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Resumen Biología de La Célula
Resumen Biología de La Célula
Indice
I
La c
elula como unidad Funcional
1. La c
elula es la unidad fundamental de la vida
4. Clasificaci
on de C
elulas
4.1. Celula Eucarionte . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.2. Celula Procarionte . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4.2.1. Componentes moleculares de la celula . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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7
7
7
5. Interacciones at
omicas y Macromol
eculas
5.1. Fuerzas de interacci
on . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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8
6. Az
ucares
6.1. Monosac
aridos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.2. Disac
aridos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
8
8
8
II
7. Formaci
on del enlace peptdico
10
10
10.Clasificaci
on de protenas
10.1. Separaci
on de Protenas por Cromatografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
10.2. Separaci
on de Protenas por Electroforesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
11
11
12
11.Fraccionamiento Subcelular
11.1. Los organelos y las macromoleculas pueden separarse por ultracentrifugacion . . . . . . . . . . . . . . . .
11.2. Comparaci
on entre los metodos de velocidad de sedimentacion y equilibrio de sedimentacion . . . . . . . .
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13
13
III
14
Estructura y clasificaci
on de Fosfolpidos y Membranas
14
13.Distribuci
on y movimientos de los fosfolpidos a trav
es de la membrana plasm
atica
13.1. Movilidad de los Fosfolpidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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15
14.Protenas de Membrana
14.1. Ejemplo de Protena Transmembrana . . . . . . . . . . .
14.2. Reconstituci
on funcional de una protena de Membrana
14.3. Migraci
on de protenas a traves de la membrana . . . .
14.4. Glucoc
aliz . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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IV
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Comunicaci
on Celular y Receptores
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18
18
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16.Transducci
on de se
nales (ligandos)
16.1. Velocidad de respuesta celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
16.2. Regulaci
on de la sensibilidad a una se
nal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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19
19
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21
21
22
24
Transporte a trav
es de la membrana plasm
atica
19.Paso de mol
eculas hidrosolubles a trav
es de la membrana
19.1. Transporte Pasivo asociado a protenas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
19.2. Transporte Activo: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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25
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20.Canales i
onicos y propiedades el
ectricas de la membrana:
20.1. Potencial de Membrana asociado a canales ionicos: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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VI
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de los microt
ubulos:
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23.Filamentos Intermedios
23.1. Organizaci
on Estructural: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
23.2. Comparaci
on deformaci
on/tensi
on entre los componentes del citoesqueleto:
23.3. Tipos de filamentos intermedios: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
23.3.1. Tipo I: Queratinas - Quinasas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
23.3.2. Tipo II: Familia de las vimentinas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
23.3.3. Tipo III: Neurofilamentos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
23.3.4. Tipo IV: L
aminas nucleares. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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22.Microt
ubulos
22.1. Funciones: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
22.2. Estructura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
22.2.1. Regulaci
on de la din
amica de los MTs: . .
22.2.2. Protenas Motoras que se mueven a lo largo
VII
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N
ucleo, ADN y replicaci
on.
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24.Estructura y organizaci
on del n
ucleo:
24.1. La matriz nuclear y la l
amina nuclear: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
24.1.1. Poros nucleares: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
38
38
39
25.Organizaci
on del ADN y Cromosomas
25.1. Acidos
nucleicos: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
25.1.1. Apareamiento de bases nitrogenadas en la cadena de ADN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
40
41
41
26.Replicaci
on del ADN
26.0.2. Polimerizaci
on en la Hebra retardada: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
42
43
VIII
44
Transcripci
on y Traducci
on:
44
28.Transcripci
on:
28.1. Reconocimiento de la hebra molde: . . . . . . . . . . . . .
28.1.1. Promotor: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
28.1.2. Inicio de la Transcripci
on . . . . . . . . . . . . . . .
28.2. Fase de elongaci
on: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
28.3. Termino de la sntesis de RNA en procariontes: . . . . . .
28.3.1. Termino independiente de la protena : . . . . . .
28.3.2. Termino dependiente de la protena : . . . . . . .
28.4. Detalles de la transcripci
on en Eucariontes (Maduracion del
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mRNA):
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Retculo Endoplasm
atico:
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30.Generalidades de la expresi
on g
enica:
51
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Aparato de Golgi:
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34.Organizaci
on de las funciones de las Cisternas del Golgi:
58
35.Procesamiento de Oligosac
aridos en el Aparato de Golgi
59
60
XI
61
37.Etapas en la formaci
on de vesculas:
61
61
61
62
39.C
elulas epiteliales como modelo de la destinaci
on de protenas en el aparato de Golgi:
64
64
65
41.Fusi
on de vesculas con el organelo o membrana diana:
65
65
XII
67
Ciclo Celular:
43.Estimaci
on de la duraci
on de las etapas del ciclo celular:
67
44.Detecci
on del Factor promotor de la Mitosis MPF:
44.1. Ciclinas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
44.1.1. Mecanismo molecular de activacion e inactivacion de Cdk1-M (MPF) . . . . . . . . . . . . . . .
44.1.2. Control de la prote
olisis de ciclinas mediante APC/C (Complejo promotor de la anafase): . . . . .
68
69
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70
71
71
72
72
73
XIII
75
Mecanismos de la divisi
on celular:
47.Etapas de la mitosis:
47.1. Profase: . . . . . .
47.2. Prometafase: . . .
47.3. Metafase: . . . . .
47.4. Anafase: . . . . .
47.5. Telofase: . . . . .
47.6. Citocinesis: . . . .
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48.Detalles de la divisi
on Celular:
48.1. Condensaci
on de los cromosomas: . . . . . . . . .
48.1.1. Condensinas: . . . . . . . . . . . . . . . . .
48.1.2. Cohesinas: . . . . . . . . . . . . . . . . . .
48.2. Formaci
on del Huso mit
otico: . . . . . . . . . . . .
48.2.1. Cinetocoro: . . . . . . . . . . . . . . . . . .
48.3. Complejo Promotor de la Anafase APC/C: . . . .
48.4. Detalles de la anafase y la migraci
on cromosomica:
48.5. Detalles de la Telofase y citocinesis: . . . . . . . .
48.5.1. Telofase: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
48.5.2. Citodieresis: . . . . . . . . . . . . . . . . .
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49.Telofase Vegetal:
83
84
XIV
84
Meiosis
51.Etapas de la Meiosis:
51.1. Meiosis 1: . . . . . . . . . . .
51.1.1. Profase I: . . . . . . .
51.1.2. Metafase I . . . . . . .
51.1.3. Anafase I y Telofase I
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85
85
85
87
87
52.Ovog
enesis y Espermatog
enesis
52.1. Ovogenesis: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
52.2. Espermatogenesis: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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88
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53.Cromosomas
53.1. Cromosomas Politenicos: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
53.2. Cromosomas Plumulados: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
53.3. Cariotipo Humano: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
53.3.1. Preparaci
on de un Cariotipo de Sangre: . . . . . . . . .
53.4. Clasificaci
on de modelos de cromosomas: . . . . . . . . . . . . .
53.4.1. Nomenclatura en citogenetica de cromosomas bandeados
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89
89
89
90
90
90
54.Sndrome de Down.
91
XV
92
Estructura y Funci
on de la Mitocondria
55.Estructura de la Mitocondria:
92
56.Teora Endosimbi
otica:
93
57.Importaci
on de Protenas la mitocondria.
93
58.Sntesis de ATP:
58.1. Fosforilaci
on oxidativa y cadena transportadora de electrones . . . . . . . .
58.2. Detalles de la cadena transportadora y el acoplamiento quimiosmotico . . .
58.2.1. Potencial Redox asociado a la cadena transportadora de electrones:
58.2.2. La ATP Sintasa: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
XVI
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59.Fibroblastos y componentes de la
59.1. Protenas Fibrilares: . . . . . . .
59.1.1. Col
ageno: . . . . . . . . .
59.1.2. Elastina: . . . . . . . . .
59.2. Protenas no Fibrilares: . . . . .
59.2.1. Fibronectina: . . . . . . .
59.2.2. Laminina: . . . . . . . .
59.3. Proteoglicanes: . . . . . . . . . .
59.4. L
aminas Basales: . . . . . . . . .
ECM:
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. 99
. 99
. 99
. 100
60.Mol
eculas de Adhesi
on. Interacci
on c
elula-c
elula y c
elula-matriz:
61.Uniones Celulares:
61.1. Uniones estrechas: . . . . . . . . . . . . .
61.2. Anclaje celular: . . . . . . . . . . . . . .
61.2.1. Uniones adherentes. . . . . . . . .
61.2.2. Desmosomas: . . . . . . . . . . . .
61.2.3. Hemidesmosomas: . . . . . . . . .
61.2.4. Adhesiones focales: . . . . . . . .
61.3. Uniones de comunicaci
on (Gap junctions):
XVII
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Tarea 1: Por qu
e el ADN contiene Timina en vez de Uracilo?
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101
102
102
102
103
103
103
103
105
A. Desaminaci
on de la Citosina y correcci
on en el ADN mediante enzimas
105
B. Por qu
e el ADN utiliza una base metilada (timina) y no lo hace en el ARN?
106
Parte I
La c
elula como unidad Funcional
1.
La c
elula es la unidad fundamental de la vida
2.
Los primeros dos postulados de esta teora fueron establecidos por Matthias Schleiden (1838) y por Theodor Schwann
(1839) . El tercero fue realizado por Virchow en 1855.
La Teora Celular afirma:
1. Todos los organismos vivos est
an compuestos por celulas. Primera evidencia: L
aminas de corcho (Hooke)
2. La celula es la unidad estructural de la vida.
3. Todas las celulas se originan a partir de celulas pre-existentes.
3.
4.
Clasificaci
on de C
elulas
Seg
un el tama
no y la complejidad celular estas se pueden clasificar en:
4.1.
C
elula Eucarionte
tama
no entre 10-100m
Caracterizada por su envoltura nuclear definida
organizaci
on interna m
as compleja, presencia de organelos)
delimitados por membrana plasm
atica
Ejemplos: animales, plantas, hongos y protozoos
4.2.
C
elula Procarionte
tama
no entre 1-10 m
material genetico sin envoltura nuclear (nucleoide)
organizaci
on interna relativamente simple
delimitados por membrana plasm
atica (en algunos casos, pared celular)
eubacterias, arqueobacterias
4.2.1.
Componentes moleculares de la c
elula
5.
Interacciones at
omicas y Macromol
eculas
5.1.
Fuerzas de interacci
on
6.
Az
ucares
Las macromoleculas se forman a partir de unidades individuales identificables llamads monomeros. En esta secci
on se
estudiaran las macromoleculas compuestas por uniones de monosacaridos.
6.1.
Monosac
aridos
Los monosac
aridos presentan una f
ormula general de Cn H2n On donde n vara entre 3 y 7.
Los monosac
aridos m
as comunes son las hexosas y existen 3 tipos principales:
1. Glucosa
2. Galactosa
3. Fructosa (Manosa)
6.2.
Disac
aridos
El carbono que lleva el grupo aldehdo o cetona puede reaccionar con cualquier grupo OH de otra molecula, formando
un enlace glucosdico. En cada uni
on por condensacion se libera una molecula de agua.
1. Maltosa = Glucosa + Glucosa
2. Lactosa = Galactosa + Glucosa
3. Sacarosa = Glucosa + Fructosa
Parte II
Estructura com
un a los amino
acidos
El grupo radical determina al amino
acido y bajo este grupo existe una nueva clasificacion:
Grupos Radicales no Polares: Prolina, Leucina, Fenilalanina
Grupos Radicales Polares sin carga: Glicina, Serina.
Grupos Radicales con carga positiva: Lisina.
Grupos Radicales con carga negativa: Aspartato
Protenas: Las Protenas se pueden definir como polmeros formados por la union mediante Enlaces peptdicos de
amino
acidos.
Las protenas con macromoleculas
Compuestos m
as abundantes de la materia viva
Son
altamente especficas
A traves de ellas se expresa la informaci
on genetica.( Dogma central de la biologa molecular )
7.
Formaci
on del enlace peptdico
El enlace se forma entre los grupos carboxilo del aminoacido 1 y el grupo amino del aminoacido numero 2. En esta
uni
on se libera una molecula de agua (sntesis por deshidratacion) y se forma un dipeptido.
Enlace peptdico
9
Interacci
on entre Cisteinas en la molecula de la insulina
Urea y M ercaptoetanol : Estos dos compuestos actuan como agentes denaturantes de la estructura terciaria de la
protena pues afectan los enlaces disulfuro, actuan como agentes reductores (que oxidan) devolviendoles su estructura SH
individual a cada Cistena. Sin embargo, las protenas pueden renaturalizarse mediante la dialisis.
8.
9.
1. Transporte: Hemoglobina
2. Enzim
atica: Lisozima.
3. Homeost
atica: Insulina
4. Estructural: Col
ageno
5. inmunol
ogica: Inmunoglobulinas
6. movimiento: Actina y Miosina
7. Reserva: (Funci
on utilizada solo cuando se acaban las reservas de hidratos de carbono y lpidos)
10
10.
Clasificaci
on de protenas
I. Seg
un presencia o no de un grupo prostetico:
Protenas simples: Solo est
an formadas por protena
Protenas conjugadas :Est
an formadas por la protena mas un grupo no proteico llamado grupo prostetico
II. Seg
un estructura global:
Protenas fibrosas y protenas globulares
10.1.
Separaci
on de Protenas por Cromatografa
Las protenas se suelen fraccionar mediante la cromatografa en columna , en la que una mezcla de protenas en
soluci
on se hace pasar a traves de una columna que contiene una matriz solida porosa. Las diferentes protenas de la
mezcla se van retrasando m
as o menos a causa de su interaccion con la matriz de la columna y pueden recogerse por
separado en su estado funcional nativo a medida que fluyen por el extremo inferior de la columna. En funcion del tipo de
matriz que se utilice, las protenas se pueden separar seg
un:
su carga: Cromatografa de intercambio i
onico
su hidrofobicidad: Cromatografa hidrof
obica
su tama
no: Cromatografa de Filtraci
on
su capacidad para unirse a determinados grupos qumicos: Cromatografa de afinidad.
Cromatografa de Intercambio i
onico
Cromatografa de afinidad
Cromatografa de intercambio i
onico: La matriz insoluble presenta cargas ionicas que retardan las moleculas de
carga opuesta. Las m
as utilizadas son las de dietilaminoetilcelulosa (DEAE-Celulosa), de carga positiva y la fosfocelulosa,
de carga negativa. La fuerza de uni
on entre las moleculas disueltas y la matriz depende de la fuerza ionica y del pH de la
soluci
on que atraviesa la columna. Estos dos par
ametros pueden variarse para obtener una separacion mas efectiva.
Cromatografa de Filtraci
on en Gel: La matriz es inerte pero porosa. Las moleculas suficientemente peque
nas para
penetrar en el interior de la matriz se retrasan y viajan mas lentamente a traves de la columna. Las esferas porosas m
as
comunes son polisac
aridos como el dextrano o agarosa.
