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Enzimas
Enzimas
Los enzimas son protenas que catalizan reacciones qumicas en los seres vivos.
Los enzimas son catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una
reaccin, aumentan notablemente su velocidad. No hacen factibles las reacciones
imposibles, sino que slamente aceleran las que espontneamente podran producirse.
Ello hace posible que en condiciones fisiolgicas tengan lugar reacciones que sin
catalizador requeriran condiciones extremas de presin, temperatura o pH.
Prcticamente todas las reacciones qumicas que tienen lugar en los seres vivos estn catalizadas por enzimas. Los
enzimas son catalizadores especficos: cada enzima cataliza un solo tipo de reaccin, y casi siempre acta sobre un
nico sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos. En una reaccin catalizada por un enzima:
1. La sustancia sobre la que acta el enzima se llama sustrato.
2. El sustrato se une a una regin concreta del enzima, llamada centro activo. El centro activo comprende (1)
un sitio de unin formado por los aminocidos que estn en contacto directo con el sustrato y (2) un sitio
cataltico, formado por los aminocidos directamente implicados en el mecanismo de la reaccin
3. Una vez formados los productos el enzima puede comenzar un nuevo ciclo de reaccin
1.- El enzima y su
sustrato
3.- Formacin de
productos
Los enzimas, a diferencia de los catalizadores inorgnicos catalizan reacciones especficas. Sin embargo hay
distintos grados de especificidad. El enzima sacarasa es muy especfico: rompe el enlace b-glucosdico de la
sacarosa o de compuestos muy similares. As, para el enzima sacarasa, la sacarosa es su sustrato natural, mientras
que la maltosa y la isomaltosa son sustratos anlogos. El enzima acta con mxima eficacia sobre el sustrato
natural y con menor eficacia sobre los sustratos anlogos. Entre los enzimas poco especficos estn las proteasas
digestivas como la quimotripsina, que rompe los enlaces amida de protenas y pptidos de muy diverso tipo.
PROPIEDADES DE LOS ENZIMAS
Las propiedades de los enzimas derivan del hecho de ser protenas y de actuar como catalizadores. Como protenas,
poseen una conformacin natural ms estable que las dems conformaciones posibles. As, cambios en la
conformacin suelen ir asociados en cambios en la actividad cataltica. Los factores que influyen de manera ms
directa sobre la actividad de un enzima son:
pH
temperatura
cofactores
A veces, un enzima requiere para su funcin la presencia de sustancias no proteicas que colaboran en la catlisis:
los cofactores. Los cofactores pueden ser iones inorgnicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc. Casi un tercio de
los enzimas conocidos requieren cofactores. Cuando el cofactor es una molcula orgnica se llama coenzima.
Muchos de estos coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas. En la figura inferior podemos observar una molcula
de hemoglobina (protena que transporta oxgeno) y su coenzima (el grupo hemo). Cuando los cofactores y las
coenzimas se encuentran unidos covalentemente al enzima se llaman grupos prostticos. La forma catalticamente
activa del enzima, es decir, el enzima unida a su grupo prosttico, se llama holoenzima. La parte proteica de un
holoenzima (inactiva) se llama apoenzima, de forma que:
apoenzima + grupo prosttico= holoenzima
NOMBRES PARTICULARES
Antiguamente, los enzimas reciban nombres particulares, asignados por su descubridor. Al ir aumentando el
nmero de enzimas conocidos, se hizo necesaria una nomenclatura sistemtica que informara sobre la accin
especfica de cada enzima y los sustratos sobre los que actuaba.
NOMBRE SISTEMTICO
El nombre de cada enzima puede ser identificado por un cdigo numrico, encabezado por las letras EC (enzyme
commission), seguidas de cuatro nmeros separados por puntos. El primer nmero indica a cual de las seis
clases pertenece el enzima, el segundo se refiere a distintas subclases dentro de cada grupo, el tercero y el cuarto se
refieren a los grupos qumicos especficos que intervienen en la reaccin.
As, la ATP:glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa) se define como EC 2.7.1.2. El nmero 2 indica que es una
transferasa, el 7 que es una fosfotransferasa, el 1 indica que el aceptor es un grupo OH, y el ltimo 2 indica que es
un OH de la D-glucosa el que acepta el grupo fosfato.
