Inmunologa Molecular

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Resea
Propiedades moleculares de las subclases de IgG humanas y sus implicaciones en el
diseo de anticuerpos monoclonales teraputicos contra enfermedades infecciosas
Vashti Irania, Andrew J. Guy, Dean Andrew, James G. Beeson, Paul A. Ramsland, Jack S.
Resumen
Anticuerpos monoclonales estn siendo desarrollados como teraputicos para complementar drogas y
vacunas, o para llenar el vaco donde ninguna droga o vacuna existe. Estos anticuerpos teraputicos
(ThAb) pueden ser especialmente importantes para enfermedades infecciosas en las cuales hay
resistencia antibitica, patognesis mediada por toxinas, o patgenos emergentes. La estructura nica
de los anticuerpos determina la naturaleza especfica de sus efectos o funciones, por lo que al
desarrollar ThAb, los efectos o funciones deseados necesitan ser considerados e integrados en los
procesos de diseo y desarrollo para asegurar la mxima eficacia y seguridad. Es crtico tener en
consideracin la subclase de los anticuerpos, y es notable que casi todo ThAb que est licenciado o
actualmente en desarrollo, utiliza una IgG1 como cimiento. Esta resea describe las principales
propiedades estructurales que varan entre cada subclase, cmo es que estas propiedades afectan la
inmunidad funcional, y discute los diferentes acercamientos usados para estudiar la respuesta de las
diferentes subclases a enfermedades infecciosas. Tambin analizamos los factores asociados a la
seleccin de las subclases de anticuerpos durante el diseo de las ThAb y subrayamos circunstancias
donde las diferentes propiedades de las subclases pueden ser beneficiosas al ser aplicadas contra
enfermedades infecciosas especficas. Estos enfoques son crticos para el futuro diseo de ThAb y para
el estudio de la inmunidad naturalmente adquirida y la inducida por vacunas.

1.

Introduccin

El descubrimiento de Emili von Behring de las antitoxinas

para la difteria, ttano y ntrax en 1901, llev
eventualmente al descubrimiento de los anticuerpos. Un
siglo despus, el uso de anticuerpos teraputicos (ThAb) se
ha vuelto una de las reas de mayor crecimiento de la
industria farmacutica; aun as, irnicamente, el desarrollo
de ThAb monoclonales contra enfermedades infecciosas ha
sido lento, comparado con la mayora de otros campos.
Queda todava un considerable vaco de conocimiento en la
identificacin de los roles de ThAb contra enfermedades
infecciosas especficas, as como las propiedades
moleculares exactas requeridas para asegurar que los ThAb
induzcan las funciones deseadas, evitando reacciones
adversas. Es bien sabido que los principales isotipos de
inmunoglobulinas humanas tienen funciones estructurales
nicas que les permiten realizar funciones inmunolgicas
especficas (Fig. 1). En esta resea, nos concentramos en IgG
y sus subclases y resaltamos la compleja relacin estructurafuncin, que es crtica para desarrollar ThAb monoclonales
ms seguros y efectivos (TablaS1). Situamos este
conocimiento en el contexto de enfermedades infecciosas y
resaltamos cmo los estudios deberan evaluar ahora las
mejores subclases de IgG o las propiedades moleculares

requeridas para tratamientos efectivos de enfermedades

infecciosas especficas.
Actualmente, un amplio repertorio de ThAb monoclonales
estn licenciados, con cientos ms en desarrollo preclnico y
clnico. Estos ThAb son administrados para un amplio rango
de enfermedades, aunque la gran mayora son usados para
tratar cncer, desrdenes autoinmunes y trasplantes (Fig. 2A
y tabla S2). Es interesante notar que a pesar del claro papel
que los anticuerpos desempean contra muchas
infecciones, slo hay dos ThAb monoclonales licenciados
que tienen como objetivo agentes infecciosos (Palivizumab
contra el virus sincitial respiratorio humano y Raxibacumab
contra Bacillus anthracis) (Tabla 1). La mayora de ThAb
licenciados son de tamao completo en vez de fragmentos
Fab (Fig. 2B). Los beneficios de usar ThAb de tamao
completo incluyen mayor vida media en suero como
resultado de la interaccin con FcRn, efecto o funcin
mejorados mediante el acoplamiento con receptores Fc y,
en algunos casos, una neutralizacin ms efectiva
comparada con el fragmento Fab correspondiente. La
mayora de los ThAb aprobados anticuerpos IgG
humanizados o completamente humanos. Anticuerpos
quimricos o basados en murinae (ratas) conllevan un riesgo
incrementado de reacciones anti murinicas en los pacientes.,
y ha habido un movimiento general hacia el uso de un
andamio humano en el desarrollo de potenciales ThAb.

Mientras el uso de IgG intacta permite la seleccin de

subclases de IgG para desempear funciones efectoras
especficas, esto no es reflejado en el rango actual de
anticuerpos licenciados en los que la mayora son IgG1 (Fig.
2D y Tabla S2).
Probablemente, esto es porque la IgG muestra funciones
efectoras potentes, siendo la ms predominante de las
subclases de suero, y fue el cimiento usado en los primeros
ThAb aprobados. Interesantemente, no existen ThAb de
IgG3 aprobadas, con posibilidad de que esto sea debido a (i)
una afinidad aumentada a protelisis debido a una extensa
regin bisagra, (ii) los muchos alotipos de IgG3 entre
diferentes poblaciones, (iii) que las IgG3 no puedan ser
purificadas con protena A, o (iv) la reducida vida media en
suero de la IgG3 comparada con otras subclases (Tabla S1).
En este anlisis, proveemos una visin concisa del efector
conocido de la IgG humana y propiedades de subclases
(Seccin 2) y discutimos cmo est informacin puede ser
usada en el diseo de ThAb para enfermedades infecciosas
(Seccin 3).

2.