Cromatografa de afinidad: utiliza una matriz insoluble que esta unida covalentemente a un ligando especfico (i.e
substrato enzim
atico), que se unir
a a una protena determinada de la muestra. Las moleculas de enzima que se han unido
a los substratos inmovilizados en columnas de este tipo se pueden liberar con una solucion concentrada del substrato en
forma libre, mientras que moleculas que se han unido a anticuerpos inmovilizados pueden eluirse disociando el complejo
antgeno-anticuerpo con soluciones concentradas de sales o soluciones con pH alto o bajo. Suelen ser las mas efectivas al
poder conseguir un alto grado de pureza en solo una pasada por estas columnas.
11
10.2.
Separaci
on de Protenas por Electroforesis
Las protenas suelen tener una carga neta positiva o negativa, que refleja la de los aminoacidos cargados que contiene.
Al aplicar un campo electrico a una soluci
on que contenga una molecula proteica, la protena migrara a una velocidad
dependiente de su carga, tama
no y forma. Esta tecnica se conoce como electroforesis.
Actualmente este tipo de separaci
on se realiza en conjunto con SDS, mercaptoetanol y gel de poliacrilamida.
s de la
SDS (Dodecil sulfato sodico), para luego migrar hacia el anodo (polo positivo) a trave
12
11.
Fraccionamiento Subcelular
De la misma forma que un tejido puede ser disgregado en sus diferentes tipos celulares vivos, la celula puede ser
fraccionada en sus organelos y macromoleculas funcionales.
11.1.
11.2.
Comparaci
on entre los m
etodos de velocidad de sedimentaci
on y equilibrio de sedimentaci
on
Velocidad de sedimentaci
on: la muestra se coloca sobre una solucion diluida de sacarosa y los componentes subcelulares sedimentan a velocidades dependiente de su tama
no. Para estabilizar las bandas que sedimentan y evitar que
se mezclen, el tubo contiene un gradiente continuo de sacarosa que aumenta de concentracion hacia el fondo del tubo.
Despues de la centrifugaci
on, los componentes pueden recogerse por separado.
Equilibrio de Sedimentaci
on: Cuando los componentes subcelulares se centrifugan en un gradiente, pueden desplazarse hacia arriba o abajo hasta que alcanzan una zona en que su densidad esta comprendida entre las densidades vecinas
del gradiente. En este Equilibrio se utiliza un gradiente discontinuo de sacarosa (20-70 %). Sin embargo, para la separaci
on
de protenas y de
acidos nucleicos se utilizan gradientes preparados con cloruro de cesio. Cada organelo posee estructuras
propias, por lo que existen enzimas marcadoras para marcar distintos organelos. Por ejemplo:
Lisosomas: Fosfatasa
acida
Peroxisomas: Catalasa
Mitocondrias: Citocromo-C Oxidasa
Golgi: Galactocil Transferasa
RER: Glucosa-6-Fosfatasa
13
Parte III
Estructura y clasificaci
on de Fosfolpidos y
Membranas
Los fosfolpidos son estructuras que presentan una cabeza polar y una cola formada por cadenas de acidos grasos
altamente hidrof
obicas. La cabeza polar est
a formada por un grupo colina con carga positiva, un grupo fosfato P O4 con
carga negativa, y una molecula de glicerol.
Principales fosfolpidos de las membranas plasm
aticas en mamferos
1. Fosfatidiletanolamida
2. Fosfatidilserina
3. Fosfatidilcolina
12.
F
acilmente caracterizable por su anillo esteroidal. Posee tambien una cabeza polar y una cadena hidrocarbonada
apolar.
14
13.
Distribuci
on y movimientos de los fosfolpidos a trav
es de la membrana
plasm
atica
La distribuci
on de fosfolpidos y glucolpidos a traves de la membrana plasmatica es asimetrica. Generalmente, los
fosfolpidos con carga neta negativa quedan mirando hacia el interior de la celula.
La membrana plasm
atica se caracteriza por ser una bicapa fosfolipdica donde las cabezas polares miran hacia el
exterior y el interior celular, mientras que las colas hidrofobicas quedan mirandose entre si al interior de la membrana.
13.1.
Existen cuatro movimientos comunes al movimiento de los Fosfolpidos a traves de la membrana plasmatica, recordando
que esta no es rgida:
1. Flexi
on: Movimiento en donde se estira o se acorta la distancia entre las 2 colas hidrofobicas de los Fosfolpidos.
2. Rotaci
on: Movimiento en donde el Fosfolpido gira sobre su eje.
3. Flip-Flop (Difusi
on transversal): Este tipo de accion es escasa pues requiere gran cantidad de energa para
mover un fosfolpido a traves de la bicapa (de un extremo a otro).
4. Difusi
on lateral: Desplazamiento horizontal de cada fosfolpido.
14.
Protenas de Membrana
Aunque la estructura basica de las membranas biologicas esta determinada por la bicapa lipdica, la mayora de
sus funciones especficas est
an desempe
nadas por protenas. Existen 6 sistemas comunes de asociacion de protenas a la
membrana plasm
atica:
1. Helice u
nica.
2. Helices multiples.
3. Uni
on covalente con un lpido.
4. A traves de un oligosac
arido.
5. Interacci
ones no covalentes con otras protenas de membrana. Union de una protena intrinseca con una periferica.
Organizaci
on de protenas a traves de la bicapa lipdica
14.1.
15
-helice. No es un detalle menor que los aminoacidos expuestos a las colas apolares de los
cidos estrictamente apolares como por ejemplo: Leucina,
fosfolpidos corresponden a aminoa
Alanina, Triptofano.
cidos polares pero sin carga neta como
Del mismo modo existe en menor medida presencia de aminoa
la Glicina
14.2.
Reconstituci
on funcional de una protena de Membrana
Al estudiar el comportamiento de cierta protena de membrana, primero es necesario aislarla del resto de las protenas
y generar una nueva membrana compuesta en su totalidad por la protena a investigar. La adicion de un detergente
como el SDS disuelve la membrana plasm
atica y se puede obtener la protena de interes asociada al detergente y a restos
fosfolipdicos de la membrana (formando micelas debido a la interaccion con el medio acuoso y la naturaleza hidrof
obica de
estos lpidos). Posteriormente se procede a purificar la protena y remover el detergente. Finalmente se a
naden fosfolpidos
para formar una bicapa compuesta por la protena a estudiar.
Purificaci
on de la bomba Na-K
14.3.
Migraci
on de protenas a trav
es de la membrana
Un experimento que utiliza marcajes fluorescentes a distintas protenas permite demostrar que las protenas no permanecen rgidas en la membrana plasm
atica sino que tambien presentan fluidez
16
14.4.
Glucoc
aliz
Glucoc
aliz en un acercamiento por microsc
opio
optico
17
Parte IV
Comunicaci
on Celular y Receptores
Se
nales Externas inducen respuestas a nivel celular que permiten la adaptacion y supervivencia del organismo. Las
celulas constantemente est
an censando el medio.
15.
Las ligandos m
as comunes a los que se pueden ver enfrentadas las celulas son se
nales de tipo:
Protenas
Peptidos
Derivados de amino
acidos
Lpidos
Luz
Gases
Movimientos mec
anicos
15.1.
Receptores de superficie
15.2.
Receptores Intracelulares
15.3.
Se
nalizaciones intercelulares
1. Se
nalizaciones Paracrinas: La celula productora de la se
nal, afecta solamente a las celulas en una vecindad a
ella
2. Se
nalizaciones Autocrinas: La misma celula produce una se
nal que es captada por receptores de ella misma
18
3. Se
nalizaci
on dependiente de contacto: La celula productora, exocita una se
nal que va a parar directamente
a un receptor de membrana de otra celula que esta en contacto directo con la primera.
4. Se
nalizaci
on Endocrina: Celulas endocrinas liberan su contenido al torrente sanguineo, distribuci
on a todo el
cuerpo, pero solamente las celulas que posean en sus membranas receptoras de esta se
nal, responderan al estmulo.
Adem
as, un tipo de estmulo no asegura que la respuesta en las celulas receptoras sea la misma.
El tiempo de respuesta de la se
nalizaci
on endocrina es lento comparada con la sinaptica pero afecta a una gran
cantidad de celulas
Misma se
nal (Adrenalina) produce respuestas diferentes entre las celulas cardiacas y las celulas hep
aticas
5. Se
nalizaci
on Sinaptica: Se
nales electricas y liberacion de neurotransmisores lejos del cuerpo celular (DendritaAx
on). El tiempo de respuesta de este tipo de se
nal es mas rapido pero a la vez mas especfico.
16.
Transducci
on de se
nales (ligandos)
El proceso de Transducci
on celular lo podemos resumir en 3 pasos. En primer lugar existe una captaci
on de se
nal
(Extra o intracelular) que transforma esta se
nal al lenguaje interno celular, mediante una accion de relevo. Esta nueva
se
nal es amplificada hacia numerosos segundos mensajeros que tienen como funcion dar origen a la respuesta celular
que puede ser:
Alteraci
on del metabolismo
Alteraci
on celular o movimiento
Alteraci
on de la expresi
on genica
Es importante aclarar que no todas las respuestas finalizan en una alteraci
on a la expresi
on g
enica. Pues
respuestas a determinadas se
nales pueden ser simplemente llevar a cabo la activaci
on de enzimas que no
necesitan ser codificadas, ya que estaban presentes en la c
elula en su forma inactiva.
16.1.
Las respuestas celulares que requieren de activacion de genes para la codificacion de protenas requieren un tiempo
mayor (minutos-horas) que si solamente se necesitase la activacion o la alteracion de una estructura proteica (segundosminutos). Sin embargo, ambas son efectivas y alteran el comportamiento celular en respuesta a la se
nal recibida.
16.2.
Regulaci
on de la sensibilidad a una se
nal
Existen 5 formas en las que una celula puede regular la sensibilidad de respuesta a una se
nal:
1. Secuestro del receptor
2. Degradaci
on del receptor
3. Inactivaci
on del receptor
4. Inactivaci
on de una protena se
nalizadora (i.e: Protenas G)
5. Producci
on de una protena inhibitoria
19
17.
El ligando (hidrof
obico) viaja unido en una protena carrier para atravesar directamente la membrana plasm
atica y
alterar la expresi
on genica.
Receptores nucleares: En la mayora de los casos donde el ligando posee caractersticas lipdicas la respuesta est
a relacionada a la expresi
on genica de nuevas protenas. Los receptores nucleares corresponden a protenas que regulan esta
expresi
on moduladas por la interacci
on con el ligando. No requiere necesariamente de la acci
on de segundos
mensajeros.
El receptor nuclear en ausencia de ligando se encuentra a unido a una protena inhibitoria para mantenerlo en su estado
inactivo. En presencia del ligando la protena inhibitoria deja cede su lugar para comenzar la transcripcion de genes. Es
importante destacar que el receptor nuclear posee en su estructura un sitio de union al DNA para la codificaci
on precisa
de la protena necesitada.
Existen dos tipos de respuesta para a esta se
nal:
20
18.
18.1.
21
Protena G activa a la adenilato ciclasa para formar AMPc (Segundos mensajeros) + 2 grupos fosfatos que activan la
PKA(Protena quinasa dependiente de AMPc).
PKA o protenas quinasas dependientes del AMPc : El PKA puede regular tanto la expresion genica alterada
en respuesta a una se
nal, como estimular funciones metabolicas y homeostaticas de la celula. La regulacion del metabolismo por PKA es un proceso r
apido comparado con la accion de la misma protena de relevo sobre la expresi
on genica
(Principalmente porque la respuesta genetica suele ser mas lenta, ademas que existe una mayor cantidad de relevos en la
propagaci
on de la se
nal).
Activacion de Protena Gq
Protena G activa a la Fosfolipasa C para liberar IP3 que abre los canales de Ca2+ (Segundos mensajeros) que activan la
PKC(Protena quinasa dependiente de Calcio).
Un descubrimiento importante a partir del uso del Calcio como Segundo Mensajero es su inmediata actividad en el ovocito
tras fertilizaci
on. Con el paso del tiempo se observa como este ion se libera a la celula y la recorre en un tiempo cercano
a los 3 minutos.
18.2.
22
La presencia del ligando en los receptores celulares RTK, activa este complejo produciendo una autofosforilaci
on cruzada
entre los dominios Tirosina Quinasas
Autofosforilaci
on de RTKs:
Un aumento en la autofosforilacion de RTKs puede conseguir dos resultados. Un
aumento en la actividad de Tirosina Quinasa del receptor (Mantencion de la fosforilacion cruzada) y la uni
on de este
complejo con protenas se
nalizadoras o adaptadoras para seguir el curso de la transduccion de la se
nal hacia las protenas
RAS.
Protena Ras: Una protena RAS es una protena G monomerica, especficamente es una peque
na GTPasa que alterna
dos conformaciones estructurales:
Una forma activada, donde la protena RAS esta unida al guanosn trifosfato (GTP), llamada RAS-GTP.
Otra forma inactivada, donde la protena RAS esta unida al guanosn difosfato (GDP), llamada RAS-GDP
Las protenas Ras son activadas por los receptores TirosinaQuinasas
Activacion de protenas Ras
En su forma inactiva la proteina Ras se encuentra asociada a una molecula de GDP, Tras la activaci
on de las RTKs y
el encendido de las protenas se
nalizadoras, la protena Activadora Ras Cambiar el GDP por GTP dejando a la protena
Ras en su forma activa
La Activaci
on de las protenas Ras Permite realizar el relevo de la se
nal a otros modulos de se
nalizacion. Por ejemplo
MAPKs
Relevo a MAPKs
23
Parte V
Transporte a trav
es de la membrana plasm
atica
En esta secci
on se revisan dos tipos de transporte asociado a protenas:
1. Transporte de solutos mediados por protenas de membrana:
Transporte Activo
Transporte Pasivo
2. Canales i
onicos y propiedades electricas de la membrana plasmatica.
Conceptos b
asicos:
Difusi
on por gradiente de concentraci
on: Principio basico de la membranas permeables de soluto. Las moleculas se mueven de lugares de mayor concentracion a zonas de menor concentracion. En el equilibrio no cesa el
movimiento, sin embargo el movimiento neto de partculas es 0.
Osmosis: Membrana no permeable al soluto, pero si permeable al solvente: Sea la concentracion de soluto A mayor
que la concentraci
on en B,A y B unidos por la membrana, el agua trata de moverse desde B a A para diluir el soluto
concentrado. En el equilibrio ambas soluciones tienen igual concentracion Molar de soluto.
Osmoralidad: Cantidad de soluto presente en la solucion, sin importar su naturaleza. La osmoralidad vara si es
que el compuesto se disocia o se asocia en el medio acuoso. Una mayor osmoralidad provoca un desplzamiento de
agua hacia esta concentraci
on.
Presi
on osm
otica: Fuerza que empuja el flujo de agua desde zonas de menor osmolaridad hacia zonas de mayor
osmolaridad.
La celula es electricamente neutra, debe poseer igual cantidad de cargas positivas y negativas. Sin embargo, la concentraci
on i
onica y electrica presente en la celula presenta diferencias. Recordemos ademas, que la membrana plasm
atica
suele estar cargada negativamente en su cara interna y ser positiva en su cara mirando al medio extracelular.
Caractersticas generales en la concentraci
on i
onica a nivel extra e intracelular
Importante es recalcar las concentraciones de los iones N a+ y K + . El primero se encuentra presente en mayor medida
en el medio extracelular (generando un gradiente de concentraci
on hacia el interior, y el potasio genera un gradiente de
concentraci
on hacia el medio extracelular.
