ESTANDARIZACIN

La estandarizacin de un mtodo analtico es un proceso riguroso que tiene como

objetivo establecer o definir las condiciones de anlisis en que se pretende
cuantificar un analito. Que dependiendo de la tcnica analtica a la que pertenezca
el mtodo, la matriz o matrices, el analito, la cantidad de parmetros de
estandarizacin y de la metodologa empleada para su desarrollo puede requerir
de un tiempo considerable (en algunos casos puede superar los seis meses) [12].
Los anlisis de laboratorio son una parte fundamental hoy en da en los sistemas
de gestin, por ende los laboratorios que trabajan en stos campos deben tener
controlados todos sus procesos, desde el momento en que reciben las muestras
hasta que emiten el resultado final, pasando por el proceso de anlisis, en todos
los anlisis se requiere una confianza en los resultados obtenidos. La
estandarizacin de las metodologas analticas, junto con otras actividades
englobadas en la gran rea del aseguramiento de la calidad permite conseguir
calidad otorgando la confianza necesaria.
Por tanto, un mtodo siempre debe estandarizarse cuando es necesario verificar
que sus parmetros de calidad se adecuan a las necesidades analticas del
laboratorio. Estos parmetros de calidad, llamados performance characteristics o
figures of merit en ingls, son de tipo estadstico y se calculan mediante
herramientas matemtico estadsticas tales como: exactitud, precisin,
sensibilidad, selectividad, lmites de deteccin y cuantificacin, entre otros,
permitiendo as la confirmacin de la metodologa empleada para el uso propuesto
y la confiabilidad de los resultados obtenidos.
PARMETROS DE CALIDAD:
Linealidad y rango:
Linealidad es la capacidad del mtodo de proporcionar resultados directamente
proporcionales a la concentracin del analito de la muestra dentro del rango
establecido y el rango es el intervalo de concentracin del analito para la cual se
demostrado la correcta precisin, exactitud y linealidad del mtodo descrito [13].
Con los resultados obtenidos en el estudio de la linealidad se tabulan los datos en
una tabla relacionando las concentraciones (x) y la absorbancia (y).La relacin de
ambas variables se expresa matemticamente como una recta de regresin del
tipo y = bx + b obtenida por un mtodo de ajuste, donde y es la Absorbancia, a es
el intercepto, b es la pendiente y x la concentracin.
El coeficiente de correlacin (r) indica el grado de relacin entre la concentracin
(x) y la respuesta (y). Su valor mximo es 1, si r es cercano a la unidad significa
que existe correlacin con una probabilidad elevada, un valor nulo indica ausencia
de relacin lineal entre variables, el valor recomendado es r 0.999.

Exactitud se define como la proximidad entre el valor medido y el valor verdadero

de una magnitud a medir. La exactitud en la medida no es una magnitud y no se
expresa numricamente. Se dice que una medicin es ms exacta cuanto ms
pequeo es el error de la medicin.
Precisin: se define como el grado de concordancia mutua entre los datos que se
han obtenido de una misma forma. La precisin se puede expresar
numricamente mediante medidas de dispersin tales como desviacin estndar,
variancia o el coeficiente de variacin bajo las condiciones especificadas. La
precisin, se utiliza para definir a la repetitividad y reproducibilidad de una medida
[14].
Desviacin Estndar: es una medida de dispersin, que nos indica cunto pueden
alejarse los valores respecto al promedio (media), por lo tanto es til para buscar
probabilidades de que un evento ocurra. La desviacin estndar, s, para la
muestra est dada por:
ESPECTROFOTOMETRA ULTRAVIOLETA VISIBLE
La espectrofotometra ultravioleta-visible es una tcnica de medicin de
concentracin de masa de elementos y compuestos (especies) qumicos (anlisis
cuantitativo), cuyo principio es la interaccin entre la energa electromagntica con
la materia. En forma ms especfica la espectrofotometra ultravioleta visible se
fundamenta en medir la radiacin monocromtica absorbida por un elemento o
molcula causante de desplazamientos electrnicos a capas superiores, estas
transiciones determinan la regin del espectro en la que tiene lugar la absorcin.
La figura 2 muestra la interaccin de la radiacin con la materia [15].