Propiedades moleculares de las

subclases de IgG relevantes para
anticuerpos teraputicos

Las IgG consisten de dos cadenas pesadas y dos cadenas

ligeras con las principales caractersticas moleculares
descritas en la Fig. 1B. En la IgG, la regin del fragmento de
unin al antgeno (Fab) contiene al paratope, y puede ejercer
diferentes efectos, haciendo posible las interacciones con el
antgeno (por ejemplo, bloqueando una protena de
reconocimiento del hospedero o inhibiendo una
toxina/enzima de un patgeno). Mientras tanto, la regin de
fragmento cristalizable (Fc) interacta con una variedad de
molculas accesorias para mediar funciones efectoras
indirectas, tales como citotoxicidad celular dependiente de
anticuerpos (ADCC), fagocitosis celular dependiente de
anticuerpos (ADCP) y citotoxicidad dependiente de
complemento (CDC) (Fig. 3A y B). Las funciones efector
mediadas por Fc son especialmente importantes contra
enfermedades infecciosas donde respuestas celulares y de

complemento son importantes para la eliminacin eficiente

del patgeno.
Las propiedades estructurales y funcionales de las subclases
de IgG varan, as como su respuesta se perfila contra
diferentes enfermedades infecciosas, y estas diferencias
pueden ser utilizadas en el desarrollo de ThAb efectivos. A
pesar de que las cadenas pesadas comparten ms del 90%
de identidad en sus secuencias entre las subclases de IgG,
hay diferencias en los residuos expuestos en la superficie en
los dominios constantes (CH1, CH2 y CH3), as como una
variacin sustancial en la regin bisagra [hinge region] (Fig.
3C, D y Tabla S1). Es la estructura de bisagra la que confiere
muchas de las propiedades nicas para cada subclase de IgG,
como estabilidad, flexibilidad y distancias abarcadas por las
dos Fab y la Fc acomodadora. Considerablemente, algunas
reas del Fc y de la bisagra que difieren entre subclases de
IgG, claramente se sobreponen con residuos que se sabe
estan involucrados con unirse con receptores activadores e
inhibidores Fc (FcR), el receptor neonatal para IgG (FcRn)
y el componente complemento C1q (Fig. 3A and B). La
ocurrencia de diferencias en aminocidos clave en los sitios
de unin de estas molculas efectoras, ayuda a explicar las
diferencias observadas en las propiedades efectoras de las
subclases de IgG (Tabla S1). Esta informacin estructural y
molecular es importante al escoger una subclase como base
para un anticuerpo teraputico o para introducir cambios en
aminocidos clave para adaptar anticuerpos para un
propsito especfico.
2.1. Sitio de unin en GgG-Fc para FcyRs activadoras e
inhibidoras
La regin de fragmento cristalizable (Fc) de las IgG
interacta con diversos FcRs para estimular y regular
el flujo de mecanismos efectores. Hay cinco
receptores activadores, llamados FcRI (CD64), FcRIIa
(CD32a), FcRIIc (CD32c), FcRIIIa (CD16a) y FcRIIIb
(CD16b),y un receptor inhibidor, FcRIIb (CD32b). Las
subclases de IgG varan en su habilidad de unirse a
FcR, y esta diferencia en la unin determina su
habilidad para desencadenar un gran rango de
respuestas funcionales.

Fig. 1. Estructura de un anticuerpo y

nomenclatura. (A) Los potenciales
isotipos, subclases y alotipos de
inmunoglobulinas en humanos.
Tanto la letra como el cdigo son
provistos para cada alotipo.
(B)
Esquema
ilustrando
la
estructura bsica de un anticuerpo y
su nomenclatura asociada. La
cadena ligera (en marrn) consiste
de un dominio variable (VL) y uno
constante (CL), mientras que la
cadena pesada (en gris) consiste de
un dominio variable (VH) y tres
dominios constantes (CH1, CH2,
CH3). Uniones de disulfuro
intercatenarias en el rango de la
regin bisagra estabilizan el total de
la estructura del anticuerpo. Las
regiones
determinantes
de
complementariedad (CDR, rayas
cruzadas) determinan especificad
antignica. Los patrones de
glicosilacin
pueden
tambin
afectar la funcin (en verde).

Fig. 2 Estructura y dianas de anticuerpos teraputicos licenciados. La lista actual (2014) de

anticuerpos teraputicos que han sido licenciados para su uso en EE.UU. y la UE los clasifica en (A)
enfermedad para la que fueron aprobados inicialmente, (B) estructura del anticuerpo (tamao
completo o fragmentos Fab), (C) tipo de especie del anticuerpo (e.j. murina, quimrica, humanisada,
totalmente humana), y (D) subclase de anticuerpo. Estas figuras fueron hechas con datos de la
Sociedad de Anticuerpos (2014) y la tabla de datos usada para preparar estas cifras est provista en
los materiales suplementarios (Tabla suplementaria S2). *Panel A: otras indicaciones incluyen
prevencin de cogulos de sangre, prdida de masa sea, asma, degeneracin macular,
hemoglobinuria nocturna paroxstica y sndrome de Mackle-Wells.

