2.

SIMBIOSIS MICORRZICA
recubren las races laterales (manto fngico)
y que al penetrar la epidermis, entre las
clulas corticales, el micelio crece de tal
forma que forma una extensa red de hifas
denominada red de Hartig (Figura 17). As, el
micelio que esta fuera de la raz contribuye
en la absorcin de agua y nutrimentos a partir
del suelo, los cuales son dirigidos hacia el
interior de la raz, de forma que la planta los
aprovecha en forma ms eficiente(FerreraCerrato, 1993). A su vez, los hongos
ectomicorrzicos, a travs de su micelio
externo, pueden llegar a generar cuerpos
fructferos (Figura 18), tanto en la superficie
del suelo como subterrneos (Figura 19 y
20), que contienen esporas microscpicas
responsables de la propagacin de los
hongos. Estos cuerpos fructferos llamados
tambin carpforos pueden ser utilizados
para la identificacin de las diversas especies
de hongos ectomicorrzicos que se pueden
encontrar en un sistema forestal, adems de
servir como fuente de inculo para aplicar a
plantas o para aislar los hongos mediante
tcnicas de cultivo in vitro en laboratorio.

2.1. Definicin
La simbiosis se define como la relacin de
dos o ms organismos que viven juntos, con
base en esto se pueden encontrar dos
principales tipos de simbiosis: 1) parastica,
en la que un organismo toma de otro los
compuestos necesarios para vivir, pudiendo
producir daos severos y muerte del otro
organismo y, 2) mutualista, en la que los
organismos involucrados obtienen beneficios
mutuos. Por otra parte, el trmino micorriza
(Mykes= Hongo y Rhiza= Raz) se define
como una estructura especializada que se
forma por la asociacin de un grupo
especfico de hongos con las races de las
plantas y cuya funcin repercute en
beneficios nutrimentales y fisiolgicos para
ambos organismos. De esta forma se
constituye una simbiosis mutualista entre
ambos componentes.

2.2. Tipos de micorriza

En la naturaleza existen seis tipos bien
diferenciados de micorriza y su distribucin
esta influenciada por aspectos ecolgicos
relacionados con el clima, disponibilidad
nutrimental y especificidad hacia algunas
familias de plantas. En si, los dos tipos de
micorriza ms importantes desde el punto
vista forestal, agrcola, frutcola y hortcola
son: 1) la ectomicorriza y 2) la endomicorriza
arbuscular( Ferrera-Cerrato y Alarcn 2001).

La ectomicorriza es una simbiosis obligada,

es decir, la planta de pino o cualquier
confera, no es capaz de crecer si no es
colonizada por los hongos formadores de
esta estructura. A pesar de encontrarse en la
naturaleza ms de 1500 especies de hongos
formadores de ectomicorriza que estn
incluidos en diferentes grupos. En el cuadro 5
se
aprecian
las
principales
Clases
taxonmicas, Familias y Gneros en los que
se encuentran los hongos ectomicorrzicos.
stos hongos presentan cierta especificidad
hacia rboles tanto de clima templado como
tropicales. En los cuadros 6 y 7 se muestran
los gneros tpicos de micobiontes y
fitobiontes tanto de clima templado como
tropical
que
establecen
simbiosis
ectomicorrzica.

2.3. Caractersticas morfolgicas de la

ectomicorriza
La ectomicorriza que se forma en las races,
es posible observarla a simple vista y se
pueden encontrar diferentes formas que van
desde una estructura simple, bifurcada,
coraloide hasta pinnada (Figura 16), mismas
que se pueden caracterizar por el color que
presentan. En la ectomicorriza, el micelio de
los hongos formadores de esta estructura,

33

a)

b)

c)

d)

e)

f)

Figura 16.

Estructuras ectomicorrzicas macroscpicas: a) Digitiforme (Cenoccocum geophylum); b)

Bifurcada (Pisolithus tinctorius-Pinus radiata); c) Policotmica (Pseudotsuga sp.); d)
Bifurcada con presencia de rizomorfas (Flecha, Pisolithus tinctorius-Pinus radiata); e)
Morfologa tpica microscpica de las hifas de P. tinctorius mostrando fbulas; f) Formacin
incipiente de cuerpos fructferos de P. tinctorius en el cepelln de P. radiata.

34

a)

Manto Fngico

Red de Hartig
Clulas corticales

b)

Figura 17.

Caractersticas macromorfolgicas de las estructuras internas y externas de la simbiosis

ectomicorrzica en el sistema radical de pinaceas y conferas. a) Diagrama esquemtico de
la colonizacin y b) estructuras fngicas internas de la raz

35

a)

c)

b)

Figura 18.

Caractersticas morfolgicas externas de la simbiosis ectomicorrzica establecida en el

sistema radical de pinceas. a) Colonizacin del sistema radical con estructuras
ectomicorrzicas (Flechas) dicotmicas (bifurcadas); b) Cuerpo fructfero (Flechas) de
Telephora terrestris en Pinus hartwegii; c) Cuerpo fructfero (Flechas) de Laccaria sp. en
Pinus hartwegii.

a)

c)

b)

d)

Figura 19. Morfologa de algunos cuerpos fructferos (carpforos) epigeos de hongos formadores de
ectomicorriza del bosque del Cofre de Perote, Mxico. a) Laccaria laccata, b) Amanita
cesarea, c) Russula sp. y d) Boletus sp.

36

Cuadro 5. Taxas de hongos ectomicorrzicos y ectendomicorrizicos. H= Hongos Hipogeos, E= Hongos

epigeos, G =Globosos (Puffballs), Gneros con un asterisco indican que tienen muchas
especies no micorrzicas (Brundrett et al., 1996).
CLASE/FAMILIA
HYPHOMYCETES
ZYGOMYCETES
Endogonaceae
ASCOMYCETES
Ascobolaceae
Balsamiaceae
Elaphomycetaceae
Geneaceae
Geoglossaceae
Helvellaceae
Pezizaceae
Pyronemataceae

Sarcoscyphaceae
Terfeziaceae
Tuberaceae
BASIDOMYCETES
Amanitaceae
Astraeaceae
Boletaceae

Cantharellaceae
Chondrogastraceae
Clavariaceae
Corticiaceae
Cortinariaceae

Cribbiaceae
Entolomataceae
Elasmomycetaceae
Gelopellidaceae
Gomphaceae
Gomphidiaceae
Hydnaceae
Hygrophoraceae
Hysterangiaceae
Leucogastraceae
Lycoperdaceae
Melanogastraceae
Mesophelliaceae
Octavianinaceae
Paxillaceae
Pisolithaceae
Polyporaceae
Russulaceae
Sclerodermataceae
Sedeculaceae
Stephanosporaceae
Strobilomycetaceae
Thelephoraceae
Tricholomataceae

GNERO
Cenococcum,etc
Endogone, Sclerogone

TIPO
Conidial
H

Sphaerosoma
Balsamia, Picoa
Elaphomyces
Genea,Geneaba
Geoglossum*, Leotia*,Trichoglossum
Gyromitra, Helvella
Barssia, Fischerula, Gymnohydnotrya, Mycoclelandia
Aleuria*, Peziza*, Phillipsa*, Pulvinia, Sarcosphaera
Amylascus, Hydnotryopsis, Muciturbo, Pachyphloeus, Peziza, Ruhlandiella
Geopora, Humaria, jafneadelphus*, Lamprospora* Sphaerosporella,
Trichophaea, Wilcoxina
Choiromyces, Dingleya, Elderia, Geopora, Hydnobolites, Hydnocystis,
Labyrinthomyces, Paurocotys Reddellomyces, Sphaerosporella, Stephensia
Plectania*,Pseudoplectania*, Sarcocypha*
Choiromyces, Terfezia
Mukagomyces, Paradoxa, Tuber

H
H
H
H
E
E
H
E
H
E
H
E
H
H

Amanita, Limacella
Torrendia
Astraeus
Pyrenogaster, Radiigera
Astroboletus, Boletellus*, Boletochaete, Boletus, Buchwaldoboletus*,
Chalciporus, Fistulinella, Gyrodon, Gyroporus, heimiella, Leccinum, Phlebopus,
Pulveroboletus, Rubinoboletus, Suillus, Tylopilus, Xanthoconium
Alpova Boughera, Chamonixia, gastroboletus, Rhizopogon, Royoungia
Truncocolumella

E
H
E
H
E

Cantharellus, Craterellus
Chondrogaster
Apelara, Clavaria, Clavariadelphus, Clavicorona, Clavulina, Clavulinopsis,
Ramaria, Ramariopsis
Amphinema, Byssocorticium, Byssosporia, Piloderma, etc.
Astroporina, Cortinarius, Cuphocybe, dermocybe*, Descolea, Hebeloma,
Inocybe, Leucocortinarius, Rozites, Stephanopus, etc.
Cortinarius, Cortinomyces, Descomyces, Destuntzia, Hymenogaster
Quadrispora, Setchelliogaster, Thaxterogaster, Timgrovea
Cribbea, Mycolevis
Clitopilus, Entoloma, Leptonia, Rhodocybe*
Rhodogaster, Richoniella
Elasmomyces, Gymnomyces, Martellia, Zelleromyces
Gelopellis
Gomphus
Chroogomphus, Cystogomphus, Gomphidius
Bankera, Dentinum, Hydnellum, Hydnum, Phellodon
Bertrandia* Camarophyllus, Gliphorus, Humidicutis*, Hygrocybe,
Hygrophorus*, etc.
Hysterangium, Pseudohysterangium, Trappea
Leucogaster, Leucophleps
Lycoperdon*
Melanogaster
Castoreum, Diploderma, Gummiglobus, Malajczukia, Mesophellia,
Nothocastoreum
Octavianina, Sclerogaster
Paxillus
Pisolithus
Albatrellus
Lactarius, Russula
Archangeliella, Cystangium, Macowanites
Scleroderma
Horakiella, Scleroderma

E
H

Sedecula
Stephanospora
Strobilomyces
Austrogautieria, Chamonixia, Gautieria, Wakefieldia
Boletopsis, Thelephora
Clitocybe*, Cystoderma*, Cantharellula, Catathelasma, laccaria, Lepista
Leucopaxillus, tricholoma, Tricholomopsis*
Gigasperma, Hydnangium, Podohydnangium

37

H
H

E
E
E
H
H
E
H
H
H
E
E
E
E
H
H
G
H
H
E
G
E
E
H
G
H
H
H
E
H
E
E
H

Cuadro 6. Gneros tpicos de hongos (micobiontes) y plantas (fitobiontes) de zonas templadas que
establecen simbiosis del tipo ectomicorrzica (Tomado de Prez-Moreno, 1998).

Divisin taxonmica y Micobiontes

Fitobiontes

Basiodiomycotina

Abies, Alnus, Betula, Corylus, Eucalyptus,

Fagus,
Larix,
Picea,
Pinus,
Populus,
Pseudotsuga, Quercus, Salix y Tsuga

Alpova, Amanita, Astraeus, Boletus,

Cantharellus, Cortinarius, Entoloma,
Gastroboletus, Gautieria, Gomphidius,
Hebeloma, Hygrophorus,
Hymenogaster, Hysterangium,
Inocybe, Laccaria, Lactarius,
Leccinum, Lycoperdon, Martellia,
Paxillus, Pisolithus, Rhizopogon,
Rozites, Russula, Scleroderma,
Suillus, Tylopilus, Tricholoma,
Xerocomus

Ascomycotina

Abies, Alnus, Betula, Corylus, Eucalyptus,

Fagus,
Larix,
Picea,
Pinus,
Populus,
Pseudotsuga, Quercus, Salix y Tsuga

Balsamia, Elaphomyces, Genea,

Geopora, Helvella, Hydnotria,
Sphaerosporela, Tuber

Zygomycotina

Eucalyptus, Pinus, Pseudotsuga

Endogone

Deuteromycotina

Abies, Larix, Pinus, Polygonum, Pseudotsuga

Cenococcum

38

Cuadro 7. Gneros tpicos de hongos (micobiontes) y plantas (fitobiontes) de zonas tropicales que
establecen simbiosis del tipo ectomicorrzica (Tomado de Prez-Moreno, 1998).

