Mondragon Ti Si

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

E. A. P. FARMACIA Y BIOQUMICA
Estudio farmacognstico y bromatolgico de los

residuos industriales de la extraccin del aceite de
Plukenetia volubilis L. (Sacha inchi)
TESIS
para optar al ttulo profesional de Qumico Farmacutica
AUTOR
Iris Giovana Mondragn Tarrillo
ASESORA
Arilm Gorriti Gutirrez
Lima-Per
2009
DEDICATORIA
A Dios
Por darme la oportunidad de estudiar Farmacia y Bioqumica,
iluminndome en los momentos en que todo pareca difcil y confuso,
slo en fe y encomendndome a l, lograron disipar y esclarecer mis
dudas
A mis padres: Elas Mondragn Silva y Sara Tarrillo Linarez

Por ser las personas que ms he admirado toda mi vida, que con sus
acciones me han enseado que el trabajo, la perseverancia, la
superacin continua y la humildad son esenciales en la vida y para la
vida.
A mis hermanos: Oscar Elas, Edgar Ronal e Ybett Roco.

Porque en toda mi etapa universitaria llena de esfuerzo, siempre me han
dado su apoyo, solidaridad y compresin
A mi Madrina: Orfelina Cotrina Meja.

Por ser como una segunda madre y ser ejemplo de orden, disciplina
esfuerzo y sacrificio.
A Miguel ngel Inocente.

Por su amor, su amistad, su apoyo durante nuestra etapa universitaria
y por ser l una parte de mi felicidad
AGRADECIMIENTOS
A mi Directora de Tesis: Dra. Arilm Gorriti Gutirrez, por creer

en mi y permitir
llevar a acabo sta investigacin, gracias
sinceramente por su comprensin, por su tiempo y por cada una de las

enseanzas dadas las cuales me permitieron llegar hasta aqu.
A mi Co- Asesora, Mg. Teresa Arbaiza Fernndez, por su

paciencia, dedicacin y comprensin en todo momento; por sus
enseanzas
Bromatolgico.
instrucciones
en
la
realizacin
del
estudio
CENTRO DE INVESTIGACIN DE BIOQUMICA Y NUTRICIN

DE LA UNMSM (CIBN)
A la Mg. Ines Arnao Salas, mi eterno agradecimiento y gratitud

en esta etapa tan importante de mi vida profesional, por toda la
paciencia y el tiempo dedicado, por sus sugerencias, ideas, respaldo
y consejos
en el desarrollo de la determinacin cualitativa y
cuantitativa de aminocidos y sobre todo por su gran amistad.
Al
Dr.
Mario
Monteghirfo
Gomero
mi
eterno
agradecimiento y gratitud por ampliar mis conocimientos

y permitir culminar con su apoyo incondicional una parte
importante de mi tesis.
Un agradecimiento muy especial y mi gratitud a los Docentes de la

Facultad de Farmacia y Bioqumica de la UNMSM, en especial a la : Mg.
Bertha Jurado Teixeira , Dra. Augusta Crdova, Dr. Cesar Fuertes; Mg.
Moiss Garca; Mg. Mirtha Roque; Q. F. Marielena Salazar; Q. F.
Vicky Irey; Q. F. Gloria Gordillo; Q. F. Julio Ruiz; por su apoyo y
colaboracin en el desarrollo de la tesis.
A todos los trabajadores del Instituto CIBN de la UNMSM por su apoyo,

aportaciones y sugerencias en el desarrollo de la tesis, en especial a la:
Dra. Doris Huerta, Mg. Silvia Surez; Mg. Raquel Or; Mg. Patricia
Woll, Q. F . Rubn Valdivieso, Biol. Juan Trabuco; Biol. Rosala
Callohuari.
A mi tutora del HNGAI, Dra. Rosario Chipana Florez; por su amistad,

y comprensin en la realizacin y culminacin de la tesis durante el ao
2008.
A todos mis compaeros y amigos de la Facultad de Farmacia y

Bioqumica de la UNMSM y del Hospital Nacional Guillermo Almenara
Irigoyen, Elizabeth Poma, Eveling Requis, Eveling Taipe ,Jazmn
Alfaro, Mara Daz, Deybbis Ayala, Linne Cceres, Angi More, Erika
Sinche , Henry Ostos, Dany Rueda y especialmente a Gina Grisson
Salsavilca y Cristhin Zacarillas por su amistad, enseanzas y ayuda
incondicional.
Y a todos los dems no mencionados. Dios los

bendiga
MUCHAS GRACIAS
AGRADECIMIENTO ESPECIAL
Al Presidente y distinguidos Miembros del jurado por sus sugerencias y aportes de

investigacin realizado.
Presidenta
Dra. Eloisa Maximina Hernandez Fernandez
Miembros
Q.F. Luz Fabola Guadalupe Sifuentes

MG. Margarita Eva Lovatn Erazo
MG. Eriberto Carrasco Raymundez
Estudio Farmacognstico y Bromatolgico de los residuos industriales de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. (sacha inchi)
NDICE
Pgina
RESUMEN
SUMMARY
10
ABREVIATURA
11
I.INTRODUCCIN
12
II.GENERALIDADES
14
2.1.
Antecedentes
14
2.2. Estudio Farmacognstico

2.2.1.
16
Datos etnobotnicos y etnofarmacolgicos
16
2.2.1.1. Datos etnobotnicos
16
2.2.1.2. Uso etnofarmacolgico
16
2.2.2.
Hbitat y recoleccin
17
2.2.3.
Protocolo botnico
18
2.2.3.1. Ubicacin taxonmica
18
2.2.3.2. Descripcin morfolgica
18
2.3. Estudio bromatolgico
19
2.3.1.
Valor nutritivo de
19
2.3.2.
Digestibilidad
20
2.3.3.
Calidad de protenas
21
2.3.4.
Anlisis de aminocidos
21
2.4.
2.3.4.1. Cromatografa lquida de alta resolucin en fase reversa
23
2.3.4.2. Mtodos de derivatizacin para la separacin cromatogrfica
24
2.3.4.3. Reactivos de derivatizacin de precolumna
25
2.3.4.3.1.
Ortoftaladehido (OPA)
25
2.3.4.3.2.
Fenilisotiocianato(PICT)
26
2.3.4.3.3.
Fluorenilmetil cloroformato (FMOC-Cl)
27
2.3.4.3.4.
Cloruro de dansilo
27
Fibra diettica
2.4.1.
2.5.
27
Inters de la fibra diettica
28
Potencial industrial
2.5.1.
29
Mercado del sacha inchi
30
2.5.1.1. Comercio internacional
32
2.5.1.2. Comercio nacional
33
2.5.2.
Residuos
34
2.5.2.1. Normatividad y gestin de residuos slidos
36
2.5.2.2. Manejo de residuos slidos
36
2.5.2.3. Los residuo de acuerdo a los mtodos de extraccin del aceite
UNMSM-Facultad de Farmacia y Bioqumica
-1-
Bach. Iris Giovana Mondragn Tarrillo
37
Pgina
2.5.2.4. Temperatura y calidad de los residuos de la extraccin de aceite
2.6. Desarrollo sostenible
38
39
III. PARTE EXPERIMENTAL
40
3.1. Materiales, equipos y reactivos
40
3.2. Metodologa
44
3.2.1.
Obtencin y preparacin de la muestra
44
3.2.2.
Estudio farmacognstico
44
3.2.2.1. Anlisis cualitativo
44
3.2.2.1.1. Anlisis cromatogrfico (CCF)
48
3.2.2.2. Determinacin cuantitativa de taninos
49
3.2.2.3. Determinacin cuantitativa de saponinas totales
51
3.2.3.
Estudio Bromatolgico
51
3.2.3.1. Estudio qumico proximal
51
3.2.3.2. Determinacin de minerales y oligoelementos
56
3.2.3.3. Determinacin de vitaminas
57
3.2.3.4. Digestibilidad de protenas in vitro
58
3.2.3.4.1. Mtodo de pepsina y cido clorhdrico
58
3.2.3.4.2. Mtodo enzimtico por celulasa
58
3.2.3.5. Determinacin de aminocidos por HPLC
58
3.2.4. Evaluacin de la toxicidad aguda a dosis limite
63
IV. RESULTADOS
65
4.1. Estudio Farmacognstico
65
4.1.1. Ensayo organolptico
65
4.1.2. Anlisis cualitativo
65
4.1.3. Anlisis cuantitativo de taninos y saponinas totales
67
4.1.3.1. Determinacin cuantitativa de taninos
67
4.1.3.2. Determinacin cuantitativa de saponinas totales
70
4.1.4. Anlisis cromatogrfico
72
4.2. Estudio Bromatolgico
75
4.2.1. Anlisis qumico proximal
75
4.2.2. Fibra detergente neutra
78
4.2.3. Minerales esenciales
79
4.2.4. Vitaminas
79
4.2.5. pH y acidez total
80
4.2.6. Digestibilidad de protenas in vitro
83
-2-
4.2.6.1. Nitrgeno soluble en pepsina
83
4.2.6.2. Digestibilidad enzimtica por celulasa
84
4.2.6.2.1. ANOVA de tiempo y porcentaje de digestibilidad

4.2.6.3. Determinacin de aminocidos
85
86
4.2.6.3.1. Prueba de solubilidad y determinacin de protenas
86
4.2.6.3.2. Extraccin y purificacin de protenas
87
4.2.6.3.3. Valores obtenidos del pico I del fraccionamiento proteico
88
4.2.6.3.4. Composicin de aminocidos de los residuos de la extraccin de aceite de

sacha inchi
89
4.2.6.3.4.1. Anlisis de los aminocidos esenciales del sacha inchi
90
4.2.6.3.4.2. Puntaje qumico
91
4.3. Evaluacin de toxicidad aguda a dosis limite
93
V. DISCUSIN
98
VI. CONCLUSIONES
104
VII. RECOMENDACIONES
105
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

IX.
106
ANEXOS
112
-3-
NDICE DE TABLAS
Pgina
Tabla1.Composicin qumica del sacha inchi
15
Tabla2.Uso etnofarmacolgico de Plukenetia volubilis L. sacha inchi
16
Tabla3. Hbitat y recoleccin
17
Tabla 4.Digestibilidad en diferentes mezclas nutritivas
20
Tabla 5.Puntaje qumico de algunos alimentos
21
Tabla 6.Las protenas y aminocidos de la semilla de sacha inchi versus otras semillas
22
Tabla 7.Reactivos de derivatizacin
25
Tabla 8. Beneficio de la fibra soluble e insoluble en la salud
28
Tabla 9. Clasificacin de la fibra segn su grado de fermentabilidad
29
Tabla 10. Exportaciones de productos naturales en dlares americano
33
Tabla 11. Composicin de los residuos slidos municipales
36
Tabla 12. Composicin de los principios inmediatos del anlisis de Weende
55
Tabla 13. Condiciones de la separacin de los PICT
60
Tabla 14. Ensayo organolptico
65
Tabla 15. Rendimiento y determinacin de sustancias solubles
65
Tabla 16. Resultado de la marcha fitoqumica del extracto etreo
65
Tabla 17. Resultado de la marcha fitoqumica del extracto alcohlico
66
Tabla 18. Resultado de la marcha fitoqumica del extracto acuoso
66
Tabla 19. Resultados de la determinacin de carbohidratos
67
Tabla 20. Curva de calibracin de cido tnico (x/y)
67
Tabla 21. Estadstica de la regresin del cido tnico
67
Tabla 22. Anlisis de varianza del cido tnico
67
Tabla 23. Porcentaje de cido tnico de residuos de la extraccin de aceite de Plukenetia

volubilis L.
69
Tabla 24. Curva de calibracin de saponina estndar y estadstica descriptiva de (x/y)
70
Tabla 25. Estadstica de regresin de la saponina estndar
71
Tabla 26. Anlisis de varianza de la saponina estndar
71
Tabla 27. Porcentaje de saponinas totales de residuos de la extraccin del aceite de Plukenetia
volubilis L.
72
Tabla 28. Determinacin de humedad
75
Tabla 29. Determinacin de protenas
75
Tabla 30. Determinacin de protenas en muestra desengrasada
76
Tabla 31. Determinacin de extracto etreo
76
Tabla 32. Determinacin de fibra cruda
76
Tabla 33. Determinacin de cenizas
77
-4-
Pgina
Tabla 34. Anlisis proximal de los residuos industriales de la extraccin del aceite de Plukenetia
volubilis L.
77
Tabla 35. Determinacin de la pared celular y contenido celular
78
Tabla 36. Determinacin de FDN
78
Tabla 37. Resultados de la determinacin de FDN
78
Tabla 38. Determinacin de calcio, fsforo, hierro
79
Tabla 39. Determinacin de tiamina, riboflavina y niacina
79
Tabla 40. Resultados de la determinacin de minerales y vitaminas
79
Tabla 41. Resultados de la determinacin de pH
80
Tabla 42. Resultados de la determinacin de acidez total
80
Tabla 43. Tabla comparativa del anlisis proximal y pared celular de residuos obtenidos
de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L., Glycine max L., Chenopodium
quinoa W.
81
Tabla 44.Tabla comparativa de minerales, vitaminas (tiamina) de residuos obtenidos

de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L., Glycine max L., Chenopodium
quinoa W.
82
Tabla 45. Resultados de la digestibilidad de protenas in vitro por el mtodo enzimtico

pepsina de los residuos de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L.
83
Tabla 46. Resultados de la digestibilidad enzimtica in vitro por el mtodo enzimtico de

celulasa
84
Tabla 47. Resumen de ANOVA de la influencia del tiempo en el %DMS por celulasa
85
Tabla 48. Resultado de ANOVA del %DMS en funcin del tiempo
85
Tabla 49. Resultados de la prueba de solubilidad y determinacin de protenas de los residuos

industriales de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L., para la utilizacin del
solvente adecuado para la extraccin de la fraccin proteica
86
Tabla 50. Condiciones de la fraccin proteica, del mayor pico obtenido del residuo de la
extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi
88
Tabla 51. Aminograma de los residuos industriales de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis
L. sacha inchi (mg/g) en comparacin con A.caudatus, Glycine max L., Chenopodium
quinoa.W.
89
Tabla 52. Comparacin de la composicin de los aminocidos esenciales de los residuos de la

extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi(mg/g) con Chenopodium
quinoa.W, Chenopodium pallidicaule, Oxalis tuberosa, Tropaeolum tuberosum, Arachis
hipogea L., Helianthus annuus L y la FAO/OMS
-5-
90
Pgina
Tabla 53.Puntaje qumico
91
Tabla 54. Resultados del ensayo de toxicidad aguda oral a dosis limite
93
Tabla 55. Resultados del comportamiento de la media desviacin estndar en la evaluacin

de toxicidad aguda a los 0, 7 y 14 das.
93
Tabla 56. Rango de la masa corporal con relacin a la edad en semanas de la especie y lnea del
modelo biolgico.
93
Tabla 57. Resumen ANOVA para el grupo control y tratado para ambos sexos
95
Tabla 58. Anlisis de varianza para determinar la diferencia entre grupos
95
Tabla 59. Prueba F para varianza de dos muestras para la determinacin del comportamiento
del peso corporal para el grupo control y tratado hembra.
96
Tabla 60. Prueba T para dos muestras suponiendo varianzas iguales para la determinacin
del comportamiento del peso corporal para el grupo control y tratado hembra.
96
Tabla 61. Prueba F para varianza de dos muestras para la determinacin del comportamiento
del peso corporal para el grupo control y tratado macho.
97
Tabla 62. Prueba T para dos muestras suponiendo varianzas iguales para la determinacin
del comportamiento del peso corporal para el grupo control y tratado macho
-6-
97
NDICE DE FIGURAS
Pgina
19
Figura 1. Plantaciones de sacha inchi, fruto y semilla

Figura 2. Reaccin de los aminocidos con OPA.MCE=Mercaptoetanol
26
Figura 3. Reaccin de derivatizacin de los aminocidos con PICT
26
Figura 4. Reaccin de derivatizacin de aminocidos con FMOC-Cl
27
Figura 5. Proceso de extraccin del aceite y residuos de Plukenetia volubilis L.
31
Figura 6. Exportaciones de productos naturales
32
Figura 7. Evolucin de las exportaciones de sacha inchi y derivados
34
Figura 8. Estimacin de residuos basada en la poblacin total del pas
34
Figura 9. Disposicin final de los residuos slidos
35
Figura 10. Composicin de los residuos slidos
35
Figura 11. Diagrama de flujo del estudio realizado a los residuos de la extraccin del aceite de
Plukenetia volubilis L. sacha inchi
45
Figura 12. Extraccin sucesiva al residuo de la extraccin de Plukenetia volubilis L. sacha inchi
para la marcha fitoqumica
46
Figura 12. Marcha fitoqumica del extracto etreo
47
Figura 13. Marcha fitoqumica del extracto alcohlico
47
Figura 14. Marcha fitoqumica del extracto acuoso
48
Figura 15. Procedimiento de extraccin, identificacin y cuantificacin de saponinas totales
52
Figura 16. Determinacin de fibra cruda
53
Figura 17. Determinacin de fibra detergente neutro
54
Figura 18. Procedimiento de extraccin de protenas solubles de residuos industriales de la extraccin

del aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi.
61
Figura 19. Procedimiento de hidrlisis de la protena soluble y derivatizacin de los aminocidos de

residuos industriales de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi
62
Figura 20. Proceso de separacin de los feniltiocarbamilaminocidos de residuos industriales de la

extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi
63
Figura 21. Recta de regresin del cido tnico
69
Figura 22. Recta de regresin de la saponina estndar.
71
Figura 23. Comparacin del anlisis proximal y pared celular de residuos obtenidos de la
extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi, Glycine max L. soya;
Chenopodium quinoa W. quinoa
81
Figura 24. Comparacin de minerales, calcio, fsforo y hierro de residuos obtenidos de la

extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi, Glycine max L.soya;
Chenopodium quinoa W. quinoa
82
-7-
Pgina
Figura 25. Comparacin en g/g % de tiamina de residuos obtenidos de la extraccin
del aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi, Glycine max L.soya;Chenopodium
quinoa w. quinoa
83
Figura 26. Curva de la absorbancia de la fraccin proteica de la muestra del residuo al 20%
en Tris-HCl 0.05M 6.5pH a una lectura de 280nm y 30 mL/h de
velocidad de
elucin
87
Figura 27. Curva de la absorbancia de la fraccin proteica de la muestra del residuo al 30%
en Tris-HCl 0.05m 6.5ph a una lectura de 280nm y 30 mL /h de
velocidad de
elucin
87
Figura 28.Composicin de la solucin estndar de aminocidos stock NAA-S-18 (Sigma Aldrich) a

una concentracin de 2.5 moles*mL-1, en una dilucin de 20 uL en 300uL de buffer
acetato de amonio 0.05M, pH 6
91
Figura 29.Composicin de aminocidos de los residuos industriales de la extraccin del aceite de

Plukenetia volubilis L.sacha inchi. (30%) en una dilucin de 3.7mg de protena
soluble en 500uL de buffer acetato de amonio 0.05M,pH 6
92
Figura 30.Composicin de aminocidos de los residuos industriales de la extraccin del aceite de

Plukenetia volubilis L.sacha inchi. (20%) en una dilucin de 3.4 mg de protena
soluble en 500uL de buffer acetato de amonio 0.05M,pH 6
92
Figura 31. Ganancia de peso en el ensayo de toxicidad aguda a dosis nica oral en el grupo control
y tratamiento de hembras a los 7 y 14 das de ensayo
94
Figura 32. Comportamiento del peso corporal para el grupo control y tratado hembra
96
Figura 33. Comportamiento del peso corporal para el grupo control y tratado macho
97
-8-
ABREVIATURAS
FONAM
: Fondo Nacional del Ambiente.
HPLC
: High Performance Liquid Chromatography.
UV
: Ultravioleta.
FAO
: Food and Agriculture Organization.
WHO
: World Health Organization.
CFR
: Cromatografa en fase reversa.
OPA
: Ortoftaladehido.
PICT
: Fenilisotiocianato.
FMOC-Cl
: Fluorenilmetil cloroformato.
CERPER
: Certificaciones del Per.
SAT
: Sociedad de Asesoramiento Tcnico.
Tris-HCl
: 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol, hydrochloride; Tris HCl;

