Evaluacion Antimicrobiana

EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS
EXTRACTOS ETANLICOS Y/O ACEITES ESENCIALES DE LAS

ESPECIES VEGETALES Valeriana pilosa, Hesperomeles ferruginea,
Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata FRENTE A
MICRORGANISMOS PATGENOS Y FITOPATGENOS
ANDREA JIMENA LIZCANO RAMN

JENNY LISSETH VERGARA GONZLEZ
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
Bogot D.C., Colombia

Julio 18 de 2008


TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al titulo de
MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
Bogot D.C.
Julio 18 de 2008
ii


APROBADO
_____________________________
Mara Eugenia Torres
Microbiloga Industrial
Director
___________________________
Alberto Gmez Meja
Doctoris Scientiae Juridicae
Codirector
______________________________
Prof. Miguel Pinzn
Asesor Estadstico
iii


APROBADO
______________________________
________________________________
Ingrid Schuler. Phd

Decana Acadmica
Facultad de Ciencias
Janeth Arias Palacios M.Sc.

Directora de Carrera
Microbiologa Industrial
iv
DEDICATORIA
Durante estos aos ha habido momentos inolvidables, para alegrarse, para

entristecerse pero sobre todo para sentirse orgulloso de haber terminado un camino
bastante largo. Cuando ya estoy a unas pocas semanas de graduarme, es que me doy
cuenta de tantos momentos que tal vez, pasaron desapercibidos, y ahora llegan como
buenos recuerdos. Muchsima gente involucrada en estos aos han hecho que este
tiempo no fuera una lucha sino ms bien, como una aventura. A todos
ellos.Muchas Gracias.
Dedico esta pgina a mis padres: Eduardo y Elizabeth, mis hermanos: Eli, Caro y
Jorge, mi novio Hctor, a Dios, Ecopetrol y amigos, a los que me han enseado que
tenemos algo muy importante para ofrecernos unos a otros y a todos aquellos que
han logrado pasar toda la clase de experiencias, mirando el miedo cara a cara, con
fuerza, valor y confianza, para con orgullo decir: He sobrevivido una vez ms, y
estoy en capacidad de manejar lo que venga .
Jenny Lisseth Vergara Gonzlez
Dedico este trabajo a todas las personas que me acompaaron en el transcurso de mi
vida, en especial, a mi pap, m mam, mis hermanas (Martha y Liliana), mi ta Libia
por apoyarme en los momentos en que mas los necesite, ayudarme y aconsejarme en
los momentos ms duros. Aquellas personas que me soportaron durante estos aos, a
quienes con regaos y un poco de afn por verme crecer como persona supieron
comprenderme y aquellos que tal vez no me vieron como la mejor pero siempre con
un pensamiento de que podra serlo.
A todos ellos Gracias.
Andrea Jimena Lizcano Ramn
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos al Jardn Botnico de Bogot D.C Jos Celestino Mutis por facilitarnos
materiales y equipos para el desarrollo de este trabajo.
Al equipo de trabajo de las instalaciones de Subdireccin Cientfica por su
colaboracin, paciencia y dedicacin para la culminacin de nuestro trabajo de grado.
A la Microbiloga Industrial Mara Eugenia Torres por sus consejos y por compartir
desinteresadamente sus amplios conocimientos y experiencia.
A Freddy Alejandro Ramos por transmitirnos sus conocimientos y darnos seguridad
Al Dr. Alberto Gmez Meja por su confianza y apoyo incondicional
A Hctor Lancheros por su contribucin a la realizacin de este estudio aportndonos
su orientacin estadstica en la elaboracin y discusin de nuestro trabajo de grado.
Al profesor Miguel Pinzn por su compromiso y conocimientos estadsticos
vi
LISTA DE ABREVIATURAS
PDA (Agar papa dextrosa)

DCM (Diclorometano)
EX1 (Extracto etanlico hojas de Valeriana pilosa)
EX2 (Extracto etanlico hojas de Hesperomeles ferruginea)
EX3 (Extracto etanlico hojas de Myrcianthes rhopaloides)
EX4 (Extracto etanlico hojas de Passiflora manicata)
CDC (Centro para el Control y Prevencin de Enfermedades)
FR1 (Fase acuosa de Extracto hojas Passiflora manicata)
FR2 (Fase diclorometano de Extracto hojas Passiflora manicata)
FR3 (Fase alcohol isoamlico de Extracto hojas Passiflora manicata)
AE1 (Aceite esencial de hojas de Myrcianthes rhopaloides)
C+
(Control positivo)
C-
(Control Negativo)
Cm (Cloramfenicol)
gl
(Grados de libertad)
vii
TABLA DE CONTENIDO
Pg
1. INTRODUCCIN
2. MARCO TERICO
2.1 GENERALIDADES METABOLITOS SECUNDARIOS
2.1.1 Antecedentes de los metabolitos secundarios de origen vegetal
2.1.2 Importancia de los metabolitos secundarios
2.1.3 Metabolito secundario
2.1.4 Metabolismo secundario
2.2 EXTRACTOS
2.2.1 Consistencia de los extractos
2.2.1.1 Extractos blandos
2.2.1.2 Extractos firmes o de consistencia pilular
2.2.1.3 Extractos secos
2.2.1.4 Extractos fluidos
2.2.2 Caractersticas de los extractos
2.2.3 Conservacin de los extractos
2.3 METODOS
2.3.1 Mtodos de extraccin
2.4 MOLCULAS ACTIVAS EN EL MBITO MEDICINAL E INDUSTRIAL
2.4.1 Los Alcoholes
2.4.2 Los Fenoles
2.4.3 Cumarinas
2.4.4 Alcaloides
2.4.5 Los Aldehdos
2.4.6 Los Terpenoides
2.4.7 Flavonas
2.4.8 Los Isoflavonoides
2.4.9 Los Alcaloides
viii
2.4.10 Quinonas
2.4.11 Tanoides o Taninos
2.4.12 Los aceites esenciales
2.4.13 Saponinas
2.4.14 Esteroides y Triterpenos
2.4.15 Cromenos y Benzofuranos
2.4.16 Sesquiterpenlactonas
2.5 ESPECIES VEGETALES
2.5.1 Valeriana pilosa
2.5.1.1 Caractersticas generales
2.5.1.1.1 Descripcin
2.5.1.1.2 Distribucin geogrfica
2.5.1.1.3 Fitoqumica
2.5.1.1.4 Usos
2.5.2 Myrcianthes rhopaloides
2.5.2.1 Caractersticas generales de la especie
2.5.2.1.2 Distribucin Geogrfica
2.5.2.1.3 Propagacin tradicional:
2.5.2.1.4 Cosecha
2.5.2.1.5 Usos
2.5.2.1.6 Bromatologa y Aporte Nutricional
2.5.3 Passiflora manicata
2.5.3.1 Caractersticas generales de las especies
2.5.3.1.3 Usos
2.5.4 Hesperomeles ferruginea
ix
2.5.4.1.3 Usos
2.5.4.1.4 Fitogeografa y ecologa
2.6 MICROORGANISMOS SELECCIONADOS
2.6.1 Hongo fitopatgeno
2.6.1.1 Alternaria sp.
2.6.2 Microorganismos patgenos
2.6.2.1 Candida albicans
2.6.2.2 Staphylococcus aureus
2.6.2.3 Escherichia coli
2.6.2.4 Bacillus subtillis
2.7 ANTIMICROBIANOS
2.7.1 CLORAMFENICOL
2.7.1.1 Origen
2.7.1.2 Mecanismos de accin del cloramfenicol
2.7.1.3 Mecanismos de resistencia bacteriana al cloramfenicol
2.7.1.4 Constitucin qumica
2.7.1.5 Propiedades
2.7.2 GRISEOFULVINA
2.8 MTODOS DE EVALUACIN ANTIMICROBIANA
2.8.1 Mtodo de difusin en gel
2.8.2 Mtodo de dilucin
2.8.3 Mtodo de Bioautografia
3. FORMULACIN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN
3.1 Formulacin del problema
3.2 Justificacin de la Investigacin
4. OBJETIVOS
4.1 Objetivo General
4.2 Objetivos Especficos

5. MATERIALES Y MTODOS
5.1 LOCALIZACIN
5.2 RECOLECCIN DE LAS MUESTRAS
5.3 TRATAMIENTO DEL MATERIAL VEGETAL
5.4 OBTENCIN DE EXTRACTOS
5.4.1 Extracto Etanlico
5.4.2 Aceite Esencial
5.5 MICROORGANISMOS
5.5.1 Cepas
5.5.2 Aislamiento de las cepas
5.6 ENSAYOS BIOLGICOS
5.6.1 Prueba de susceptibilidad antimicrobiana
5.6.1.1 Tcnica de difusin de disco en Agar
5.6.1.1.1 Bacterias
5.6.1.1.2 Levadura
5.6.1.1.2.1 Evaluacin antifngica
5.6.1.1.3 Hongo
5.6.2 Ensayo biodirijido
5.7 DISEO DE LA INVESTIGACIN
5.8 ANLISIS ESTADSTICO
6. RESULTADOS Y DISCUSIN
7. CONCLUSIONES
8. RECOMENDACIONES
9. BIBLIOGRAFANEXOS
xi
NDICE DE GRFICAS
Grfica 1. Promedio de halos de inhibicin (mm) Vs. Extractos vegetales frente al
control positivo para S. aureus.
control positivo para E. coli.
control positivo para B. subtillis.
control positivo para C. albicans.
control positivo para Alternaria sp
Grfica 6. Dimetro de halos de inhibicin Vs. Microorganismos seleccionados para
las diferentes fases.
Grfica 7. Halos de inhibicin Vs. Fracciones para cada microorganismo
Grfica 8. Halos de inhibicin Vs Microorganismos seleccionados frente al aceite
esencial de M. rhopaloides
xii
INDICE DE FIGURAS
Figura 1. Valeriana pilosa
Figura 2. Myrcianthes rhopaloides
Figura 3. Passiflora manicata
Figura 4. Hesperomeles ferruginea
Figura 5. Caractersticas Macro y Microscpicas de Alternaria sp
Figura 6. Caractersticas Macro y Microscpicas de Candida albicans.
Figura 7. Caractersticas Macro y Microscpicas de Staphylococcus aureus
Figura 8. Caractersticas Macro y Microscpicas de Escherichia coli
Figura 9. Caractersticas Macro y Microscpicas de Bacillus subtillis
Figura 10. Rotavapor Heidolph LABOROTA 4000-EFFICIENT
Figura 11. Proceso para la obtencin de extractos a partir del material vegetal
Figura 12. Montaje Hidrodestilacin hojas de Myrcianthes rhopaloides
Figura 13. Fraccionamiento hojas de Passiflora manicata
Figura 14. Fase diclorometano (DCM) de extracto hojas Passiflora manicata
Figura 15. Fase Acuosa - Fase Alcohol Isoamlico de extracto hojas de Passiflora
manicata
Figura 16. Proceso para la obtencin de fracciones a partir del material vegetal
Figura 17. Ensayos biolgicos con extractos vegetales EX1 (Valeriana pilosa), EX2
(Hesperomeles ferruginea), EX3 (Myrcianthes rhopaloides), EX4 (Passiflora
manicata), C+ (Control positivo), C- (Control Negativo) frente a microorganismos
patgenos y fitopatgenos A. Escherichia coli, B. Candida albicans, C.
Staphylococcus aureus, D. Bacillus subtillis, E. Alternaria sp.
Figura 18. Ensayo biolgico de las fracciones (FR1: Fase acuosa, FR2: Fase
Diclorometano, FR3: Alcohol isoamilico) del extracto de Passiflora manicata frente
a E. coli
Figura 19. Ensayo biolgico del aceite esencial del extracto de M. rhopaloides frente
A. B. subtillis y B. C. albicans
xiii
INDICE TABLAS
Tabla 1. Anlisis bromatolgicos proximales para M. rhopaloides (contenido/100g

de pulpa)
Tabla 2. Peso en gramos del material vegetal a extraer.
Tabla 3. Especies, Parte a estudiar y Extractos a evaluar
Tabla 4. Tamao halos de inhibicin (mm), promedio, desviacin estndar de
extractos vegetales de hojas de Valeriana pilosa, Hesperomeles ferruginea,
Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata para S. aureus.
Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata para E. coli.
Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata para B. subtillis.
Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata para C.albicans.
Myrcianthes rophaloides y Passiflora manicata para Alternaria sp..
Tabla 9. Tabla anlisis de varianza para los efectos de dos factores
Tabla 10. Prueba de comparacin de medias de Tukey para microorganismos
seleccionados
Tabla 11. Prueba de comparacin de medias de Tukey para extractos
Tabla 12. Anlisis de varianza para S. aureus
Tabla 13. Prueba de comparacin de medias de Tukey para S. aureus
Tabla 14. Anlisis de varianza para E. coli
Tabla 15. Prueba de comparacin de medias de Tukey para E. coli
xiv
Tabla 16. Anlisis de varianza para B. subtillis