CLASIFICACIN DE LOS ENZIMAS
En funcin de su accin cataltica especfica, los enzimas se clasifican en 6 grandes grupos o clases:
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Clase 2: TRANSFERASAS
Clase 3: HIDROLASAS
Clase 4: LIASAS
Clase 5: ISOMERASAS
Clase 6: LIGASAS
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreduccin, es decir, transferencia de hidrgeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a
otro, segn la reaccin general:
AH2 + B
A + BH2
Ared + Box
Aox + Bred
Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo qumico (distinto del hidrgeno) de un sustrato a otro, segn la reaccin:
A-B + C
A + C-B
ADP + glucosa-6-fosfato
Clase 3: HIDROLASAS
AH + B-OH
glucosa + galactosa
Clase 4: LIASAS
A+B
CO2 + acetona
Clase 5: ISOMERASAS
Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa y la fosfoglucosa isomerasa, que catalizan las reacciones representadas en la
tabla inferior:
fosfotriosa isomerasa
gliceraldehdo-3-fosfato
fosfoglucosa isomerasa
dihidroxiacetona-fosfato
glucosa-6fosfato
fructosa-6fosfato
Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis simultnea de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.):
A + B + XTP
A-B + XDP + Pi
oxaloacetato + ADP + Pi
La accin de los catalizadores consiste, precisamente, en disminuir la Ea (Figura superior derecha). Los
enzimas son catalizadores especialmente eficaces, ya que disminuyen la Ea an ms que los catalizadores
inorgnicos. Por ejemplo, la descomposicin del agua oxigenada (H2O2) para dar H2O y O2 puede ocurrir sin
catalizador, con un catalizador inorgnico (platino), o con un enzima especfico (catalasa). Las respectivas Ea para
cada proceso son 18, 12 y 6 Kcal/mol. As, se puede calcular que el platino acelera la reaccin 20.000 veces,
mientras que la catalasa la acelera 370.000 veces.
Para que una reaccin qumica tenga lugar, las molculas de los reactantes deben chocar con una energa y una
orientacin adecuadas. La actuacin del enzima (1) permite que los reactantes (sustratos) se unan a su centro activo
con una orientacin ptima para que la reaccin se produzca y (2) modifica las propiedades qumicas del sustrato
unido a su centro activo, debilitando los enlaces existentes y facilitando la formacin de otros nuevos (Figuras
inferiores):
Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une al centro activo del enzima:
el modelo llave-cerradura
el modelo del ajuste inducido
MODELO LLAVE-CERRADURA El modelo llave-cerradura supone que la
estructura del sustrato y la del centro activo son complementarias, de la misma
forma que una llave encaja en una cerradura. Este modelo es vlido en muchos
casos, pero no es siempre correcto.
A veces, un enzima requiere para su funcin la presencia de sustancias no proteicas que colaboran en la catlisis:
los cofactores. Los cofactores pueden ser iones inorgnicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc. Casi un tercio de
los enzimas conocidos requieren cofactores. Cuando el cofactor es una molcula orgnica se llama coenzima.
Muchos de estos coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas. En la figura de la izquierda podemos observar una
molcula de mioglobina (protena que transporta oxgeno al tejido muscular) y su coenzima (el grupo hemo,
representado en color verde). Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran unidos covalentemente al
enzima se llaman grupos prostticos. La forma catalticamente activa del enzima, es decir, el enzima unida a su
grupo prosttico, se llama holoenzima. La parte proteica de un holoenzima (inactiva) se llama apoenzima, de forma
que:
apoenzima + grupo prosttico= holoenzima
Inhibidor no competitivo
Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa). R es la
forma ms activa porque se une al sustrato con ms afinidad. Las formas R y T se encuentran en equilibrio R <==>
T (Figura inferior):
Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores positivos. El propio sustrato es a
menudo un modulador positivo. Las molculas que favorecen la forma R pero que actan sobre una regin del
enzima distinta del centro activo son los activadores alostricos (Figura inferior izquierda).