Tris (hydroxymethyl) aminomethane Hydrochloride.
Vo
: Volumen muerto.
AA-STD-18
:18 aminocidos estndar.
pp
: Precipitado.
ANOVA
: Anlisis de varianza.
: Coeficiente de correlacin.
R2
: Coeficiente de determinacin.
ppm
: Partes por milln.
x
s
: Media.
: Desviacin estndar
: Distribucin F de Fisher-Snedecor.
FDN
: Fibra detergente neutra.
DMS
: Digestibilidad de materia seca.
FMN
: Flavina mononucletido
FAD
: Flavina adenina dinucletido
- 11 -
RESUMEN
La produccin de biomasa residual, como consecuencia de las actividades humanas constituye
fuente de energa y materiales desaprovechados con grave peligro para la biosfera y dao a sus recursos
naturales. Dentro de la composicin de residuos slidos, se encuentran en mayor proporcin los de
materia orgnica y dentro de estos se encuentran los residuos producidos por la industria aceitera y de
granos oleosos que se incrementa en estos ltimos aos. El presente trabajo de investigacin realiz un
estudio, farmacognstico, bromatolgico y toxicolgico de los residuos industriales de la extraccin del
aceite de Plukenetia volubilis L. para su aprovechamiento total y contribuir al desarrollo sostenible del
pas. En los resultados del estudio farmacognstico se ha encontrado: esteroides, taninos y saponsidos.
Los valores promedios obtenidos de taninos y saponinas totales en g% de muestra fueron: 1,3 x 10-5 y
0,420.01 respectivamente. En el estudio bromatolgico: humedad, protenas totales, extracto etreo,
fibra bruta,
cenizas, extracto libre de nitrgeno (g%):5,090,06; 34,260,01; 37,332,87; 3,161,08 y
3,240,33 respectivamente. Fibra detergente neutro 16,33. Calcio, fsforo, hierro y tiamina en mg/100g:
317,83; 560,00; 4,19 y 0,31 respectivamente. La digestibilidad de protenas in vitro por nitrgeno soluble
en pepsina y celulasa fue de (g%) : 86,890,33 y 90,711.73. y aminocidos esenciales mg/g: histidina
9,00; isoleucina 180,00; leucina 69,00; lisina 39,00; metionina 13,00; fenilalanina+tirosina 31,00;
treonina 68,00 y valina 31,00. El estudio del ensayo toxicolgico a dosis limite demostr la inocuidad de
los residuos a dosis de 2000 mg/kg
Palabras claves: Plukenetia volubilis L., residuo, taninos, saponinas, anlisis proximal, digestibilidad in
vitro aminocidos, HPLC.
-9-
SUMMARY
The production of residual biomass as a result of human activities, in addition to being a source of energy
and materials almost entirely untapped, it presents a great danger to the biosphere where uncontrolled
discharge or abandonment damages or destroys natural resources. Within the composition of solid waste,
is in the highest proportion of organic matter and within these are the wastes produced by the oil industry
and oil seeds. The industrial production of oil sacha inchi this increase in recent years, therefore, the
production of waste is increasing. This research conducts a survey pharmacognostic, dieticians, and
toxicology of industrial waste from the extraction of oil sacha inchi to be harvested at 100% and thus
contribute to sustainable development of the country. In the study results pharmacognostic were found as
secondary metabolites: steroids, tannins and saponins heterosides. The average values derived from
tannins and saponins in g% of total sample were: 1.3 x 10-5 and 0.42 0.01
respectively. The study
bromatological: Moisture, total protein, ether extract, crude fiber, ash, nitrogen free extract (g %): 5.09
0.06; 34.26 0.01; 37.33 2.87; 3.161.08 and 3.24 0.33 respectively. Neutral detergent fiber, 16.33.
Calcium, phosphorus, iron, thiamine mg/100g: 317, 83; 560, 00; 4, 19 and 0, 31 respectively. In vitro
protein digestibility of
nitrogen soluble in pepsin and cellulase (g%): 86.890.33 and 90.711.73
Essential amino acids mg / g: histidne 9,00; isoleucine 180,00 ; leucine 69,00; lysine 39,00; methionine
13,00; phenylalanine + tyrosine 31,00; threonine 68,00 and valine 31,00. The results demonstrated the
toxicological safety of the aqueous extract fixed dose of 2000 mg / kg.
Keywords: Plukenetia volubilis L., residue, tannins, saponins, proximate analysis, in vitro digestibility,
amino acids, HPLC.
- 10 -
I.
INTRODUCCIN
La gran produccin de residuos que supone la normal actividad del hombre sobre nuestro planeta
es uno de los principales problemas de hoy; ya que, provocan una progresiva degradacin del medio
ambiente.
Las industrias de productos alimenticios y bebidas no son tan contaminantes como otros sectores;
sin embargo, son responsables de contaminar el medio ambiente al descargar efluentes lquidos con
grandes cantidades de sedimento y residuos slidos, por ejemplo, las industrias elaboradoras de aceite
comestible que eliminan fibras, cscaras y residuos resultantes de la extraccin de aceite y grasa.
De acuerdo con el ADEX, PROMPEX y Biocomercio Per, el aceite de sacha inchi y derivados
han presentado una tendencia exportadora, relacionndose directamente a la produccin de residuos.
Plukenetia volubilis L., sacha inchi, es una Euphorbiaceae que comnmente se conoce como man del
monte, sacha man o man del inca. Se encuentra distribuida desde Amrica Central y en el Per se le
encuentra en estado silvestre en diversos lugares de San Martn, Ucayali, Hunuco, Amazonas, Madre de
Dios y Loreto. Crece desde los 100 hasta los 2 000 m.s.n.m. Fue cultivado tambin en la costa peruana en
la poca prehispnica y se han encontrado semillas y representaciones en cermicas (Brack, 1 999).
La primera mencin cientfica de Plukenetia volubilis L., fue hecha en 1980 a consecuencia de
los anlisis de contenido graso y proteico realizados por la Universidad de Cornell en USA, que
demostraron que las semillas de Plukenetia volubilis L., poseen 33% de protenas y de 49% , lo que
conllev a un programa de investigaciones de las bondades del aceite como se describe y en la literatura;
as como, estudios qumicos, bromatolgicos y ensayos clnicos en marcha.
Pascual, G., et al encontraron cidos grasos del aceite crudo de Plukenetia volubilis L.,
destacando el cido linolnico (43,75 %) y el cido linoleico (36,99 %) y cidos grasos saturados como el
cido palmtico (5,61 %). Gorriti, A., et al demostraron la actividad hipolipemiante del aceite de
Plukenetia volubilis L., y no presentar toxicidad a dosis lmite; tambin se ha realizado el estudio clnico
Fase I de un alimento funcional a base de aceite de Plukenetia volubilis L., encontraron que el consumo a
dosis diarias de 400 mg, 600 mg durante 30 das, en voluntarios sanos, no ocasionaron efectos adversos,
ni alteracin de signos vitales, revelando seguridad y tolerancia.
De acuerdo a lo anteriormente referido las investigaciones realizadas, muestran una mayor
atencin a las propiedades del aceite; sin embargo, se ha dejado de lado los residuos de la extraccin del
aceite de Plukenetia volubilis L.
- 12 -
En nuestro pas, en el ao 2000, el Congreso de la Republica promulg en El Peruano la Ley

General de Residuos Slidos, Ley N 27314, para gestionar y manejar los residuos slidos en el Per,
que generan rentabilidad econmica con derivados que puedan ser insertados en las cadenas de
produccin y mercados ya existentes.
La produccin de aceite de sacha inchi genera residuos, que an no han sido estudiados. Por tal
motivo, se ha realizado: El estudio Farmacognstico y Bromatolgico de los residuos industriales de la
extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. (sacha inchi).
El presente trabajo de investigacin tiene como objetivo general:
Aprovechar los residuos industriales de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. (sacha
inchi), mediante el conocimiento integral de esta especie nativa, fomentando el desarrollo econmico
y social sostenible.
Sus objetivos especficos son:
1. Realizar el estudio farmacognstico de los residuos industriales de la extraccin del aceite de

Plukenetia volubilis L. (sacha inchi).
2. Realizar el estudio bromatolgico de los residuos industriales de la extraccin del aceite de
Plukenetia volubilis L. (sacha inchi).
3. Determinar el valor nutritivo a travs de la digestibilidad in vitro y la determinacin de
aminocidos esenciales de los residuos industriales de la extraccin del aceite de
Plukenetia
volubilis L. (sacha inchi).

4. Evaluar la toxicidad aguda oral a dosis limites del extracto acuoso de los residuos industriales de
la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. (sacha inchi).
La presente investigacin se ha realizado gracias al apoyo de la Ctedra de Farmacognsia,

Laboratorio de Bioqumica y Nutricin Animal del Centro de Produccin de la Facultad de Medicina
de Veterinaria de la UNMSM y el Centro de Investigacin de Bioqumica y Nutricin de la Facultad
de Medicina Humana de la UNMSM.
- 13 -
II. GENERALIDADES
2.1. ANTECEDENTES
En la dcada de los ochenta, el gobierno peruano realiz diferentes estudios con el objetivo de
buscar un producto agrario alternativo de gran productividad, que pudiera sustituir las plantaciones de
hoja de coca, para apoyar a la lucha contra la pobreza. (1) Entre estos estudios apareci la investigacin de
Plukenetia volubilis L., hasta la fecha hay un sin nmero de investigaciones sobre esta planta, a
continuacin se presentan las ms relevantes:
Huamn. J., et al
(2)
determinaron que la ingesta de 50g de Plukenetia volubilis L. (sacha inchi)
que contena 11g de omega 3 e ingerido como man disminuy la trigliceridemia posprandial en adultos
jvenes.
Pascual, G., et al
(3)
encontraron cidos grasos del aceite crudo de sacha inchi, destacando el
cido linolnico (43,75 %) y el cido linoleico (36,99 %) y cidos grasos saturados como el cido
palmtico (5,61 %).
Gorriti, A., et al
(4)
encontraron cidos esenciales poliinsaturados (82,21 %), monoinsaturados
(9,62 %) y saturados (7,62%) en el aceite de sacha inchi, destacando: cido linolnico (48,54 %) y el
cido linoleico (36,67 %). Asimismo ha demostrado la actividad hipolipemiante del aceite de sacha inchi,
la cual no produce toxicidad a dosis lmite.
Gorriti, A., et al
(5)
realizaron el estudio clnico Fase I de un alimento funcional a base de aceite
de sacha inchi, encontrando que la aplicacin a dosis diarias de 400 mg, 600 mg durante 30 das, en
voluntarios sanos, no ocasion efectos adversos, ni alteracin de signos vitales.
En el ao 2001, a travs del convenio INIA Agroindustria Amaznica, analiz muestras de
semilla del germoplasma de la estacin experimental El Porvenir en los laboratorios del Instituto
Tecnolgico Pesquero del Per, se encontr 44,24% y 54,21% de contenido de aceite (6).
Benavides, J.; Morales, J.; y Chagman, J.; presentaron los resultados de su investigacin en un
documento titulado: Avances en la caracterizacin del aceite y protenas del cultivo Plukenetia volubilis
L. como alternativa para la alimentacin humana y animal (Yurimaguas Per; Instituto Nacional de
Investigacin Agraria. 1994. 17 h.). Los ecotipos Lamas y Shanao, procedentes de Tarapoto, se
seleccion para este estudio. Los resultados mostraron que el ecotipo Lamas destac en contenido de
aceite 41,7 %, superando en 1,2 % al ecotipo de Shanao, tambin Lamas destac en contenido de
protenas. La calidad del aceite est dada por el alto contenido de cidos grasos insaturados; Lamas y
Shanao arrojaron 91,33 y 88,81% (7).
- 14 -
En el ao de 1995, Vela, L., desarroll la tesis de grado Ensayos para la extraccin y

caracterizacin del aceite de sacha inchi en el departamento de San Martn. (8)
El Instituto Nacional de Produccin, a travs de estudios realizados por Gmez I., Reyna, J.,
Obregn, A., y Vela, L., determinaron que esta oleaginosa silvestre, contiene 48% de grasa , este equipo
determin tambin la calidad de la protena de Plukenetia volubilis L., utilizando polvo atomizado y
harina desengrasada por prensado. (8)
El Instituto de Ciencias de los Alimento de la Universidad de CORNELL,
encontr en
Plukenetia volubilis L., un elevado contenido de aceite (49%), un contenido relativamente alto de
protenas (33%) y
alto grado de digestibilidad
(9)
Tabla 1. Composicin de la torta desengrasada de Plukenetia volubilis L.
Fuente: Extraccin y caracterizacin de Plukenetia volubilis L. Pascual G. 1992
- 15 -
2.1. ESTUDIO FARMACOGNSTICO
2.1.1. DATOS ETNOBOTNICOS Y ETNOFARMACOLGICOS

2.1.1.1. Datos etnobotnicos
La familia Euphorbiaceae comprende plantas anuales, de importancia ornamental, medicinal,
alimentaria e industrial, que se caracterizan por la presencia de una sustancia lechosa, tipo ltex y frutos
tricapsulares. Abarca alrededor de 1280 gneros con 8000 especies aproximadamente, y se observa que
est distribuido en todo el orbe (10).
Plukenetia volubilis L., es una planta nativa de la Amazona Peruana descrita por primera vez,
como especie, en el ao 1753 por el Naturalista Linneo; de ah su nombre cientfico. Crece desde los 100
msnm hasta 1500 msnm. Es un arbusto trepador o rastrero comnmente se le encuentra en bordes de
bosques secundarios (purmas), en caaverales, sobre cercos vivos y como maleza en platanales y cultivos
permanentes
(12)
. Se cultiv en la costa peruana desde la poca prehispnica y se han encontrado
semillas y representaciones de su fruto en cermicas de las culturas Chim y Mochica. Actualmente se

estudia la presencia de esta planta en la milenaria cultura Caral, al norte de Lima-Per, con ms de 3000
aos de antigedad (13).
2.1.1.2. Uso etnofarmacolgico

En las reas rurales de San Martn los pobladores utilizan la almendra de Plukenetia volubilis L.,
en su alimentacin, ya sea cocida o tostada en la preparacin de diversos platos como inchicapi, aj de
sacha inchi, cutacho, mantequilla de sacha inchi, inchi cucho, tamal de sacha inchi, turrn de sacha inchi,
ingesta de hojas crudas o cocidas por los pobladores nativos de la Amazona, particularmente los huitotos
, por considerar sus semillas muy nutritivas (10-12).
Las ancianas mayurunas, chayuhuitas, campas, huitotas, shipibas, yaguas y boras (pueblos
indgenas de la amazona peruana) mezclan el aceite de Plukenetia volubilis L. con harina de esta misma
almendra y preparan una crema especial para revitalizar y rejuvenecer la piel (Especies vegetales
promisorias de los pases del Convenio Andrs Bello, 1992) (14).
- 16 -
Tabla 2. Uso etnofarmacolgico de Plukenetia volubilis L.
Nombres vulgares, sacha inchi, sacha inchic, sacha man, man del inca, man del monte,inca pennut
Profesional
Familiar
Hierbero
Raz
Tallo
Hojas
Flores
Semilla
Planta entera
Recomendaciones de uso, el sabor ligeramente amargo ("patco") de la almendra cruda desaparece
durante el cocido, el tostado.
Otras Disminuye el colesterol malo
Cuidados ninguno
Origen biolgico Plukenetia volubilis L.
Familia Euphorbiaceae
Familia
Nombre
cientfico
Nombre
Vulgar
Dolencias
Euphorbiaceae
Plukenetia
volubilis L.
sacha inchi
Hipercolesterolemia
Estrategia
De
Obtencin
Recoleccin
Lugar de
Obtencin
Campos
2.1.2. HBITAT Y RECOLECCIN

El gnero Plukenetia ha sido reportado en Malasia, Nueva Guinea, Borneo, Mxico, etc.
(Biblioteca Conmemorativa Orton, 1987). El nmero de especies reportadas en Amrica Tropical vara de
7 a 12 (Stanley y Steyemark, 1949; Hutchinson, 1969). En Amrica del Sur, la presencia de Plukenetia
volubilis L., ha sido registrada en Bolivia y en la Amazona Peruana en los departamentos de Madre de
Dios, Hunuco, Oxapampa y San Martn (15).
Tabla 3. Hbitat y recoleccin de Plukenetia volubilis L.
Suelo
Amplia adaptacin a diferentes tipos de suelo; crece en suelos cidos (pH por
debajo de 5.5) y con alta concentracin de aluminio. Franco arcillosos y arenosos
(pH 5.5 a 6.5)
Clima
Temperatura
Altitud
Hbitat
Hmedo
Mnimo 10 C, mximo 36C.
Crece desde los 100 msnm en la Selva Baja y 2 000 msnm en la Selva Alta.
Bosque tropical
Edad
Estacin
Entre los 6.5 y 8.0 meses despus del trasplante, cuando los frutos estn secos,
recogindose las cpsulas manualmente cada 15 30 das.
Invierno
- 17 -
2.1.3. PROTOCOLO BOTNICO

2.1.3.1.Ubicacin taxonmica
La clasificacin botnica de la planta es la siguiente. (12,16)
Reino
Vegetal
Divisin :
Magnoliophyta
Clase
Magnoliopsida
Orden
Euphorbiales
Familia :
Euphorbiaceae
Gnero :
Plukenetia
Especie :
Plukenetia volubilis Linneo.
Ecotipo :
Pinto Recodo
La especie Plukenetia volubilis L., es conocida de acuerdo al idioma o lugar con los siguientes
nombres: Sacha inchi , mani estrella, mani inca, mani de monte, mani de bejuco, cacahuate inca, Ngart,
Inca peanut, supua, amui-o, sacha yuchi, sacha yuchiqui,sampannankii,suwaa.Debido a la alta
variabilidad gentica se tienen los siguientes ecotipos: Pinto Recodo, Tambo Yaguas, Muyuy, Cumbaza,
Lamas, Shanao y Ro Putumayo (10).
2.1.3.2. Descripcin morfolgica

Es una planta trepadora, voluble, semileosa, de altura indeterminada de hojas alternas, de color
verde oscuro, oval - elpticas, aseruladas y pinnitinervias, de 09 16 cm de largo y 06 10 cm.
ancho. El pice es puntiagudo y la base es plana o semi-arrionada; las flores presenta un alto
porcentaje de polinizacin cruzada, lo que implica es una especie algama. En el sacha inchi se
observan 2 tipos de flores: las masculinas son pequeas, blanquecinas, dispuestas en racimos y las
femeninas se encuentran en la base del racimo y ubicadas lateralmente de una a dos flores; el fruto es
una cpsula, de 3,5 a 4,5 cm. de dimetro, con 4 lbulos aristados (tetralobados) dentro de los cuales
se encuentran 4 semillas y las semilla son ovaladas marrn oscuro, ligeramente abultadas en el
centro y aplastadas hacia el borde. Segn los ecotipos, el dimetro flucta entre 1,3 y 2,1 cm. y de 48
a 100 g de peso. En condiciones de medio ambiente y al aire libre, la semilla se conserva por ms de
un ao (15).
- 18 -
Figura 1. A la izquierda, plantaciones de sacha inchi en la amazona peruana. A la derecha, fruto y

semilla de Plukenetia volubilis L.
2.2. ESTUDIO BROMATOLGICO
2.2.1.
VALOR NUTRITIVO
El valor nutritivo de los alimentos est determinado por la biodisponibilidad de nutrientes y la
dinmica de los procesos de solubilizacin e hidrlisis en el tracto gastro-intestinal.

La utilizacin neta de la protena, de leguminosa, en monogstricos est en torno al 65 70% en
animales en crecimiento, mientras que los valores observados con protenas de origen animal suelen
superar el 90%. Esto se debe principalmente a tres causas: el perfil de aminocidos de la protena del
grano leguminoso, su digestibilidad, y la presencia de sustancias no nutritivas (17).
Para valorar el empleo de leguminosas grano en la alimentacin de rumiantes, es necesario
conocer las caractersticas de estas semillas como fuente de protena, su degradabilidad y digestibilidad,
as como su efecto sobre la produccin y composicin de la leche.
- 19 -
2.2.1.1. Digestibilidad
La composicin qumica de un alimento es solamente un indicativo del contenido de nutrientes,
pero no de su biodisponibilidad; entonces, si una fuente de protena ha sido procesada inadecuadamente,
no puede ser bien digerida por el animal y contribuir muy poco a su crecimiento y a la produccin.
La digestibilidad se define como el porcentaje de un nutriente que desaparece a su paso por el
tracto gastrointestinal. Es la proporcin de alimento ingerido que no aparece en las heces. Se expresa en
porcentaje (%).
A medida que aumenta el contenido de pared celular y principalmente el de lignina, disminuye el
% de protena bruta del forraje. A medida que aumenta la madurez, disminuye su contenido de protenas
y de azcares solubles, y se eleva el contenido de fibra (principalmente celulosa y lignina). (18)
Los mtodos para medir la digestibilidad de los nutrientes, implica el empleo de animales, pero
resultan costosos en cuanto a tiempo, mano de obra calificada y nmero de anlisis qumicos.
Generalmente se utilizan mtodos qumicos para la determinacin de digestibilidad.
Los mtodos qumicos consisten en exponer los alimentos a la accin de enzimas digestivas
como la pepsina, la celulasa y lquido rumial, incubandose las muestras durante cierto periodo bajo
condiciones controladas. (19)
Tabla 4. Digestibilidad en diferentes muestras mezcla/proporciones en %

Mezcla
Quinua
Kiwicha
Frijol
Quinua
Caihua
Haba
Kiwicha
Arroz
Tarwi
Kiwicha
Tarwi
Caihua
Caseina
Proporcin %
61
19
20
75
15
10
56
44
47
51
51
49
PER* corregido
2.59
Digestibilidad aparente
79.39
2.36
79.20
2.48
80.60
1.35
82.03
1.34
83.77
2.50
Fuente: Reupo Carrasco, 1992. *Relacin de eficiencia de protena.
- 20 -
2.2.2. CALIDAD DE PROTENAS

El anlisis de las protenas es de gran importancia para determinar el valor nutritivo de los
alimentos. La calidad de una protena esta definida por la cantidad y proporcin de aminocidos para
satisfacer las necesidades nutricionales
(20)
En general, el contenido de aminocidos esenciales en los alimentos es un buen indicador de la

calidad de una protena, particularmente si la digestibilidad es alta, por lo tanto; si se conoce el contenido
de aminocidos esenciales de un alimento y se comparan con un patrn de referencia, se puede calcular
su calidad respecto a cada aminocido. El contenido de aminocidos esenciales de un producto es
corregido con respecto al contenido de protena y luego es comparado con el porcentaje de aminocidos
de la protena de referencia, otorgndole as puntuacin a cada aminocido. Los aminocidos esenciales
son: metionina, cistena, lisina, treonina, valina, isoleucina, leucina, fenilalanina, tirosina y triptfano (21).
2.2.3. ANLISIS DE AMINOCIDOS

La mayora de procedimientos para el anlisis de aminocidos dependen del uso de mtodos
cromatogrficos, en especial la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), que constituye una
tcnica cuantitativa, rpida y altamente sensible, capaz de producir una buena resolucin de compuestos
qumicamente similares, por ejemplo, aminocidos y vitaminas. Esta tcnica emplea columnas con
dimetro de 2-5 mm, empacadas con partculas muy pequeas (3-10 ) y fases mviles cuyo flujo se
controla de manera muy precisa. El nico inconveniente de esta tcnica se debe a la preparacin de
derivados antes o despus de la separacin cromatogrfica; ya que, por s solos los aminocidos no son
detectados fcilmente por UV o fluorescencia (21,22).
Tabla 5. Puntaje qumico de algunos alimentos

Alimentos
PQ %
100
100
100
97
84
82
81
74
73
63
60
55
44
Leche
Huevo
Carne de res
Protena aislada de soya
Frijol rojo
Arveja
Garbanzo
Frijol negro
Arroz
Avena
Lentejas
Haba
Trigo
Fuente:
Torum,
B.
et.
al.
1996.
Recomendaciones
dietticas
diarias
del
INCAP.
Aniversario.INCAP/OPS.Guatemala.
- 21 -
Edicin
45
Tabla 6. Las protenas y aminocidos de la semilla de Plukenetia volubilis L. versus

diferentes semillas y patrones recomendados por la FAO/WHO/ONU
PROTEINAS
Y
AMINOCIDOS
PROTEINAS (1)
SEMILLAS (2)
Sacha
Inchi
27
AMINOCIDOS
ESENCIALES
Histidina
26
Isoleucina
50
Leucina
64
Lisina
43
Metionina
12
Cistena
25
Metionina + cistena
37
Fenilalanina
24
Tirosina
55
Fenilalanina+tirosina
79
Treonina
43
Triptofano
29
Valina
40
AMINOCIDOS NO ESENCIALES
Alanina
36
Arginina
55
Asparagina
111
Glutamina
133
Glicina
118
Prolina
48
Serina
64
TEAA*
411
TAA**
976
TEAA (% de TAA)
42
(3) Patrones
FAO/WHO/ONU
Soya
Man
Algodn
Girasol
28
23
23
24
-.-
25
45
78
54
13
13
26
49
31
80
39
13
48
24
34
64
35
12
13
25
50
39
89
26
10
42
27
33
59
44
13
16
29
52
29
81
33
13
46
23
43
64
36
15
15
34
15
19
54
37
14
51
19
28
66
58
-.-.25
-.-.53
34
11
35
43
72
117
187
42
55
51
418
985
42
39
112
114
183
56
44
48
349
945
37
41
112
94
200
42
38
44
365
936
39
42
80
93
218
54
45
43
366
941
39
-.-.-.-.-.-.-.-.-.-.-
Fuente: Hamaker et al. 1992. Universidad de Arkansas, USA*TEAA= Aminocidos esenciales totales
**TAA= Total de aminocidos
1.
Los valores estn indicados en mg/g de protenas
2.
Valores para soya, man, algodn y girasol (Bodwel y Hopkins (1985) )
3.
Niveles recomendados para nios en edad pre-escolar (2-5 aos). La recomendacin para la
evaluacin de la calidad de la dieta proteica para todos los grupos, a excepcin de infantes
(Expertos FAO/WHO 1990).
- 22 -
2.2.3.1. Cromatografa lquida de alta resolucin de fase reversa

