Ao de la Promocin de la Industria Responsable y del Compromiso Climtico

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

CURSO:

Nutricin y Alimentacin de Organismos Acuticos

TEMA: Descapsulacin de Cistes de Artemia y Conteo de Nauplios

Recin Eclosionados
PROFESORA: VARGAS CARDENAS, Jessie Marina
GRUPO:

FECHA DE REALIZACIN DE LA PRCTICA:

04/09/14

FECHA DE ENTREGA DE LA PRCTICA:

11/09/14

ALUMNOS:

BELTRAN ROSAS, Mara Fernanda

NAVA AVENDAO, Guillermo
VITO VILLA, Jordan
ZAGA ALARCN, Braulio

2014

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE PESQUERIA

INTRODUCCIN
La poblacin natural de Artemia se encuentra distribuida sobre los cinco continentes
en variedades de biotopos aislados como lo son los lagos interiores de sal, lagunascosteras salias costeras y albuferas; se tiene toda una lista de lugares naturales
compilada por Van Haecke y colaboradores en su libro La biogeografa de la Artemia
(Van Haecke, Tackaert, & Sorgeloos, 1987).
En tiempos modernos, la necesidad de un alimento bsico especficamente para el
desarrollo de larvas a nivel mundial, requiere como pieza fundamental del pequeo
crustceo conocido como Artemia, este peculiar individuo durante sus primeras etapas
de vida, tanto por su calidad nutricional, como por talla y movilidad resultan atractivos
para especies comerciales de hbitos carnvoros.
Los nauplios de Artemias, obtenidos mediante la eclosin de sus quistes, son
ampliamente utilizados para el sector que comprende el desarrollo de otros
crustceos, peneidos y peces (Lger, Bengston, Simpson, & Sorgeloos, 1986). La
facilidad y rapidez con que se obtienen sus nauplios a partir de un material
prcticamente inerte, fcilmente manipulable y almacenable como son los quistes o
huevos de resistencia, hacen que en la actualidad el uso de nauplios de Artemia siga
siendo prcticamente insustituible en acuicultura que comprende particularmente a las
especies carnvoras u omnvoras.

OBJETIVOS

Desarrollar el protocolo en pequea escala la descapsulacin de cistes de

artemia para la obtencin de nauplios utilizando hipoclorito de sodio.
Identificar los diferentes estados de desarrollo de los cistes desde su
hidratacin hasta la liberacin del nauplio.
Conocer las tcnicas de fijacin y conteo del nauplios de artemia.

MARCO TERICO
Los quistes secos son altamente higroscpicos, incorporando agua a gran velocidad,
por ejemplo en las primeras horas el volumen del embrin hidratado aumenta ms de
un 100%. Una vez completamente hidratado (asimilacin del 140% de agua) se puede
iniciar el metabolismo activo a condicin de que los quistes estn suficientemente
iluminados. El efecto activador de la luz es esencial para que comience el metabolismo
de la mayoria de los quistes. A intensidades de luz demasiado bajas, la tasa de
eclosin se retrasa o simplemente no se produce.
El metabolismo aerbico en el embrin enquistado asegura la conversin de la
trealosa, como carbohidrato de reserva, en glicgeno (como fuente de energa) y
glicerol que son acumulados por el embrin en la membrana cuticular externa. El
incremento en la concentracin de un producto altamente higroscpico como es el
glicerol, ocasiona un mayor aumento en la asimilacin de agua por el embrin a travs
de la membrana cuticular externa. Como consecuencia de este fenmeno se produce
un aumento de la presin osmtica en el interior de la membrana cuticular externa
hasta que se alcanza un punto crtico, momento en el cual se produce la ruptura de

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esta membrana y de la cscara del quiste (breaking). La ruptura de la cscara va
acompaada de la liberacin de todo el glicerol al medio de cultivo.
Dicho de otro modo, el metabolismo de los quistes de Artemia, con anterioridad a la
ruptura, es un sistema regulatorio hiperosmtico trealosa-glicerol. Esto significa que la
ruptura se puede producir en ausencia de sales y que a medida que aumentan los
nveles de salinidad en el medio de eclosin, se necesitan mayores concentraciones
de glicerol para alcanzar el punto crtico de presin osmtica necesario para que se
produzca la ruptura de la cscara (por diferencia entre la presin osmtica dentro y
fuera del quiste). De esta forma cuanto mayor es la salinidad en el medio, mayor
cantidad de glicerol tiene que ser producido, alargandose con ello el perodo de
eclosin y de ruptura y disponiendo de menos reservas energticas para el nauplio.

