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Medios de Cultivo, Algo
Medios de Cultivo, Algo
Bacteriologa II.
OBJETIVO
El objetivo de la presente prctica es aprender a preparar correctamente los principales de medios de cultivo
que se utilizan en el laboratorio de Bacteriologa, como instrumentes de suma importancia en la
dignosticacin de bacterias patgenas dentro de los individuos. Asimismo, conocer los diferentes tipos de
cultivo, su calcificacin y su importancia en la diagnosticacin.
INTRODUCCIN
Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la superficie de un
medio slido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azcares simples
hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie
bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo
slido donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada
bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones
de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer
como cultivo puro de un solo tipo de bacteria. Muchas especies bacterianas son tan parecidas
morfolgicamente que es imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para
identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de
cultivo especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las
especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est presente. Otras veces el medio de
cultivo contiene determinados azcares especiales que slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos
medios se aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es
fermentado y se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan
gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Con otros medios de cultivo
se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: as, algunas bacterias
con enzimas hemolticas (capaces de romper los glbulos rojos) producen hemlisis y cambios apreciables
macroscpicamente en las placas de agarsangre. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales
en el laboratorio de microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las
enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias.
Los requerimientos necesarios para un cultivo de bacterias son:
Medio de carbono.
Presencia o ausencia de oxigeno.
Atmsfera adecuada.
Agaragar.
Para un cultivo adecuado de bacterias y microorganismos, se utiliza el agar, un gel coloidal formado por
hidratos de carbono, de extendido uso comercial, y que proviene de las paredes celulares de varias especies de
algas rojas, en concreto de miembros orientales del gnero Gelidium. Se utiliza como agente solidificante en
la preparacin de dulces, cremas y lociones, as como en las conservas de pescado y carne; para texturizar y
emulsionar los helados y postres congelados; para clarificar, durante el proceso de fabricacin del vino y la
elaboracin de la cerveza; y tambin para dar apresto (almidonar) las telas. Adems, es un excelente medio de
cultivo de bacterias, ya que no se disuelve por el efecto de las sales, ni se consume por la accin de la mayora
de los microorganismos.
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El agar se extrae de las algas marinas hacindolas hervir. Posteriormente, el producto resultante se deja
enfriar y secar, y al final se solidifica en pastillas o en escamas. En un principio se llam agaragar, un
trmino que se utiliza en Malasia para denominar a un alga local.
Pero existen diferentes tipos de agar de acuerdo a las especificidades que cada uno tenga, sin embargo cada
tipo de agar debe de cumplir con los requerimientos:
Fuente de energa. Las bacterias pueden ser fottrofas o quimiottrofas. Las fotottrofas absorben energa
del sol y las quimiottrofas de compuestos orgnicos.
Fuente de carbono.
Fuente de nitrgeno. Las bacterias pueden obtener el nitrgeno atmosfrico a travs de las protenas o por la
degradacin de aminocidos o pptidos.
Azufre y fosfatos. La obtienen como elemento(S), y como fosfatos en sales (P).
Vitaminas.
Agua. Medio de transporte que permite una mejor absorcin de los nutrimentos.
Tambin requiere de los requerimientos nutricionales ptimos para su desarrollo:
Protenas. Se suministran generalmente peptonas, que se encuentran disponibles en el comercio, preparadas
por digestin parcial de carne con enzimas peptdicas; consisten en polipptidos, dipptidos y aminocidos.
Carbohidratos. Sumistran carbono para la sntesis, y adems su fermentacin libera energa utilizable en el
metabolismo.
Factores accesorios de crecimiento. Son tambin requerimientos por algunas bacterias. Entre ellos estn las
vitaminas del complejo B; estas suministran enzimas necesarias para que las bacterias que son incapaces de
sintetizar otros factores necesarios para algunas bacterias son obtenidos de los nutrimentos ms complejos.
Sales minerales. Elementos como K, Ca, Na, etc.; tambin son requeridas por algunas bacterias en su
desarrollo.
Atmsfera. Algunos microorganismos precisan oxgeno para su desarrollo, otros son incapaces de
reproducirse en presencia de este elemento, en cambio otros organismos pueden crecer en una atmsfera con
oxgeno, logran sobrevivir y crecer sin el, se les llama anaerobios facultativos.
Presin osmtica. Las clulas pueden encogerse y ser destruidas en soluciones hipertnicas; inversamente se
rompen por entrada de agua, en las soluciones hipotnicas.
Temperatura. La temperatura para la cual los organismos microbianos crecen mejor, es considerada como
temperatura ptima.
Luz. La mayora de las bacterias se desarrollan mejor en ausencia de luz. La luz ultravioleta puede ser letal.
Reaccin. La mayora de las bacterias crece en un medio ligeramente alcalino (pH 7.2 a 7.6). Los hongos
crecen con facilidad en los medios cidos (pH 5).
Actualmente existen diferentes formas y mtodos de cultivar en el mercado, ya que pueden cultivarse en
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Peptona de casina 10 g
Peptonas de carne 10 g
NaCl 5 g
Lactosa 10 g
Sacarosa 10 g
Dextrosa 1 g
Sulfato de hierro y amonio 0.2g
Tiosulfato de sodio 0.2g
Rojo de fenol 0.25g
Agar 13 g
CIT
Utilizacin del citrato.
Medio inclinado de color verde.
Estado slido.
pH 6.9 + 0.2
Fosfato dihidrogenado de amonio 1.00 g
Fosfato dipotsico. 1.00 g
NaCl 5.00 g
Citrato de sodio 2.00 g
MgSO4 0.20 g
Agar 15.00 g
Azul de bromofenol 0.08 g
LIA
Lisina y arginina.
Medio inclinado de color violeta.
Estado slido.
pH 6.7 + 0.2
Peptona de gelatina 5 g
Extracto de levadura 3 g
Dextrosa 1 g
LLisina 10 g
Citrato de hierro y amonio 0.5g
Tiosulfato de sodio 0.04g
Prpura de bromofenol 0.02g
Agar 13.5g
SIM
Sulfato, indol y movilidad.
Medio plano de color amarillo.
Estado semislido.
pH 7.3 + 0.2
Peptona de caseina 20 g
Peptona de carne 6.1g
Sulfato de hierro y amonio 0.2g
Tiosulfato de sodio 0.2g
Agar 3.5g
MIO
Movilidad, indol, ortinina.
Medio plano de color prpura.
Estado semislido.
pH 6.5 + 0.2
Extracto de levadura 3.0 g
Peptona de gelatina 10.0 g
Ed. Interamericana.
Pgs. 146 147.