta

2011 Enrique Castro

P+E

Constante bimolecular
de 2 orden

k
v 0= cat [ E ]T [ S ]
KM

k cat
v diffusion
KM

Velocidad mxima bimolecular:

Lmite de difusin (n choques)
vdifusion=108-109 M-1s-1.

kcat elevada
KM no puede ser bajo
Afinidad ES limitada

KM alta
Baja afinidad, disociacin rpida
kcat rpida

26

GrficodeLineweaverBurke
GrficodeLineweaverBurke
V max[ S ]
;
K M [S ]

1 K M [S ]
=
v 0 V max[S ]

1/v0, (mol/min)-1

v 0=

KM
1
[S ]
=

v 0 V max[ S ] V max[ S ]
1 KM 1
1
=

v 0 V max [ S ] V max
Y=

p=KM/Vmax

1/Vmax

KM
1
X
V max
V max
1/[S], mM-1

-1/KM

27

2011 Enrique Castro

GrficodeEadieHofstee
GrficodeEadieHofstee
v 0=

V max[ S ]
K M [S ]

Vmax

v 0

KM
v 0=V max
[S ]

v
v 0 =K M 0 V max
[S ]

v0, (mol/min)

v 0K M v 0[ S ]=V max[S ]

p= -KM

Vmax/KM

v
v 0 =K M 0 V max
[S ]
Y =K MX V max

2011 Enrique Castro

v0/[S],
(mol/min)/mM

28

Mecanismodereaccionesbisustrato
Mecanismodereaccionesbisustrato
Mecanismo secuencial ordenado

Mecanismo secuencial al azar

Mecanismo ping-pong

29

2011 Enrique Castro

Cinticadereaccionesbisustrato
Cinticadereaccionesbisustrato
Reacciones secuenciales

1/v0

Ordenadas / al azar
Complejo ternario EAB

1/[A]

Reacciones ping-pong
1/v0

Ordenadas
Sin complejo ternario EAB
Intermediario enzima modificada

1/[A]
2011 Enrique Castro

30

Mecanismosdeinhibicin
Mecanismosdeinhibicin
Inhibicin reversible
Competitivos
Acompetitivos
No-competitivos: puros/mixtos
Inhibidor en equilbrio con E

KI:

constante de

disociacin de EI

Eliminacin del inhibidor

restaura actividad enzimtica

E +I

KI

Anlogos del estado

de transicin
Muy baja KM (KI)
Competitivos

EI

[ E ][ I ]
[ EI ]
[I ]
=1
KI

KI=

Inhibicin irreversible
Agentes desnaturalizantes
Reactivos de centro activo
Inhibidores suicidas

Frmacos inhibidores irreversibles

Penicilina / transpeptidasa bacteriana
Aspirina / COX
Disulfiram / AlDH (alcohol)

Efectos cinticos

H2O +O2

Vmax (kcat o [E]T)

KM

H2O2

Inhibidores suicidas
Alopurinol / Xantina oxidasa
5-Fluorouracilo / Timidilato sintasa
Deprenil / MAO

Venenos inhibidores irreversibles

Inhibidores AchE (organofosforados)
Amanitina / RNApol

Inactivacin enzimtica permanente

Recuperacin requiere biosntesis
31

2011 Enrique Castro

Inhibicinirreversible:bloqueoaaactivo
Inhibicinirreversible:bloqueoaaactivo
Cisten-enzimas
Agentes S-alquilantes
(iodoacetato, pCl-Hg-benzoato)
I2 antisptico

Sern-enzimas
Organofosfatos

Intoxicacin
por pesticidas

Reactivacin por
pralidoxima

2011 Enrique Castro

32

Inhibicinirreversibledirigida
Inhibicinirreversibledirigida

33

2011 Enrique Castro

Inhibicincompetitiva
Inhibicincompetitiva

[ E ][ I ]
[ EI ]
[I ]
=1
KI

KI=

ES

P +E

v0 =

KI

V max[ S ]
K M [ S ]