Tabla 17. Prueba de comparacin de medias de Tukey para B. subtillis
Tabla 18. Anlisis de varianza para Candida albicans.
Tabla 19. Prueba de comparacin de medias de Tukey para Candida albicans
Tabla 20. Anlisis de varianza para Alternaria sp.
Tabla 21. Prueba de comparacin de medias de Tukey para Alternaria sp.
fraccionamiento de hojas de Passiflora manicata para E. coli.
fraccionamiento de hojas de Passiflora manicata para S. aureus.
fraccionamiento de hojas de Passiflora manicata para B. subtillis.
fraccionamiento de hojas de Passiflora manicata para Candida albicans.
Tabla 26. Tamao halos de inhibicin (mm), promedio, desviacin estndar y de
fraccionamiento de hojas de Passiflora manicata para Alternaria sp.
seleccionados
Tabla 29. Prueba de comparacin de medias de Tukey para fracciones.
Tabla 30. Anlisis de varianza para S. aureus con las diferentes fracciones
xv
Tabla 40. Tamao halos de inhibicin (mm), promedio, desviacin estndar de aceite
esencial de hojas de Myrcianthes rhopaloides para B. subtillis.
esencial de hojas de Myrcianthes rhopaloides para S. aureus.
esencial de hojas de Myrcianthes rhopaloides para E. coli.
esencial de hojas de Myrcianthes rhopaloides para Alternaria sp.
esencial de hojas de Myrcianthes rhopaloides para Candida albicans.
seleccionados con respecto al aceite esencial.
xvi
INDICE DE ANEXOS
ANEXO 1
PREPARACIN AGAR MUELLER HINTON
ANEXO 2
PREPARACIN AGAR CHROMOCULT
ANEXO 3
PREPARACIN AGAR PAPA DEXTROSA (PDA)
ANEXO 4
PREPARACIN AGAR BAIRD PARKER
ANEXO 5
PREPARACIN DE AGAR BPLS (Verde brillante, Rojo de fenol,
Lactosa y Sacarosa)
xvii
RESUMEN
El presente trabajo se realiz en los laboratorios de las
instalaciones de la
Subdireccin Cientfica del Jardn Botnico de Bogot Jos Celestino Mutis, con el
fin de observar y determinar el efecto antimicrobiano de extractos etanlicos
vegetales
y aceite esencial obtenidos a partir de 4 especies Valeriana pilosa,
Hesperomeles ferruginea, Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata priorizadas

dentro del proyecto de Uso Sostenible del Distrito Capital y la regin frente a
microorganismos patgenos
Escherichia coli, Bacillus subtillis, Staphylococcus
aureus, Candida albicans y un hongo fitopatgeno Alternaria sp, cepas adquiridas de

la Pontificia Universidad Javeriana.
Para la obtencin de los extractos etanlicos se utiliz el material vegetal seco
previamente triturado, el cual fue macerado en frio utilizando como solvente etanol
durante 48 horas, se realiz
reflujo con etanol-agua(9:1) para su posterior
concentracin a presin reducida. Para obtener aceite esencial a partir de las hojas de
Myrcianthes rhopaloides se utiliz la tcnica de hidrodestilacin.
Luego de obtener los extractos a evaluar se midi la actividad antimicrobiana
utilizando la tcnica de difusin de disco en agar de Kirby-Bauer, prueba que
permiti medir la suceptibilidad In Vitro de los microorganismos patgenos y
fitopatgenos seleccionados frente a sustancias de origen natural con potencial
antimicrobiano, utilizando 300 g de
extracto obtenido por especie vegetal,
utilizando de igual manera como control positivo 10 g de cloramfenicol y agua

estril como control negativo.
Al analizar los resultados de los diferentes ensayos se observ que el extracto
etanlico de Passiflora manicata present mayor actividad antimicrobiana frente a E.
coli, Candida albicans y B. subtillis, razn por la cual se seleccion para fraccionar el
extracto crudo utilizando como solventes diclorometano, agua y alcohol isoamlico,
xviii
demostrando que la fase acuosa fue la de mayor efecto inhibitorio frente a todos los
microorganismos evaluados. Los resultados obtenidos para el aceite esencial obtenido
con las hojas de Myrcianthes rhopaloides mostraron inhibicin solo frente a Candida
albicans.
En este trabajo se concluy que Passiflora manicata fue el extracto etanlico que
present mayor accin frente a todos los microorganismos, permitiendo realizar el
fraccionamiento con los diferentes solventes identificando a la fase acuosa como la
responsable del principio activo con potencial antimicrobiano; cabe anotar que para
dar continuidad a futuras investigaciones entorno a la potencialidad antimicrobiana de
la especies es necesario el aislamiento y la elucidacin de la molcula capaz de
inhibir a los microorganismo seleccionados.
xix
ABSTRACT
The present work was performed in the Laboratories of the Scientific Subdirection of
Botanical Garden of Bogot Jos Celestino Mutis, in order to observe and determine
the antimicrobial effect of ethanolic plant extracts and essential oil, obtained from 4
species Valeriana pilosa, Hesperomeles ferruginea, Myrcianthes rophaloides and
Passiflora manicata chosen for the Sostenible Use project of the Capital District and
the Region. These species were tested against the pathogen microorganisms
Escherichia coli, Bacillus subtillis, Staphylococcus aureus, Candida albicans and the
phythopathogen fungus Alternaria sp, which were acquired from the storage of the
Pontificia Universidad Javeriana.
For the obtainment of the ethanolic extracts we used dried plant material that was
previously crushed; this was cold macerated using ethanol as a solvent during 48
hours. We used reflux ethanol-water (9:1) in order to concentrate it in a reduced
pressure.
For the obtainment of the essential oil from the leaves of Myrcianthes rophaloides
we used the hydrodistillation technique.
After, we measured the antimicrobial activity using the difussion disc agar technique
of Kirby-Bauer. This technique allows us to measure the In vitro oversensitivity of
the pathogen and phytophatogen microorganisms, to the natural origin substances
which have antimicrobian potential. We took 300 g of each extract, using 10 g of
cloramfenicol as a postive control and water as a negative control.
As a result of the different tests, we observed that the ethanolic extract of Passiflora
manicata had a better antimicrobial activity against E.coli, Candida albicans and B.
subtillis. For this reason we chose the extract of Passiflora manicata and divided it
using dichloromethane, water and isoamilic alcohol as solvents. We found that the
xx
aqueous phase showed the highest antimicrobial effect against all the evaluated
microorganisms.
The results for the essential oil which was obtained from the leaves of Myrcianthes
rophaloides showed that Candida albicans was inhibited the most.
In this work we concluded that Passiflora manicata was the ethanolic extract that
showed the best results against all the microorganisms, permiting the division with
the different solvents. We identified that the aqueous phase was responsible for all of
the principle actions because there was the antimicrobial potential.
In order to continue fututre investigations about antimicrobial potential of plant
species it is necessary to find and isolate the specific molecule able to inhibit the
microorganism chosen.
xxi
1. INTRODUCCIN
Se puede afirmar que el uso de las plantas medicinales naci con el hombre. Desde
tiempos prehistricos hasta comienzos del siglo XIX se utilizaron por ensayo error,
aquellos extractos que brindaban curar enfermedades. Esta prctica mdica pasaba y
se perfeccionaba de generacin en generacin, por lo cual se denomin medicina
tradicional.
Hasta el siglo XVIII se conocieron las propiedades curativas de las plantas, su efecto
sobre el organismo y su modo de aplicacin, desconociendo en muchas de los casos
la composicin y caracterizacin de principios activos. Con el desarrollo de las
teoras de la evolucin, herencia gentica, el uso del microscopio y el nacimiento de
ciencias como la fitoqumica, fue posible el reconocimiento y el aislamiento de
principios activos de muchas especies vegetales. La gran mayora de los principios
activos se han obtenido sintticamente en laboratorios, para su posterior uso en la
preparacin de medicamentos qumicos. Con el paso de los aos el consumo de
medicamentos sintticos se increment, desplazando cada vez ms el uso directo de
plantas medicinales alejndose as de la medicina tradicional.
Desde tiempos muy remotos las plantas han cumplido un papel importante en el rea
teraputica gracias a las mltiples propiedades que ellas poseen. Por esta razn en las
ltimas dcadas ha ido tomando cada da mayor importancia su estudio y el desarrollo
de tcnicas analticas que permitan la determinacin e identificacin de las sustancias
o principios activos contenidos en especies vegetales.
En la actualidad, el gran desafo para los pases ricos en biodiversidad es poder
vincular y convertir el conocimiento proveniente de los recursos biolgicos en
compuestos, procesos, mtodos, herramientas o productos tiles, como parte del
aprovechamiento y la explotacin sostenible de la diversidad biolgica en beneficio
de la sociedad.
xxii
Colombia cuenta con un extenso banco de germoplasma, rico en molculas activas de

gran inters para la industria farmacutica y
dada la gran disminucin de
disponibilidad, uso y aprovechamiento de especies vegetales que se encuentran en

ecosistemas de Distrito Capital y la regin, para entidades como el Jardn Botnico
Jos Celestino Mutis (JBJCM) como centro de investigacin y desarroll cientfico
en cumplimiento de sus objetivos misionales, contribuye con la generacin del
conocimiento en cuanto al uso y el aprovechamiento de especies vegetales
promisorias presentes en los ecosistemas del Distrito Capital y la regin.
Con base en lo anterior en aras de buscar alternativas de aprovechamiento y conocer
la presencia de principios activos en especies como Valeriana pilosa, Hesperomeles
ferruginea, Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata,
priorizadas como
potenciales dentro del proyecto de Uso Sostenible de los recursos vegetales del
Distrito Capital y la regini, se plante evaluar la actividad antimicrobiana de los
extractos etanlicos o aceites esenciales obtenidos a partir de las especies, frente a
microorganismos patgenos Escherichia coli, Bacillus subtillis, Staphylococcus
aureus, Candida albicans y el hongo fitopatgeno Alternaria sp utilizando la tcnica
de susceptibilidad microbiana., para determinar cual de los extractos presenta mayor
actividad antimicrobiana frente a los microorganismos seleccionados.
xxiii
2. MARCO TERICO
2.1 GENERALIDADES METABOLITOS SECUNDARIOS
2.1.1 Antecedentes de los metabolitos secundarios de origen vegetal
Aproximadamente hasta el ao 1800, apenas se haba progresado en el campo de la
Fitoqumicaii. Solo se conocan unas cuantas sustancias como el azcar de caa,
almidn, alcanfor y cido benzoico, debido a que su preparacin era sumamente
sencilla. Mezclas complejas como grasas, aceites, esencias, breas y resinas, se haban
utilizado y elaborado, aunque prcticamente no se saba nada acerca de su
composicin. Los primeros investigadores en el campo de la Fitoqumica no llegaron
a apreciar la extrema complejidad de las materias con que realizaban sus
investigaciones y carecieron casi por completo de las tcnicas necesarias para
conseguir un proceso autntico. Se quemaron grandes cantidades de plantas para
obtener cenizas y esos primitivos investigadores se desanimaron al encontrar
diferencias mnimas entre las cenizas de una planta venenosa y otra inocua. La
expresin, la extraccin acuosa y la evaporacin se haban empleado tiempo atrs en
la obtencin de azcar a partir de la caa de azcar. El farmacutico francs Nicols
Lmery (1645-1715) extendi el empleo de los procesos de extraccin y utiliz el
alcohol como disolvente (Torres C, 2004).
Robert Boyle (1627-1691) abandon la antigua teora de Aristteles de que la materia
est compuesta de cuatro elementos y aunque jams lleg a aislar ningn alcaloide es
evidente que iba bien encaminado cuando trat el opio con carbonato potsico y
alcohol (Torres C, 2004).
En 1747 se aisl la sacarosa de muchas plantas, entre ellas de la remolacha, por el
farmacutico alemn A.S. Marggraf (1707-1780). K. W. scheele (1742-1786), obtuvo
un gran xito en el campo de la Fitoqumica, al aislar los cidos ctrico, glico,
mlico, oxlico, tartrico y prsicoiii (Torres C, 2004).
xxiv
En el siglo XIX, los progresos alcanzan mayor rapidez. En 1803 se asla el primer
alcaloide, la narcotina, y le siguieron rpidamente muchos otros, como morfina,
estricnina, emetina. Entre 1813 y1823, Chevreul dilucid la naturaleza qumica de las
grasas y los aceites fijos (Torres C, 2004).
Hasta mediados del siglo XX, el principal empeo, en cuanto a la qumica de los
productos naturales, sigui siendo el aislamiento y determinacin de la estructura de
una amplia gama de compuestos. Resulta claro que se haban establecido los
principales tipos estructurales encontrados comnmente en las plantas. A partir de
entonces, la atencin de los qumicos respecto a los productos naturales fue virando
hacia la disolucin de las rutas biosintticas halladas en la planta (Torres C, 2004).
2.1.2 Importancia de los metabolitos secundarios
A lo largo de la historia, los metabolitos secundarios de las plantas han sido utilizados
por la humanidad convirtindose en una fuente inagotable de compuestos qumicos
y complejas sustancias activas, que desde hace muchos aos han sido explotadas por
el hombre (Torres C, 2004).
As mismo es importante destacar que a pesar de todos los esfuerzos de naciones,
instituciones gubernamentales y no gubernamentales e investigadores en aumentar el
nivel y el caudal de conocimientos adquiridos sobre las
trasformacin secundaria (de frutos, flores,
metodologas de
semillas, hojas y tallos) y de la
identificacin y caracterizacin de los metabolitos secundarios de especies vegetales

priorizadas, en la actualidad slo unos pocos metabolitos se utilizan de forma
industrial, por lo que se ha creado la necesidad de generar opciones y alternativas de
produccin enfocadas al
uso sostenible de todos aquellos recursos vegetales
disponible en el entorno trabajando activamente en la deteccin y caracterizacin de

sustancias producidas por diferentes especies promisorias
que pueden tener
aplicacin en la industria (cosmtica, farmacutica, textilera y agroalimentaria)

(Torres C, 2004).
xxv
2.1.3 Metabolito secundario

Son todas aquellas molculas activas generadas por diversas especies vegetales. Los
metabolitos son molculas que no son necesarias para el crecimiento y la
reproduccin de las plantas, pero cumplen con roles muy importantes en el reino
vegetal, pueden suponer una ventaja competitiva considerable (Torres C, 2004).
2.1.4 Metabolismo secundario
El metabolismo secundario compromete aquellos procesos qumicos que son nicos
para una planta dada y no son universales. Dicho metabolismo es la qumica que
conduce a la formacin de un producto natural. Algunas porciones de esta qumica
son comunes para un nmero de plantas diferentes o familias de plantas, pero
actualmente la qumica de los metabolitos secundarios es usualmente diferente de una
planta a otra, pues precursores qumicos comunes pueden conducir a resultados
totalmente diferentes (Torres C, 2004).
2.2 EXTRACTOS VEGETALES
Los extractos vegetales se han definido como un concentrado obtenido por
tratamiento de productos vegetales con solventes apropiados, tales como agua, etanol
o ter, de elementos solubles, constituidos por una mezcla de principios activos y
sustancias inertes que se producen de la totalidad o de partes de una planta fresca o
seca (Ruiz & Susunaga, 2000).
2.2.1 Consistencia de los extractos
Alzate en 1990, descubri la consistencia ideal que deban tener los extractos. De
acuerdo con este aspecto comnmente los extractos se clasifican en cuatro grupos:
blandos, firmes, secos y fluidos (Barreto J, 1997).
xxvi
2.2.1.1 Extractos blandos