La cromatografa de intercambio inico es el mtodo de anlisis de aminocidos ms utilizados;
sin embargo, si el anlisis no se lleva a cabo de manera rutinaria, los altos costos hacen que la
cromatografa de fase reversa sea el mtodo de eleccin (23,24).
En la cromatografa de fase reversa, la fase estacionaria es menos polar que la fase mvil y se
utilizan fundamentalmente dos tipos de fases estacionarias: partculas esfricas de poliestireno y
divinilbenceno, unidos por enlaces cruzados; y el tipo ms comn lo constituyen partculas de slice
recubiertas por grupos no
polares orgnicos
como CH3, -C8H7 y C18H37. De stas, las fases
estacionarias de octadecilsilano (denominados ODS o C18) son las ms populares y con menor frecuencia
se utilizan las C8. La particin de los componentes de la muestra depender de sus respectivas
caractersticas de solubilidad. Los componentes menos hidrofbicos se asociaran primariamente con la fase
hidroflica, mientras que los componentes ms hidrofbicos se encontrarn en la fase lipoflica (23).
En cuanto a las fases mviles empleadas en la separacin de la fase reversa, los disolventes poco
polares son eluyentes ms poderosos y se presentan en gran variedad. La fase mvil puede ser considerada
como una solucin acuosa de un disolvente orgnico, el tipo y concentracin determinarn su poder
extractor. Algunos solventes orgnicos usados comnmente para la hidrofbicidad son metanol, propanol,
acetonitrilo y tetrahidrofurano. La eleccin del componente orgnico depende de su selectividad para
separar ciertos pares de aminocidos y por la forma en que su presencia influye en la presin de la columna.
Los cambios en el disolvente producen desplazamientos entre el equilibrio en las fases mviles y
estacionarias (24).
La separacin cromatogrfica se puede mejorar pasando de una elucin isocrtica (pasa un nico
eluyente) a una elucin en gradiente; esta ltima se consigue mezclando dos o ms eluyentes diferentes de
manera que la composicin de la fase mvil cambie con el tiempo (25). Dependiendo del poder extractor del
eluyente, una menor o mayor parte del componente de la muestra ser retenido reversiblemente por la fase
estacionaria. Los compuestos hidroflicos se movern siempre ms rpido, ya que la fase mvil es siempre
ms hidroflica que la fase estacionaria.
- 23 -
2.2.3.2. Mtodos de derivatizacin para la separacin cromatogrfica de aminocidos

La mayora de los aminocidos no derivatizados, no contienen cromforos adecuados para su
deteccin, excepto a longitudes de ondas muy cortas por ejemplo a 200nm, como hay muchos compuestos
que se absorben a esta longitud de onda, pueden presentarse muchas interferencias; por lo tanto, los
aminocidos tienen que convertirse en derivados adecuados antes o despus de la separacin
cromatogrfica. Los procedimientos de derivatizacin se dividen en postcolumna y precolumna (26).
La derivatizacin postcolumna involucra los siguientes pasos: separacin de los aminocidos en la
columna cromatogrfica, introduccin de un reactivo de derivatizacin en el sistema de efluente de la
columna; paso de los lquidos combinados a travs de un colector mezclador seguido por una espiral de
reaccin (debe calentarse) y finalmente bombeo de los aminocidos derivatizados a travs de un sistema de
deteccin . La separacin se lleva a cabo mediante cromatografa de intercambio inico
En la derivatizacin precolumna la mezcla de aminocidos reaccionan con el agente de
derivatizacin antes de que los aminocidos sean separados. Las tcnicas difieren principalmente en las
condiciones de reaccin (temperatura, tiempo, separacin del reactivo, estabilidad de los derivados, y
mtodo de deteccin). Una de las desventajas de esta tcnica es que una porcin sustancial de todos los
derivados ser idntica (la parte del reactivo de derivatizacin). Las pequeas diferencias entre las cadenas
laterales de los aminocidos derivatizados tendrn un efecto menor en el comportamiento cromatogrfico
de los aminocidos. La derivatizacin precolumna elimina la necesidad de utilizar reactores postcolumna
costosos, y los derivados hidrofbicos de los aminocidos pueden se separados rpida y eficientemente con
columnas de fase reversa. Estos sistemas, acoplados con detectores sensibles, permite la deteccin de
aminocidos presentes en concentracin picomolar.
Aunque la derivatizacin precolumna ofrece las ventajas mencionadas, no se ha podido desplazar
completamente a los mtodos postcolumna tradicionales; para la aplicacin del anlisis de aminocidos de
manera rutinaria, por lo que el agente de derivatizacin precolumna debe satisfacer los siguientes
requerimientos:
1) Debe reaccionar rpidamente bajo condiciones moderadas para obtener rendimientos cuantitativos
del derivado.
2) Debe reaccionar tanto con aminocidos primarios como secundarios.
3) Los derivados deben ser estables por varios das, de preferencia a temperatura ambiente para
permitir el anlisis automatizado de varias muestras.
4) No debe haber interferencia del reactivo, productos de rupturas o reacciones secundarias.
5) Debe presentar respuesta lineal a los intervalos de concentracin tpicos de la mayora de las
aplicaciones.
6) Los derivados deben poseer factores de respuesta molar razonablemente similares.
- 24 -
Se han investigado diferentes reactivos de derivatizacin precolumna, pero ninguno ha podido

alcanzar una aceptacin universal debido a que no cumplen con uno o mas de los requerimientos
mencionados anteriormente para esta tcnica. (27)
Tabla 7. Reactivos de derivatizacin

REACTIVOS
Ninhidrina
OPA
Fluorescamina
PITC
Cloruro de dansilo
Cloruro de dabsilo
FMOC-Cl
NBD-Cl
NBD-F
Complejos Mtodo de
con:
separacin
1os
CIC o
electroforsis
os
1
CFR (en postcolumna,CIC)
1os
CIC o
electroforsis
os
os
1 y2
CFR
1os y 2os
CFR
os
os
1 y2
CFR
1os y 2os
CFR
os
os
1 y2
CFR
1os y 2os
CFR
Post- o precolumna
Post-
Deteccin
Pre- y post-
Fluorescencia
Post-
Fluorescencia
PrePrePrePrePre- y postPre- y post-
UV 240-255 nm
Fluorescencia
VIS
Fluorescencia
Fluorescencia
Fluorescencia
VIS 570 nm
Fuente: Quattrocchi, A; Abelaira, S; Laba, R. Introduccin a la HPLC.
2.2.3.3. Reactivos de derivatizacin de precolumna

2.2.3.3.1. Ortoftaladehido (OPA)
Es el reactivo de derivatizacin ms comnmente usado en la cromatografa de fase reversa. La
reaccin entre el OPA y los aminocidos primarios tienen lugar en presencia del grupo tiol como el del 2mercaptoetanol o etanodiol para formar derivados altamente fluorescentes. La ventajas que presenta este
mtodo de derivatizacin es que la reaccin se lleva a cabo rpidamente (1 minuto a temperatura ambiente),
midiendo la emisin a longitudes de onda superior a 430nm .
No es necesario remover el exceso de OPA antes de la inyeccin de la muestra ya que OPA por s
no interfiere con la separacin o la deteccin. Sin embargo; los derivados de OPA- aminocidos, son
inestables.
El OPA no reacciona con aminocidos secundarios. Esta desventaja puede solucionarse mediante
la adicin de
cloroformato.
un segundo reactivo de derivatizacin,
utilizandose
comnmente 9- Fluorenilmetil
(23, 26)
- 25 -
Figura 2. Reaccin de los aminocidos con opa.mce=mercaptoetanol.

Fuente: Development and evaluation of an HPLC method for the analysis of carotenoids in foods Chemistry.1995;
54:101-111. Hart, D.; Sccott, J.
2.2.3.3.2. Fenilisotiocianato (PICT)

El fenilisotiocianato ha sido utilizado por ms de 30 aos en la degradacin de Edman para
secuenciar pptidos y protenas. El PICT reacciona con los aminocidos libres para dar
feniltiocabamilaminocidos. Con este mtodo se puede cuantificar aminocidos secundarios como la
prolina y la hidroxiprolina, as como, los productos de oxidacin de la metionina y cistena, metionina
sulfato y cido cisteico, respectivamente . Bajo condiciones moderadas, la reaccin es prcticamente
completa entre los 5 a 10 minutos; ya que el reactivo es voltil, se puede usar en exceso y eliminarlo
fcilmente bajo presin reducida en un rotavapor
(50)
. Aunque, no es tan sensible como algunos reactivos
fluorescentes, sus derivados pueden cuantificarse en niveles picomolares en la regin ultravioleta a 254 nm.
Estos derivados pueden ser estables hasta por cuatro semanas a 20C (23,26).
Figura 3. Reaccin de derivatizacin de los aminocidos con PICT

54:101-111. Hart, D.; Sccott, J.
- 26 -
2.2.3.3.3. Fluorenilmetil cloroformato (FMOC-Cl)

Otro reactivo fluorescente de derivatizacin precolumna es el FMOC-Cl. Originalmente se us
como un reactivo protector del grupo amino durante la sntesis de pptidos. Reaccionan rpidamente con
todos los aminocidos a temperatura ambiente, pero ms lentamente que el OPA. Los derivados son
estables y pueden almacenarse por varios das en el refrigerador (26).
2.2.3.3.4. Cloruro de dansilo

El cloruro de dansilo es un reactivo de derivatizacin fluorognico para la determinacin de aminas
secundarias y primarias. La dansilacin ha sido ampliamente utilizada como un mtodo para determinar
aminocidos. Los aminocido dansilados son altamente fluorescentes (excitacin: 360nm-emisin: 470nm),
siendo posible detectarlos en la regin ultravioleta (250nm). Los niveles de deteccin caen dentro del
intervalo picomolar (26).
Figura 4. A la izquierda muestra la reaccin de derivatizacin de aminocidos con FMOC-CL. A la

derecha, estructura del cloruro de dansilo
54:101-111. Hart, D.; Sccott, J.
2.3. FIBRA DIETTICA

La fibra diettica o fibra alimentaria es un conjunto de componentes, procedentes de las paredes de
las clulas vegetales (celulosa, hemicelulosa, lignina y otras), que no son hidrolizables por las secreciones
endgenas del aparato digestivo humano.
Dentro de la fibra alimentaria podemos distinguir una parte que puede ser fermentada por la flora
bacteriana del intestino, que se conoce como fibra soluble, y el resto no fermentable, que se denomina fibra
insoluble.
- 27 -
2.3.1.
INTERS DE LA FIBRA DIETTICA

La fibra insoluble circula por el intestino delgado sin ser digerida, por lo que llega ms o menos
intacta al colon y ejerce efecto laxante.

La fibra soluble se degrada parcialmente por la flora del colon y libera cidos de cadena corta que
pueden ser parcialmente absorbidos y metabolizados. Los principales cidos producidos por fermentacin
de la fibra soluble son: cido butrico, cido propinico y cido actico. La acidez que producen dificulta el
crecimiento de microorganismos patgenos y tienen un efecto antiinflamatorio, con una accin protectora
frente a la colitis ulcerosa.
La fibra consumida en cantidades adecuadas presenta una serie de ventajas sobre el trnsito
gastrointestinal, que repercute directa en la prevencin y evolucin de ciertas patologas tal y como se
indica en la tabla N 8.
Un exceso de fibra en la dieta puede causar trastornos como: problemas de malabsorcin de
nutrientes y un trnsito excesivamente rpido de las heces. La ingesta de fibra recomendada diaria es de 30
40g/da.(18)
Tabla 8. Beneficio de la fibra soluble e insoluble en la salud
Efecto
Sensacin de saciedad
Debido a
Fibra soluble
Beneficio sobre:
Obesidad
Fibra insoluble
Modifica volumen de heces
Fibra soluble
Estreimiento
Modifica consistencia de heces
Fibra insoluble
Diverticulosis
Disminuye el tiempo de trnsito intestinal
Megacolon
Facilita la excrecin
Cncer de colon
Disminuye la absorcin del colesterol
Fibra soluble
Disminuye la absorcin de cidos biliares
Aterosclerosis
Trastornos cardiovasculares
Facilita su eliminacin fecal

Disminuye la absorcin de glcidos
Fibra soluble
Diabetes
Fibra soluble
Proteccin frente a infecciones

bacterianas
Retrasa la absorcin de glucosa

Disminuye el ndice de glucemia
Mantenimiento y desarrollo de la flora
bacteriana
Fuente: Kuklinski, C. 2003.Nutricin y Bromatologa. pg 23.
- 28 -
Tabla 9. Clasificacin de la fibra segn grado de fermentabilidad.
Gomas
Muclagos
FIBRA ALIMENTARIA
Fibra soluble
Pectinas
Fermentable por una parte de

la flora microbiana intestinal
dando cidos grasos de cadena
corta
Inulina
No digerible
Celulosa
Fibra insoluble
Hemicelulosa
Lignina
No digerible
No fermentable
No absorbible
Fuente: Kuklinski, C. 2003.Nutricin y Bromatologa.
2.4. POTENCIAL INDUSTRIAL

El cultivo de Plukenetia volubilis L., significa un gran potencial para el sector agrario y de la
industria nacional, pero el mundo todava no conoce de sus virtudes; sin embargo, una somera proyeccin
tendra como mira atender el mercado japons y europeo que demandan 200 toneladas de aceite al ao.
La Ley N 11367 2004 ha declarado a Plukenetia volubilis L. como patrimonio gentico nacional
y producto alternativo de la pobreza. En el artculo 107 de la Constitucin Poltica del Per y en
concordancia con el artculo 75 del Reglamento del Congreso propone al Congreso de la Repblica lo
siguiente: se declar al sacha inchi como un importante recurso gentico y un valioso aporte de nuestra
amazona peruana a la humanidad por sus cualidades nutraceticas, alimenticias, cosmticas y otras
(8)
La especie vegetal Plukenetia volubilis L. , es considerada por el Programa Amaznico Regional

de Biocomercio, PROMPEX y Consejo Nacional de Ambiente CONAM para aplicacin industrial con
gran potencial dentro del grupo de ingredientes naturals, cosmticos y alimenticios
- 29 -
(28)
Luego de la extraccin del aceite queda una torta con alto valor nutritivo que puede sustituir a la
torta de la soya que es importada en cantidades apreciables para la crianza de monogstricos en la amazona
peruana (29).
En la Universidad de San Martn en Tarapoto, se est realizando investigaciones para cultivar
Plukenetia volubilis L., y evaluar su uso como suplemento en la alimentacin de aves de corral (29).
Plukenetia volubilis L., puede ser consumido tradicionalmente y convertido en harinas, pepin,
ocopa, tamales, mazamorra, juanes e inchicapi (8).
El Programa de Nutricin y la Agencia Adventista de Desarrollo y Recursos Asistenciales

(ADRA), han preparado un recetario popular para su consumo directo e inform que el producto residual de
la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L., se est promoviendo para ser consumida en la dieta de
37,000 familias de nueve departamentos con altos porcentajes de desnutricin
(8)
. E n base a la elevada
cantidad de protenas de los residuos de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L., se estn
realizando concentrados proteicos de harina desengrasada para lactantes (19). En la Universidad San Ignacio
de Loyola, en el ao 2006, se ha realizado la elaboracin, produccin y caracterizacin de mantequilla de
Plukenetia volubilis L (30).
2.4.1.
EL MERCADO DE SACHA INCHI

Mercedes Ins Carazo, Coordinadora Nacional de la Red de Centros de Innovacin Tecnolgica
(CITES), ha sealado que el mercado externo para plantas alimenticias, medicinales y cosmticas es
grande, pero que la oferta no cubre la demanda actual, asimismo, la demanda mundial de estos productos ha
venido creciendo y se estima que seguir creciendo en los prximos aos. Antonio Brack sostena: "La
demanda de los productos naturales en los pases del primer mundo crece entre 15 y 20% anualmente (8,31).
Aunque, las comunidades indgenas de las selvas amaznicas utilizan Plukenetia volubilis L. desde
tiempos milenarios, la industrializacin y comercializacin de este producto es reciente, lo que se debe a la
difusin de nuevos estudios que destacan su alto contenido de Omega 3 y Omega 6, protenas y
antioxidantes (32).
- 30 -
Siembra
Cosecha
Reunin
de
semillas
envioo
Envo a Lima
05.Seleccin y
descascarado
de semilla
06. Prensado de
Residuo
aceite
07. Filtrado de aceite

Aceite
Figura 5. Proceso de extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L. , y obtencin del residuo

Fuente: Prensado en frio .Katherine Roco Chacn Bringas.USMP
- 31 -
El aceite de Plukenetia volubilis L., no tiene partida arancelaria especfica. Los flujos de comercio
se registran bajo la partida 33.01.29.90.00 cuya descripcin corresponde a los dems
esenciales
aceites
(33)
Figura 6: Exportaciones de productos naturales (1996-2010)

Fuente: ADEX
2.4.1.1. Comercio internacional

Las perspectivas del aceite de Plukenetia volubilis L., en el mercado internacional son favorables
gracias a las tendencias del mercado en el campo de la salud y de la nutricin. Una prueba de esto es el
premio que recibi en los aos 2004 y 2006 como el mejor aceite del mundo en el World Ethnic &
Specialty Food Show que se celebra anualmente en Pars (34).
El reconocimiento que se da a Plukenetia volubilis L., en el mercado internacional ha logrado que
el gobierno peruano proyecte invertir en la ampliacin de la produccin, industrializacin y
comercializacin en conjunto con el sector privado; crendose el proyecto Omega que vincula asociaciones
de productores, empresas y entidades estatales de investigacin en torno a este aceite esencial. Este
proyecto incluye la produccin de aceite de Plukenetia volubilis L., ecolgico. (32, 34).
- 32 -
Otras iniciativas llevadas a cabo en Per a favor del aceite de Plukenetia volubilis y sus
subproductos son el registro de la marca inca inchi en los mercados en los que se comercializa actualmente
(Japn, Europa y Estados Unidos) y la gestin de la patente de la semilla en los mercados
internacionales (33).
2.4.1.2. Comercio nacional

De acuerdo con ADEX (Asociacin de Exportadores del Per) entre enero y septiembre del 2005,
Per export aceite de Plukenetia volubilis L., por un valor aproximado de trece mil dlares. Los
principales destinos fueron Francia, 92%; Italia, 6% y Japn, 2%. (35)
En los ltimos aos, el Per ha presentado una creciente tendencia exportadora
americanos, tabla N 10 y figura N 7
(32)
en dlares
Tabla 10. Exportacin de productos naturales en dlares americanos
Producto
2005
Yacn
Maca
Sacha inchi
Camu camu
2006
101,948
3 600,000
25,194
906,000
221,456
3 700,000
113,255
2 100,000
Fuente: Superintendencia Nacional de Administracin Tributaria
- 33 -
2007
229,023
4 017,000
422,559
5 000,000
Figura 7: Evolucin de las exportaciones de Plukenetia volubilis l. y derivados

Fuente
: Superintendencia Nacional de Administracin Tributaria
Elaboracin
2.4.2.
: Biocomercio Per / PROMPEX
RESIDUOS
Es cualquier objeto material, elemento slido, lquido o gaseoso; resultado del consumo o uso de un
bien en actividades domsticas, industriales, comerciales o institucionales, que el generador abandona,

rechaza y que es susceptible de aprovechamiento o transformacin en un nuevo bien, con valor econmico
o disposicin final (36).
Generacin de residuos
slidos a nivel nacional
(2007)
30,061 Ton/da*
19,3%
80,7%
Disposicin final en
rellenos sanitarios
adecuados
5,802 Ton/da
Resto
(Botaderos, ros, mar y lagos, reciclaje
informal, chancheras
24,259 Ton/da
Figura 8: Estimacin de residuos basada en el total de poblacin del pas

Fuente: Ministerio Del Ambiente, 2008
- 34 -
Disposicin en rellenos
sanitarios
Disposicin en botaderos
controlados
Reciclaje
Vertido al ambiente
Figura 9. Disposicin final de residuos slidos

Fuente: Encuesta Nacional de la evaluacin regional de los servicios de manejo de los residuos, 2002
Materia orgnica
Material reciclable
controlados
Material no reciclable
Figura 10. Composicin de los residuos slidos

- 35 -
Tabla 11. Composicin de residuos slidos municipales
Ton/dia
Papel
6.49
842.81
Cartn
0.97
125.97
Plsticos
4.30
558.41
Vidrios
3.39
440.23
Metales ferrosos
2.20
285.70
Metales no ferrosoos
0.16
20.78
Textiles y trapos
1.56
202.58
Cueros y caucho
0.30
38.96
Maderas
0.93
120.77
Otros
25.20
3272.53
Orgnicos
54.50
7077.49
100.00
12986.23
Fuente de Residuos orgnicos

1.
2.
3.
4.
5.
Actividad agropecuaria
Actividad agroindustrial
Industria lctea
Industria frigorifica
Industria de cereales
6. Industria aceitera y de granos

oleosos
7.
8.
9.
10.
Industria de la pesca
Industria forestal
Resduos slidos urbanos
Resduos slidos domicilirios
2.4.2.1. Normatividad y gestin de residuos slidos en el Per (37)

Ley General de Residuos slidos, Ley N 27314
Reglamento de la Ley General de residuos slidos, D.S. N057-2004-PCM
NTP 900.058-GESTION AMBIENTAL. Gestin de Residuos.
Ordenanza 295-2001/MML.Sistema Metropolitano de Gestin de Residuos slidos.
2.4.2.2. Manejo de residuos slidos en el Per

La Ley General de residuos slidos Ley N 27314-, en el Ttulo III, captulo I, artculo 14;
establece las operaciones para un adecuado manejo de residuos slidos en virtud a lo establecido en la
normatividad nacional para evitar los riesgos que causan a la salud y el ambiente, y estas son (37):
1. Minimizacin de residuos
2. Segregacin en la fuente
3. Reaprovechamiento
4. Almacenamiento
5. Recoleccin
- 36 -
6. Comercializacin
7. Transporte
8. Tratamiento
9. Transferencia
10. Disposicin final
Si bien las industrias de productos alimenticios y bebidas no contaminan tanto como otros sectores(,
tambin han sido responsables de la contaminacin del aire y del agua al despedir polvos y olores
desagradables en la atmsfera, descargar efluentes lquidos con un elevado contenido orgnico y generar
grandes cantidades de sedimentos y residuos slidos; por ejemplo, algunas empresas dedicadas a la
produccin de fcula de patata producen anualmente entre 100,000 y 250,000 m3 de almidn. En el sector
de la conservacin y elaboracin de hortalizas, se puede desechar hasta un tercio del volumen total de
materias primas. La elaboracin de aceite comestible genera cantidades considerables de residuos slidos y
lquidos, tales como fibras, cscaras y residuos resultantes de la extraccin de aceites y grasas (38,39).
En respuesta a la aplicacin de una reglamentacin ms estricta del medio ambiente por muchas
comunidades, varias fbricas de productos alimenticios y bebidas han instalado aparatos modernos para el
tratamiento de la biomasa residual. Los desechos vegetales que solan verterse en el ocano se utilizan
ahora como alimento para animales, aunque esta actitud no se considere nueva tecnologa (39).
Las empresas japonesas que tratan el residuo de la extraccin de aceite, transforman los residuos
slidos en diversos fertilizantes orgnicos y naturales para la jardinera. Esto no slo ha reducido el
volumen de desechos generados sino que tambin ha permitido que las empresas desarrollen actividades en
un nuevo sector, generando rentabilidad. (39,40)
2.4.2.3. Residuos de acuerdo a la extraccin de aceite