Fig. 3 Entendimiento estructural para las interacciones Fc y las diferencias entre subclases de IgG. (A)
Un esquema generalizado de un anticuerpo con sitios de adherencia mayores [receptores Fc
(magenta), C1q (cian) y FcRn(morado)] superpuestos. (B) Estructura dristalina de la regin Fc de la
IgG1 (PDB: 1FC1) (Deisenhofer, 1981) con todas las diferencias de aminocidos entre subclases
resaltadas. Los residuos que difieren de la IgG1 estn en negrita. Los allotipos (alelos de un
anticuerpo) usados fueron IgG1 (G1m,17), IgG2 (G2m..) y IgG3 (G3m5*). (D) Alineacin de los
residuos de bisagra entre las cuatro subclases. Los residuos estn numerados usando el esquema de
numeracin de la UE; este esquema est basado en secuencias de IgG1 y por ende no asigna nmeros
para la mayor parte de la secuencia bisagra de IgG3 (por ser muy larga). Las figuras B y C fueron
construidas usando Accrelys Discovery studio visualizer (versin 3.5).
Por ejemplo FcRIIIa es el mayor receptor involucrado en la
activacin de ADCC y la IgG3 seguida inmediatamente de la
IgG1 muestran las afinidades ms altas por este receptor,
reflejando su actividad para inducir potencialmente ADCC.
La regin de unin de FcR en la IgG incluye partes de CH2 y
la bisagra, con la unin influenciada por glicosilacin en
N297. Residuos especficos que interactan con FcR en la
IgG han sido identificados por medio de cristalografa de
rayos X de complejos de IgG1-Fc con los diferentes FcRs.
Muchos de estos estudios han demostrado que hay residuos
conservados en la IgG involucrados en la unin con todos los

FcyRs. Sin embargo, otros residuos de IgG varan en su

interaccin con los diferentes FcyRs y algunos de estos
residuos difieren entre las subclases de IgG, lo que ayuda a
explicar los diferentes perfiles de unin de FcyR en las
subclases de IgG. Esto ha proporcionado una visin
especfica de los residuos requeridos para la interaccion de
IgG con los receptores involucrados en ADCC y ADCP. La
posibilidad de usar secuencias especficas de subclases para
adaptar la unin de diferentes FcyRs debe ser considerada
cuando se desarrolle la IgG teraputica con las funciones
efectoras dependientes de anticuerpos deseados.

2.2 Deposicin del complemento y CDC por IgG

En el clsico camino del complemento, IgG se une al
antgeno para formar complejos inmunes, que luego
interactan con C1 y desencadenan una jerarqua de
interacciones y reacciones enzimticas que pueden llevar a
la formacin del complejo de ataque a la membrana y CDC,
resultando en la liquidacin del patgeno. La deposicin de
C1q (unin a IgG-Fc), ocurre con IgG1, 2 y 3, con IgG3 siendo
la ms efectiva; IgG4 no es capaz de interactuar con C1q.
Curiosamente, la eficiencia de deposiciones de C1q no se
correlacionan con la actividad de CDC, en la que IgG1 es la
subclase ms potente de IgG. El fundamento estructural
para esta diferencia entre la unin de C1q y CDC por las
subclases de IgG queda an irresuelto. Aqu brevemente
resumimos lo que es conocido acerca de la interaccin de
IgG y C1q.
El sitio de unin de IgG1 para C1q ha sido localizado en el
dominio CH2 y los residuos especficos implicados en la
interaccin se han estudiado usando mutagnesis de IgG1.
Mostramos la ubicacin del sitio de unin C1q en una
representacin diagramatica de IgG (Fig 3A) y la estructura
cristalina de IgG1-Fc (Fig 3B). Aunque cada IgG tiene dos
sitios de union para C1q en lados opuestos del Fc, slo un
sitio necesita ser implicado en la unin de C1q. Mientras la
estructura cristalina de IgG unida a C1q no se ha
determinado, la estructura cristalina de C1q se ha modelado
con IgG1 y sugiere una conformacin de C1q e IgG1 que
tambin puede implicar el fragmento Fab. Un estudio
reciente usando tomografa crio-electrn sugiere que el
antgeno unido a IgG1 puede formar una estructura
hexamerica que interacta eficientemente con el hexmero
C1q de una manera reminiscente a la IgM polimrica.
2.3 La unin de IgG a FcRn determina la vida media y el
transporte de la placenta.
La interaccin de IgG con FcRn es importante en el contexto
del transporte placentario y la vida media en suero. El FcRn
tiene homologa estructural con MHC I y tambin participa
en la presentacin de antgenos. Los residuos responsables

de la unin de IgG a FcRn fueron aclarados utilizando

principalmente las estructuras cristalinas de FcRn de rata o
de humano, y se indican en una representacin de IgG y en
la estructura 3D de la estructura de IgG1-Fc (Fig 3B). El sitio
de unin FcRn en IgG se produce en la unin entre los
dominios CH2 y CH3, un rea rica en residuos de histidina,
en la cual H310 y H435 se considera actan como sensor de
pH en la unin de IgG.
De las subclases de IgG, IgG3 tiene la vida media ms corta
con aproximadamente 7 das, lo cual es debido en gran parte
a una arginina en la posicin 435 que sustituye a la histidina
presente en todas las otras subclases de IgG. Despus de su
absorcin por endosomas recicladores, la unin de IgG3 a
FcRn est competitivamente inhibida por IgG1, que tiene
una mayor afinidad de unin por FcRn; la IgG3 no unida, es
degradada en lugar de ser de vuelta a la circulacin, lo que
explica su vida media ms corta. Un alotipo de IgG3 (G3m15)
con H435 no tiene una vida media reducida, destacando la
importancia de residuos de histidina en la afinidad de unin
en general para FcRn. En consecuencia, la produccin de
IgG3 humana con H435 debera conducir a candidatos Thab
con vidas medias largas in vivo similar a otras subclases de
IgG.
Es interesante observar que aunque el FcRn tambin est
implicado en el transporte placentario, IgG2 se observa a
menudo como el menos eficiente en comparacin con otras
subclases. La razn del transporte placentario ineficiente de
IgG2 no se entiende claramente, pero la proporcin de
isotipos de cadena ligera ( o ) no es un factor. La
comprensin de las interacciones de los receptores
especficos que modulan el transporte placentario, mas no
su vida media en suero, puede ser til cuando se produce
ThAb para uso durante el embarazo.
2.4. La glicosilacin de IgG-Fc impacta en la funcin efectora
Todas las IgG contienen un sitio de glicosilacin conservados
en N297 en CH2, contribuyendo a la conformacin
estructural de la Fc requerido para la unin a FcR, FcRn y
C1q (Fig 1B). Los N-glicanos en Fc son estructuras complejas

