CONGRESO INTERNACIONAL DE

QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO 2010

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NL , MEXICO

GENES Y OBESIDAD
ES HORA DE COMENZAR SU
DIAGNOSTICO?
Dra. Natalia Ulloa M., PhD
FACULTAD DE MEDICINA FACULTAD DE FARMACIA
UNIVERSIDAD DE CONCEPCION

OBESIDAD: DEFINICION
La obesidad se define
como una enfermedad crnica
que se caracteriza por una acumulacin
anormal o excesiva de grasa
Y que se asocia con mayor riesgo de mortalidad
y morbilidad.

LA OBESIDAD:
BALANCE POSITIVO DE LARGO PLAZO,
ENTRE INGESTA Y GASTO DE ENERGIA

Ingesta
energtica

Depsito
de grasas

Gasto
energtico

OBESIDAD: ENFERMEDAD
COMPLEJA
Genes
x
Medioambiente

Genes
x
Genes

Fenotipo
Obeso

CLASIFICACIONES GENETICAS
DE LA OBESIDAD

Obesidad Monognica
Obesidad Polignica u Obesidad Comn

IDENTIFICACION VARIACIONES
GENETICAS ASOCIADAS CON OBESIDAD
150 genes

Identificacin 6 nuevos loci

asociados a obesidad comn
y de alta prevelencia

Muchos

Identificacin el 1 gen
ampliamente asociado a
obesidad comn ( FTO )

Identificacin de otros
genes asociados a
obesidades monognica
Obesidad Monognica
MC4R / Leptina

1993 -1997

2007

1998 -2004

AO

2009

OBESIDAD MONOGENICA
RUTA SACIEDAD Y GASTO DE ENERGA
HIPOTALAMO

LepR leptin receptor,

POMC proopiomelanocortin,
aMSH (alpha melanin stimulating
hor),
PC1 proconvertase 1,
CPE carboxypeptidase E,
MC4R melanocortin-4 receptor. .

MUTACIONES OBESIDAD MONOGENICA

RUTA LEPTINA MELANOCORTINA

Clment C.R. Biologies 329, 2006.

PREVALENCIA DEFECTOS MONOGENICOS

QUE CAUSAN OBESIDAD SEVERA

LEP

0.5%

LEPR

0.5%

POMC

0.8%

PCSK1

0.4%

MC4R

: 2 to 5%

From S ORahilly and S Farooqi

Homozygous G del codon 133

Nature, 387, pp 903-908

June 26, 1997
7q31

cEBP
( 300)

Gene= 18kb
cDNA= 3.5 kb
Leptin

2
10kb

1.9kb

*
167 aa

*
Leptin* 133aa

3
AAAA

DEFICIENCIA CONGENITA DE
LEPTINA

RECEPTOR MCR4

29 mutaciones en
los 500 sujetos.

3 sin efecto
patgeno.

Sadaf Farooqi, NEJM, 2003. Vol. 348 no. 12.

DEFICIENCIA EXTREMA DE LA
FUNCIN DE MC4R

Severa obesidad y
altura.

Aumento masa
grasa, magra y en
densidad sea.

Izquierda: Nio 9 aos.

Mutante homocigoto.
Derecha: Hermano de 16
aos. Genotipo normal.
Clinical Spectrum of Obesity and Mutations in the Melanocortin 4 Receptor Gene. I.
Sadaf Farooqi et al.The New England Journal of Medicine. March 20, 2003. Vol. 348
no. 12.