Durante el proceso de extraccin de aceites se generan subproductos como harinas, expeller,
cascarillas, gomas, lecitina que son ampliamente utilizados para la industria en general, la alimentacin
humana y animal.
Se entiende por subproductos oleaginosos, a los residuos slidos resultantes de la extraccin
industrial del aceite de granos oleaginosos, obtenidos por presin y/o disolvente, provenientes de la
elaboracin de mercadera normal, sin el agregado de cuerpos extraos ni aglutinantes.
En funcin del proceso de industrializacin que se somete a la materia prima, se ha establecido para
la comercializacin de estos insumos la siguiente clasificacin:
- 37 -
a) Expellers: residuos de elaboracin por prensa continua.

b) Harina de extraccin: residuos de la elaboracin por disolvente y salvo estipulacin especial no se
diferencian por su granulacin, pudiendo ser: fina, en grumos, aglomerados o pedazos, segn los distintos
sistemas de extraccin y secado.
c) Pellets: comprimidos (cilindros) provenientes de los residuos de la extraccin del aceite de los granos
oleaginosos definidos anteriormente. El largo y el dimetro de los comprimidos podrn ser de cualquier
medida, salvo estipulaciones expresas en el boleto de compra-venta.
La referencia a expeller significa material de extraccin por prensado, harina es el material
obtenido por solvente y pellets se denomina a la forma fsica (comprimidos) de presentacin de estos
subproductos (41).
En el Per la principal forma de extraccin de aceites se realiza combinando presin-solvente (PS), debe considerarse que cuando se habla de pellets (los cilindros compactos de largo y dimetros
variables) pueden fabricarse tanto a partir de expeller como de harinas o la combinacin presin-solvente.
2.4.2.4. Efecto de la temperatura en la calidad de los residuos

La composicin qumica y el valor nutritivo de estos residuos industriales son muy variables. El
mtodo industrial utilizado para la extraccin de aceite, junto a la calidad de la materia prima de origen
representan las fuentes de variacin ms importantes. Es fundamental el correcto control de la temperatura
durante el proceso de manufactura porque la falta de coccin puede causar serios problemas de salud y
desempeo de los animales (monogstricos y rumiantes muy jvenes); sin embargo, los excesos de calor
tambin pueden daar la calidad de las protenas. Si las temperaturas son excesivamente altas y aplicadas
por tiempos muy prolongados las protenas cambian su configuracin; ya que, el exceso de calor conduce a
la formacin de productos indigeribles, a travs de la conocida reaccin de Maillard. La reaccin de
Maillard constituye un proceso no-enzimtico de caramelizacin, donde los residuos de los azcares se
condensan con ciertos aminocidos, seguido de una polimerizacin, para formar una sustancia de color
marrn que posee muchas de las caractersticas qumicas de la lignina (18).
- 38 -
2.5. DESARROLLO SOSTENIBLE

De acuerdo William Hughes, el desarrollo sostenible implica que el ser humano es el centro de
todo desarrollo, promoviendo una vida saludable y productiva en armona con la naturaleza
(42)
. Este
concepto sugiere la bsqueda de la satisfaccin de las necesidades actuales no comprometan la capacidad

de que las generaciones futuras tambin puedan lograrlo, incluyendo de esta manera, al medio ambiente. El
desarrollo sostenible es un concepto que se ha venido desarrollando en las ltimas dcadas. Implica el
manejo integrado de los recursos naturales mediante la aplicacin de polticas eficientes que permitan un
balance entre el desarrollo y la conservacin tomando en cuenta las necesidades de las generaciones
presentes y futuras.La importancia y trascendencia que tiene el manejo sostenido de los recursos naturales,
as como la preservacin de la biodiversidad; pero sobre todo, la necesidad de buscar tecnologas limpias,
polticas adecuadas y permitir la activa participacin de los pobladores locales para lograr el desarrollo
sostenible en el Per, brindando bienestar y una mejor calidad de vida a largo plazo.
Existen cuatro hiptesis que se pudieran esbozar sobre la correlacin del desarrollo humano y los
factores ambientales, a saber segn Mallela V. Prez Palomino (43):
La contaminacin ambiental incide negativamente en el desarrollo humano,
Un proceso productivo que degrade el ambiente convierte el desarrollo humano en no sostenible,
El ambiente contaminado perjudica la vida vegetal y animal del planeta; y a la postre,
La degradacin de los ecosistemas implicar una variable negativa del desarrollo.
La base legal en el Per para el desarrollo sotenible constituye(44)

1. Ley Orgnica del Sector de Agricultura, D. Ley N 25902
2. Ley N 26821 Ley Orgnica para el Aprovechamiento sostenible de los recursos naturales.
3. Ley N 26834 Ley de reas naturales protegidas
- 39 -
III. PARTE EXPERIMENTAL

3.1. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
MATERIALES
Bureta
Crisoles de porcelana
Crucibles para ceniza
Dedales celulsicos de extraccin.
Desecador.
Portadedales de vidrio.
Tubos de digestibilidad 20 x 2.5 cm.
Capilares.
Cromatofolio Merck Silicagel 60 F254.
Embudos.
Fiolas de 25,50,100 mL.
Frascos de vidrio.
Matraz 250 ml.
Papel Whatman N 1.
Papel picrosado.
Pera de decantacin.
Pipetas 1, 2, 5, 10 mL.
Probetas de 50 mL.
Bolsa de dilisis.
Columna gel Sephadex G- 25
Hilo dental
Tubos eppendorff.
Cnula intragstrica.
Jaulas de acero inoxidable
Jeringas y agujas
Vasos de extraccin Goldsfich
MATERIAL BIOLGICO
20 ratas albinas Sprangue Dawley
- 40 -
EQUIPOS
Agitador magntico.
Balanza analtica marca OHAUS Pioner.
Bomba de vacio.
Cocinilla elctrica.
Colector de fracciones marca LKB BROMMA 7000 ULTROPAC.
Columna para HPLC de fase reversa Octadecilo (C18) MERCK.
Cromatografia lquida de alta performance (HPLC) marca WWR
HITACHI- EZChrom Elite.
Equipo Macro Kjheldahl SISTEMA TECATOR.
Equipo para digestin con calentadores individuales y condensadores.
Espectrofotmetro UV- visible marca CARY 50 CONC eQUIPO.
Estufa con aire circulante marca MEMMERT.
Extractor tipo Goldsfich.de 6 unidades.
Lmpara de luz ultravioleta 365nm.
Liofilizador marca VIRTIS.
Microcentrfuga EPPENDORF.
Mufla de incineracin DERIVER INSTRUMENT COMPANY.
Reacti-Therm marca PIERCE.
Rotavapor rotatorio marca BUCHI modelo R-205 con BM 60C.
REACTIVOS
a) Solventes:
Acetato de amonio SIGMA Chemical co.
Acetona Merck.
Acetonitrilo grado HPLC SIGMA Chemical co.
cido clorhdrico 10% Colman.
cido clorhdrico concentrado Colman.
cido fosfomolibdico hidratado Merck.
cido sulfrico concentrado Colman.
Cloroformo Colman.
Etanol de 96
ter de petrleo Colman.
- 41 -
ter dietlico anhidro Q.P. Merck

Hidrxido de amonio Merck.
Metanol Q.P. Merck
N-Butanol Colman.
N-Hexano Colman.
Trietilamina Q.P. SIGMA Chemical co.
b) Reactivos :
cido clorhdrico 6N Colman.
cido sulfrico 0.1 N Colman.
cido sulfrico al 1.25%.
Asbesto preparado SIGMA Chemical co.
cido clorhdrico 6N SIGMA Chemical co.
cido fosfrico SIGMA Chemical co.
Agua destilada, bidestilada.
Buffer Tris HCl 50 Mm pH 6.5 SIGMA Chemical co.
Catalizador.
Fenilisotiocianato (PICT) SIGMA Chemical co.
Fenol SIGMA Chemical co.
Fosfato monopotsico Q.P. SIGMA Chemical co.
Hidrxido de sodio al 1.25% SIGMA Chemical co.
Indicador Tashsiro.
Molibdato de amonio SIGMA Chemical co.
Piridina SIGMA Chemical co.
Solucin Buffer acetato 0.1 M.
Solucin de cido brico 3%.
Solucin Detergente Neutro (FDN).
Standard de aminocidos SIGMA Chemical co.
Sulfato de amonio SIGMA Chemical co.
- 42 -
c) Reactivos cromgenos:
cido Tnico St. Colman.
Alcohol amlico Colman.
Caoln SIGMA.
Carbonato de sodio Merck.
Cloruro de cobalto Colman.
Cloruro de sodio Merck.
Fehling A.
Fehling B.
Gelatina 25%.
Hidrxido de potasio Merck.
Hidrxido de sodio Merck.
Magnesio metlico.
Ninhidrina.
Reactivo de Baljet.
Reactivo de Dragendorf.
Reactivo de Keller-Killiani.
Reactivo de Mayer.
Reactivo de Molish.
Saponina St. Merck.
Solucin tricloruro ferrico 5%.
Tungstato de sodio dihidratado Merck.
ENZIMAS:
Celulasa del hongo Penicilliun funicullosum E.C. 3.2.1.4.
SIGMA
chemical co.
Pepsina N.F. XII (The proteolytic enzime obtainid from the glandular layer
of fresh hig stomach standardized according to the method giver in the
National formulary 12 th edition. DIFCO Laboratories. Detroit- Michigan.
USA.
- 43 -
3.2.
METODOLOGA
3.2.1.
OBTENCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA
Los residuos de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L., sacha inchi pertenecientes al
ecotipo Pinto Recodo de la provincia de Tarapoto del departamento de San Martn y clasificados como
residuos tipo expeller fueron proporcionados por la Ctedra de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia
y Bioqumica de la UNMSM en septiembre del 2007.1
Los residuos de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L., se encontraban distribuidos en

14 bolsas de polietileno hermticamente cerradas con un peso promedio de cada bolsa de 2 Kg. con
600g, present las siguientes caractersticas al realizar el muestreo: polvo heterogneo, color crema, olor
sui generis y sabor amargo astringente. Se procedi a tomar una muestra representativa (200g), aleatoria,
homognea y en cantidad suficiente con la ayuda de una cuchara medidora (20g).
La muestra se tamiz y se sec en estufa a 40 C durante 72 horas. Luego se envas en frascos

hermticos de vidrio mbar, rotulndose (nombre y fecha) y se almacen en refrigeracin.
3.2.2. ESTUDIO FARMACOGNSTICO

3.2.2.1.
Anlisis cualitativo
El residuo seco (30g) se someti a extracciones sucesivas, figura N11. A cada extracto (etreo,
alcohlico y acuoso) se determin su concentracin (g/mL), se tom una alcuota de 5mL, se evapor a
sequedad en bao de agua en una placa petri tarada y se pes (45-47).
Posteriormente a cada extracto, se procedi con la marcha fitoqumica de acuerdo a las figuras
N 12, 13 y 14.
1 Obtenidos del estudio de investigacin: Caracterizacin qumica, farmacolgica y toxicolgica del aceite de
sacha inchi destinada al mercado de productos funcionales. Esta investigacin la hicieron la UNMSM en
convenio con la Empresa Agro negocios PERUAGRO SRL.2007
- 44 -
Residuo de la extraccin de aceite de

Plukenetia volubilis L.
Muestreo
ESTUDIO
FARMACOGNSTICO
ESTUDIO
BROMATOLGICO
Anlisis Proximal
Screening
fitoqumico
Cuantificacin
de taninos
Cuantificacin
de saponinas
ESTUDIO
TOXICOLGICO
Ensayo a dosis
limite
Digestibilidad
enzimtica
Determinacin de
vitaminas y
minerales
Determinacin de
aminocidos
Figura 11. Diagrama de flujo del estudio de toxicidad realizado a los residuos de la extraccin de
aceite de Plukenetia volubilis L. (sacha inchi)
- 45 -
30g de RESIDUO
Extraer con 90 mL DE TER ETLICO Y MACER

DURANTE 48 h
EXTRACTO ETREO
RESIDUO SLIDO
EXTRAER CON ETANOL EN

UNA PROPORCIN DE 1:3 Y
MACER DURANTE 48 h
EXTRACTO
ALCOHLICO
RESIDUO SLIDO
EXTAER CON AGUA EN UNA

PROPORCIN DE 1:3 Y MACER
DURANTE 48 h
RESIDUO SLIDO
EXTRACTO ACUOSO
Figura 12. Extraccin sucesiva del residuo de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L.
para la marcha fitoqumica
- 46 -
EXTRACTO ETREO
FRACCIONES
1mL
Ensayo de HAUCHERCORNE
ACEITE Y GRASAS
1mL
Ensayo de BALJET
LACTONAS Y CUMARINAS
1mL
Ensayo de LIEBERMAN BUCHARD
TRITERPENOIDES - ESTEROIDES
4 mL (dividir en 4 porciones)
Ensayos de DRAGENDORFF, MAYER,
BOUCHARDART, SONNENSCHEIN
ALCALOIDES
Figura 13. Marcha fitoqumica del extracto etreo
1mL
1mL
1mL
Ensayo de
LIEBERMAN BUCHARD
Ensayo de BORNTRAGER
Ensayo de CATEQUINA
TRITERPENOIDES -
QUINONAS
1mL
1mL
Ensayo de FEHLING
Ensayo de KELLER KILIANI
AZCARES REDUCTORES
HETEROSIDOS CARDIOTONICOS
1mL
Ensayo de FeCl3
FENOLES - TANINOS
EXTRACTO ALCOHLICO
FRACCIONES
1mL
Ensayos de DRAGENDORFF, MAYER,
BOUCHARDART, SONNENSCHEIN
1mL
1mL
ALCALOIDES
Ensayo de NINHIDRINA
Ensayo de
AMINOCIDOS
ANTOCIANIDIN
A
1mL
1mL
Ensayo de SHINODA
FFFLLLAAAVVVOOONNNOOOIIIDDDEEESSS
1mL
Ensayo de BALJET
Ensayo de ESPUMA
LACTONA
SAPONINAS
Figura 14. Marcha fitoqumica del extracto alcohlico
- 47 -
EXTRACTO ACUOSO
FRACCIONES
1mL
Ensayo de CLORURO
FERRICO
TANINOS
1mL
Ensayo de
SHINODA
FLAVONOIDES
Ensayos de DRAGENDORFF,
MAYER, BOUCHARDART,
SONNENSCHEIN ALCALOIDES
1mL
Ensayo de
ESPUMA
SAPONINAS
1mL
Ensayo de
FEHLING
AZ. REDUCTORES
1mL
Ensayo de MUCILAGOS
Figura 15. Marcha fitoqumica del extracto acuoso
3.2.2.1.1. Anlisis Cromatogrfico

Mtodo: Cromatografa en capa fina
Fundamento:
Se fundamenta
en los fenmenos fsicos de adsorcin, siempre hay un soporte slido
microporoso al que se adsorben las sustancias, acumulndose en el extremo superior. Los distintos
componentes pueden ser separados haciendo pasar disolvente puro a travs del mismo. De este modo, las
sustancias retenidas descienden lentamente y se separan ms entre s (48-50).
Procedimiento:
Se utiliz cromatofolios con silicagel 60F
254,
en el cual se aplica el extracto hidroalcohlico, utilizando
capilares nuevos; posteriormente colocados en cmaras de separacin cromatogrfica, previamente

saturada con los sistemas de solventes:
Para taninos:
1-Butanol: cido Actico: Agua (4:1:5)
Para saponinas:
Cloroformo: Acetato de etilo (9:1)
- 48 -
3.2.2.2. Cuantificacin de taninos

Mtodo: analtico para la cuantificacin de taninos en el extracto acuoso de romerillo (51).
Fundamento:
El mtodo se basa en la reaccin de los compuestos fenlicos con el reactivo de Folin (tungstato
fosfomolbdico; carbonato de sodio 20%) el cual produce un complejo de color azul, cuya extensin es
medida a 700nm, determinndose el contenido total de fenoles.
Posteriormente se utiliz una solucin de gelatina al 25% para garantizar el secuestro de los
taninos, obtenindose de la diferencia de ambas determinaciones el porcentaje de taninos reportados
como cido tnico (50,51).
3.2.2.2.1. Diseo experimental

El mtodo consta de 2 etapas: la etapa (A) donde se cuantifican los polifenoles totales en el
extracto acuoso de los residuos de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L., y la etapa (B) donde
se cuantifican los polifenoles residuales despus del secuestro de los taninos con gelatina (51).
Solucin tungstato-fosfomolbdico
Se disolvi 10 g de tungstato de sodio dihidratado, 0.2 g de cido fosfomolbdico hidratado y
5.0 mL de cido fosfrico al 85% en 75 mL de agua desionizada. La solucin se refluj por 2 horas (hasta
aparicin de color amarillo; no verde, ni azul) y se complet con agua desionizada a 100 mL.
Ensayo A: cuantificacin de polifenoles totales
Se midi y transfiri 4mL de extracto a un matraz aforado de 250 mL, diluyendo con agua
desionizada hasta enrase. De la solucin anterior se tomaron porciones de 1, 2, 3, 4 y 5 mL y se llev a
matraces aforados de 25 mL; a cada matraz, se agreg 2 mL de solucin tungstato- fosfomolbdico, se
agit y se dej reposar durante 5 minutos. Luego se aadi 1mL de solucin de carbonato de sodio al
20%, se agit, enras con agua desionizada y homogeniz. Se lee la absorbancia de las soluciones a
700nm despus de transcurridos 2 minutos de la reaccin.
Ensayo B: cuantificacin de polifenoles residuales
Se midi y trasfiri 20 mL del extracto a un matraz aforado de 250 mL con tapa, luego se
adicion 60 mL de agua desionizada, 50 mL de solucin de gelatina al 25%, 100 mL de solucin saturada
de cloruro de sodio acidificado y 10 g de caoln y luego enrasado con agua desionizada. Se tap y agit
durante 1 hora, posteriormente se filtr.
- 49 -
Del filtrado se tom y transfiri 10 mL a un matraz aforado de 50 mL completado con agua

desionizada. Luego se tom y llev 1, 2, 3,4 y 5 mL a matraces aforados de 25 mL; a un matraz, se
agreg 2 mL de solucin de tungstato- fosfomolbdico, se agit y se dej reposar durante 5 minutos.
Luego se aadi 1 mL de solucin de carbonato de sodio al 20% se agit, enras con agua desionizada y
homogeniz. Se ley la absorbancia de las soluciones a 700 nm despus de transcurridos 2 minutos de la
reaccin.
Sustancia de referencia
Se pes 25 mg de cido tnico, se transfiri a un matraz aforado de 100 mL y se complet el
volumen con agua desionizada. Posteriormente se midi y trasnfiri 20 mL a un matraz aforado de 100
mL enrasando con agua desionizada. De la solucin anterior se transfiri 1,2,4,6,8,10 y 12 mL a matraces
aforados de 25 mL a cada matraz, se agreg 2 mL de solucin tungstato-fosfomolbdico, se agit y se
dej reposar durante 5 minutos. Luego se aadi 1 mL de solucin de carbonato de sodio al 20%, se
agit, enras y homogeniz. Se ley la absorbancia de las soluciones a 700 nm despus de transcurridos
2 minutos de la reaccin.
Blanco (Mtodo A)
Se aadi 1, 2, 3, 4 y 5 mL de agua desionizada a matraces aforados de 25 mL; a cada matraz,
se agreg 2 mL de solucin tungstato-fosfomolbdico, se agit y se dej reposar durante 5 minutos.
Luego se aadi 1 mL de solucin de carbonato de sodio al 20%, se agit, enras y homogeniz. Se ley
la absorbancia de las soluciones a 700 nm despus de transcurridos 2 minutos de la reaccin.
Blanco (Mtodo B)
Se adicion 80 mL de agua desionizada, 50 mL de solucin de gelatina al 25%, 100 mL de
solucin saturada de cloruro de sodio acidificada y 10 g de caoln, y enras con agua en un matraz
aforado de 250 mL con tapa. Se tap y agit durante 1 hora, se dej reposar para posteriormente filtrar.
Del filtrado se tom y se transfiri 10 mL a un matraz aforado de 50 mL, , luego se tom y llev 1, 2, 3, 4
y 5 mL a matraces aforados de 25 mL; a cada matraz, se agreg 2 mL de solucin tungstatofosfomolbdico, se agit y se dej reposar por 5 minutos, Luego se aadi 1 mL de solucin de carbonato
de sodio al 20%,se agit, enras y homogeniz. Se ley la absorbancia de las soluciones a 700 nm
despus de transcurridos 2 minutos de la reaccin
- 50 -
3.2.2.3. Cuantificacin de saponinas totales

Mtodo: metodologia de cuantificacin espectrofotomtrica de las saponinas de pfaffia glomerata
(Spreng) Pedersen Amaranthaceae (52).
Fundamento:
El cido sulfrico concentrado produce la hidrlisis de los hetersidos saponnicos, los cuales
reaccionaran con el cloruro de cobalto. La reaccin da una coloracin rosada tenue, cuya extensin es
medida a 280nm, determinndose el contenido total de saponinas.
3.2.3. ESTUDIO BROMATOLGICO
3.2.3.1. Estudio qumico proximal

Se realiz el anlisis proximal empleando, las tcnicas estandarizadas del Laboratorio de
Bioqumica, Nutricin y Alimentacin Animal de la Facultad de Medicina Veterinaria de la UNMSM
(Arbaiza, 1997) (53).
1. Determinacin de la humedad
Mtodo
: gravimtrico (A.OA.C. 1997) (54)
Fundamento
: se basa en la perdida de humedad de la muestra, por volatilizacin, a causa del calor,
cuando es sometida a una temperatura de 60 C.
2. Determinacin de extracto etreo

Mtodo
: Goldsfich (A.OA.C. 1997) (54)
Fundamento
: el ter se evapora y condensa continuamente y al pasar a travs de la muestra se extrae
los materiales solubles en el solvente orgnico.
3. Fibra
3.1. Determinacin de fibra cruda
Mtodo
: hidrlisis cida y bsica (A.OA.C. 1997) (54)
Fundamento
: se basa en la digestin cida-alcalina por accin del cido sulfrico y el hidrxido de
sodio diluido a ebullicin, para obtener luego de la incineracin la fibra cruda.
- 51 -
200 mg de
RESIDUO DE LA EXTRACCIN DE ACEITE DE SACHA INCHI
Se desengras con 30 ml de hexano por dos

horas
RESIDUO
El residuo fue sometido a extraccin por
reflujo con tres alcuotas por 1 1/2 hora cada
una de 20mL de metanol agua (4:1)
EXTRACTO METANOLICO
La fraccin metanlica se concentr en

rotavapor a 600mbar, 50 rpm, a un bao
mara de 40 C y a temperatura ambiente de
23C
EXTRAER CON TRES PORCIONES DE 60mL DE

1-BUTANOL SATURADA CON AGUA (1:2), por 72 horas
REACCIN DE IDENTIFICACIN
CCF
CUANTIFICICACIN DE SAPONINAS
TOTALES
Se tom 60 ml de la fraccin butanlica y se

concentr en rotavapor.
El extracto se disolvi en 25 ml. Se tom 5ml y

se transfiri a una fiola de 25ml.
Se aadi 1mL de cloruro de cobalto y 1mL de

H2SO4 y se enras a 25ml.
Efectuar la lectura a los 20 min. de la reaccin, a
una longitud de onda de 284nm.
Patrn de saponina: 1mg/mL.