La bicapa lipdica de la membrana plasm
atica presenta permeabilidad a los siguientes compuestos:
Gases: como el CO2 , O2 , N2
Moleculas peque
nas no polares: Etanol.
Sin embargo, moleculas neutras, peque
nas pero con polaridad definida(agua, urea) presentan una baja permeabilidad a
la membrana, siendo protenas transportadoras el principal medio de ingreso hacia el medio intracelular.
Moleculas grandes,iones, o moleculas polares (de tama
no considerable) son impermeables a la membrana celular.
24
19.
Paso de mol
eculas hidrosolubles a trav
es de la membrana
19.1.
La difusi
on facilitada mediada por un transportador involucra cambios conformacionales en la protena. Esta protena
puede presentar 1 o m
as sitios de uni
on para el soluto a transportar, y los cambios en la conformacion son secuenciales y
reversibles (soluto puede entrar y salir a traves de la misma protena)
Como la concentraci
on de glucosa es mayor en el medio extracelular, se genera un gradiente de concentraci
on para este
soluto. Como la glucosa es una molecula Grande necesita de una protena transportadora de tipo uniporte
Es importante evidenciar que la difusi
on facilitada alcanza una velocidad mayor que la difusion simple en el paso de solutos
a traves de la membrana. La velocidad m
axima de transporte en protenas viene dada por las siguientes condiciones:
1. Nivel de saturaci
on de la protena transportadora
2. Velocidad del cambio conformacional del transportador (lmite de velocidad)
25
19.2.
Transporte Activo:
Existen 3 estrategias b
asicas para medir el transporte activo de un soluto:
Transporte Activo Simporte: los gradientes de concentracion de los solutos apuntan en direcciones opuestas. la
partcula cargada de este sistema ingresa a favor de su gradiente electroqumico para generar la energa necesaria para
ingresar un soluto en contra de su gradiente de concentracion.
Transporte Activo Antiporte: Los gradientes de concentracion de los solutos apuntan en la misma direcci
on. La
partcula cargada del sistema ingresa a favor de su gradiente electroqumico para generar la energa necesaria para sacar
el soluto en la direcci
on opuesta.
Bombas dependientes de ATP:
Casi un tercio del ATP de una celula se utiliza en bombas de tipo Sodio-Potasio ATPasa
La bomba sodio-potasio permite regular la osmolaridad intracelular maneniendo el gradiente de N a+
26
20.
Canales i
onicos y propiedades el
ectricas de la membrana:
En el caso de un canal, se habla de una protena que tiene un poro donde pasan los iones. Una protena canal
siempre transporta solo iones, a excepci
on de las aquaporinas. Estas protena siempre transportan a favor del gradiente
de concentraci
on. Es mucho m
as r
apido y eficiente que el paso de soluto mediado por protenas transportadoras.
Caractersticas de los canales:
Transporte de iones especficos.
Transporte siempre a favor de la corriente.
hasta 109 iones/seg.
Canales i
onicos abiertos y cerrados
Los canales i
onicos, adem
as pueden clasificarse de acuerdo al estmulo que gatilla su apertura.
Apertura de canales i
onicos por los 3 posibles caminos
27
20.1.
Un potencial de membrana se logra cuando existe una diferencia de cargas en ambos lados de la membrana. En
condiciones de equilibrio, el potencial base de la celula bordea los -80mv.
Potencial de membrana y canales de sodio asociados a diferencias de voltaje.
Durante el impulso nervioso, los canales que se encontraban cerrados se abren por la diferencia de voltaje asociado y el
sodio ingresa a la celula. Posteriormente en el periodo refractario, los canales de sodio se cierran y quedan inactivados.
Es responsabilidad de una protena de Transporte activo (bomba Sodio-Potasio) restituir las concentraciones iniciales de
la celula neuronal para volver a recibir un impulso nervioso
Canales asociados a ligando convierten se
nales qumicas en electricas: En la sinapsis qumica, una celula
presinaptica mediante la liberaci
on de neutransmisores transfiere el impulso nervioso gracias a la accion de canales
asociados a ligando
Neurotransmisores en la sin
apsis qumica.
28
Parte VI
21.
Los filamentos de actina son polmeros helicoidales, enroscados de dos en dos, de la protena actina. Aparecen como
estructuras flexibles, con un di
ametro de 5 a 10 nm que estan organizadas en una gran variedad de haces, de redes
bidimensionales, o geles tridimensionales.
Estructura de la Actina
Aunque los filamentos de actina est
an dispersos por el citoplasma de la celula, estan altamente concentrados en el c
ortex,
justo por debajo de la membrana plasm
atica.
29
21.1.
Da fuerza mec
anica a la superficie celular.
Permite el cambio de forma celular.
Movimiento.
El c
ortex de actina puede generar y mantener la polaridad celular junto con los microt
ubulos.
Determinadas se
nales extracelulares que afectan a una parte de la superficie pueden provocar reestructuraciones locales del
c
ortex de actina debajo de la zona correspondiente de la membrana plasmatica. De manera recproca, la organizaci
on del
c
ortex de actina puede tener una influencia determinada en el comportamiento de la membrana plasmatica que est
a por
encima. Mecanismos basados en los filamentos de actina corticales pueden empujar la membrana plasm
atica hacia afuera
formando largas y finas microespinas o lamelipodios (filopodios) o pueden invaginar la membrana durante la divisi
on
celular.
21.2.
Estructura de la Actina:
La actina corresponde a una protena globular en donde distintas subunidades se juntan para formar el microfilamento:
subunidades de G-Actina de naturaleza globular se unen entre s para formar F-Actina de estructura fibrosa.
Caracterizada por su extremo m
as y su extremo menos; El extremo plus tiene la capacidad de unirse a mon
omeros de
actina de una forma mucho m
as r
apida y din
amica que la zona minus.
30
21.2.1.
Fen
omeno de nucleaci
on:
Reguladores de la polimerizaci
on:
31
21.2.3.
Organizaci
on de F-actina junto con -actinina generan un haz contractil que permite el paso de la miosina II a traves
del haz.
El empaquetamiento con fimbrina impide la entrada de miosina II en el haz, lo que en principio la inhibe como banda
contr
actil y le otorga una figura de haz paralelo.
Participaci
on de la Miosina: La miosina es otra de las protenas asociadas al citoesqueleto de la actina, participa
en el movimiento de organelos y la reestructuracion de redes durante el movimiento.
Miosina Tipo 1: Protenas que ayudan al transporte de vesculas a traves del filamento de actina. Permite a las
vesculas Caminar sobre el filamento de actina.
Miosina tipo 2: permite la contracci
on muscular.
32
Contracci
on Muscular: en la contracci
on muscular, los filamentos de miosina y de actina se deslizan uno sobre otro,
disminuyendo la longitud del sarc
omero. El deslizamiento de los filamentos gruesos y los delgados se produce debido a la
fuerza generada de las cabezas de miosina con los filamentos de actina. Este proceso es dependiente del ATP.
Ciclo de los enlaces cruzados
33
22.
Microt
ubulos
Los microt
ubulos son cilindros largos y huecos formados por una protena tubulina. Su diametro externo es de 25 nm
y son mucho m
as rgidos que los filamentos de actina. Los microt
ubulos son largos y rectos y tpicamente disponen de un
extremo unido a un centro organizado de microt
ubulos llamado centrosoma, Los microt
ubulos emanan a partir de estos
centros organizadores. Los extremos menos se encuentran en el centro organizador de MTs, los extremos
m
as,cerca de la membrana plasm
atica.
Organizaci
on de los microt
ubulos.
22.1.
Funciones:
22.2.
Estructura:
Los microt
ubulos se forman a partir de uniones de subunidades de -tubulina y -tubulina. A este complejo se le
denomina heterodmero de tubulina y corresponde a la subunidad basica del microt
ubulo.
34
Los microt
ubulos son estructuras altamente din
amicas. El extremo mas sufre mayores ciclos de crecimiento y acortamiento,
el extremo menos se ubica dentro del centrosoma.
Regulaci
on de la din
amica de los MTs:
Protenas MAP: La presencia de estas protenas sobre el CAP provocan un aumento en la tasa de crecimiento y una
disminuci
on de la frecuencia de cat
astrofes, lo que trae como consecuencia microt
ubulos mas largos y menos din
amicos.
35
22.2.2.
23.
Filamentos Intermedios
Los filamentos intermedios corresponden a fibras proteicas de gran resistencia y de un diametro de 10 nm. Tienen
vital importancia en celulas sujetas a tensi
on (i.e: celulas epiteliales), neuronas y celulas musculares. Su estructura
intracelular se puede observar como una red alrededor del n
ucleo, que se extiende hacia la periferia. Los filamentos
intermedios mantienen la estabilidad de los tejidos.
Ante un corte, las celulas del tejido no pueden permanecer juntas pues se rompe la conexi
on de filamentos intermedios
entre la l
amina basal y las celulas epidermicas en la piel.
36
23.1.
Organizaci
on Estructural:
El mon
omero de los filamentos intermedios corresponde a una region de tipo -helice con un dominio central compuesto
por alrededor de 310 amino
acidos, en esta regi
on existen ademas repeticiones de 7 aminoacidos. Los dominios carboxilo
y amino terminales de este mon
omero varan en tama
no y en secuencia.
Tetr
ameros y polimerizaci
on de filamentos intermedios.
23.2.
Comparaci
on deformaci
on/tensi
on entre los componentes del citoesqueleto:
Relaci
on deformaci
on/tensi
on entre los distintos componentes del citoesqueleto.
23.3.
23.3.1.
Los filamentos de queratina mantienen juntas las capas de celulas (i:e epitelio, piel, cabello). Los desmosomas conectan
los filamentos de keratina de una celula a otra.
Desmosoma: Los desmosomas son estructuras celulares que mantienen adheridas a las celulas vecinas. Estructuralmente est
a uni
on est
a ligada a sus filamentos intermedios de queratina.
37
23.3.2.
La vimentina es una de las protenas fibrosas que forman los filamentos intermedios del citoesqueleto intracelular de
celulas embrionarias, ciertas celulas endoteliales, as como tambien como en las celulas sanguneas. Desminas participan en
el m
usculo liso y estriado. La vimentina corresponde a una protena glial acdica que participa en celulas como (astrocitos
y celulas de Schwann).
23.3.3.
Los neurofilamentos presentan numerosos puentes, lo cual los hace especialmente importantes para dar estabilidad
y largo fino al ax
on. Los neurofilamentos se ubican con mayor presencia justo por debajo de la membrana
plasm
atica.
Tipo IV: L
aminas nucleares.
Presentes en todas las celulas eucariontes, forman una red bajo la membrana nuclear. Esta red es din
amica y es
capaz de disociarse durante la mitosis.
L
aminas nucleares otorgan rgidez y dinamismo al n
ucleo.
Parte VII
N
ucleo, ADN y replicaci
on.
24.
Estructura y organizaci
on del n
ucleo:
El n
ucleo celular es un organelo compuesto por una doble membrana fosfolipdica la cual posteriormente se continua con
el retculo endoplasm
atico, entre las dos membranas que cubren el n
ucleo celular, existe un espacio llamado perinuclear.
Su volumen es el mayor comparado con cualquier otro organelo dentro de la celula. Inmediatamente bajo la membrana
nuclear se encuentran los filamentos intermedios de L
aminas nucleares A,B y C. Dentro del n
ucleo existe una zona
de mayor densidad llamada nucl
eolo, que en primera instancia corresponde al lugar de sntesis de rRNA.
24.1.
La matriz nuclear y la l
amina nuclear:
Siendo el n
ucleo el centro organizador de la celula, la ventaja que otorga la separacion del material genetico del resto
de la celula es que permite una regulaci
on m
as ordenada y eficiente de los procesos celulares. Sin embargo, el n
ucleo no
es una estructura impermeable, de echo la existencia de poros nucleares permiten el paso de sustancias desde y hacia
afuera del n
ucleo. Cada n
ucleo celular posee entre 3000 y 4000 poros nucleares.
38
Representaci
on de la envoltura nuclear
24.1.1.
Poros nucleares:
Cada poro nuclear esta compuesto por una subunidad llamada anillo, que representa la base del poro, sobre este anillo
existen proyeccciones hacia el citoplasma y nucleoplasma de protenas fibrilares. Las fibras hacia el interior del n
ucleo
foman el basket o cesta.
El transporte mediado por el n
ucleo tiene diferentes medios de transporte (activo o pasivo). El dametro
de exclusi
on para pasar por difusi
on facilitada a trav
es de los poros es de 10 nm.
estructura b
asica del poro nuclear.
Surge la interrogante acerca de como una protena tras ser sintetizada sabe a que region de la celula debe migrar para
realizar su funci
on, en una experimentaci
on con nucleoplasmina (protena
acida que participa en el ensamblaje del
nucleosoma uniendose a las protenas Histonas) se logro determinar la forma en que las diferentes partes de esta protena
presentan actividad para migrar al n
ucleo celular:
39
Imagen de la izquierda muestra el proceso de transporte nuclear mediado por protenas, la imagen de la derecha nos
muestra que sustancias son capaces de entrar y salir del n
ucleo.
25.
Organizaci
on del ADN y Cromosomas
25.1.
Acidos
nucleicos:
Estructura b
asica de un nucleotido de ADN
La uni
on de nucle
otidos se produce por condensacion de una molecula de agua entre el grupo fosfato ubicado en el carbono
5 y el grupo OH presente en el carbono 3.
25.1.1.
En la molecula de ADN, la Adenina se une a la Timina formando dos puentes de hidrogeno, mientras que la Guanina
y Citosina se unen formando 3 puentes de hidr
ogeno. Una mol
ecula de ADN con una alta presencia de Guanina
o Citosina presentar
a una mayor cohesi
on y se requerir
a m
as fuerza para separar la hebra.
26.
Replicaci
on del ADN
Modelo de replicaci
on semiconservativa.
Inicio de la Replicaci
on: El inicio de la replicacion esta dado por la formacion de una Horquilla de replicaci
on. En
las celulas eucariontes existen muchos lugares de inicios de replicacion. Las horquillas se extienden hacia las dos direcciones
de la doble hebra. En celulas procariontes solamente existe una horquilla de replicacion. Este proceso esta mediado por
la acci
on de las siguientes enzimas:
1. Helicasas: Separan la doble hebra cortando los puentes de hidrogeno de las bases nitrogenadas.
2. Single-Strand Binding Proteins (SSB): Son protenas que se unen a una hebra simple de DNA y ayudan a
mantener las hebras separadas.
3. Topoisomerasa: A medida que vamos abriendo la molecula de ADN, buscamos que la helice se relaje lo m
as
posible para que quede estirada. la Topoisomerasa relaja la molecula de DNA permitiendo una libre rotaci
on de la
simple hebra (desenrrolla).
Iniciaci
on: La horquilla de replicaci
on del ADN es asimetrica, la cadena hija de ADN que se sintetiza de manera
continua recibe el nombre de cadena conductora y se sintetiza antes que la cadena hija, que se sintetiza de forma
discontinua y recibe el nombre de cadena retrasada. La sntesis de la cadena retrasada es mas lenta debido que a que
debe esperar a que la cadena conductora exponga la cadena patron sobre la que se sintetizara cada uno de los fragmentos
de Okazaki.