principalmente di-antenarios con ncleo de 1-6 fucosilacin

del residuo N-acetil glucosamina (GlcNAc) unido a N297,
pero una gran variedad de glicoformas se han descrito en IgG
normal y recombinante. Estos patrones diferentes de
glicosilacin imparten cambios estructurales en la regin Fc,
que a su vez afecta a la funcin efectora de anticuerpos.
Aunque hay evidencia de que los patrones de glicosilacin
pueden diferir entre subclases, el impacto en las funciones
efectoras de IgG no ha sido bien caracterizado. La
glicosilacin de IgG tambin se ve afectada por un nmero
de factores incluyendo la edad, el embarazo, enfermedad
inflamatoria e infeccin. Les referimos a los lectores que
busquen revisiones detalladas en la glicosilacin de
inmunoglobulina para ms informacin.

El uso de ThAb para enfermedades infecciosas puede

implicar la transferencia pasiva de anticuerpos para la
profilaxis pre/pos exposicin o para el tratamiento. El ThAb
puede derivarse de suero humano agrupado o anticuerpos
monoclonales recombinantes. En esta revisin, nos
centramos en el uso de anticuerpos monoclonales, pero
brevemente discutimos terapias sricas y preparaciones de
anticuerpos policlonales ya que se han utilizado para el
tratamiento de enfermedades infecciosas. Discutimos la
relevancia de las subclases de IgG en el contexto de las
enfermedades infecciosas y destacamos la adherencia actual
de ThAb monoclonal a los antgenos de organismos
infecciosos.
3. Anticuerpos teraputicos para enfermedades infecciosas

2.5. Alotipos de subclases de IgG

La variacin alotpica (polimorfismos) en cadenas pesadas de
IgG (Gm) tiene el potencial de influir en las respuestas de IgG
inducidas tanto naturalmente o por vacunas. El nmero de
alotipos para cada subclase IgG vara: IgG1 tiene 4, IgG2
tiene 2, IgG3 tiene 13 e IgG4 no tiene ninguno (Fig 1A). Estos
alotipos de IgG han sido en ocasiones asociados a una mayor
proteccin contra ciertas enfermedades. Es importante
destacar que se ha sugerido que el alotipo de un ThAb puede
contribuir a la resistencia a la terapia asociada a respuestas
inmunes anti-Thab. Hasta la fecha, slo unos pocos estudios
han investigado claramente los efectos del desajuste del
alotipo en el desarrollo de respuestas anti-Thab. En estos
estudios, no hubo asociacin significativa entre el alotipo de
IgG y la aparicin de respuestas de anticuerpos antimonoclonales. Sin embargo, se necesita ms investigacin
para conclur de forma segura que un alotipo no influye en
las respuestas anti-Thab, sobre todo porque relativamente
pocos alotipos se han probado en la clnica.
2.6. La subclase IgG y la ingeniera de Fc
La ingeniera de Fc ha sido importante para el desarrollo de
anticuerpos teraputicos con actividad potente y especfica,
as reduciendo tanto la dosificacin y los efectos secundarios
potenciales. La comprensin de las diferencias entre las
subclases de IgG se ha utilizado en la produccin de Fc y los
estudios han demostrado que la introduccin de residuos
especficos de una subclase a otra puede transformar ciertas
funciones efectoras, mientras que conserva las dems. Los
ejemplos incluyen la produccin de IgG2 con residuos de
IgG4 para la extripacin de las funciones efectoras o la
produccin de IgG3 con residuos procedentes de otras
subclases para aumentar su vida media. Este enfoque se
complementa con otros mtodos tales como la evaluacin
de los mutantes de alanina, mtodos de cribado de alto
rendimiento computacionales o la resolucin de la
estructura de los dominios Fc mutados. Estos enfoques de
ingeniera Fc son pertinentes en el contexto de las
enfermedades infecciosas, como la funcin efectora de
anticuerpos especficos es a menudo crtica en la eliminacin
eficiente del patgeno. Los anticuerpos de Fc tambin se han
modificado para eliminar los sitios de protelisis bacteriana,
que se cree es un modo de evasin inmune de ciertos
patgenos. El amplio alcance y las posibilidades de la
ingeniera de Fc han sido revisados en detalle en otra parte.

3.
Anticuerpos
teraputicos
enfermedades infecciosas

para

Preparaciones Thab policlonales usados comnmente

consisten en fracciones de inmunoglobulinas purificadas de
cientos a miles de donantes y se entregan por va
intravenosa (IGIV), intramuscular (IMIG) o subcutnea
(SCIG). Nos centramos en el uso de IgG agrupado para
condiciones infecciosas especficas, aunque tambin se ha
utilizado como una transfusin para pacientes con
enfermedades de inmunodeficiencia primaria o
enfermedades inflamatorias o autoinmunes. Las principales
enfermedades infecciosas que se utiliza IgG combinada son
el ttanos, la hepatitis A, la hepatitis B, el sarampin, la
rubola, la rabia, la varicela, el virus respiratorio sincitial y el
citomegalovirus. Productos especficos a la enfermedad a
veces se enriquecieron mediante la agregacin de
anticuerpos de individuos con ttulos altos a estos antgenos
de enfermedad.
La naturaleza policlonal de IgG combinada permite la
focalizacin de mltiples eptopos (determinante
antignico), lo que es ventajoso en el tratamiento de ciertas
enfermedades infecciosas. Sin embargo, esto crea desafos
con estandarizacin a travs de lotes, aumento de costos,
potencial de contaminacin y la falta de eficacia debido a la
dilucin de anticuerpos funcionales. Un enfoque alternativo
es usar anticuerpos monoclonales dirigidos a eptopos
relevantes y que estn diseados con los cimientos de
subclases, que median la respuesta efectora deseada. Los
anticuerpos monoclonales tienen la ventaja adicional de
estar estandarizados, pueden ser producidos en masa y
tienen un bajo riesgo de contaminacin. Los anticuerpos
monoclonales teraputicos pueden ser particularmente
tiles para aplicaciones tales como la fiebre del dengue, en
los que actualmente no hay medicamentos o vacunas
antivirales autorizadas o licenciadas, y el tratamiento es
principalmente de apoyo. Los anticuerpos monoclonales
seran favorables, ya que podran ser seleccionados para
dirigir la neutralizacin de eptopos comunes en los cuatro
serotipos del virus del dengue. Mas an, la preocupacin por
el aumento de la patognesis impulsado por la mejora
dependiente de anticuerpos (mediado por las interacciones
Fc:FcR) podran ser superados por los anticuerpos
monoclonales con cimientos de IgG4 o mutaciones para
eliminar la unin a FcRs.
3.2 Relevancia de las subclases de IgG en enfermedades
infecciosas
Las interacciones diferenciales de las cuatro subclases de IgG
con diversas molculas efectoras inmunes sugiere roles
especficos para cada subclase durante una infeccin
natural. Esto es reflejado en las caractersticas de perfiles de

