Lpez-Durn M, Campo-Trapero J, Cano-Snchez J, Dez-Prez R, Bascones-Martnez A

Aplicacin de las tcnicas de biologa molecular en oncologa oral

Aplicacin de las tcnicas de biologa

molecular en oncologa oral
Application of molecular biology techniques in oral cancer
Lpez-Durn M*, Campo-Trapero J**, Cano-Snchez J***, Dez-Prez R*,
Bascones-Martnez A****
RESUMEN
Este artculo de revisin se propone exponer las principales tcnicas de biologa molecular disponibles actualmente
para los investigadores, en el campo del cncer y precncer oral, clasificadas segn el tipo de material biolgico del
que se disponga para iniciar la investigacin. ste puede ser ADN, ARN o protenas. La explicacin de cada tcnica
comprender una breve sistemtica del proceso, as como sus ventajas, inconvenientes y estado de actividad actual.
Todo ello con la finalidad de esclarecer las aplicaciones, pronto indispensables, de las tcnicas ms destacadas, en
el diagnstico precoz, pronstico y tratamiento individualizado del carcinoma oral. Entre las tcnicas ms tiles en
este proceso se encuentran: la electroforesis en gel, las tcnicas de hibridacin, la tecnologa microarray, los
biochips, la PCR convencional, la cuantitativa o la transcriptasa inversa, las tcnicas de Southern, Northern y
Western blot, la secuenciacin de ADN, la clonacin de genes, la inmunohistoqumica, el ensayo ELISA y la
citometra de flujo. Destacan en particular por su gran utilidad, la tecnologa microarray, los biochips y la PCR.
Palabras clave: Tcnicas biologa molecular, cncer oral, carcinoma oral de clulas escamosas, PCR, microchips, microarrays.
SUMMARY
This article summarizes the main techniques in the area of molecular biology that are available for the
investigation of oral cancer and precancer. They have been classified depending on the biological material we
expect to analyze, which can be DNA, RNA or proteins. The explanation for each technique includes a brief
description of its basics, as well as some advantages, drawbacks and current use of the technique. Our aim is
to throw light on the applications of these techniques, soon indispensable for most studies, in the early
diagnosis, prognosis and individualized treatment of oral carcinoma. The most useful techniques for this
objective are nowadays: gel electrophoresis, hybridation, microarray technology, biochips, PCR (conventional,
quantitative or reverse transcriptase), Southern, Northern and Western blot studies, DNA sequenciation, cloning,
immunohistochemistry, ELISA and flow citrometry. Some techniques that deserve a special mention due to
their greater usefulness in the area of oral cancer are microarray technology, biochips and PCR.
Key words: Molecular biology techniques, oral cancer, oral squamous cell carcinoma, PCR, microchips,
microarrays.
Fecha de recepcin: 17 de abril de 2009.
Aceptado para publicacin: 22 de abril de 2009.
*
**

Licenciado en Odontologa. Facultad de Odontologa. Departamento de Medicina y Ciruga Bucofacial. UCM.

Doctor en Odontologa. Profesor contratado doctor. Facultad de Odontologa. Departamento de Medicina y Ciruga Bucofacial. UCM.
*** Doctor en Odontologa. Profesor asociado. Facultad de Odontologa. Departamento de Medicina y
Ciruga Bucofacial. Facultad de Odontologa. UCM.
**** Doctor en Medicina y en Estomatologa. Catedrtico de Medicina y Ciruga Bucofacial. Facultad de
Odontologa. Departamento de Medicina y Ciruga Bucofacial. UCM.
Lpez-Durn M, Campo-Trapero J, Cano-Snchez J, Dez-Prez R, Bascones-Martnez A. Aplicacin de las
tcnicas de biologa molecular en oncologa oral. Av. Odontoestomatol 2010; 26 (4): 189-196.

