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- Produccin de metabolitos
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Fotosntesi
Va pentosas
Eritrosa-4-P
Acido shikmico
Triptofano
CO2 +H2O
Carbohidratos
Gluclisis
Fosfoenolpiruvato
Alcaloides
indlicos
Acido pirvico
Acetil-CoA
Prolina
Fenilalanina
Ciclo
Alcaloides
pirrlicos
Acido trpico
Acido cinmico
Fenilpropanoides
Alcaloides del
tropano
Flavonoides
Ligninas
Polictidos
Taninos
Fenoles
Ornitina
Malonil-CoA
Acidos grasos
Poliacetilenos
Glucsidos
Acido mevalnico
Terpenoides
Esteroides
Carotenoides
Figura 4.- Principales interrelaciones entre metabolismo primario y secundario de las clulas
vegetales (Adaptado de Robert et al., 1991; Paniego, 1995).
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Tabla 3.- Metabolitos secundarios producidos por cultivos in vitro de clulas vegetales (Fowler &
Stafford, 1992; Giulietti & Ertola, 1999)
Compuestos qumicos
Producto
Especie vegetal
Catarantina, Ajmalicina
Catharanthus roseus
Quinamina
Cinchona spp.
Isoquinlicos
Berberinas
Berberis spp.
Piridnicos
Nicotina
Nicotiana tabacum
Hyosciamina,
Hyoscyamus tuberosum
Escopolamina
Cafena
Coffea arabica
Anetol
Pimpinella anisum
Paniculina
Andrographis paniculata
Artemisina
Tiofenos
Diosgenina
Dioscorea deltoidea
Ginsensidos
Antocianinas
Vitis vinifera
Varios
Galium mollugo
7-metilpurpurina
Naftoquinonas
Shikonina
Lithospermum erythrorhizon
Lignanos
Etoposido
Alcaloides
Indlicos
Tropnicos
Purnicos
Otros
Monoterpenos
Sesquiterpenos
Poliacetilenos
Esteroides
Flavonoides
Antraquinonas
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Compuesto
Aplicacin potencial
Alcaloide
Armorina
Stephania cepharantha
Alcaloide
Norcefaradiona
Stephania cepharantha
Alcaloide
Rauglucin
Alcaloide
Epcrosina
Alcaloide
N-metilajmalina
Anti-hipertensivo
Catharanthus roseus
Alcaloide
Ajmalicina
Anticido
Beberis stolonifera
Alcaloide
Pseudoindoxil-ajmalicina
Cardiotnico
Daucus carota
Terpenoide
Dihomovalerato
Valeriana wallichii
Terpenoide
Paniculina A
Andrographis paniculata
Terpenoide
Honokiol
Thuja occidentalis
Terpenoide
Tarensido
Garenia jasminoides
Antraquinona
Lucidina
Morinda citrifolia
Fenilpropanoide
Rutacultina
Ruta graveolens
Fenilpropanoide
Podoverina
Podophyllum versipelle
Anti-hipertensivo
Especie vegetal
Rauwolfia serpentina
Ochrosia elliptica
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en hojas de plantas regeneradas in vitro fue semejante pero cuantitativamente menor que
la de hojas de plantas maduras (Apte et al., 1979).
El cultivo de callos de higo (Ficus carica) produce una peptidasa cistenica con
propiedades trmicas e hidrolticas similares a las que presenta la ficina comercial que
habitualmente se obtiene del ltex de higos inmaduros (Cormier et al., 1989). Tambin
producen peptidasas cistenicas los cultivos de tejidos de Carica papaya (papaya;
Medora et al., 1973) y Asclepias syriaca (hierba lechera; Knorr & Miazga, 1987).
Las clulas en suspensin de Phaseolus vulgaris producen peptidasas sernicas y
cistenicas, incrementndose la actividad cistenica al agregar cido giberlico al medio
de cultivo (Kim & Minamikawa, 1997).