Tienen la consistencia de la miel espesa; algunas veces, debido a la absorcin de la
humedad atmosfrica, presentan una consistencia menos densa (Barreto J, 1997).
2.2.1.2 Extractos firmes o de consistencia pilular
Como su nombre lo indica deben tener una estrecha semejanza con la masa con la
cual se fabrican o manufacturan las pldoras; deben tener la caracterstica especial de
no adherirse a los dedos (Barreto J, 1997).
2.2.1.3 Extractos secos
Anteriorrmente se les conoca con la denominacin de sales esenciales. Son los
extractos en los cuales el disolvente ha sido casi completamente eliminado. Contiene
tan solo del 5 al 8% de agua. Se reducen fcilmente a polvo y facilitan su
manipulacin y dosificacin. La forma farmacutica de extractos secos aparece en
varias farmacopeas (Belga, Norteamericana, noruega y mexicana), pero no indican un
mtodo exacto para la preparacin de este tipo de extractos. Golaz (1973) les dio el
nombre de extractos unitarios y los recomienda para la preparacin de tinturas y
jarabe (Barreto J, 1997).
2.2.1.4 Extractos fluidos
Son preparados en una forma tal que el peso del extracto corresponde exactamente al
peso de la sustancia empleada como medicamento, desecada al aire y pulverizada
(Barreto J, 1997).
xxvii
2.2.2 Caractersticas de los extractos

Estudios realizados por Corpas y Barrero entre 1988 y 1991, permitieron fundamentar
las siguientes caractersticas especficas de los extractos:
a. Los extractos bien preparados son de color ms o menos oscuros; cuando han
sido preparados al vaco, son ligeramente ms claros.
b. Algunos son de color caf amarillento, otros rojizos; los extractos
provenientes de hojas son verdosos debido a la clorofila.
c. Su aspecto debe ser liso, fino y homogneo.
d. Su olor y sabor son propiedades caractersticas de la materia prima que les ha
dado su origen. Cuando son mal preparados, adquieren olor a caramelo o
confitura poco conocida.
e. La solubilidad de los extractos es variable y est en relacin directa con el tipo
de preparacin al cual fueron sometidos.
f. Los extractos acuosos son completamente solubles en agua y producen una
solucin transparente, algunas veces ligeramente turbia, debido a que han sido
preparados con mucha anterioridad.
g. Los extractos alcohlicos son parcialmente solubles en agua y algunas veces
son totalmente insolubles, especialmente los extractos que han sido
preparados con alcohol fuerte tienen un excelente ndice de disolucin, en el
mismo ttulo alcoholimtrico del alcohol con el cual han sido preparados.
h. Los extractos alcohlicos preparados con hojas, dan soluciones coloreadas de
verde, pues la eliminacin de la clorofila no puede ser total. Cordell (1995)
propuso ensayos generales para someter a los extractos a pruebas especficas
xxviii
para observar su calidad
y composicin final. Estos trabajos fueron
remontados por Corpas, quien propuso realizar ensayos de identidad a los

extractos obtenidos (Barreto J, 1997).
2.2.3 Conservacin de los extractos
Labfarve (1995) determin las alteraciones y los diferentes mtodos de conservacin
de los extractos. Los extractos son medicamentos en donde la alteracin modifica y
varia notoriamente la naturaleza del producto. En principio, un extracto seco o de tipo
pilular se conserva mejor que un extracto acuoso. Esto no es totalmente exacto, pues
la naturaleza del producto interviene igualmente. Algunos extractos se descomponen
al aire, otros absorben humedad atmosfrica. Algunos se recubren de hongos y
permiten el desarrollo de grmenes bacterianos. Por otra parte, las alteraciones ms
frecuentes consisten en modificaciones qumicas no aparentes como sucede con los
extractos de flores verdes que por la oxidacin de la clorofila pierden su color. Los
extractos a base de alcaloides, bajan de ttulo, segn lo demuestran las
investigaciones de Fricotel y Mtin (1970). Esta disminucin del ttulo alcalidico, es
especialmente sensible a los extractos blandos y de aspecto pilular y bastante menos
notorio en los extractos secos (Barreto J, 1997).
Segn Corpas y Barriga (1993), la conservacin de los extractos es indispensable y
deben cumplir las siguientes condiciones:
a. Se deben conservar protegindolos de la luz.
b. Los envases deben estar bien tapados.
c. Se deben conservar en un medio ambiente seco (Barreto J, 1997).
Desde luego, son numerosos los mtodos que se han indicado para la conservacin de
los extractos. Para mayor comodidad ellos se pueden clasificar, en dos categoras
(Barreto J, 1997).
xxix
En el primer grupo tenemos aquellos a los cuales no se les ha adicionado ninguna

materia extraa. Al segundo grupo, por el contrario, pertenecen aquellos extractos
que han sido objeto de la adicin de productos extraos, de naturaleza fsico-qumica
definida (Barreto J, 1997).
2.3 METODOS DE EXTRACCIN
Deben obedecer a la informacin de la naturaleza qumica de las sustancias, presentes
en la planta y al propsito de la investigacin. En el caso de bsqueda de sustancias
para la comprobacin de actividad biolgica, la extraccin del material vegetal debe
hacerse en agua o con solucin disotnica (0.9 % NaCl). Frecuentemente se usa la
extraccin con solventes orgnicos de bajo punto de ebullicin (alcohol, acetato de
etilo) y de baja reactividad. Algunas veces es conveniente desengrasar el material
vegetal con ter de petrleo (extracto etreo) o hexano. El alcohol es generalmente
mas eficaz para recuperar la mayora de los metabolitos secundarios. Los extractos
son evaporados bajo presin reducida o liofilizados, en el caso de extraccin con agua
(Arvalo A, 1996).
Los mtodos de extraccin se basan en las diferentes solubilidades de los diversos
compuestos encontrados en el material vegetal, as , para sustancias de baja polaridad
( lpidos) se utilizan como solventes el ter de petrleo y cloroformo; para sustancias
de mediana y alta polaridad el acetato de etilo, el etanol y la acetona . Las
extracciones pueden hacerse por extraccin continua en soxhlet, en la cual el
material seco se sita en una cmara central y el solvente se hace evaporar en
caliente, en un recipiente inferior, el vapor del solvente asciende al condensador y
gotea sobre el material vegetal. Por reflujo, el material vegetal y el solvente se
colocan en un baln el cual tiene acoplado un refrigerante, se calienta, el solvente
evaporado se condensa y vuelve a mezclarse con el material vegetal. Y por
maceracin en fro , el material se mezcla con el solvente triturado continuamente
en fro (Arvalo A, 1996).
xxx
2.4 MOLCULAS ACTIVAS EN EL MBITO MEDICINAL E INDUSTRIAL

No todos los componentes qumicos elaborados por la planta, poseen igual inters
para la Fitoqumica. Los denominados principios activos son frecuentemente
alcaloides o hetersidos; ambos merecen por ello especial atencin. Otros grupos,
como los glcidos, grasas y protenas, tienen importancia diettica y muchos, como
los almidones y las gomas, se emplean en tcnica farmacutica, aunque carecen de
sealada accin farmacolgica. Otras sustancias como el oxalato clcico, slice,
lignina y materiales colorantes, pueden ser materias primas coadyuvantes en
diferentes procesos en la industria (Torres C, 2004).
2.4.1 Los Alcoholes: Los alcoholes libres no estn generalmente presentes ms que
en forma de trazas en las plantas vivas. Son esterificados y combinados bajo la forma
de hetersidos. Se encuentran sobre todo en los aceites esenciales. El olor de ciertos
alcoholes les da gran aplicacin en la perfumera o como aromatizante (Carey, 2003).
Los alcoholes alifticos son tensoactivos e hipotensores1. Todos los alcoholes son
txicos en grado diverso. Los alcoholes de las plantas umbelferas, tienen una
toxicidad muy elevada (Carey, 2003).
2.4.2 Los Fenoles: Entre los fenoles encontrados en estado libre, se encuentran
constituyentes importantes de las esencias como el timol, el carbacrol (esencias de
tomillo), el eugenol y el chavicol. Muchos de los fenoles estn en estado de ter
oxidado en las esencias, entre ellos citaremos el estragol, la miristicina, el apiol y el
atenol (Carey, 2003).
Los fenoles tienen una actividad fisiolgica marcada porque poseen propiedades
antispticas. Hidroquinol, timol (este ltimo tambin antihelmntico), eugenol
(igualmente anestsico local), el apiol es emenagogo, el anetol es carminativo2 y
1
2
Fitoterapia que acta a nivel de los vasos sanguneos.
Dcese de los agentes que previenen la formacin de gases en el tubo digestivo o provocan la
expulsin de los mismos
xxxi
antidiarreico
pequeas
dosis
veneno
del
SNC
altas
dosis.
El
tetrahidrocannabinol es alucingeno. Los polifenoles del helecho son antihelmnticos

(Carey, 2003).
Son los compuestos ms simples y consisten en un anillo fenlico sustituido. Algunos
ejemplos los constituyen el catecol, el pirogalol y los cidos cinmicos y cafeico.
Plantas productoras de compuestos de estas caractersticas son el tomillo, la
manzanilla y la gayuba, cuyo principio activo, la arbutina, ha sido utilizado a lo largo
de los aos en el tratamiento de la infeccin urinaria (Domingo D., 2003).
El mecanismo parece estar relacionado con la inhibicin enzimtica por los
compuestos oxidados, posiblemente mediante reacciones de grupos sulfihidrilo o por
interacciones no especficas con protenas (Domingo D., 2003).
2.4.3 Cumarinas: Son compuestos derivados de la benzo--pirona, como la
cumarina, la esculetina, la umbeliferona y la escopoletina. Estn presentes en las
margaritas y tienen propiedades antiinflamatorias, antitrombticas y vasodilatadoras.
Parece que su mecanismo de accin antimicrobiano es mediante interaccin con el
ADN eucariota, lo que explica tambin su actividad antiviral (Domingo D., 2003).
2.4.4 Alcaloides: Reciben esta denominacin los compuestos nitrogenados
heterocclicos. Pertenecen a este grupo, entre otros, sustancias como la morfina, la
herona y la cocana. El mecanismo de accin de los alcaloides parece ser mediante
intercalacin entre la pared celular y el DNA del microorganismo (Domingo D.,
2003).
2.4.5 Los Aldehdos: Son derivados de los alcoholes primarios por deshidrogenacin.
Muchos aldehdos son aromatizantes como la vainilla y el citral. As mismo este
El tetrahidrocannabinol (THC) es uno de los compuestos activos de la marihuana que est siendo
objeto de un gran nmero de estudios debido a las propiedades beneficiosas que puede ejercer sobre
algunas patologas.
xxxii
grupo fitoqumico tienen propiedades antispticas. La vainilla por ejemplo tienen

efectos colerticos (Carey, 2003).
2.4.6 Los Terpenoides: Son compuestos a menudo no saturados formados por
carbono, hidrgeno y oxgeno de estructura no aromtica y que se encuentran sobre
todo en los aceites esenciales y en las resinas (Carey, 2003).
Muchas de las plantas, deben a sus compuestos terpnicos de las esencias, sus
propiedades aromticas. Pero estas sustancias, poseen tambin propiedades
farmacodinmicas muy variadas en relacin con las diferentes funciones ligadas a su
esqueleto terpnico. Algunas, son irritantes de la piel y de las mucosas, utilizndose
como rubefacientes4 (pineno en la esencia de trementina). Los azulenos tienen
propiedades antinflamatorias. El geraniol, cineol y linalol
tienen propiedades
antispticas. El ascaridol, tiene propiedades vermfugas. La tuyona tiene propiedades

abortivas y estupefacientes. Las cucurbitceas, poseen propiedades txicas y
necrosantes. El cido glicirrictico tiene propiedades antinflamatorias (Torres C,
2004).
2.4.7 Flavonas: Las flavonas son estructuras fenlicas que contienen un grupo
carbonilo. Constituyen la familia ms amplia de fenoles naturales. Su actividad frente
a los microorganismos probablemente se debe a que forman complejos con las
protenas solubles y extracelulares y con las clulas de la pared bacteriana, de forma
similar a las quinonas. Mencin especial merecen las catequinas, presentes en el t
verde, las cuales ejercen actividad frente a Vibrio cholerae O1, Streptococcus mutans,
Shigella y otros microorganismos. Otros flavonoides tienen en general actividad
antiviral.
2.4.8 Los Isoflavonoides: Actan como efectivas fitoalexinas, las cuales pueden ser
definidas como compuestos antimicrobianos de pequeo peso molecular o
4
Rubefaciente se refiere a la sustancia que produce un enrojecimiento en la piel debido al flujo de la

sangre de los vasos capilares.
xxxiii
metabolitos de estrs biolgico. Ellos pueden ser constitutivos o tambin ser

inducidos por ataque biolgico o heridas. Los constituyentes varan entre especies, y
tambin varan dependiendo la edad y el ambiente en el que se encuentra la planta.
Estos flavonoides inhiben la germinacin de esporas de hongos y causan dao a los
sistemas de membrana. El recubrimiento de algunas semillas y algunas resinas de
rboles son particularmente ricas en flavonoides antimicrobianos. Esta cita e
informacin se debe incluir.
2.4.9 Los Alcaloides: Estos compuestos constituyen
con los hetersidos y los
antibiticos la mayor parte de los principios activos de las plantas medicinales. Son
sustancias de origen biolgico y sobre todo de origen vegetal, ya que en el reino
animal se encuentran raramente representadas. Los alcaloides contienen siempre
carbono, hidrgeno,
nitrgeno y oxgeno. Excepcionalmente algunos alcaloides
contienen azufre (Torres C, 2004).