Interaccin de la radiacin con la materia

Ley de Beer-Lambert.
La ley fundamental en la que se basan los mtodos espectrofotomtricos es la de
Bouguer-Beer, Lambert, Beer y establece:

La relacin entre la intensidad de la luz transmitida o energa radiante I y la

energa radiante incidente Io es una funcin del espesor de la celda b a travs del
medio absorbente, de acuerdo a:
= abc
Dnde:
= absorbancia
b = espesor de la celda
a = absortividad
c = concentracin

La cantidad de energa electromagntica monocromtica absorbida por un

elemento es directamente proporcional a la concentracin de la(s) especie(s) que
absorbe(n) y a la longitud de la trayectoria de la muestra para un conjunto de
condiciones instrumentales establecidas.
Si = Log (I0/I) donde: = absorbancia entonces T = (I/ I0) donde: T =
transmitancia, entonces:
= -Log T
El intervalo de longitudes de onda consideradas
espectrofotometra de ultravioleta-visible son:

para

la

tcnica

de

De 190 a 326 nm longitud de onda de la radiacin generada por lmpara de

deuterio para la regin de ultravioleta.
De 326 a 1100 nm longitud de onda de la radiacin generada por lmpara
de tungsteno para la regin del visible.

Equipos de medicin utilizados.

Los equipos comnmente utilizados en las tcnicas analticas de
espectrofotometra son los espectrofotmetros y los fotocolormetros o fotmetros.
Los espectrofotmetros son equipos que tienen en su sistema un monocromador
que permite la seleccin de la longitud de onda con una alta resolucin. Un
fotocolormetro a diferencia del espectrofotmetro utiliza slo sistemas de filtros
para seleccionar un intervalo de longitudes de onda con una menor resolucin que
el espectrofotmetro.
Los componentes principales de un espectrofotmetro se muestran en la figura

componentes del espectrofotmetro

Introduccin de la muestra
Existen varias formas para introducir la muestra al espectrofotmetro ultravioletavisible, entre las ms usadas se encuentran:
Manual: Para esta operacin son utilizadas celdas de vidrio o de cuarzo
(dependiendo de la longitud de onda que indica el mtodo) donde se coloca la
muestra y sta a su vez se introduce en un compartimiento especfico del
espectrofotmetro. El espesor de las celdas utilizadas comnmente es de 1 cm,
sin embargo, es factible contar con espesores hasta de 10 cm de espesor,
teniendo influencia directa en la cantidad de luz absorbida por la muestra.

Flujo continuo: Los espectrofotmetros tambin cuentan con bombas peristlticas

para la inyeccin de flujo continuo de muestras, sin embargo, stas slo son para
facilitar la introduccin de la muestra que finalmente llega a una celda de vidrio o
cuarzo que podr tener caractersticas similares a las mencionadas en el prrafo
anterior.
Anlisis cuantitativo
Cuando la absorbancia de soluciones estndar de concentracin conocida del
elemento a determinar se grafica versus la concentracin, se obtiene una curva de
calibracin. La curva as obtenida es generalmente lineal a bajas concentraciones
y la concentracin de la muestra puede ser determinada por interpolacin de su
absorbancia en la curva de calibracin. Para emplear este mtodo de anlisis
cuantitativo, la composicin de las soluciones estndar deben ser preparadas lo
ms semejante posible a la composicin de la muestra para compensar o eliminar
interferencias.
Curvas de calibracin.
Entre las caractersticas definidas para un mtodo analtico est su linealidad,
definida como la habilidad de un mtodo analtico para entregar resultados
proporcionales a la concentracin de un analito en un rango especfico. Solo
algunas veces, los procedimientos analticos propuestos llegan a proponer los
datos de una curva de calibracin tpica, pero en todos los casos la informacin es

suficiente para definir las concentraciones de las soluciones a preparar para

obtener la curva de calibracin [16].
Un primer objetivo en la implementacin y validacin de un mtodo analtico es
verificar el comportamiento del sistema en el laboratorio propio, para ello se
construye una curva de calibracin con un mnimo de cinco puntos, para un
intervalo de confianza del 95%, un ptimo de siete puntos, para un intervalo de
confianza del 95%, y un mximo de ocho puntos, para un intervalo de confianza
del 99%. La validacin y revalidacin, por lo tanto de una curva de calibracin tan
estricta como la descrita, se lleva a cabo durante la implementacin del mtodo o
cuando alguna condicin analtica cambia, o dependiendo de los requerimientos y
condiciones del mtodo.