Micobiontes

Familias y gneros de fitobiontes

Leguminoseae (Fabaceae)

Acacia, Afzelia, Aldinia, Anthonota,

Aphanocalyx, Berlinia, Brachystegia,
Didolotia, Inga, Instia, Isoberlinia,
Julbernarlia, Macrolobium, Microberlinia,
Monopetalanthus, Pericopsis,
Tetraberlinia
Casuarinaceae

Casuarina, Allocasuarina

Amanita, Cantharellus, Gyrodon, Gyroporus,

Inocybe, Lactarius, Porphyrellus, Russulla,
Scleroderma, Sclerogaster, Strobilomyces,
Xerocomus

Amanita, Elaphomyces, Hysterangium,

Laccaria, Paxilus, Pisolithus, Scleroderma,
Telephora
Agaricus,
Telephora,
Amanita,
Boletus,
Cantharelus, Geastrum, Lactarius, Russula,
Scleroderma

Dipterocarpaceae

Anisoptera, Dipeterocarpus,
Dryobalanoptus, Hopea, Marquesia,
Monotes, Sghorea, Vateria

Amanita, Austrogauteria, Cantharelus, Coltricia,

Elasmomyces, Lactarius, Pulveroboletus,
Russula, Scleroderma, Tubosaeta, Xerocomus

Euphorbiaceae

Uapaca

Nr

Fabaceae

Castaneopsis,
Pasania

Quercus,

Lithocarpus,

Nr

Gnetaceae

Gnetum

Cenoccocum, Pisolithus, Scleroderma

Myrtaceae

Campomanesia, Eucalyptus, Eugenia,

Melaleuca, Tristania

Nr

Nyctaginaceae

Neea, Pisonia, Torrubia

Cantharellus

Polygonaceae

Coccoloba

Amanita,
Boletus,
Coltricia,
Gyroporus,
Hebeloma,
Lycoperdon,
Pisolithus,
Rhizopogon, Scleroderma, Suillus, Telephora,
Tylopirus

Pinaceae

Pinus

Nr

Proteaceae

Faurea

Nr

Sapotaceae

Glycoxylon

Nr

Sapindaceae

Allophylhis, Nephelium

Nr= Hongos no reportados para estos gneros de plantas

39

Pileo(sombrero)
Margen

Lminas conteniendo esporas

Estpite

Volva

Micelio

Figura 20.

Partes tpicas que integran al cuerpo fructfero (carpforo) de Amanita muscaria que forma
ectomicorriza con: Abies alba. A. procera, Larix decidua, L. occidentalis, Picea abies, P.
sitchensis, P. banksiana, P. cembra, P. ponderosa, P. radiata, Pseudotsuga menziesii,
Tsuga heterophylla, Arbutus menziesii, Betula alba, Eucalyptus camaldulensis, Fagus
sylvatica, Populus tremula x tremuliodes, Quercus sp., Tilia europaea, entre otros (Yang et
al., 1999).

propagacin de los hongos, stas son las

esporas que pueden estar libres o agrupadas
(Declerck et al., 2000). Una vez que alguna
hifa del hongo penetra la raz, sta crece a lo
largo del tejido radical y llega a formar
estructuras tpicas de esta simbiosis (Figura
21b y c): 1) Hifas inter e intrarcelulares, 2)
Arbsculos que facilitan en intercambio
bidireccional de nutrimentos entre hongoplanta (Bago et al., 2000b), 3) Vesculas, que
almacenan reservas para el hongo, 4)
Enrrollamientos hifales y, 5) Esporas simples
o esporocrpicas en el suelo, pero algunas
especies pueden esporular dentro de la raz
(Figura 21d).

2.4. Caractersticas morfolgicas de la

micorriza arbuscular
A diferencia de la ectomicorriza, los hongos
micorrzicos arbusculares no producen
cambios visibles en la morfologa de la raz
de sus hospedantes. Su presencia puede ser
detectada
mediante
observaciones
al
microscopio ptico. En el suelo, los hongos
formadores de esta simbiosis presentan una
extensa red de hifas que favorecen la
absorcin de nutrimentos y agua (Bago et al.,
1998, 2000a), permitiendo que la raz posea
un mecanismo alterno que explore mayor
volumen de suelo. Este micelio puede formar
estructuras microscpicas que favorecen la

40

a)

b)

c)

d)

Figura 21.

Morfologa de la colonizacin de hongos micorrzicos arbusculares en el sistema radical de

las plantas: a) raz no colonizada, b) raz colonizada con hifas intrarradicales y arbsculos
(flechas), c) vesculas y micelio intrarradical y d) formacin de esporas dentro de la raz (en
algunos gneros).

obligados) (Bago et al., 2000b), por lo que

para propagarlos con xito, se requiere del
uso de plantas trampa (Morton 1990;
Gonzlez-Chvez, 1993. El reto del uso de
estos hongos en la agricultura o en la
dasonoma como inoculante, implica la
creacin de sistemas de produccin de
inculo eficientes que satisfagan los
requerimientos de los viveros (Alarcn y
Ferrera-Cerrato 1999; Ferrera-Cerrato y

En contraste con los hongos ectomicorrzicos,

los hongos formadores de micorriza
arbuscular conocidos hasta la fecha no
sobrepasan las 150 especies (Walker y
Trappe, 1993) y estn agrupados dentro del
orden de los Glomales, el cual esta
conformado por siete gneros (Morton y
Redecker, 2001). Sin embargo, estos hongos
pueden establecerse en el sistema radical de
aproximadamente 85% de las especies
vegetales que han sido identificadas y se
cree que stos fueron determinantes en la
capacidad de adaptacin de las plantas en el
ecosistema terrestre ( Malloch et al., 1980.,
Taylor et al., 1995).

Alarcn 2001).

Los hongos micorrzicos arbusculares se

consideran como simbiontes obligados y
requieren nutrirse de una raz viva (biotrofos
41

Este procedimiento permite obtener cepas

puras que sern ensayadas en los diferentes
hospedantes, para conocer su grado de
micorrizacin y efecto en el desarrollo de las
plantas. Otra fuente de inculo importante,
son las esporas contenidas en los cuerpos
fructferos, mismas que pueden ser
inoculadas directamente en el sustrato como
se ha hecho con las esporas de hongos como
Pisolithus, Scleroderma, Rhizopogon y Tuber.

2.5. Definicin de inoculante

Como inoculante debe entenderse a aquel
producto biolgico que facilita la introduccin
de microorganismos con diversa actividad
fisiolgica que favorece el crecimiento y
desarrollo de las plantas. Este inoculante
puede presentar diferentes aspectos fsicos,
ya sea lquidos o slidos en los que se
utilizan acarreadores como la turba, el carbn
activado, aceites, alginatos y otros soportes
orgnicos e inorgnicos. De este modo, el
inoculante puede ser manejado con el fin de
establecer los microorganismos en las hojas,
tallo o races para establecerlos en los
diversos sistemas de produccin agrcola,
hortcola, frutcola y forestal. En el caso de
los hongos micorrzicos el inoculantes puede
consistir de esporas, hifas, fragmentos de
cuerpos fructferos, races colonizadas y en
su caso suelo rizosfrico donde se detecte
una abundancia de hifas de hongos
micorrzicos provenientes de un sistema de
raz sano (Alarcn y Ferrera-Cerrato,1999).

Una forma tradicional de fuente de inoculo

muy utilizada, aunque no muy adecuada, se
basa en la colecta de suelo de monte, el cual
debe ser colectado de la rizsfera de plantas
sanas. Otra fuente de inoculo poco frecuente,
se refiere al uso de los cuerpos fructferos o
mezclas de ellos finamente fragmentados e
introducirlos como inoculo en el sustrato de
crecimiento de las plantas con fines de
inducir la micorrizacin.
A partir de las diferentes fuentes de
inoculantes, independientemente del tipo de
simbionte micorrzico, se procede al
seguimiento de la ruta biotecnolgica que se
presenta en la figura 22 y que a continuacin
se describe de manera general:

2.6. Fuentes de inoculante

En el caso de los hongos micorrzicos
arbusculares, la fuente inoculante proviene
del conjunto de hongos que estn asociados
a las races o que se encuentran en el suelo
rizosfrico de las plantas, ya sea en
ecosistemas
y
agroecosistemas.
Los
propgulos conocidos como esporas, son
separados y propagados en plantas trampa
mantenidas en invernadero, utilizando
sustratos estriles. Estos propgulos son
separados del suelo empleando la tcnica de
Gerdermann y Nicolson (1963), con el fin de
seleccionar aquellas cepas que tengan mayor
capacidad de micorrizacin a la vez de
favorecer el crecimiento de las plantas. Estas
esporas tambin sirven para realizar los
estudios taxonmicos correspondientes a los
hongos
involucrados
en
las
cepas(
Morton,1990).

Con base en un muestreo en campo y

extraccin de los diferentes propgulos
micorrzicos, se procede a su propagacin
y purificacin en plantas trampa o en
laboratorio a travs de medio de cultivo

Una
vez
purificadas
las
cepas
micorrzicas,
se
procede
a
su
identificacin taxonmica.
Paralelamente a la identificacin, se
realizan ensayos de seleccin basndose
en su capacidad de colonizacin y
promocin del crecimiento en los
hospedantes.
Una vez cumplidos los puntos anteriores,
se procede a una propagacin inicial para
estudios a nivel de invernadero y en
pequeas parcelas.
Con los resultados de vivero y pequeas
parcelas, se procede a realizar una
propagacin a nivel piloto, que consiste
en incrementar el volumen del inoculante
seleccionado en forma escalada.

Para los hongos ectomicorrzicos, una de las

fuentes de inoculo pueden ser los cuerpos
fructferos
colectados
en
ecosistemas
forestales, de los cuales se procede al
aislamiento del hongo en el laboratorio
(Ferrera-Cerrato,1993; Brundrett et al.,1996).

42

El inoculante producido en esta fase,

antes de ser empleado, tiene que cumplir
con controles de calidad, que consisten
en
la ausencia de patgenos, mantener la
capacidad de colonizacin y promocin
de crecimiento, supervivencia y vida de
anaquel. Un inoculante con estas
caractersticas puede ser empleado en
diferentes sistemas de propagacin de
plantas horto-frutcolas, forestales y
ornamentales, para evaluar su tolerancia
a ambientes adversos, as como
utilizarlos en diferentes sistemas de
produccin, en suelos marginales con
diferentes grados de perturbacin y
contaminacin.

Muestreo de
Campo

Estudios
ecolgicos

Ensayos en
suelos
marginales
Evaluacin de
colonizacin y
aislamiento de
esporas

Purificacin de
esporas

Ensayos en
plantas hortofrutcolas

Cultivo in vitro
Cultivos
trampa

Propagacin
piloto
(4 toneladas)

Uso en
viveros

Control de
calidad de
inoculante
producido:
Micorrizacin
Patologa

Identificacin
taxonmica

Pruebas de seleccin:
Infectividad versus
efectividad

Figura 22.

Ensayos especiales:
Componentes de
rendimiento,
Tolerancia a agentes
contaminantes, etc.

Sistemas de
propagacin
de plantas

Vivero de
plantas
forestales

Propagacin
inicial

Proceso biotecnolgico de la produccin de inoculantes a base de hongos micorrzicos

para uso en viveros hortcolas, frutcolas y forestales (Modificado de Alarcn, 2001).

