Pruebas Bioquimicas

SUBMDULO: PROCESAR CULTIVOS BACTERIOLGICOS
PRUEBAS BIOQUMICAS PARA IDENTIFICACIN DE BACTERIAS

MTRA: Ma. Del Pilar Huerta Ruz
PRUEBAS
BIOQUMICAS
ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
Tincin de Gram
1.
2.
3.
4.
Cristal violeta
Lugol
Alcohol/Acetona
Safranina o Fuscina
Se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas
Poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana:
Grampositivas y Gramnegativas
RESULTADO
IMAGENES

PRUEBAS
BIOQUMICAS
ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Las bacterias Gram positivas retienen el colorante primario (cristal violeta)=prpura

Las bacterias Gram negattvas no retienen el colorante primario por lo que se tien del colorante de contraste (safranina) = rojo
Prpura
Rojas
Catalasa
Catalasa.
Con un asa de inoculacin (no hiero)recoger el centro de una colonia pura de 18-24 hrs. y colocarla sobre un portaobjetos limpio, agregar una
gota de agua oxigenada sobre el microorganismo

PRUEBAS
BIOQUMICAS
ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Perxido de hidrgeno
Se investiga la presencia de la enzima catalasa en el microorganismo, que es capaz de descomponer el perxido de hidrgeno o agua oxigenada
en agua y oxgeno, que se desprende en forma de burbujas en el medio.
La presencia de la enzima catalasa en el microorganismo,

Si el microorganismo es catalasa + se observar de inmediato la aparicin de burbujas (liberacin de gas)

PRUEBAS
BIOQUMICAS
ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Citocromo- oxidasa
Oxidasa.
Sobre el Reactivo impregnado en disco colocar con un aplicador de madera en forma abundante cultivo puro de colonias. No usar asas o
alambres de inoculacin. Los productos de oxidacin formados al esterilizar el alambre dan reacciones falsas positivas.
Tetrametilo de la p- fenilendiamina

PRUEBAS
BIOQUMICAS
ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
Identificar bacterias que contengan el Sistema de citocromos que nos permita diferenciar gramnegativos
Identificar microorganismos que carecen de la enzima.

Prueba positiva: Vire del indicador de incoloro a prpura o violeta en 10 segundos. Espere un tiempo Mximo de 60 segundos.
Prueba Negativa: Sin cambio del indicador en los primeros 60 segundos.
RESULTADO
IMAGENES

PRUEBAS
BIOQUMICAS
ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
O/F
Oxidacin/
Fermentacin
Se inoculan dos tubos por picadura y uno de ellos se coloca en sello de aceite mineral estril y otro tubo sin el sello. Los tubos son incubados a
37 C durante 24hrs.
Medio OF con Dextrosa de Hugh y Leifson.

Aceite mineral

PRUEBAS
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ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Identificar bacterias, constituye un pilar importante de los criterios de Cowan y Steel en las pruebas de Bioqumicas de Seleccin Primaria para la
identificacin bacteriana.
-Utilizacin de Hidratos de carbono por la va oxidativa o va fermentativa.

-Movilidad y
- produccin de gases
Medio OF con Dextrosa de Hugh y Leifson. (Verde)
A= Amarillo/ verde =oxidativa. Los microorg. oxidativos producen cido slo en el tubo abierto expuesto al oxgeno atmosfrico.
B=Amarillo/amarillo=fermentativa

PRUEBAS
BIOQUMICAS
ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
C= Verde/ verde= no utiliza el hidrato de carbono (asacaroltico). Observe el ligero vire a alcalino (azul) debido a la utilizacin de protenas
(peptonas) del medio.

PRUEBAS
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EL MICROOG/
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REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Urea
Ureasa.
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, estriar la superficie del pico de flauta. Algunos microorganismos pueden requerir mayor tiempo de
incubacin.