AVANCES EN ODONTOESTOMATOLOGA/189

AVANCES EN ODONTOESTOMATOLOGA
Vol. 26 - Nm. 4 - 2010

INTRODUCCIN
Una vez secuenciado el genoma humano, hay que
acotar y otorgar su funcin a cada fragmento de ADN
correspondiente a un gen. El Proyecto Genoma Humano ha revelado que los diez billones de pares de
bases que forman el ADN codifican entre 30.000 y
40.000 genes (1). El ADN de las clulas de un organismo contiene la informacin gentica necesaria para
la construccin de sus protenas, que determinarn la
funcin biolgica del gen o la patologa de la enfermedad. La molcula de ARNm (ARN mensajero) es
una copia de esta informacin mediante un proceso
conocido como transcripcin. La informacin codificada en la molcula de ARNm es interpretada en un
proceso denominado traduccin que tiene como fin
la construccin de la protena.
Sin embargo, el mero conocimiento de la secuencia
de bases del ADN no es suficiente para definir la funcin biolgica o la patologa de la enfermedad. Para
alcanzar este conocimiento se han desarrollado tcnicas basadas en los perfiles de expresin, que a su vez
han favorecido la deteccin de nuevos protooncogenes, genes supresores tumorales y modificaciones
genticas involucradas en la carcinognesis oral. A
toda esta tecnologa se le une la bioinformtica, capaz
de descifrar la ingente cantidad de los datos generados por las tcnicas de biologa molecular (2). La
caracterizacin de los patrones moleculares alterados
que conducen a la transformacin maligna puede
emplearse tanto para el diagnstico temprano del
cncer como para un tratamiento eficaz de esta patologa (1). Todo esto tambin est suponiendo una
revolucin en la investigacin de la carcinognesis oral
al permitirnos llevar a cabo un anlisis en una escala
genmica o protemica, complementaria a los mtodos convencionales de diagnstico clnico o histopatolgico, con el objetivo de determinar biomarcadores que puedan ser aplicados a nivel diagnstico y/o
teraputico en las lesiones de precncer y cncer oral.
APLICACIONES DE LA BIOLOGA
MOLECULAR EN ONCOLOGA ORAL
Subclasificacin de los tumores orales identificados
histolgicamente
El cncer de cabeza y cuello (CCC) es el sexto ms
comn en el mundo, y est asociado a una baja
190 /AVANCES EN ODONTOESTOMATOLOGA

supervivencia y una alta morbilidad, constituyendo

el cncer oral el 40% de los CCC (3). En la actualidad, la tecnologa microarray ha descubierto cuatro
subtipos de carcinoma oral de clulas escamosas
(COCE) segn sus distintos comportamientos clnicos, identificados por los perfiles de expresin gnica.
Chung et al, describieron un subtipo de COCE asociado al EGFR (receptor del factor de crecimiento
endotelial), otro con un mesnquima enriquecido, un
tercer tipo similar al epitelio normal y un ltimo subclasificado en base a sus altos niveles de enzimas
antioxidantes (4, 5). Estos grupos mostraron diferencias estadsticamente significativas en la tasa de supervivencia sin recurrencia del tumor, y una exactitud
del 80% en la prediccin de metstasis linfticas (5).
Diagnstico y pronstico molecular del cncer
El COCE, como sucede con el resto de los cnceres,
es una enfermedad causada por la acumulacin de
anomalas en la secuencia y expresin de un nmero
de genes crticos. La tecnologa microarray ha conseguido identificar muchos genes con alteraciones
en su expresin, siendo la mayora reguladores del
ciclo celular, marcadores de diferenciacin, genes
con funcin antioxidante o reparadora del ADN, y
genes involucrados en la adhesin celular, en las
seales de transduccin o en la respuesta inflamatoria (1, 6, 7) Entre ellos, cabe mencionar por su importancia o relevancia los siguientes: Proliferacin y
ciclo celular: el EGFR, C-myc, las ciclinas A y D1,
Ki67, Bcl-2, H-RAS; supresin tumoral: p53, Bax,
Rb, p16, p21, p27, maspina; angiognesis: EGFR,
VEGF; invasin y metstasis: caderinas, cateninas,
MMPs, integrinas, protena S100. Hasta el momento
actual no se ha encontrado un gen o grupo de genes
implicados en el desarrollo de la enfermedad en la
mayora de los casos y que pudiera ser, por lo tanto,
utilizado como biomarcador en el diagnstico precoz y/o manejo de los pacientes con COCE.
Todas las formas de cncer desarrollan alteraciones
comunes, como son: la habilidad para la autosuficiencia en las seales de crecimiento e insensibilidad a las seales que se oponen a l, evasin de la
apoptosis, angiognesis, potencial replicativo ilimitado, invasin tisular y capacidad de metstasis (8).
Las alteraciones que promueven este crecimiento
celular anormal, detectables mediante las tcnicas