2.4.10 Quinonas: Las quinonas son anillos aromticos con dos funciones ceto. Son
ubicuas en la naturaleza y causantes del color marrn que se produce en las frutas
cuando son daadas. Poseen una alta reactividad, formando complejos con los
aminocidos hidroflicos de las protenas, la mayora de las veces inactivando la
protena y anulando su funcin. Debido a esto, el potencial antimicrobiano de este
grupo es amplio (Domingo D., 2003).
2.4.11 Tanoides o Taninos: Son sustancias de origen vegetal, no nitrogenadas de
estructura polifenlica, solubles en agua, alcohol y acetona. Estas sustancias son de
sabor astringente y tienen la propiedad comn de curtir la piel, hacindola
imputrescible e impermeable al fijarse sobre sus protenas (Domingo D., 2003).
El trmino tanino se emple para denominar ciertas sustancias presentes en extractos
vegetales capaces de combinarse con protenas de la piel animal, evitando su
putrefaccin y convirtindola en cuero. Constituyen un grupo de sustancias fenlicas
xxxiv
polimricas y se pueden dividir en hidrolizables y condensados, en funcin de que

puedan o no ser hidrolizados. Se han descrito ms de 30 taninos que pueden inhibir
hongos y bacterias (Domingo D., 2003).
2.4.12 Los aceites esenciales: Estos productos llamados comnmente esencias son
sustancias olorosas voltiles contenidas en los vegetales. Su volatilidad les diferencia
de los aceites fijos que producen de los lpidos. Son particularmente abundantes en
las Conferas, Rutceas, Umbelferas, Mirtceas y Labiadas (Torres C, 2004).
Son compuestos causantes del agradable olor de determinadas plantas y algunos con
poder antimicrobiano, como el mentol obtenido de la menta (Menta piperita) y la
capsaicina de la planta conocida como el pimiento rojo o chile (Capsicumm annum).
(Domingo D., 2003).
2.4.13 Saponinas: son los compenentes principales de varios extractos de plantas,
tienen actividad antiprotozoaria. Las saponinas se unen al colesterol y otros esteroles
de la membrana celular de los protozoos causando su inestabilidad, lisis y muerte
celular (Calsamiglia S, 2005).
2.4.14 Esteroides y Triterpenos: Los compuestos esteroidales pueden interferir
determinados procesos de sntesis vitales en la clula bacteriana y los triterpenos, por
su parte, pueden actuar siguiendo diversos mecanismos en dependencia de su
naturaleza qumica: los de naturaleza hidrocarbrica, por ejemplo, tienen
generalmente accin depresora sobre la tensin superficial lo cual, cuando tiene lugar
en el entorno de la clula bacteriana, altera la selectividad de la membrana
citoplasmtica para el intercambio de sustancias. Los triterpenos de naturaleza
alcohlica pueden alterar la naturaleza coloidal del protoplasma de la clula
provocando su muerte (Pelczar M., 1992).
xxxv
2.4.15 Cromenos y Benzofuranos: Los cromenos y benzofuranos son productos

naturales que se han encontrado en algunas especies de Rutaceae, Liliaceae,
ciperaceae y principalmente en ciertas tribus de las Asteraceae, entre las cuales parece
ser exclusivos de las Asterreae, Eupatorieae, Heliantheae, Inulaeae y Senecioneae
(Scherriber, K., 1963).
Estos compuestos se encuentran presentes generalmente en hojas y tallos, y menos
comnmente en races habindose encontrado en los primeros hasta un 5% sobre el
peso seco (Scherriber, K., 1963).
Muchos cromenos y benzofuranos han mostrado ser biolgicamente activos como el
toxol y la dehidrotrementona que son bacteriostticos; la tremetona, la
dehidrotremetona y la hidroxitremetona son txicos a los peces; el toxol y el angelato
de toxilo exhiben una debil actividad antitumor contra la leucemia linfocitica P-388;
el encecalin, el 7-hidroxiencalin y la 6- metaoxieuparina son fototxicos a varios
hongos y bacteras; el encecalin tambin ha mostrado accin insecticida; as mismo
los precocenos I y II actuan como hormonas antijuveniles en los insectos (Scherriber,
K., 1963).
2.4.16 Sesquiterpenlactonas: derivadas biogenticamente de los sesquiterpenos, son
una clase de productos naturales distribuidos menos ampliamente que estos ltimos y
de ocurrencia predominante en la familia Asteraceae (notablemente en gneros
Artemisia y ambrosia), de all que su distribucin permite ser aplicada a problemas
taxonmicos especialmente en los gneros nombrados y en otras taxas (Scherriber,
K., 1963).
Son sustancias amargas que se encuentran en todas las partes de las plantas, en
concentraciones que varan entre 0,01 y 8% del peso seco, siendo las concentraciones
mayores generalmente en las hojas; son bastantes solubles en cloroformo y en eter
etlico. Presentan gran importancia por la variada accin biolgica que han
xxxvi
demostrado: accin citotxica, antitumoral, analgsica, inhibidoras del crecimiento de

bacterias, entre otras (Scherriber, K., 1963).
Estos compuestos lactnicos son primariamente clasificados en base a su esqueleto
carbocclico como germacranlidos, guaianlidos, eudesmanlidos y pseudoguaianlidos, entre otros (el sufijo olido se refiere a la funcin lactona) (Scherriber,
K., 1963).
2.5 ESPECIES VEGETALES
2.5.1 Valeriana pilosa
Figura 1. Valeriana pilosa Fuente: Autores

Orden: DIPSACALES
Especie: Valeriana pilosa Ruiz & Pavn
Familia: VALERIANACEAE
xxxvii
Sinnimos: Valeriana longifolia H.B.K., Valeriana longifolia var. pilosa

(Ruiz & Pav.) Wedd.
Nombre Comn: valeriana, Mata de gato
2.5.1.1 Caractersticas generales
2.5.1.1.1 Descripcin: Hierba perenne con las hojas en una roseta basal, 10-75 cm de
alto, ramificada desde la base. Raz central obcnica. Hojas simples, pecioladas;
lmina de la hoja lanceolada, 5-35 x 0.5-2.5 cm, subcoricea, en la parte superior
glabra a pilosa, en la parte inferior glabra o pilosa, ocasionalmente con el nervio
medio piloso, aguda en el pice, los mrgenes enteros con pequeas berrugas en la
parte superior que dan la impresin de dientes; peciolos dilatados y generalmente
ciliados en la base. Inflorescencia paniculoide, 2-41 x 1-8 cm, el eje piloso; eje
principal de la inflorescencia con 1-3 pares de hojas ssiles, lanceoladas a linear
lanceoladas, generalmente con el margen verrugoso, con o sin inflorescencias
parciales en sus axilas, brcteas y bracteolas superiores espatuladas, 2-10 x 1-4 mm,
glabras o pilosas en la base. Flores ginodioicas, corola infundibuliforme, la de flores
perfectas de 2-3 mm de longitud, la de flores pistiladas de 1-2.5 mm de longitud,
blanca, a menudo teida de prpura, glabra, 5-lobada; estambres o estilo exsertos.
Aquenios de 1.5-2 mm de longitud, de forma creciente en corte transversal, el vilano
de 3-5 mm de longitud, usualmente con 6 radios (Guzmn, 2005)
2.5.1.1.2 Distribucin geogrfica: El gnero Valeriana tiene 150 especies
distribuidas por todo el mundo, la mayora en Sudamrica, especialmente en la
Cordillera de los Andes. Esta especie se distribuye en Ecuador, Per y Colombia
entre los 2700 a 4250m. En Colombia se encuentra en los departamentos de
Antioqua, Caldas, Santander, Boyac y Cundinamarca entre los 2700 a 3800m. En
Cundinamarca se halla en los pramos de Cruz verde, Sumapz, El Tablazo,
Chingaza, San Cayetano, Chipaque, Chisac. Esta especie crece en bosques alto
andino y pramo (Torres, 2007).
xxxviii
2.5.1.1.3 Fitoqumica: Los anlisis fitoqumicos preeliminares uno realizado en las

hojas y otro en los rizomas de V. pilosa mostraron la presencia de alcaloides,
esteroides y/o triterpenoides, flavonoides y taninos. Las pruebas realizadas para
cumarinas y lactonas terpnicas, glicsidos cardiotnicos y saponinas dieron
resultados negativos. La presencia de alcaloides puede estar relacionada con
alcaloides iridoidales similares a los aislados de las races de V. officinalis (Guzmn,
2005).
Los iridoides son la familia de compuestos monoterpenicos mas comunes en el
genero Valeriana y en la familia Valerianaceae. Aunque en un principio se crea que
estos compuestos eran los responsables de la actividad sedante de la valeriana,
algunos autores consideran que los cidos valernicos y otros sesquiterpenos
estructuralmente similares, que se encuentran en el aceite esencial de las races de V.
officinalis son los responsables de esta actividad y no los valeropotriatos
(epoxiridoides encontrados en la Valeriana). Estos resultados sugieren la necesidad de
caracterizar qumica y farmacolgicamente la especie V. pilosa, con el fin de evaluar
su aprovechamiento como una novedosa fuente de extractos sedativos (Guzmn,
2005).
2.5.1.1.4 Usos: En general, las especies pertenecientes al gnero Valeriana, son
usadas con fines medicinales. En Bogot y alrededores se encuentra muy difundido el
uso de los tallos y hojas de estas plantas, como tranquilizante, para la conciliacin del
sueo y otras afecciones del sistema nervioso. Sin embargo, la mayora de las
personas adquieren los fragmentos de estas plantas en la seccin de plantas
medicinales de las plazas de mercado y en centros naturistas, muchas veces sin tener
certeza sobre la identidad de la especie a la cual corresponde dicho fragmento, ya que
son pocas las personas que reconocen esta planta en su ambiente natural (Guzmn,
2005).
xxxix
En Per, se reporta adems el uso de las hojas y tallos de la Valeriana pilosa para
curar las irritaciones, como desinfectante y para combatir la fiebre interna. Las races
de esta especie se hierven por pocos minutos y el t es utilizado como un sedante y
para disminuir el stress (Gzman, 2005).
2.5.2 Myrcianthes rhopaloides
Figura 2. Myrcianthes rhopaloides.

Fuente : Autores
Orden: MYRTALES
Familia: MYRTACEAE
Especie: Myrcianthes rhopaloides (H.B.K.) McVaugh
xl
Nombres comunes: Hueso,
Guayabo, Almanegra, Arrayn, Arrayn guayabn,
Guayabn, Arrayn negro, Arrayn de los Andes.

Sinnimos: Eugenia porphyroclada O. Berg, Eugenia rhopaloides (Kunth) DC.,
Myrtus rhopaloides Kunth
2.5.2.1 Caractersticas generales de la especie
2.5.2.1.1 Descripcin: rbol de hasta 15 m de altura, tronco cilndrico, copa regular.
Corteza color rojizo, escamosa, resinosa y desprendible. Hojas simples, opuestas, de
limbo ovalado, consistencia coricea; con el borde entero, a veces involuto; con pice
marginado y base redondeada; haz glabro y lustroso, de color verde oscuro, envs
verde amarillento con la nervadura central prominente. Pecolo corto lignificado.
Flores hermafroditas, completas y estaminoideas; cliz dialispalo, color verde;
corola con ptalos libres, color blanco; estambres muy numerosos, de 9-10 mm de
largo; ovario nfero, estilo largo y estigma capitado. Fruto en drupa, carnoso, de
forma orbiculada, color rojo oscuro cuando maduro, con una sola semilla. Los frutos
pesan 2.88 g promedio; las semillas miden aproximadamente 0.82 cm de largo y 0.61
de ancho y 100 semillas pesan 0.172 g en promedio (Pico, 2004).
2.5.2.1.2 Distribucin Geogrfica: Se encuentra distribuida en Costa Rica,
Colombia, Ecuador, Panam, Per, y Venezuela desde los 2300 a 2800 m. En
Colombia se le encuentra en la cordillera Central y Oriental en el departamento de
Cundinamarca, en el altiplano Cundiboyacense y sus alrededores y en el Tolima. En
Cundinamarca en los municipios de la Calera (Santa Isabel), Facatativa. En Bogot
D.C se encuentra en las zonas rurales de Usme (Pasquilla) y Sumapaz (Capitolio)
dentro de un rango altitudinal de 2500 a 3200m (Guzmn, 2005).
Crece en laderas bajas y pies de ladera, suelos pesados con drenaje lento, no
anegados. Frecuentemente se halla aislada en potreros junto con otros elementos
relictuales de los bosques de susca y de tbar, como elemento silvopastoril tradicional
xli
(potrero arbolado de arrayanes, comn en toda la regin andina con otros gneros y
especies de la misma familia). Es inductor preclimcico de la sere de laderas bajas,
vinculado a la mesosere del bosque de susca (Ocotea heterophylla) y la del tibaral
(bosque de Escallonia paniculata) (DAMA, 2000).
2.5.2.1.3 Propagacin tradicional: Las semillas se extraen de los frutos con bistur,
con presin de pinzas con punta delgada o bien de manera manual al presionar el
fruto carnoso, se lavan 2 a 3 veces con agua durante 2 minutos mximo cada vez. No
se realiza aplicacin de jabones ni detergentes, dado el carcter fotosinttico del
embrin y los cotiledones, desde el momento de maduracin de los frutos. Deben
mantenerse en humedad superior al 60% desde la extraccin del fruto y el lavado. No
requiere etapa de secado, posterior al lavado, por el contrario, debe mantenerse la
humedad. En medio estril utilizando cajas de petri con papel absorbente, luz solar
parcial y temperatura ambiente en condiciones de laboratorio (17C promedio), se
registra germinacin desde el tercer da despus de la hidratacin hasta el sptimo
da, siendo la germinacin del 100% para el da 7 (Pico, 2004).
La germinacin es tipo hipogea, puesto que los cotiledones verdes permanecen en el
sustrato, en el lugar de siembra y emerge la radcula y posteriormente la plmula
entre los cotiledones. Se deben sembrar 2 semillas por alvolo, con una profundidad
de 1 cm, el riego debe ser cada 2 das y de manera suave (Pico, 2004).
2.5.2.1.4 Cosecha: La colecta se realiza de manera manual, halando de la parte
apical, para propagacin se pueden colectar frutos con pocos das de cada en el
suelo.
El ciclo reproductivo de esta especie es poco constante y depende del tipo de suelo
pues plantas de una misma regin inician fases reproductivas a diferentes pocas. En
el mes de abril en Pasquilla y Guachet se han encontrado plantas de esta especie en
floracin, plantas con frutos se encuentran en los meses de febrero en Duitama, abril
xlii
en Sumapaz, junio en el Verjn alto localidad de Chapinero y julio en la Calera. En el