Extraido: http://www.fao.org/docrep/field/003/ab474s/AB474S03.htm

Tras la ruptura de la cscara el embrin entra en contacto directo con el medio externo
a travs de la membrana de eclosin. En ese momento ya es activo un sistema
osmoregulatorio inico; el desarrollo ptimo hasta larva nauplio libre y nadadora no
quedar asegurado hasta que la composicin inica del medio de eclosin sea similar
a la del agua de mar y con un pH comprendido en el intervalo entre 8 y 9.
El embrin empieza entonces a diferenciarse en una larva nauplio mvil. Un enzima de
eclosin es segregado en la zona de la cabeza del nauplio. Este debilita la membrana
de eclosin a travs de la cual el nauplio mvil se libera en el medio de cultivo.
Los quistes secos (con un contenido en agua entre el 2 y el 5%) son muy resistentes,
por ejemplo la viabilidad de la eclosin no se ve afectada en un intervalo de
temperatura entre -273 y 60C pudiendo tolerar hasta 90C si las exposiciones son de
breve duracin (en realidad las exposiciones debern ser ms cortas a medida que la
temperatura aumenta).

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Los quistes hidratados (completamente hidratados en el medio de cultivo) tienen una

tolerancia a la temperatura muy especfica:

Una interrupcin del metabolismo (muerte del embrin) se produce por debajo
de -18C y por encima de 40C.

Una interrupcin reversible del metabolismo se produce (sin que la viabilidad

se vea afectada) en un intervalo de temperaturas que vara entre -18C y 4C y
entre 32C y 40C (una exposicin de larga duracin a este ltimo intervalo de
temperaturas ocasiona un retraso progresivo de la tasa de eclosin. Los lmites
superiores e inferiores de temperatura pueden variar ligeramente de cepa a
cepa).

El metabolismo activo actua en el intervlo de temperatura entre 4 y 32C;

aunque si bien el porcentaje de eclosin permanece constante, los nauplios
eclosionan antes a medida que la temperatura es ms alta.

Extraido: http://www.fao.org/docrep/field/003/ab474s/AB474S03.htm

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MATERIALES

Equipos:
- Estereoscopio
- Cmara de Sedwick Rafter
- Aireadores
Soluciones
- Hipoclorito de sodio 20%
- cido clorhdrico (si fuera necesario) 0.1N
- Agua salobre (16%o)
- Lugol
Instrumentos
- 5 g de cistes de Artemia
- Beakers
- Pipetas
- Recipientes graduados
- Placas Petri
- Filtros de malla 120u
- Pizetas
- Vaguetas
- Esptula

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PROCEDIMIENTO

Descapsulacion de Artemia
Hidratacion de cistes: Colocar 2g/L de cistes de artemia en agua con aireacion
permanente por el lapso de tiempo de una hora. (16%o)

Preparacion de la solucon descapsuladora: Se requiere el uso de legia en la

concentracion de 0.5g de Cl activo/1 gr de cistes. Acontinuacion se procede a agregar
los cistes seguido por el NaOCl en un recipiente.

Este recipiente estara sujeto a un mecanismo de aireacion que hara posible la

descapsulacion de artemia.

Pasado algunos minutos se observa un cambio de coloracion en la solucion y un ligero

aumento de temperatura.

Tomando una muestra de esta solucion se lleva al microscopio y se observa que la

proporcion de cistes naranjas es mayor a la de blancos se retira de l mecanismo de
aireacion.

Se traspasa la solucion ahora mostaza se traspasa a un filtro o malla onde se hara el

lavado del cloro activo y la eliminacion de este enjuagandose con agua de cao

Una vez habiendo desaparecido el olor a lejia de los cistes descapsulados, se coloca a
incubar en el volumen de un litro a 16%o salinidad con aireacion constante.

Se espera la eclosion de estos en las proximas 18 horas, para hacer el conteo o un

registro de cuantos de ellos han eclosionado, pasadas las 18 horas ,se observa en el
microscopio una muestra de la solucion y segun la muestra se da una conclusion general.