Enzimas que participan en este proceso:
1. RNA Primasa: Enzima que polimeriza el RNA partidor o primer.
2. ADN Polimerasa: Una vez sintetizado el RNA partidor, la ADN polimerasa cataliza la sntesis de la nueva hebra
de ADN siempre en direcci
on 5-3
42
26.0.2.
Polimerizaci
on en la Hebra retardada:
Esta hebra tambien debe sintetizarse en direccion 5-3 pero en forma discontinua en contra de la direcci
on de la
hebra lider. La principal enzima responsable de la union de cadenas discontinuas es la DNA Ligasa: que es una enzima
que cataliza la uni
on covalente de los extremos 3-5 de dos hebras de DNA. Participa especialmente en la uni
on de los
fragmentos de Okazaki.
Revisi
on y Correcci
on:
terminar la replicaci
on.
Horquilla de replicaci
on en tres dimensiones
43
Parte VIII
Transcripci
on y Traducci
on:
El dogma central de la biologa molecular propuesto por Crick establece que el flujo del a informacion genica est
a dada
por la siguiente cadena:
27.
El ARN corresponde a una hebra simple, donde la desoxirribosa es reemplazada por una ribosa (recordemos que la
diferencia radica en que la ribosa posee en su carbono 2 un grupo OH en vez de H). Las potenciales timinas se reemplazan
por uracilos (ver Tarea). El RNA est
a presenta tanto en el n
ucleo como el citoplasma. Contiene la informaci
on g
enica
codificada en el ADN y son en tama
no m
as peque
nas que el DNA.
28.
28.1.
Transcripci
on:
Reconocimiento de la hebra molde:
En la transcripci
on, hebra molde es la cadena que va en direccion 3-5, ya que la transcripcion tambien se realiza
en sentido 5-3. La hebra 5-3 Se conoce como hebra Codificante.
44
28.1.1.
Promotor:
El promotor es una secuencia del DNA donde se une la RNA Polimerasa y comienza la transcripcion. El promotor
es vital para la regulaci
on de expresi
on genica, en eucariontes los promotores tienen secuencias de nucleotidos definidas
como la caja TATA (Ubicado en la posici
on -10). El lugar de inicio de la transcripcion se denomina +1.
En la posici
on -10 la RNA polimerasa hace contacto con la hebra molde de ADN.
En la posici
on -35 se ubica una secuencia de nucleotidos denominada . Es importante para la regulaci
on, indica la
posici
on donde debe sentarse la RNA Polimerasa.
Promotor de ADN
En organismos eucariontes, este proceso es mucho mas complejo, pues debemos recordar que el ADN se encuentra
compactado en forma de cromatina:
Histona desacetilasa: Las histonas suelen estar cargadas positivamente debido a los grupos amino presentes en
los residuos de lisina y arginina. Estas cargas positivas ayudan y afianzan la interaccion con las cargas negativas de
los grupos fosfato del esqueleto carbonado del ADN. La acetilaci
on, una reaccion que se produce corrientemente
en la celula, neutraliza las cargas positivas de las histonas, convirtiendo las aminas en amidas y reduciendo as la
capacidad de las histonas para unirse al ADN. Esta reduccion de la afinidad de union permite la expansi
on de la
cromatina y as la transcripci
on genetica de esa region cromosomica. Las histona desacetilasas eliminan los grupos
acetilo, reduciendo la carga positiva de las histonas y por tanto la afinidad de estas por el ADN.
Complejo remodelador de cromatina: El CRM (Chromatin-Remodeling-Machine) tiene afinidad por las lisinas
acetiladas de las histonas y se une a ellas a traves del dominio llamado Bromodominio. El CRM desorganiza los
nucleosomas aumentando el grado de exposicion y de accesibilidad de los promotores. Finalmente el mediador, la
ARN polimerasa II y los factores de transcripcion hacen que se inicie la transcripcion.
28.1.2.
Inicio de la Transcripci
on
Posteriormente, se forma el complejo de iniciacion abierto gracias a la actividad helicasa de uno de los factores. En
este instante comienza la sntesis de ARNm por la ARN polimerasa II a partir del sitio llamado +1 que marca el punto
de inicio de la transcripci
on de un gen. En el sitiode Inicio el DNA se abre formando una burbuja
45
28.2.
Fase de elongaci
on:
En esta etapa, la ARN polimerasa II cataliza la formacion de los enlaces fosfodiester entre nucleotidos. Intervienen
otros factores, conocidos como factores de elongacion. Sus funciones son disminuir las pausas de la ARN polimerasa II, desorganizar los nucleosomas y favorecer los procesos de correccion de errores. Tambien intervienen factores de transcripci
on
involucrados en la iniciaci
on.
Concretamente (en eucariontes), la formaci
on de la caperuza (cap) metilada ocurre en la fase de iniciaci
on de la
transcripci
on y normalmente, el proceso de splicing durante la elongacion. La poliadenilacion comienza en la fase de
terminaci
on de la transcripci
on y acaba una vez finalizada esta.
28.3.
T
ermino de la sntesis de RNA en procariontes:
28.3.1.
T
ermino independiente de la protena :
Durante la transcripci
on, existe una secuencia rica en CG en la que se genera una horquilla, la cual forma uniones
entre el ARN. Posteriormente una secuencia de ARN rica en uracilos, que tienen una afinidad menor con la adenina
provocan, sumado al apareamiento intraRNA, el fin a la transcripcion.
28.3.2.
T
ermino dependiente de la protena :
La protena es una helicasa RNA-DNA dependiente de ATP que rompe el hbrido DNA-RNA naciente. tambien
necesita la presencia de la horquilla entre C y G, al reconocerla se pone fin a la transcripcion.
46
28.4.
Detalles de la transcripci
on en Eucariontes (Maduraci
on del mRNA):
Procesos de transcripci
on y posterior traducci
on en eucariontes
Capping: El Capping consta de la adici
on de la adicion de 7-metilguanosina, es una interaccion 5-5 y preserva los
3 fosfatos. Todos los RNA que salen del n
ucleo sufren capping.
Capping de metilguanosina
Splicing: Secuencias especficas en la uni
on intron-exon. Complejos formados por RNA y protenas realizan el Splicing
(Spliciosoma). Este proceso est
a mediado por un ataque nucleoflico de una adenina haca un grupo fosfato de la guanina
del grupo GU, se unen estas 2 estrcuturas formando un lazo y se libera el intron.
47
29.
1. La maquinaria:
Factores proteicos.
2. La informaci
on:
mRNA.
29.1.
Ribosomas.
El codigo genetico.
Aminoacil-tRNA
Se
nales de inicio y termino.
Aminoacil-tRNA sintasa.
Acoplamiento tRNA-Aminoacido.
Ribosomas:
Sitios de uni
on de los tRNA al ribosoma
48
29.2.
ARN de transferencia y el c
odigo gen
etico:
El c
odigo gen
etico:
Existen 4 nucle
otidos que forman la secuencia del mRNA. Como los codones se organizan en trios, existen 64 posibles
combinaciones de nucle
otidos, y solamente disponemos de 20 aminoacidos conocidos; por lo tanto, el codigo genetico es
degenerado. M
as de una secuencia de codones codifican para un mismo amino
acido.
El c
odigo genetico es redundante:
Hay m
as de un tRNA para el mismo aminoacido.
Algunas moleculas de tRNA pueden aparear sus moleculas con mas de un codon.
El c
odigo genetico no se superpone: 1 nucle
otido pertenece a un u
nico triplete.
El c
odigo genetico es universal: La excepci
on es el codigo genetico mitocondrial.
29.3.
El proceso de traducci
on:
Formaci
on del complejo de iniciaci
on.
Adem
as de los factores de iniciaci
on, el complejo reconoce el 5cap mG del mRNA y luego avanza hasta encontrar el
primer AUG que corresponde a la metionina.
49
29.3.1.
Elongaci
on:
Esta fase consiste en un ciclo de 3 pasos en donde en el primer paso se incorpora un tRNA al sitio aminoacil del
ribosoma; posteriormente el amino
acido unido al tRNA, recibe el resto de la protena que esta siendo codificada en el
sitio P, trasladandose hacia el sitio A, este proceso esta mediado por la Peptidil transferasa:
La enzima peptidil transferasa es una ribozima aminoacil transferasa que realiza la funcion esencial de los ribosomas.
Se encarga de la formaci
on de enlaces peptdicos entre aminoacidos adyacentes durante la traduccion de ARN mensajero
y, por tanto, la sntesis proteica.
Finalmente ocurre la translocaci
on proceso dependiente de la hidr
olisis de GTP, que traslada los 2 tRNA un lugar
en direcci
on al sitio E. el tRNA que contiene la protena pasa al sitio peptidil y el tRNA que carece de elementos de uni
on
se liberta por el sitio E.
Proceso de elongaci
on en los ribosomas y traducci
on de la protena.
29.3.2.
T
ermino:
Los codones de termino son reconocidos por los factores de liberacion, los codones de termino no codifican para ning
un
amino
acido. Posteriormente las subunidades se desensamblan y el mRNA es degradado por ribonucleasas.
Termino de la traducci
on.
29.3.3.
Procesos posttraduccionales:
El plegamiento de las protenas es cotraduccional: Si 2 subunidades de una protena son necesarias para
la estructura cuaternaria funcional, puede ocurrir que al termino de la traduccion de una protena, esta se una por
interacciones no covalentes a otra subunidad proteica que este en proceso de traduccion. Ademas, las protenas van
tomando su estructura terciaria conforme se van traduciendo.
50
Chaperonas unidas a ATP se encuentran libres en el citoplasma o en el lumen del retculo endoplasm
atico rugoso,
para facilitar el plegamiento correcto de la protena, La chaperona hidroliza ATP para unirse a la protena en
formaci
on. Cuando la protena termina de ser traducida, las chaperonas dejan su sitio de uni
on con el ADP y
vuelven a formar el complejo con el ATP quedando u
tiles para facilitar un nuevo plegamiento
Polirribosomas: Los polirribosomas son agrupamientos simultaneos de ribosomas a una sola molecula de mRNA que
est
a siendo traducida.
Parte IX
Retculo Endoplasm
atico:
30.
Generalidades de la expresi
on g
enica:
En cada celula existen entre 20.000 y 25.000 genes. Cada celula produce para cumplir su funcion alrededor de 10.00020.000 protenas diferentes. Finalmente, la velocidad de sntesis de protenas por celula es de 1.000.000 de moleculas por
minuto.
31.
El retculo endoplasm
atico:
Todas las celulas tienen un retculo endoplasmatico (RE o ER). Su membrana constituye normalmente m
as de la
mitad del total de la membrana de la celula. Al igual que el n
ucleo posee membrana doble. Esta organizado en forma de
una red laberntica de tubos ramificados y de sacos aplanados que se extienden por todo el citoplasma. La membrana del
RER formara una l
amina continua que define un u
nico espacio interno. Este espacio es denominado lumen del RE y
ocupa alrededor del 10 % del volumen celular. La membrana del RER separa el lumen del citosol y media la transferencia
selectiva de compuestos entre estos 2 compartimientos.
La membrana del RE es el lugar de producci
on de todas las protenas de transmembrana y lpidos de la mayora
de los organelos celulares La membrana del RE tambien contribuye a la formacion de las membranas mitocondriales
y peroxisomas. Todas las protenas que ser
an secretadas al exterior y las que se quedaran en el lumen del RE, golgi o
lisosomas, son inicialmente transportadas al lumen del RE.
51
31.1.
El RE extrae determinadas protenas desde el citosol a medida que son sintetizadas. Estas protenas son de dos tipos:
Protenas Transmembrana que son parcialmente translocadas hacia el lumen.
Protena solubles en agua que atraviesan la membrana del RE y quedan liberadas al lumen.
Independiente de su destino posterior, estas protenas son dirigidas a la membrana del RE por el mismo tipo de p
eptido
se
nal.
31.1.1.
1. En RER se sintetizan protenas solubles o de membrana para la membrana plasmatica o para otros organelos.
2. El RER detecta protenas mal plegadas por sus chaperonas.
3. Es el primer organelo que participa de la ruta exoctica de protenas.
4. Se denomina rugoso pues el adosamiento ribosomal a las paredes del retculo le otorga ese aspecto.
31.1.2.
El retculo endoplasm
atico liso es abundante en celulas que sintetizan hormonas esteroidales y en neuronas. Adem
as
es particularmente predominante en celulas especializadas en el metabolismo lipdico; es continuo con el RER y forma
t
ubulos entre 30 y 60 nm en di
ametro. Son funciones del REL:
Sntesis de lpidos: Fosfolpidos y Colesterol.
Sntesis de hormonas esteroidales y sales biliares (que participan en la emulsion de las grasas).
Participaci
on en la detoxificaci
on celular, principalmente de drogas liposolubles. Las reacciones de destoxificaci
on
m
as estudiadas est
an catalizadas por la familia de enzimas de la familia citocromo P450.
En Neuronas el REL es muy importante para el transporte de ciertas vesiculas o protenas que van a llegar al
terminal nervioso.
31.1.3.
Otra funci
on del RE en la mayora de las celulas es la de secuestrar Ca2+ . La liberacion del Ca2+ en el citosol a partir
del RE y su posterior recaptura, median muchas respuestas rapidas a las se
nales extracelulares.
32.
Tanto para sintetizar las protenas que permaneceran en el citosol como para sintetizar las que seran transportadas
al RE, se utiliza el mismo acervo de ribosomas. Lo que dirige al ribosoma correspondiente a la membrana del RE es la
presencia del peptido se
nal de la cadena que se esta sintetizando.
32.1.
El peptido se
nal se compone principalmente de amino
acidos hidrof
obicos. Las protenas que translocan la membrana
del RER lo realizan en un estado desplegado principalmente determinado por una estructura lineal.
Una vez formado el complejo ribosoma-SRP se une a una protena integral llamada receptor del SRP. Posteriormente
la SRP es liberada y comienza la translocaci
on a traves de la membrana del polipeptido creciente. Dado que una de las
protenas del SRP y el receptor del SRP tienen sitios de union al GTP; los cambios conformacionales que tienen lugar
durante la translocaci
on estaran establecidos mediante la hidrolisis de GTP.
Existen dos tipos de translocaci
on:
Translocaci
on Co-Traduccional. Dependiente del GTP.
Translocaci
on Post-Traduccional. Dependiente del ATP.
Translocaci
on Co y post traduccional
32.2.
Protenas de Secreci
on:
Protenas de Membrana.
Protenas Tipo 1: Se
nalizador de translocacion ubicado al inicio de la protena.
Protena Tipo 2: Se
nalizador de transolaci
on ubicado entre la cadena polipeptdica.
Protenas Polit
opicas: Caracterizadas por su presencia de m
ultiples sitios de termino de la translocaci
on.
Las protenas tipo 1 y tipo 2 se subdividen en protenas tipo A y B. Las protenas A tienen el grupo amino terminal
mirando hacia el lumen del RER. Las protenas B poseen el grupo carboxilo terminal orientado hacia esta misma secci
on.