Se prepar 6 concentraciones: 0.08; 0,12; 0,16;
0.20; 0.28 y 0,32mg/ml en fiolas de 25mL.
Figura 16. Procedimiento de extraccin, identificacin y cuantificacin de saponinas totales
- 52 -
3.1. Fibra detergente neutro

Mtodo
: Van Soest (A.OA.C. 1997) (54)
Fundamento
: se basa en la ruptura de la pared celular de las clulas vegetales usando como
detergentes la solucin de sulfato lauril sdico en un pH neutro.
La porcin de muestra de alimento insoluble en un detergente neutro est bsicamente

compuesta por celulosa, hemicelulosa, lignina y slice, y se la denomina pared celular. La misma se
correlaciona inversamente con el consumo voluntario de materia seca (18).
RESIDUO
EXTRACTO TEREO
Lpidos
DIGESTIN CIDA
Sustancias solubles en cido
Residuos insolubles en cido

DIGESTIN ALCALINA
Sustancias solubles en lcali
Residuos insolubles en lcali

INCINERACIN
RES. INSOL. EN CIDO Y ALCALI CENIZAS INSOL. = FIBRA CRUDA
Figura 16. Determinacin de fibra cruda

Fuente: Protocolo de Prcticas de Laboratorio de Bioqumica y Nutricin Animal. Teresa Arbaiza Fernndez. 2007
- 53 -
Se pes 0.5g de residuo + 100 mL de sol.

detergente neutro
Ebullicin por 60 min. en condensador con

refrigerante
Se filtr (papel filtro sin ceniza) y Lav con

agua caliente. Se lav los residuos indigeribles
con 3mL de acetona
Se report el
porcentaje de
pared celular
Se sec los papeles filtro por 24 horas a una

temperatura 60. Se coloc al desecador por
60min. y se pes
Se pes y coloco en un crisol tarado. Se

inciner por 3 horas a una temperatura de700C
Se estim el
material soluble
por sustraccin de
100
(Contenido celular)
Se deseco el crisol y pes
FDN
Figura 17. Determinacin de fibra detergente neutro
4.
Determinacin de protenas
4.1. Nitrgeno total.

Mtodo
: Kjeldhal. (A.OA.C. 1997) (54).
Fundamento
: se produce la digestin de protenas con cido sulfrico y catalizadores para convertir
el nitrgeno orgnico en iones amonio, estos son desplazados por un lcali y recepcionado en un cido de
concentracin conocida. Se valora el cido recepcionado. El resultado final es el N contenido en la
muestra.
Determinacin de ceniza (54)
5.
Mtodo
: calcinacin e incineracin simple (A.O.A.C. 1997) (54,55).
Fundamento
: se produce la oxidacin de la materia orgnica mediante carbonizacin e incineracin,
dando lugar a la formacin de xidos y sales minerales.
- 54 -
Tabla 12. Composicin de los principios inmediatos del anlisis de Weende.
Aminocidos no
indispensables
semiindispensables
NITROGENADOS
indispensables
ORGNICOS
FOSFOLIPDIOS
onina, fenilalanina,treonina,
leucina,isoleucina
Aminas
NO PROTENAS
LIPIDOS
ina,tirosina,prolina
Lisina,triptofano,valina,meti
Aminocidos
NEUTROS
rtico,serina
Arginina,glicina,histidina,cist
Aminocidos
PROTENAS
Ac.glutmico,alanina,ac.aspa
cidos nucleicos
Acilgliceridos
Trigliceridos
Esterides
Colesterol,Vit D.
Terpenoides
Caroteno, Vit A
Fosfogliceridos
Lecitina
Esfingolipidos
Esfingomielina
Tiamina,rivoflavina,niacina,
EXTRACTO
Vitaminas
vit.B6,cido
hidrosolubles
pantotnico,biotina,vit.B12,
LIBRE DE
CARBOHIDRATOS
cido ascrbico.
NITROGENO
FIBRA BRUTA
Monosacridos
Pentosa o hexosas simples,
Polisacridos
azcares compuestos,
(soluble)
almidones
Polisacridos
Celulosa
(insoluble)
Hemicelulosa
Ca,Mg,Na,K,P,Cl,S.
Elementos MACRO
Mn,I,Cu,Fe,Zn,Co,Mo,Se,
INORGNICOS
Elementos MICRO
Cr,Sn,F,Ni,V,Si.
As,Ba, Br,Cd,F,Pb,Hg,Sr.
Elementos
CENIZAS
POSIBLEMENTE ESENCIALES
Elementos
Cu, Mo,Se, As, Cd,
POTENCIALMENTE TOXICOS
F,Pb,Hg,Si.
Elementos Esenciales
Al,Sb,Bi,B,Ge,Au,PB,Hg,
Ag, Ti
Fuente: Protocolo de prcticas de Laboratorio de Bioqumica y Nutricin Animal. Teresa Arbaiza Fernndez. 2007.
- 55 -
6.
Determinacin de extracto libre de nitrgeno
Mtodo
: Matemtico (A.OA.C. 1997) (54,55)
Fundamento
: Se obtiene por diferencia al restar al total 100% la suma de los 5 macronutrientes
restantes (protenas, fibra cruda, extracto etreo, cenizas y humedad.).
3.2.3.2. Determinacin de minerales y oligoelementos.

La determinacin de calcio, hierro fue realizado en CERPER, Certificaciones del Per S.A.
Mtodo
: se realiz mediante el mtodo Absorcin Atmica (56).
Fundamento
: se basa en la disociacin del elemento de inters en la muestra utilizando lmparas de
ctodo hueco, estas lmparas emiten solo el espectro del elemento buscado. La absorcin es selectiva y se
produce a una determinada longitud de onda, dependiendo nicamente del agente absorbente y siguiendo
la Ley de Lambert y Beer.
El procedimiento para la determinacin de Calcio y hierro es como sigue a continuacin:
3.2.3.2.1.
Determinacin de calcio
Despus de la incineracin de la muestra se diluy con cido ntrico y cido clorhdrico, luego se
atomiz con llama de xido nitroso-acetileno y se agreg a cada muestra 200ppm de cloruro de potasio
como regulador de ionizacin. Se midi la absorcin a una longitud de onda de 422 nm
(56)
3.2.3.2.2.
Determinacin de hierro
Para determinar los elementos inorgnicos, entre ellos el hierro, se inciner la muestra en seco y
se disolvi en cido ntrico y cido clorhdrico. La muestra que contena hierro en solucin se atomiz
en una flama de aire-acetileno y se midi la absorcin a una longitud de onda de 248 nm (56).
- 56 -
3.2.3.2.3.
Determinacin de fsforo
Mtodo
: Espectrofotomtrico con molibdovanadato (A.O.A.C. 1997) (60,61).
Fundamento
: se basa en la reduccin del molibdovanadato de amonio a fosfomolbdovanadato de
amonio obtenindose un intenso color azul y cuya intensidad es leda a 400nm
3.2.3.3. Determinacin de vitaminas
Mtodo
: fluoromtrico (56)
Fundamento
: el fundamento del mtodo reside en la excitacin del tomo por una energa
electromagntica, que hace que los e- del tomo la absorban cambiando de capa, y al volver a su lugar, el
tomo vuelve a estado de reposo produciendo una energa luminosa. La intensidad de la energa
electromagntica que produce la materia es proporcional a la concentracin del tomo que medimos.
La determinacin de tiamina, riboflavina y niacina fue realizado en la Sociedad de

Asesoramiento Tcnico S.A.C. (SAT) por el mtodo fluoromtrico y la determinacin de niacina se
realiz por el mtodo colorimtrico.
3.2.3.3.1.
Determinacin de tiamina
A partir del tiocromo formado por la oxidacin de la tiamina con ferricianuro de potasio en
solucin acuosa de hidrxido de sodio (54,56).
3.2.3.3.2.
Determinacin de riboflavina
La medida total de riboflavina se di despus de la hidrlisis acida de FMN y FAD; completada

con cido clorhdrico 0.1 N. Las protenas son removidas a pH 4.5. Para destruir la interferencia de
sustancias fluorescentes se acidific con cido actico glacial y oxidado con exceso de KMnO4 al 3%.
Para eliminar el exceso KMnO4 se aadi H2O2 al 3% gota a gota. El KMnO4 se agreg para
asegurar que toda la vitamina presente se encuentre en la forma oxidada fluorescente. Las forma oxidada
presenta fluorescencia amarillo verdosa con picos mximos de absorcin a 220 - 225, 266, 371, 444 y 475
nm. La riboflavina se reduci reversiblemente a leucobase (un dihidro compuesto que no presenta
fluorescencia) por el hidrgeno, Na2S2O4 y SnCl2, para corregir la fluorescencia que queda despus de las
permanganato oxidaciones para reducir los pigmentos extraos o sustancias fluorescentes interferentes
(54,56)
- 57 -
3.2.3.3.3.
Determinacin de niacina
Mtodo
: colorimtrico (56).
Fundamento
: el anillo piridinico del cido nicotnico liberado por hidrlisis, se abre con bromuro de
ciangeno, el producto de la escisin reacciona con el cido sulfanlico quien proporciona el colorante
amarillo de polimitina. La lectura se realiza a una longitud de onda de 436nm.
3.2.3.4. Digestibilidad de protenas in vitro

Los estudios de digestibilidad demandan tiempo por lo cual se han hecho numerosos intentos para
reproducir en el laboratorio las reacciones que tienen lugar en el tracto digestivo del animal, por este
motivo, se realiz la digestibilidad de las protenas mediante las tcnicas multienzimticas, ataque in vitro
con pepsina y cido clorhdrico (53-55).
3.2.3.4.1.
Digestibilidad enzimtica por pepsina
Mtodo
: pepsina y cido clorhdrico (55).
Fundamento
: se basa en la propiedad que tienen las protenas de hidrolizarse y solubilizarse
utilizando enzimas proteolticas en condiciones controladas.
3.2.3.4.2.
Digestibilidad enzimtica por celulasa
Mtodo
: enzimtico por celulasa y pepsina (53,55).
Fundamento
: la solubilidad de la pared celular no lignificada y lignificada moderadamente por
accin de la celulasa y remocin de los componentes solubles (contenido celular) con pepsina y cido
clorhdrico.
3.2.3.5. Determinacin de aminocidos por HPLC de fase reversa

Mtodo
: Heinrikson, R.L. and Meredith, S.C, modificado por Monteghirfo,M., y Arnao,I.(57-60)
Fundamento
: la protena purificada despus de someterse a hidrlisis es desecada y derivatizada
(reaccin qumica del aminocido con el fenilisotiocianato). Los feniltiocarbamilaminocidos formados

de la derivatizacin se separan por HPLC de fase reversa.
- 58 -
Los feniltiocarbamilaminocidos menos hidrofbicos se asociaran primariamente con la fase

hidroflica (eluyendo primero), mientras los feniltiocarbamilaminocido ms hidrofbicos se encontrarn
en la fase lipoflica (mayor retencin).
3.2.3.5.1.
Preparacin de los residuos para la determinacin de aminocidos
Se emple (50 g) residuos de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L. desecados y

desengrasados con ter de petrleo en proporcin de 1:3 durante 4 horas por un periodo de tres das con
ayuda de un agitador magntico a velocidad constante . La muestra desengrasada se tamiz y almacen
en refrigeracin.
Para determinar la mejor solubilidad de los residuos desengrasados y tamizados con la finalidad
de elegir el solvente que extrajera mejor las protenas se prepar concentraciones al 20 y 30% en suero
fisiolgico, agua bidestilada y tris HCL.Para y se emple el mtodo de Lowry, por ser un mtodo
sencillo para estimar las protenas totales.
3.2.3.5.2.
Determinacin de protenas
Mtodo
: Lowry (61)
Fundamento
: El principio de este mtodo consiste en la reaccin de las protenas con el reactivo de
Folin Ciocalteau que forma un complejo coloreado azul. El color se debe a la reaccin del cobre del
reactivo en medio alcalino con la protena y la reduccin del fosfomolibdato por la tirosina y el triptfano
presentes en la protena.
3.2.3.5.3.
Extraccin de protenas
Mtodo
: cromatogrfico de exclusin por tamao o filtracin en gel (61)
Fundamento
: consiste en la separacin de las protenas en funcin de su tamao. Las protenas
mayores se desplazan ms rpidamente que las de menor tamao y siguen una ruta ms directa a travs
de la columna, eluyendo ms rpidamente. Las ms pequeas penetran en los poros y son retardadas por
la ruta laberntica que describen a travs de la columna.
- 59 -
3.2.3.5.4.
Separacin de los PICT-aa por HPLC en fase reversa.
Previamente a la separacin de los PICT-aa se realiz la hidrlisis de la protena (figura 20) y la

derivatizacin de los aminocidos (figura 21) .
La separacin de los PICT-aa se realiz en un sistema de HPLC marca HITACHI, modelo La
Chrom Elite que consiste en un sistema de control de EZChorm-Elite con tres bombas, se emple dos
solventes (tabla 13) y un detector de longitud fijado a 254nm.
Para la separacin se utiliz una columna de fase reversa Octadecilo (C18) MERCK de 25 cm
de longitud a una temperatura circulante de 52C y el flujo fue de 1,0mL.min-1.
Tabla 13. Condiciones de separacin de los PICT-aa

Solvente
Solvente A
Acetato de amonio
0.05 M pH 6
Tiempo
Solvente B
0
15
Acetato de amonio 0.1 M
30
pH 6 en acetonitrilo,
34
metanol y agua
37
(44:10:46)
40
50
Detector de longitud de onda de 254 nm.
Temperatura 52C
Flujo 1 mL /min
- 60 -
%A
%B
100
85
50
0
0
100
100
0
15
50
100
100
0
0
EXTRACCIN Y PURIFICACIN DE LA PROTENA

SOLUBLE
PREPARACIN DE
LA MUESTRA Y
DETERMINACIN
DE PROTENAS
Se desengras (50 g) residuos de la extraccin de aceite de

Plukenetia volubilis L., con ter de petrleo en una proporcin
1:3 durante 4 horas por un periodo de tres das con ayuda de un
agitador magntico a una velocidad constante (0,5).
La muestra desengrasada se tamiz con una malla N 200 y

almacen en refrigeracin hasta antes de su uso.
Se emple para la prueba de solubilidad tres disolventes: suero

fisiolgico, agua bidestilada, TRIS HCl 50mM a pH 6,5 y se
determin la protena con Lowry
Se prepar extractos al 20 y 30% de residuo de Plukenetia

volubilis L., con TRIS HCl 50mM a pH 6,5
EXTRACCIN DE
LA PROTENA
SOLUBLE
Se aadi 2 mL del extracto a la columna cromatogrfica de

exclusin por tamao con gel Sephadex , G-25, (2.2 por 27 cm),
previamente equilibrada con un volumen de 300mL de buffer
TRIS-HCl 0,05M y pH 6,5
La muestra fue eluda con buffer tris - HCl 0,05M, pH 6,5 y un

flujo de 30mL/h a temperatura ambiente (25C).
Las fracciones colectadas (1mL) ledas a 280 nm
PURIFICACIN
CONSERVACIN
Los eluatos con mayor absorbancia, fueron reunidos y dializados

por 24 horas, con ayuda de un agitador magntico
Luego se liofiliz, pes y almacen en recipientes de plstico

hermeticamente cerrados y protegidos con papel de aluminio. Los
recipientes de plstico se guardaron en la refrigeradora, en
desecadores.
Figura 18. Diagrama de flujo del procedimiento de extraccin y purificacin de protena soluble de
residuos industriales de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. (sacha inchi)
- 61 -
Se pes (3,0 mg) en tubos eppendorff de 1.5mL

protena soluble liofilizada
Se adicion en L, HCl 6N en una proporcin de 1:100
(Si la cantidad de protena soluble es de 3.2mg se le aade 320
L de HCl 6N).
Se adicion agentes protectores:

2 L de sulfito de sdio y fenol 1%
HIDRLISIS DE LA
PROTENA
Se homogeniz y llev a centrifugacin, a una velocidad de 1000

rpm por un tiempo de 3 min.
Se trasvas el sobrenadante a los tubos de digestin Reacti Therm marca PIERCE con la ayuda de una pipeta Pasteur
Se llev los tubos de digestin al vaco por 5 min.
Se hidroliz al vaco a 150 C por 2 h
Se Desec la muestra al vaco
El hidrolizado desecado se disolvi en 100 L de buffer de

acoplamiento Acetonitrilo:Piridina:Trietilamina:Agua (10:5:2:3)

DERIVATIZACIN
DE LOS
AMINOCIDOS
La muestra desecada se disolvi nuevamente en 100 L de

buffer de acoplamiento, adicionndole 5 L de fenilisotiocianato
(PITC; reactivo de Edman), se dej cinco minutos a temperatura
ambiente
Figura 19. Diagrama de flujo del procedimiento de hidrlisis de la protena soluble y derivatizacin de
los aminocidos de residuos de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L.
- 62 -
SEPARACIN DE LOS
FENILTIOCARBAMILAMINOCIDOS
La muestra derivatizada se diluy en

500 L de buffer acetato 0.05M, pH 6.
El patrn utilizado para el anlisis fue AASTD-18 (Sigma; St. Louis, MO, EEUU)
Se inyect una cantidad de 20 L.
20 L de solucin patrn se someti a las

mismas condiciones de derivatizacin de la
muestra problema
El patrn derivatizado se diluy en 300 L

de buffer acetato 0.05M, pH 6.
Se inyect una cantidad de 20 L.
Figura 20. Procedimiento de separacin de los feniltiocarbamilaminocidos de los residuos industriales

de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L.
3.2.4. EVALUACIN DE LA TOXICIDAD AGUDA A DOSIS LIMITE

Mtodo
: procedimiento a Dosis Fijas, internacionalmente validado, aceptado

y adoptado en la Gua N 420 de la OECD y modificado por Betancourt (62, 64).
Fundamento
: Esta basado en un estudio cuali-cuantitativo de los fenmenos txicos y de su aparicin
en funcin del tiempo tras la administracin de una dosis nica de la sustancia o de varias dosis
fraccionadas en el transcurso de 24 horas.
3.2.4.1. Preparacin de la muestra para el ensayo de toxicidad a dosis limite.

Se utiliz el extracto acuoso del residuo industrial de la extraccin de aceite de Plukenetia
volubilis L. a una concentracin de 200mg/mL.
- 63 -
3.2.4.2. Modelo biolgico

Se utilizaron 20 ratas albinas Sprague Dawley, de ambos sexos con una masa corporal de 200
20g y edad de
7,5 0,5 semanas. Los animales se mantuvieron en el bioterio de la Facultad de
Farmacia y Bioqumica de la UNMSM, a una temperatura de 20 2 C, con humedad relativa de 70 y

80 % y ciclos de luz/oscuridad de 12/12 horas. Recibieron como alimento dieta balanceada, y agua apta
para consumo humano. El acceso a los alimentos y el agua fue ad libitum. Los animales fueron sometidos
a cuarentena e inspeccin clnica durante una semana antes del inicio del experimento, evitando el estrs
(64)
3.2.4.3. Diseo experimental

Aleatoriamente se conform cuatro grupos experimentales, dos grupos tratados (01 grupo de
machos y 01 grupo de hembras). La muestra fue administrada con ayuno previo de 24 horas por va oral
mediante cnula intragstrica, a dosis nica de 2000mg/kg. de masa corporal, teniendo en cuenta la
ausencia de signos o sntomas de toxicidad por est va de administracin. Se dosific y administr al
peso de cada rata un volumen de 2 mL de extracto acuoso y 2 mL de suero fisiolgico para los grupos
controles (64).
Los animales fueron observados individualmente durante 30 minutos, con especial atencin
durante las primeras 24 horas y diariamente hasta los 14 das del experimento. Las observaciones
estuvieron dirigidas a la determinacin de: muerte y tiempo de ocurrencia de la misma, signos de
toxicidad incluyendo su comienzo y duracin, adems de cambios en la piel, membranas de mucosas y
ojos, en el sistema respiratorio, en el nervioso central, en la actividad somatomotora y en la conducta y
prest especial atencin a la ocurrencia de convulsiones, salivacin, diarrea, letargo, somnolencia y
coma (64).
- 64 -
IV. RESULTADOS
4.1. ESTUDIO FARMACOGNSTICO
Para obtener informacin de sus constituyentes qumicos se realiz la marcha fitoqumica
de los residuos industriales de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L., sacha inchi que
present los siguientes constituyentes qumicos que se indican en la tablas 16, 17,18 y 19.
4.1.1. Ensayo Organolptico
Tabla 14. Ensayo organolptico

Caracterstica
Aspecto
Color
Olor
Sabor
Resultado
Polvo heterogneo
crema
Sui generis
Amargo, astringente
4.1.2. Anlisis cualitativo
Tabla 15. Rendimiento y determinacin de sustancias solubles
Peso inicial (droga)

Peso final (droga)
Rendimiento
Etreo (1mL)
0,34g
0,12g
35%
Alcohlico (1mL)
0,34g
0,06g
17%
Acuoso (1mL)
0,34g
0,06g
17%
Tabla 16. Resultado de la marcha fitoqumica del extracto etreo

Constituyentes qumicos
Aceite y grasas
Carotenoides
Alcaloides
Cumarinas
Triterpenoides y esteroides
Antraquinonas
Reactivo
Hauchercorne
Carr-Price
Dragendorf
Mayer
Bouchardat
Baljet
Lieberman- Burchard
Borntrager
- 65 -
Precipitado
+++
++
+++
-
Color
pardo
Azul fugaz
pp. anaranjado
pp. blanco
pp. blanco
pp.rojo
rosado
Rosada/roja
Tabla 17. Resultado de la marcha fitoqumica del extracto alcohlico