43

2.7. Tipos de inoculante

Independientemente del sustrato en el que
se produzcan los inoculantes, stos pueden
ser producidos a partir de diversas
estructuras que son tpicas de los
microorganismos; en el caso de hongos
micorrzicos se pueden utilizar el micelio
que se encuentra en el suelo, races
colonizadas por hifas y esporas.
Para el caso especfico de hongos
micorrzicos arbusculares, las estructuras
mencionadas no son susceptibles de ser
propagadas
en
medios
de
cultivo
convencionales
(caldos
nutritivos,
fermentadores, etc.). Para este fin
se
requieren de condiciones especficas que
permitan su proliferacin tales como
sustratos orgnicos y/o inertes y presencia
de plantas vivas, as como la adicin de
soluciones nutritivas de modo que la
fisiologa tanto de la planta como del
microorganismo sean beneficiadas (Sylvia,
1999; Manjarrez et al., 2000) y poder as
obtener un inoculante de excelente calidad
en funcin de los propgulos que contiene.
Los inoculantes pueden ser elaborados
mediante el uso de diversos acarreadores
los cuales se clasifican en tres principales
categoras: 1) sustratos orgnicos: turba,

carbn activado, arcillas y suelo; 2) compostas

y vermicompostas obtenidas a partir de
estircoles de animales, aceites de soya y
cacahuate, fibra de trigo y otros desechos
vegetales; 3) materiales inertes: vermiculita,
zeolita, agrolita, roca fosfrica, sulfato de calcio
y alginatos.
2.7.1. Propgulos infectivos
Se considera como propgulo infectivo a aqul
que permita el crecimiento y proliferacin de los
microorganismos an y cuando se presenten
condiciones adversas tanto al momento de la
aplicacin como en los procesos de
elaboracin
de
los
inoculantes
y
almacenamiento de los mismos. En el caso
particular de los hongos micorrzicos, los
propgulos que deben ser considerados en la
evaluacin del control de calidad de los
inoculantes son la cuantificacin del micelio
externo (Figura 23a) que se presenta en el
suelo as como aquel que se encuentra
colonizando la regin cortical de la raz (Figura
23b). Otros propgulos de gran importancia por
ser estructuras de dispersin y supervivencia
de los hongos, son las esporas. En la figura 24,
se puede apreciar la diversidad morfolgica de
las esporas algunos gneros de hongos
micorrzicos arbusculares.

a)

b)

Figura 23. Propgulos infectivos de hongos micorrzicos arbusculares consistentes en: a) hifas externas
que se encuentran en el suelo y, b) hifas internas colonizando el sistema radical.

44

b)

a)

d)

c)

f)

e)

Figura 24.

Esporas tpicas de hongos micorrzicos arbusculares: a y b) Glomus sp.; c) Sclerocystis

sp.; d) Entrophospora infrequens, e) Gigaspora margarita y f) Acaulospora delicata.

45

2.8. Mtodos de
inoculantes

aplicacin

de

Dependiendo del tipo de inoculante, los

hongos micorrzicos, se pueden ser
inoculados en las diversas fases que
involucra la propagacin de plantas
(semillas, estacas, acodos e incluso
micropropagacin) tanto en almcigos
hortcolas, como en viveros de especies
frutales y forestales (Gonzlez-Chvez et
al., 1998; Alarcn y Ferrera-Cerrato, 1999).
A
continuacin
se
mencionan
las
principales formas de aplicacin de
inoculantes elaborados a partir de hongos
micorrzicos:
2.8.1. Inoculacin en semilleros
Con base a que la preparacin de
almcigos y semilleros requiere de la
manipulacin de poco sustrato, solo para el
llenado de los semilleros, la aplicacin de
inoculante micorrzico es factible de
utilizarse en estos sistemas. Es posible
mezclar inoculantes peletizados en turba o
en cualquier material utilizado como
sustrato antes de efectuar la siembra de las
semillas. Sin embargo, el uso de
inoculantes en semilleros debe considerar
el tipo de semilla a sembrar ya que semillas
de corto perodo de germinacin (especies
consideradas como hortalizas) con pocas
reservas en los cotiledones, permite que la
simbiosis se establezca en corto tiempo y
con ello su efecto benfico. Cuando se
utilizan semillas de largo tiempo de
germinacin, la viabilidad de los propgulos
de los hongos micorrzicos puede ser
alterada por el exceso de humedad que se
requiere para la germinacin. Por otra
parte, la mayora de las plntulas obtenidas
por semillas (de plantas de corte arbustivo o
leoso), mantienen por tiempo prolongado
sus cotiledones cuyas reservas propician en
mayor grado, el crecimiento de las plantas.
Esta caracterstica hace que los beneficios

de los hongos micorrzicos no se expresen o se

retarden ya que stos requieren de fuentes
carbonadas
procedentes
de
hojas
fotosintticamente activas.
2.8.2. Inoculacin
crecimiento

al

sustrato

de

Este mtodo representa facilidad de manejo

para el viverista. Sin embargo, se debe de
cuidar la proporcin inoculo sustrato y que al
menos debe de ser de un 50%, esto es fcil
lograrlo cuando empleamos esporas de los
hongos del grupo de los gasteromicetos (como
P. tinctorius). Las proporciones de inoculo
deben de mantenerse y vigilarse ya que este
tipo de aplicacin al romperse las proporciones
se expresara como baja micorrizacin o
ausencia. Es importante mencionar que en el
caso de los hongos endomicorrzicos es difcil
lograr grandes volmenes de inoculo
conteniendo un numero adecuado de esporas y
que un inoculo compuesto por pedazos de
races, hifas y esporas es el mas recomendable
debido a que en la mezcla del inoculo, el
sistema radical de la planta encontrara alguno
de estos elementos infectivos.
2.8.3. Inoculacin al transplante
Sin duda, este es el mtodo ms recomendado
para
aplicar
los
hongos
micorrzicos
(arbusculares y ectomicorrzicos). En el caso
de hongos micorrzicos arbusculares, la
aplicacin directa del inoculante en el sustrato,
en el agujero donde se transplantaran las
plntulas (Figura 25b y c) y sobre su sistema
radical, permite a los hongos mayor
probabilidad de establecerse y expresar sus
beneficios (Figura 25d y e) en corto tiempo (de
uno a cuatro meses, dependiendo de la
especie forestal o frutal de que se trate). En
funcin de la calidad del inoculante (cantidad
de propgulos contenidos) se puede aplicar
desde 1 a 15 g de inculo por planta.

46

a)

b)

c)

d)

Plantas inoculadas
Figura 25.

Forma de inoculacin de hongos micorrzicos arbusculares al momento del transplante. a)

semillero conteniendo las plntulas a inocular, b) inoculacin previa al transplante, c)
transplante de la plntula al agujero inoculado, d) expresin benfica en las plantas
inoculadas con HMA en portainjertos de ctricos injertados a los 310 das. Obsrvese el
escaso crecimiento de las plantas testigo (Flecha), a la misma edad.

obtenidas en el paso 1, con el fin de que

las races queden impregnadas con las
esporas del hongo ectomicorrzico a
inocular (Figura 26e y f). Despus de este
paso, las plntulas son transplantadas en
recipientes
nuevos
conteniendo
el
sustrato previamente fumigado con
productos qumicos o vaporizado con
vapor de agua (Figura 26g y h).

Para el caso de hongos ectomicorrzicos, la

inoculacin al momento del transplante es
factible mediante una suspensin de esporas
y en ella remojar las races de las plntulas
(Figura 26). A continuacin se describen los
pasos de este proceso:

Testigo

Se toma un recipiente limpio, previamente

desinfectado con alcohol, donde se vierte
una suspensin densa de esporas, la cual
se agita vigorosamente para tener una
mejor distribucin de las esporas (Figura
26a y b).
De un semillero, se toman plntulas de
aproximadamente 12-15 cm de altura,
segn la especie, y se procede a podar la
raz con el fin de evitar la deformacin
llamada cola de cochino (Figura 26c y
d).
Las plntulas una vez podadas, se
sumergen en la suspensin de esporas,

Tambin es posible generar inoculante a

partir de esporas, obtenidas directamente del
carpforo de algunos hongos altamente
productores de esporas como Scleroderma,
Rhizopogon o Pisolithus. Este proceso
consiste en liberar las esporas de los
carpforos y colectarlas en bolsas de plstico
desinfectadas y hacer observaciones al
microscopio para conocer el tipo de esporas
que se estn inoculando (Figura 27 a, b y c).
Una alternativa para inocular estas esporas
47

consiste en mezclarlas homogneamente, en

diferente proporcin, con el sustrato
previamente fumigado (Figura 26 d). Una vez
inoculado el sustrato, se coloca en los
diferentes recipientes utilizados en el vivero y
se procede al transplante.
Otra alternativa prctica de inoculacin,
consiste en tener las esporas de los hongos
micorrzicos en bolsas pequeas. Con una
estaca, clavo o lpiz, con el extremo
humedecido con agua, se introduce en el
interior de la bolsa para que se adhieran las
esporas (Figura 27e, f y g). El extremo
cargado con esporas (Figura 26g), se
introduce en el sustrato quedando un agujero
impregnado de stas, el cual recibir
posteriormente, las plntulas que quedarn
de esta forma inoculadas (Figura 27h).
Las tres metodologas de inoculacin
mencionadas, aseguran que las plntulas
crecern con el simbionte previamente
inoculado, propiciando con ello, los beneficios
de la simbiosis.

48

a)

b)

c)

d)

e)

f)

g)

h)

Figura 26.

Mtodo de inoculacin de plntulas de pino producidas en vivero con esporas de hongos

ectomicorrzicos (P. tinctorius) en suspensin. a y b) preparacin de la suspensin del
inoculante en agua; c, d, e y f) extraccin de la plntula, poda e impregnacin con el
inoculante; g y h) cama de transplante y transplante de plantas micorrizadas).

49

a)

b)

c)

d)

e)

f)

g)

h)

Figura 27. Inoculacin de plntulas de pinceas con esporas de hongos ectomicorrzicos. a)

Esporocarpos de Pisolithus tinctorius (Pt); b y c) esporas del hongo vistas al microscopio de
campo claro; d) mezcla de esporas con el sustrato; e) esporas de Pt ; f) impregnacin de
esporas de Pt mediante estacas (lpiz) antes del transplante; g) inoculacin de las esporas
en el sustrato; h) transplante en el sustrato inoculado. En cada caso obsrvese el color caf
de las esporas.

50

(Figura 28a y b). La suspensin y el proceso

de su dilucin en agua se calcula en 3,8 kg
en 10,000 litros de agua, la cual se hace
pasar por un inyector calibrado (Figura 28c)
que permita que se suspenda la solucin
inoculante hasta obtener una proporcin
1:200 y proceder a asperjar las plantas
(Figura 28d). Con esta solucin inoculante es
posible inocular 1,600,000 plantas. Con el fin
de garantizar que el inoculo salga
correctamente por el sistema de riego, se
colocan vasos de poliestireno en los que se
captura la solucin inoculante, la cual debe
tener la coloracin tpica de las esporas que
conforman al inoculante (Figura 28e).

2.8.4. Otras tcnicas de inoculacin

2.8.4.1. Inoculacin por riego
Es posible inocular hongos ectomicorrzicos
por sistemas de riego por aspersin o con
bomba
de
mochila.
Una
de
las
consideraciones ms importantes es que los
soportes del inoculo sean completamente
solubles en el agua, ya que de no ser as, el
sistema de riego por aspersin podra
obstruirse, por lo se debe tener cuidado en la
seleccin del inoculante a aplicar. Para
aplicar el inoculante en sistemas de
aspersin, se requiere que el producto se
homogenice con agua hasta obtener una
suspensin, lo ms uniformemente posible
a)

c)

b)

d)

Figura 28.

e)

Inoculacin con hongos ectomicorrzicos a plntulas de Abies mediante sistemas de riego

por aspersin: a y b) suspensin del inculo esporal de Pisolitus tinctorius en agua, c)
dilucin del inculo en bomba de agua calibrada, d) aspersin de la solucin inoculante en
las plantas y e) suspensin del inculo esporal recibida por el sistema de riego por
aspersin.

51

2.8.4.2. Inyeccin al suelo

La inyeccin al suelo de inoculantes de
hongos MA es factible mediante bombas de
aspersin especial (Tipo Confidor) y que se
pueda graduar. Esta bomba tiene un
estilete perforado en la punta, la cual se
introduce en el suelo (10-15 cm de
profundidad). En cada inyeccin es posible
aplicar de 800 a 2000 esporas y se debe
realizar varias inyecciones alrededor del
rbol. Este mismo procedimiento puede ser
utilizado
para
inocular
hongos
ectomicorrzicos en campo.
No obstante, la inyeccin de inoculante
micorrzico en campo puede tener como
desventaja la escasa competitividad de los
hongos micorrzicos al enfrentarse con
otros microorganismos presentes en ese
suelo. Adems, se debe de asegurar que
las esporas estn viables, aunque esto no
garantiza que la germinacin de ellas se
lleve a cabo, ni que la simbiosis se
establezca en las races. Bajo estas
condiciones de inoculacin, las esporas
pueden ser parasitadas muy rpidamente y
con esto evitar que la simbiosis se
establezca y sea funcional.

2.9.