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RESULTADOS
I
115

II
120

III
90

Huevos en
eclosion

15

Umbrella

21

12

Nauplio

Huevos

1er muestreo
0 nauplios/ml
2do muestreo
2 nauplios

1ml

3er muestreo
1 nauplio 1ml
En promedio:

X = 1000 nauplios

1000 ml

DISCUCIN
El nmero de nauplios encontrados fue de 1000 en un litro de solucin de incubacin
de una muestra de 2 g de quistes, los mejores eficiencias de eclosin con parmetro
fsico-qumicos ptimos e ideales arrojan una produccin de 300000 nauplios/g quiste
(FAO); esta baja nuestra puede deberse a diversos factores (Salinidad). En la prctica
los cistes decapsulados se llevaron a incubacin a un volumen de agua de 16 0/00 de
salinidad, estudios y experimentos de la FAO indican que a una salinidad de 5 0/00
aumenta la tasa de eclosin esto se debe a que el metabolismo de los quistes de
Artemia, con anterioridad a la ruptura, es un sistema regulatorio hiperosmtico
trealosa-glicerol. Esto significa que la ruptura se puede producir en ausencia de sales
y que a medida que aumentan los niveles de salinidad en el medio de eclosin, se
necesitan mayores concentraciones de glicerol para alcanzar el punto crtico de
presin osmtica necesario para que se produzca la ruptura de la cscara (por
diferencia entre la presin osmtica dentro y fuera del quiste) (Manual para el Cultivo
de Artemia en Acuicultura-FAO). De esta forma cuanto mayor es la salinidad en
el medio, mayor cantidad de glicerol tiene que ser producido, alargndose con
ello el perodo de eclosin y de ruptura y disponiendo de menos reservas
energticas para el nauplio, otro parmetro que pudo haber afectado la tasa de
eclosin de nauplio pudo ser la temperatura ya que segn la bibliografa consultada la
temperatura ptima de eclosin es de 25-30 C, pero por el clima y el ambiente de
incubacin la temperatura a la que estuvieron los cistes descapsulados fueron
menores a 20 C. Otra causa de la baja eclosin posiblemente fue que los cistes
obtenidos se encontraban hmedos, esto gracias al clima limeo y la mala
manipulacin al momento de embolsarlos. Esta humedad, conjuntamente con la
presencia de luz solar, puede estimular a un falso medio, el cual generar mayor
mortalidad.

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CONCLUSIN

La relacin principal salinidad-eclosin define la optimizacin de la produccin

de cistes descapsulados en medios controlados; el parmetro salinidad, juega
un rol importante en el medio de ruptura cuando intervienen altas
concentraciones de glicerol dentro del ciste que crea el punto crtico de presin
osmtica y evitando el alargue de la eclosin, a su vez la prdida de reservas
energticas.
Los valores de temperatura no fueron los ptimos para un mximo desarrollo
de la etapa de eclosin.
La muestra de cistes con la que se trabaj no fue almacenada adecuadamente
ocasionando que ingrese humedad y un falso medio de desarrollo, esto antes
del trabajo de descapsulacin realizado en el laboratorio.
Finalmente, el tiempo que se determin para realizar el conteo de individuos
puede no haber sido el indicado, esto debido a que los factores anteriores
indican que el verdadero tiempo de eclosin debi haberse prolongado por un
intervalo relativamente mayor al esperado, quiz hasta de 36 horas.

BIBLIOGRAFA
1. Cisneros Burga, Rosario Elizabeth. Produccin semi-Intensiva de biomasa
de Artemia Franciscana Kellog 1906 (cepa Virril, Per) utilizando diferentes
dietas.
(Disponible en:
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtual/tesis/basic/cisneros
/mat_met.htm).
2. Lger, P., Bengston, D. A., Simpson, K. L., & Sorgeloos, P. (1986). The use
and nutritional value of Artemia as food source. Oceanogr. Mar. Biol. Ann. Rev.
(Disponible en: http://digeset.ucol.mx/tesis_posgrado/Pdf/Job%20de%20la%
20Cruz%20Veloz.pdf)
3. Van Haecke, P., Tackaert, W., & Sorgeloos, P. (1987). The biogeography of
Artemia. Vol 3.
(Disponible en: http://digeset.ucol.mx/tesis_posgrado/Pdf/Job%20de%20la%
20Cruz%20Veloz.pdf)
4. Llosa Larrabure, Jaime. La Artemia: Aportes para el desarrollo de
laacuicultura en el Per.
(Disponible en: http://es.scribd.com/doc/96518317/Artemia)
5. Fernandez Fipa, Mariluz. UNAC, 2011, Informes UNAC. (Disponible:
http://www.unac.edu.pe/documentos/organizacion/vri/cdcitra/Informes_Finales_
Investigacion/Julio_2011/IF_MARILUZ_FERNANDEZ_FIPA/CAP%20I%20Y
%20II.PDF).