Activador alostrico: favorece la unin Inhibidor alostrico: impide la unin del
del sustrato
sustrato
Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimtica son los moduladores negativos. Si
estos moduladores actan en lugares distintos del centro activo del enzima se llaman inhibidores alostricos
(Figura superior derecha) .
CINTICA ENZIMTICA
Los principios generales de las reacciones qumicas se aplican tambin a las reacciones
enzimticas. Por este motivo, antes de empezar con la cintica qumica, se van a
repasar algunos conceptos bsicos de cintica qumica. A
continuacin, se describirn los siguientes conceptos:
Cintica enzimtica
Modelo cintico de Michaelis-Menten
Clculo de la KM y la Vmax de un enzima
Actividad enzimtica
En una reaccin de orden cero, la velocidad de formacin del producto es independiente de la concentracin de
sustrato: v = k
En una reaccin de primer orden la velocidad de formacin de los productos es directamente proporcional a la
concentracin del sustrato: v = k [A]. As, en la reaccin:
sacarosa + agua
glucosa + fructosa
La velocidad de hidrlisis de la sacarosa es, en todo momento, proporcional a la concentracin de sacarosa. Dicho
matemticamente, donde [A] es la concentracin de sacarosa a cada tiempo (t) y k es la constante de
proporcionalidad. Se dice que sta es una reaccin de primer orden.
Una reaccin de segundo orden es aquella en la que la velocidad de formacin del producto depende
ORDEN CERO
PRIMER ORDEN
SEGUNDO ORDEN
Representacin que
da lugar a una recta
[A] vs t
Ln[A] vs t
1/[A] vs t
Signo de la pendiente
negativo
negativo
positivo
Significado de la
pendiente
-k
-k
Significado de la
ordenada en el origen
[A]0
Ln[A]0
[A]0 es
eb
Expresin diferencial
de la velocidad
Ecuacin integrada
de la velocidad
Vida media (t1/2)
1/b
CINTICA ENZIMTICA
Para explicar la relacin oservada entre la velocidad inicial (v0) y la concentracin inicial de sustrato ([S]0)
Michaelis y Menten propusieron que las reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas: En la
primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la segunda, el complejo enzima-sustrato da lugar a la
En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinticas individuales de cada proceso y tambin reciben el nombre
de constantes microscpicas de velocidad. Segn esto, podemos afirmar que:
v1 = k1 [E] [S]
v2 = k2 [ES]
v3 = k3 [ES]
Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de forma que la concentracin total
de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de la reaccin) es:
[ET] = [E] + [ES]
Como [E] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]
v = v3 = k3 [ES] =
Para cualquier reaccin enzimtica, [ET], k3 y KM son constantes. Vamos a considerar dos casos extremos:
A concentraciones de sustrato pequeas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S]. Como los trminos entre
parntesis son constantes, pueden englobarse en una nueva constante, kobs, de forma que la expresin queda
reducida a: v = kobs [S], con lo cual la reaccin es un proceso cintico de primer orden.
A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La velocidad de reaccin es
independiente de la concentracin del sustrato, y por tanto, la reaccin es un proceso cintico de orden
cero. Adems, tanto k3 como [ET] son constantes, y nos permite definir un nuevo parmetro, la velocidad
mxima de la reaccin (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que se alcanzara cuando todo el enzima
disponible se encuantra unido al sustrato.
Si introducimos el parmetro Vmax en la ecuacin general de la velocidad, (la frmula recuadrada anteriormente),
obtenemos la expresin ms conocida de la ecuacin de Michaelis-Menten:
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol
de sustrato en un minuto. La actividad especfica es el nmero de unidades de enzima por miligramo de protena
(U/mg prot) o por mililitro de disolucin (U/ml).
Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad enzimtica como la
cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol
son 106 moles y 1 minuto son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106 U. Esta unidad es muy grande,
de forma que se utilizan frecuentemente los submltiplos como el microkatal (kat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat,
10-9 kat).
Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el nmero de centros activos por molcula de enzima, las
medidas de actividad enzimtica permiten calcular el nmero de recambio del enzima, o sea, el nmero de
reacciones elementales que realiza el enzima por cada centro activo y por unidad de tiempo.