Factores
que
afectan
la
efectividad de los inoculantes

La efectividad de un inoculante se refiere a

la capacidad de estimular el beneficio en la
planta inoculada, el cual se puede medir
con base a la promocin en altura, dimetro
de tallo y crecimiento, as como por la
calidad de planta producida(Lovato et al.,
1996; Davies et al., 2000a y b). Sin
embargo, existen diversos factores que
estn directamente involucrados en la
mayor expresin de la efectividad de los
inoculante en el vivero (Alarcn y FerreraCerrato 1999), los cuales se mencionarn a
continuacin.
2.9.1. Planta
El conocimiento de la especie vegetal que
se pretenda propagar es un aspecto
importante a considerar. Si bien la simbiosis
micorrzica se puede establecer en ms del

80% de las plantas conocidas, tambin es

cierto que algunas de ellas responden de
manera diferencial a la inoculacin de hongos
micorrzicos. Con base a lo anterior, es
importante realizar la caracterizacin de plantas
considerando la susceptibilidad a ser
colonizadas por estos hongos (plantas
micorrzicas) y el grado de respuesta a la
inoculacin (micotrofismo).
Estos aspectos, permiten predecir la posible
respuesta de las plantas a la inoculacin de
hongos micorrzicos. Gran parte de su
respuesta positiva se debe a la presencia de
sistemas radicales con limitacin para absorber
y aprovechar los nutrimentos contenidos en un
suelo o sustrato. Plantas con races con
escasos pelos radicales y del tipo magnoloide
(la mayora de los frutales, algunas
leguminosas,
especies
forestales,
principalmente) son altamente dependientes a
la actividad de los hongos. Por otra parte las
plantas con denso sistema radical y
abundantes races laterales y pelos radicales
(tipo graminoide) como maz, sorgo, trigo, etc.,
por lo que dependen menos de la simbiosis
micorrzica.
2.9.1.1. Micotrofa
Por micotrofa se debe entender el grado de
dependencia de las plantas en su crecimiento y
nutricin por la presencia de los hongos
micorrzicos establecidos en el sistema radical.
La micotrofa puede clasificarse en tres tipos:
(a) plantas no micotrficas, cuya su nutricin no
depende del establecimiento de los hongos
(crucferas, amarantceas, quenopodiaceas,
ciperceas, Lupinus albus) aunque si pueden
establecer una simbiosis efmera; (b) plantas
micotrficas facultativas, aquellas que tienen
mayor dependencia hacia los hongos de
acuerdo con la presencia (disponibilidad) o
limitacin de nutrimentos en el sustrato. Es
decir, existen plantas que si se encuentran
establecidas
en
sustratos
con
alta
disponibilidad de nutrimentos, stas son
capaces de aprovechar los nutrimentos an
cuando se hayan establecido los hongos
micorrzicos en la raz, pero si estas mismas
plantas se establecen en sustratos con
limitacin de nutrimentos, entonces la
respuesta y la dependencia hacia los hongos
52

son significativamente mayores. Las plantas

micotrficas obligadas (c) son aquellas que
requieren forzosamente del establecimiento
de la simbiosis micorrzica para poder as
satisfacer sus requerimientos nutrimentales
y
presentar
mayor
capacidad
de
crecimiento y mayor vigor, caso de
pinceas, Abies, Tsuga y Pseudotsuga,
principalmente
para
los
hongos
ectomicorrzicos y la mayora de las
especies frutales arbreas y algunas
forestales latifoliadas, para los hongos
micorrzicos arbusculares.
Con base en lo anterior, es necesario saber
qu tipo de micotrofismo presenta la planta
en propagacin en el vivero, de tal forma
que se plantee la inoculacin de hongos
micorrzicos arbusculares y se asegure el
xito de su aplicacin, la cual es afectada
por las practicas realizadas en el vivero.
2.9.1.2. Relacin infectividad
efectividad

versus

Otros conceptos que deben ser bien

comprendidos por el viverista que incluya la
inoculacin con hongos micorrzicos, son la
capacidad infectiva y efectiva de los
inoculantes. Como infectividad se entiende
la capacidad de los hongos de un
inoculante para establecerse en el sistema
radical de las plantas. La efectividad, por su
parte, se relaciona con la capacidad de los
hongos de un inoculante en promover el
crecimiento, sanidad y vigor de las plantas (
Ferrera-Cerrato y Gonzlez-Chvez 1998,
Sylvia, 1999; Alarcn y Ferrera-Cerrato,
1999) Cabe aclarar que estos dos
conceptos no estn correlacionados, es
decir, no necesariamente los hongos que se
establezcan abundantemente (80-90% de
colonizacin), en el sistema radical de las
plantas, pueden inducir mayores efectos, ya
que se pueden encontrar hongos que
colonicen la raz en menor proporcin (1540%) y muestren excelentes efectos en la
nutricin y crecimiento de las plantas. Con
esto se denota la importancia de utilizar
hongos cuya caracterstica principal sea
propiciar el mayor beneficio a la planta, en
cualquiera de las variables que se tengan
como objetivo, independientemente del

grado de colonizacin que estos hongos

presenten en el sistema radical. Con ello, es
posible determinar la dependencia micorrzica
de las plantas de un vivero, entendindose sta
como el grado de respuesta en crecimiento o
nutricin de las plantas por efecto de la
inoculacin de hongos micorrzicos (expresado
en porcentaje), en funcin de las caractersticas
de fertilidad de los sustratos en los que se
establezcan las plantas.
2.9.2. Sustrato
Como se mencion en el captulo de viverismo,
el sustrato de crecimiento para las plantas tiene
relevante importancia en funcin del contenido
nutrimental
y
caractersticas
fsicas
y
biolgicas. De esta misma forma, el sustrato es
fundamental
en
el
establecimiento
y
funcionalidad de la simbiosis micorrzica y para
que el efecto benfico de la simbiosis se
exprese, se requiere de la esterilizacin y/o
desinfeccin
(solarizacin,
fumigacin,
vaporizacin) del sustrato con el fin de evitar
posibles daos por la presencia de
microorganismos fitopatgenos que adems de
ser una fuente de diseminacin de
enfermedades tambin pueden influir en la
capacidad de los hongos micorrzicos de
colonizar el sistema radical. Mediante esta
sencilla prctica no solo se asegura que la
simbiosis se establezca y sea funcional sino
tambin se evita la proliferacin de
enfermedades de hbito radical que afectan la
sanidad, crecimiento y vigor de las plantas.
2.9.2.1. Caractersticas qumicas
Sin lugar a dudas, las caractersticas qumicas
de los sustratos utilizados en viveros son
fundamentales para abastecer de nutrimentos a
las plantas. Sin embargo, es necesario tener en
cuenta que sustratos altamente ricos en
materia orgnica y particularmente fsforo,
pueden inhibir la simbiosis micorrzica. Con
esto se trata de puntualizar que no
precisamente se requiere utilizar sustratos ricos
en nutrimentos (tanto orgnicos como
inorgnicos) como el suelo de monte (el uso
de este tipo de sustrato contribuye al proceso
de degradacin de sustratos de bosques por lo
que es necesario utilizar otras fuentes de
sustratos alternos), sino que es posible utilizar
53

sustratos con limitacin nutrimental de

modo que la simbiosis establecida funcione
adecuadamente en el aprovechamiento de
los nutrimentos existentes y que deben de
reflejarse en el buen desarrollo de las
plantas. No obstante, es importante conocer
algunos aspectos considerados como
adecuados en la literatura como el pH que
debe de ser 5.87.5, contenido de fsforo
disponible menor de 20 g g-1 de sustrato,
materia orgnica menor al 2.0% y tener una
conductividad elctrica o contenido de sales
menor a 1.0 dS m-1, que no slo afectan la
simbiosis, sino tambin a las plantas del
vivero.

2.9.3.1. Fertilizacin
La aplicacin de fertilizantes, particularmente
fosfatados, puede ser reducida cuando se
utilizan los inoculantes de hongos micorrzicos,
ya
que
los
hongos
favorecen
el
aprovechamiento ms eficiente de los
nutrimentos inorgnicos contenidos en el
sustrato. Adems, este beneficio de los hongos
permite utilizar en forma ms racionada los
fertilizantes y con ello reducir los costos de
produccin de plantas. Es posible utilizar
fertilizantes de liberacin lenta, de modo que
las plantas en simbiosis puedan aprovechar los
nutrimentos durante sus diferentes etapas
fenolgicas.

2.9.2.2. Composicin de mezclas

El sustrato debe tener caractersticas
adecuadas para el crecimiento de las
plantas (aireacin, retencin de humedad y
disponibilidad de nutrimentos). Con base a
esto, el uso de diversos materiales tanto
orgnicos como inorgnicos debe de
considerar la elaboracin de mezclas en
proporciones tales, que permitan a las
plantas crecer sin problemas. Como
materiales orgnicos que pueden ser
utilizados se tienen los productos derivados
del composteo y vermicomposteo, cachaza,
bonote de coco, etc. Sin embargo, estos
materiales son muy ricos en materia
orgnica y para tener un efecto benfico por
la simbiosis, se recomienda utilizar estos
productos en dosis menores al 12%.
Adems, es posible utilizar otros tipos de
sustratos, como los mencionados en el
captulo de viverismo, y con ello favorecer
la efectividad de la simbiosis micorrzica.

2.9.3.2. Aplicacin de biocidas

En la actualidad es posible encontrar diversos
productos de biocidas (plaguicidas) que se
venden comercialmente; de acuerdo a su
accin sobre organismos especficos se
pueden clasifican en insecticidas, nematicidas,
fungicidas y herbicidas. Todos ellos pueden
afectar diferencialmente a la simbiosis
micorrzica, de acuerdo con la susceptibilidad
de los hongos al ingrediente activo as como
por su modo de accin (sistmico o de
contacto). Aun cuando el uso de estos
productos es un aspecto importante de manejo
en el vivero, es mejor utilizarlos en menor
proporcin y en dosis adecuadas de modo que
con ello, se eviten problemas relacionados con
la disminucin de la efectividad de los hongos
micorrzicos as como evitar problemas de
contaminacin ambiental que se generan por
su aplicacin.

2.9.3. Manejo de vivero

2.9.3.2.1. Insecticidas
Uno de los aspectos importantes que
repercuten en la efectividad de los
inoculantes
con
base
en
hongos
micorrzicos en el incremento de la calidad
de las plantas, es la aplicacin de productos
qumicos
como
los
fertilizantes
y
plaguicidas, en el vivero.

En el caso de los insecticidas, al parecer su

efecto no es perjudicial para el establecimiento
y efectividad de los hongos micorrzicos en el
sistema radical de las plantas, an cuando se
apliquen productos sistmicos. Como ejemplo
de ellos, se tiene el insecticida sistmico
Marathon 1% granular (ingrediente activo:
imidacloropird, 1-[(6-cloro 3-pirinidil) metil]nNitro-2-imidalidimina) y otros insecticidas
organofosforados cuya formulacin y forma de
54

aplicacin no produce dao para la

simbiosis (Dr. Frederick T. Davies Jr.,
comunicacin personal). Incluso se ha
evaluado la aplicacin de insecticidas de
origen orgnico, como el caso de extractos
vegetales (Azadirachta indica L., nim;
Calotropis gigantea L., Catharanthus roseus
(L.) G. Don. y Eucalyptus sp., Parthenium
hysterophorus L y Pongamia pinnata (L.).
Pierre)(Bhatnagar y McCormick, 1988;
Shetty, et al., 1989; Sarvamangala et al.,
1993) y algunos de ellos no tienen efectos
perjudiciales en la
efectividad de los
hongos ( Manjarez-Martinez y FerreraCerrato, 2000)

bajas (50%) a las recomendadas para cada

producto, e incluso combinarse con productos
de origen natural.

2.9.3.2.2. Nematicidas

2.10.1.