JBJCM la floracin generalmente inicia a principios de ao en los meses de febrero a
abril y los frutos maduros son colectados cinco meses despus (Pico, 2004).
2.5.2.1.5 Usos: Los frutos de sta especie son comestibles y por su agradable sabor se
consumen directamente, en jugos con leche y dulces. La planta al igual que
Myrcianthes leucoxyla, es maderable y es empleada con fines medicinales. El uso
medicinal ms frecuente en las reas rurales de Bogot es para combatir la diabetes,
utilizando diferentes partes de la planta. Tambin se usa como tranquilizante
preparando las hojas en infusin y como antidiarreico, cocinando las hojas en agua
junto con el laurel (Laurus nobilis) (Molina, 2004).
Esta planta tambin es usada en la induccin de matorrales de Miconia spp., en la
formacin de corredores y estribones ornitcoros, como barrera antiganado, cercas
vivas, ornamental y en la fabricacin de postes y cabos de herramienta (DAMA,
2000).
2.5.2.1.6 Bromatologa y Aporte Nutricional: Los resultados del anlisis
bromatolgico proximal expresados en base hmeda para M. rhopaloides son
presentados en la tabla 1, los cuales al ser comparados con los mismos obtenidos para
M. leucoxyla, evidencian que un menor aporte nutricional. Sin embargo, esta especie
representa un potencial de aprovechamiento muy interesante desde el punto de vista
de alimentos (Molina, 2004).
xliii
Nutriente
Contenido
Protena (g)
2.9
Grasa (g)
0.3
Fibra (g)
2.4
Cenizas(g)
1.4
Calcio (mg)
100mg
Fsforo (mg)
38
Hierro ppm
28
Tabla 1. Anlisis bromatolgicos proximales para M. rhopaloides (contenido/100g

de pulpa)
2.5.2.1.7 Fitoqumica: El aceite esencial obtenido por hidrodestilacin de hojas M.
rhopaloides recolectadas en Ecuador fue caracterizado por CGAR y CGAR-EM,
identificando 40 compuestos de los cuales la mayora corresponden a alcoholes y
aldehdos monoterpenicos como geranial (34%), neral (25%), -pineno (7%), pineno (9%) y algunos sesquiterpenos (1.5%). Al comparar estos resultados con lo
reportado por Guzmn et al. 2005 para M. leucoxyla, se encuentra que los aceites
tienen en comn el alto contenido de monoterpenos tales como el -pineno y pineno, aunque detectados en concentraciones mayores para el aceite esencial de M.
rhopaloides, adems de 1,8-cineol, mirceno, linalol, terpinen-4-ol, y nerolidiol
(Guzmn, 2005).
xliv
2.5.3 Passiflora manicata
Figura 3. Passiflora manicata

Fuente: Autores
Familia: PASSIFLORACEAE
Especie: Passiflora manicata (Juss.) Pers.
Sinnimos: Passiflora meridensis H. Karst., Passiflora rhodantha Harms, Tacsonia
manicata Juss.
Nombre Comn: Flor de la pasin, Tacso (Nario), Curubo de Monte (Quindo),
Diablito (Ecuador)
xlv

2.5.3.1.1 Descripcin: Plantas pubescentes o glabras en las superficies adaxiales de
las lminas foliares, flores y frutos. Tallos angulares, esencialmente glabros o
pubescentes. Hojas ovadas, trilobuladas, de 4.2 a 10.0 cm de largo y 5.0 a 12.0 cm de
ancho, con ngulos de aproximadamente 45 entre lbulos medios y laterales, con
lbulos oblongos u ovados, agudos o acuminados en el pice, redondeadas o
ligeramente acorazonadas en la base, glandular-aserradas en las mrgenes,
densamente pubescentes en la superficie abaxial, con tricomas ondulados,
transparentes, blancuzcos, de aproximadamente 0.3 mm de largo, glabras en la
superficie adaxial, con tricomas escasos repartidos sobre las venas foliares; pecolos
de 1.4 a 4.1 cm de largo, con 4 a 9 nectarios generalmente estipitados, de 1 a 2 mm de
largo repartidos sobre la superficie adaxial; estpulas generalmente suborbiculares, de
1.5 a 2.0 cm de largo y 0.5-1.0 cm de ancho, con dentaciones gruesas en el margen.
Pednculo grueso, de 4.6 a 7.5 cm de largo; brcteas ovadas, libres hasta la base o
unidas cerca de la base, de 2.0 a 4.0 cm de largo y 1.0 a 2.0 cm de ancho, acuminadas
o agudas en el pice, cuneadas o redondeadas en la base. Flores erectas de 5.0 a 5.6
cm de largo; hipantios cilndricos, de aproximadamente 2 cm de largo; spalos
oblongos o lanceolados de 3.0 a 3.6 cm de largo, de aproximadamente 6 mm de
ancho, verdosos abaxialmente, rojos adaxialmente; ptalos sub-iguales a los spalos,
rojos; corona en 3 o 4 series, con filamentos de hasta 4 mm de largo, con series ms
exteriores color morado, con la serie interior de color blanco; oprculo localizado
aproximadamente a 1 cm de la base del hipantio, de aproximadamente 1 cm de largo,
doblado, membranceo, blanco. Frutos obovados u oblongos, de 3.5 a 5.5 cm de largo
y 2.0 a 3.7 cm de ancho, con pericarpio coriceo, verde al madurar; semillas
obovadas a acorazonadas, de 3.5 a 5.1 mm de largo y 2.0 a 3.0 mm de ancho, con
testa reticulada, color caf oscuro; arilo anaranjado poco suculento (Escobar, 1988).
Esta especie presenta caractersticas intermedias entre los subgneros Tacsonia y
Passiflora. La flor es erecta, presenta una corola color rojo intenso, con un hipantio
xlvi
ms corto que en el subgnero Tacsonia, pero ms largo que en subgnero Passiflora;

es autgama y altamente polimrfica (Escobar, 1988).
2.5.3.1.2 Distribucin geogrfica: Es nativa de Venezuela, Colombia, Ecuador y
Per. Posiblemente es originaria de los Andes de Per y Chile, entre 1400m -2800 m
de altitud. Crece de forma silvestre como una enredadera (Torres, 2007).
2.5.3.1.3 Usos: El fruto no es considerado como comestible porque no se puede
diferenciar claramente el estado maduro del estado inmaduro, durante el cual los
frutos pueden tener efectos txicos y sictropos (de ah su nombre de diablito en el
Ecuador). El inters de esta especie proviene de su potencial para el mejoramiento
gentico de las curubas, por su cercana con ellas y su rusticidad. Es resistente a los
nemtodos y a las enfermedades fngicas (antracnosis, oidio y Alternaria sp) (Torres,
2007)
xlvii
2.5.4 Hesperomeles ferruginea
Figura 4. Hesperomeles ferruginea.

Fuente: Autores
Orden: ROSALES
Familia: ROSACEAE
Especie: Hesperomeles ferruginea (Pers.) Benth.
Nombres Comunes: Mortio (Cordillera Central, Cundinamarca), noro (Cordillera
central, Valle del Cauca), cerote (Cauca, Huila), guayabo de pramo (Cauca, Valle),
manzano (Cauca, Santander). Huagra manzana, jalo, pujn, quique (Ecuador).
xlviii
Sinnimos: Crataegus ferruginea Pers., Eriobotrya cordata Lindl., Hesperomeles

lanuginosa Ruiz & Pav. ex Hook., Hesperomeles oblonga Lindl., Mespilus ferruginea
(Pers.) Poir., Osteomeles ferruginea (Pers.) Kunth.
2.5.4.1.1 Descripcin: Arbustos hasta 5 m de altura, ramas pubescentes o glabras
hacia las puntas. Estipulas, 2 a 6 mm de largo y 0.5 a 1 mm de ancho, pubescentes a
glabras, usualmente persistentes; pecolos 0.5 a 2 cm de longitud, pubescentes. Hojas
ms o menos oblongas, elpticas u ovadas, 3 a 10 cm de largo y 1.5 a 8 cm de ancho,
coriaceas o subcoriaceas, pice redondeado, base redondeada, obtusa o subcordada,
margen serrado o biserrado, superficie adaxial frecuentemente puberula a glabra,
reticuladas o suavemente abullada, con venas inmersas, superfice abaxial pubescente
con venas prominentes. Inflorescencia en forma de cima con 10 a 100 flores,
densamente pubescentes; pednculo de 5 a 40 mm. Brcteas florales, 5 a 10 mm de
largo y 1 a 1.5 mm de ancho; pedcelo de 2 a 5 mm de longitud. Flores 5 a 9 mm de
largo; hipantio urceolado a crateriforme; spalos 1.5 a 3 mm de largo, pice agudo;
ptalos ampliamente elpticos u obovados, 2.5 a 5 mm de largo, glabros, pubrulos o
ciliados, blancos o cremas comnmente teidos de rosa o rojo. Fruto de 5 a 8 mm de
largo y 6 a 8 mm de ancho, rojo. Semillas de 2.5 a 3 mm de largo y 1 a 1.5 mm de
ancho (Guzmn, 2005).
2.5.4.1.2 Distribucin geogrfica: Se encuentra distribuida a lo largo de Suramerica,
en Colombia, Ecuador, Per y Venezuela. Se encuentra entre los 2800 y 3900 m. En
Cundinamarca se localiza en los municipios de Cogua, La Aguadita, San Miguel y
Represa del Neusa. En Bogot D.C. en las Localidades de Ciudad Bolvar, Sumapaz,
Usme y en los Cerros Orientales. Tambin se encuentra en los departamentos del
Boyac, Cauca, Cesar, Magdalena, Norte de Santander y Risaralda. Esta especie se
encuentra en relictos de bosque andino, asociada a matorrales densos en caadas y
ocasionalmente en linderos de predios en forma aislada, es una especie persistente en
zonas de disturbio antrpico (Rangel, 2000).
xlix
Se desarrolla en suelos cidos orgnicos y algo arcillosos, se han encontrado

asociaciones micorrticas de tipo vesculo arbuscular, en cuanto a aspectos climticos
no soporta heladas prolongadas y se producen defoliaciones frecuentes. Esta planta
esta ms adaptada a paramos hmedos que H. goudotiana (Rangel, 2000).
2.5.4.1.3 Usos: En las reas rurales del sur de Bogot D. C. esta especie al igual que
H. goudotiana es bastante conocida y utilizada. El fruto maduro se consume
directamente, o se usa para preparar mermeladas, dulces y yogurt. En el departamento
de Boyac los frutos de mortio se tuestan con azcar o panela, y se prepara masato
para las fiestas de San Pedro a finales de Junio (Cardozo, 2005).
Por otra parte, a partir de esta planta se obtiene la madera para fabricar cabos de
azadn y cercas vivas (Molina, 2004), lo que esta ocasionando una gran disminucin
en las poblaciones de esta especie, hecho que tambin se evidencia en pases como
Ecuador, donde H. ferruginea se encuentra amenazada por la fragmentacin de
hbitat y por la tala a la que es sometida por la calidad de su madera; adems la
regeneracin natural no es eficiente y los pocos rboles que alcanzan a rebrotar en las
reas intervenidas son muy susceptibles a enfermedades (Ordez, 2006).
2.5.4.1.4 Fitogeografa y ecologa: Posicin sucesional: inductores preclimcicos
priserales. Aparece como subordinada en las priseres del encenillal, denotando las
facies de suelos hmedos. Es un importante elemento protector de los bordes
relictuales, por sus espinas. Su papel como subdominante del clmax de subpramo
hmedo, indica tambin su funcin mediadora del ascenso del lmite superior del
bosque y la regeneracin del encenillal sobre subpramos hmedos y potreros por
encima de los 3200 msnm. Es uno de los precursores leosos ms frecuentes en los
pastizales altos de Holcus lanatus en el subpramo degradado (Torres, 2007).
2.5.4.1.5 Fitoqumica: An no se han publicado estudios acerca de la composicin
qumica de los frutos, hojas y otras partes de H. ferruginea, sin embargo cabe esperar
que no difiera de la composicin de otras especies de su mismo gnero, como la

observada en H. goudotiana donde se encuentran esteroides, triterpenoides,
flavonoides y taninos. Adems por la coloracin de sus frutos es muy probable que
contenga compuestos polifenlicos tipo antocianinas que pueden ser utilizadas como
colorantes en la industria de alimentos y posiblemente como antioxidantes (Garzn,
2006).
No se han publicado estudios sobre la actividad biolgica que pueda tener H.
ferruginea, sin embargo en otras especies como H. cuneata Lindl., H. obtusiofolia
(Pers.) Lindl. H. heterophylla Hook., se ha encontrado que los frutos y las hojas
tienen actividad antiinflamatoria sobre los riones y el hgado (Garzn, 2006).
2.6 MICROORGANISMOS SELECCIONADOS
2.6.1 Hongo fitopatgeno
La mayora de los hongos fitopatgenos forman hifas, es decir, talos tubulares, que se
extienden mediante crecimiento apical y un sistema organizado de ramificacin. La
red de hifas que resultan de dicho crecimiento se conoce como micelio y el micelio
interconectado producto de un propgulo o de la fusin de hifas de dos o ms
propgalos se denomina colonia (Ayala S, 1998).
li
2.6.1.1 Alternaria sp.
Figura 5. Caractersticas Macro y Microscpicas de Alternaria sp.