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Aplicacin de las tcnicas de biologa molecular en oncologa oral

de biologa molecular, son: la mutacin, delecin,

amplificacin, translocacin y las modificaciones en
la expresin gnica o en el nivel de metilacin. Se ha
observado que los cambios en los patrones de
metilacin pueden aparecer incluso dos aos antes
del desarrollo de un COCE, por lo que se ha propuesto utilizar estas modificaciones como biomarcadores
para la deteccin y pronstico de esta patologa (9)
Ninguna de las mltiples tcnicas que existen actualmente para la deteccin de los patrones de metilacin
es universal. Para la seleccin de la ms adecuada se
debe considerar el tipo, cantidad y calidad del material biolgico. Las tcnicas ms avanzadas para la
deteccin de metilaciones en los genes son el MALDITOF MS (Matrix-assisted laser desorption/ionization
time-of-flight mass spectrometry), la HPLC (High-performance liquid chromatography) (9) y la MSP-PCR
(Methylation - Specific PCR) (9-11).
En lesiones potencialmente malignas, como la leucoplasia oral, se ha empleado la tecnologa
microarray para identificar genes que sirvieran de
biomarcadores para las lesiones displsicas con potencial para progresar a COCE, establecindose la
tecnologa microarray como el mtodo de eleccin
para analizar los marcadores potenciales de progresin de la displasia epitelial. (1, 7).
Mejora en el desarrollo de frmacos
El empleo de la biologa molecular para el tratamiento
oncolgico pretende, por una parte, identificar los
subgrupos sensibles a beneficiarse del tratamiento, y
por otra, establecer nuevas dianas teraputicas determinando los genes asociados con un mal pronstico o ausencia de respuesta al tratamiento (12). Adems, facilita la prediccin de efectos adversos durante
los estudios de toxicidad (12). El desarrollo farmacolgico actual se centra en agentes diseados contra
genes especficos involucrados en el cncer, alejndose cada vez ms de los frmacos con toxicidad
general (12). Cabe destacar tambin la importancia
de la tecnologa microarray en este campo (1, 12).
Estudio de la estabilidad cromosmica
La longitud de los telmeros es un importante indicador en el estudio tanto de la estabilidad cromos-

mica como de la actividad de la telomerasa y la capacidad proliferativa de las clulas, pudiendo utilizarse para el pronstico de malignidad en las clulas
tumorales (13). Entre los mtodos empleados para
medir la longitud de los telmeros se encuentran
los siguientes: southern blot, hybridization protection
assay, fluorescence in situ hybridization (FISH),
citrometra de flujo, reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) y la microscopa electrnica.
TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR
DISPONIBLES PARA SU APLICACIN EN
ONCOLOGA ORAL
Existen en la actualidad numerosas tcnicas para el
estudio de las alteraciones producidas en el cncer o
precncer oral. En las tablas 1 y 2 aparecen explicadas las tcnicas principales, clasificadas en grupos
segn el tipo de material gentico que pretendamos
analizar: ADN, ARN o protenas. Algunas de ellas son
aplicables a todo tipo de muestra biolgica, mientras que otras son especficamente utilizadas para
cada uno de los tipos de material de partida.
De todas las tcnicas que se resumen en las Tablas
1 y 2, merecen especial atencin y un desarrollo mayor
la tecnologa microarray, los biochips y la PCR.
La tecnologa microarray permite la miniaturizacin
del proceso de hibridacin de las secuencias de
nucletidos en superficies microscpicas, que normalmente son ledas por un lser capaz de interpretar los fluorforos. Pueden usarse para detectar ADN,
ARN o protenas y permiten analizar incluso todo el
genoma humano conocido en un nico experimento (14, 15). El microarray permite analizar los niveles
de expresin de un gen, determinando la cantidad
de material gentico presente (4). Son ensayos sencillos que requieren un material muy accesible, de
alta validez y reproducibilidad (6, 15).
En general, el procedimiento del microarray puede
dividirse en las siguientes fases:
1. Fabricacin del array.
2. Aislamiento y marcaje del material gentico.
3. Aplicacin de la muestra marcada al array y
medicin de la hibridacin.
AVANCES EN ODONTOESTOMATOLOGA/191