En el caso de los nematicidas, stos

aparentemente no afectan la actividad de
los hongos micorrzicos y se pueden aplicar
sin contrarrestar la actividad benfica de la
simbiosis. Como ejemplo de estos
productos se tienen al Temik, Carbaryl y
Diazinon. Por otra parte, no se tienen
reportes sobre el efecto que tienen las
aplicaciones de productos orgnicos
(extractos
vegetales,
etc.)
en
la
colonizacin y efectividad de los hongos
micorrzicos.
2.9.3.2.3. Fungicidas
Uno de los principales productos utilizados
en
el
control
de
enfermedades,
particularmente de hbito radical, son los
fungicidas. En muchos de los casos, es
preferible utilizar aquellos funguicidas cuyo
modo de accin sea de contacto, mientras
que se tenga la necesidad de usar
fungicidas sistmicos, estos deben ser
Selectivos (especficos) a ciertos grupos de
hongos fitopatgenos como el Previcur en
dosis de 0.15% para el control de
Oomycetos como Pythium y que no afecta a
la micorriza. Se debe tener cuidado de
utilizar productos como Captan, Captafol,
Thiabendazol,
Maneb,
Clorotalonil,
Benomyl,
Bayleton
y
Cercobin,
principalmente, cuyos efectos han sido
reportados como negativos para la
simbiosis. En muchos de los casos es
posible aplicar fungicidas en dosis ms

2.10. Evaluacin de la efectividad de

los inoculantes
La efectividad de los inoculantes puede ser
evaluada con base en los efectos benficos
que tienen en las plantas a las cuales se realiz
la aplicacin. Para este caso, se toman en
consideracin aspectos morfolgicos de
crecimiento y fisiolgicos, e incluso calidad de
planta y sanidad, as como su capacidad de
adaptacin a condiciones extremas.
Efecto
en
crecimiento

la

morfologa

Como aspectos morfolgicos y de crecimiento

se tienen aquellos relacionados con la
induccin de mayor altura, dimetro de tallo,
expansin foliar, rea foliar especfica,
asignacin de crecimiento a determinada parte
de la planta (relacin raz:parte area) y
acumulacin de materia seca. Todas estas
variables son modificadas por la aplicacin de
hongos micorrzicos, de modo que el beneficio
de esta simbiosis sea evaluado con base en
estas variables (Lovato et al., 1996; Sylvia,
1989; Martins et al., 1997; Kahiluoto y
Vestverg, 2000; Kahiluoto et al., 2000). No
obstante, estos efectos son diferenciales de
acuerdo al tipo de planta propagada y la
combinacin del hongo micorrzico (arbuscular
o ectomicorrzico) que se inocule.
La inoculacin con hongos micorrzicos
arbusculares
ha
propiciado
efectos
significativos en la promocin del crecimiento
de plantas como Casuarina equisetifolia
(Alarcn y Ferrera-Cerrato 1995,1996) y Acacia
cyanophylla (Gardezi et al., 1988) (Figura 29).
De este modo, la expresin benfica de los
hongos puede ser diferencialmente modificada
de acuerdo con la composicin del sustrato,
particularmente por la proporcin de materia
orgnica utilizada. En la figura 28a se observa
que la adicin de 12.5% de vermicomposta en
combinacin con los hongos micorrzicos, el
desarrollo de la planta se ve potenciado en
comparacin con el testigo no inoculado.
Cuando se vara la concentracin de
55

vermicomposta
al
25%,
se
sigue
observando el efecto de la micorriza
arbuscular comparado con el testigo, pero
tambin se observa respuesta del
tratamiento no inoculado a la aplicacin de
vermicomposta (Figura 29b).
En el caso de leguminosas arbreas, la
inoculacin con hongos arbusculares
incrementa la altura y la biomasa de Acacia
cyanophylla. En la figura 29c se observa el
efecto de la inoculacin de los endfitos
micorrzicos comparado con la respuesta
del testigo y con el tratamiento en el que se
inocul la bacteria fijadora de nitrgeno del
grupo
Rhizobium.
La
respuesta
a
inoculacin con hongos arbusculares es
superior a los 50 y 100 mg de P kg-1 e igual
a lo observado con 150 mg de P kg-1
(Figura 29d).
Efectos benficos de la inoculacin con
hongos micorrzicos arbusculares, se han
encontrado en otras plantas de importancia
forestal como Leucaena leucocephala,
Eysendhartia polystachia, Cedrella odorata,
Tabebuia
donell-smithii,
Fraxinus
pensylvanica,
Lyquidambar
styraciflua,
Eucalyptus camaldulensis, E. globulus, etc.
(Brown et al., 1981; Sidhu y Behl, 1991;
Rios, 1995; Zulueta et al., 2000, Plascencia
et al., 1995; Garca, 2001)
En el caso de hongos ectomicorrzicos, su
efectividad no slo se expresa en la
induccin de mayor altura, sino que tambin
en el vigor y estado nutricional de pinceas
como Pinus michoacana (Figura 30a). Por
otra parte, las respuestas a la inoculacin
con estos hongos, pueden ser diferentes de
acuerdo con el hospedante al que se
inoculan. As, la inoculacin con Pisolithus
tinctorius puede ser efectivo en Pinus
michoacana y presentar poca efectividad en
el crecimiento y desarrollo de Pinus
pseudostrobus (Figura 30a y b). Para
corregir el bajo desarrollo de algunas
pinceas
inoculadas
con
hongos
ectomicorrzicos, se recomienda el uso de
picomdulos (fertilizante de liberacin lenta)
considerados compatibles con los hongos
simbiontes utilizados en plantas de inters
forestal (Figura 29b).

2.10.2.

Induccin
de
crecimiento

velocidad

de

Las plantas inoculadas con los endfitos

micorrzicos presentan mayor tasa de
crecimiento (Figura 28b), ya sea con base a la
evaluacin de altura, materia seca acumulada o
dimetro de tallo. Mediante este beneficio
aportado por la simbiosis micorrzica, el
viverista tiene ventajas ya que por un lado, se
acorta el tiempo de estancia de las plantas en
el vivero y por ello, es posible injertar
variedades comerciales (en algunos casos) e
incluso, liberarla para uso en los programas de
reforestacin.
Por otra parte, la produccin de planta
micorrizada puede tener menor costo de
produccin, al disminuir el uso y frecuencia de
aplicacin de fertilizantes. Para definir bien este
ultimo beneficio, se requiere el anlisis del
costo-beneficio econmico de las plantas
producidas tanto con simbiosis micorrzica
como por aquella obtenida con fertilizantes.
2.10.3. Calidad de planta producida
El concepto de calidad de planta ha tenido en
la actualidad gran inters, ya que se trata de
predecir el xito de una plantacin con base al
establecimiento de ndices de calidad de planta
producida en vivero. La calidad de planta
involucra aspectos genticos, morfolgicos y
fisiolgicos; sin embargo, este concepto es
relativo ya que se pueden presentar
variaciones de acuerdo con la especie
propagada, sitio donde se va a plantar
definitivamente y objetivos de la produccin de
las plantas (Mohedano, 1999; Cruz, 2001).
Existen criterios para definir la calidad de
planta, los cuales se pueden basar en aspectos
morfolgicos: altura, dimetro del cuello del
tallo, cociente altura/dimetro, arquitectura de
la parte area y arquitectura de la raz, as con
aspectos fisiolgicos como relacin aguaplanta, nutricin, potencial de regeneracin
radical, fotosntesis, transpiracin y cantidad de
carbohidratos en cuello del tallo y raz.

56

a)

b)

Glomus
intrarradices

Glomus
Zac-19

Testigo
Glomus
intrarradices

Glomus
Zac-19

Testigo

50:25:25
Suelo: vermicomposta:arena

12.5:12.5:75
Suelo:vermicomposta:arena

c)

d)

Testigo

Figura 29.

Rhizobium

Glomus Zac-8
+ Rhizobium

Glomus
Zac-8

Testigo

50 ppm
P2O5

100 ppm
P2O5

150 ppm
P2O5

Efectividad de hongos micorrzicos arbusculares en la altura de plantas de Casuarina

equisetifolia L. establecidas en dos condiciones de aplicacin de vermicomposta (a y b) y
en plantas de Acacia cyanophylla con y sin la doble inoculacin HMA-Rhizobium (c) y su
comparacin con el efecto de la aplicacin de tres niveles de fertilizacin fosfatada
(P2O5) (d).

57

a)

Testigo

Inoculado con esporas de

Pisolithus tinctorius

Testigo

b)

Inoculado con esporas

de Pisolithus
tinctorius

Figura 30.

Promocin del crecimiento y vigor de plntulas de (a) Pinus michoacana y (b) Pinus
pseudostrobus inoculados con esporas de Pisolithus tinctorius. Picomudulos-fertilizante
de liberacin lenta, en forma de pastilla (Garca y Ferrera-Cerrato, 1982).

Uno de los ndices de calidad que es

fcilmente calculado y utilizado en
pinceas, es el de Dickson et al. (1960) que
expresa la combinacin entre la relacin
raz:parte area-raz (peso seco) y el ndice
de robustez que relaciona la altura (cm) y el
dimetro del tallo (mm) de la planta:
ndice de
calidad =

Inoculado con Pisolithus tinctorius +

Picomdulo

Testigo

plantas
(podas
areas,
fertilizaciones,
inoculacin de hongos micorrzicos, etc.), de tal
forma que tambin se puede proceder el
tiempo de liberacin de la planta a condiciones
de campo e incluso, por ejemplo, se puede
utilizar para establecer el ndice adecuado para
efectuar
la
injertacin
de
variedades
comerciales en portainjertos.

Peso seco total de la planta (g)

Altura (cm)
Dimetro de
tallo (mm)

Peso seco parte area (g)

Peso seco de raz (g)

Entre ms cercano sea el valor obtenido de

la ecuacin a la unidad, denotar mayor
calidad de las plntulas producidas en el
vivero. De este modo, se pueden establecer
diversos ndices con base en las diferentes
prcticas utilizadas en la produccin de

2.10.4. Adaptacin a condiciones limitantes

Una de las ventajas que presentan las plantas
que fueron previamente inoculadas con hongos
micorrzicos (arbusculares o ectomicorrzicos)
cuando son liberadas a condiciones de campo,
es el aumento de su capacidad de adaptacin y
tolerancia
al
estrs
que
implica
su
establecimiento en el campo. En el cuadro 8,
se hace mencin de algunos efectos benficos
58

que la simbiosis micorrzica aporta a las

plantas
establecidas
en
diversas
condiciones de estrs comunes en el
campo.
2.10.4.1. Salinidad
La condicin salina de un suelo produce
efectos negativos en el crecimiento de la
mayora de las plantas que comnmente se
producen en el vivero. Sin embargo, el uso
de especies forestales con mayor grado de
adaptacin a esta condicin adversa
favorece el xito de la plantacin. De este
modo, se deben utilizar preferentemente,
especies
que
ecolgicamente
estn
adaptadas a este problema edfico como
pinos pioneros (Pinus cembroides) Salix
bonplandiana, Salix sp., Casuarina sp.,
entre otras. Por otra parte, la inoculacin
con hongos micorrzicos arbusculares,
confiere a estas plantas mayor capacidad
de adaptacin y tolerancia a sales mediante
la modificacin de su fisiologa en funcin
de la sntesis de compuestos orgnicos
internos de la planta que propician mayor
capacidad de aprovechamiento del agua
(prolina, otros solutos y trehalosa producida
por los hongos), as como favorecer la
relacin nutrimental que posibilita a las
plantas adaptarse a estos ambientes. Un
aspecto importante a considerar es la
produccin de planta con menor porte en
altura y mayor volumen radical. Estas
caractersticas contribuyen en la reduccin
del dao por la condicin salina del suelo y
que se propicie la adaptacin de la planta.
2.10.4.2. Sequa
En buena parte, la sequa representa
problemas semejantes a los que se
presentan en plantas expuestas a
condiciones salinas, solo que en este caso,
la prolongada exposicin de estrs hdrico
representa
una
limitante
para
el
establecimiento de plantaciones forestales
con fines de rehabilitacin de zonas con
este tipo de problema. En este caso, el uso
de especies con tolerancia a estrs hdrico
como algunas leguminosas arbreas
(Prosopis,
Mimosa,
Leucaena,
Eysendhartia, etc., especies micotrficas

obligadas), puede representar un excelente

potencial para este tipo de zonas, no solo en la
reforestacin sino que tambin en su
aprovechamiento por el hombre. Dada la
condicin micorrzica y micotrfica de estas
plantas (Carrillo-Garca et al., 1999), su
produccin en el vivero debe incluir la
inoculacin
con
hongos
micorrzicos
arbusculares para favorecer su crecimiento,
sanidad, nutricin y vigor, as como su
capacidad de adaptacin y desarrollo en el
sitio. No obstante, tambin se pueden producir
en el vivero, plantas nativas del sitio y a la vez,
inocular con hongos micorrzicos arbusculares
ecolgicamente adaptados a las zonas ridas,
de modo a que se favorezca el crecimiento y
desarrollo de las plantas propagadas en el
vivero.
2.10.4.3.