Forma parte de los llamados hongos imperfectos. Produce manchas en hojas, frutos y
tallos, adems de necrosis foliar (Arvalo A, 1996). Algunas de la enfermedades ms
comunes causadas por Alternaria spp, incluye el tizn temprano de la papa, el tomate
y el brcoli; mancha de la hoja del tabaco, del geranio, hule, gladiola y kenaf; tizn
de la zanahoria, macha circular en la remolacha, mancha concntrica del crtamo,
pudricin negra del fruto en el chile. Causa manchas y tizn en la cebolla, manchas
en frutas como la manzana, el limn y la naranja. Estas manchas son generalmente
caf oscuras o negras, frecuentemente numerosas y dispuestas en anillos concntricos
que le dan la apariencia de tablero de tiro (Ayala S, 1998).
Sobre las ramas y tallos de plantas tales como el tomate, aparecen varias manchas
obscuras, profundas y con frecuencia en forma de blanco. A veces las lesiones del
tallo en las plntulas forman cnceres que pueden extenderse, cubrir el tallo y matar a
la planta, o si se forman cerca de la superficie del suelo pueden desarrollarse y
originar una pudricin del cuello. (Forero N, 1997)
Caractersticas macroscpicas: Colonias vellosas, de superficie rugosa y borde
regular, de color gris intenso en el anverso y negro en el reverso (Ayala S, 1998).
Caractersticas microscpicas: Conidios grandes y pequeos entre lazados (Ayala S,
1998).
lii
2.6.2 Microorganismos patgenos

2.6.2.1 Candida albicans
Figura 6. Caractersticas Macro y Microscpicas de Candida albicans.

La especie patgena ms frecuente en el hombre es la Candida albicans. Estos
hongos viven como saprofitos sobre la piel y las mucosas del tracto respiratorio,
digestivo y genital femenino, de preferencia en pacientes diabticos y durante el
embarazo (Roncancio B, 2001). Es una levadura, redonda u ovoide con 3 mcm de
dimetro, con o sin gemacin. Forma parte de la flora normal de la boca, tubo
digestivo y vagina. Y esta considerada como la ms patgena de este gnero (Arvalo
A, 1995). Es frecuente ver las invasiones superficiales (piel y mucosas) producidas
por este hongo (Roncancio B, 2001). La forma generalizada se produce por va
hemtica y se manifiesta por lesiones o abscesos en casi todos los rganos y tejidos.
Microscpicamente se puede observar que en el tejido se forma un micelio con hifas
delgadas y seudohifas, adems de clulas micticas levaduriformes pequeas. Estas
clulas pueden mostrar gemacin. Las hifas y seudohifas penetran en el tejido como
lo hacen las races de una planta (Roncancio B, 2001).
Se relaciona con los alimentos ya que es una levadura presente en la fermentacin de
stos, atacando alimentos ricos en grasa, a pesar de ello otras especies de Candida sp
liii
tienen importancia industrial produciendo cidos orgnicos, etanol a partir de

nutrientes especiales, enzimas como la lipasa utilizada en la produccin de jabn,
lpidos en sustratos ricos en glucosa y vitaminas como la riboflavina, entre otras
(Roncancio B, 2001).
Presenta rasgos clnicos como dolor de esfago y dificultad para comer, infeccin del
torrente sanguneo y enfermedad diseminada normalmente con fiebre, raramente:
pulmona, osteomelitis y artritis.
Segn el CDC y la divisin de enfermedades bacterianas y micticas posee una
incidencia de 8 casos/100000 en la poblacin general, en los pacientes VIH positivos
se presenta como una infeccin oportunista (Roncancio B, 2001).
2.6.2.2 Staphylococcus aureus
Figura 7. Caractersiticas Macro y Microscpicas de Staphylococcus aureus.

Son cocos Gram positivos de 0,5 - 1 mcm de dimetro, inmviles, aerobios o
anaerobios facultativos, caracterizados por su agrupacin en forma de racimo. Crecen
a una temperatura ptima de 37 C y se desarrollan mejor en un pH ligeramente
alcalino de 7.6 la adicin de glucosa favorece el crecimiento (Pearanda, 2003).
Forma parte de la flora normal de mucosas y piel e intervienen en procesos
patolgicos diversos como infecciones supurativas e intoxicaciones alimenticias
(Arvalo A, 1996). Ms del 95% de los Staphylococcus aureus producen protena A,
liv
la cual puede estar asociada a la clula o al medio extracelular, con una importante
afinidad por la fraccin Fc de la Ig G. La presencia de protena A o coagulasa es de
gran utilidad clnica para diferenciar Staphylococcus aureus de otras especies de
Estafilococos (Uribe C, 2003). Staphylococcus aureus es una bacteria que puede
causar infeccin en todos los grupos de edad tanto en forma espordica como
epidmica y se ha identificado como una de las principales causas de infeccin de
heridas quirrgicas. Su principal forma de transmisin es por contacto (Uribe C,
2003).
La capacidad de S. aureus para fermentar los azcares como maltosa, manitol,
trehalosa es positiva. La produccin de una nucleasa termoestable es un buen
indicador de la presencia S. aureus, al igual que la conversin de nitratos a nitritos
(Pearanda O, 2003).
Elaboran diversas enzimas: proteasas, lipasas, fosfatasas, gelatinasas, catalasas y
coagulasas (Pearanda O, 2003).
En cultivo puro resisten una concentracin de fenol al 1% durante 15 minutos, pero
solo los mata una concentracin al 2%. Soportan el calor hmedo a 60 C durante 30
minutos. Muchas cepas de S. aureus toleran concentraciones altas de cloruro de sodio
(7,5 a 10%), y son fcilmente inhibidos por colorantes como el violeta de genciana
(Pearanda O, 2003).
lv
2.6.2.3 Escherichia coli
Figura 8. Caractersticas Macro y Microscpicas de Escherichia coli.

Es un bacilo de 1 3 m por 0.5 m, que se presenta slo, en pares, en cortas
cadenas o formando grupos. En general es mvil (por flagelos pertricos), aunque
existen variantes inmviles no flageladas. No forma esporas y por lo general es no
cpsulado y Gram negativo. En cultivos jvenes la forma cocobacilar es bastante
frecuente; en los viejos se presentan formas de una dimensin mayor (Pearanda O,
2003).
En agar forma colonias circulares de 3 a 5 mm convexas, de borde continuo o un
tanto ondulado, brillantes y de coloracin blanca un poco amarillenta. Con
produccin de cido y gas, fermenta la lactosa y un gran nmero de carbohidratos;
algunas cepas son lactosa negativas. Es indol positiva, rojo de metilo positiva, Voges
Proskauer (VP) negativa y no utiliza el citrato. Produce H2S en determinados medios.
Acidifica y coagula la leche. Pueden necesitarse pruebas adicionales en casos de E.
coli aislada de colitis hemorrgicas, las cuales son tpicamente negativas a sorbitol.
Este bacilo es aerobio y anaerobio facultativo. Su temperatura ptima de crecimiento
es de 37 C, pero posee propiedades de desarrollo en una gama bastante amplia de
temperaturas; el pH favorable es de 7 alguna cepas producen hemolisina (Pearanda
O, 2003).
Se ha considerado inicialmente slo como un habitante del intestino, desde hace cerca
lvi
de tres dcadas se empez a estudiar su poder enteropatgeno. Se ha visto que las

cepas toxignicas de E. coli pueden producir una enterotoxina termolbil (TL),una
termoestable (TS) o ambas. La TL es una protena de alto peso molecular, que
bioqumicamente es muy similar a la toxina de Vibrio cholerae, activando la
adenilciclasa. Es inactivada a 60 C. La TS es una pequea molcula relativamente
estable al ser hervida (Rodrguez V, 1995).
2.6.2.4 Bacillus subtillis
Figura 9. Caractersticas Macro y Microscpicas de Bacillus subtillis.

Son bacilos Gram positivos de tamao 1 por 8 mcm, inmviles, aerobios o anaerobios
facultativos, formadores de endosporas. Habitan en el suelo, agua, aire y son
contaminantes del ambiente de laboratorio. Este microorganismo es obligado en esta
clase de bioensayos por su gran sensibilidad. (Arvalo A. 1996)
Se encuentra con frecuencia en tierra y en vegetales, tambin se encuentra en diversos
productos alimenticios, produciendo infecciones areas o por contacto, se considera
un microorganismo perjudicial pero no peligroso en carne en la cual ataca las
protenas. Este bacilo hidroliza el almidn y reduce los nitratos, no produce indol a
veces forma una escasa cantidad de cido sulfrico, sus esporas son menos
termorresistentes que las de los gneros trmofilos. (Lpez L., 2001)
Esta bacteria no se desarrolla en la leche cruda porque mediante la acidificacin
lvii
continuada producida por los streptococcus lcticos, se entorpece su crecimiento; a

pesar de esto a una temperatura alta adecuada, este bacilo muchas veces puede
coagular la leche pasteurizada por medio de los fermentos de laboratorio sin previa
acidificacin y tras reposar un largo perodo puede sobrevenir la peptonizacin.
Esta bacteria tambin es importante porque produce subtilicina, una bacteriocina que
inhibe o mata especies estrechamente relacionadas o incluso a cepas diferentes de la
misma especie. (Lpez L., 2001)
Algunas enfermedades causadas por este son:
-
Mancha blanca del trigo
Daos en cultivo de tejidos de la palma datilera
Daos en vulos y semillas de papa (Lpez L., 2001)
2.7 ANTIMICROBIANOS
Desde el siglo XVIII se han empleado sustancias qumicas para el tratamiento de las
emnfermedades infecciosas. Paul Ehrlich, quien formulo los principios de toxicidad
selectiva, reconoci las reacciones qumicas especficas entre microorganismos y
medicamento, la aparicin de la resistencia a estos y el papel de la teraputica
combinada para combatirlos. Posteriormente se descubrieron las sulfonamidas y se
acrecent el inters en sustancias antibacterianas de origen microbiano, llamadas
antibiticos, de ah surgi la penicilina, estreptomicina, tetraciclina, cloramfenicol,
etc. Las cuales tambin han sido obtenidas sintticamente, a travs de modificacin
qumica, total o parcial, de las molculas por biosntesis (Manrique E, 1997).
El ataque a los microorganismos, por parte de los antimicrobianos, se pueden dar de
diferentes maneras: por inhibicin de la sntesis de la pared celular, de las funciones
de la membrana celular, de la traduccin de material gentico y de la sntesis de
cidos nucleicos (Manrique E, 1997).
El trmino antibitico, se refiere a un producto metablico de un organismo que es
lviii
perjudicial o inhibitorio para otros microorganismos en muy pequeas cantidades,

estas sustancias pueden actuar de dos maneras:
a. Como microbiocidas, es decir, que matan las formas vegetativas de los
grmenes, especficamente se denominan bactericidas, refirindose a bacterias
y fungicidas refirindose a hongos.
b. Como microbiostatico, es decir que inhibe el crecimiento de microorganismos
y se denominar, bacteriosttico o fungisttico, segn se refiera a bacterias o a
hongos, respectivamente (Barreto J, 1997)
2.7.1 CLORAMFENICOL
2.7.1.1 Origen
El Cloramfenicol (Cm) es un antibitico clsico de amplio espectro que es producido
por diversas especies del gnero bacteriano Streptomyces. Este agente antimicrobiano
es nico entre los compuestos naturales ya que contiene un grupo nitrobenceno
conectado a un grupo propanol, as como un grupo amino conectado a un derivado
del cido dicloroactico. El Cm es una de las molculas ms simples, razn por la que
fue el primer antibitico cuya sntesis qumica fue desarrollada para la produccin
comercial a gran escala y que ha sido modificado en mltiples para la obtencin de
molculas anlogas con mejor actividad antimicrobiana. A pesar de la toxicidad del
Cm, algunas veces ste se usa como antibitico sistmico debido a su efectividad
contra infecciones causadas por Samonella typhi y se recomienda en pacientes con
meningitis de tipo bacteriana causada por Enterococcus faecium, Haemofilus
influenzae, Neisseria meningitidis y Streptococcus pneumoniae, especialmente en
aquellos que son alrgicos a los lactmicos. Adems, debido a que la molcula de
Cm es pequea y con caractersticas poco polares, este antibitico es capaz de
difundir a travs de clulas eucariticas y paredes de clulas procariticas. De hecho,
la solubilidad lipdica de este antibitico es la que permite que el Cm penetre bien
lix
dentro del cerebro, razn por las que sus potencialidades se aumentan para tratar
infecciones en estos sitios donde otros antibiticos no podran llegar a producir los
efectos deseados. Adems el Cm sigue siendo un antibitico de eleccin para el
tratamiento tpico de una amplia variedad de infecciones bacterianas incluyendo las
causadas por anaerobios (Morales Y, 2007).
2.7.1.2 Mecanismos de accin del cloramfenicol
El mecanismo de accin principal del Cm sobre diversas bacterias, involucra la
inhibicin de la sntesis de protenas en las cepas sensibles. El cido ribonucleico
mensajero (ARNm), derivado del proceso de transcripcin es usado como molde por
el complejo ribosomal donde la informacin es convertida a protenas (traduccin).
Los ribosomas son la unidad funcional de la traduccin y actan como un catalizador.
El Cloramfenicol se une a la subunidad 50S bloqueando las funciones principales de
los ribosomas como la reaccin de la PTasa, la terminacin de la traduccin y
causando un proceso de traduccin impreciso. La inhibicin de la sntesis de las
protenas causada por el Cm en la mayora de los microorganismos susceptibles
produce un efecto bacteriosttico (Morales Y, 2007).
Los ribosomas eucariticos son ms largos, complejos y difieren significativamente
de los procariotas, razn por la cual los agentes antimicrobianos como el
Cloramfenicol no interfieren considerablemente con ribosomas eucariticos y poseen
ms especificidad sobre los ribosomas de las clulas procariotas (Morales Y, 2007).
2.7.1.3 Mecanismos de resistencia bacteriana al cloramfenicol
Los microorganismos han desarrollado distintas estrategias para competir por los
nutrientes en su hbitat, algunos han mejorado sus sistemas de quimiotaxis y otros
han elaborado compuestos antimicrobianos para inhibir a otros miembros del
ambiente. Diversas son las sustancias antagnicas que los microorganismos producen
para dominar su hbitat, por ejemplo los antibiticos de amplio espectro, los
lx
productos del metabolismo como cidos orgnicos, las molculas quelantes de hierro
(siderforos) y las bacteriocinas (Morales Y, 2007).
2.7.1.4 Constitucin qumica
Frmula global C11H12Cl2N2O5
Peso molecular: 323.13
Estructura qumica
2.7.1.5 Propiedades
Es un polvo blanco o blanco amarillento, inodoro, intensamente amargo; es poco
soluble en agua, muy soluble en alcohol, propilenglicol, acetona y acetato de etilo. Es
prcticamente estable en soluciones neutras o ligeramente cidas, pero se destruye
rpidamente en solucin alcalina (Morales Y, 2007).
lxi
2.7.2 GRISEOFULVINA
Obtenida de especies de Penicillium. Utilizada en infecciones micticas. Es un
anlogo de las purinas y as conlleva a un error de la secuencia de los aminocidos
para la lectura del RNAm, inhibiendo as, la mitosis fngica. La resistencia est dada
por cambios en la permeabilidad de la membrana celular. Tiene accin fungisttica,
bloquea la reproduccin del hongo, inhibiendo la mitosis fngica. (Manrique E,
1997).
2.8 MTODOS DE EVALUACIN ANTIMICROBIANA
Estas tcnicas fueron desarrolladas al observar que los microorganismos eran capaces
de inducir resistencia al antimicrobiano que se ha utilizado contra l durante un
perodo largo de tiempo, esta resistencia puede deberse a diversos mecanismos como:
a. Produccin de una sustancia que destruye el antibitico.
b. Adaptacin del metabolismo bacteriano para inhibir el antibitico.
c. La pared celular del microorganismo se vuelve impermeable al antibitico.
d. Un fago comunica la resistencia por transduccin
e. Desaparicin de cepas sensibles y supervivencia de cepas resistentes por un
fenmeno de seleccin natural.
f. Produccin de cepas mutantes (Arvalo A, 1996).
Existen varias tcnicas para evaluar los antimicrobianos: mtodos de dilucin,
mtodo de difusin en gel y mtodo de bioautografa (Arvalo A, 1996).
2.8.1 Mtodo de difusin en gel
Se basa fundamentalmente en incorporar al medio de cultivo el antibitico o el
microorganismo en concentracin conocida para que luego de solidificado el medio
se adicione la contraparte y observar inhibicin de crecimiento o halos de inhibicin
segn la tcnica utilizada. Esta tcnica tambin abarca la llamada de discos de papel,
lxii
en la cual el antibitico a ensayar viene incorporado a discos de papel absorbente en