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TABLA 1.- TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR APLICABLES TANTO A MUESTRAS

DE ADN, ARN O PROTENAS
Base metodolgica

Aplicacin

Ventajas

Electroforesis Separacin de cidos Comparacin de mues- Tcnica sencilla

en gel
nucleicos o protenas tras biolgicas distintas
segn su tamao y (sano/enfermo).
carga elctrica mediante campo elctrico, en medio poroso.

Inconvenientes
Necesita comparar
datos con otros conocidos. Se tiende a
la miniaturizacin y
a los chips.

Hibridacin

Unin de sondas es- Se usa en PCR, chips Alta especifici- Requiere un mtopecficas marcadas a de ADN, Southern y dad.
do de visualizacin
los cidos nucleicos o Northern Blot.
(radiactividad o quiprotenas a identificar.
mioluminiscencia).

Microarray

Miniaturizacin del
proceso de hibridacin para analizar un
nmero elevado de
muestras en un nico
experimento.

Monitorizacin de niveles de biomarcadores,

deteccin de cambios
en material gentico,
determinacin de dianas farmacolgicas,
evaluacin de interacciones entre protenas.

Tcnica cuantitativa, sencilla,

accesible, de alta
validez, reproducibilidad y sensibilidad.

Los de ADNc no
permiten detectar
modificaciones posttranscripcionales.

Biochips

Ensayo bioqumico Farmacogenmica y

farmacogentica (Idenminiaturizado.
tificacin de dianas teraputicas; desarrollo
de frmacos), diagnstico de enfermedades,
deteccin de mutaciones y polimorfismos,
anlisis de perfiles de
expresin.

Estudio de varios elementos

simultneamente en la misma
muestra; requiere cantidades mnimas de muestra y reactivos;
rendimiento alto
de la muestra.

Problemas para analizar protenas (la estructura 3D favorece

uniones mltiples;
fcil desnaturalizacin
o inactivacin por la
manipulacin), precio.

TCNICAS
COMUNES

4. Anlisis e interpretacin de los datos (12). Una

tcnica frecuentemente empleada para el estudio del cncer oral es la aplicacin de la inmunohistoqumica a muestras recogidas en tissue
microarrays (TMA) (Fig. 1).
El concepto de los microarrays basados en anticuerpos fue propuesto por Ekins y Chu en la segunda
mitad de la dcada de 1980. Probaron matemticamente que estos arrays permitan determinar mltiples niveles proteicos de forma simultnea y con una
alta sensibilidad. Posibilitan, por tanto, identificar y
192 /AVANCES EN ODONTOESTOMATOLOGA

cuantificar protenas, as como estudiar su funcin.

La limitacin de los microarrays de ADNc es que no
son capaces de detectar modificaciones que ocurran despus de la transcripcin (metilacin, fosforilacin, etc), permitiendo en este caso slo una visin parcial del proceso (7).
Las aplicaciones de los microarrays incluyen:
La monitorizacin de los niveles de biomarcadores en los pacientes con lesiones de cncer o
precncer oral.