Tolerancia a condiciones
acidez y alcalinidad

de

En diversos suelos de Mxico, se presentan

condiciones de acidez o alcalinidad que
redundan en el pobre y limitado crecimiento de
las plantas que en ellos se establecen. Con
base en lo anterior, es posible realizar
diferentes prcticas de manejo (aplicacin de
mejoradores de suelo tanto orgnicos como
inorgnicos) con el fin de propiciar cambios en
el grado de acidez o alcalinidad y con ello
favorecer el crecimiento de plantas con la
capacidad de tolerar dichas condiciones, por
ejemplo, Casuarina obesa (Sidhu y Behl, 1992).
Al propagar estas plantas en el vivero, es
posible proceder a la inoculacin con hongos
micorrzicos arbusculares o ectomicorrzicos,
segn el hospedante, con el fin de obtener
plantas ms vigorosas y con mayor capacidad
de adaptacin a las condiciones edficas
mencionadas.

59

Cuadro 8. Especies arbreas con uso potencial en la recuperacin de suelos con posibilidad de
inocularlas exitosamente con hongos micorrzicos arbusculares (HMA) o ectomicorrzicos
(HECM) en el vivero.

Nombre cientfico

Tipo de planta

Simbiontes
micorrzicos

Condicin de adaptacin

Leguminosa tropical

HMA

Sequa

Acer pseudoplatanus

Deciduo

HMA

Sequa

Betula papyrifera

Deciduo

HECM

Acidez, fertilidad pobre

Betula pubescens

Deciduo

HECM

Fertilidad pobre

Casuarina equisitefolia

Tropical

HMA

Acidez

Crotalaria anagyroides

Leguminosa Tropical

HMA

Acidez

Deciduo

HMA

Sequa, alta humedad

Leguminosa Tropical

HMA

Sequa

Pinus caribbea

Conifera

HECM

Acidez, sequa, fertilidad pobre

Pinus cembroides

Conifera

HECM

Sequa, salinidad

Platanus occidentalis

Deciduo

HMA

Alta humedad, metales pesados

Populus spp

Deciduo

HECM

Acidez

Prosopis spp

Leguminosa

HMA

Sequa

Acacia spp

Fraxinus americana
Leaucaena leucocephala

tiempo de exposicin del suelo a la intensidad

de los agentes de erosin, por lo que la prdida
de suelo puede ser mayor en ciertas zonas. De
forma natural, la sucesin vegetal se lleva
acabo en forma lenta y se caracteriza por la
presencia de especies pioneras y posterior
aparicin
y
colonizacin
de
especies
permanentes (Allen M, 1992, 1999; Allen E,
1999). El conocimiento de estos procesos de
sucesin,
permite
aplicarlos
utilizando
principalmente plantas consideradas como
permanentes y que adems sean susceptibles
de formar micorriza. Con lo anterior, es posible
crear condiciones que favorezcan los procesos
de restauracin de zonas, al propiciar la
creacin de manchones o islas de fertilidad
(Carrillo-Garca et al., 1999a y b) que a largo
plazo, contribuirn a la expansin de mayor
cobertura vegetal y con ello a la restauracin
de la zona.

2.10.4.4. Grado de perturbacin

El grado de perturbacin de los suelos
(alteracin del estado del suelo debido al
impacto de fenmenos atmosfricos y
manejo de los sistemas por el hombre;
lvarez y Ferrera-Cerrato, 1995) es un
aspecto que debe ser considerado al
momento de la produccin de plantas en
vivero, ya que stas deben tener
caractersticas adecuadas que permitan
que su tasa de supervivencia sea mayor y
se garantice, en cierta forma, el xito de las
plantaciones con fines de restauracin o
rehabilitacin de zonas perturbadas.
2.10.4.4.1. Erosin
Sin lugar a dudas, la erosin tanto elica
como hdrica contribuye en forma
significativa en la prdida de la capa frtil
de los suelos. Algunas estimulaciones
sealan que la prdida de suelos por accin
del viento es de 10 mm ao-1 , mientras que
por accin del agua es de 1 mm ao-1. Sin
embargo, estas cifras son variables en
funcin de la variabilidad ambiental y del

2.10.4.4.2. Desertificacin
La desertificacin es un proceso originado por
la actividad de los agentes de erosin e
inadecuados manejos agrcolas y minera. Este
proceso se caracteriza por la sucesiva prdida
60

Ejemplos de stas son: pinos, abedules,

sauces
(especies
formadoras
de
ectomicorriza), Acer y Salix (que establecen
simbiosis con hongos ectomicorrzicos y
micorrzicos arbusculares). Por otra parte, las
especies creciendo cerca de suelos mineros
como Festuca rubra, F. ovina, F. arundinaceae,
Andropogon gerardii, Holcus lanatus, Agrostis
capilaris, A. stolonifera y Deschampsia
flexuosa, tienen la capacidad de formar
micorriza arbuscular

de las propiedades fsicas, qumicas,

biolgicas del suelo, que definen la fertilidad
del mismo. Al igual que en las zonas
erosionadas, en zonas desrticas es
posible
implementar
procesos
de
restauracin con base al manejo de
especies
con
tolerancia
a
dichas
condiciones y de acuerdo al conocimiento
de los procesos de sucesin vegetal. En
ambos casos es posible utilizar especies
arbustivas y arbreas como leguminosas
(Mimosa luisana, Prosopis laevigata, etc.)
(Reyes-Quintanar et al., 2000) y algunas
gramneas como Bouteluoa gracillis,
mismas que son susceptibles de ser
colonizadas por los hongos micorrzicos
arbusculares los cuales confieren ventajas
fisiolgicas a condiciones de estrs hdrico
y temperaturas extremas.

La magnitud del problema de contaminacin en

Mxico permite predecir el enorme potencial de
los hongos micorrzicos con el fin de expandir
su uso prctico en la fitorremediacin de suelos
contaminados al inocularlos, ya sea por
hidrocarburos o metales pesados.

2.11. Evaluacin
micorrzica

2.10.4.4.3. Contaminacin
La contaminacin del suelo puede ser
originada por la deposicin de diferentes
compuestos txicos. Actualmente este
problema ha tenido especial preocupacin
tanto en nuestro pas como en muchas
otras regiones del mundo, ya que
representa un constante riesgo para el
ambiente y para la salud humana. Como
alternativas para la recuperacin de reas
contaminadas con hidrocarburos o metales
pesados, estn la fitodescontaminacin y la
fitoestabilizacin en las que se tiene la
participacin directa de la planta y su
microflora rizosfrica (Cunningham et al.,
1996). Estas alternativas biolgicas de
remediacin tienen como ventaja su bajo
costo (comparado con la remediacin de
suelos mediante tcnicas qumicas y de
ingeniera), as como su aceptacin pblica
para su aplicacin, adems de tener bajo o
nulo impacto ecolgico. El uso de hongos
micorrzicos en la fitorremediacin de
suelos contaminados, representan una
posibilidad de disminuir los riesgos de los
contaminantes en el suelo, as como
reestablecer la vegetacin en estas reas
(Jasper, 1994). La presencia de los hongos
ectomicorrzicos y hongos micorrzicos
arbusculares es de vital importancia para el
establecimiento de especies arbustivas y
arbreas
en
suelos
contaminados.

de

la

colonizacin

En todos los sistemas donde se aplican los

hongos formadores de micorriza es necesario
evaluar la colonizacin. Esta evaluacin vara
desde una simple observacin de las races e
identificacin de la formacin de la micorriza,
hasta la cuantificacin microscpica basada en
mtodos especficos ya probados. En
cualquiera de los casos, el propsito es
identificar si las races fueron colonizadas por
el hongo y en que cantidad. Para esto, se
recurre a la evaluacin de muestras frescas de
races con crecimiento secundario. Un proceso
de clareo y tincin de la raz resulta
indispensable cuando se han inoculado hongos
formadores de micorriza arbuscular, no as
para el caso de la ectomicorriza donde la
cuantificacin se realiza directamente. As, el
mtodo ms utilizado para evaluar la
colonizacin
por
hongos
micorrzicos
arbusculares, es aqul donde se emplea KOH
al 10% para eliminar todo el contenido celular,
as como pigmentos con el fin de observar, sin
interferencias, las estructuras fngicas que son
teidas con azul tripano y con otros colorantes
como negro E de clorazol, fucsina cida
(Brundrett et al., 1996; Dickson y Smith, 1998)
e incluso con anilina o tinta china (Dr. Chris
Walker comunicacin personal).
La medicin de la colonizacin puede
realizarse mediante mtodos no sistemticos y
61

El establecimiento de la escala de colonizacin

puede ser ajustada mediante la observacin del
sistema radical al microscopio estereoscopio en
la que se realiza una revisin minuciosa de
toda la raz de la planta (separada
cuidadosamente del sustrato de crecimiento)
para
detectar
las
ramificaciones
y
deformaciones de las races alimentadoras
(feeder roots) inducidas por el hongo
ectomicorrzico (Figura 16a-d).

mtodos sistemticos, que de acuerdo con

cierto proceso es posible realizarlo en los
viveros o preferentemente enviar las
muestras a laboratorios especializados para
dar un diagnostico ms completo en la
colonizacin tanto por hongos micorrzicos
arbusculares
como
ectomicorrzicos
(Alarcn, 2001).
2.11.1. Mtodos no sistemticos
Para la micorriza arbuscular, los mtodos
no sistemticos involucran la revisin
subjetiva de la muestra que permite inferir
la presencia de hongos micorrzicos
arbusculares colonizando las races, como
es el caso de pigmentacin amarilla en
races de cebolla, pero no proporciona
informacin del tipo de estructuras fngicas
presentes. Esta observacin no representa
para el evaluador ninguna seguridad de la
frecuencia ni proporcin del sistema radical
colonizado por los hongos, por lo que se
requiere utilizar otros mtodos.

2. 11. 2. Mtodos sistemticos

Los mtodos sistemticos conllevan el
seguimiento de procesos bien definidos que
permiten
evaluar
cuantitativamente
la
colonizacin fngica en la raz con mayor
precisin. En el caso de la micorriza arbuscular,
con este tipo de mtodos se cuantifica la
intensidad de la colonizacin y el tipo de
estructuras presentes (hifas, arbsculos,
vesculas) por cada segmento de raz
evaluado. El procedimiento utilizado se basa en
aquel que fue propuesto por Phillips y
Haymann (1970). Este proceso inicia con la
exposicin de las races en una solucin de
KOH al 10%, expuesta a calor (a ebullicin o en
olla de presin a 10 lb) durante 10 minutos,
repitiendo este paso hasta obtener la raz libre
de pigmentos (taninos, polifenoles, etc.).
Posteriormente, las races son enjuagadas con
agua corriente para despus exponerlas a agua
oxigenada comercial durante 10-15 minutos.
Las races se enjuagan nuevamente y se
adiciona una solucin de HCl al 10% durante
10-15 minutos. Pasado este tiempo el cido se
elimina, y sin enjuagar, las races son
sumergidas en una solucin colorante de azul
tripano al 0.05% en lactoglicerol (100 mL de
cido lctico comercial, 100 mL de glicerina
comercial y 100 mL de agua destilada). Las
races se exponen a calor (a ebullicin o en olla
de presin a 10 lb), durante 10 minutos, para
facilitar su tincin (Figura 32).

Para el caso de la ectomicorriza, su

evaluacin consiste en determinar si los
hongos ectomicorrzicos se establecieron
en la planta. El tipo de estructura
micorrzica formada (digitiforme, bifurcada,
coraloide, pinnada, etc. ver figura 17), se
compara con la arquitectura original del
sistema radical de plantas no colonizadas
por los hongos (Ferrera-Cerrato, 1993). Con
base lo anterior, se pueden crear clases
subjetivas que consisten en comparar el
grado de formacin de estructuras
ectomicorrzicas en la raz (Figura 31a-d).
Esta comparacin permite obtener valores
numricos subjetivos en forma de escala, la
cual es utilizada por el USDA Forest
Service
de
Georgia,
tomando
en
consideracin varias repeticiones para
establecer los diferentes grados de
colonizacin. Mediante esta observacin es
posible
estimar
el
porcentaje
de
colonizacin por ectomicorrzicos con base
en el tipo y color de la estructura micorrzica
que stos forman. Por ejemplo, Pisolithus
tinctorius forma estructuras micorrzicas de
color caf y Cenococcum geophylum de
color negro.
62

0%
Figura 31.