concentracin conocida, los cuales se colocan sobre la superficie de una caja de agar
sembrado masivamente con el microorganismo en estudio, luego de incubar a la
temperatura y tiempo adecuados se observan halos de inhibicin de crecimiento
(Arvalo A, 1996).
Las ventajas de los mtodos de difusin son que utilizan una pequea cantidad de la
muestra evaluar y ofrecen la posibilidad de ensayar varias sustancias contra un
mismo microorganismo (Arvalo A, 1996).
Con stas tcnicas y realizando diluciones de los diferentes antimicrobianos a probar
se puede la concentracin Mnima Inhibitoria (MIC), que se define como la menor
concentracin de antibitico en g/mL capaz de inhibir el desarrollo in vitro del
microorganismo en estudio y la concentracin Mnima Bactericida (MBC),
considerndose como la menor concentracin del antibitico en g/mL que mata los
microorganismos in vitro (Arvalo A, 1996).
2.8.2 Mtodo de dilucin
Tambin llamado turbidimtrico, consiste en hacer diluciones seriadas del antibitico
en g/ml en caldo de cultivo y un tubo como control de crecimiento de
microorganismo, los tubos se inoculan con una suspensin calibrada del
microorganismo y se incuban a temperatura y tiempo determinados, finalizado el
perodo de incubacin, los tubos se examinan visualmente para comprobar la
existencia o no de turbidez. (Manrique E, 1997)
2.8.3 Mtodo de Bioautografia
Este mtodo consiste en incluir los cromatogramas obtenidos por cromatografa en
capa fina en un medio de cultivo. Para ello se utilizan placas cromatogrficas de slica
gel 60f 254 de MERCK o de celulosa las cuales se colocan en las cajas petri
lxiii
correspondientes. Previamente se procede a eliminar el disolvente para evitar falsas

bandas de inhibicin. (Manrique E, 1997)
La bioautografa ha sido considerada como el ensayo ms eficiente para la deteccin
de componentes antimicrobiales, porque esta permite la localizacin de la actividad
en un complejo matriz y por lo tanto permite un directo aislamiento de los
constituyentes activos. El ensayo de bioautografia puede dividirse en tres grupos:
a. bioautografa directa: Donde los microorganismos crecen directamente sobre
la capa fina cromatogrfica.
b. bioautografia de contacto: Donde los componentes antimicrobiales son
transferidos de la fina capa cromatogrfica y son inoculados en una caja de
agar a travs de contacto directo.
c. bioautografia cubierta de agar o inmersin de bioautografia: Es donde el
medio de agar sembrado es aplicado encima de la fina capa cromatografica.
(Manrique E, 1997)
lxiv
3. FORMULACIN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN

3.1 Formulacin del problema
Tendrn actividad antimicrobiana los extractos etanlicos o aceites esenciales
obtenidos a partir de las
ferruginea,
Myrcianthes
especies vegetales Valeriana pilosa, Hesperomeles

rhopaloides
Passiflora
manicata
contra
los

aureus, Candida albicans y el hongo fitopatgeno Alternaria sp ?
3.2 Justificacin de la Investigacin
En la actualidad, el gran desafo para los pases ricos en biodiversidad es poder
vincular y convertir el conocimiento proveniente de los recursos biolgicos en
compuestos, procesos, mtodos, herramientas o productos tiles, como parte del
aprovechamiento y la explotacin sostenible de la diversidad biolgica en beneficio
de la sociedad. El Distrito Capital posee especies cuyas propiedades medicinales no
han sido estudiadas por completo, y con el fin de de generar conocimiento en cuanto
a las posibles propiedades farmacolgicas
se han seleccionado las especies
Myrcianthes rhopaloides, Passiflora manicata, Hesperomeles ferruginea y Valeriana

pilosa que posiblemente pueden tener propiedades antimicrobianas, ya que especies
de su misma familia y gnero han sido estudiadas preliminarmente por tener
principios activos bactericidas y fungicidas.
Este trabajo de grado se basa en evaluar la actividad antimicrobiana de extractos
etanlicos de las especies vegetales Valeriana pilosa, Hesperomeles ferruginea,
Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata para demostrar la capacidad
inhibitoria que ejercen stas sustancias obtenidas de estas plantas contra los
lxv
aureus, Candida albicans y el hongo fitopatgeno Alternaria sp para formar parte

del desarrollo cientfico de la sociedad, estudiar microbiolgicamente las propiedades
teraputicas de plantas colombianas ya que resulta imprescindible descubrir nuevas
sustancias con actividad antibitica frente a microorganismos resistentes y con alta
capacidad infectiva, aumentando la calidad de vida del hombre.
lxvi
4. OBJETIVOS
4.1 Objetivo General
Evaluar la actividad antimicrobiana de extractos etanlicos y aceites esenciales de las
especies vegetales Valeriana pilosa, Hesperomeles ferruginea, Myrcianthes
rhopaloides y Passiflora manicata frente a los microorganismos patgenos
Escherichia coli, Bacillus subtillis, Staphylococcus aureus, Candida albicans y el
hongo fitopatgeno Alternaria sp.
mediante la Prueba de Sensibilidad
Antimicrobiana.
4.2 Objetivos Especficos
- Realizar la prueba de sensibilidad antimicrobiana a cada uno de los extractos
vegetales utilizando los microorganismos seleccionados.
- Determinar cual de los extractos obtenidos presenta mayor accin contra los
microorganismos Escherichia coli, Bacillus subtillis, Staphylococcus aureus,
Candida albicans y Alternaria sp.
lxvii
5. MATERIALES Y MTODOS
5.1 LOCALIZACIN
El presente trabajo se llev a cabo en las instalaciones de los laboratorios de la
Subdireccin Cientfica del Jardn Botnico Jos Celestino Mutis de la ciudad de
Bogot D.C (JBJCMB).
5.2 RECOLECCIN DE LAS MUESTRAS
Se recolect el material vegetal para cada especie vegetal de la siguiente forma:
Myrcianthes rhopaloides
Passiflora manicata
Jardn Botnico Bogot Jos Celestino Mutis

Ubate 2800 mt
Hesperomeles ferruginea
Valeriana pilosa
Guacheta - 2400 mt
Pramo Cruz Verde (Choach, Cundinamarca)
Tabla 2. Peso en gramos del material vegetal a extraer.

Peso (g) de
extracto total
Hojas
Peso (g) de
material
vegetal
220
0.348
Peso (g)
extracto
utilizado
0.03
Hojas
200
0.253
0.03
Hojas
200
0.222
0.03
Hojas
250
0.436
0.03
Especie
vegetal
Parte de la
planta
Myrcianthes
rhopaloides
Passiflora
manicata
Hesperomeles
ferruginea
Valeriana
pilosa
5.3 TRATAMIENTO DEL MATERIAL VEGETAL

lxviii
Las plantas de las diferentes especies se separaron por partes, se lavaron con agua,
para luego secarlas a temperatura ambiente; una vez secas se cortaron
independientemente con el fin de obtener partculas uniformes, lo cual facilito el
proceso de extraccin, y se peso el material vegetal para conocer la cantidad exacta a
extraer, ver Tabla 2.
5.4 OBTENCIN DE EXTRACTOS
Tabla 3. Especies, Parte a estudiar y Extractos a evaluar
ESPECIES
PARTE A
EXTRACTOS A
ESTUDIAR
EVALUAR
Hojas
Extracto Etanlico y
Myrcianthes
aceite esencial
rhopaloides
Passiflora manicata
Hojas
Extract Etanlico
Hesperomeles
Hojas
Extracto Etanlico
Hojas
Extracto Etanlico
ferruginea
Valeriana pilosa
5.4.1 Extracto Etanlico
Se recolect el material vegetal descrito en la Tabla 2, posteriormente se puso a secar
a temperatura ambiente y cuando se sec se disminuy el tamao de partcula de
forma manual. Para obtener el extracto se adicion el solvente (etanol 90%) y se dej
en maceracin fra durante 48 horas. Posteriormente se puso en reflujo a 60C en
bao termostatado tres veces durante 4 horas, se concentr el extracto utilizando el
rotavapor y se dej secando el mismo a temperatura ambiente. Los extractos
obtenidos se almacenaron hasta el momento de utilizarlos a 4C. (Torres, 2004)
lxix
Figura 10. Rotavapor Heidolph LABOROTA 4000-EFFICIENT

De estos extractos se sacaron alcuotas para hallar la concentracin en peso de cada
extracto y su equivalencia en gramos (g), con ellos se evalu la actividad
antimicrobiana contra bacterias, hongo y levadura, a una concentracin especfica
para cada caso. (Arvalo A, 1996)
lxx
RECOLECCIN DE LA PLANTA
SEPARACIN DE LAS PARTES DE LA PLANTA
OBTENCIN DEL EXTRACTO ETANLICO
FLCULO
FILTRADO
CONCENTRAR EXTRACTO
REFRIGERAR 4C
Figura 11. Proceso para la obtencin de extractos a partir del material vegetal
5.4.2 Aceite Esencial: Con el material vegetal semiseco se realiz una
Hidrodestilacin con arrastre a vapor durante 4 horas utilizando un destilador de
aceites esenciales con capacidad 3 litros (Torres, 2007).
lxxi
Figura 12. Montaje hidrodestilacin hojas de Myrcianthes rhopaloides.

5.5 MICROORGANISMOS
5.5.1 Cepas: Se utilizaron los siguientes microorganismos Escherichia coli, Bacillus
subtillis y Sthaphylococcus aureus., los cuales fueron seleccionados bajo los
siguientes criterios.
representan diferentes grupos
Son agentes patgenos para humanos, por su relacin con los diferentes
cuadros clnicos que causan
Crean resistencia con mucha facilidad
lxxii
En el caso del hongo fitopatgeno, (Alternaria sp) se seleccion bajo el criterio:
Es un microorganismo que ataca con mucha frecuencia algunas de las

especies vegetales presentes en el arbolado urbano.
5.5.2 Aislamiento de las cepas

Patgenas: Se realiz la siembra de los microorganismos en Agar Mueller Hinton,
las cuales se incubaron a 35 C durante 24 horas, posterior a esta incubacin se
sembr cada microorganismo en medio selectivo para cada uno. Para E. coli
Chromocult (Colonias azul/violeta oscuro), para S. aureus Baird Parker (colonias
negras, lustrosas, convexas, 15 mm de dimetro, rodeado de un halo claro de 2-5
mm de anchura. Dentro del halo claro presencia de anillos opacos no visibles antes de
las 48h de incubacin) y BPLS (colonias naranja) para B. subtillis. Se realiz la
determinacin de las caractersticas macroscpicas y microscpicas para cada
microorganismo realizando Coloracin de Gram (Torres, 2007).
Fitopatgeno: Se realiz la siembra en medio PDA y se incubo a 27 C, durante 3- 5
Das. Posteriormente se determinaron las caractersticas macro y microscpicas
realizando Coloracin con azul de lactofenol (Torres, 2007).
5.6 ENSAYOS BIOLGICOS
5.6.1 Prueba de susceptibilidad antimicrobiana: Se utiliz la tcnica de difusin de
disco en Agar de Kirby-Bauer, prueba que permite medir la susceptibilidad in Vitro
de microorganismos patgenos y fitopatgenos frente a una sustancia o a la mezcla
de varias sustancias desconocidas de origen vegetal con potencial antimicrobiano
(Torres, 2007).
lxxiii
5.6.1.1 Tcnica de difusin de disco en Agar