EVALUACION DE
Assay of cAMP activity stimulated by -MSH
ACTIVIDAD
DE MC4R
1. Cell culture:
Human embryonic kidney (HEK 293) cell line;
2. Transfection of HEK293 cells with MC4R plasmid:
- Lipofectamine with Plus reagent;
- Transfection with Flag-GFP chimerical wild-type MC4R:

Transfeccin de clulas HEK 293 con plasmideo

conteniendo la informacin gnica de GFP-MC4R

MSH

Produccin de
AMPc

EFECTOS FUNCIONALES DE
MUTACIONES
MC4R
Functional effects DE
of obesity
associated
Melanocortin-4 Receptor Mutations
Base C hange
A-307-G
A-751-C
47-48insG
750 ins GATT
A-31-G
C-52-T
C-449 -T
A-508-G
C-493 -T
T-7 49-A
T-9 02-C

Effect on am ino acid

sequence
Val103 Ile
Ile251 Leu
16 +12 ami no-acids
Frames hift at 6th TM
Thr11Ser
Arg18Cys
Thr150I le
Ile170Va l
Arg165T rp
Leu250G ln
Ile301 Thr

Vaisse C, UCSF, 2002

NIe = normal

Membrane
expression

Nle
Nle
0
0
Nle
Nle
Nle
Nle

Nle

Basal
Act ivity
Nle
Nle
0
0

EC50 fo r MS H
stimu lation
Nle
Nle
Nle
Nle

Nle/

C Vaisse, NAASO, 2001

Alimentos de Alta Densidad Energtica Sedentarismo

2007
DIVERSOS GENES CANDIDATOS
Ahorro de gasto
energtico:

ADRB2, ADRB3, UCP1, UCP2,

UCP3

Hiperfagia:

DRD2, HTR2C, LEP, LEPR,

MC4R, NR3C1

Baja oxidation ACE, ADIPOQ, GNB3, IL6, INS,

de lpidos
LDLR, LIPE, RETN, TNFA
Hiperplasia del
tejido adiposo

PPARG, VDR

FTO: Fat mass and obesity associated

Adapted from Bouchard and Rankinen, 2007

FTO:

Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol.

2008 294: R1185

FAT MASS AND OBESITY ASSOCIATED

(6 variantes SNP)

FTO :

BMC Biochemistry 2007, 8:23

DEMETILASA DE ACIDOS NUCLEICOS

DEPENDIENTE 2-OXOGLUTARATE

Superfamilia de nono-heme dioxigenasas (dioxygenasas Fe(II)Fe(II)- y 2

2-oxoglutarato--dependientes).
oxoglutarato

ASOCIACION DE VARIANTE
RS S9939609 DEL GEN FTO
CON SOBREPESO Y OBESIDAD
SNP rs9939609 en gen FTO,
tipificado en 38,759 sujetos de 13 estudios.

Frayling TM et al, Science, 2007.

SNP rs9939609 en el gen FTO

Riesgo de Obesidad
Type 2 diabetes cases

WTCCC Cases
UK T2D Cases
UK T2D Genetics Consortium Cases

Non-diabetic controls
EFSOCH Controls
UK T2D Genetics Consortium Controls

Population-based
ALSPAC Mothers
NFBC1966
Oxford Biobank
Caerphilly
EPIC-Norfolk
BWHHS
InCHIANTI

OR alelo A, Obeso vs Normal

1.32
(1.26-1.39)
0.75

OR Homocigoto AA

1.0

1.5

1.67

UNIVERSIDAD DE CONCEPCIN
EN CAMPAA CONTRA LA OBESIDAD

Jorge G onzlez Cam arena

OBESIDAD GENES Y SUS

IMPLICANCIAS METABOLICAS

ESTRATEGIA TERRITORIAL INTEGRADA PARA INTERVENIR

LA OBESIDAD ESCOLAR

EVALUACION DEL ESTADO NUTRICIONAL

n = 2918 escolares de 6 a 11 aos de edad

Obeso
18%

Sobrepeso
22%

Bajo-peso
3%

Normal
57%

PORCENTAJE DE GRASA CORPORAL

VS PUNTAJE Z IMC
60

P< 0.0001
Porcentaje de Grasa Corporal

n = 2918 escolares
50

Obeso

40

30

Sobrepeso

20

Normopeso

10

Bajo peso
0
-3,0

-2,5

-2,0

-1,5

-1,0

-0,5

0,0

0,5

IMC Z-score

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

Genotipificacin del SNP rs9939609 del Gen

FTO mediante Hight resolution melting
EXTRAER DNA GENOMICO DESDE
LEUCOCITOS
AMPLIFICAR MEDIANTE PCR EN TIEMPO REAL EN UN
EQUIPO DE HIGHT RESOLUTION MELTING
USANDO EL FLUOROFORO EVA GREEN

