REPLICACIN DE ADN

La primera pregunta:
semiconservativa o conservativa?

Experimento de Meselson y Stahl

Replicacin semiconservativa
La copia de DNA original fue marcada con N15 (istopo pesado).
Este DNA entr a una ronda de replicacin con N14 y despus la mezcla fue centrifugada de tal
manera que el DNA pesado (2 hebras N15) formara una banda ms baja en el tubo, el DNA
intermedio(una hebra N15 y una hebra N14) una banda ms ligera y ms arriba en el tubo y el DNA
ligero (N14) formara una banda ms arriba de las dos anteriores).
Los resultados esperados para cada modelo:
Conservativa: Despus de una generacin una banda pesada y una banda ligera, el resultado no
cambia despus de varias generaciones.
Semiconservativa: Despus de una generacin una sola banda intermedia, despus de varais
generaciones, una banda ligera y una banda intermedia.

La replicacin del ADN produce una copia de s

mismo por medio de enzimas. El mecanismo
de replicacin es esencialmente el mismo en
todas las clulas.
Es un proceso semiconservativo porque cada uno
de los dos ADN hijos tiene una cadena del
ADN anterior.

Cada una de las dos molculas hijas contiene la

mitad de la molcula madre. Este tipo de
duplicacin semiconservativa se puede realizar
porque la secuencia de las bases que la
constituyen ha sido conservada, de forma que la
secuencia de cada molcula madre sirve de
molde para formar la secuencia de las dos
molculas hijas.
El proceso tiene 3 fases bien diferenciadas:
Iniciacin, Elongacin y Terminacin.

EL DNA se replica desenrollando la hlice y

rompiendo los puentes de hidrgeno entre las
hebras complementarias.
La replicacin comienza en sitios especficos
u orgen de replicacin
Procariontes: Un origen de replicacin

Eucariontes: Mltiples orgenes de

replicacin.

 La replicacin es bidireccional a partir del

origen de replicacin

Bidirectional Circular DNA Replication in Bacteria

Sitios de origen de la replicacin

Genoma circular
1 sitio origen
de la replicacin

Genoma lineal
varios sitios origen
de la replicacin

Iniciacin
La iniciacin de la replicacin del ADN comienza siempre en una
secuencia especfica de nucletidos conocida como origen de
replicacin, en el que hay un gran contenido de adenina y
timina.
Requiere una serie de protenas iniciadoras especiales (protenas
desestabilizadoras de la hlice) y enzimas conocidas como
helicasas, que rompen los puentes de hidrgeno abriendo la
hlice, formndose las horquillas de replicacin, una a cada
lado de la burbuja a que da lugar la separacin de las ramas del
ADN.

 Para iniciar la replicacin se requieren enzimas

desenrrolladoras llamadas helicasas y as se
forman las horquillas de replicacin (replication
forks)

Una vez abierta la cadena de ADN se unen otras protenas y

enzimas adicionales:
Protenas SSB (protenas de unin a cadena)
No permiten que el ADN se vuelva a naturalizar o
forme estructuras secundarias.
Las enzimas topoisomerasa evitan que se retuerzan y formen
superenrrollamientos cortando una o ambas hebras del ADN
alivindolos

Elongacin
Replicacin de ADN. Durante la
Iniciacin de la replicacin, la
doble hlice de ADN se abre por
accin de una helicasa. A
continuacin, una molcula de
ADN polimerasa se une a una de
las hebras de ADN. Se mueve
recorriendo la hebra usndola
como molde para ir sintetizando
la cadena lder (en rojo),
aadiendo
nucletidos
y
recomponiendo la doble hlice

En el siguiente paso, las enzimas llamadas ADN

polimerasas catalizan la sntesis real de las nuevas
cadenas aadiendo nucletidos sobre el molde.
La ADN polimerasa sintetiza las nuevas cadenas,
complementarias a cada una de las cadenas primitivas,
pero slo es capaz de sintetizar nuevo ADN en sentido 5
3 partiendo de un ARN corto especfico llamado
ARN cebador -molcula formada por nucletidos de
ARN catalizados por ARN primasas.
Durante la sntesis, en cada horquilla de replicacin, se van
formando dos copias nuevas, sobre cada una de las dos
hebras de ADN que se separaron en la fase de iniciacin.