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Aplicacin de las tcnicas de biologa molecular en oncologa oral

TABLA 2.- TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR APLICABLES ESPECFICAMENTE

A MUESTRAS DE ADN, ARN O PROTENAS
Base metodolgica

TCNICAS
PARA
PROTENAS

Ventajas

Inconvenientes

PCR (reaccin
en cadena de
la polimerasa)

Mtodo enzimtico de amplificacin de secuencias especficas de ADN (ej: gen) para

obtener millones de copias,
mediante la ADN polimerasa

Amplificacin de genes; modificacin de fragmentos de

ADN; genotipificacin; deteccin de mutaciones, marcadores genticos, expresin de
genes.

Lmite de deteccin
muy alto

Requiere material gentico bicatenario y tcnicas de visualizacin; es

semicuantitativa; frecuentes falsos positivos
por contaminacin leve

PCR cuantitativa
o en tiempo real

Variante de la PCR en la que

se cuantifica de forma absoluta o relativa (comparando
con un gen normalizador) el
producto de la amplificacin
de ADN

Cuantificacin de expresin
gnica, valoracin de la eficacia de frmacos, deteccin de agentes infecciosos
y polimorfismos, diagnstico tumoral, medicin de telmeros

Tcnica cuantitativa;
mayor sensibilidad y
rapidez; menor probabilidad de contaminacin; no requiere electroforesis para
su visualizacin

Requiere una curva de

calibrado para la cuantificacin absoluta y una
alta calidad del material
de partida; aconsejable
la estandarizacin

Cloning

Duplicar un gen o una porcin de ste

Obtener un fragmento de
ADN buscado

Posibilidad de ampliar
la muestra exacta

Se obtiene slo una copia

Southern blot

Electroforesis e hibridacin
para secuencias especficas
de ADN

Deteccin del tamao y cantidad de un fragmento de

ADN de inters (ej: telmero)

Permite cuantificar
tamao y abundancia

Tcnica lenta que requiere grandes cantidades de ADN

Secuenciacin

Conocimiento de la secuencia de bases nitrogenadas de

un fragmento de ADN mediante un mtodo qumico o
enzimtico

Entender la estructura; detectar mutaciones y mecanismos

fisiopatolgicos generados
por inferencia en la secuencia y homologa de genes

Permite el conocimiento de la estructura ms bsica de

un nucletido o gen

Slo permite el conocimiento de la secuencia

de bases, pero no su
funcin

Northern blot

Electroforesis e hibridacin
para secuencias especficas
de ARNm

Deteccin del tamao y nmero de transcripciones

Es la tcnica ms
sensible para detectar niveles de expresin de ARNm

Tcnica lenta que requiere grandes cantidades de ARN

RT-PCR
(PCR transcriptasa inversa)

Amplificacin de fragmentos
de ARN de inters para obtener millones de copias,
con un paso previo de conversin de ARNm en ADNc
bicatenario

Cuantificacin de expresin
gnica, valoracin de la eficacia de frmacos, deteccin de agentes infecciosos,
diagnstico tumoral

Requiere cantidades
mnimas de ARN

Tcnica semicuantitativa

Hibridacin in
situ

Visualizacin de una secuencia de ADN o ARN en el sitio

fsico donde se encuentra,
mediante hibridacin por
complementariedad de bases.
Variaciones de la tcnica:
FISH, Q-FISH, TELI-FISH (parafina), Flow-FISH

Analizar la presencia y/o distribucin de una secuencia

de ADN o ARN transcrito de
inters en tejidos o clulas.
Muy utilizada en los TMA,
donde puede hacerse de
forma automatizada

Sondas ms sensibles y especficas que

las de ADN; la visualizacin en el tejido
permite correlacionar
resultados con muestras histolgicas e inmunolgicas

Las sondas de ARN son

ms lbiles que las de
ADN

Western blot

Electroforesis en gel para

separar protenas segn su
peso molecular y deteccin
mediante anticuerpos especficos

Examinar cambios en niveles proteicos

Tcnica con gran

sensibilidad; permite
detectar tambin el
peso molecular de
las protenas

Tcnica semicuantitativa, poco especfica; laboriosa; requiere tcnicas de visualizacin