ANALIZAR CURVAS DE
MELTING DIFERENCIALES

GENOTIPO ANCESTRAL

GENOTIPO
HOMOCIGOTO
GENOTIPO
HETEROCIGOTO

CURVAS DE MELTING NORMALIZADAS

N o r m a lis e d F lu o r e s c e n c e

100
80
60
40

Asignar valor cero

Obtener familias de
curvas diferenciales

20

75,10 75,15 75,20 75,25 75,30 75,35 75,40 75,45 75,50 75,55 75,60 75,65 75,70 75,75 75,80
deg.
TEMPERATURA

CURVAS
DIFERENCIALES
homocigoto

Normalised minus heterocigoto

FLOORESCENCIA

ANCESTRAL

ancestral
heterocigoto
heterocigoto
heterocigoto

heterocigoto
homocigoto
HETEROCIGOTO

heterocigoto
homocigoto

-5

heterocigoto
heterocigoto
HOMOCIGOTO

ancestral
ancestral

-10
75,10

75,15

75,20

75,25

75,30

75,35

75,40

75,45
deg.

TEMPERATURA C

75,50

75,55

75,60

75,65
ancestral

ancestral

75,70

75,75

75,80

PREVALENCIA DEL POLIMORFISMO

RS9939609 DEL GEN FTO
EN 366 ESCOLARES DE HUALPEN.

20%
30%

Homocigoto (AA)
Heterocigoto (AT)

Sin polimorfismo (TT)

50%

PREVALENCIA DEL POLIMORFISMO

RS9939609 DEL GEN FTO ESCOLARES SEGUN
ESTADO NUTRICIONAL.

Homocigoto

Riesgo Relativo

15%
22%

Heterocigoto

ORAA

2,08

( 1,15 3,74)

< 0,01

ORAT

1,33

(0,88 2,21)

ns

27%
29%

Sin
polimorfismo

IC: 95%

58%
45%

Normopeso

Obeso

Frayling
(adultos)

Riffo, Ulloa, Asenjo,

Aguayo (nios)

Prevalencia AA

16%

20%

Odd Ratio
obesidad de
sujeto AA

1,67

2,08

Odd Ratio
obesidad de
sujeto TA

1,32

1,33

Etnia

Caucsica

90% (Amerindio)

ASPECTOS ANTROPOMETRICOS
SEGUN POLIMORFISMO DEL GEN
FTO, EN ESCOLARES
Ancestral

Valores relativos a
polimorfismo ancestral

1,4

Heterocigoto
Homocigoto

1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2

BMIz

Cintura

Porcentaje grasa

OBESIDAD GENES Y SUS

IMPLICANCIAS METABOLICAS

OBESIDAD SE ASOCIA CON

RESISTENCIA A LA INSULINA
Indicadores Asociados a Resistencia a la Insulina
**
**

Valor Relativo a Gnero

Femenino Normopeso

2,25

****

****

****

****
****

****

2,00
1,75
1,50
1,25
1,00

0,75
0,50
0,25
0,00

Insulina

HOMA

TG/HDL

Fem Normopeso
Fem Obesa
Masc Normopeso
Masc Obeso

Concentracin relativa a
escolares normo peso sin SNP

INDICADORES ASOCIADOS A RESISTENCIA A LA INSULINA

SEGUN ESTADO NUTRICIONAL Y POLIMORFISMO DEL GEN
FTO.

Normopeso sin mutacin

Obeso sin mutacin
Obeso homocigoto

2,5

***

***

***

2
1,5

*
***

**

1
0,5
0
C-HDL

Triglicridos

HOMA-IR

TG/C-HDL

Adiponectina

Conclusiones

En poblacin chilena el polimorfismo rs rs9939609

del gen FTO tiene una prevalencia de un 20% a la
forma homocigota y 30 % a la forma heterocigota.