Terminacin

Cuando una ADN polimerasa hace contacto con el

extremo de otro fragmento de Okazaki contiguo el
ARN cebador de este es eliminado y otra enzima, la
ADN ligasa, conecta los dos fragmentos de Okazaki
de ADN recin sintetizado, catalizando las reacciones
de condensacin que unen los grupos fosfato y azcar
de los nucletidos contiguos y as, una vez unidos
todos los fragmentos de Okazaki se completa la doble
hlice de ADN.

Replicacin
3
5
3

AGCTTAGCCTAAGCTTAGCCTAAGCTTAGCCTAAGCTTAGCCT
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
TCGAATCGGATTCGAATCGGATTCGAATCGGATTCGAATCGGA

Separacin de
las cadenas
AGCTTAGCCTAAGCTTAGCCTAAGCTTAGCCTAAGCTTAGCCT

TCGAATCGGATTCGAATCGGATTCGAATCGGATTCGAATCGGA

DNA

3
5

Templado 1

3 Templado 2

Replicacin
3
5
3
5

AGCTTAGCCTAAGCTTAGCCTAAGCTTAGCCTAAGCTTAGCCT
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
UCGAATCGGATTCGAATCGGATTCGAATCGGATTCGAATCGGA

AGCTTAGCCTAAGCTTAGCCTAAGCTTAGCCTAAGCTTAGCCU
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
TCGAATCGGATTCGAATCGGATTCGAATCGGATTCGAATCGGA

5
3

5
3

DNA

RNAm

Polip

DNA polimerasa III no puede empezar de cero, necesita un

Extremo OH libre en donde unir el primer nucletido, por
Eso se requiere un primer de RNA (Primasa).
Lectura 3-5
Sntesis 5-3

Adelaida Camitjana

Entonces, hay una hebra lder y una hebra retrasada

 Una vez terminada la copia del DNA, se

deben remover los pedazos de RNA (DNA
pol I) y unir toda la cadena (Ligasa).
En la copia puede haber errores
(mutaciones) que en general son corregidas
simultneamente por la DNA pol III.

Sntesis continua de la cadena 5 -3

G C

A
T

C
G

G C

T
A

T
A

G
C

C
G

A
T

Sntesis continua de la cadena en direccin 5'3'. La sntesis de esta cadena no plantea ningn
problema. As, una vez separadas ambas cadenas, se sintetiza el primer y la ADN pol. III (una de las
enzimas que unen los nucletidos) va a elongar la cadena en direccin 5'3'.

Sntesis discontinua de la cadena 3 -5

G C

A
U
T

C
G

G C

G
C

C
G

A
T

G C

G
C

T
A

Sntesis discontinua. La cadena complementaria no se va a replicar en sentido 3'5' sino que se

replica discontinuamente en direccin 5'3'. Primero se sintetiza el primer (ARN) y posteriormente
este se elonga con ADN. El ARN es posteriormente eliminado y los diferentes fragmentos sintetizados,
llamados fragmentos de Okazaki, son unidos entre s.

Enzima

Accin

Funcin en la
clula

DNA polimerasa I

Aade nucletidos a la
molcula de DNA en
formacin. Remueve
primers de RNA

Llena huecos en el DNA,

fundamentalmente para
reparacin. Remueve
primers de RNA.

DNA polimerasa III

Aade nucletidos a la
molcula de DNA en
formacin. Revisa la
seecuencia y corrige

Replica DNA

DNA girasa
(topoisomerasa II)

Promueve
superenrrolamiento

Mantiene la
compactacin del DNA

DNA helicasa

Se une al DNA cerca de

la horquilla de
replicacin

Promueve la separacin
de las hebras de DNA

Topoisomerasa I

Relaja el DNA super

enrollado

Mantiene el nivel
adecuado de
enrollamiento

Primasa

Hace cadenas pequeas

de RNA unsando DNA
como molde

Se necesita para que la

DNA polimerasa replique
la hebra retrasada