Inmuno -histo qumica

Deteccin de molculas mediante uniones especficas

antgeno-anticuerpo

Localizacin de protenas
especficas en tejidos o clulas

Posible a partir de
muestras congeladas o en formol

Tcnica semicuantitativa

ELISA (Enzyme
linked immuno
sorbent assay)

Ensayo inmunoenzimtico
que puede ser directo/ indirecto, cualitativo/ cuantitativo/ semicuantitativo

Cuantificacin de molculas

Sencilla, rpida,
econmica, automatizable, anlisis simultneo de varias
muestras

Requiere tcnicas de visualizacin de la reaccin enzimtica

Citometra de
flujo

Paso de clulas por un fluido colocado bajo una fuente de luz que permite su visualizacin

Recuento celular, evaluacin

de marcadores fenotpicos,
ciclos celulares, apoptosis

Tcnica rpida; permite valorar el contenido total de ADN de

una poblacin celular

Requiere clulas en suspensin

TCNICAS
PARA ADN

TCNICAS
PARA ARN

Aplicacin

AVANCES EN ODONTOESTOMATOLOGA/193

AVANCES EN ODONTOESTOMATOLOGA
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Fig. 1. Construccin y anlisis de un TMA a partir de muestras fijadas en formaldehdo y embebidas en parafina. A) Marcaje de la zona de
inters en portaobjetos y parafinas. B) Fijacin del bloque recibidor en el microtomo. C) Confeccin del cilindro recibidor. D) Toma de la regin
marcada. E) Colocacin en el cilindro preconfeccionado. F) Recoger el resto de las muestras en el bloque recibidor de la misma manera. G)
Corte del TMA. H) Tincin con hematoxilina/eosina y/o inmunotincin. I) Visualizacin mediante microscopio.

La determinacin de cambios en los niveles celulares de expresin gnica o proteica; el anlisis

de distintos candidatos farmacolgicos.
El descubrimiento y validacin de nuevas dianas
teraputicas para el tratamiento del COCE.
La evaluacin de las interacciones entre protenas.
La monitorizacin de las modificaciones proteicas. (1, 4, 6, 12, 15).
La Genmica y la Protemica utilizan para su estudio en el campo de los biochips, los ADN-chips y los
microarrays proteicos, respectivamente. Con las protenas, el escenario se vuelve ms complicado por
varias razones, entre las que se encuentran las siguientes:
194 /AVANCES EN ODONTOESTOMATOLOGA

La amplia variedad proteica permite muchas formas de funcionalizacin e hibridacin.

La tcnica no consigue una amplificacin de protenas igualable a la PCR.
Requiere una herramienta de anlisis estadstico
para cuantificar las uniones de la estructura tridimensional proteica.
Los mtodos de transporte e inmovilizacin pueden producir la desnaturalizacin o inactivacin
de las protenas (16).
Otra tcnica muy utilizada por su enorme potencial replicativo es la PCR (por Polymerase Chain
Reaction), bien la convencional, la semicuantitativa
pero con un lmite de deteccin mucho mayor que
el resto de las tcnicas, o cualquiera de sus varieda-

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Aplicacin de las tcnicas de biologa molecular en oncologa oral

