Protocolo de transformacin

para cada grupo

Celulas competentes ...............................................................1 vial c/ 250 uL de bact. comp.
Plasmido/s a transformar.........................................................1vial con x uL de DNA 1 ng/uL
Caldo LB.........................................................................................5 mL esteril.
Placas de petri......................1 placa con agar LB solo, 2 placas con agar LB ampi y 1 con agar LB ampi + ara (0.15 ml
sln. Ara 20%)
Hielo .................................................................................................1 cuba llena de hielo granizado y vasitos para c/grupo
Pipetas...........................................................................................1 de 20 ul y otra de 200 ul.
Tips esteriles...................................................................................10.
bao 37 a 42 .................................................................................1
Eppendorfs ..................................................................................2, rotulados -DNA y +DNA.
Mecheros............................................................................................1 cada 2 grupos.
rastrillo de drigalsky........................................................................1 c/grupo
Alcohol para flamear ...............................................................1 vaso de precipitado con 50 mL.
Flotadores para tubos eppendorf1 por grupo.

Va a haber 4 grupos asi que la cuenta total de placas es:

4 de LB agar solo
8 LB ampi
4 LB ampi + arabinosa
16 placas en total.

Procedimiento.
Todo bajo mechero.
Se toman los eppendorfs y se rotulan convenientemente (- o + DNA y la identificacin del grupo).
Las bact. comp se llevan en hielo a la mesada de trabajo
Se alicuotan 50 uL de bact en el tubo - DNA y 40 uL para el + DNA.
Se dejan en hielo.
Se toman 10 uL de la solucin 1ng/uL de DNA y se mezcla con las bact del tubo + DNA.
Se incuban ambos tubos en hielo 30 minutos.
Pasado ese lapso, los tubos se colocan a 42 C (shock trmico) durante 1 minuto.
Se sacan de all, y se les aaden 200 uL de caldo LB esteril.(recuperacin).
Se incuba 1 hora a 37C y se plaquea bajo mechero 100 uL de cultivo en las cajas correspondientes. Se
rastrilla las placas y se las cierra, poniendolas luego boca abajo.
Se incuban overnight a 37 C.