subclases observados en individuos despus de la exposicin

a agentes infecciosos. En este contexto, las respuestas de las
subclases pueden diferir de acuerdo con el patgeno, el
antgeno, o incluso el eptopo (discutido en la Seccin 4.1).
La importancia de las subclases de IgG en las enfermedades
infecciosas es apoyada tambin por el estudio en individuos
con ciertas deficiencias en estas subclases de IgG. Las
deficiencias selectivas en subclases estn entre las cuatro
deficiencias inmunitarias ms comunes en pediatra. Los
sndromes ms comunes observados clnicamente han sido
aquellos en las que la deficiencia de IgG2 se asocia con un
mayor riesgo de infecciones, causadas por bacterias
encapsuladas; y la deficiencia de IgG3 se asocia con
infecciones respiratorias recurrentes. Sin embargo, estos
estudios describen la asociacin y no necesariamente
causalidad, y pueden ser confundidos con ciertas
deficiencias de subclases de IgG que se producen en
combinacin
con
otras
inmunodeficiencias.
En
consecuencia, las respuestas de las subclases de IgG pueden
afectar la inmunidad a patgenos y esto debe ser
investigado ms a fondo para avanzar en el desarrollo de
ThAb especialmente en enfermedades infecciosas.
3.3 ThAb monoclonal en las enfermedades infecciosas en
desarrollo

Actualmente, slo hay dos ThAb monoclonales autorizados

para su uso contra las enfermedades infecciosas, con
aproximadamente 36 etapas preclnicas y clnicas de
desarrollo. Estos ThAb
tienen como objetivo
aproximadamente a 14 especies diferentes de virus y
bacterias, mientras solo 2 tienen como objetivo hongos y
ningno a organismos parasitarios. Los que estn en
desarrollo tienen como objetivo organismos similares a los
de los productos IgG humano agrupados existentes,
reflejando el paso de productos a base de sangre hacia
anticuerpos monoclonales recombinantes. Adems, las
combinaciones de anticuerpos monoclonales para el mismo
organismo estn siendo evaluados para aumentar su
eficacia y para prevenir el escape de organismos mutados
que pueden causar resistencia (Tabla S3). Curiosamente,
casi todos los ThAb en desarrollo se basan en el cimiento de
IgG1 humano con una la ausencia de la mayora de las otras
subclases de IgG (Tabla 1).
El uso de ThAb monoclonal se pueden aplicar a una amplia
gama de patgenos y marcos clnicos (Tabla 2). Esto incluye:
(1) la configuracin de un organismo especfico para tener
esporas, toxinas o biopeliculas como objetivo (ecosistema
microbiano);

Tabla 2
Situaciones en las que ThAb sera til contra enfermedades infecciosas.
Situacin
Organismo especifico
Patognesis a travs de esporas
Patognesis a travs de la toxina
Formacin de biopelculas
Entorno clnico
Ajustes nosocomiales / iatrognicas
Resistencia a las drogas
Epidemia / brotes pandmicos
Bioterrorismo
Enfermedades emergentes
En nios pequeos
En individuos inmunocomprometidos
Las infecciones en los bebs prematuros
Profilaxis en personas de alto riesgo
Las infecciones en pacientes con
trasplante
En la transmisin maternoinfantil de un
enfermedad
Terapia adjunta para el tratamiento de
enfermedad grave
La falta de otros tratamientos
Vacunas / medicamento no est disponible
Aumente la ventana teraputica de
antibiticos
Publique profilaxis de exposicin

Ejemplo
Bacillus anthracis
Escherichia coli (toxina Shiga)
Pseudomonas aeruginosa

Clostridium difficile
Staphylococcus aureus (VRSA)
Virus del bola
Bacillus anthracis
Nipah o virus Hendra
Virus sincitial respiratorio
Retinitis por citomegalovirus en
Pacientes con VIH
Staphylococcus aureus
Virus de la gripe
Hepatitis C
Virus VIH
Plasmodium falciparum