Azcares reductores
Aminogrupos libres
Alcaloides
Flavonoides
Cumarinas
Glucosidos
Saponinas
Reactivo
Fehling
Lieberman- Burchard
Ninhidrina 2%
Dragendorf
Mayer
Bouchardat
Shinoda
Baljet
Molish
Triterpenoides
Esteroides
Lieberman- Burchard
Espuma
Borntrager
Papel picrosado
Antraquinonas
Glicsidos cianogenticos
Precipitado
+++
+++
+++
+++
+++
+++
-
Color
pp.rojo ladrillo
Rosado/azul
Azul
pp. anaranjado
pp. blanco
pp. blanco
Naranja/rojo
pp. rojo
Anillo violeta
Rosado
Verde/azul
>2mm x2 min.
Rosada/roja
Rojo
Tabla 18. Resultado de la marcha fitoqumica del extracto acuoso
Azcares reductores
Aminogrupos libres
Alcaloides
Flavonoides
Cumarinas
Glicsidos
Saponinas
Triterpenoides
Esteroides
Antraquinonas
Glicsidos cianogenticos
Taninos
Reactivo
Fehling
Lieberman- Burchard
Ninhidrina 2%
Dragendorf
Mayer
Bouchardat
Shinoda
Baljet
Molish
Precipitado
+++
+++
+++
+++
Color
pp.rojo ladrillo
Rosado/azul
Azul
pp. anaranjado
pp. blanco
pp. blanco
Naranja/rojo
pp. rojo
Anillo violeta
Lieberman- Burchard
+++
Rosado /azul
Espuma
Borntrager
Papel picrosado
Cloruro ferrico 5%
Acetato de plomo 5%
Hipoclorito e sodio
Cianuro de potasio
+++
+
+
-
>2mm x2 min.
Rojo cereza
rojo
Azul/verde
blanco
Anaranjada
pp. amarillo
- 66 -
Tabla 19. Resultados de la determinacin de carbohidratos

Reaccin
Reacciones generales
Reacciones de
azcares reductores
Reaccin aldosas
Reaccin cetosas
Reactivo
Molish
Fehling
Resultado
+++
+++
Pelouze
Selivanoff
+++
+++
Caracterstica
violeta
rojo ladrillo
Amarillo naranja
rosado
Leyenda:
(+++)
(++)
(+)
(-)
4.1.3.
: Abundante
: Moderado
: Escaso
: Negativo
ANLISIS CUANTITATIVO DE TANINOS Y SAPONINAS TOTALES
4.1.3.1. Cuantificacin de taninos
La curva de calibracin del cido tnico en el rango de concentracines estudiadas responde a la

ecuacin y= 0,0475X + 0,0205, un coeficiente de correlacin 0,9973 y a un intervalo de confianza
95%.Al realizar la significacin estadstica de la varianza de la pendiente (Tabla ANOVA para la
regresin lineal simple, mediante el anlisis de regresin ). El Fc (1816,03)>F (1,34) por lo tanto se
rechaz la hiptesis Ho (=0) por lo que x e y estn relacionadas linealmente. La utilizacin de la
ecuacin de regresin para la prediccin y estimacin es aconsejable.
De acuerdo al valor del coeficiente de correlacin lineal simple, se puede afirmar que la variable
X (ppm) se encuentran asociadas en forma directa de una manera muy fuerte con la variable dependiente
Y (absorbancia), en un 99%. La prueba de hiptesis para la correlacin a un nivel de significancia de
=0,05, tc (42,61)>t(2,57), entonces se rechaza la hiptesis Ho:=0; con lo que se afirma la correlacin.
De acuerdo al coeficiente de determinacin R2, se puede afirmar que el 99% de las absorbancias
se explican por las concentraciones ppm del cido.
- 67 -
Tabla 20. Curva de calibracin de cido tnico (x/y)
X
[Estndar]
ppm
(X/Y)
Absorbancia
1
2
3
4
5
6
7
1
2
4
6
8
10
12
0,058
0,112
0,221
0,307
0,410
0,504
0,575
0,058
0,056
0,055
0,051
0,051
0,050
0,048
Tabla 21. Estadsticas de la regresin del cido tnico

0,998
0,997
0,997
0,011
7
Coeficiente de correlacin
Coeficiente de determinacin R^2
R^2 ajustado
Error tpico
Observaciones
Tabla 22. Anlisis de varianza del cido tnico

Grados de
libertad
Regresin
Residuos
Total
1
5
6
Suma de
cuadrados
0,227830438
0,000627276
0,228457714
Promedio de los
cuadrados
0,22783044
0,00012546
- 68 -
Valor crtico
de F
1816,03
1,34
Tabla 23. Porcentaje de cido tnico en el residuo de la extraccin de aceite de

Absorbancia
Polifenoles
1
2
3
Totales
(T)
0,0728
0,0726
0,0730
g/mL
Residuales
(T)
(R)
0,0522
0,0520
0,0524
Gramos de
droga para
1mL de
solucin
Porcentaje
Taninos
- (R)
0,0206
0,0206
0,0206
0,0001
0,0001
0,0001
8x10-4
8x10-4
8x10-4
PROMEDIO
1,3 x 10-5
1,3 x 10-5
1,3 x 10-5
1,3 x 10-5
CURVA
DE CALIBRACIN
DEL CIDO
TNICO
CURVA
CURVADE
DECALIBRACIN
CALIBRACINDEL
DELCIDO
CIDOTNICO
TNICO
0.7
0.7
0.7
yy==0.0475x
++0.0205
y =0.0475x
0.0475x
+0.0205
0.0205
2
RR2=
2=0.9973
0.9973
R =0.9973
0.6
0.6
0.6
Absorbancia
Absorbancia
Absorbancia
0.5
0.5
0.5
Absorbancia
Absorbancia
Absorbancia
Pronstico
Absorbancia
Pronstico
PronsticoAbsorbancia
Absorbancia
Lineal
(Absorbancia)
Lineal
Lineal(Absorbancia)
(Absorbancia)
0.4
0.4
0.4
0.3
0.3
0.3
0.2
0.2
0.2
0.1
0.1
0.1
00
0
00
0
22
2
44
4
66
6
88
8
10
10
10
12
12
12
14
14
14
ppm
ppm
ppm
Figura 21. Recta de regresin del cido tnico
- 69 -
4.1.3.2. Cuantificacin de saponinas totales

La curva de calibracin de saponina estndar en el rango de concentracin estudiadas responde a
la ecuacin Y = 1,9582X + 0,3836 y coeficiente de correlacin 0,9513 y a un intervalo de confianza
95%.Al realizar la significacin estadstica de la varianza de la pendiente (Tabla ANOVA para la
regresin lineal simple, mediante el anlisis de regresin utilizando Excel 2007, Microsoft office).
El Fc (78,076021)>Fo (0,00090555), se rechaz la hiptesis Ho(=0) por lo que X e Y estn relacionadas
linealmente. La utilizacin de la ecuacin de regresin para la prediccin y estimacin es aconsejable.
De acuerdo al valor del coeficiente de correlacin lineal simple, se puede afirmar que la variable
X (mg/mL) se encuentran asociadas en forma directa de una manera muy fuerte con la variable
dependiente Y (absorbancia) en un 97,5%.La prueba de hiptesis para la correlacin a un nivel de
significancia de =0,05, tc (8,84)>to(2,77), entonces se rechaza la hiptesis Ho:=0; con lo que se afirma
la correlacin. De acuerdo al coeficiente de determinacin R2, se puede afirmar que el 95% de las
absorbancias se explican por la regresin.
Tabla 24. Curva de calibracin de saponina estndar
X
[Estndar]
mg/mL
0,12
0,462
0,500
0,16
0,540
0,533
0,20
0,608
0,526
0,24
0,663
0,560
0,28
0,848
0,600
0,32
0,904
0,625
(X/Y)
Absorbancia
- 70 -
Tabla 25. Estadstica de la regresin de la saponina estndar
0,975
0,951
0,939
0,043
6
Coeficiente de correlacin mltiple

Coeficiente de determinacin R^2
R^2 ajustado
Error tpico
Observaciones
Tabla 26. Anlisis de varianza de la saponina estndar
Regresin
Residuos
Total
Grados de
libertad
1
4
5
Suma de
cuadrados
0,14315852
0,00733431
0,15049283
Promedio de los
cuadrados
0,14315852
0,00183358
F
78,076021
Figura 22. Recta de regresin de la saponina estndar
- 71 -
Valor crtico
de F
0,000906
Tabla 27. Porcentaje de saponinas totales de residuos de la extraccin de aceite de

Absorbancia
Gramos de
residuo para
1mL de
solucin
mg/mL
0,464
0,470
0,466
1
2
3
0,041
0,044
0,042
Porcentaje de
saponinas
Totales
0,01
0,01
0,01
PROMEDIO
0,410
0,440
0,420
0.423
4.1.4. ANLISIS CROMATOGRFICO
4.1.4.1. Taninos
I. Krameria triandra
RfSt 1:0.90
II. Plukenetia volubilis L.
Fase estacionaria: Silica Gel 60F254

Fase mvil: 1-Butanol: Ac. Actico: Agua (4:1:5)
Revelador: Cloruro Ferrico
II
Fotografa N 1. Cromatografa en
capa fina de taninos
- 72 -
4.1.4.2.
Saponinas
RfM5
Fase estacionaria
: Silica Gel 60F254
Fase mvil
: Cloroformo: Acetato de etilo (9:1)
Revelador
: Lieberman - Burchard
RfM4
RfM3 RfM2 RfM1
RfSt 1
II
I
RfM2
Fotografa N2. Cromatografa de saponinas triterpenoides
I. Quillaja saponaria
RfSt 1:0.60
RfM1:0.46 RfM2:.0.62
RfM3: 0.82 RfM4:0.94
RfM5:100
RfM5
RfM4
RfM3
I. Quillaja saponaria
RfSt 1
RfM2
RfSt 1:0.60
RfM1
RfM1:0.31 RfM2:0.46
RfM3: 0.62 RfM4: 0.82
RfM5:0.94 RfM6:100
II
Fotografa N 3.cromatografa de
saponinas triterpenoides
- 73 -
I. Glycyrrhiza glabra
RfSt 1:0.34
RfSt 2:0.43
RfM3
RfSt 3:0.62
RfSt 3
RfM2
RfSt 2
RfM1:0.34
RfM1
RfSt 1
RfM2:0.62 RfM3:0.82
II
Fotografa N 4. Cromatografa de saponinas

triterpenoides
I. Glycyrrhiza glabra
RfSt 1:0.32
RfM3
RfSt 2:0.43
RfSt 3:0.62
RfSt 3
RfM2
RfSt 2
RfM1:0.38
RfM1
RfSt 1
RfM2:0.62 RfM3:0.82
II
Fotografa N 5. Cromatografa de saponinas

triterpenoides
- 74 -
4.2.
ESTUDIO BROMATOLGICO
4.2.1.
ANLISIS QUMICO PROXIMAL
Para obtener informacin del contenido de humedad, grasa, protena y cenizas, se realiz el
anlisis proximal. Estos procedimientos qumicos revelaron el valor nutritivo de
los residuos
industriales de la extraccin de aceite de Plukenentia volubilis L., sacha inchi y de esta manera
nos da una referencia de cmo pueden ser combinados con otras materias primas para alcanzar el
nivel deseado de los diferentes componentes de una dieta (tabla N 28 a la N 34).
Tabla 28. Determinacin de la humedad
Muestra
Porcentaje de base hmeda
Porcentaje de base seca
5,13
94,87
5,05
94,95
5,090,057
94,910,057
xs
Tabla 29. Determinacin de protenas
Muestra
32,51
34,25
32,42
34,15
32,65
34,39
32,530,12
34,260,012
xs
- 75 -
Tabla 30. Determinacin de protenas en muestra de residuos desengrasados
Muestra
48,74
51,36
50,08
52,77
47,41
49,95
48,741,34
51,361,41
xs
Tabla 31. Determinacin de extracto etreo
Muestra
37,37
39,36
33,51
35,30
35,442,73
37,332,87
xs
Tabla 32. Determinacin de fibra cruda
Muestra
3,73
3,93
2,28
2,40
3.001,03
3.161.08
x s
- 76 -
Tabla 33. Determinacin de cenizas
Muestra
2,84
3,00
3,29
3,47
3,070,32
3,240,33
xs
Tabla 34. Anlisis proximal de los residuos industriales de la extraccin de aceite de

Humedad
5,09
94,91
Protena
32,53
34,26
Extracto etreo
35,44
37,33
Fibra cruda
3,00
3,16
Cenizas
3,07
3,24
Extracto no nitrogenado
20,87
22,01
- 77 -
4.2.2.
FIBRA DETERGENTE NEUTRO(FDN)
Tabla 35. Determinacin de pared celular y contenido celular
Muestra
Porcentaje de pared celular
Porcentaje de contenido celular
23,86
76,14
27,46
72,54
25,662,55
74,342,55
xs
Tabla 36. Determinacin de FDN
Muestra
Porcentaje de FDN
16,39
16,26
xs
16,332,74
Tabla 37. Resultados de la determinacin de fibra detergente neutro
Pared celular
24,35
25,66
Contenido celular
70,56
74,34
FDN
15,49
16,33
- 78 -
4.2.3.
MINERALES ESENCIALES
Tabla 38. Determinacin de calcio, fsforo y hierro
4.2.4.
Macroelementos
Microelementos
> 100 mg/da
< 100 mg/da
Calcio
Fsforo
Hierro
mg/100g
mg/100g
mg/100g
317,83
560,00
4,18
VITAMINAS
Tabla 39. Determinacin de tiamina, riboflavina, niacina
Tiamina
Riboflavina
Niacina
mg/100g
mg/100g
mg/100g
0,31
No detectable
No detectable
Tabla 40. Resultados de la determinacin de minerales y vitaminas
Calcio
301,65
317,83
Fsforo
531,50
560,00
Hierro
3,97
4,18
Tiamina
0,29
0,31
Riboflavina
No detectable
No detectable
Niacina
No detectable
No detectable
- 79 -
4.2.5.
pH
Tabla 41.Resultados de la determinacin de pH

Temperatura
pH
23,2
5,89
pH
4.2.6. ACIDEZ TOTAL
Tabla 42. Resultados de la determinacin de acidez titulable total

1.10 x 10-3
1.20 x 10-3
2.14 x 10-3
2.26 x 10-3
ACIDEZ TOTAL
- 80 -
Tabla 43. Tabla comparativa del anlisis proximal de residuos obtenidos de la

extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L., respecto a Glycine max L. y
Chenopodium quinoa W.
RESIDUO
SACHA INCHI
5,09
34,26
35,44
3,00
3,07
20,87
24,35
Humedad
Protena
Extracto etreo
Fibra cruda
Cenizas
ELN
Pared Celular
Glycine max
EXPELLER
SOYA1
5,00 11,00
30,00 42,00
13,2 22,5
4,70 6,48
4,61 5,37
30,9 34,00
12,00 29,50
Chenopodium quinoa W
GRANO
QUINUA2
7,83
15,25
7,49
5,09
3,54
68,79
54,63
Fuente:
Gallardo, M et al. (2008)

Collazos et al (1996). Tablas Peruanas de Composicin de Alimentos.
80
Porcentaje g/100g
70
60
50
40
30
20
10
0
1
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
HUMEDAD
PROTEINA
EXTRACTO TEREO
FIBRA CRUDA
CENIZAS
EXTRACTO NO NITOGENADO
PARED CELULAR
Pl u k e n e ti a vol u bi l i s L. RES IDUO S AC HA INC HI

Gl yci n e m ax EXPELLER S O YA
ran go mi n
Gl yci n e m ax EXPELLER S O YA
ran go max
C h e n opodi u m qu i n oa W
GRANO Q UINO A
Figura 23. Comparacin del anlisis proximal de residuos obtenidos de la extraccin del aceite de
Plukenetia volubilis L. , respecto a Glycine max L., y Chenopodium quinoa W.
- 81 -
Estudio Farmacognstico y Bromatolgico de los residuos industriales de la extraccin del
Tabla 44. Tabla comparativa de minerales y vitaminas de residuos obtenidos de la

extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L., respecto a Glycine max L. y
Minerales y
Resduo sacha inchi
Glycine max
Expeller soya1
Chenopodium quinoa W
Grano quinoa2
Calcio
301,65
200,00
127,10
Fsforo
531,50
620,00
534,48
Hierro
3,97
15,70
16,23
Tiamina
0,31
0,50
0,45
Riboflavina
No detectable
0,80
1,19
Niacina
No detectable
9,00
1,40
vitaminas
Fuente:
Gallardo, M et al. (2008)

Collazos et al (1996). Tablas Peruanas de Composicin de Alimentos.
700
PORCENTAJE g/%
600
500
400
300
200
Plukenetia volubilis L
100
Glycine max.L.
0
CALCIO
mg/100g
FOSFORO mg/100g
HIERRO
mg/100g
Figura 24. Comparacin de minerales, calcio, fsforo y hierro de residuos obtenidos de la extraccin de
aceite de Plukenetia volubilis L., Glycine max L.; Chenopodium quinoa W.
- 82 -
PORCENTAJE ug/100 g
600
500
400
300
200
Plukenetia volubilis L
100
Glycine max.L.
TIAMINA ug/100g
Figura 25. Comparacin en g/g% de tiamina de residuos obtenidos de la extraccin de aceite de

Plukenetia volubilis L., Glycine max L; Chenopodium quinoa W.
4.2.6. DIGESTIBILIDAD DE PROTENAS IN VITRO

4.2.6.1. Nitrgeno soluble en pepsina
Tabla 45. Resultados de la digestibilidad de protenas in vitro por el mtodo

enzimtico pepsina de residuos de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L.
Muestra
Protena indigerible mg
Protena digerible %
A
B
C
4,43
4,57
4,43
87,07
86,66
87,07
A1
4,50
86,86
B1
4,66
86,40
C1
4,35
87,30
4,480,111
86,890,325
xs
- 83 -
4.2.6.2. Digestibilidad enzimtica por celulasa
Tabla 46. Resultados de la digestibilidad de protenas in vitro por el mtodo enzimtico celulasa de residuos industriales de la
extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi.
Muestra
Residuo 24h (g)
Residuo 48h (g)
Residuo 72h (g)
0,0346
86,53
0,0256
86,32
0,0281
88,97
A1
0,0217
91,38
B1
0,0288
88,26
C1
0,0358
85,70
A2
0,0176
92,90
B2
0,0258
89,63
C2
0,0257
89,60
- 84 -
%DMS
Promedio
87,271,47
88,452,84
90,711,73
4.2.6.2.1.
Anlisis de varianza de la influencia del tiempo y el porcentaje de digestibilidad

enzimtica por celulasa
Los tres conjuntos de datos forman muestras aleatorias simples e independientes, extradas de tres
poblaciones que son similares excepto por las condiciones estudiadas.
Hiptesis
Ho: 1 = 2 = 3(en promedio las cuatro condiciones producen la misma respuesta)
HA: No todas las son iguales (al menos una condicin produce una respuesta promedio diferente del
promedio de cuando menos una de las dems condiciones)
Tabla 47. ANOVA de tiempo y %DMS por celulasa
Grupos
%DMS 24H
%DMS 48H
%DMS 72H
Cuenta
3
3
3
Suma
261,82
265,34
272,13
Promedio
87,27
88,45
90,71
Varianza
2,17
8,09
3,60
Tabla 48. Anlisis de varianza de tiempo y %DMS por celulasa
Origen de las variaciones

Entre grupos
Dentro de los grupos
Total
Suma de
cuadrados
18,31
27,72
46,03
Grados Promedio
de
de los
libertad cuadrados
2
9,16
6
4,62
8
1,98
Valor
Probabilidad crtico
para F
0,22
5,14
Decisin estadstica
Podemos comparar la F calculada con la F terica de las tablas para 2 y 6 grados de libertad, con un
nivel de significancia : 0,05: El resultado ANOVA le da el valor estadstico de F. El valor de F
calculado entre los tres grupos es 0,22 y el obtenido en las tablas F 0,95; 2,6 es 5,143; p>0,05 para esta
prueba.
- 85 -
Podemos afirmar que al ser menor el F calculado que el F 0,95; 2,6 terico y ser el p- valor es mayor a
0,05 hemos de aceptar la hiptesis nula y que no hay diferencias significativas en las digestibilidades
respecto a las 24, 48 y 72 horas, es decir no hay relacin entre las variables.
4.2.6.3. Determinacin de aminocidos
4.2.6.3.1.
Prueba de solubilidad y determinacin de protenas del residuo de la extraccin

del aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi
En la prueba de solubilidad para la extraccin de una mayor cantidad de protenas, se observ una
mejor extraccin con el Buffer Tris-HCl 0.05M a un pH 6.5 y a una temperatura de 25C. y que se
corroboro con la determinacin de protenas (mtodo de Lowry ).
Tabla 49. Resultados de la prueba de solubilidad en la extraccin de la fraccin

proteica de residuos industriales de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L
Suero fisiolgico
Agua bidestilada
TRIS HCl
1,02g
1,05 g
1,04 g
7,0
7,4
6,5
Temperatura
25C
25C
25C
Desecho
0,64 g
0,65 g
0,25 g
Muestra solubilizada
0,37g
0,40g
0,78g
Longitud de onda
700nm
700nm
700nm
41
37
46
Disolvente
Muestra problema
Prueba de solubilidad
pH
Cuantificacin
% protena (Lowry)
- 86 -
4.2.6.3.2.
Extraccin y purificacin de protenas totales de residuos de la extraccin del aceite

de Plukenetia volubilis L. sacha inchi mediante la cromatografa por filtracin en gel
sephadex G-25.
FRACCIN PROTECA DE LA MUESTRA B (30%) A UNA LECTURA

FRACCIN PROTECA DE LA
A (20%) A UNA LECTURA
DEMUESTRA
280 nm
DE
280 nm
Absorbancia
2.5
COLUMNA
ABSORVANCIA280nm
Dimetro :2.2 cm
Altura :27 cm
Flujo
:30 m L/h
Eluente :Tris-HCl 50mM pH 6.5
Volumen/Tubo: 1mL
PICO I
1.5
PICO II
96
94
92
90
88
86
84
82
80
78
76
74
72
70
68
66
64
62
60
58
56
54
52
48
0.5
N DE FRACCIN
VOLUMEN(mL)/TUBO
30mL/h
Figura 26. Curva de absorbancias de la fraccin proteica de la muestra al 20%
FRACCIN PROTECA DE LA MUESTRA A (20%) A UNA LECTURA
FRACCIN PROTECA DE LADE