Translocaci
on de protenas tipo I y tipo II
Translocaci
on de proteinas polit
opicas.
32.3.
Modificaciones Post-traduccionales:
Durante este proceso se forma y amolda la estructura secundaria y terciaria de la protena en sntesis. En esta etapa
se producen:
Incorporaci
on y procesamiento de az
ucares.
La mayora de las protenas sintetizadas en el RER son glucosiladas por la adicion de un N-oligosacarido com
un. La
adici
on covalente de az
ucares a las protenas es una de las principales funciones biosinteticas del RER. La mayora
de las protenas solubles y unidas a la membranas que son fabricadas por el lumen del RER, son glucoprotenas.
Casi inmediatamente despues que la cadena polipeptdica entre en el lumen, se glucosila sobre los residuos de
asparagina diana. El oligosac
arido se transfiere al amino
acido a traves de la enzima oligosacaril transferasa
(enzima adosada a la membrana). Existe una copia de esta enzima para cada translocador proteico.
54
Formaci
on y reordenamiento de puentes dis
ulfuro.
La enzima PDI o Disulfuro Isomerasa es la enzima encargada de adicionar o restaurar enlaces dis
ulfuro en las
protenas, favoreciendo un correcto plegamiento para la estructura terciaria de la protena.
Acci
on de la Disulfuro Isomerasa en el reordenamiento de los puentes disulfuro entre cistenas.
Cortes proteolticos especficos.
Ensamblaje de complejos multimericos:
La glicosilaci
on en el retculo cumple varias funciones: Plegamiento correcto y sistema de control. (que se v er
a m
as
adelante):
33.
Dado que la velocidad de sntesis de proteinas es alrededor de 1.000.000 de moleculas por segundo, es de esperar que
puedan ocurrir errores en la conformaci
on de la estructura terciaria de la protena. Sin embargo, la celula cuenta con tres
tipos de respuesta frente a una protena mal plegada:
1. ciclo deglucosilaci
on/glucosilaci
on mediado por chaperonas a nivel del RER
2. Retro-Translocaci
on o dislocaci
on de protenas mal plegadas.
3. Respuesta a nivel nuclear (expresi
on de m
as chaperonas).
55
33.1.
Ciclo de glucosilaci
on/deglucosilaci
on a nivel del RE:
Una enzima Glucosiltransferasa detecta protenas mal plegadas y glucosila a la proteina. Esta glucosa al ser reconocida por la calnexina (chaperona transmembrana) produce una glicosidacion para formar correctamente.a la protena.
Si la calnexina logra arreglar la protena, esta continua su viaje hacia el golgi.
Es importante destacar los tipos de chaperonas presentes en el RER : Calnexina, Calreticulina , ERp57 y BIP/Grp78.
33.2.
Retro-Translocaci
on de protenas mal plegadas:
Si el primer ciclo no logra arreglar el plegamiento de la proteina,esta es llevada al citosol donde son degradadas por los
proteosomas. Una enzima N-Glicanasa marca a la asparagina marcada con oligosacaridos y en conjunto con una protena
ubiquitina cuya funci
on es dirigir el reciclaje de protenas, llevan a esta protena hacia un proteosoma.
Los proteosomas representan un importante mecanismo por el cual las celulas controlan la concentraci
on de
determinadas protenas mediante la degradaci
on de las mismas.
56
33.3.
Una protena UPR es activada en respuesta a la acumulacion de protenas mal formadas o no formadas en el lumen
del retculo endoplasm
atico. Existen tres protenas que sensan la presencia de protenas mal formadas:
Activaci
on del IRE1 favorece la sntesis de chaperonas en consecuencia a una acumulaci
on de protenas mal plegadas.
33.3.1.
Tunicamicina: Afecta la glicosilacon de las protenas y por tanto las celulas se pliegan mal.
Tapsigargina: Induce la liberaci
on de Ca2+ desde el lumen del RER al citoplasma afectando la funci
on de las
chaperonas como calnexina y calreticulina.
57
Ditiotreitol (DTT): agente fuertemente reductor que rompe los puentes dis
ulfuros (S-S), haciendo que las protenas
se desplieguen.
Parte X
Aparato de Golgi:
El Aparato de Golgi constituye el segundo organelo de la ruta exoctica de protenas. El transporte posterior de
protenas desde el RER hacia el Golgi y desde este hacia cualquier otro sitio, tiene lugar a traves de vesculas. La via
que va desde el RE, pasando por el complejo de Golgi, hasta la superficie celular se llama a menudo via por defecto ya
que parece que las proteans no necesitan presentar se
nales especficas para seguirla.
Estructura del Aparato de Golgi: EL complejo de Golgi se localiza cerca del n
ucleo celular, y en una celula animal
est
a a menudo cerca del centrosoma o centro celular. Esta formado por una serie de cisternas limitadas por membrana
y de forma aplanada. Muchas vesculas se hallan asociadas a los dictiosomas del Golgi, se cree que estas vesculas del
Golgi son vesculas de transporte de protenas y de lpidos desde y hacia el Golgi y entre las mismas cisternas del
organelo. Durante su paso a trav
es del complejo de Golgi, las mol
eculas transportadas sufren una serie de
modificaciones covalentes ordenadas.
34.
Organizaci
on de las funciones de las Cisternas del Golgi:
Las protenas exportadas desde el RE entran por la cara Cis del Golgi; luego se desplazan al compartimiento medial
formado por la cisterna central del dictiosoma, y finalmente se desplazan al compartimiento Trans, donde se completa la
glucosilaci
on.
58
Compartimentalizaci
on del Golgi
35.
Procesamiento de Oligosac
aridos en el Aparato de Golgi
El procesamiento de oligosac
aridos pasa por distintas fases a medida que la protena avanza a traves del complejo de
Golgi, en donde cada cisterna contiene sus propias enzimas. Las protenas se modifican a traves de sucesivas etapas a
medida que pasan de cisterna en cisterna a traves del dictiosoma, de forma que las cisternas constituyen una unidad de
procesamiento m
ultiple. El procesamiento tiene lugar tanto en una secuencia espacial como en una secuencia bioqumica:
as, las enzimas que catalizan las primeras etapas se localizan en las cisternas cis, mientras que las que catalizan las
u
ltimas etapas se ubican en las cisternas trans.
El procesamiento de oligosac
aridos es altamente ordenado, de forma que cada uno de los pasos depende de las reacciones
anteriores. En los dictiosomas del Golgi, la manosidasa I elimina 3 residuos de manosa y la N-acetilglucosamina
transferasa I a
nade un residuo de GlcNAc, lo que permite que la manosidasa II elimine dos residuos mas de manosa.
De esta manera, se obtiene el n
ucleo final de 3 residuos de manosa que presenta un oligosacarido complejo. En este
estado, el enlace existente entre los residuos del GlcNAc se vuelve resistente al ataque de una endoglucosidasa la Endo-H.
36.
60
Parte XI
Etapas en la formaci
on de vesculas:
38.
La mayora de las vesculas de transporte se forman a partir de regiones revestidas especializadas de la membrana,
por lo que generan vesculas rveestidas de una red de proteinas distintas de las que recubren la superficie citos
olica. Antes
de que la vescula se fusione con la membrana receptroa, este recubrimiento ha de eliminarse para permitir que las dos
membranas interaccionen directamente.
38.1.
Iniciaci
on, Yemaci
on y Escici
on:
Existen dos tipos de vesculas revestidas bien caracterizadas (las revestidas de clatrina y las revestidas de coat
omero
(COP1 y COP2, pondremos n
umeros ar
abicos en vez de n
umeros romanos para evitar equivocaciones en la pronunciaci
on).
61
38.1.1.
Las vesculas revestidas por COP median el transporte vesicular de la ruta por defecto, incluye en transporte desde el
retculo endoplasm
atico al complejo de Golgi COP2 , de una cisterna del Golgi a otra mas baja y desde el Golgi hacia
el RER. COP1.
Protenas de cubierta COP2: El transporte mediado por protenas tipo COP2 es principalmente de tipo anter
ogrado. Si tomamos como referencia la ruta exoctica, este tipo de transporte es hacia fuera de la membrana celular.
La protena ARF-GDP permanece al principio en un estado soluble e inactivo. Esta se une posteriormente a una
protena liberadora de nucleo
otidos de guanina (GNRP) en la membrana dadora, lo cual provoca que el ARF libere su
GDP y se una al GTP. El GTP desencadena un cambio conformacional en el ARF dejando expuesta su cadena de
acido
graso. Entonces, la protena ARF-GTP activa y unida a la membrana comienza a reclutar las subunidades del
coat
omero de la membrana.
Protenas de Cubierta COP1:
62
Protenas llamadas adaptinas se utilizan para unir el revestimiento de clatrina a la membrana, adem
as de reclutar
diversos receptores proteicos de transmembrana, los cuales capturan moleculas especficas en el interior de la vescula
(protenas cargo)
Finalmente, el proceso de escici
on se produce por la accion de una protena con una naturaleza similar a la actina,
hablamos de la dinamina y un complejo proteico cuya estructura principal es esta protena.
Dinamina y la escici
on vesicular.
Resumen acci
on de protenas COP1, COP2 y Clatrinas
63
39.
C
elulas epiteliales como modelo de la destinaci
on de protenas en el
aparato de Golgi:
En esa secci
on se observar
a el efecto de la destinacion hacia la membrana plasmatica de celulas polares como por
ejemplo las celulas epiteliales. Donde una cara de la membrana apunta en sentido apical y la otra en sentido basolateral.
Los cambios en la destinaci
on se realizan principalmente en el TGN (trans Golgi Network) en la cara mas alejada del
aparato de Golgi.
El estudio contempla la utilizaci
on de dos tipos de virus que generan salidas exocticas distintas: Hablamos del virus
HA (o de la gripe) y el VSVG.
Presencia de la se
nal en protenas con salida a la cara apical y a la basolateral.
Caractersticas de las se
nales:
Existe m
as de un tipo de se
nal para destinar protenas a diferentes organelos. Mas que la secuencia especfica de
amino
acidos de la protena, importan m
as sus propiedades fsicas: (hidrofobicidad, hidofilidad).
Las se
nales se pueden transferir de una protena a otra. Son necesarias, suficientes e intercambiables entre las
protenas.
Las se
nales pueden tener diferente naturaleza. (Carbohidratos, lpidos o protenas).
Las se
nales son reconocidas por una maquinaria especfica de protenas citosolicas de cubierta y adaptadores.
40.
64
40.1.
41.
Fusi
on de vesculas con el organelo o membrana diana:
Las vesculas de transporte, sean o no selectivas al tomar la carga del compartimiento dador, han de ser altamente
selectivas en cuanto a la membrana diana a la que se fusionan. Esto sugiere que todos lso tipos de vesculas de transporte
en la celula han de expresar marcadores de superficie que las identifiquen se
un su origen y su carga y que sean reconocidas
por receptores de las membranas diana. Las vesculas de transporte son reconocidas especficamente en la membrana
receptora a traves de los Snares.
Existen dos tipos de Snares para el reconocimiento vesicula-membrana:
V-Snares: Se encuentran en vesculas y estan formados por un u
nico polipeptido.
T-Snares: Se encuentran en el organelo blanco y estaran compuestos por dos o tres protenas.
Ambos Snares tienen dominios helicoidales que interact
uan formando un haz de cuatro hebras.
42.
En la celula existen muchos sistemas de membrana por lo que el proceso de union de las distintas vesculas ha de ser
altamente selectivo. Una vescula puede inspeccionar muchas membranas potencialmente diana antes de que su v-SNARE
encuentre una t-SNARE complementaria <3. Este proceso crucial de reconocimiento esta controlado por miembros de una
familia de protenas GTPasas monomericas llamadas protenas Rab, que controlan que la interaccion entre el v-SNARE
y el t-SNARE sea correcta. Las protenas Rab estan unidas a la superficie de las vesculas revestidas que est
an formando
en la membrana dadora. Cuando una vescula encuentra la membrana diana adecuada, la union de los Snares permite
que la vescula permanezca unida durante el tiempo necesario para que la protena Rab hidrolice el GTP que lleva unido,
lo cual bloquea a la vescula en la membrana diana, preparandola para la fusion posterior.
65
La interacci
on entre v-SNARE y t-SNARE provoca la hidr
olisis del GTP de la protena RAB para controlar que la
interacci
on sea correcta, mediante el efecto del Rab.
Caractersticas generales de las protenas GTPasas monom
ericas:
Garantizan un tr
afico vesicular ordenado.
existen alrededor de 600 tipos de GTPasas.
Direccionan a la vescula a puntos especficos en la membrana blanco correcta.
Rabs funcionan en las vesculas de transporte, en las membranas blanco y/o en ambas.
Caractersticas generales de las protenas Rabs (caso particular de GTPasa):
las protenas Rabs circulan entre el citosol y las membranas y regulan el ensamblaje del complejo de protenas en
la membrana.
GDP-Rab (inactiva), se unen a GDI(Rab-GDP inhibidor de disociacion) que la mantiene en el citosol.
GTP-Rab (activa) se une fuertemente a la membrana del organelo y de la vescula.
GTP-Rab se une a efectores que facilitan la union y la fusion de membranas.
66
Parte XII
Ciclo Celular:
El ciclo celular se divide tradicionalmente en varias fases, de las cuales la mas importante es la mitosis o fase M. En la
mayora de las celulas, toda la fase M solo dura una hora aproximadamente, lo cual corresponde solo una peque
na fracci
on
de la duraci
on total del ciclo. El periodo comprendido entre 2 fases M consecutivas se denomina interfase. Este proceso
presenta una alta actividad celular, durante el cual tienen lugar, en una secuencia de eventos ordenados, la duplicaci
on
del material genetico y preparaci
on para entrar en la fase M.
Las cuatro fases sucesivas del ciclo de una celula eucariotica tpica. Durante la interfase la celula crece continuamente;
durante la fase M se divide. La replicaci
on del DNA se produce u
nicamente durante la fase S.
Necesariamente antes de que la celula entre en mitosis deben duplicarse los cromosomas. Conociendo el concepto, Mesia
realiza una experimento para saber como logran duplicarse estos cromosomas antes de la mitosis: Antes de hacer un
preparado histol
ogico, se inyecta al animal timidina tritiada (Radiactiva), la gracia del tritio es que si la timidina
tritiada se incorpora en el DNA, en una soluci
on con plata, la timina tritiada reducira la Ag, y al microscopio
optico se
observan gr
anulos de plata. (Periodo S). Si no se observan estructuras mitotitcas pero tampoco se observan granos de
plata la celula se puede encontrar en un periodo antes (Gap 1) o despues de S (Gap 2).
El ciclo celular dura al entre 17 y 20 horas. En las celulas de mamferos superiores, la fase S demora 7 horas, ya que se
deben copiar 3200 millones de pares de bases. G2 dura alrededor de 3 horas y G1 puede durar entre 5 y 7 horas.
43.