Frmacos inhibidores competitivos

EI

1/v0, (mol/min)-1

1 K M 1
1
=

v 0 V max [ S ] V max

1/Vmax

Vmax constante

ap

K M = K M1

[I ]

KI

ap

V max =V max

constante

p=KM/Vmax

-1/KM
2011 Enrique Castro

1/[S], mM-1

v
v 0=K M 0 V max
[S ]

KMap
Vmaxap =

+I

I=0

Metotrexato / DHF reductasa

Ibuprofeno / COX
Sildenafilo / PDE V
Estatinas /-HMGCoA reductasa

Inhibicin superable
por aumento de S

v0, (mol/min)

E+ S
+
I

I se une a E: EI
Excluye unin S

p= -KM

I=0
+I

Vmax/KM

v0/[S],
(mol/min)/mM
34

Inhibidoresenzimticosanlogosdesustrato
Inhibidoresenzimticosanlogosdesustrato

Anlogo del sustrato

de la DHF reductasa humana

Anlogo del sustrato

de la DHPS bacteriana
35

2011 Enrique Castro

Inhibicinacompetitiva
Inhibicinacompetitiva
I se une
slo a ES: ESI

E+ S

[ E ][ I ]
KI=
EI
[I ]
=1
KI

ES
+
I
KI
ES I

P +E

V max
[ S ]

v0=
KM
[ S ]

Frmacos inhibidores acompetitivos

Camptotecina / Topo I; etopsido / Topo II
Anlogos 2 sustrato secuencial/ping-pong

/Vmax

v 0=
+I

KMap
Vmaxap

p=KM/Vmax

-/KM
2011 Enrique Castro

I=0

1/[S], mM-1

KM
[I]
1
KI
V max
V ap
max=
[I]
1
KI
ap

KM=

v0, (mol/min)

1/v0, (mol/min)-1

1 KM 1

=

v 0 V max [S ] V max

+I

K M v 0 V max

[S ]

I=0

p= -KM/

Vmax/

Vmax/KM

v0/[S],
(mol/min)/mM
36

Inhibicinnocompetitivapura
Inhibicinnocompetitivapura
E+ S
+
I

[ E ][ I ]
[ EI ]
[I ]
=1
KI

KI=

ES
+
I

KI

P +E

V max
[ S ]

v0 =
K M [ S ]

KI

EI+S

ES I

1 K M 1

=

v 0 V max [ S ] V max
KMap =
Vmaxap

+I

K ap
M=K M
V max
V ap
max=
[I]
1
KI

I=0

p=KM/Vmax

Inhibicin insuperable
por aumento de S

1/[S], mM-1

-1/KM constante

Digoxina / Na+ /K+-ATPasa

Tacrina / AchE
Anlogos alostricos

v
V
v 0=K M 0 max

[S]

1/v0, (mol/min)-1

/Vmax

Frmacos inhibidores no-competitivos

Vmax/
v0, (mol/min)

I se une a E y ES

p= -KM
constante

I=0
+I

Vmax/KM

v0/[S],
(mol/min)/mM
37

2011 Enrique Castro

Inhibicinnocompetitivamixta
Inhibicinnocompetitivamixta
I se une a E y ES

[ E ][ I ]
[ EI ]
[I ]
=1
KI

KI=

k2

E+ S
+
I
KI

ES
P +E
+
[ ES ][ I ]
I K ' I = [ ESI ]
K'I

EI+S

' =1

ES I

'/Vmax

1/v0, (mol/min)-1

1 K M 1
'
=

v 0 V max [ S ] V max
+I

I=0

p=KM/Vmax

1/[S], mM

-1

-'/KM
2011 Enrique Castro

k'2

[I]
K 'I

P +E

V max
[ S ]
'
v0=
KM
[ S ]
'
KMap
Vmaxap

[I]