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Se recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color. Incubacin:

En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 C.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de carbono. Estos productos alcalinizan el
medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo.
Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.
Agar urea

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EL MICROOG/
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REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
El medio vira con el rojo de fenol del amarillo al rojo.
Movilidad
(Medio Mio)
UR
EA
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, inocular por puncin profunda con ansa recta.
Incubacin:
En aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37 C.
La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas all de la lnea de inoculacin.
RESULTADO
IMAGENES

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Movilidad
Medio Mio
Morado
1.Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas all de la lnea de siembra. 2.Resultado negativo: Crecimiento solo en la lnea de
siembra

PRUEBAS
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EL MICROOG/
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Ornitina
descarboxilasa (Medio Mio)
Descarboxilasa
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES

PRUEBAS
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ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
La descarboxilacin es el proceso por el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas especficas atacan los aminocidos en su
carboxilo terminal (COOH), para formar una amina o diamina y CO2.
Actividad de ornitina
Medio Mio
Descarboxilasa +=: color prpura.
-=: color amarillo.
A veces se puede desarrollar un color violceo en la superficie del medio

PRUEBAS
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EL MICROOG/
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REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
Indol
(Medio Mio)
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES

PRUEBAS
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EL MICROOG/
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REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Kovacs o de Erlich.
El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de
agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo.
Produccin de indol.
Se realiza despus de las dos anteriores.
Medio Mio
1.Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador. 2.Resultado negativo el color del reactivo revelador permanece incoloro
amarillento

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
Descarboxilacin de la Lisina
Descarboxilasa y deaminasa .
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Siembra Por puncin profunda con aguja de inoculacin. Incubacin

En aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 C.
La lisina es el sustrato para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa.

Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta
1.Descarboxilacin de la lisina: +=pico y fondo violeta.
2 -=:pico violeta/fondo amarillo:
3. Desanimacin de la lisina: +=pico rojizo/fondo amarillo
4.Produccin de cido sulfhdrico:+= ennegrecimiento del medio, pico y fondo

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
5.Produccin de gas
Agar de hierro lisina

(LIA)
Morado
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
-galactosidasa
4/5
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES

PRUEBAS
BIOQUMICAS
ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
-galactosidasa.
El caldo se distribuye aspticamente en tubos estriles, realizar una suspensin bacteriana densa del microorganismo. Incubar a 37. C desde 1 a
24 Hrs,
Orto-nitro-fenil--D-galacto-piransido (OPNG)
la presencia en el microorganismo de la enzima galactosidasa, utilizando el orto-nitro-fenil--D-galacto-piransido (OPNG)
Esta prueba permite detectar con mayor rapidez la fermentacin de la lactosa, al evidenciar la enzima -galactosidasa ms rpidamente.
Caldo de OPNG
1.Prueba positiva: Aparicin de un color amarillo establece por liberacin del o-nitrofenol.
2.Prueba negativa: incoloro despus de 24 hrs

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
Citrato
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES

PRUEBAS
BIOQUMICAS
ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie del pico de flauta un inculo ligero , usando una ansa sin arrastrar el agar.
Incubacin
A
35-37
C,
durante
24-48
horas,
en
aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 das de incubacin.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El
desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato.
Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos
y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.
Mediante esta prueba se determina si el M es capaz de utilizar el citrato como nica fuente de carbono y energa

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
Agar Citrato de Simons

1.Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad
2.Negativo: El medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color
RESULTADO
IMAGENES

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Agar Hierro de Kligler (AHK)

La inoculacin del medio se realiza en picadura hasta unos 0,6 cm del fondo, y sin volver a cargar se siembra en estras la superficie del pico de
flauta. Inoculacin: a 35 a 37.C durante 18 a 24 Hrs
La lactosa est presente en una concentracin 10 veces superior a la glucosa, el sulfato de hierro se adiciona al medio para detectar la formacin
SH2 por la bacteria, originndose sulfuro ferroso que es de color negro. El indicar pH rojo fenol es amarillo a un pH cido, rojo a un pH alcalino y
anaranjado rojizo a un pH inicial del medio 7,4
a)Capacidad de un microor. de atacar un hidrato de carbono (glucosa y lactosa o ambas)
b) Produccin o no de gases: CO2 e H2 como productos finales del metabolismo de los hidratos de carbono.
c)Produccin de cido sulfhdrico SH2 como productos finales del metabolismo de los hidratos de carbono.
Agar Hierro de Kligler
1).Fermentacin de la glucosa y no de la lactosa: pico alcalino(rojo) y fondo cido (amarillo)

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
2) Fermentacin tanto de la glucosa como de la lactosa: Pico cido, fondo cido (amarillos ambos)
3) No hay fermentacin ni de glucosa ni lactosa: Pico y fondo alcalino (ambos rojos)
2a 1
b
Voges Proscauer
Por inoculacin directa, a partir del cultivo en estudio. Incubacin

En aerobiosis, a 35-37C hasta por 3 das
Aadir 0.2 ml de hidrxido de potasio al 40% y 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etlico absoluto a 2.5 ml de cultivo. Agitar vigorosamente el
tubo, y dejar a temperatura ambiente durante 10-15 minutos. Observar el color de la superficie del medio.