Estimaci
on de la duraci
on de las etapas del ciclo celular:
Para determinar las etapas del ciclo celular de un determinado cultivo, lo que se hace es alimentar a este cultivo con
un pulso de timidina tritiada, la cual migrar
a a las celulas que dupliquen su DNA. 24 Horas despues se toma el cultivo y
se hace una autorradiografa del mismo. Si se observan 2 celulas con la presencia de granulos de plata entonces la duraci
on
de la fase S estar
a dada (en horas) por:
S=
2
24 = 4 factor de correccion
12
Estimaci
on de la duraci
on de las fases del ciclo celular
67
Sin embargo, este metodo no es lo suficientemente efectivo debido a que no sabemos si las celulas estan efectivamente
sincronizadas (todas en G1 por ejemplo). Por lo que Renato Dulbecco (Padre del cultivo celular) descubri
o que las
celulas que est
an en interfase se encuentran estiradas y las que estan en mitosis tienen una forma redondeada, por lo que
si se perturba el cultivo caer
an solo las celulas que estan en fase M teniendo un cultivo mucho mas sincronizado.
Sincronizaci
on del cultivo celular mediante golpecitos?
M
etodo del Metotrexato: Lo que hace esta droga es inhibir el metabolismo del acido folico que se necesita para
realizar la sntesis de DNA, por lo tanto si se le suministra la droga a un cultivo de celulas, este se bloquea exactamente
al inicio de S. De esta manera queda sincronizado el cultivo de manera optima.
Gracias a los cultivos sincronizados con metotrexato se logro determinar el factor promotor de la mitosis (MPF)
44.
Detecci
on del Factor promotor de la Mitosis MPF:
Im
agen Izquierda: Mediante la fusi
on de celulas en distintas fases del ciclo celular con celulas en la fase M, se logr
o la
inducci
on de los cromosomas en celulas que se encontraban en G1,S y G2 (MPF)
Im
agen Derecha: Los citoplasmas en fase S contienen factores que hacen que los n
ucleos en G1 entren directamente en
proceso de sntesis del DNA. Sin embargo, los n
ucleos en G2 son refractarios a dichos factores. N
otese que la fusi
on de
una celula en G2 con una celula en G1 no hace que el n
ucleo G1 inice la sntesis de su DNA. Por lo tanto los factores
presentes en la fase S desaparecen en la fase G2.
En un experimento realizado con levaduras que se dividan por fision y yemacion, se busco determinar cuales son estos
factores que inducan la duplicaci
on del material genetico . Para ello cultivaron levaduras que tenan una restricci
on para
dividirse a altas temperaturas obteniendo un resultado como el siguiente:
68
44.1.
Ciclinas:
EL MPF corresponde a un complejo proteico formado esencialmente por 2 protenas. Una quinasa dependiente de
ciclina Cdk y la ciclina correspondiente.
Acci
on de los distintos tipos de ciclinas durante distintas fases del ciclo celular.
44.1.1.
69
Mecanismo de regulaci
on y activaci
on de la CdK1-M
A medida que el nivel de ciclina-M aumenta, una protena CAK (Protena activadora de CdK) fosforila a la CdK1 en
su sitio activo, mientras que al mismo tiempo una protena Wee1 (Protena inhibitoria de CdK) fosforila a la CdK1
en su sitio inactivo. La activaci
on de la CdK se lleva a cabo por una fosfatasa cdc25 que hidroliza el fosfato inhibitorio
activando el MPF. Se cree que el MPF activo estimula su propia activacion por retroalimentacion positiva con Cdc25 y
negativa con Wee1.
Es importante recalcar que tanto la quinasa de inicio y el MPF se componen de Cdc2, pero se asocian
con diferentes tipos de ciclina. Esto sugiere que la Cdc2 esta presente de forma permanente, pero cambia su estado
de asociaci
on con las ciclinas, lo cual define las fases del ciclo de division mitotica (Inicio y Fin de fase M).
La activaci
on del M-CdK estimula:
1. Ruptura de la membrana nuclear.
2. Condensaci
on de los cromosomas.
3. Formaci
on de la maquinaria mit
otica.
4. Degradaci
on de la ciclina.
44.1.2.
Control de la prote
olisis de ciclinas mediante APC/C (Complejo promotor de la anafase):
La degradaci
on y desensasmble de protenas ciclinas al CDK est
a mediado por ubiquitinas
70
45.
Cada una de las acciones principales del sistema de control del ciclo celular (La activacion del MPF al inicio de la
mitosis, su inactivaci
on en la transici
on de la metafase a la anafase, la activacion de la quinasa de Inicio) desencadenan
un complejo proceso subordinado que requiere un cierto intervalo de tiempo para completarse. Si el sistema de control
inicia la siguiente acci
on sin que cada uno de estos procesos se haya completado, es probable que las consecuencias sean
fatales o mutagenicas para la celula.
46.
La proliferaci
on de celulas en el cuerpo tiene que estar regulada de forma que se mantenga el n
umero de celulas y su
organizaci
on espacial. Esta regulaci
on depende de interacciones de unas celulas con otras y con la matriz extracelular.
Consideremos un tejido epitelial: La proliferaci
on celular tiene que estar controlada de forma precisa para
equilibrar la p
erdida de c
elulas, de forma que el epitelio ni crezca ni decrezca. Las nuevas celulas han de
encajar perfectamente en la estructura. De hecho, en la mayora de los epitelios solo se dividen las celulas que contin
uan
en contacto con la l
amina basal.
Habitualmente, las celulas situadas en la superficie de una placa de cultivo proliferan hasta que se tocan unas con otras,
formando una monocapa confluente. El siguiente diagrama muestra lo que ocurre si se rasga la monocapa. Las celulas que
quedan en los m
argenes de la herida se aplanan y empiezan a crecer y a dividirse hasta que se reconstituye la monocapa
confluente.
46.1.
Respuesta temprana mediada por Myc: Myc es el producto de un gen myc de respuesta rapida. El gr
afico a
continuaci
on muestra los cambios de concentracion de Myc tras un incremento repentino de la concentraci
on del factor
de crecimiento hacia un nuevo estado estacionario, lo que provocara la salida de la celula en Go y su proliferaci
on. Los
cambios en la concentraci
on de Myc reflejan cambios en la transcripci
on del gen myc. La propia protena
Myc inhibe la transcripci
on del myc y se cree que su retroalimentacion negativa explica por que el nivel de Myc disminuye
desde su valor m
aximo inicial hacia un valor m
as bajo pero estable:
Respuesta celular y salida de Go provocado por la presencia repentina del factor de crecimiento adecuado.
Debemos tener en cuenta que las poblaciones celulares en condiciones normales tienen un tiempo de vida determinado,
caracterizado principalmente por la etapa de Senescencia y muerte. Las celulas tienen una capacidad limitada de
divisi
on, tras ciertas divisiones mit
oticas, la celula no puede salir de Go y la poblacion muere. Sin embargo, celulas
transformadas son por definici
on inmortales:
46.1.1.
Oncog
enes y Genes supresores de tumores:
Oncog
enes activados por virus: El caso mas estudiado corresponde al virus del sarcoma de Rous. Los oncogenes
virales provienen de genes celulares que fueron en alg
un momento secuestrados por el virus y posteriormente mutaron.
Para efectos de notaci
on un oncogen viral se denomina v-src y la forma benigna del mismo (ubicado en los genes celulares)
se denomina c-src.
Secuestro del gen c-src unido al genoma del virus para que este protooncogen se transforme en un oncogen y tenga
efectos malignos.
46.1.2.
Retinoblastoma Humano:
El gen retinoblastoma Rb fue inicialmente identificado a traves de estudios sobre una predisposicion hereditaria
para un c
ancer poco conocido, que se produce en los ojos de algunos ni
nos. La perdida de las dos copias de este gen
conduce a una proliferaci
on celular excesiva en la retina inmadura, lo cual sugiere que normalmente el producto del gen
ayuda a mantener controlada la proliferaci
on celular. La clonacion del gen retinoblastoma posbilita explorar c
omo ejerce
este efecto el producto de gen.
La protena Rb es una molecula abundante en el n
ucleo de celulas de mamferos. Tiene la capacidad de unirse a diferentes
protenas, incluso algunas protenas reguladoras de genes, pero su capacidad de union depende de su estado de
fosforilaci
on.
Cuando Rb se desfosforila, se une a un conjunto de protenas reguladoras que favorecen la proliferaci
on celular,
manteniendolas secuestradas y fueras de accion C
elulas en Go.
La fosforilaci
on de Rb facilita la liberaci
on de estas protenas permitiendo que act
uen. En celulas normales Rb
est
a siempre presente. Estimula la proliferaci
on.
73
El siguiente gr
afico demuestra la regulaci
on completa del inicio del ciclo celular tras la recepcion de un factor que estimula
la proliferaci
on y el paso a la fase S.
Regulaci
on por P53
74
Resumen y progresi
on molecular del ciclo celular
Parte XIII
Mecanismos de la divisi
on celular:
La fase M incluye los diferentes estadios de division nuclear (mitosis) y de la division citoplasmatica (citocinesis). En
un periodo breve, los contenidos de la celula madre, que se han duplicado mediante las actividades biosinteticas de la
interfase precedente, se segregan en dos celulas hijas.
La primera manifestaci
on apreciable de la fase M es la progresiva compactacion de la dispersa cromatina interf
asica,
formando unos cromosomas en forma de hilo. Esta condensaci
on cromos
omica es necesaria para la segregaci
on organizada de cromosomas en dos celulas hijas que tendra lugar a continuacion, y se ve acompa
nada por la extensa fosforilaci
on
de moleculas histona H1. Se cree que la fosforilacion de la H1 en el comienzo de la fase M contribuye a la condensaci
on cromos
omica, ya que su concentraci
on es 1 molecula por nucleosoma y se sabe que participa uniendo nucleosomas.
Un cromosoma es aquel que est
a formado por 2 crom
atidas, se entiende por cromosoma u
nicamente el
cromosoma metaf
asico.
47.
Etapas de la mitosis:
47.1.
Profase:
La transici
on de G2 a la fase M del ciclo celular no es un proceso estrictamente definido. La cromatina, que en la
interfase se halla difusa, se condensa lentamente formando cromosomas bien definidos. Cada cromosoma se ha duplicado
durante la fase S precedente y ahora consta de 2 cromatidas hermanas, cada una de las cuales contiene una secuencia
de DNA especfica conocida como centr
omero, necesaria para la correcta segregacion del cromosoma. Hacia el final de
la profase los microt
ubulos citoplasm
aticos que forman parte del citoesqueleto interfasico se despolimerizan y empieza a
75
47.2.
Prometafase:
47.3.
Metafase:
Los microt
ubulos cinetoc
oricos alinean los cromosomas en un plano situado a medio camino de los polos del huso.
Cada cromosoma se mantiene en tensi
on en esta placa metafasica por los cinetocoros apareados y por sus microt
ubulos
asociados, los cuales est
an unidos a los polos opuestos del huso.
76
47.4.
Anafase:
Anafase
47.5.
Telofase:
En la Telofase los cromosomas hijos separados llegan a los polos y los microt
ubulos cinetocoricos desaparecen. Los
microt
ubulos polares se alargan a
un m
as y se vuelve a formar la carioteca. La cromatina condensada se expande de nuevo.
47.6.
Citocinesis:
Telofase y citodieresis
77
48.
Detalles de la divisi
on Celular:
48.1.
Condensaci
on de los cromosomas:
Todos los cambios que ocurren al comienzo de la mitosis dependen de la activacion de la M-Cdk. En esta etapa el MPF
fosforila a las l
aminas nucleares A,B,C (materia I2). Ademas, fosforila las protenas del nucleolo y lo desagrega. Finalmente
el MPF participa en la condensaci
on de la cromatina fosforilando a la H1. El cordon formado se llama solenoide o fibra
b
asica (formado por 6 nucleosomas apilados), mide 30 nm. Protenas Scafoldinas forman el esqueleto cromos
omico.
48.1.1.
Condensinas:
Las condensinas son complejos proteicos que juegan un rol central en el ensamblado y segregacion cromos
omica en
las celulas eucariontes. En las celulas de los vertebrados hay al menos dos tipos diferentes de complejos de condensinas,
conocidos como condensina I y condensina II. Ambos complejos comparten el mismo par de subunidades centrales, SMC2
y SMC4, con actividad ATP-asa para realizar su funcion. Las SMC (de Structural Maintenance of Chromosomes)
son protenas encargadas del mantenimiento estructural de los cromosomas.La principal funci
on de las
condensinas es
Condensina II: Est
a presente dentro del n
ucleo celular durante la interfase y esta involucrada en las etapas m
as
tempranas de la condensaci
on de cromosomas durante la profase.
Condensina I: Est
a presente en el citoplasma durante el periodo interfasico, y gana acceso a los cromosomas una
vez que la membrana nuclear se desagrega.
Durante la prometafase y la metafase, tanto la condensina I como la condensina II contribuyen a condensar y ensamblar
los cromosomas.
Las condensinas est
an formadas por Dmeros de SMC.
La fosforilaci
on de condensina por M-Cdk, estimula la capacidad de condensar el DNA. (Al menos una de las
subunidades de condensina es uno de los blancos conocidos de las kinasas dependientes de ciclinas (Cdk).)
Las condensinas son protenas encargadas del mantenimiento estructural de los cromosomas.
Condensinas: En azul y celeste se observan los dmeros del SMC, con su dominio ATP-asa para enrollar la cromatina y
los solenoides. Es importante reafirmar que las condensinas se asocian en grupos de 8 en la formaci
on de la estructura
cromosomal.
48.1.2.
Cohesinas:
En el momento de la separaci
on de crom
atidas en anafase, las cohesinas son destruidas por la separasa que anteriormente
se encontraba inhibida por una protena llamada securina. En la anafase, el APC/C (Complejo Promotor de Anafase)
marca la securina para la degradaci
on. Proceso especfico del checkpoint de la fase M.
78
48.2.
Formaci
on del Huso mit
otico:
El ensamblaje del huso, la captura de cromosomas , su alineacion en la placa metafasica y el posterior alargamiento
del huso con el desplazamiento de los cromosomas a los polos, dependen de una serie de procesos que ocurren cerca de
los extremos de los microt
ubulos. Los extremos no son tan solo el lugar donde se localiza el ensamblaje y desensamblaje
de microt
ubulos, sino tambien donde se produce la fuerza mecanica para la mitosis. Existen tres tipos de microt
ubulos
asociados al huso mit
otico:
Microt
ubulos polares: se solapan en la lnea media del huso y son responsables de empujar a los polos del huso
causando su separaci
on.
Microt
ubulos cinetoc
oricos: Se adhieren al cinetocoro especializado que forma el centromero.
Microt
ubulos astrales: Parten en todas direcciones desde los centrosomas y se cree que contribuyen a generar las
fuerzas que separan los polos.
79
48.2.1.
Cinetocoro:
Los microt
ubulos cromos
omicos van desde el polo hacia los cromosomas, se dirigen directamente hacia el cinetocoro
(anillo proteico) que es una regi
on del centr
omero.
En la capa m
as externa del cinetocoro se insertan los microt
ubulos cromosomicos. Esto se descubrio gracias a pacientes
con enfermedades autoinmunes. Las protenas del cinetocoro reconocen una secuencia de 171 pares de bases. Este DNA
no codifica pero tiene funciones estructurales. Por ingeniera genetica en celulas Hila, se introdujo una letra cambiada en
estos pares de bases. Esta mutaci
on result
o en una muerte celular (Entra en apoptosis): Al estar mutada en 1 base, las
protenas del cinetocoro no reconocen la secuencia y no se arma el complejo. Por lo tanto la celula se detiene en metafase.
