ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL

PRACTICA N4
Microbiologa Ambiental
MEDIOS DE CULTIVO. REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES. CLASIFICACION. PREPARACION
I.-REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES DE LOS MICROORGANISMOS
Los microorganismos de acuerdo a sus requerimientos nutricionales se clasifican en general en
AUTOTROFICOS y HETEROTROFICOS.
-MICROORGANISMOS AUTOTROFICOS: Son aquellos que obtienen su energa de la oxidacin de sustancias
inorgnicas simples
-MICROORGANISMOS HETEROTROFICOS: Son aquellos que requieren de compuestos orgnicos ms
complejos como fuente de carbono y nitrgeno, requieren del suministro de protenas, carbohidratos,
lpidos, vitaminas, sales inorgnicas y otros factores de crecimiento para la sntesis de compuestos
estructurales y citoplasmticos en su desarrollo.
II.-MEDIOS DE CULTIVO
DEFINICION
Son sustancias nutritivas lquidas o slidas, que se utilizan en el laboratorio para el crecimiento de los
microorganismos, pudiendo ser similares a sustratos naturales, en los cuales estos crecen normalmente
COMPOSICION
Sus componentes bsicos deben satisfacer las mnimas exigencias nutricionales para el desarrollo microbiano
y varan segn el tipo de bacteria. Incluyen agua, nutrientes como fuentes de nitrgeno, carbono y energa; y
en ciertos casos, factores de crecimiento. Se consideran adems para el crecimiento necesidades de oxgeno
(aerobios), CO2 parcial o total (microaerfilos o anaerobios) y condiciones ptimas de pH y temperatura de
incubacin.
UTILIDAD
Los medios de cultivo de acuerdo a su naturaleza pueden ser orgnicos e inorgnicos. La mayora de los
medios de cultivo empleados para el desarrollo inicial y aislamiento de microorganismos heterotrficos, son
ricos en componentes proteicos: pptidos, peptonas, proteosas, aminocidos, sales inorgnicas como
fosfatos y trazas de K y Mg.
El agar es el agente solidificante de un nutriente lquido, al igual que la gelatina y su principal componente es
un polisacrido de cadena larga, mayormente constituido por D-galactopiranosa.
CLASIFICACION
Segn su composicin y objetivos se clasifican de la siguiente manera:
1.-MEDIOS COMUNES
Aquellos que contienen los mnimos componentes nutricionales para organismos heterotrficos no
exigentes. Pueden ser:
-Medios lquidos: caldo nutritivo
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-Medios slidos: nutrientes compuestos de un medio lquido base, al que se le agregan sustancias orgnicas
de poco o nulo valor nutritivo como el agar o gelatina, para dar al medio la consistencia de gel. Ejemplo: agar
nutritivo. Un medio as nos permite el aislamiento de bacterias no exigentes al estado de pureza, a partir de
una fuente problema
-medios semislidos: compuesto por cualquiera de los medios lquidos antes mencionados, a los que se le
adiciona una cantidad suficiente de agar para obtener un estado de gel blando. Principalmente se usa para
estudios de motilidad macroscpica.
2.-MEDIOS ENRIQUECIDOS O SUPLEMENTADOS
Preparados para satisfacer los requerimientos nutricionales de bacterias ms exigentes. Se componen de un
medio basal ordinarios suplementado con factores de crecimiento como sangre, vitaminas, extracto de
levadura, caldo TSA etc. Pueden ser:
-Medios lquidos: caldo BHI, caldo TSA
-Medios slidos: Agar BHI, agar sangre, agar chocolate.
3.-MEDIOS SINTETICOS DEFINIDOS O QUIMICAMENTE DEFINIDOS
Que son preparados exclusivamente de sustancias qumicas.
-Medios sintticos simples: contienen carbono como fuente de energa, una fuente inorgnica de nitrgeno;
fosfato o sulfato y varias otras sales minerales. Ejemplo: medio mnimo de Davis
-Medios sintticos complejos: incorporan aminocidos, purinas, pirimidinas y otros factores de crecimiento
para cepas exigentes
4.-MEDIOS ESPECIALES
Son aquellos que adems de contener los requerimientos nutricionales bsicos, llevan en su composicin
sustancias inhibidoras con carcter selectivo y compuestos especficos e indicadores para poner de
manifiesto los principales caracteres bioqumicos esenciales para el diagnstico especfico. Comprenden:
-MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO: Que favorecen el crecimiento de uno o un grupo de microorganismos en
particular e inhiben en lo posible a otros de la microflora acompaante. Ejemplo: Agua peptonada alcalina
(APA), Caldo tetrationato
-MEDIOS SELECTIVOS: Que favorecen el aislamiento de un determinado grupo de microorganismos mediante
la obtencin de colonias. Todos son utilizados en condiciones slidas, Ejemplo: Agar Chapman, Agar Mitis
Salivarius, Agar Mac Conkey, Agar EMB, Agar SS
-MEDIOS DIFERENCIALES: Empleados para detectar reacciones bioqumicas con carcter diferencial de
grupos, gneros y especies microbianas. Ejemplo: Agar TSI, Agar LIA, Citrato de Simmons, Medio SIM.

III. PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVOS:
-Preparar medios de cultivo comunes. Agar nutritivo
-Preparar medios selectivos: Agar Mac Conkey

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MATERIALES:
-Medio de cultivo deshidratado (Agar Mac
Conkey)
-Balanza
- Matraces Erlenmeyer de un litro de capacidad
- Tapones de algodn

PROCEDIMIENTO:

-Pesar la cantidad requerida de los medios a preparar

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- Probetas de un litro
-Agua destilada
-Varillas o baguetas de vidrio
-Placas Petri
-Papel indicador de pH

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-Colocar la cantidad pesada en el matraz Erlenmeyer, adicionar agua destilada en la proporcin requerida.
Homogenizar la mezcla mediante la varilla de vidrio
-Colocar el matraz dentro de una olla con agua, y poner todo sobre un trpode provisto de una rejilla de
asbesto. Calentar la muestra, empleando la llama del mechero, hasta lograr la total disolucin de los
ingredientes
-Disueltos los componentes, enfriar a 50 55 C. Verificar el pH
-Esterilizar a la autoclave a 15 lb de presin, 121 C por 15 minutos. Terminado el tiempo de esterilizacin,
esperar que la aguja del manmetro descienda y extraer los medios
-Los medios slidos sometidos al proceso de esterilizacin y enfriados a 50 55 C, deben de repartirse en
promedio de 12 a 15 ml en placas Petri estriles en condiciones aspticas; cuando los medios se solidifican,
invertir las placas para evitar que el agua de condensacin se acumule sobre la superficie del agar.
-Incubar las placas a 37C por 24 horas, para control de esterilidad
-Rotular datos: nombre del medio y fecha de preparacin
CUESTIONARIO
1.- Evolucin de los medios de cultivo a travs del tiempo
2.-Desarrollar frmula, componentes y fundamento de los siguientes medios de cultivo:
1. - Agar Mac Conkey

8.- Agar TSI

2. - Agar EMB

9.- Agar Citrato de Simmons

3. - Agar SS

10.-Agar Mitis Salivarius

4. - Agar XLD

11.- Agar TSA

5. - Agar Sabouraud

12.- Agar TCBS

6.- Agar Plate Count

13.-Agar LIA

7.-Caldo lactosado

14.- Agar Mueller- Hinton (MH)

IV. REFERENCIAS

Aquiahuatl MA y Prez ML. 2004. Manual de Practicas del Laboratorio de Microbiologa

General. 1era Edicin Universidad Autnoma Metropolitana Unidad Iztapalapa. Mxico
Castaeda MT.
Madigan et al. 2003. Brock Biologa de los Microorganismos. 10ma Edicin. Pearson
Prentice Hall
PANREAC. 2003. Manual Bsico de Microbiologa. Espaa
Tortora et al. 2007. Introduccin a la Microbiologa. 9na Edicin. Editorial Mdica
Panamericana

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