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
hidrxido de potasio al 40% y 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etlico absoluto a 2.5 ml de cultivo
Se basa en la conversin de acetil-metil-carbinol (acetona), el cual es el metabolito final de la glucosa, a diacetilo a travs de la accin del
hidrxido de potasio al 40% y el oxgeno atmosfrico.
Observar si el microorganismo fermenta la glucosa por la va butanodilica. Si es as , se forma un producto intermedio (acetona) que forma un
complejo de color rojizo con el -naftol
Medio de Clark y Lubs (caldo RM/VP)
1.Positivo: Desarrollo de un color rojo en pocos minutos, despues de una completa agitacin del tubo.
2.Negativo: Ausencia del color rojo

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
1
2
Reduccin de Nitratos
Las bacterias se inoculan en medios conteniendo nitrato potsico
El nitrito procedente de la reduccin de clulas puede detectarse aadiendo alfanalfilamina y cido sulfanlico producindose un color rojo.

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
Algunas bacterias pueden usar nitratos como aceptor final de e- en la respiracin. el nitrato puede ser reducido a nitrito o en un paso ms a gases
(xidos de nitrgeno). Las Enterobacterias y Pseudomonas son usualmente positivos.
Se puede saber si el nitrato puede haberse reducido a ms que a nitritos producindose gas. Si al aadir zinc en polvo no hay color rojo es que
no hay nitrato porque se ha reducido a gas (desnitrificacin)
.
Positivo = color
rojo
Negativo=
ausencia de
color

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EL MICROOG/
TCNICA
Fermentacin
de
carbohidratos,
produccin de
gas y H2S
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
Siembra
A partir de un cultivo
puro, sembrar en TSI,
picando el fondo y
extendiendo sobre la
superficie del medio.
Incubacin
A 35-37C durante 24
horas, en aerobiosis.
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
Por fermentacin
de azcares, se
producen cidos,
que se detectan
por medio del
indicador rojo de
fenol,el cual vira
al color amarillo
en medio cido.
El tiosulfato de
sodio se reduce a
sulfuro de
hidrgeno el que
reacciona luego
con una sal de
hierro
proporcionando el
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
El agar TSI es un
medio
universalmente
empleado para la
diferenciacin de
enterobacterias,
en base a la
fermentacin de
glucosa, lactosa,
sacarosa y a la
produccin
de
cido sulfhdrico.
RESULTADO
IMAGENES
Agar TSI
3. Pico rojo fondo rojo: el
microorg. es no
fermentador de azcares.
4. La presencia de
burbujas, o ruptura del
medio de cultivo, indica
que el microorg. produce
gas.
5.EL ennegrecimiento del
medio indica que el
2
4
1. Pico rojo fondo

amarillo: el microorg.
fermenta solamente la
glucosa.
2. Pico y fondo

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EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
tpico sulfuro de
hierro de color
negro.
Mismos
fundamentos que
el medio AHK
Determinacin
de indol,
movilidad y
cido
sulfhdrico
(SIM)
Siembra
puro del
microorganismo en
estudio, inocular por
puncin profunda con
ansa recta.
reactivo de Kovacs
o de Erlich
El triptfano es un
aminocido
constituyente de
muchas
peptonas, y
particularmente
de la triptena,
que puede ser
oxidado por
algunas bacterias
RESULTADO
IMAGENES
microorg. produce cido

sulfhdrico.
Movilidad
-Produccin de
indol
y cido sulfhdrico
Medio Sim
Amarillo
Cepas mviles:
producen turbidez del
medio, que se extiende
ms all de la lnea de
siembra.
Cepas H2S positivas:
ennegrecimiento a lo
largo de la lnea de
amarillo el microor.
fermenta glusosa,
lactosa y/o sacarosa

PRUEBAS
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ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
Incubacin
En aerobiosis, durante
18-24 horas a 35-37 C.
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
para formar indol.