Por otro lado, las peptidasas obtenidas en cultivo de suspensiones celulares de
Cynara cardunculus L. muestran una gran heterogeneidad y propiedades diferentes que
las enzimas de las flores (Cordeiro et al., 1993) mientras que la actividad proteoltica
observada por Tamer & Mavituna (1996) en cultivos de callos y suspensiones celulares
de Onoprodum turcicum fue mayor que la observada en hojas y semillas de la planta.
transformacin
mediada
por
Agrobacterium
spp.
bombardeo
de
micropartculas recubiertas con ADN. Con cualquiera de estas tcnicas, fragmentos del
ADN extrao pueden insertarse en el genoma vegetal, habindose demostrado que las
plantas expresan, arman, pliegan y modifican postranscripcionalmente protenas extraas
con alta fidelidad. Los avances en la biologa molecular de plantas y el uso de stas como
biorreactores permiten la produccin de protenas recombinantes que incrementan la
resistencia a los patgenos o mejoran la calidad nutricional de las plantas transgnicas.
Adems puede inducirse la produccin de polipptidos de uso tcnico o farmacetico
(Hammond, 1999; Herbers & Sonnewald, 1999; Doran, 2000).
Las plantas insecticidas se han obtenido por la expresin de la -endotoxina de
Bacillus thuringiensis, de -amilasa, de polifenol oxidasas, de quitinasas y de inhibidores
de peptidasas que interfieren en el metabolismo de los insectos. Una de las ventajas de
esta metodologa sobre la clsica pulverizacin de insecticidas es que slo sern
afectados los insectos que ataquen el cultivo, no siendo perjudicados los insectos
involucrados en la polinizacin de estas especies (Hammond, 1999; Herbers &
Sonnewald, 1999).
La estrategia ms utilizada para introducir resistencia a los virus es la que
involucra la expresin del gen que codifica la protena de cubierta de algunos virus y en
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este sentido se han transformado la papa, el arroz, la papaya, el tabaco y el frijol. Otros
procedimientos que resultan efectivos contra algunas virosis utilizan ARN antisentido,
genes no virales y protenas inactivantes de los ribosomas (RIPs) (Hammond, 1999;
Herbers & Sonnewald, 1999).
La resistencia a bacterias y a hongos patgenos se induce generalmente
interfiriendo con la integridad de la pared celular o de la membrana del patgeno. As,
mediante la expresin de protenas antifngicas (quitinasas y -1,3-glucanasas) se puede
incrementar la resistencia de las plantas a ciertos hongos (Gil Daz et al., 1998;
Hammond, 1999).
Las plantas resistentes a herbicidas se han logrado mediante la expresin de
enzimas que reducen los efectos txicos de esos productos qumicos, por la
sobreexpresin de las enzimas sensibles al herbicida o a travs de la expresin de
enzimas mutadas insensibles al mismo (Gil Daz et al., 1998). As, Mannerlf et al. (1997)
obtuvieron plantas transgnicas de Beta vulgaris L. tolerantes al glifosato (herbicida de
amplio espectro) utilizando genes de bacterias que degradan el glifosato a productos no
txicos para la planta.
Nuevas protenas con alto contenido de los aminocidos metionina y lisina se han
expresado en semillas transgnicas con la finalidad de mejorar la calidad nutricional de
las plantas. Para ello se han seguido dos tipos de estrategias: 1) expresin de protenas
con alto contenido de metionina y/o lisina por modificacin de la estructura primaria de la
protena endgena y 2) expresin heterloga de protenas ricas en dichos aminocidos.
Por ejemplo, para incrementar el contenido de metionina de la papa se utiliz el cADN de
un mutante rico en metionina de la albmina 2S de nuez (Herbers & Sonnewald, 1999).