Virus Marburg
Bacillus anthracis
virus de la rabia
Enterovirus

(2) entornos clnicos en los que puede haber brotes

nosocomiales / iatrognicos, resistencia a los
medicamentos, brotes pandmicos, ataques bioterroristas,
enfermedades infecciosas emergentes, y uso en grupos de
alto riesgo o en enfermos graves; (3) cuando hay una falta
de opciones de tratamiento disponibles; y (4) como terapias
adjuntas que tienen funciones anti-inflamatorias o
inmunomoduladoras. (Esto podra incluir ThAb contra TNF y
otros mediadores inmunolgicos en humanos y no se analiza
en esta revisin). Algunas de estas aplicaciones se ilustran
mediante el uso autorizado de ThAb contra la toxina de B.
anthracis. La B. anthracis es una bacteria gram positiva,
forma esporas, productora de toxinas, que representa una
amenaza bioterrorista. Los ThAb contra la B. anthracis

podran ser particularmente tiles, porque un ThAb tiene

una vida media ms larga que los antibiticos y los
antibiticos slo se dirigen a las bacterias, mas no a la toxina,
y requieren un tratamiento de 60 das que plantea retos
importantes para su cumplimiento. Adems, la vacunacin
requiere dosis repetidas por aproximadamente 4 semanas
para inducir un anticuerpo eficaz.
Claramente, ThAb no tienen aplicacin para todas las
enfermedades infecciosas. En los casos donde hay un
beneficio teraputico potencial, las ventajas y desventajas
relativas de ThAb deben ser consideradas y sopesadas
contra opciones teraputicas alterativas (Tabla 3).En
muchos casos, los factores que son ms probables de limitar

aplicaciones para las ThAb incluyen: (1) la caracterizacin

especfica de Ab monoclonal con respecto a objetivos de los
eptopos y las respuestas efectoras funcionales; (2) los
costos de desarrollo y produccin; (3) la necesidad de la
administracin parenteral; y (4) la capacidad de ofrecer un
nivel suficiente de ThAb de mxima efectividad. La seleccin
de las subclases de IgG en el desarrollo de ThAb es a menudo
infravalorado, pero puede tener implicaciones importantes
para asegurar que se obtengan respuestas funcionales, los
efectos adversos se minimicen, y la vida media del
anticuerpo se optimice.
4. Seleccin de subclases de IgG para las ThAb contra
enfermedades infecciosas.
4.1 Subclases y respuestas natural inmune
La exposicin a la mayora de los microorganismos conlleva
a la induccin de una respuesta por anticuerpos, muchas de
las cuales mediarn proteccin clnica, pero otras son no
funcionales y simplemente reflejan la exposicin. En ambos
casos, estas respuestas adquiridas naturalmente van a ser,
con frecuencia, altamente sesgadas con respecto al isotipo y

la subclase. Entender las caractersticas de esta respuesta

adquirida naturalmente es el primer paso en la seleccin de
la subclase apropiada para un efectivo ThAb. El sesgo en la
subclase IgG que ocurre para diferentes microorganismos ha
sido demostrado por la respuesta de la IgG a polisacridos
bacterianos, lo que indica una predominancia de IgG2, con
reducidas cantidades de IgG1 e IgG3 (Chudwin et al., 1987;
Islam et al., 1995). En contraste, la respuesta de anticuerpos
contra VIH, el virus del bola, Coxiella burnetii (fiebre Q) y
plasmodium falciparum (malaria), han demostrado contener
principalmente IgG1 e IgG3 (Camacho et al., 1995; Leroy et
al., 2001; Raux et al., 2000; Richards et al., 2010), mientas
que las respuestas a Schistosoma mansoni son
predominantemente de IgG4 (Boctor and Peter, 1990).
Adems, se ha observado diferencias en las respuestas de las
subclases segn la edad y el gnero (Perez-Perez et al., 2010;
Simon et al., 2013), que pueden diferir para diferentes
antgenos del mismo patgeno o diferente dominio del
mismo antgeno (Richards et al., 2010; Stanisic et al., 2009).
Este conocimiento de las respuestas de subclases adquiridas
naturalmente puede, entonces, ser utilizado en ensayos
funcionales para determinar su posible significancia en la
induccin de la inmunidad protectora.

Tabla 3
Ventajas y desventajas de desarrollar ThAb contra enfermedades infecciosasa
Ventajas

Desventajas
Alta especificidad

Requiere conocimiento detallado de la

patognesis de los microorganismos, eptopos
No afecta la flora normal
protectores y respuesta inmune efectiva
Poca toxicidad

Puede no reconocer mutantes virales de escapeb u

Funciones biolgicas dirigidas que pueden incluir
organismos con antgenos polifrmicos.
neutralizacin, ADCC, ADCP o CDC

Costo de produccin, almacenamiento y

Variedades de isotipos y subclases opcionales para

despacho; adems del riesgo de contaminacin.
desarrollar ThAb con las funciones deseadas

Requiere administracin sistemtica (parenteral,

Acta sinrgicamente con antimicrobianos

subcutnea, IV o intramuscular)

Provisin rpida de inmunidad pasiva comparada

Requerimiento para administrar cantidades

con los largos periodos requeridos para las
teraputicas de ThAb
respuestas inducidas por vacunas

El ThAb debe ser administrado tempranamente

Conjugar toxinas o molculas teraputicas con

durante la infeccin para una mxima eficacia.
ThAb para dirigir estas respuestas de manera ms
precisa
ADCC: citotoxina celular dependiente de anticuerpos; ADCP: fagocitosis celular dependiente de anticuerpos; CDC: citotoxicidad
dependiente de complemento
a Tabla resumida usando lecturas de Casadevall et al. (2004).
.
b
.
Los combinados con diferentes monoclonales pueden compensar esto.

4.2. Valoracin funcional de las subclases aisladas de la

respuesta inmune natural:
Discriminar entre anticuerpos que reflejan exposicin y
aquellos que median la proteccin funcional puede ser
desafiante, pero el uso de ensayos funcionales patgenoespecficos in vitro puede ser informativo. Muchos campos
que estudian microorganismos dependen solo de un puado
de ensayos funcionales aceptados. (por ejemplo, ensayo de
neutralizacin para influenza o ensayo de inhibicin de
crecimiento para malaria), y se necesitan ms ensayos
funcionales para usar en valoraciones sistemticas de las
funciones de los anticuerpos. Estos ensayos sern luego
comparados con los resultados clnicos para determinar si
las respuestas medidas mediaron proteccin in vivo. Los
ensayos funcionales bien validados pueden ser usados
posteriormente para valorar la significancia de la subclase
IgG al purificar los anticuerpos especficos de esa subclase.