1-25%

26-50%

51-75%

76-100%

Evaluacin de la colonizacin ectomicorrzica en races de pinceas, mediante el

establecimiento subjetivo de una escala (0-100 %) que representa la presencia, en
porcentaje, de las diferentes estructuras ectomicorrzicas en el sistema radical de las
plantas hospedantes.

presentan
estructuras
fngicas
(hifas,
arbsculos y vesculas), a la vez de contar los
segmentos no colonizados. El porcentaje de
colonizacin total se determina dividiendo el
nmero de segmentos de raz colonizados, por
cualquier estructura fngica, entre el nmero de
segmentos totales observados (suma de los
segmentos colonizados y los segmentos no
colonizados), multiplicado por 100:

Una vez teidas las races, stas se cortan

en segmentos de 1.5 centmetros de largo
(procurando que sean las races ms finas)
y se colocan en forma paralela, sobre
portaobjetos
con
unas
gotas
de
lactoglicerol. En cada portaobjetos se
montan de 25 segmentos de raz por
cuatriplicado y finalmente, se les coloca un
cubreobjetos, quedando la preparacin lista
para su observacin al microscopio ptico a
objetivo de inmersin 100x (Figura 33). Este
procedimiento, a pesar de su laboriosidad,
permite realizar una mejor estimacin de la
colonizacin de las diferentes estructuras
caractersticas de los hongos micorrzicos
arbusculares en las clulas corticales. Una
vez realizada la observacin microscpica
de las races, y haber procedido a contar
los segmentos radicales colonizados o no
colonizados por los HMA, se procede a
calcular el porcentaje de la frecuencia de
colonizacin (Biermann y Linderman, 1981).

% Colonizacin =

Nmero de segmentos
colonizados (Hifas, arbsculos
o vesculas)
------------------------------------Nmero de segmentos totales
observados

x 100

Por otra parte y considerando su rapidez de

evaluacin, se tiene otro mtodo con base al
uso de cajas de Petri con cuadrcula de 1cm2
(interseccin de cuadrantes, generado por
Giovanetti y Mosse, 1980) y la observacin de
las races al microscopio estereoscpico. El
mtodo consiste en colocar aproximadamente
un gramo de races, previamente teidas, en
las cajas de Petri cuadriculadas. Las races se
distribuyen en el interior de la caja y se les
agrega un poco de agua para que no se
deshidraten. La caja se coloca bajo el

La determinacin del porcentaje de

colonizacin, se basa en la observacin
microscpica
de segmentos de raz
teidos y en ellos, contabilizar aquellos que
63

microscopio estereoscpico y se comienza

la observacin, siguiendo las lneas de la
cuadrcula, empezando por las lneas de la
cuadrcula horizontal y al finalizar, continuar
con las lneas de la cuadrcula vertical
(Figura 34).

c)
b)

d)

a)

KOH 10%
10 libras, 10 minutos

KOH 10%

e)

Enjuague con
agua corriente

Figura 32.

h)

f)

g)

HCl 10%
10 minutos

Azul tripano
0.05%

Tincin con calor

10 libras, 10 minutos

H2O2 10%
10 minutos

i)

Races teidas

Pasos metodolgicos de clarificacin y tincin de races colonizadas por hongos

micorrzicos arbusculares. a) corte de races y colocacin de races en cpsulas
esterilizadas, b) cpsulas de races en solucin de KOH al 10% , c) cpsulas expuestas a
calor por ebullicin o sometidas a presin (10 lb) durante 10 minutos, d) cpsulas
expuestas a solucin de agua oxigenada por 10 minutos, e) enjuague de las cpsulas con
agua corriente, f) cpsulas expuestas a HCl al 10% durante 10 minutos, g) cpsulas
expuestas a solucin colorante con azul tripano 0.05% en lactoglicerol, h) exposicin de
las cpsulas a calor por ebullicin o a presin durante 10 minutos, i) cpsulas con races
teidas, listas para su montaje.

el total de races no colonizadas y con base en

el total de segmentos cuantificados, se estima
el porcentaje de longitud de raz colonizada e
incluso el porcentaje de longitud total de la raz
(Figura 34c).

Conforme se hace el recorrido de las lneas

horizontales y verticales, se toman lecturas
de las intersecciones de las races sobre las
lneas de la cuadrcula y de aquellas races
en las que se detecte colonizacin por los
hongos micorrzicos arbusculares. Una vez
cuantificadas todas las intersecciones, se
contabiliza el total de races colonizadas y
64

b)

a)

c)
)

Figura 33. Evaluacin de la colonizacin por hongos micorrzicos arbusculares en el sistema radical de
las plantas, con base al montaje de races teidas sobre portaobjetos: a) colocacin de
races teidas en cajas de Petri; b) montaje de races en portaobjetos con lactoglicerol; b)
observacin de las preparaciones al microscopio de campo claro a objetivo de inmersin
100x e identificacin de las estructuras fngicas intrarradicales.

Este mtodo es recomendable para raicillas

de fcil observacin (cebolla, poro, lechuga,
etc.) cuya existencia y grado de colonizacin,
permite observar la colonizacin por los
hongos micorrzicos arbusculares; mientras
que no muy es recomendable para races de
consistencia semileosa o leosa (rboles
forestales o frutales), por su dificultad para
teirlas. La determinacin del porcentaje de
raz colonizada mediante el mtodo de
interseccin de cuadrantes se calcula
mediante la siguiente ecuacin:
Longitud de raz
colonizada (%) =

Total de intersecciones colonizadas (cm)

-----------------------------------------------------------------------------Total de intersecciones no
colonizadas (cm)

65

Total de intersecciones
colonizadas (cm)

X 100

a)

c)

Lneas horizontales

RM

b)

NRT

Lneas
RM 0
Verticales
/
NRT 0

3
/
7

5
/
11

2
/
11

4
/
10

1
/
6

4
/
6

0
/
0

Total de races micorrizadas (RM) = 35

Total de races observadas (NRT) = 80
(35 / 80) x100 =
Longitud de raz colonizada = 43.7%

Figura 34. Mtodo de evaluacin de la colonizacin micorrzica por interseccin de cuadrantes: a)

Colocacin de races teidas en caja de Petri con cuadrcula de 1cm2; b) Observacin al
microscopio estereoscpico; c) Secuencia del seguimiento de la observacin de las cajas de
Petri (flechas en direccin vertical y horizontal) para la cuantificacin de segmentos
colonizados por hongos micorrzicos arbusculares ubicados sobre las lneas de la cuadrcula
( ).

Ambos
mtodos
descritos,
pueden
aplicarse a cualquier especie vegetal donde
se inoculen los hongos que forman
micorriza arbuscular, considerando un
tiempo mnimo de tres meses para
realizarlo, ya que en ese tiempo ya es
posible encontrar colonizacin en races de
plantas forestales leosas. Para cualquier
simbiosis, la frecuencia en realizacin de
estas
determinaciones
depender
fundamentalmente de los objetivos del
viverista, de modo que con ello se asegure
liberar planta, a los sitios definitivos de
transplante, con una simbiosis micorrzica
bien establecida que confiera a las plantas
mayor capacidad de adaptacin a las
condiciones tanto edfica como climtica
del sitio.

Para el caso de los hongos ectomicorrzicos, el

procedimiento sistemtico para la evaluacin
de la colonizacin consiste en contabilizar las
puntas con estructuras ectomicorrzicas en las
races de conferas (Figura 35). Este mtodo es
muy similar al de interseccin de cuadrantes
descrito para la evaluacin de hongos
micorrzicos arbusculares (ver Figura 34). El
procedimiento del mtodo se lleva a cabo con
base a los siguientes pasos:
Las races se cortan en segmentos y se
colocan en cajas de Petri cuadriculadas (1
cm2)
Las cajas con las races se colocan en el
microscopio estereoscpico y se realizan
evaluaciones de las intersecciones de las
66

races en el sentido vertical y horizontal

de la cuadrcula
Se procede a cuantificar cada
interseccin de la cuadricula con las
races y se contabilizan las races
colonizadas (con presencia de las
estructuras ectomicorrzicas) y las no
colonizadas

Los valores se expresan en centmetros

cuadrados para cada condicin de raz
evaluada
Adems, es posible determinar la longitud
radical de la muestra con base a la suma
del conteo de races no colonizadas y
races colonizadas

A continuacin se ilustran las estructuras

ectomicorrzicas tpicas a observar y cuantificar
con el mtodo de interseccin de cuadrantes
(Tomado de Brundrett et al., 1996):

c)

a)

b)

75

44

Races
colonizada
s
Longitud radical total = 119 cm
Longitud de raz colonizada = 44 cm
(44/119) x 100 =
Longitud radical colonizada = 36.97%
Races sin
colonizar

Figura 35.

Mtodo de evaluacin de la colonizacin por hongos ectomicorrzicos mediante el mtodo

de interseccin de cuadrantes: a) colocacin de races de conferas en caja de Petri con
cuadrcula de 1cm2; b) observacin al microscopio estereoscpico; c) observacin de la
caja de Petri (en direccin vertical y horizontal) para la cuantificacin de la longitud radical
y las puntas radicales con estructuras ectomicorrzicas que se sobrepongan a las lneas de
la cuadrcula.
67

2.12. Calidad
biolgica
inoculantes

de

los

A pesar de la importancia que actualmente

tienen los inoculantes microbianos en Mxico,
desafortunadamente, no se cuenta con un
organismo que regule y evale la calidad de
los mismos. Dado que se carece de
estndares que establezcan la cantidad
mnima de propgulos infectivos de los
hongos micorrzicos, as como de garantizar
que los inoculantes estn libres de
organismos fitopatgenos, ningn inoculante
comercial pueden ser calificado como de alta
calidad. Un inoculante debe contener una
cantidad
de
propgulos
de
hongos
micorrzicos que permita colonizar la planta y
producir con el tiempo, efectos positivos en el
crecimiento y desarrollo. Con base en lo
anterior, cada compaa anuncia lo ms
apropiado para sus productos y como
consumidores solo queda el recurso de
aplicarlos y esperar resultados; o bien,
proceder a la evaluacin del inoculante y
corroborar si cumple o no con lo que se
presenta en la etiqueta del producto.
2.12.1. Evaluacin microbiolgica de los
inoculantes
La determinacin del nmero de bacterias,
hongos y actinomicetos que vienen en
conjunto con un inoculante micorrzico, debe
realizarse mediante tcnicas de laboratorio
especficas para Microbiologa de Suelos. En
tal caso, se debe acudir a personal
especializado que adems de cuantificar el
nmero de microorganismos ajenos al
inoculante (considerando la especificacin del
producto), tambin pueda dar un diagnostico
de la presencia de patgenos. Las tcnicas
microbiolgicas se basan en el uso de
medios de cultivo especficos para cada
grupo microbiano y evaluar con ello, su
posible actividad fisiolgica (fijadores de
nitrgeno,
solubilizadores
de
fsforo,
patgenos, etc.).
Para estudios microbiolgicos se requiere del
uso de productos sellados de origen, y evitar
con
ello
la
introduccin
de
otros
microorganismos por el manejo de los
68

inoculantes. De acuerdo con la evaluacin de

los microorganismos, la cantidad (poblacin)
de contaminantes en inoculantes comerciales
suele en algunos casos sobrepasar a la
cantidad de hongos micorrzicos pudiendo
causar efectos negativos sobre la planta
inoculada, lo cual puede, equivocaramente,
atribuirse al efecto del hongo micorrzico que
incluye el inoculante.
2.12.2.