MUESTRA
A (30%) A UNA LECTURA DE
280 nm
280 nm
Absorbancia
1.8
PICO I
1.6
ABSORVANCIA280 nm
COLUMNA
1.4
Dimetro :2.2 cm
Altura :27 cm
Flujo
:30 m L/h
Eluente :Tris-HCl 50mM pH 6.5
1.2
1
0.8
PICO II
0.6
0.4
N DE FRACCIN
VOLUMEN(mL)/TUBO
30mL/h
Figura 27. Curva de absorbancias de la fraccin proteica de la muestra al 30%
- 87 -
95
93
91
89
87
85
83
81
79
77
75
73
71
69
67
65
63
61
59
57
55
53
51
48
0.2
4.2.6.3.3.
Valores obtenidos del Pico I de la fraccin proteica extrada de las protenas totales
y rendimiento del volumen dializado y peso del liofilizado.
Tabla 50. Condiciones de la fraccin proteica del mayor pico (Pico I) de residuos
de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L.
Extracto
Concentracin
Rendimiento
Rendimiento
trasvasado a la
Peso del liofilizado
Protena
Protena
columna
(Protena soluble)
soluble/residuo
soluble/protena
(%)
(mL)
(mg)
(%)
total (%)
20
2mL
45
11.25
21.42
30
2mL
57
9.5
18.38
Promedio
25
2mL
51
10.38
19.90
Muestra
Muestra cargada
Partculas de gel
Molcula de la muestra de tamao molecular
inferior al poro del gel
Molcula de la muestra de tamao molecular
superior al poro del gel (azul dextrano)
Fotografa N
6. Izq. equipode
recolector
de fracciones
cromatografa
columna.Der.del
mecanismo
de
4.2.6.3.4.
Composicin
aminocidos
de losy residuos
de laen extraccin
aceite de
flujo devolubilis
las partculas
y molculas
de la cromatografa en columna.
Plukenetia
L. sacha
inchi (mg/g)
- 88 -
Tabla 51. Aminograma de los residuos de la extraccin del aceite de Plukenetia

volubilis L. (mg/g) en comparacin con Amarantus caudatus, Glycine max L.,
Aminocidos
Plukenetia
volubilis L.
Protena
aislada de 35
KDa
Fraccin
albmina
Semilla
A.caudatus
(1)
A.caudatus
(1)
Glycine max L.
(2)
(3)
Chenopodium
quinoa W
Asprtico
132
121
18
117
73
Glutmico
239
100
134
187
119
Serina
58
67
72
51
37
Glicina
38
90
174
42
52
Histidina
22
40
25
24
Treonina
68
39
35
Alanina
35
108
72
43
47
Arginina
63
29
89
72
71
Prolina
24
54
97
55
31
Tirosina
22
39
33
31
28
Valina
31
64
64
48
45
Metionina
13
18
46
13
20
Isoleucina
180
49
52
45
36
Leucina
69
95
59
78
60
Fenilalanina
56
22
49
41
Lisina
39
86
27
54
56
(1) Fuente. Villanueva, O., Arnao, I. Purificacin de una protena de 35 KDa rica en lisina,
de la fraccin albmina de Amaranthus caudatus (Kiwicha).2007.
(2) Fuente. Hamaker et al. 1992. Universidad de Arkansas, USA.
(3) Aporte de los cultivos andinos a la nutricin humana. Raices Andinas.Guido
Ayala.pag102-111
- 89 -
4.2.6.3.4.1. Anlisis de aminocidos esenciales de los residuos industriales de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi (mg/g)
TABLA 52. COMPOSICIN DE AMINOCIDOS ESENCIALES DE LOS RESIDUOS DE LA EXTRACCIN DEL ACEITE DE
Plukenetia volubilis L. (mg/g) EN COMPARACIN CON A.caudatus, Glycine max L.,Chenopodium quinoa W, Chenopodium
pallidicaule, Oxalis tuberosa, Tropaeolum tuberosum, Arachis hypogaea L., Helianthus annuus L Y LA FAO/OMS
Aminocido
Plukenentia
volubilis L.
Chenopodium
quinoa W.
Chenopodium
pallidicaule
Amaranthus
caudatus
Oxalis
tuberosa
Tropaeolum
tuberosum
Ullucus
tuberosum
Plukenentia
volubilis L.
Glycine
max L.
sacha inchi**
quinua
caihua
kiwicha
oca
mashua
olluco
sacha inchi
soya
( 1)
( 1)
( 1)
( 1)
( 1)
( 1)
(2)
(2)
Arachis
hypogaea
L.
Mani
Helianthus
annuus L.
girasol
FAO/OMS
(2)
(2)
180
69
64
52
36.36
28.08
41.1
50
45
34
43
52
Leucina
69
67
58
46
53.63
46.53
49.0
64
78
64
64
70
Lisina
39
68
58
67
59.08
33.78
48.0
43
54
35
36
55
13(*)
33
16
35
25.45
27.90
30.5
37
26
25
34
35
31
40
35
35
31.81
49.41
59.5
79
80
89
54
60
68
45
47
51
45.45
23.69
26.5
43
39
26
37
40
ND
13
11
5.50
6.66
9.1
29
13
10
14
10
31
35
45
45
48.17
40.59
35.0
40
48
42
51
35
Isoleucina
Metionina+cisteina
Fenilalanina
+tirosina
Treonina
Triptofano
Valina
Fuente (1): Aporte de los cultivos andinos a la nutricin humana. Races Andinas. Guido Ayala. pg. 102-111. (2) Hamaker et al. 1992.Universidad de Arkansas, USA.
( )
: metionina
**
: residuo industrial de la extraccin del aceite del Plukenetia volubilis L.
ND
: no determinado
- 90 -
4.2.6.3.4.2. Puntaje qumico

En las muestras analizadas se observa que el aminocido limitante en los residuos industriales
de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L. es la histidina (48) .No se pueden hacer
inferencias sobre el triptfano debido a que no fue posible determinarlo en esta investigacin.
Empleando el dato terico de 87% de digestibilidad (nitrgeno soluble en pepsina), el puntaje
qumico corregido (PQC) para los residuos es 42%.
Tabla 53. Puntaje qumico

Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
Fenilalanina
+ tirosina
Treonina
Valina
Histidina
Sacha inchi
180
69
39
13
31
68
31
FAO
52
70
55
17
60
40
35
19
PQ
346
99
71
76
52
170
89
48
16
10
4
7
5
1
11
12
15
14
6
8
13
1. Asprtico. 2. Glutamico. 3. Serina. 4. Glicina. 5. Histidina. 6. Treonina. 7. Alanina. 8. Arginina.

9.Prolina.10.Tirosina. 11. Valina. 12. Metionina. 13. Isoleucina. 14.leucina.15. Fenilalanina. 16.
Figura 28. Composicin de solucin estndar de aminocidos stock a una concentracin de 2.5
moles*mL-1, en una dilucin de 20 L en 300 L de buffer acetato de amonio 0.05M, pH 6
- 91 -
16
4
3
7
14
9
13
10
11
12
15
1. Asprtico. 2. Glutamico. 3. Serina. 4. Glicina. 5. Histidina. 6. Treonina. 7.Alanina.8.Arginina.

Figura 29. Composicin de los aminocidos de residuos de la extraccin de aceite de Plukennetia

volubilis L. (20%) en una dilucin de 3,7mg de protena soluble en 500 L de buffer acetato de
amonio 0.05M, pH 6
16
2
4
3
7
8
10
11
14
12
13 15
1. Asprtico. 2. Glutamico. 3. Serina. 4. Glicina. 5. Histidina. 6. Treonina. 7. Alanina. 8. Arginina.

Figura 30. Composicin de los aminocidos de residuos de la extraccin de aceite de Plukennetia

volubilis L.(30%) en una dilucin de 3,4mg de protena soluble en 500 L de buffer acetato de
amonio 0.05M, pH 6
- 92 -
4.3. EVALUACIN DE TOXICIDAD AGUDA A DOSIS LMITE
El ensayo de toxicidad aguda a dosis lmite de residuos de la extraccin del aceite de Plukenetia
volubilis L., la dosis administrada en ratas se expres en: gramos de extracto por kilogramo de peso
corporal (tabla 54), segn el ensayo de toxicidad a dosis limite por el Mtodo OECD 420
(tabla 56) y met. Betancourt.
Tabla 54. Resultado de toxicidad aguda oral a dosis limite

ESPECIE
DESCRIPCIN
N RATAS
Plukenetia
volubilis L.
SEXO
HEMBRA
MACHO
HEMBRA
MACHO
NMUERTES
sacha inchi
TOXICIDAD
DOSIS NICA
2000 mg/kg
5
5
0
0
> 2000 mg/Kg

de peso corporal
Tabla 55. Comportamiento de la media del peso corporal desviacin estndar a

los 0, 7 y 14 das.
PESO CORPORAL (g)
GRUPO
CONTROL
GRUPO
TRATADO
GRUPO
CONTROL
GRUPO
TRATADO
N
ANIMALES
EN CADA
GRUPO
5
181,6 1,3
185,4 2,7
202,2 3,6
201,4 3,13
202,2 2,2
206,4 2,3
221,8 2,7
226,0 2,2
14
218,4 3,3
223,2 3,4
242,8 3,6
247,8 2,8
N DE DAS
HEMBRAS
MACHOS
Tabla 56. Rango de masa corporal con relacin a la edad en

semanas de la especie y lnea del modelo biolgico
Edad (semanas)
7-8
Masa corporal (g)

180-200
8-9
200-220
9-10
220-240
La masa corporal como indicador de toxicidad, se comport dentro de los parmetros establecidos
para la curva de crecimiento de la especie y lnea del modelo biolgico utilizado (IFFA CREDO).
- 93 -
4.3.1.
ANLISIS BIOESTADSTICO
4.3.1.1. Anlisis de varianza entre los grupos control y tratados hembra y macho, respecto
a la ganancia de peso.
Se determin la media y desviacin estndar de los pesos corporales a los 0, 7 y 14 das por sexo y
grupo. Se realiz un ANOVA de un factor y un Test de t - Student, para determinar las diferencias
entre grupos.
GANANCIA DE PESO EN TOXICIDAD A DOSIS LIMITE

GANANCIA DE PESO EN EL ENSAYO DE TOXICIDAD AGUDA A DOSIS NICA EN
50
EL GRUPO CONTROL Y TRATADO DE HEMBRAS Y MACHOS
GANANCIA DE PESO
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
7 DIAS
14 DIAS
GRUPO CONTROL HEMBRA
GRUPO TRATADO HEMBRA
GRUPO CONTROL MACHO
GRUPO TRATADO MACHO
Figura 31. Ganancia de peso en el ensayo de toxicidad aguda a dosis nica en el

grupo control y tratamiento de hembras a los 7 y 14 das de ensayo.
- 94 -
Supuesto
Los cuatro conjuntos de datos forman muestras aleatorias simples e independientes, extradas
de cuatro poblaciones que son similares excepto por la condicin estudiada.
Hiptesis
Se plantea la hiptesis para comparar las medias de los pesos corporales de cada grupo de
tratamiento (cantidad de extracto 2g/Kg de peso y das (0,7 y 14))
Ho: El incremento de los pesos corporales de los grupos son iguales
HC(hembra control)=MC(macho control)= HT(hembra tratada)=MT(macho tratado)

H1: El incremento de los pesos corporales en los grupos son diferentes
HC(hembra control) MC(macho control) HT(hembra tratada) MT(macho tratado)
Tabla 57. Resumen de ANOVA para el grupo control y tratado para ambos sexos
Grupos
Controlados hembras
Controlados machos
Tratados hembras
Tratados machos
Cuenta
3
3
3
3
Suma
603,1
664,8
615,0
670,4
Promedio
201,0
221,6
205,0
223,5
Varianza
374,4
453,7
358,7
542,1
Tabla 58. ANOVA para determinar la diferencia entre grupos
Origen de las
variaciones
Entre grupos
Dentro de los grupos
Total
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
1171,53
3457,87
4629,40
3
8
11
Promedio
de los
cuadrados
390,51
432,23
Probabilidad
Valor
crtico
para F
0,90
0,48
4,06
Decisin
Debido a que el valor calculado F es 0,90 es menor que el valor crtico F0.95, 3,8 4,06 se acepta
Ho.
Se concluye que los cuatro grupos no tienen diferente peso corporal promedio y
mostraron diferencias significativas p>0,05 en ninguno de los tiempos estudiados.
- 95 -
no
4.3.1.2. Comportamiento del peso corporal para el grupo control y tratado hembra
mediante la aplicacin del test de t- Student.
Tabla 59. Prueba F para varianzas de dos Tabla 60. Prueba t para dos muestras suponiendo
muestras
varianzas iguales
TRATADOS CONTROL
TRATADOS CONTROL
Media
Varianza
Observaciones
Grados de
libertad
F
Valor crtico
para F
205,80
404,28
3
200,40
339,04
3
2
1,19
Media
Varianza
Observaciones
Varianza agrupada
Grados de libertad
Estadstico t
205,80
404,28
3
371,66
4
0,34
2,77
Valor crtico de t
19,00
200,40
339,04
3
COMPORTAMIENTO DEL PESO CORPORAL DURANTE EL ENSAYO DE TOXICIDAD

AGUDA A DOSIS NICA EN HEMBRAS
0
10
12
14
16
250
250
206.4
225.6
185.4
200
PESO(g)
201.2
200
218.4
181.6
150
150
100
100
50
50
0
0
7
TIPO DE ENSAYO (DIAS)
GRUPO CONTROL
14
GRUPO TRATADO
Figura 32. Comportamiento del peso corporal para el grupo control y tratado hembra.
Debido a que el valor calculado t - estadstico es 0,34 es menor que el valor crtico t 2,77; entonces, no
existe diferencia del peso corporal de las hembras en los grupos controles y tratados, para un p>0,05 a los
0,7 y 14 das de tratamiento.
- 96 -
4.3.1.3. Comportamiento del peso corporal para el grupo control y tratado macho mediante
la aplicacin del test de t- Student
Tabla 62.Prueba f para varianzas de dos
TABLA 63. Prueba t para dos muestras
muestras
suponiendo varianzas iguales

TRATADOS CONTROL
TRATADOS CONTROL
Media
Varianza
Observaciones
Grados de
libertad
F
Valor crtico F
225,06
538,89
3
222,20
455,16
3
2
1,18
19,00
225,06
538,89
3
497,03
4
Media
Varianza
Observaciones
Varianza agrupada
Grados de libertad
222,22
455,16
3
0,16
2,77
Estadstico t
Valor crtico de t
COMPORTAMIENTO DEL PESO CORPORAL DURANTE EL ENSAYO DE

TOXICIDAD AGUDA A DOSIS NICA EN MACHOS
0
10
12
14
16
300
300
247.8
250
226
201.4
223.6
PESO(g)
200
250
242.8
200
200.2
150
150
100
100
50
50
0
0
7
TIPO DE ENSAYO (DIAS)
GRUPO TRATADO
14
GRUPO CONTROL
Figura 33. Comportamiento del peso corporal para el grupo control y tratado macho
Debido a que el valor calculado t - estadstico es 0,16 es menor que el valor crtico t 2,77; entonces, no
existe diferencia del peso corporal de los machos en los grupos controles y tratados, para un p>0,05 a los
0,7y 14 das de tratamiento
- 97 -
V. DISCUSIN
La presente investigacin realiz el estudio farmacognstico y bromatolgico de residuos

industriales de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi; al mismo tiempo que
se confirmndose que en la literatura no existen referencias especificas sobre estos estudios que
permitan valorar y desechar y aprovecharlos al 100%, fomentando el desarrollo econmico social
sostenible que justifica el presente trabajo.
En el estudio farmacognstico se realiz la marcha fitoqumica realizndose mediante tres

extracciones, en cada una de ellas se procedi a la determinacin de sustancias solubles, observndose
en la tabla 15: extracto etereo, 35%; alcohlico y acuoso, 17%. De cada extracto se obtuvieron
respuestas positivas para metabolitos primarios o esenciales que desempean funciones vitales para el
desarrollo del vegetal
(22)
, entre los que se destacaron: glcidos (azcares reductores), lpidos y
aminocidos. Entre los metabolitos secundarios en las tablas 16, 17 y 18): triterpenos, saponinas
triterpenoides, trazas de taninos, estos resultados no han sido reportados, pero segn la literatura (20,21),
la familia Euphorbiaceae se caracteriza por presentar los mencionados metabolitos secundarios.
En la cuantificacin de tninos, la curva de calibracin en el rango de concentraciones

estudiadas para el patrn, demostr ser lineal por tener un coeficiente de correlacin mayor a 0.990
(figura 21). De acuerdo al coeficiente de determinacin R2, se puede concluir que el 99% de las
absorbancias pueden ser explicadas por las concentraciones ppm del cido tnico, con lo que se
obtiene 1.3 x 10-5 %de cido tnico (tabla 23) del residuo de la extraccin de aceite de Plukenetia
volubilis L. Estos valores son inferiores a los encontrados en: Krameria triandra (12%), Plantago
lanceolada (0.8 1.0%), Medicago sativa. Los valores obtenidos de los residuos de Plukenetia
volubilis L. no perjudican su interaccin con las protenas.
Los principales efectos de los taninos se deberan a la interaccin de la protena con los
taninos condensados (TC) y con los taninos hidrolizados (TH), los taninos se adhieren con mayor
fuerza a las protenas con alto contenido de prolina. Los taninos afectan la digestibilidad de las
protenas y disminuye la actividad de las enzimas digestivas, por ello su retencin de nitrgeno y
aminocidos esenciales. Respecto a los
aminocidos limitantes reducen la disponibilidad de
metionina, mientras para las protenas los valores de digestibilidad varan de 45.5 a 66.7% en
comparacin con 89.9% de los sorgos (bajos en taninos) que explicara la alta digestibilidad de los
residuos de Plukenetia volubilis L.
- 98 -
En la cuantificacin espectrofotomtrica de saponinas totales se encontr un 0.423 0.015%

de saponinas (tabla 27), valores menores a los encontrados en saponina de: corteza de Quillaja
saponaria (10%), Chenopodium quinoa W. quinua (0-6%), Medicago sativa alfalfa (2-3%); sin
embargo, las exigencias del mercado, fijan como valor limite 0.05%.Al respecto las saponinas, son
inhibidores del consumo (baja palatabilidad), un ejemplo de ello se ve en los bajos consumos de
alfalfa por cerdos, atribuidos a la presencia de saponinas y sus propiedades espumantes que
constituyen fuertes interferencias en la absorcin intestinal; las especies de mayores concentraciones
deben ser manejadas con cuidado en los sistemas de alimentacin para evitar trastornos en el
metabolismo digestivo; ya que, se unen a nutrientes como el zinc inhibiendo enzimas metablicas y
digestivas.
En el estudio cromatogrfico de saponinas en capa fina se confirm la presencia saponinas

triterpenoides, al ser comparadas con saponinas patrn que al ser comparado con Quillaja saponaria
jaboncillo
presento un componente, Rf para el patrn 0.60 y 0.62 (fotografa N2 y 3) y
Glycyrrihiza glabra presento tres componentes siendo sus Rf 0.62,0.43 y 0.32 - 034 con ambos
reveladores y para el residuo 0.62, 0.38 con revelador Lieberman Bouchardat (fotografa N4) y
0.62,0.34 encontrados con revelador vainillin fosfrico (fotografa N5). La literatura reporta la
presencia de saponinas triterpnicas en las dicotiledneas, clasificacin adoptada por Engler,
especialmente en la familia Euphorbiaceae, Cariofilaceae, Poligalceae y solanceae entre otras; la
especie vegetal pertenece a una de las familias mencionadas anteriormente (Euphorbiaceae) y servir
para sealar su posible presencia, que corroborara la quimiotaxonomia de la familia (47,65, 66).
En el estudio bromatolgico, el anlisis qumico proximal, se determin la humedad un bajo

contenido de agua (tabla 28) con valor promedio de 5.09 0.057. Antunez,E (1981)(67) y Pascual, G.,
et al (2000) (3) encontraron valores similares de agua, 4.2 y 6.37 respectivamente.
En la determinacin de protenas (tabla 29) de acuerdo al mtodo de Kjeldahl (AOAC,1997),

se observ que el contenido de protenas de los residuos fue de 34.26 0.012 y para residuos
desengrasados
51.36 1.41 (tabla 30) . Estos resultados son prximos a los encontrados por
Antunez, E (1981) (67) ; Pascual, G, et al (2000) (3); Garca (1992) (9) y Hamaker, et al (1992) (9)
encontraron. El valor de proetinas encontrados constituye una alternativa a la torta Glycine max L.
soya, pues la actividad avcola y pecuaria importa aproximadamente cien mil toneladas de torta de
Glycine max L. soya y que actualmente se estn formulando mezclas nutritivas. La concentracin
de protena y su calidad, se ve influencian por el proceso de extraccin (menos aceite remanente) y si
se procesan descascarillados (41,69).
- 99 -
En el extracto tereo se emple el mtodo de Goldsfich. Los resultados se muestran en la

tabla 31, el contenido de grasa fue de, 37.33 2.87; que al compararse con los datos reportados por
Antunez, E. (1981) (67); Garca (1992) (9), Hamaker, et. al, (1992 ) (9) y Pascual, G., et al (2000) (3) se
observa que sus diferencias son poco significativas que se explicaran debido al almacenamiento, el
cultivo, la poca de siembra y cosecha , el tiempo , la temperatura y el tratamiento post-cosecha
(25)
.Segn Gallardo, G. et al (2008) (41) valores mayores de 9% de extracto (extraccin mecnica) y no
ms de 2% cuando se combina prensa y solvente, evidencia una baja eficiencia industrial; por lo tanto,
es exponer el material a la rancidez, porque podra entorpecer otros procesos industriales; por
ejemplo, cuando se desean incorporar estas harinas en un balanceado comercial pelletilizado; ya que,
los materiales aceitosos no corren bien.
El valor obtenido para la fibra cruda en base seca que se observan en la tabla 32, 3.16
1.08 %, al comparar los datos se observa que el valor obtenido est dentro del rango reportado por
Garca
(9)
, Hamaker et. al,
(9) )
pero, diferente a lo reportado por Pascual, G.Estas diferencias es
muestra del ecotipo analizado, almacenamiento de las semillas, estacin de cultivo, post-cosecha y
proceso de prensado. La metodologa de fibra cruda desarrollado hace ms de 100 aos se obtienen
valores que subestiman al valor y el contenido de fibra insoluble; ya que, el tratamiento alcalino
disuelve parte de esta fibra (gasta un 40%) (70).
En referencia a la fibra detergente neutra Van Soest, haba reportado que el 40% de los
componentes de la fibra se perda en el mtodo de fibra cruda
(18)
. Por tal motivo se realiz la
determinacin en fibra detergente neutra la pared celular (celulosa, hemicelulosa, lignina y slice),
corroborndose la gran variacin en la determinacin de fibra insoluble por ambos mtodos. Se
muestra en la tabla 35 que los principios fcilmente digeribles se encuentran en el contenido clular
del tejido vegetal y en el pool de los residuos estudiados fue de 74.342.55, valor muy elevado que
proporciona mayor biodisponibilidad de nutrientes para el consumidor, que est compuesto por
protenas, azcares solubles y grasas. El envoltorio del contenido celular est determinado por la
pared celular, el valor encontrado para este anlisis fue de 25.66 2.55 que est formada por una
trama o malla de difcil digestin. La composicin qumica de la pared celular vara segn la
naturaleza y origen de la fibra
(71,72)
. A mediada que la planta madura se deposita lignina entre la
celulosa y hemicelulosa; la lignina es indigerible, contribuyendo a disminuir la digestibilidad de la