Regi
on cinetoc
orica del cromosoma
Detalles de la uni
on cinetocoro-microt
ubulo: Hemos afirmado que el cinetocoro es un complejo proteico externo
del centrosoma, en donde el ADN tiene una secuencia especfica de bases ricas en AT. Los microt
ubulos cromos
omicos
solamente se unen a la estructura externa del cinetocoro. En este punto se pueden llegar a producir las no disyunciones
cromos
omicas pues existe la posibilidad de que dos microt
ubulos cromosomicos no queden equitativamente distribuidos
en los cinetocoros.
Detalles de la uni
on cinetocoro-microt
ubulo
48.3.
Corresponde a la acci
on de una ligasa de ubiquitina multisubunitaria, que se activa por la adicion de una subunidad
dependiente del ciclo celular. Su activaci
on produce la degradacion de ciclinas M y otras protenas regulatorias en la
transici
on Metafase-Anafase.
Durante la fase M hasta la metafase una protena separasa que en su forma activa se encarga de degradar las cohesinas
se encuentra unida a una protena securina (que la mantiene en su forma inactiva). La activacion del APC/C por medio de
una protena Cdc20 hace que el APC/C act
ue sobre la securina ligandole una cadena de poliubiquitina para su posterior
degradaci
on. Similar es el caso para la degradaci
on de M-ciclina.
80
Acci
on del APC/C sobre las cohesinas y la degradaci
on de la M ciclina que permite el paso de la metafase hacia la
anafase.
48.4.
Acci
on de kinesinas y dinenas
81
48.5.
48.5.1.
Telofase:
Al final de la anafase los cromosomas se han separado en dos grupos iguales, uno en cada polo del huso. En la telofase,
el estadio final de la mitosis, se recompone una envoltura nuclear alrededor de cada grupo de cromosomas, formando los
dos n
ucleos hijos de la interfase.
Citodi
eresis:
Acci
on del anillo contr
actil de actina y miosina
82
Activaci
on de la protena Rho
49.
Telofase Vegetal:
La mayora de las celulas de plantas superiores estan encerradas en una pared celular rgida, y en estas celulas el
mecanismo de la citocinesis es distinto al de las celulas animales. En vez de separar ambas celulas mediante un anillo
contr
actil en la superficie celular, el citoplasma vegetal se parte por la construccion de una nueva pared celular en el
interior de la celula. La nueva pared transversal, o placa celular, empieza a ensamblarse en un plano situado en los
dos n
ucleos hijos y en asociaci
on con los microt
ubulos polares del huso, que forman una estructura cilndrica llamada
fragmoplasto.
El proceso para formar el fragmoplasto pareciera partir por peque
nas vesculas rodeadas de membrana, derivadas del
complejo de Golgi y repletas de precursores de la pared celular. Estas vesculas contactan con los microt
ubulos en cada
cara del fragmoplasto y se dejan transportar por ellos hasta alcanzar la region ecuatorial. All se fusionan entre s formando
una estructura rodeada de membrana llamada placa celular precoz. Las moleculas de polisacaridos liberadas por estas
vesculas se ensamblan en la placa celular precoz formando la matriz de la pared celular primaria. Ahora, esta pared debe
expandirse hacia la periferia de la celula. Para ello, microt
ubulos del fragmoplasto temprano se reorganizan en la periferia
de la placa celular, donde atraen m
as vesculas que se fucionan en el ecuador extendiendo el borde de la placa.
Formaci
on del fragmoplasto vegetal. Notar la importancia de la presencia de microt
ubulos interf
asicos en el lugar de la
futura membrana. Estos microt
ubulos, junto con bandas de actina, aparecen en G2 y son el primer indicio de la
inminente divisi
on celular vegetal.
83
50.
En muchas celulas embrionarias durante el periodo de implantacion, la masa celular no crece, pero contin
ua dividiendose para la posterior diferenciaci
on.
Desarrollo embrionario de los mamferos: a. huevo fertilizado, b. Estado de 2 celulas (1,5 das), c. Estado de 8 celulas
o m
orula (2,5 das), d. Estado de 16 celulas (3 das) y e. Estado de blastocisto (4 das).
Comparaci
on actividad de ciclinas en celulas proliferativas carentes de G1 con celulas con ciclo celular normal.
Parte XIV
Meiosis
En principio la meiosis(meio = mitad) es el proceso por el cual se generan celulas haploides a partir de celulas diploides.
Si la celula progenitora tena una cantidad de cromosomas y material genetico 2n=2c. El resultado final ser
an cuatro
celulas con dotaci
on haploide n=c.
84
51.
Etapas de la Meiosis:
En la meiosis se producen dos divisiones celulares consecutivas, sin la replicacion de material genetico entre las
divisiones.
Reducci
on cromos
omica y recombinaci
on genetica en la meiosis.
51.1.
Meiosis 1:
51.1.1.
Profase I:
Corresponde a la etapa m
as importante y mas larga de este proceso, pues en la profase I ocurre la recombinaci
on
genetica que produce variabilidad fenotpica y genotpica en la descendencia. Dada su importancia la profase I puede
subdividirse de la siguiente manera:
n
odulo de recombinaci
on: lugar sistem
atico donde ocurre el crossing over.
Diploteno: Los cromosomas contin
uan condensandose hasta que se pueden comenzar a observar las dos crom
atidas
de cada cromosoma. Adem
as en este momento se pueden observar los lugares del cromosoma donde se ha producido
la recombinaci
on. Estas estructuras en forma de X reciben el nombre quiasmas. Cada quiasma se origina en un sitio
de entrecruzamiento, lugar en el que anteriormente se rompieron dos cromatidas homologas que intercambiaron
material genetico y se reunieron.
Diploteno
86
Diacinesis: El final de la diacinesis y por tanto de la profase I meiotica viene marcado por la rotura de la membrana
nuclear. Durante toda la profase I continu
o la sntesis de ARN en el n
ucleo. Al final de la diacinesis cesa la sntesis
de ARN y desaparece el nucleolo.
Metafase I
En esta secci
on aparece el huso mit
otico desarrollado y en vez de anclarse a cada cinetocoro de cada crom
atida
hermana, lo hace sobre los cromosomas hom
ologos de las tetradas.
51.1.3.
Anafase I y Telofase I
Separaci
on de cromosomas hom
ologos y comienza la invaginacion de la membrana celular para posteriormente dar
lugar a 2 nuevas celulas con la mitad de cromosomas, pero con cantidad de ADN doble, pues existen cromosomas con 2
crom
atidas. Notar que es un error llamar a estos cromosomas : homologos, pues tienen alelos distintos para determinados
genes (en donde hubo recombinaci
on). Se vuelve a formar temporalmente la membrana nuclear.
La meiosis II es simplemente una mitosis sin duplicaci
on de material gen
etico, por lo que su apunte es
redundante.
Comparaci
on Mitosis y Meiosis
Mecanismos que originan variabilidad gen
etica:
Permutaci
on cromos
omica al azar (tiene lugar durante la metafase-anfase I o II).
Crossing Over (Paquiteno de la profase I)
87
52.
52.1.
Ovog
enesis y Espermatog
enesis
Ovog
enesis:
Los ovog
onios se desarrollan a partir de las celulas germinales primordiales que al principio de la embriogenesis migran
hacia la g
onada en desarrollo. Tras un cierto n
umero de divisiones mitoticas, los ovogonios empiezan la division mei
otica I
recibiendo el nombre de ovocitos primarios. En los mamferos, los ovocitos primarios se forman muy temprano (entre
los 3 y 8 meses de gestaci
on) y permanecen en la profase de la division meiotica I hasta que la hembra es sexualmente
madura. En este momento y de forma peri
odica un peque
no n
umero de ovocitos madura bajo la influencia hormonal
completando la divisi
on mei
otica I y constituyendose los ovocitos secundarios. Cuando comienza la pubertad LA FSH,
provoca que las celulas en el dictioteno vuelvan a la meiosis y completa la primera divisi
on mei
otica. Es una citodieresis
no ecutatorial. Una se convierte en el ovocito 2 y otra en el cuerpo polar. Los ovocitos secundarios, finalmente pasan
por la divisi
on mei
otica II. En la mayora de los vertebrados la maduracion de los ovocitos se encuentra detenida en la
metafase de la meiosis II, y el ovocito secundario solo completa la meiosis II tras la fecundacion. Finalmente todos los
cuerpos polares degeneran.
52.2.
Espermatog
enesis:
Los espermatogonios se desarrollan a partir de las celulas germinales primordiales que migran hacia los testculos
durante las primeras fases de la embriogenesis. Cuando el animal alcanza la madurez sexual, la espermatogonia empieza
a proliferar r
apidamente, generando alguna progenie que retiene la capacidad de continuar dividiendose indefinidamente
(como celulas madre de espermatogonias) y otra progenie (espermatogonia en maduracion) que despues de un n
umero
La espermatogenesis se diferencia de la ovogenesis en varios aspectos: (1) A partir de la pubertad continuamente existen
nuevas celulas que inician la meiosis, (2) cada celula que empieza la meiosis da lugar a cuatro gametos maduros y no a
uno solo, y (3) los espermatozoides maduros se forman por un proceso elaborado de diferenciaci
on celular que empieza
despues que se complete la meiosis.
88
53.
53.1.
Cromosomas
Cromosomas Polit
enicos:
Los cromosomas gigantes se forman por la repeticion del periodo S interfasico, formados por cientos de hebras de
crom
atidas. Poseen unas bandas caractersticas que es donde se enrolla la cromatina. Las interbandas son lugares donde
la cromatina se encuentra m
as laxa. Los puffs cromos
omicos son lugares donde se desenrrollan las bandas para la
sntesis de transcriptos. Como est
a formado por cientos de hebras, los puffs funcionan como zonas amplificadoras de
genes.
53.2.
Cromosomas Plumulados:
Cromosomas que aparecen en el diploteno (etapa meiotica) de la ovogenesis de anfibios. La cromatina se organiza en
base a asas. En estas asas se expone m
as ADN y hay mayor posibilidad de transcripcion. Por lo tanto, en el diploteno de
la ovogenesis de los anfibios se producen los Rnas necesarias para la formacion del cigoto.
Cromosoma plumulado
53.3.
Cariotipo Humano:
El orden de los cromosomas representa el cariotipo especfico de una especie. Para la formacion del cariotipo, los
cromosomas se juntan por hom
ologos y se ordenan por tama
no. El cariotipo humano corresponde a 22 pares de cromosomas
autos
omicos y 1 par sexual.
Cariotipo Humano
89
53.3.1.
Preparaci
on de un Cariotipo de Sangre:
La imagen a continuaci
on muestra el proceso para obtener el cariotipo en seres humanos. La importancia de este
p
arrafo radica en conocer la funcionalidad de la Colchicina. La colchicina es un farmaco antimitotico que detiene o
inhibe la division celular en metafase o en anafase. Es un compuesto que evita el reparto de los cromatidas de un
cromosoma durante la mitosis. Su efecto se debe a su accion sobre las protenas citoesqueleticas del huso mit
otico ya
que al desorganizar el huso, este no puede unirse a los microt
ubulos cinetocoricos de las cromatidas y tirar de ellas para
separarlas. Act
ua sobre la alfa tubulina, inactivandola e inhibiendo la formacion de microt
ubulos.
53.4.
Clasificaci
on de modelos de cromosomas:
Seg
un la posici
on del centr
omero podemos clasificar a los cromosomas metafasicos seg
un el siguiente orden:
Metacentricos: Donde el brazo p es igual al brazo q. Por nomenclatura el brazo p tiende a ser el brazo m
as corto
del cromosoma. La nomenclatura es importante para la identificaci
on del lugar de ciertos genes.
Submetacentricos: Diferencia de tama
no entre el brazo p y q del cromosoma.
Acrocentrico: El brazo P es excesivamente peque
no comparado con el brazo q.
Telocentrico: Carente totalmente del brazo P. (No existe en humanos).
Clasificaci
on cromos
omica.
53.4.1.
Nomenclatura en citog
enetica de cromosomas bandeados
90
54.
Sndrome de Down.
El 95 % de los ni
nos con sindrome de Down tiene trisomina en el cromosoma 21. A mayor edad aumenta la probabilidad
de tener un ni
no Down. el 85 % de las no disyunciones vienen de la madre. el 15 % viene del padre. Es importante recalcar
que las monosomas autos
omicas son letales en los seres humanos, solamente se acepta monosoma sexual (sndrome de
Turner). Es por esta raz
on que no existe el sndrome de down con carencia de un cromosoma 21.
No disyunci
on mei
otica que produce trisoma y monosoma; y presencia evidente del aumento la tasa de sndrome de
down conforme avanza la edad materna.
21q22.2
El 1 porciento restante, se produce por mosaicos de Down. Durante la division mitotica, en las celulas som
aticas ocurre
una no disyunci
on del cromosoma 21. La monosoma de cromosomas autosomicos es local. Sobreviven 2 poblaciones
91
celular. 46 y 47 cromosomas. el 1 % tiene mosaico. El grado de compromiso del Sndrome de Down es el Mosaicismo. Sin
embargo, el grado de mosaicismo sanguneo no asegura nada.
Parte XV
Estructura y Funci
on de la Mitocondria
La mitocondria ocupa una parte substancial del volumen citoplasmatico de las celulas eucariotas, y han sido esenciales
para la evoluci
on de los animales pluricelulares. Sin las mitocondrias las celulas animales actuales dependeran de la
gluc
olisis anaer
obica para formar ATP. En las mitocondrias el metabolismo de los az
ucares esta integrado: el piruvato
(producto de la glic
olisis) es importado y oxidado por el oxgeno molecular.
Las mitocondrias se describen como cilindros alargados y rgidos, de un diametro entre 0,5 y 1 m parecidos a las
bacterias. Las mitocondrias son organelos claramente moviles y plasticos, que cambian constantemente de forma e incluso
se fusionan y fisionan entre ellos. Cuando las mitocondrias se desplazan por el citoplasma, aparecen asociadas a
microt
ubulos, lo que determina la orientaci
on y distribucion de las mitocondrias en distintos tipos celulares.
55.
Estructura de la Mitocondria:
1. Matriz: Contiene una mezcla altamente concentrada de cientos de enzimas, incluyendo las que son necesarias para
la oxidaci
on del piruvato y los
acidos grados y para el ciclo de Krebs. La matriz tambien contiene diversas copias
identicas del genoma de DNA mitocondrial, ribosomas mitocondriales especiales, tRNA y varias enzimas requeridas
para la expresi
on de los genes mitocondriales.
2. Membrana interna: La membrana interna se encuentra replegada en numerosas crestas, que aumentan considerablemente su superficie total. Contiene protenas con tres tipos de funciones:
Aquellas que realizan las reacciones de oxidacion de la cadena respiratoria. (Cadena transportadora de electrones)
Un complejo enzim
atico llamado ATP sintasa que produce ATP en la matriz.
Protenas de transporte especficas que regulan el paso de metabolitos dentro y fuera de la matriz.
Dado que se establece un gradiente electroqumico a traves de esta membrana por la cadena impulsada por la ATP
sintasa, es importante que la membrana interna sea impermeable a la mayora de iones.