Las enzimas de uso industrial producidas por plantas transformadas son
principalmente aquellas que degradan la pared celular, el almidn y el fitato (Tabla 5). Las
hidrolasas de la pared celular juegan un importante rol en la industria alimentaria, del
papel, de la madera y de las bebidas. La -amilasa es usada principalmente en la
manufactura de alimentos y detergentes y el fitato, principal forma de almacenamiento del
fsforo en las plantas, necesita ser hidrolizado por fitasas para incrementar el valor
nutricional de los alimentos para animales monogstricos.
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Tabla 5.- Enzimas de uso industrial producidas en plantas transformadas estables (Herbers &
Sonnewald, 1999)
Enzima
Planta
-amilasa
Bacillus licheniformis
Tabaco
Fitasa
Aspergillus niger
Tabaco
Fitasa
Aspergillus niger
Soja
(1,3-1,4) glucanasa
Ruminococcus flavefaciens
Tabaco
(1,3-1,4) glucanasa
Bacillus amyloliquefaciens
Bacillus macerans
Cebada
(1,4) xilanasa
Clostridium thermocellum
Tabaco
(1,4) xilanasa
Ruminococcus flavefaciens
Tabaco
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comparar con la produccin por cultivos microbianos, con cultivos de clulas animales y
con la extraccin desde tejidos animales, la principal ventaja reside en la seguridad
sanitaria de estos medicamentos, pues las plantas no son hospedantes de la mayora de
los patgenos humanos que se transmiten por sangre o por tejidos animales, como el HIV
o los priones responsables de la encefalopata espongiforme (Cramer et al., 1999).
Tabla 6.- Produccin de protenas terapeticas en plantas transgnicas (Cramer et al., 1999)
Planta
Actividad funcional
Producto transgnico
Uso potencial
Hemoglobina ( y )
Sustituto sanguneo
Tabaco
S (une O2/CO2)
Sustituto sanguneo
Papa
NT
Anticoagulante
Tabaco
NT
Albmina srica
humana
Protena C
-interferon
-interferon
GM-CSF
Proteccin viral y
anticancergeno
Activacin de fagocitos
husped
S (ensayo de
Arroz
resistencia viral)
Tabaco
S (ensayos in vitro)
Leucopoyesis en transplante de
mdula sea, quimioterapia del
Tabaco
S (estimula el
crecimiento de clulas)
Factor de crecimiento
epidrmico
Mitgeno
Tabaco
NT
-galactosidasa
Enfermedad de Fabry
Tabaco
S (actividad enzimtica)
Glucocerebrosidasa
Enfermedad de Gaucher
Tabaco
S (actividad enzimtica)
Casena
Nutricin
Papa
NT
Hirudina
Anticoagulante
Canola
NP1 defensina
Antibitico
Tabaco
S (actividad antibitica)
Eritropoyetina
Mitgeno hematopoytico
Tabaco
No
Diabetes
Tabaco
S (en ratn)
Glutamato
descarboxilasa
S (inhibicin de
trombina)
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5.2.4. Elicitacin
La elicitacin consiste en inducir la biosntesis de metabolitos por exposicin de los
cultivos a molculas capaces de causarle una situacin de estrs. Esta presencia
determina la expresin de genes asociados con las enzimas catalizadoras de diferentes
vas metablicas (Roberts & Shuler, 1997). Los elicitores se agrupan en dos clases:
biticos y abiticos. Entre los elicitores biticos se encuentran micelios y componentes de
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5.2.6. Biotransformaciones
Las clulas vegetales en cultivo in vitro pueden biotransformar un determinado sustrato
en un producto deseable. Los compuestos qumicos que se transforman son variables e
incluyen alcaloides, esteroides, cumarinas y terpenoides que pueden ser oxidados,
reducidos, metilados, acetilados y/o esterificados, entre otras reacciones. Los productos
no necesariamente tienen que ser los intermediarios naturales en el metabolismo vegetal
(Williams & Mavituna, 1992).
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como
as
tambin
para
sustancias
que
se
producen
en
bajas