KI
ap
K M = K M
[I]
1

K 'I
V max
ap
V max =
[I ]
1

K 'I
1

Inhibicin insuperable
por aumento de S
38

Enzimas:mecanismo,cinticayregulacin
Enzimas:mecanismo,cinticayregulacin
Concepto y clasificacin
Propiedades y caractersticas
Clasificacin de enzimas
Velocidad y orden de reaccin

Mecanismo de accin de las enzimas

Energa de activacin y velocidad de reaccin

Sitio activo y energa de unin
Mecanismos de catlisis
Coenzimas y cofactores

Cintica enzimtica
Modelo de Michaelis-Menten
Cintica mutisustrato
Mecanismos de inhibicin

Regulacin de la actividad enzimtica

Mecanismos generales de regulacin
Regulacin alostrica y cooperatividad
Regulacin de rutas metablicas
39

2011 Enrique Castro

Mecanismosgenricosderegulacinenzimtica
Mecanismosgenricosderegulacinenzimtica
Regulacin alostrica

Mod. Reversible
Proteolisis (irreversible)

Activador heterotrpico:
aumenta unin de sustrato

Quinasas
Sealizacin

Inhibidor heterotrpico:
dificulta unin de sustrato

Zimgenos pancreticos
Coagulacin
Caspasas apoptticas

Regulacin de la Expresin
Induccin/represin
Ubiquitinacin: degradacin
Expresin diferencial de isoenzimas
2011 Enrique Castro

Efector <> Sustrato

Tanto

Sustrato actuando en otro sitio

Usualmente

Modulador se une a otro sitio

Regula KM o kcat

Regulacin covalente

Efectos heterotrpicos

Efectos homotrpicos

gen

biosntesis

[Protena]

degradacin

aa

Expresin es un
estado estacionario
40

Regulacinalostrica:cooperatividad
Regulacinalostrica:cooperatividad

41

2011 Enrique Castro

Cooperatividadcintica
Cooperatividadcintica
Cintica no michaeliana
(sigmoidal)

Anlisis de cooperatividad:
representacin de Hill

Vmax

Vmax
K0.5

2011 Enrique Castro

42

Cinticacooperativa
Cinticacooperativa
K enzimas

V enzimas

Efector modula KM

Efector modula Vmax

Cintica sigmoidal:
activacin/inactivacin
como interruptor
(switch-like)

43

2011 Enrique Castro

Modelosdecooperatividad
Modelosdecooperatividad
Modelo concertado
Dos estados conformacionales
Efector cambia equilibrio T-R
Inhibidor T, activador R

Modelo secuencial
Subunidades cambian separadamente
Mltiples formas en equilibrio

Equilibrio R-T
L = T/R Stryer p. 282 fig. 10,15

2011 Enrique Castro

44

Reg.pormodificacincovalentereversible
Reg.pormodificacincovalentereversible
Uso regulador
Reversible
Modula actividad

Uso no regulador

Acilacin
Activacin constitutiva Farnesilacin
-carboxilacin
Anclaje
sulfatacin
2011 Enrique Castro

Funciones especficas
no reguladoras

45

Fosforilacincomomecanismoregulador
Fosforilacincomomecanismoregulador
Enzimas modificadoras de protenas
Quinasas / fosfatasas
Actividad / unin

Dianas fosforilables

Pi:
2 cargas, 3 pdh, tetradrico
(capacidad enlazante, reorganizacin)
Reaccin rpida
ATP ubicuo

G-25 kJ/mol
ratio P/D x104

Protena quinasa

Mltiples sitios de fosforilacin

Cambio estado conformacional
Actividad / unin

Forma
fosforilada

Forma
desfosforilada
Fosforilacin

activacin

Actividad enzimtica
Protena fosfatasa
Capacidad de unin
Reclutamiento
terminacin de la seal
Translocacin