celulosa y hemicelulosa para rumiantes, para el hombre y animales monogstricos es un irritante de la
mucosa intestinal. La fibra detergente neutra est relacionada inversamente a la capacidad de
consumo (sensacin de saciedad) que el hombre y los animales poseen sobre este alimento. El valor
encontrado de la pared celular en comparacin a expeler de soya para ganado de leche y carne est
dentro de rangos de 12 30%, estos valores no influyen negativamente en el consumo y
digestibilidad, mientra que resultados de FDN de 63-66% si lo hacen (41).
- 100 -
El valor promedio obtenido de la determinacin de FDN es de 16.332.74 (tabla 36), valor en

el que se encuentra celulosa, hemicelulosa y lignina.
En referencia a la determinacin de ceniza (tabla 33) se obtuvo 3.24 0.33% , este valor es
muy prximo a los encontrados por Antunez, E. (1981)
(67)
, Garca (1992)
(9)
, Hamaker, E ., et al
(1992 ) (9) y Pascual, G., et al (2000) (3).
Respecto al valor de ELN su contenido fue de 20.87, tal como se observa en la tabla 34;
observndose variaciones en la composicin de azcares respecto a Antunez, E. (1981) (67); Garca
(1992) (9), Hamaker, E.,et. al (1992 )(9) y Pascual, G., et al (2000) (3)debido a diferentes factores como
el cultivo, la poca de siembra y cosecha, tiempo y temperatura en poscosecha; y adems por los
distintos procesos generando insumos de composicin diferente (41,73).
La tabla 38, presenta los valores obtenidos para los macroelementos esenciales; calcio y
fsforo es 317 y 560 mg/100mg respectivamente. En la tabla 44, el valor de calcio encontrado fue
mayor en comparacin a la quinua (127 mg/100g de materia seca) y respecto al los expeller de soya
que se encuentra en un rango (200- 340 mg/100g de materia seca). El valor de fsforo es
significativamente mayor que el encontrado en la quinua real Boliviana (530 mg/100g de materia
seca), considerada como la mejor quinua a nivel internacional y est dentro del rango mnimo de los
expeller de soya (600 - 790 mg/100g de materia seca). El valor obtenido para el microelemento
esencial, hierro es de 4.179, que al compararlo con la quinua, resulta significativamente menor al
rango mnimo reportado para la quinua blanca (Junn); 4.89 - 16,8 mg/100g de materia seca.
Respecto a las vitaminas analizadas (tabla 39), detect la presencia de 0,31 mg/g de tiamina,
no reportndose riboflavina ni niacina. La presencia de tiamina se detect debido a que se encuentra
ligada a las protenas, relacionndose de manera directa a ellas
(18)
. El valor de tiamina hallado en
comparacin al reportado por la quinua (tabla 44) esta dentro del rango de 0.23-1,16 mg/100g de
materia seca y menor para la semilla de soya; 1.1 mg/100g de materia seca
En referencia a la acidez titulable y pH; se obtuvo 0.00023 % de acidez (tabla 42) (gramos
de cido lctico por cada 100g de muestra) a un pH 5.89 (tabla 41).Su valor de acidez superior a 7,0
sugiere una alteracin microbiana de la harina. Es importante el pH, ya que, segn el pH propio del
alimento (acidez natural), se producir el crecimiento de un tipo u otros microorganismos, as como
tambin influenciar en las reacciones enzimticas y disponibilidad de nutrientes, entre otros.
Respecto a la determinacin de digestibilidad de protenas in vitro, el valor de nitrgeno

soluble en pepsina mostr en la tabla 45, un promedio de protena indigerible de 4.48 y la protena
digerible o total de 86.890.325. Este valor es muy prximo al encontrado por
- 101 -
Vela, L, et al. 1994
(8)
(92.24%). La digestibilidad por el mtodo enzimtica celulasa, reporto: 90.711.73 (tabla 46),
valor similar a los obtenida por expeller de soya para ganado de leche y carne, 79-93%(41) .La
digestibilidad obtenida en los residuos permite conocer el valor nutricional verdadero de las fuentes
de protenas para rumiantes. La alta digestibilidad es muestra de un menor dao de la protena
durante los procedimientos de extraccin; ya que, a una temperatura excesivamente alta y por
tiempo prolongado hacen que las protenas cambien su configuracin, disminuyendo su digestibilidad,
a travs de la reaccin de Maillard. La digestibilidad disminuye con el incremento de la madurez
del cultivo, principalmente como resultado del aumento en el contenido de carbohidratos
estructurales,pared celular que son menos digestibles que
celular
los componentes solubles, contenido
(18, 69)
En la determinacin de aminocidos la prueba de solubilidad para la mejor extraccin de

protenas de acuerdo a los resultados se obtuvo un mayor rendimiento con el buffer TRIS-HCL
50mM a un pH 6.5, corroborado por el mtodo de Lowry. En la determinacin de protenas Lowry
present los siguientes resultados para TRIS-HCL, 46%; agua bidestilada, 37% y suero fisiolgico,
41%. El rendimiento de protena soluble obtenido fue de 10.38% en comparacin con los residuos de
la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L., y 19.90% en comparacin con las protenas totales.
En la metodologa para la determinacin de aminocidos, previa al anlisis cromatogrfico, las
muestras se hidrolizaron en medio cido y altas temperaturas por dos horas. En estas condiciones,
existen reportes de degradacin de triptfano, asparagina, glutamina y lisina que explica por qu no
fue posible determinar el triptfano, y apunta a la posibilidad que los datos de lisina sean
subestimados. Hidrlisis alcalinas de alimentos permiten determinar con mayor exactitud el
triptfano, ya que de esta manera se asegura una mejor solubilidad y estabilidad de su estructura
(74)
La determinacin de la lisina presenta problemas adicionales suele reaccionar a temperaturas elevadas

con grupos carbonilos o con la misma protena, por lo que disminuye su disponibilidad para la
cuantificacin; al igual que con el triptfano: mediante una hidrlisis alcalina se consiguen mejores
resultados (74, 75). En cuanto al anlisis cromatogrfico, la metodologa empleada para la determinacin
de aminocidos en esta investigacin tiene la ventaja de ser rpida y sensible; ya que, en menos de
una hora de anlisis de muestra se identifican simultneamente 16 aminocidos. El perfil de
aminocidos obtenido en esta investigacin al ser comparado con el patrn de la FAO/OMS y los
resultados obtenidos por Hamaker et al. 1992
(9)
se observan algunas diferencias (tabla 52); se debe
destacar que los residuos industriales de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L., presentan
isoleucina, leucina y treonina en mayores proporciones que los del patrn, lo cual es atractivo cuando
se desea elegir un alimento candidato para preparar mezclas nutritivas para consumo humano y
animal. En los residuos, el aminocido limitante es la histidina (PQ 48%), con un valor superior al del
trigo (PQ 44%) e inferior a la leche (PQ 100%). En vista que el triptfano no es un aminocido
limitante, que reportan la literatura, el no haber generado este dato en el presente estudio, no es un
factor crtico para evaluar la calidad de la protena.
- 102 -
Del ensayo de toxicidad, actualmente se acepta desde el punto de vista regulatorio que no es
necesario definir un valor puntual de DL50 para una sustancia y que resulta prcticamente suficiente
ubicar dicha dosis en un slo rango
(62)
. Las regulaciones para la ejecucin de este tipo de estudio
alternativo de toxicidad aguda plantean que si no existen informes anteriores de toxicidad de la(s)
sustancia(s) que se investiga(n) es posible utilizar una dosis lmite de 2000 mg/kg de masa corporal,
que se ajusta al presente estudio dado que el extracto acuoso del residuo no ha sealado toxicidad en
su uso tradicional. En el ensayo realizado, los animales alcanzaron al final del estudio, un 100% de
supervivencia, durante el estudio no se observaron signos de toxicidad y los animales mostraron los
patrones normales de comportamiento de la especie. Los valores de peso corporal obtenidos en los
das 0,7 y 14 en ambos ensayos y sexos, mostraron tendencia a su incremento continuo (tabla 55,
figura 31) similar a la curva de peso reportada por la literatura internacional (tabla 56) (62, 63). Adems
en la tabla 59-60 se puede observar que el anlisis estadstico (ANOVA) no arrojo diferencias entre
grupos (p>0.05).Se observ una ligero aumento de peso de los tratados frente a los controles para
ambos sexos (figura 32 33); sin embargo, mediante el test t-Student, este aumento no fue
significativo (p>0.05) al compararse con el grupo control, igual sexo (cuadro 62 63). El peso
corporal constituye uno de los principales indicadores de posibles trastornos orgnicos en los estudios
de toxicidad y su disminucin podra considerarse como efecto
txico, estos resultados no
demostraron que el extracto del residuo de la extraccin de Plukenetia volubilis L. no afect el peso
corporal de los animales
(64,76)
. El ensayo confirma el estudio de Gorriti et., de que al no ocurrir
muertes ni signos de toxicidad aparente y de acuerdo a la clasificacin de la OECD se considera que

los residuos de Plukenetia volubilis L., sacha inchi no son txicos y se encuentra como No
Clasificada.
De acuerdo a los resultados obtenidos se confirma que los residuos industriales de la extraccin del
aceite de Plukenetia volubilis L., sacha inchi posee un alto valor nutritivo y no txico para ser
utilizado en muchas formulaciones de mezclas nutritivas en la industria alimentaria.
- 103 -
VI.
CONCLUSIONES
1. En el estudio farmacognstico del residuo industrial de la extraccin del aceite de Plukenetia

volubilis L., se observ presencia de azcares reductores; triterpenos; glicosidos y saponinas
de ncleo triterpenico, de acuerdo a las reacciones de coloracin especificas y manchas
caractersticas observadas en la CCF. El estudio cuantitativo present 1.3 x 10-5 g% de
taninos y 0.42g% de saponinas totales.
2. Los anlisis bromatolgicos confirmaron en el anlisis proximal que los residuos de la

extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L; en g% fueron: humedad, 5.09; protenas
totales, 34.26; extracto etreo, 37.33; fibra cruda, 3.16, cenizas, 3.24 y carbohidratos 20.84 ;
asimismo la determinacin en g%:pared celular, 25.66; contenido celular, 74.34; fibra
detergente neutra 16.33 y en el contenido de vitaminas de residuos de la extraccin del aceite
de Plukenetia volubilis L., se hallo tiamina tiamina en 0.31 mg % y los % de minerales
fueron para calcio, 317.83mg%; fsforo, 560 mg % y de hierro, 4.79 mg %.
3. Respecto a las protenas por mtodos enzimticos fue de 86.89% para el mtodo enzimtico
nitrgeno soluble en pepsina y 90.71% para el mtodo enzimtico de celulasa; asimismo los
valores de aminocidos esenciales obtenidos en mg/g fueron: histidina, 9; isoleucina, 180;
Leucina, 69; lisina, 39; metionina, 13; fenilalanina+tirosina, 31; treonina, 68 y valina 31.
4. En las condiciones del ensayo no se produjo mortalidad ni se manifestaron signos indicativos

de toxicidad en los animales. La toxicidad de los residuos se encuentra por encima de
2000mg/kg de masa corporal, calificndose segn el Sistema Global Armonizado, como No
clasificadas (no txicas).
- 104 -
VII. RECOMENDACIONES
1.
Aprovechar la fibra diettica del residuo de la extraccin de aceite de Plukenetia

volubilis L. en la industria alimentaria como nutrimento debido a su efecto protector
frente a diversas patologas.
2.
Aplicar los residuos de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L. (sacha inchi) a

procesos tecnolgicos para la industria alimentaria (consumo humano y animal),
cosmtica , industria farmacutica e ingeniera ambiental.
3.
Realizar estudios a la cscara de la semilla de Plukenetia volubilis L. sacha inchi para la

determinacin de fibra soluble e insoluble y ser aprovechados como fibra alimentara.
4.
Realizar investigaciones complementarias de posibles antinutrientes existentes en los

residuos de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L (sacha inchi) que influyen
en la digestibilidad y calidad de las protenas.
5.
Realizar estudios de la caracterizacin bioqumica de las protenas de residuos de la

extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L. (sacha inchi); por ser la macromolcula
biolgica ms abundante y de mayor demanda internacional
- 105 -
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. INIA [sede Web]Tarapoto: Gloria Arvalo Garazata;2000[acceso 3 de noviembre de 2007].

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4. Gorriti, A.; Crdova, A.; Arroyo, J.; et al. Estudio farmacognstico, toxicidad aguda oral y
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del aceite de de sacha inchi (Plukenetia volubilis L.). X Jornadas de Investigacin en Ciencias
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8. Higuchi, S. Proyecto de Ley N 11367/2004 C12: Ley que declara al sacha inchi como
patrimonio gentico Nacional y producto alternativo en la lucha contra la pobreza. Lima, 08
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- 111 -
IX.
ANEXOS
ANEXO N1. Certificacin botnica de Plukenetia volubilis L. (sacha inchi)
- 112 -
ANEXO N2. Informe de ensayo de la determinacin de fsforo,clcio y hierro de los residuos

industriales de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L.sacha inchi
- 113 -
ANEXO N3. Certificado de ensayo de la determinacin de las vitaminas tiamina, riboflavina,

niacina de los resduos industriales de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilisL.sacha
inchi.
ANEXO 4. Semilla y residuos de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L. sacha inchi
- 114 -
Fotografa N7. Semillas de Plukenetia volubilis L. sacha inchi.
Fotografa N8. Homogenizado deshidratado de las muestras de los

residuos industriales de la extraccin de aceite de Plukenetia volubilis L.
sacha inchi.
- 115 -
ANEXO 5. Ambientes del laboratorio de Farmacognosia y Qumica Orgnica
Fotografa N9. Filtracin del extracto acuoso al

20% para la determinacin de taninos.
Fotografa N 11. Extraccin metanol-agua por

reflujo del residuo desengrasado con n-hexano para
la determinacin y cuantificacin de saponinas
totales.
Fotografa N10. Etapa B en la determinacin de

taninos, para luego ser ledos a 700nm.
Fotografa N 12.Concentracin de la
fraccin butanlica en rotavapor para la
determinacin y cuantificacin de saponinas
totales.
- 116 -
ANEXO 6. Procedimiento en la cuantificacin de saponinas totales y de anlisis proximal en

los residuos de la extraccin del aceite de Plukenetia volubilis L.
E1
E2 E3
E4 E5
E6
Fotografa N 13. Preparacin del patrn se

saponinas para la realizacin de la curva de
calibracin de saponinas totales.
Fotografa N 14. Sembrado del extracto

alcohlico de Saponaria quillaja y de sacha inchi
para la CCF
Fotografa N 15. Determinacin de humedad de

la muestra de Plukenetia volubilis L. por el mtodo
gravimtrico.
Fotografa N 16. Aparato extractor tipo Goldfisch
Fotografa N 17. Determinacin de fibra
Fotografa N 18. Filtracin al vaco de la
insoluble de la muestra de Plukenetia volubilis L. por

el mtodo de detergente neutro.
de 6 unidades para la determinacin de extracto etreo

de la muestra de Plukenetia volubilis L.
hidrlisis acida de la muestra de Plukenetia volubilis

L. en la determinacin de fibra cruda, por el mtodo
de hidrlisis acida y bsica.
- 117 -
ANEXO 7. Ambiente del Laboratorio de Bioqumica y Nutricin Animal de la Facultad de

Medicina Veterinaria de la UNMSM.
(21)
Fotografa N 19. Digestin del hidrolizado acido y

bsico de la muestra de Plukenetia volubilis L., para la
determinacin de fibra cruda
Fotografa N20. Reaccin del catalizador y la

muestra de Plukenetia volubilis L. en el tubo para
digestin para la determinacin de protena por el
mtodo Kjeldahl.
Fotografa N 21. Digestin de la materia orgnica
Fotografa N22. Destilacin de la muestra
de la muestra de Plukenetia volubilis L. en los tubos

para digestin para la determinacin de protena por el
mtodo Kjeldahl.
digerida de Plukenetia volubilis L.con hidroxido de

sodio
en el equipo Macrojeldahl SISTEMA
TECATOR.
Fotografa N23. El destilado bajo la forma de

borato de amonio con tres gotas del indicador de
tashiro por triplicado.
Fotografa N24. Punto final de la titulacin
(violeta), con acido sulfrico para la determinacin

de protena por el mtodo de Kjeldhal.
- 118 -
Fotografa N25. Peso de las muestras en tubos

para digestin
para la determinacin de
digestibilidad in vitro por el mtodo enzimtico por
pepsina.
Fotografa N26. Muestras por triplicado para la

determinacin de digestibilidad in Vitro por el
mtodo enzimtico por pepsina y celulasa.
Fotografa N27. Incubacin en bao mara a 39C
Fotografa N 28. Adicin de HCl 6N para
de las muestras con la solucin enzimtica durante 24

horas, 48horas, 72 horas para la determinacin de
digestibilidad in Vitro por el mtodo enzimtico por
celulasa
detener la digestin de la solucin enzimtica por

celulasa, a la cual se le agregara 6mL de pepsina
buffer y se incubara a 39C por 24 horas ms.
M1
M2 E4
E3
E2
E1
Fotografa N 29. Preparacin del material, muestra
Fotografa N30. Preparacin del estndar de
y reactivos para la determinacin de fsforo por el

mtodo espectrofotomtrico con molibdovanadato
fsforo(KH2PO4)con solucin molibdovanadato para

la realizacin de la curva de calibracin(E) y
determinacin de fsforo en muestra (M).
- 119 -
ANEXO 8. Ambiente del Laboratorio Centro de Investigacin de Bioqumica y nutricin

(CIBN) de la facultad de Medicina Humana de la UNMSM.
Fotografa
N31.Extraccin
de
muestra
deshidratada y desengrasada de sacha inchi con TRIS
HCL 50mM pH 6.5 para el fraccionamiento y
purificacin de protenas por cromatografa en
columna.
Fotografa N32. Dializacin de la fraccin de
Fotografa N 33. Muestra liofilizada de protena
Fotografa N34. Trasvasado de una cantidad de

muestra liofilizada en tubos eppendorff para el
procedimiento de hidrlisis.
protena soluble (pico I) para la eliminacin de la sal.
soluble
Fotografa N 35. Hidrlisis de la protena con

HCL 6N en vacio con el equipo Reacti-Therm marca
PIERCE a una temperatura de 150C por 2 horas.
Fotografa N36.Secado al vaco del hidrolizado y

derivatizado de la muestra de Plukenetia volubilis L. y
estndar.
- 120 -
Fotografa N 37. Hidrolizado de la muestra de
Fotografa N38. Estndar y muestra de Plukenetia
Plukenetia volubilis L. al 20 y 30%.
volubilis L. al 20 y 30% desecada y derivatizada con

buffer de acetonitrilo, piridina, agua y trietilamina con
fenilisotiocianato
Fotografa N 39. Filtracin al vaco de los

solventes y buffer de acetato de amonio previo a la
determinacin de aminocidos por HPLC.
Fotografa N40. Determinacin de aminocidos

de la muestra Plukenetia volubilis L. y estndar por
HPLC Elite la Chrom.
Fotografa N41. Anlisis de toxicidad aguda a

dosis nica realizado en el bioterio de Farmacia y
Bioqumica. Conformacin de dos grupos tratados y
dos controles de ambos sexos por grupo.
Fotografa N 42. Administracin del extracto
acuosos de Plukenetia volubilis L por va oral mediante

cnula intragstrica a dosis nica de 2000 mg/Kg de
masa corporal
- 121 -

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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

Estudio farmacognstico y bromatolgico de los

A mis padres: Elas Mondragn Silva y Sara Tarrillo Linarez

A mis hermanos: Oscar Elas, Edgar Ronal e Ybett Roco.

A mi Madrina: Orfelina Cotrina Meja.

A Miguel ngel Inocente.

A mi Directora de Tesis: Dra. Arilm Gorriti Gutirrez, por creer

llevar a acabo sta investigacin, gracias

sinceramente por su comprensin, por su tiempo y por cada una de las

A mi Co- Asesora, Mg. Teresa Arbaiza Fernndez, por su

CENTRO DE INVESTIGACIN DE BIOQUMICA Y NUTRICIN

A la Mg. Ines Arnao Salas, mi eterno agradecimiento y gratitud

en el desarrollo de la determinacin cualitativa y

cuantitativa de aminocidos y sobre todo por su gran amistad.

agradecimiento y gratitud por ampliar mis conocimientos

Un agradecimiento muy especial y mi gratitud a los Docentes de la

A todos los trabajadores del Instituto CIBN de la UNMSM por su apoyo,

A mi tutora del HNGAI, Dra. Rosario Chipana Florez; por su amistad,

A todos mis compaeros y amigos de la Facultad de Farmacia y

Y a todos los dems no mencionados. Dios los

Al Presidente y distinguidos Miembros del jurado por sus sugerencias y aportes de

Dra. Eloisa Maximina Hernandez Fernandez

Q.F. Luz Fabola Guadalupe Sifuentes

2.2. Estudio Farmacognstico

Datos etnobotnicos y etnofarmacolgicos

2.2.1.1. Datos etnobotnicos

2.2.1.2. Uso etnofarmacolgico

2.2.3.1. Ubicacin taxonmica

2.2.3.2. Descripcin morfolgica

2.3. Estudio bromatolgico

2.3.4.1. Cromatografa lquida de alta resolucin en fase reversa

2.3.4.2. Mtodos de derivatizacin para la separacin cromatogrfica

2.3.4.3. Reactivos de derivatizacin de precolumna

Fluorenilmetil cloroformato (FMOC-Cl)

Inters de la fibra diettica

Mercado del sacha inchi

2.5.1.1. Comercio internacional

2.5.1.2. Comercio nacional

2.5.2.1. Normatividad y gestin de residuos slidos

2.5.2.2. Manejo de residuos slidos

2.5.2.3. Los residuo de acuerdo a los mtodos de extraccin del aceite

UNMSM-Facultad de Farmacia y Bioqumica

Bach. Iris Giovana Mondragn Tarrillo

III. PARTE EXPERIMENTAL

3.1. Materiales, equipos y reactivos

Obtencin y preparacin de la muestra

3.2.2.1. Anlisis cualitativo

3.2.2.1.1. Anlisis cromatogrfico (CCF)

3.2.2.2. Determinacin cuantitativa de taninos

3.2.2.3. Determinacin cuantitativa de saponinas totales

3.2.3.1. Estudio qumico proximal

3.2.3.2. Determinacin de minerales y oligoelementos

3.2.3.3. Determinacin de vitaminas

3.2.3.4. Digestibilidad de protenas in vitro

3.2.3.4.1. Mtodo de pepsina y cido clorhdrico

3.2.3.4.2. Mtodo enzimtico por celulasa

3.2.3.5. Determinacin de aminocidos por HPLC

3.2.4. Evaluacin de la toxicidad aguda a dosis limite

4.1. Estudio Farmacognstico

4.1.1. Ensayo organolptico

4.1.2. Anlisis cualitativo

4.1.3. Anlisis cuantitativo de taninos y saponinas totales

4.1.3.1. Determinacin cuantitativa de taninos