Por ejemplo, en un estudio reciente se compar una

subclase purificada de anticuerpos en un ensayo de
neutralizacin del virus del Herpes Simplex, y se determin
que IgG3 e IgG4 tienen la mayor capacidad de neutralizar el
virus incluso cuando no fueron la subclase predominante
(Mathiesen et al., 1988). Estudios similares para el VIH
purificaron IgG1 e IgG3 y compararon la habilidad de los
anticuerpos para neutralizar el virus aislados de muestras
individuales o en conjunto con mltiples individuos
(Cavacini et al., 2003; Scharf et al., 2001). Curiosamente,
IgG3 demostr ser ms efectivo que IgG1 en la
neutralizacin del VIH-1 cuando se usaron muestras
conjugadas, pero esto no se evidenci en muestras
individuales, indicando que la especificidad del eptopo
tambin juega un papel importante en la neutralizacin. Un
estudio adicional sobre las respuestas contra el enterovirus
71 humano us fracciones especficas de subclases
purificadas de IgG a partir de inmunoglobulinas agrupadas y

encontr que las fracciones de IgG1 e IgG2 son ms efectivas

en la neutralizacin, y que IgG3 conllevaba a una infeccin
aumentada (Cao et al., 2013). Estos estudios resaltaron el
valor potencial de la purificacin de subclases especficas del
suero de individuos infectados naturalmente y el estudio de
estos anticuerpos en ensayos funcionales para entender mejor
su contribucin a la proteccin clnica o a la patogenia de la
enfermedad. Estudios como estos tambin necesitan ser
complementados con experimentos en donde variantes en el
cambio de subclases son generadas y valoradas en ensayos
funcionales.
4.3 Variantes en el cambio de subclases:
Las variantes en el cambio de subclases usan los mismos
dominios variables, pero son expresadas en los cimientos de
cadenas pesadas de las diferentes subclases. Entonces, las
variantes en el cambio de subclases son anticuerpos
monoclonales que se unen al mismo epitopo, permitiendo la
contribucin de las diferentes subclases evaluadas en ensayos
funcionales patgeno- especficos in vitro y, en modelos in
vivo, para determinar las diferencias en su funcin efectora.
Las variantes en el cambio de subclases han sido evaluadas
usando tanto subclases humanas como murinae para: (1) virus
incluyendo VIH (Cavacini et al., 1995; Kunert et al., 2000;
Liu et al., 2003; Miranda et al., 2007), virus de la fiebre
amarilla (Schlesinger and Chapman, 1995; Schlesinger et al.,
1993), virus del Nilo Occidental (Mehlhop et al., 2007), y
virus de Varicela Zoster (Lloyd-Evans and Gilmour, 2000);
(2) bacterias incluyendo Staphylococcus aureus (Brown et
al., 2009; Kelly-Quintos et al., 2006; Varshney et al., 2014),
Streptococcus de grupo A(Cooper et al., 1991, 1993), B.
anthracis (Abboud et al., 2010; Hovenden et al., 2013),
Pseudomonas aeruginosa (Pollack et al., 1995; Schreiber et
al., 1993), y Escherichia coli (Akiyoshi et al., 2010; Oishi et
al., 1992; Pelkonen and Pluschke, 1989); (3) hongos
incluyendo Cryptococcus neoformans (Sanford et al., 1990;
Yuan et al., 1995); y (4) parsitos como P. falciparum
(Lazarou et al., 2009). Estos estudios de variantes en el
cambio de subclases han utilizado anticuerpos humanos, de
ratones y ratas; un resumen de las variantes en el cambio de
subclases humanas se muestra en la tabla 4. En ciertas
instancias, estos estudios han indicado claras diferencias
entre subclases en la mediacin de la neutralizacin del VIH
(Cavacini et al., 1995; Miranda et al., 2007), fagocitosis por
opsonizacin de S. Aureus (Kelly-Quintos et al., 2006), y en
estudios funcionales con P. aeruginosa (Eichler et al., 1989;
Schreiber et al., 1993), E. coli (Oishi et al., 1992), virus de la
fiebre amarilla (Schlesinger et al., 1993), virus de varicela
zoster (Lloyd-Evans and Gilmour, 2000) y Cryptococcus
(Yuan et al., 1995, 1998). En otras, el cambio de subclases no
demostr tener mayor efecto en el resultado de los estudios
funcionales (Bachmann et al., 1997; Brown et al., 2009;
Cavacini et al., 1995; Kelly-Quintos et al., 2006; Kunert et
al., 2000; Liu et al., 2003; Sanford et al., 1990). Esto sugiere
que la subclase de ThAb no es siempre crucial y que otros
factores, como los niveles de anticuerpos, tambin pueden ser
importantes. (Bachmann et al., 1997). Un inconveniente en la
valoracin de las variantes en el cambio de subclases es que
las subclases de ratones y otros animales no son equivalentes
directos de las humanos debido a la diversificacin de IgG en
subclases despus de la especiacin (Butler, 2006). Por lo
tanto, las diferencias observadas en las funciones de las
subclases especificas obtenidas de modelos animales no
pueden ser inferidas directamente en humanos (Mestas and
Hughes, 2004. Por ejemplo, la IgG de murinae es una
respuesta prominente para muchos patgenos, y la mayora
de anticuerpos monoclonales murinos son IgG1, pero el IgG1