Evaluacin
micorrzicos

de

propgulos

2.12.2.1. Cuantificacin de esporas

El nmero de esporas en el inoculante
micorrzico (hongos micorrzicos arbusculares
y ectomicorrzicos) debe ser cuantificado
antes de que ste sea utilizado, de tal
manera que se asegure que la colonizacin
micorrzica se lleve a cabo. La separacin y el
conteo de esporas se realizan un mtodo
muy sencillo pero laborioso, ya que involucra
la observacin y evaluacin al microscopio
estereoscpico y en algunos casos en el
microscopio ptico.
Para el caso de hongos micorrzicos
arbusculares, la separacin del soporte en
que van incluidas las esporas se realiza,
bsicamente, mediante el mtodo de
tamizado y decantado en hmedo (Figura
36). En este mtodo, 100 g del inculo se
disuelve con 1L de agua, la suspensin se
deja reposar durante unos segundos y el
sobrenadante se pasa a travs de tamices o
mallas calibradas a 500, 250 y 44 micras para
capturar las esporas de acuerdo a su tamao.
Este procedimiento de decantacin se repite
al menos tres veces. El material que queda
atrapado en los tamices se recoge en su
totalidad y se observa al microscopio
estereoscopio y se procede a cuantificar el
nmero de esporas por gramo de inoculante.
Es importante recalcar que el conteo de
esporas debe ser realizado por personal con
experiencia para evitar confusiones y errores
en el conteo.

a)

d)

b)

c)

e)
f)

Figura 36. Mtodo de tamizado y decantacin en hmedo (Gerdemann y Nicolson, 1963) utilizado para
la extraccin de esporas de hongos micorrzicos arbusculares tanto para aislamiento como
para cuantificacin en muestras de suelo o en inoculantes. a) Muestra de suelo (100 g)
depositada en 1 litro de agua; b) agitacin de la suspensin; c) Decantado del sobrenadante
y captura de esporas en tamices de malla 520 y 45 micras; d) Colecta de esporas retenidas
en los tamices; e y f) Observacin y cuantificacin de las esporas al microscopio
estereoscopio.

Un mtodo muy sencillo para efectuar el

conteo
de
esporas
de
hongos
ectomicorrzicos se basa en diluciones
seriales, y en cada suspensin se agregan
unas gotas de Tween 20 al 1% para propiciar
la separacin de las esporas y su suspensin
total en el aproximadamente. Con base a la
dilucin ms alta (10-7, 10-8 o 10-9) se colecta
una alcuota de 100 L y se vierte ya sea en
una caja de Petri cuadriculada y se observa
al microscopio estereoscpico.
Otra
alternativa consiste en colocar la alcuota
entre el cubreobjeto y la cmara de
Newbauer. La alcuota pasara por capilaridad
y con un papel filtro o absorbente se elimina
el exceso. Posteriormente, se coloca la
preparacin en el microscopio ptico. La
cmara esta conformada por retculas (cuatro
retculas perifricas con 16 cuadros y una
retcula central con 400 cuadros). Tanto en la
retcula central como en las perifricas, se
69

procede a contar las esporas que estn

tocando las lneas de la retcula.
Una vez contabilizadas las esporas, se suma
el total de ellas y se divide entre cinco
(retculas) para obtener un promedio. Con
base en que cada retcula tiene 1 mm2 de
superficie y 0.1 mm de profundidad, el
promedio obtenido es el que se encuentra en
0.1 mm3, lo que equivale en 0.0001 ml. Dado
que el nmero de esporas se puede reportar
por mililitro, se procede a calcularlo de la
siguiente forma: X=[(nmero de esporas x 1.0
mL) / 0.0001 mL]. Este tipo de
determinaciones
se pueden utilizar para
generar recomendaciones de la cantidad de
producto para aplicar a una determinada
cantidad de plantas, tal cantidad debe ser
superior a inocular 1.1 x 106 esporas por
plantas.

2.13. Interaccin
con
otros
microorganismos benficos
2.13.1. Bacterias
crecimiento

promotoras

de

El
trmino
bacterias
promotoras
de
crecimiento es aplicado a aquellas bacterias
del suelo capaces de colonizar las races de
las plantas y estimular el desarrollo de las
mismas,
a travs de la sntesis
de
reguladores del crecimiento como el cido
indolacetico (AIA) (Azcon, 2000). Muchas de
stas bacterias, adems de promover el
crecimiento
vegetal,
presentas
otras
importantes actividades fisiolgicas como fijar
nitrgeno atmosfrico, movilizacin de
fuentes
insolubles
de
nutrimentos,
modificando el desarrollo y funcin de las
races para mejorar la absorcin de agua y
nutrimentos y contribuir en el control de
microorganismos patgenos, mediante la
secrecin de sustancias antibiticas. En los
ltimos aos, se ha incrementado la
informacin de los beneficios de estas
bacterias, pudiendo actualmente formularse
recomendaciones para su uso en los viveros,
sobre todo en especies de lento crecimiento.
El xito de la introduccin de estas bacterias
y de los hongos micorrzicos en la
propagacin de plantas en el vivero es
seguro, puesto que se realizan algunas
prcticas que favorecen su establecimiento
en el sistema radical como la esterilizacin o
desinfeccin de recipientes, envases y
sustratos, el uso de frmulas fertilizantes de
lenta liberacin o en bajas dosis, aplicacin
racional de plaguicidas, as como hacer el
seguimiento
del contenido de humedad,
mismos que repercuten en los beneficios
tanto planta como a los simbiontes.
2.13.1.1. Bacterias fijadoras de Nitrgeno
De acuerdo con diversas investigaciones
reportadas en la literatura, se ha podido
establecer el efecto benfico que tiene la
doble
inoculacin
hongo
micorrzico
arbuscular-bacterias fijadoras de nitrgeno
atmosfrico. Un tipo de planta que resulta
beneficiada de este tipo de asociaciones son
las leguminosas, pues establecen simbiosis
con Rhizobium y hongos micorrzicos, por lo
70

que tienen mayor capacidad de aprovechar N

y P contenido. Es posible disminuir
considerablemente
los
requerimientos
nutrimentrales
suministrado
mediante
fertilizacin qumica (Azcon, 2000). Las
leguminosas herbceas y semileosas suelen
presentar micorriza arbuscular, mientras que
algunas leguminosas arbreas pueden
presentan ectomicorriza (Cuadro 7). El
establecimiento de ambos microorganismos
en las leguminosas se establece a los pocos
das de la inoculacin y al parecer no existe
competencia entre el hongo y la bacteria por
los puntos de colonizacin dando como
resultado
mayor
crecimiento
en
el
hospedante.
La doble simbiosis en leguminosas forestales
con
propsitos
de
regeneracin
o
conservacin de suelos, es una alternativa
que permitira a algunas especies como
Acacia schaffneri, Dalea bicolor, Prosopis
laevigata,
Robinia
sp.
y
Leucaena
leucocephala
mayor
adaptacin
y
supervivencia en condiciones edafolgicas y
climticas adversas. Adems la extensa red
de hifas, que explora el suelo y transloca
nutrimentos, no solo beneficia a la planta
originalmente inoculada sino tambin a otras
plantas que cohabitan en el mismo sitio, lo
cual contribuye en la estabilidad de las
comunidades de vegetales que conforman el
ecosistema.
Otra interaccin importante de la micorriza
con fijadores de N, se da en plantas no
leguminosas que forman ndulos en la raz y
a la asociacin con actinomicetos del gnero
Frankia (actinorriza). Esta simbiosis se
establece en 20 gneros de especies
vegetales que en su mayora son rboles y
arbustos de vida perenne. Algunos como
Casuarina,
Eleagnus,
Hyppophae,
Ceanothus, Colletia, Discaria, Purshia, Robus
y Dastica adems de asociarse con Frankia
establecen simbiosis con hongos micorrzicos
arbusculares; mientras que Alnus, Myrica,
Comptonia, Dryas y Coriaria pueden
establecer simbiosis con los tres simbiontes
al mismo tiempo: actinorriza, micorriza
arbuscular y ectomicorriza. Los efectos de
estas interacciones sobre la planta se
manifiestan en la nutricin y crecimiento del

hospedante. Por ltimo, la fijacin biolgica

de N tambin la realizan bacterias de vida
libre (diazotrofos); sin embargo, este tipo de
bacterias no han sido inoculadas ni
evaluadaspoco se les ha asociado con
especies forestales y mucho menos en
combinacin
con
hongos
micorrzicos
arbusculares.
2.13.1.2.

Bacterias solubilizadoras de
fsforo
y
productoras
de
reguladores del crecimiento
vegetal

Las bacterias solubilizadoras de fosfatos

(fosfobacterias) de algunos gneros como
Pseudomonas y Agrobacterium facilitan el
aporte de fsforo a la planta mediante
algunos mecanismos como la secrecin de
enzimas fosfatasas que permite que el
fsforo se haga disponible a la planta.
Cuando estas bacterias son inoculadas en
combinacin con hongos micorrzicos la
captacin de este elemento aumenta y se
promueve considerablemente el crecimiento
de la planta, con mnima fertilizacin qumica.
Estas bacterias, pueden ser tambin
promotoras de crecimiento, ya que producen
hormonas del crecimiento como citocininas,
giberelinas y cido indol-actico adems de
algunas vitaminas y otras sustancias que
inducen el crecimiento vegetal. Existen
muchos ejemplos del efecto conjunto en el
crecimiento de las plantas por el empleo de
los hongos micorrzicos y estas bacterias
promotoras en limonero, aguacate, capuln,
aile y muchas otras de inters hortcola.
2.13.1.3.

Bacterias antibiticas

El control de ciertos patgenos del suelo

puede tambin lograrse con el empleo de
bacterias (Lara, 1998; Lara et al., 1998a y b).
Algunas de stas producen compuestos que
inmovilizan nutrimentos (Fe) que los hongos
patgenos utilizan para su nutricin,
disminuyendo as la poblacin de los mismos
por efecto de competencia (Crowley, 2001).
Otra forma incluye la competencia por
nutrimentos en la raz, donde las bacterias no
patognicas, por lo general, son ms
competitivas, impidiendo que la poblacin de
patgenos se convierta en un problema.
71

Existen bacterias que han mostrado actividad

antibitica a hongos patgenos son
Pseudomonas
fluorescens y P. putida,
adems de Agrobacterium y otras cuyo efecto
antibitico no afecta a la micorriza sino que
en
ciertas
ocasiones
favorecen
la
germinacin de las esporas o estimulan el
desarrollo del micelio hacia la raz, por lo que
pueden usarse conjuntamente.

72

3. SERVICIOS REQUERIDOS
3.1. Instituciones nacionales
pueden dar servicio

que

El rea de Microbiologa de Suelos del

Instituto de Recursos Naturales del Colegio
de Postgraduados en Ciencias Agrcolas
(Montecillo, Estado de Mxico) tiene la
infraestructura necesaria para desarrollar
programas de servicio y asesora para las
diferentes instancias productoras de plantas
en
vivero,
as
como
instituciones
gubernamentales, etc.

Para solicitar este tipo de servicios, acudir a:

Dr. Ronald Ferrera-Cerrato
rea de Microbiologa. Instituto de Recursos
Naturales. Colegio de Postgraduados en
Ciencias Agrcolas. Carretera Mxico-Texcoco
km 35.5. Montecillo 56230, estado de Mxico.
Tel-Fax: + 5 9520287
correo electrnico:
ronaldfc@colpos.colpos.mx

3.2. Abastecimiento de inoculante

previa programacin
La produccin de inoculante puede ser
generada por sistemas de produccin con
base a la programacin en la que se
contemplen los futuros requerimientos de
los viveros. Este proceso se realiza, por lo
menos con seis meses con de anticipacin,
y su calidad se verifica en funcin de la
evaluacin de su efectividad en plantas
indicadoras, as como de no llevar consigo
microorganismos fitopatgenos.

3.3. Servicio
de
microbiolgica en
inoculantes

evaluacin
plantas e

La evaluacin de la calidad de los

inoculantes comprende de manera general,
las siguientes pruebas realizadas con base
al
seguimiento
de
los
protocolos
establecidos en el rea de Microbiologa:

Pruebas de viabilidad de esporas de

hongos micorrzicos
Evaluacin de la colonizacin de hongos
micorrzicos en el sistema radical de las
plantas inoculadas

Microbiolgicas:
pruebas
de
patogenicidad (bacterias y hongos),
presencia de bacterias con diferente
capacidad
fisiolgica
(fijacin
de
nitrgeno en vida libre, solubilizacin de
fosfatos
inorgnicos
insolubles,
capacidad
antibitica
a
hongos
fitopatgenos, etc).
Evaluacin de la efectividad de los
inoculantes micorrzicos, bsicamente
en la promocin del crecimiento
73