En el proceso
interviene un
conjunto de
enzimas llamadas
triptofanasa. El
indol producido se
combina con el
aldehdo del
reactivo de Kovac
s o de Erlich,
para originar un
compuesto de
color rojo.
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
siembra o en todo el
medio.
Cepas indol positivas:
desarrollo de color rojo
luego de agregar el
reactivo de Kovacs o de
Erlich.
Indol positivo
H2S +

PRUEBAS
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EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
Rojo de metilo al
0.04%,
Rojo de Metilo
Siembra
Por inoculacin
directa, a partir del
cultivo en estudio.
Incubacin
En aerobiosis, a 3537C hasta por 3 das.
Aadir unas gotas de

una solucin de rojo
de metilo al 0.04%,
observar el color del
medio.
DETERMINA:
La glucosa puede
ser metabolizada
por los microorg,
a
travs
de
distintas
vas
metablicas.
Segn
la
va
utilizada,se
originarn produc.
finales
cidos
(cido
lctico,
cido
actico,
cido frmico), o
produc.
finales
neutros
(acetil
metil
carbinol).
Esta diferencia en
el
metabolismo
bacteriano, podra
ser
reconocida
por la adicin de
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
revelar la
presencia de
productos cidos
RESULTADO
IMAGENES
Medio de Clark y Lubs

(caldo RM/VP)
Positivo: color rojo.
Negativo: color amarillo.

PRUEBAS
BIOQUMICAS
ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
RESULTADO
IMAGENES
un
indicador
como rojo de
metilo,para
revelar
la
presencia
de
productos cidos
Cloruro frrico
Fenilalanina
Fenilalanina
deaminasa .
Siembra
puro de 18-24 horas,
sembrar un inculo
denso estriando la
superficie del medio.
Incubacin
Incubar de 18 a 24
horas a 35-37 C, en
aerobiosis.
El
aminocido
fenilalanina sufre
la desaminacin
oxidativa
catalizada por la
enzima
fenilalanina
deaminasa
(es
una
flavoprotena),par
a producir cido
fenilpirvico
y
amonaco.
La
presencia
del
Produccin de
cido
Agar Fenilalanina
El anlisis de los
resultados debe
realizarse dentro de los
primeros 5 minutos.
Positivo: desarrollo de
color verde plido a
intenso en el pico de
flauta y en el lquido de
condensacin.

PRUEBAS
BIOQUMICAS
ENZIMA QUE POSEE

EL MICROOG/
TCNICA
REACTIVO
UTILIZADO PARA
DETERMINAR LA
REACCIN
Luego,
se
debe
realizar el revelado:
agregar unas gotas de
una solucin acuosa
de cloruro frrico al
10%
PRINCIPIO DE
LA PRUEBA
DETERMINA:
cido fenilpirvico
se demuestra con
el agregado de
cloruro frrico en
medio cido, con
el cual se forma
un quelato de
color
verdoso
entre el cido fenil
pirvico y los
iones
Fe3+.
Adems, en este
medio se suele -
MEDIO DE CULTIVO
UTIZADO ,COLOR /E
INTERPRETACIN
Adems, en este
medio se suele
poner en
evidencia la
produccin de
pigmentos
melnicos, como
en el caso de
Morganella
morganii.
RESULTADO
IMAGENES
Negativo: sin cambios de

color. El medio
permanece amarillo
debido al color del
reactivo cloruro frrico.

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Las bacterias Gram positivas retienen el colorante primario (cristal violeta)=prpura

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La presencia de la enzima catalasa en el microorganismo,

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Identificar microorganismos que carecen de la enzima.

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Medio OF con Dextrosa de Hugh y Leifson.

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-Utilizacin de Hidratos de carbono por la va oxidativa o va fermentativa.

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Se recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color. Incubacin:

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El medio vira con el rojo de fenol del amarillo al rojo.

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Siembra Por puncin profunda con aguja de inoculacin. Incubacin

La lisina es el sustrato para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa.

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Agar de hierro lisina

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Agar Citrato de Simons

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Agar Hierro de Kligler (AHK)