Los nios homocigotos para el SNP FTO tienen un

porcentaje de grasa corporal 10% superior
comparado con los portadores de la forma
ancestral del gen.

La asociacin obesidad con polimorfismo del gen

FTO aumenta la resistencia a la insulina

CUALES SON LOS MECANISMOS

MEDIANTE LOS CUALES EL
POLIMORFISMO FTO SE
ASOCIA A OBESIDAD?

FTO PARTICIPARA EN EL
CONTROL CENTRAL DEL APETITO

AS COMO TAMBIEN, TENDRIA UN

ROL EN LOS TEJIDOS PERIFERICOS

SNC: EL FTO ES SOBRE-EXPRESADO EN EL

HIPOTALAMO POR DEPRIVACION DE
ALIMENTOS EN MODELO MURINO

(+41%)

EFECTO DE LA MANIPULACION DE LA
EXPRESIO HIPOTALAMICA DEL GEN FTO EN
MODELO MURINO

PLoS ONE January 2010 | Volume 5 | Issue 1 | e8771

SNP RS9939609 DEL GEN FTO SE

ASOCIA CON INCREMENTO DE INGESTA
DE ALIMENTOS EN NIOS
**
**

N = 43

TT

66

TA

24

AA

International Journal of Obesity (2009) 33, 4245;

Meta-anlisis de datos GWAS (Genoma Wide

association studies) de un total de 32,387 sujetos de
ancestro Europeo.

Se incluyeron 15 estudios que analizaban entre 1,094

a 5,433 individuos.

IDENTIFICACION DE NUEVOS LOCUS ASOCIADOS

CON OBESIDAD Y CONFIRMACION DE LOCUS
PREVIAMENTE COMUNICADOS

Nat Genet. 2009 January ; 41(1): 2534.

LOCUS ASOCIADOS CON OBESIDAD Y SU EFECTO

SOBRE EL INDICE DE MASA CORPORAL

Gen

Cromosona

Frecuencia de
efecto del alelo
%

Rs9939609

FTO

16

41

0,33

rs6548238

TMEM18

84

0,26

rs17782313

MC4R

18

21

0,2

rs10938397

GNPDA2

45

0,19

rs7498665

SH2B1

16

41

0,15

rs10838738

MTCH2

11

34

0,07

rs11084753

KCTD15

19

67

0,06

rs2815752

NEGR1

62

0,1

SNP

Cambio IMC por

allelo (kg/m2)

Nat Genet. 2009 January ; 41(1): 2534..

EFECTO ADITIVO DE ALELOS

(INTERACCION: GEN X GEN)

+ 5 Kg
(1,60 m)

Nat Genet. 2009 January ; 41(1): 2534.

INTERACCION GEN X MEDIOAMBIENTE

IMPACTO ACTIVIDAD FISICA EN BMI,
SEGUN GENOTIPO FTO

Difference in BMI
(kg/m2)

2.5

Physically passive
Light or medium active
Hard or very hard active

2.0
1.5
1.0
0.5
0
-0.5 AT vs TT
-1.0

AA vs TT

N= 4,861 non-diabetic adults

and 3,3856 diabetic adults.
Andreasen CH et al Diabetes. 2008

GENES Y OBESIDAD
ES HORA DE COMENZAR SU
DIAGNOSTICO?
El polimorfismo altamente prevalente de FTO responde al
ejercicio fsico, reduciendo la grasa corporal.
Recientemente se han confirmado 8 locus de alta prevalencia
en poblacin caucsica.
Se pudiera establecer tempranamente un score de riego
gentico individual, resultante de la adicin de estos 8 locus.
La tecnologa actual lo permite de manera eficiente, con alta
precisin y costo razonable.

MEDICINA TERCER MILENIO

Predictiva
Preventiva
Genticamente Personalizada

GRACIAS