3. Membrana Externa: Gracias a que esta contiene una gran protena formadora de canales (denominada porina),
la membrana externa es permeable a todas las moleculas con peso molecular inferior a 5000 daltons. Otras protenas
de esta membrana son las enzimas implicadas en la sntesis mitocondrial de lpidos y las enzimas que transforman
en la matriz los substratos lipdicos en formas metabolizables. Ademas posee la maquinaria necesaria para la fisi
on
y fusi
on mitocondrial.
4. Espacio Intermembrana: Este espacio contiene varias enzimas que utilizan la salida de ATP de la matriz para
fosforilar otro nucle
otidos.
92
56.
Teora Endosimbi
otica:
57.
Importaci
on de Protenas la mitocondria.
Importaci
on de protenas por mitocondrias
Es importante recalcar que tambien hay distintos tipos de traslocacion de protenas mitocondrialas, unas pueden quedar
en la membrana interna o incluso estar activas en el espacio intermembrana. Se cree que en el espacio intermembrana
tambien existen chaperonas que ayudan al plegamiento proteico.
93
58.
Sntesis de ATP:
El ADN es tambien precursor de la sntesis de DNA y RNA. Por s misma es la moneda de cambio energetico celula.
La mitocondria altera el equilibrio de la reacci
on de hidrolisis de ATP, hacia la sntesis de ATP por 1010 veces.
Ciclo del
acido ctrico
58.1.
Fosforilaci
on oxidativa y cadena transportadora de electrones
Fosforilaci
on oxidativa: La membrana mitocondrial interna act
ua como una m
aquina de interconversi
on energetica,
transformando parte de la energa de oxidaci
on del NADH y del FADH2 en energa de enlace fosfato del ATP.
94
Hip
otesis Quimiosm
otica: Seg
un esta hip
otesis, los intermediarios qumicos de alta energa son substituidos por una
conexi
on entre los procesos qumicos y los procesos de transporte. Cuando los electrones de alta energa de los hidr
ogenos
del NADH y del FADH2 son transferidos a lo largo de la cadena respiratoria de la membrana mitocondrial interna,
la energa que se libera cada vez que pasan de una molecula transportadora a la siguiente es utilizada para bombear
protones a traves de la membrana interna, desde la matriz mitocondrial hasta el espacio intermembranoso. Esto genera
un gradiente electroqumico de protones a traves de la membrana mitocondrial interna, y el flujo de H+ a favor de
este gradiente es utilizado mediante una enzima ligada a la membrana, la ATP sintasa, para impulsar la conversi
on de
ADP en ATP, completando la fosforilaci
on oxidativa.
Acoplamiento quimiosm
otico para generar el potencial necesario para la sntesis de ATP
58.2.
95
Los electrones fluyen a traves de un complejo enzimatico pasando de manera secuencial a los cuatro o m
as transportadores de electrones de cada complejo. Parte de la variacion favorable de energa libre es utilizada por cada complejo
enzim
atico para bombear protones a traves de la membrana mitocondrial interna. No se conoce con exactitud el n
umero
de protones bombeados por electr
on; se estima que la NAD deshidrogenasa y los complejos bc1 bombean dos H+ por
electr
on, mientras que el complejo de la citocromo c oxidasa solo bombea uno. En la siguiente imagen solo se ilustra el
potencial redox asociado a la deshidrogenaci
on del NADH.
La ATP Sintasa:
La ATP sintasa se ubica en la membrana interna de la mitocondria y es la encargada final de producir ATP a partir
del ADP + Pi . La ATP sintasa se puede imaginar como un motor molecular que produce una gran cantidad de ATP
cuando los protones fluyen a traves de ella.
La sntesis de ATP se realiza cuando el rotor cambia conformacionalmente a las unidades beta del complejo
ATP-sintasa
96
Parte XVI
59.
Las macromoleculas que constituyen la ECM proceden de una secrecion celular de caracter local. En la mayor parte
de los diferentes tipos de tejido conectivo, estas macromoleculas son secretadas fundamentalmente por fibroblastos. Sin
embargo, en algunos tejidos conectivos especializados tales como el cartlago y el hueso, la ECM es secretada por celulas
relacionadas con nombres especficos como condroblastos y osteoblastos (cartlago y hueso respectivamente). La
ECM se compone de :
1. Protenas fibrilares.
2. Protenas no fibrilares.
3. Proteoglicanes.
59.1.
Protenas Fibrilares:
59.1.1.
Col
ageno:
97
Organizaci
on celular del col
ageno en la ECM.
Hasta el momento, se han identificado unas 25 cadenas de -helice, cada una codificada por un gen diferente. En los
diferentes tejidos se expresan diversas combinaciones de estos genes. La fibra de colageno, finalmente, se compone de la
uni
on 3 cadenas. Hasta el momento se han identificado 15 moleculas distintas de colageno.
Col
ageno tipo IV: Es tambien denominado col
ageno formador de redes. Estas moleculas se unen en una especie de
l
amina o red que constituye la mayor parte de la lamina basal madura.
59.1.2.
Elastina:
Muchos tejidos de los vertebrados, como la piel o los vasos sanguneos han de ser elasticos y resistentes a la tensi
on
para ser funcionales. Una red de fibras el
asticas en la ECM de estos tejidos les confiere la capacidad de recobrar su
conformaci
on inicial despues de una deformaci
on transitoria. Intercaladas con las fibras elasticas, se encuentran largas
fibras de col
ageno (inel
astico), que limitan la capacidad de extension, evitando el desgarro tisular.
Al contrario del col
ageno, la elastina es una estructura hidrofobica que tiene una forma globular, unida entre s por
puentes disulfuro.
98
59.2.
Protenas no Fibrilares:
59.2.1.
Fibronectina:
La ECM contiene varias protenas adhesivas diferentes del colageno que tpicamente presentan varios dominios, cada
uno de los cuales tiene lugares especficos de uni
on para otras macromeculas de la matriz y para receptores de la superficie
celular. De esta forma estas protenas facilitan tanto la organizacion de la matriz como el anclaje de las celulas a la
matriz. La fibronectina es una glucoprotena organizada en un dmero compuesto por dos subunidades muy largas
unidas mediante un par de enlaces disulfuro situados cerca del extremo carboxilo terminal. Cada subunidad est
a plegada
en una serie de dominios semejantes a un rodillo, funcionalmente distintos, separados por regiones flexibles de la cadena
polipeptdica.
Laminina:
La l
aminina es un gran complejo flexible formado por tres cadenas polipeptdicas, dispuestas en forma de cruz y unidas
mediante enlaces disulfuro. Como muchas otras protenas de la matriz extracelular, tambien presenta varios dominios
funcionales: uno de uni
on al col
ageno IV, otro al heparan sulfato, otro a la entactina y dos o mas a los receptores de la
laminina situados en la superficie celular.
La encactina, se une a cada molecula de laminina en el lugar donde los brazos cortos se unen con los largos. La entactina
tambien se une al col
ageno IV, por lo que se cree que act
ua como un puente adicional entre el colageno IV y la red de
laminina de la l
amina basal.
Laminina
59.3.
Proteoglicanes:
Est
an formados por una protena central y de manera covalente de glicosaminoglicanos o GAGs. Se unen de forma
covalente a un protena Core o nuclear. Hay proteoglicanos que son exclusivos de ECM o proteoglicanes cuyo core es una
protena de transmembrana. Tambien hay proteoglicanos con una modificacion lipdica cuyo core se ancla a la membrana
celular. Aparte de ser una molecula de matriz, son reservorios para factores de crecimiento. (Inducen proliferaci
on celular).
En general, los proteoglicanes se diferencian f
acilmente de otras glucoprotenas por la naturaleza, cantidad y organizaci
on de sus cadenas laterales de gl
ucidos: por definicion, por lo menos una de las cadenas sencillas de az
ucares de un
proteoglicano ha de ser un GAG (glucosaminoglucanos). Normalmente la protena central de los proteoglucanos es una
glucoprotena.
99
Estructura de un proteoglicano b
asico
59.4.
L
aminas Basales:
L
amina Basal: separa el epitelio del tejido conectivo. La lamina basal es ECM pero esta organizada de tal forma que
es una l
amina que separa los tejidos. Es relevante en m
usculo, epitelio y en los glomerulos. La lamina basal est
a formada
por interacciones especificas entre las protenas de colageno IV, la laminina, entactina y el proteoglucano perlecano.
60.
Mol
eculas de Adhesi
on. Interacci
on c
elula-c
elula y c
elula-matriz:
En el tejido conjuntivo la matriz extracelular es muy abundante, mientras que las celulas se encuentran en menor
n
umero. La matriz como vimos anteriormente, es rica en polmeros, principalmente en colageno utilizada como respuesta
a las tensiones a las que que est
a sujeta el tejido. Las celulas, que se encuentran unidas a diferentes componentes de la
matriz, pueden ejercer sobre esta diversas fuerzas, mientras que la contribucion de las uniones intercelulares es escasa. Por
el contrario, en tejidos epiteliales las celulas se encuentran estrechamente unidas formado laminas (epitelio). La ECM es
escasa en estos tejidos y est
a constituida principalmente por la l
amina basal que esta en la base de las celulas. Las capas
de celulas epiteliales tapizan todas las cavidades y superficies libes del organismo y, mediante uniones dotan aquellas
de propiedades de barrera que restringen el movimiento de agua, solutos y celulas entre los diversos compartimientos del
organismo:
100
La primera imagen muestra las diversas interacciones entre celula-celula y celula-ECM. La segunda muestra un esquema
de un epitelio que forma una monocapa que est
a interconectada por plasmodesmos a traves filamentos intermedios. Bajo
el epitelio est
a la l
amina basal que separa el epitelio del tejido conectivo.
Sobre la l
amina basal, el epitelio sobre esta, puede organizarse de 5 formas diferentes:
Organizaci
on del epitelio
61.
Uniones Celulares:
61.1.
Uniones estrechas:
A pesar de las grandes diferencias estructurales y bioqumicas entre los tipos de epitelios, todos tienen, como mnimo,
una importante funci
on com
un: constituir barreras selectivas de permeabilidad, separando fluidos de diferente composici
on. Las uniones estrechas juegan un importante doble papel en el mantenimiento de esta funcion de barrera
selectiva; el ejemplo m
as cl
asico es el epitelio instestinal de los mamferos (separando la region apical de la basolateral).
Modelo actual de las uniones estrechas: Se postla que las hebras de sellado que mantienen unidas las membranas
plasm
aticas est
an constituidas por hebras continuas de protenas transmembrana, las cuales establecen contacto a traves
del espacio intercelular, dando lugar a su sellado. Esta union continua esta establecida por accion de protenas ocludinas
y claudinas.
61.2.
Anclaje celular:
Uniones adherentes.
Las uniones adherentes intercelulares, en los epitelios, forman una banda de adhesi
on continua, situada alrededor
de cada celula epitelial, bajo las uniones estrechas. La union de estas bandas esta dada principalmente por protenas
transmembrana denominadas cadherinas. Importante es destacar que una diferencia notable con los desmosomas es
que las uniones adherentes ligan uniones de actina y no de filamentos intermedios.
En cada celula puede observarse un haz de fibras de actina, contractil, que se encuentra adyacente a la banda de
adhesi
on, que corre paralelo a la membrana plasmatica. Los haces de actina se encuentran interconectados a traves de
las cadherinas y protenas de uni
on, formando una extensa red transcelular. Se cree que la contraccion de esta red, que
depende de protenas motoras como la miosina, puede ser mediadora en la morfogenesis animal:
61.2.2.
Desmosomas:
Los desmosomas (que ya hicieron su primera aparicion en la materia pasada) son contactos intercelulares puntiformes que mantienen unidas a las celulas. En el interior de las celulas act
uan como lugares de anclaje para filamentos
intermedios, los cuales forman una red estructural en el citoplasma proporcionando una cierta rigidez. Mediante estas
uniones los filamentos intermedios de las celulas adyacentas estan indirectamente conectados formando una red continua
que se extiende a todo el tejido. El tipo especfico de filamentos intermedios anclados a los desmosomas depende del tipo
celular. La queratina en la mayora de las celulas epiteliales y desmina en las fibras musculares cardiacas:
Desmosomas :D
61.2.3.
Hemidesmosomas:
Hemidesmosomas
61.2.4.
Adhesiones focales:
Las adhesiones focales son tambien uniones entre la celula y la ECM, constituido por protenas integrinas asociadas. El
dominio extracelular de estas integrinas se fija a protenas de la matriz mientras que el dominio citosolico interact
ua con
protenas adaptadoras, mediando el comportamiento de las fibras de F-actina asociadas a estas protenas transmembranas.
Las adhesiones focales se unen principalmente a la fibronectina de la ECM.
61.3.
Uniones de comunicaci
on (Gap junctions):
103
Gap Junctions. Dos conexonesunidos a traves del espacio intercelular dan lugar a la formaci
on de un canal acuoso
continuo entre ambas celulas.
104
Parte XVII
Tarea 1: Por qu
e el ADN contiene Timina en vez
de Uracilo?
A.
Desaminaci
on de la Citosina y correcci
on en el ADN mediante enzimas
En la mayora de las especies animales las pirimidinas son degradadas a amoniaco y urea. Pueden ser tambien utilizadas
como precursores de la biosntesis de -alanina, y por tanto de la coenzima A. La principal ruta de degradaci
on de la
citosina y del uracilo se muestra de la siguiente manera:
Degradaci
on de una base pirimidnica (Citosina) mediante un proceso cataltico
Desaminaci
on de la citosina.
La citosina del DNA a diferencia del nucle
otido libre, se desanima espontaneamente para formar uracilo, la desaminaci
on
de la citosina es potencialmente mutagenica porque el uracilo se empareja con la adenina y as una de las hebras hijas
contendr
a la pareja AU en vez de la copia original.
Esta mutaci
on puede evitarse por un sistema de reparacion que reconoce al uracilo como una base extra
na al DNA. En
primer lugar, una uracilo-DNA glicosidasa hidroliza el enlace glicosdico entre el uracilo y la desoxirribosa y se genera
un hueco debido a la falta del uracilo denominado lugar AP porque es apurnico (libre de A o G) o apirimidico (libre de
C o T). Posteriormente una endonucleasa AP reconoce este defecto y corta una de las hebras justo al lado de la base
que falta.
Posteriormente la DNA polimerasa 1 corta el fragmento de desoxirribosa fosfato residual e inserta citosina. Por u
ltimo
la hebra reparada se cierra por acci
on de la DNA ligasa.
105
Reparaci
on debido a la desaminaci
on de la citosina en el ADN
B.
Por qu
e el ADN utiliza una base metilada (timina) y no lo hace en el
ARN?
El uracilo no es un componente natural del DNA. En su lugar, el DNA contiene timina, el analogo metilado del uracilo.
El toque final en la formaci
on de timina tiene lugar a nivel del desoxirribonucleosido monofosfato:
El desoxiuridilato (dUMP), se metila a desoxitimidilato (dTMP) por medio de una enzima llamada timidilato
sintasa. Sin embargo, falta el compuesto clave, el denominado dador de metilos. que se explica claramente en la siguiente
imagen:
106