Organizacin en cascada
Activacin secuencial
Amplificacin

MKKK

seal
MKK

A
A*
10

amplificacin
x10

B*

100
2011 Enrique Castro

MAPK

C
C*

1000

46

Secuenciasdianadefosforilacin
Secuenciasdianadefosforilacin
Cada quinasa fosforila -OH
en secuencias especficas
S/T: quinasas efectoras
Y: transduccin
H: quinasas efectoras

Cada protena puede

contener mltiples dianas
para varias quinasas

Mltiples efectos
P constitutiva
Localizacin secuestro
Activacin/inactivacin
Magnitud variable
47

2011 Enrique Castro

PKA:ejemplodeenzimareguladora
PKA:ejemplodeenzimareguladora
PKA

AKAP localiza R

Heterotetrmero R2C2
4 sitios cAMP, cooperativos
S/T-quinasa
Diana RRpS/T

Subunidades R
ligan 4 cAMP
(cooperativo)

Secuencia RRGAI
pseudosustrato

Centro cataltico
libre, activo

Activacin cooperativa
Actividad quinasa

Subunidades R
Inhiben a sub. C

100%-

Subunidades C
Fosforilan dianas

sigmoidal
10 M

50%-

Umbral de
activacin

[cAMP]i
2011 Enrique Castro

protena

protena

-RRpS/T-

-RRpS/TATP

ADP
OFosforilacin de protenas diana
(secuencia especfica)

OH

Pi
48

Reg.porproteolisis:zimgenospancreticos
Reg.porproteolisis:zimgenospancreticos
Zimgenos inactivos
(Grnulos de almacenamiento)

Activacin proteoltica
(extracelular)

Activacin
por proteolisis
en cascada

Feedback
explosivo
Proteolisis re-posiciona
el centro activo

49

2011 Enrique Castro

Activacinporproteolisis:coagulacin
Activacinporproteolisis:coagulacin

Proteasa
activa

Fibringeno
Dom.

Proteasa
inactiva
Activacin
por proteolisis
en cascada

Dom.

Proteolisis
por trombina

Fibrinopptidos
AyB

GHR
Monmero
de fibrina
GPR

Polimerizacin fibrina
Unin - GHR
Unin - GPR

2011 Enrique Castro

50

Isoenzimascomomecanismoregulador
Isoenzimascomomecanismoregulador
Hexoquinasas I-III

Isoenzimas
Igual reaccin
Diferente cintica
Diferente localizacin
Diferente expresin

KM Gluc baja (0.1 mM, alta afinidad)

Inhibicin por producto

Ajuste fino del metabolismo

en cada tejido o compartimento

Hexoquinas IV (glucoquinasa)
KM Gluc alta (10 mM, alta afinidad)
SIN inhibicin por producto

LDH H4

LDH M4

KM Lac baja (alta afinidad)

Inhibicin alostrica Pyr

KM Lac alta (baja afinidad)

No efecto alostrico Pyr

Lac

Pyr

NAD+

Pyr
NADH

Adaptado
produccin aerobia Pyr

NADH

Recambio de isoenzimas LDH

en corazn
(adaptacin a aerobio)

Lac
NAD+

Adaptado
produccin anaerobia Lac
51

2011 Enrique Castro

Regulacinderutasmetablicas
Regulacinderutasmetablicas
retroalimentacin

Enzimas reguladas/reguladoras
Reacciones ms lentas (paso limitante)
Inicio/ramificacin/fin de rutas
(etapa de compromiso)
Regular actividad
Regular expresin

Paso
limitante

retroalimentacin

Retroalimentacin (feedback)
Usualmente negativo
Precursores / Productos finales

Compartimentacin
Separar tras membranas
Regulacin independiente en zonas
Transporte regulado

g
g'
Etapa de
compromiso

2011 Enrique Castro

52

Enzimascomomarcadores
Enzimascomomarcadores
Ensayos enzimticos
Medida Vmax (conocer KM)
Identificaci de isoenzimas (selectividad tisular)

CPK3

CPK2

2011 Enrique Castro

53