des. Esta tcnica fue descrita inicialmente por

Khorana y colaboradores en 1974, y perfeccionada
por Mullis en 1986, siendo de las ms empleadas
actualmente. Permite la amplificacin de un fragmento de ADN de inters (por ejemplo un gen), obteniendo millones de copias, en slo 30 50 ciclos de
reaccin. La PCR requiere material gentico bicatenario (ADN molde o template), que se separa en las
dos hebras mediante incrementos de temperatura, y
donde cada uno de los filamentos aislados sirve de
molde para la sntesis y amplificacin de nuevas
hebras de ADN (17). La PCR es una tcnica vlida
para diferentes aplicaciones mdicas que requieran
una concentracin alta de un fragmento concreto de
ADN (17). Entre las variaciones de esta tcnica se
encuentran la PCR en tiempo real (PCR cuantitativa),
capaz de determinar el nmero de copias de ADN
presentes en una muestra, o la PCR transcriptasa
inversa, adaptada para analizar ARN mensajero monocatenario mediante un paso previo de conversin
a ADN complementario bicatenario. Esta tcnica
puede usarse en los casos en que se dispone de
niveles de ARN insuficientes para la tcnica de
Northern blot. Adems de proporcionar informacin
cuantitativa, la PCR en tiempo real presenta otra serie
de ventajas frente a la PCR tradicional, entre las que
se encuentra su mayor sensibilidad (menos falsos
negativos), rapidez y menor probabilidad de contaminacin (menos falsos positivos) (17). Existe una
PCR especialmente diseada para la deteccin de
las metilaciones en los genes implicados en la carcinognesis oral. Es la Methylation-Specific PCR o MSP,
que precisa de un tratamiento especial de la muestra
con bisulfito sdico para diferenciar las bases metiladas de las no metiladas (10, 11). La Nested-MSP
(MN-MSP) aparece como mtodo alternativo a la MSP
en aquellos casos en que se analicen muestras con
baja cantidad o calidad de ADN inicial, como puede
ocurrir con las conservadas en parafina (11).

Se podra afirmar que, a da de hoy, la tecnologa

precede al conocimiento, ya que es el rpido desarrollo de estas tcnicas lo que permite avanzar en el
conocimiento de las enfermedades a nivel molecular, as como la creacin de dianas teraputicas cada
vez ms especficas y fiables. En la actualidad existen
numerosas herramientas disponibles para dilucidar
las funciones biolgicas de un gen en sus diferentes
niveles de expresin (DNA, mRNA o protenas), entre las que se encuentran: la electroforesis en gel, las
tcnicas de hibridacin, la tecnologa microarray, los
biochips, la PCR convencional, la cuantitativa o la
transcriptasa inversa, las tcnicas de Southern,
Northern y Western blot, la secuenciacin de ADN,
la clonacin de genes, la inmunohistoqumica, el
ensayo ELISA y la citometra de flujo. No todas las
tcnicas son aplicables a cualquier muestra biolgica, sino que deberemos tener en cuenta el tipo, cantidad y mtodo de conservacin del material de partida, as como los objetivos, tiempo y economa de
la investigacin.

CONCLUSIN

Actualmente, las tcnicas con mayor utilidad en el

estudio del cncer oral son la PCR cuantitativa, los
biochips y la tecnologa microarray. La PCR en tiempo real o cuantitativa comprende, adems de las
ventajas inherentes a la PCR convencional, el poder
de cuantificacin del producto inicial, un aumento
en la sensibilidad, una mayor rapidez y menor probabilidad de contaminacin. La hibridacin con
microarrays ha esclarecido la relacin existente entre el perfil de expresin gnica y la presencia de
diversas patologas. Esta tcnica es adems de gran
inters en el ensayo de frmacos anticancergenos.
Los biochips consiguen un alto rendimiento de la
muestra y de los reactivos y, al igual que los
microarrays permiten medir la expresin de decenas de miles de genes simultneamente, pudindose recoger dicha informacin en bases de datos
con perfiles de expresin gnica que permitan
comprender las funciones e interacciones de estos genes.

Debido a que el cncer oral es una enfermedad asociada a cambios moleculares, genticos y tisulares, el
descubrimiento de biomarcadores que puedan detectar estas alteraciones proporciona una potente herramienta para el diagnstico, seguimiento y prediccin
del pronstico y de la respuesta al tratamiento.

Una vez se empiezan a crear estas bases de datos, es

importante aadir a toda investigacin molecular la
denominada bsqueda in silico, a travs de las numerosas herramientas bioinformticas actualmente
disponibles, que permiten el acceso a estas bases de
datos, muchas de ellas de acceso pblico.
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CORRESPONDENCIA
Mercedes Lpez-Durn
lopezduran.m@gmail.com