murino no se involucra con FcyRs activantes o el

complemento en ratones. Sin embargo, interacciones y
mecanismos efectores determinados para las subclases de
IgG humanos y sus sistemas efectores (FcyRs, FcRn y C1q
humanos) son relevantes en el desarrollo de ThAb para
tratar enfermedades infecciosas
4.3.1 El uso de modelos murinos para guiar el desarrollo de
anticuerpos teraputicos
A pesar de la dificultad de transferir los descubrimientos de
estudios de variantes de cambio de subclase murinos a
humanos, tales estudios pueden ser tiles en el desarrollo
de ThAb al incrementar el conocimiento de los mecanismos
protectores del sistema inmune y por su aplicacin en
modelos animales in vivo. Ejemplos incluyen estudios
murinos que han indicado que ThAb debe incluir una funcin
FcyR para efectivamente inducir la neutralizacin de la
toxina del anthrax y que inducir fagocitosis opsonica es ms
importante que la actividad mediada por el complemento
para protegerse contra C. neoformans.
4.3.2. Funciones especficas de subclases varan de acuerdo
a las caractersticas del eptopo
Identificar eptopo objetivos que median la inmunidad
funcional es claramente un componente clave en el
desarrollo de una ThAb. De forma interesante, el impacto de
subclases de anticuerpos en tales eptopos funcionales
puede variar dramticamente entre eptopos, incluso dentro
de los mismos organismos. Por ejemplo, los anticuerpos
monoclonales IgG3 humanos que tienen por objetivo gp120
han mostrado tener una habilidad neutralizadora mayor
para VIH que sus contrapartes en IgG1, pero tales diferencias
de subclase no fueron encontradas en anticuerpos
monoclonales contra gp41. La relacin entre el objetivo
especfico de un eptopo y la subclase de anticuerpos
tambin depende probablemente en la densidad de los
eptopos y la flexibilidad de diferentes subclases de
anticuerpos para interactuar con dichos eptopos. Por
ejemplo, estudios usando variantes de cambio de subclase
contra P. aeruginosa y el grupo A streptococcus sugiere que
la densidad antignica influencia fuertemente la habilidad
de algunas subclases de anticuerpos para unirse
efectivamente, por tanto resaltando la importancia de
investigar respuestas de subclases usando ensayos que
reflejen la conformacin nativa antignica y su densidad.
Existe tambin evidencia que el efecto funcional de
diferentes subclases puede variar de acuerdo a la cepa del
organismo, indicando que es importante tambin investigar
una variedad de cepas cuando se desarrolle ThAb.
4.3.3. Evaluando las respuestas de subclases usando ensayos
funcionales in vitro
Como fue mencionado anteriormente, existe necesidad para
un grupo mayor de ensayos funcionales que pueda evaluar
sistemticamente el rol de subclases de IgG para muchas
enfermedades infecciosas. El uso de tales evaluaciones
funcionales necesitar ser combinado con la validacin de
estas evaluacin como indicadores de una proteccin in vivo
real. Estudios en respuestas de subclases murinas contra C.
neoformans han demostrado fuertes discrepancias entre
ensayos funcionales in vitro y modelos in vivo. Caudn
Oposible, ensayos funcionales deben reflejar el mecanismo
probable de la actividad mediada por anticuerpos in vivo.
Por ejemplo, la proteccin in vivo contra la E. coli es asociada

con la limpieza mediada por el complemento; por tanto

ThAb debera ser evaluada usando ensayos funcionales que
reflejen este mecanismo. Sin embargo, P. aeruginosa es
capaz de resistir la lisis mediada por el complemento, y por
tanto, un ensayo del complemento no predecira
adecuadamente la proteccin in vivo. Ensayos funcionales
bien-validados pueden tambin ser usados para determinar
si diferentes subclases de IgG tienen el potencial de interferir

con accin de otras subclases de IgG, por ejemplo,

bloqueando anticuerpos. De forma similar, los ensayos
funcionales pueden ser usados para evaluar la habilidad de
algunos anticuerpos de tener efectos dainos al aumentar la
infeccin, como es observado en el virus del dengue, el virus
del oeste del Nilo, VIH, y hongos incluyendo Candida albicans
y C. neoformans.

Tabla 4: Ejemplos de estudios usando variantes de cambio de subclases humanas de IgG

5. Conclusiones
Existen ms de 40 ThAb con licencia pero solo dos que
tienen como objetivos patgenos asociados con
enfermedades infecciosas. Casi todos los ThAb licenciados,
as como aquellos en desarrollo clnico, tienen dominio Fc
IgG1 humano. La diversidad de respuestas de subclase
contra infecciones naturales y la estructura nica y
funcional de las 4 subclases de IgG disminuye la
importancia de considerar las propiedades de subclases
cuando se desarrolla y se prueba ThAb, especialmente
contra enfermedades infecciosas. A pesar de que existen
aproximadamente 36 nuevos ThAb contra enfermedades
infecciosas en desarrollo preclnico, la investigacin en este
campo ha sido lenta comparada con el desarrollo en cncer
y autoinmunidad. Existe una multitud de conformaciones
potenciales para la aplicacin de ThAb contra
enfermedades infecciosas y los pros y cons deberan ser
cuidadosamente evaluados para cada conformacin
teraputica. Conocimiento de los perfiles de cada subclase
contra los patgenos y antgenos de inters sera

beneficioso. Esta evaluacin debera incluir el estudio de las

respuestas de anticuerpos naturalmente adquiridas,
anticuerpos derivados del suero, y variantes de cambio de
subclase en estudios in vitro funcionales relevantes y
estudios in vivo donde sea apropiado. Tales estudios han
indicado que las subclases de IgG individuales pueden tener
efectos funcionales diferentes contra diferentes patgenos,
con ninguna subclase siendo singularmente importanteal
mediar proteccin contra enfermedades. Ms an, la
naturaleza del eptopo especfico es extremadamente
importante para respuestas efectivas y funcionales, y la
densidad del eptopo o cepa patgena usada en el ensayo
puede afectar profundamente los resultados. Por ende es
ms importante examinar un rango de estos factores.
Finalmente, el conocimiento obtenido en los estudios de
cambio de subclase, combinado con un entendimiento
molecular de las propiedades de las subclases de IgG
permitir la preparacin y desarrollo de ThAb
monoclonales altamente efectivos especficos para
patgenos.