5.6.1.1.1 Bacterias
Luego de tener las cepas totalmente aisladas en sus respectivos medios se tom por
cada microorganismo de 4 a 5 colonias y se coloc en 5 mL de solucin salina al
0.85%, se ajust las concentraciones con el Tubo No. 0.5 Mc Farland (1.5 x 106
UFC/mL). Luego la suspensin ajustada se sembr masivamente con escobilln
estril en el Agar Mueller Hinton para cada microorganismo. Posteriormente se
tomaron los discos de papel estriles a los cuales se les adicion 10 l de extracto con
una concentracin de 30 mg/mL de acetona, se dejaron secar en una caja de petri
cerrada luego se distribuyeron en cada una de las cajas que contenan Agar Mueller
Hinton. El control positivo fue un disco con cloramfenicol (10mg/mL) y el control
negativo fue agua estril.
Para hallar las concentraciones de los extractos se tomaron 0.03g y se adicionaron en
1mL de acetona, para la concentracin del control positivo se tomaron 0.01g y se
adicionaron en 1 mL de acetona.
Se dej incubando a 37C durante 24 horas, luego del periodo de incubacin se
realiz la lectura de los halos de inhibicin (mm). Todos los ensayos de actividad
antimicrobiana se realizaron cinco (5) veces.
5.6.1.1.2 Hongo
5.6.1.1.2.1 Evaluacin antifngica
Comprende la realizacin de los ensayos biolgicos para determinar la actividad
antifngica. Existen varios mtodos para la evaluacin de la actividad antifngica de
productos vegetales, los cuales se pueden agrupar en los tres siguientes:
-
Mtodo de crecimiento radial sobre un medio de Agar en caja de petri.
lxxiv
Mtodo de crecimiento en cultivo lquido (el cual puede ser medido como un
aumento en el peso seco o como un aumento en la turbidez).
El mtodo conocido como bioautografa (el cual utiliza una suspensin de

esporas fngicas, mientras que el extrado a analizar se separa previamente
por cromatografa en capa delgada (CCD).
Se prefiri en este caso el mtodo de crecimiento radial puesto que es el bioensayo

ms adecuado para hongos de rpido crecimiento. Se utiliz Agar PDA, este se
incub a 27 C de 5 a 10 das. Despus de la incubacin se aadi 10 mL de agua
destilada para remover las estructuras del hongo, de all se tomaron 0,1 mL para
realizar siembra masiva con escobilln estril. Se tomaron los discos de papel
estriles a los cuales se les adicion 10 l de extracto con una concentracin de 30
mg/mL de acetona. Se utiliz Griseofulvina como control positivo y como control
negativo agua estril.
Se dejaron incubando a 27 C de 3 5 das, luego del tiempo de incubacin se realiz
la lectura de los halos de inhibicin (mm). Todos los ensayos de actividad
antimicrobiana se realizaron cinco (5) veces.
5.6.1.1.3 Levadura
Teniendo la cepa totalmente aislada de Candida albicans, se tomaron de 4 a 5
colonias y se colocaron en un tubo que contena 5 mL de solucin salina al 0,85%, se
ajust la concentracin con el tubo N 0.5 Mc Farland (1.5 x 106 UFC/mL), luego la
suspensin ajustada se sembr masivamente con escobilln estril en Agar PDA.
Posteriormente se tomaron discos de papel estriles a los cuales se les adicion 10 l
de extracto con una concentracin de 30 mg/mL de acetona. El control positivo fue
un disco de papel con Griseofulvina (10mg/mL) y el control negativo fue agua estril.
lxxv
En todos los ensayos la lectura de los halos de inhibicin (mm) de la actividad

antimicrobiana se determin de la siguiente manera:
C = A - B
C = Tamao del halo de inhibicin ( mm)
A = Tamao del halo + disco de papel filtro
B = Tamao del disco de papel filtro(6 mm)
5.6.2 Ensayo biodirigido: Se realiz un estudio bioguiado al extracto que present
mayor actividad antimicrobiana, realizando una serie de fraccionamientos utilizando
diferentes solventes (diclorometano, alcohol isoamlico y agua) para determinar cual
fraccin es la responsable de la actividad antimicrobiana. Se tom aproximadamente
de 0.2 a 0.4 g de extracto vegetal y se disolvi en agua, se mezcl y se adicion
diclorometano (DCM), esto se agit en un embudo de decantacin y se le sac el gas
abriendo la llave, este proceso se realiz 3 veces. Se mantuvo sobre un soporte
metlico dejando que se separaran las fases (acuosa DCM) luego se sac la fase
acuosa en un vaso de precipitado y aparte la fase de diclorometano.
lxxvi
Figura 13. Fraccionamiento hojas de Passiflora manicata.
Figura 14. Fase diclorometano (DCM) de extracto hojas Passiflora manicata.
lxxvii
La fase acuosa se volvi adicionar al embudo de decantacin y se agrego alcohol

isoamlico, se agit y se dejo escapar el gas abriendo la llave, este proceso se realiz
3 veces. Se dejo sobre el soporte esperando que se separaran las fases (acuosa
alcohol isoamlico), posteriormente se obtuvo la fase acuosa y la fase de alcohol
isoamlico por separado.
Figura 15. Fase Acuosa - Fase Alcohol Isoamlico de extracto hojas de Passiflora
manicata.
Al final del procedimiento cada fase fue secada en el rotavapor para conocer el peso
(g) extracto de la fraccin obtenida.
lxxviii
Figura 16. Proceso para la obtencin de fracciones a partir del material vegetal
5.7 DISEO DE LA INVESTIGACIN
La presente investigacin estuvo basada en un estudio experimental cuantitativo que
buscaba encontrar la mayor actividad antimicrobiana representada en halos de
inhibicin que tuvieran los extractos obtenidos de las especies Myrcianthes
rhopaloides, Passiflora manicata, Hesperomeles ferruginea y Valeriana pilosa y
determinar cual de ellos era el mejor frente a microorganismos patgenos y
fitopatgenos. En la experimentacin se determinaron cinco (5) tratamientos
diferentes, cada uno cont con cinco (5) repeticiones.
lxxix
5.8 ANLISIS ESTADSTICO

La presente investigacin estuvo basada en un estudio experimental cuantitativo, el
anlisis estadstico se determin por medio de la prueba ANOVA (Anlisis de
varianza) y la comparacin de medias de Tukey.
Cada ensayo se realiz cinco (5) veces.
Hiptesis nula: Ninguno de los extractos obtenidos de las especies Myrcianthes
rhopaloides, Passiflora manicata, Hesperomeles ferruginea y Valeriana pilosa
presentan actividad antimicrobiana frente a los microorganismos seleccionados de
referencia (Patgenos y fitopatgenos).
Hiptesis alterna: Todos los extractos obtenidos de las especies Myrcianthes
rhopaloides, Passiflora manicata, Hesperomeles ferruginea y Valeriana pilosa
presentan actividad antimicrobiana frente a los microorganismos seleccionados de
referencia (Patgenos y fitopatgenos).
Variables: Las variables planteadas en el presente trabajo contribuirn a la
determinacin de aquellas especies que tienen propiedades antimicrobianas.
Dependiente: Tamao de Halo de inhibicin medido en mm.
Independiente: Tipo de microorganismo y tipo de extracto
lxxx
6. RESULTADOS Y DISCUSIN
Es comn el empleo popular de partes vegetales con la finalidad de obtener diversos
efectos teraputicos. Varios estudios han validado cientficamente la eficacia de
numerosos usos de la medicina tradicional utilizada por la gente. Entre las variadas
aplicaciones teraputicas de los vegetales, se incluyen aquellas con finalidad
antimicrobiana (Garzn, 2006).
Con el objetivo de evaluar la actividad antimicrobiana de extractos etanlicos y
aceites esenciales de las especies vegetales Valeriana pilosa, Hesperomeles
ferruginea, Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata frente a los
aureus, Candida albicans y Alternaria sp, se dise un experimento en el que se
compara la capacidad de los extractos vegetales de inhibir el crecimiento de los
microorganismos a travs de la Prueba de Sensibilidad Antimicrobiana, usando el
Cloramfenicol (Cm) y la griseofulvina como control positivo, teniendo en cuenta que
es un antibitico de amplio espectro activo en tcnicas in vitro contra un gran
nmero de bacterias, ya que previene la formacin de enlaces peptdicos y la sntesis
proteica en gran variedad de organismos Gram negativos y Gram positivos.
La inhibicin de la sntesis de protenas causada por el Cm en la mayora de los
microorganismos susceptibles produce un efecto bacteriosttico (Morales Y., 2007).
En el presente trabajo se utiliz una dosis de Cm (10 mg/mL), que al compararla con
la dosis de los extractos etanlicos de las plantas (30 mg/mL), determin que la
concentracin del extracto es tres (3) veces mayor que la del antibitico, lo cual
mostr efectividad presentando una no correlacin con la dosis empleada para el
antibitico sinttico, lo que nos permiti inferir que la concentracin del extracto
debe ser ms elevada, por ser una mezcla compleja de sustancias, mientras que el Cm
lxxxi
es una molcula sinttica, la cual contiene sus parmetros ya estandarizados (Torres,

2007).
En este experimento, la capacidad antimicrobiana es medida a travs del dimetro del
halo de inhibicin, el cual es afectado por dos factores: El microorganismo y el
extracto vegetal, en donde la actividad antimicrobiana de varios extractos vegetales es
evaluada sobre los diferentes microorganismos seleccionados. A continuacin se
presentan cinco grficas (grfica 1 - 5) que describen los resultados del experimento
conducido. En todos los casos, los puntos representan los dimetros de los halos de
inhibicin que se obtuvieron en el experimento para cada extracto vegetal
considerado. En todos los ensayos se tom como patrn de referencia el control
positivo para determinar cual era el que tena mayor actividad antimicrobiana.
Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata para S. aureus.
Extractos
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
EX1
4.6
0.894
EX2
4.0
0.707
EX3
7.4
1.516
EX4
1.2
0.836
Control
24
24
19
19
26
22.4
3.209
Positivo
lxxxii

control positivo para S. aureus.
Se observa claramente que el dimetro de los halos de inhibicin del extracto vegetal
Passiflora manicata fue menor al de los dems extractos en presencia del
microorganismo Staphylococcus aureus, es decir, que el poder inhibidor de este
extracto vegetal es mnimo. Se observa tambin que frente a este microorganismo el
extracto que present mejor actividad fue el de Myrcianthes rhopaloides, el cual
estuvo ms cercano al valor obtenido para el control positivo (Grfica 1).
Las posibles razones para que el crecimiento del microorganismo se viera poco
afectado es la existencia de mecanismos de resistencia por parte de S. aureus, la cual
esta relacionada con la activacin de una sntesis de la pared celular, con
hiperproduccin de protenas ligadoras de penicilinas, engrosamiento de la pared y el
encarcelamiento de frmacos por hiperproduccin de los componentes de pared
(Tavares, 2000).
Otros mecanismos que posee la bacteria son la produccin de la enzima coagulasa
que hace que se deposite el material de fibrina sobre los cocos protegindoles del
ataque por las clulas del hospedador, produccin de proteasas, nucleasas y lipasas
lxxxiii
que sirven para despolimerizar las protenas del hospedador, los cidos nucleicos y
las grasas, el desarrollo de una va bioqumica resistente la cual puede tener lugar por
intercambio gentico bloqueando el agente antimicrobiano y por eflujo donde el
microorganismo es capaz de bombear hacia afuera el antimicrobiano que va entrando
en la clula. Estudios previos han demostrado que S. aureus posee genes que le
permiten generar resistencia contra biocidas (Agentes qumicos y antibiticos)
(Tavares, 2000).
Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata para E. coli.
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
Extractos
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
EX1
7.2
1.643
EX2
5.4
1.341
EX3
10
12
10
10
1.224
EX4
24
19
24
14
12
18.6
5.549
Control
24
24
24
19
19
22
2.738
Positivo
lxxxiv

control positivo para E. coli.
En el caso de Escherichia coli se evidencia que el poder inhibidor del extracto vegetal
Passiflora manicata es muy similar al del Control Positivo (C+), representando una
buena actividad antimicrobiana para este. Sin embargo los dems extractos
presentaron actividad aunque mucho menor en comparacin con el control positivo y
con el extracto de Passiflora manicata (Grfica 2).
E. coli hace parte de las bacterias Gram negativas, adems del peptidoglicano, poseen
una capa adicional en su pared que esta compuesta de lipopolisacridos. Esta capa
representa una segunda bicapa lipdica, que no consta solamente de fosfolpidos como
la membrana plasmtica, sino que contiene polisacridos y protenas. Los lpidos y
polisacridos estn estrechamente unidos en la capa externa formando estructuras
lipopolisacridas especficas. La presencia del lipopolisacrido justifica que la
membrana externa se denomine generalmente capa de lipopolisacrido o simplemente
LPS. Los mecanismos de resistencia de estas bacterias pueden presentarse como
alteracin del sitio blanco o diana de antimicrobianos, disminucin de la
permeabilidad de la pared por poseer una pequea capa de peptidoglicano, la cual es
ms sensible, adquisicin de mecanismo de eflujo y cambio de va metablica
lxxxv
externa, lo anterior podra sugerir que el extracto etanlico de Passiflora manicata

puede poseer sustancias capaces de contrarrestar los mecanismos de resistencia del
microorganismo, como por ejemplo las saponinas las cuales actan sobre los lpidos
de la membrana ocasionando alteraciones y provocando muerte celular; as como lo
indica la Tabla N 5 presentando solo una diferencia de 2 unidades frente al control
positivo.
Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata para B. subtillis.
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
Extractos
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
EX1
7.2
1.789
EX2
5.2
1.303
EX3
14
14
19
24
22
18.6
4.560
EX4
34
36
39
34
36
35.8
2.049
Control
34
39
39
34
39
37
2.738
Positivo
lxxxvi

control positivo para B. subtillis.
Se observa para Bacillus subtillis que el efecto inhibidor de los extractos es mayor al
compararlos frente a los dems microorganismos evaluados, en este caso para
Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata, siendo este ltimo el ms cercano al
control positivo, definiendo que el extracto tiene el mejor poder inhibidor, lo cual se
traduce en que dicha especie puede ser una fuente natural de antimicrobianos
cumpliendo un papel importante en el rea teraputica capaz de inhibir un bacilo
Gram positivo esporulado, de tomar una molcula de DNA y transformarla, siendo
este un elemento natural que el microorganismo posee como factor de competencia y
resistencia regulada, existiendo
protenas especiales que juegan un papel en el
transporte y procesamiento del DNA. Estas protenas especficas de competencia

incluyen una protena de unin del DNA que esta asociada a la membrana, una
autolisina de la pared celular y varias nucleasas (Gutowski-Eckel, 1994) (Grfica 3).
de nutrientes esenciales como el nitrgeno y el carbono, proceso que solo dura 8
horas.
Este microorganismo fue el ms sensible en todos los ensayos biolgicos
posiblemente puede deberse a la estructura de su pared celular ya que como es un
microorganismo Gram positivo es menos compleja pues esta compuesta por una
lxxxvii
membrana citoplasmtica y una capa gruesa de peptidoglicano en comparacin con

los microorganismos Gram negativos que tienen una pared ms compleja ya que
posee una membrana citoplasmtica, un delgada capa de peptidoglicano,
lipopolisacridos y protenas.
Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata para C.albicans.
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
Extractos
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
EX1
1.6
2.190
EX2
3.2
2.387
EX3
4.6
2.880
EX4
5.4
2.302
Control
8.4
0.547
Positivo

Myrcianthes rophaloides y Passiflora manicata para Alternaria sp..
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
Extractos
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
EX1
2.4
1.516
EX2
2.6
0.894
EX3
4.6
2.607
EX4
4.2
1.095
Control
6.4
1.516
Positivo
lxxxviii

control positivo para C.albicans.

control positivo para Alternaria sp
En las grficas 4 y 5 se puede apreciar que para la levadura y el hongo fitopatgeno

ninguno de los extractos vegetales, incluido el Control Positivo (C+), logr generar
halos con dimetro superior a 10 mm. Lo que indica que los extractos vegetales no
presentaron una eficiente actividad antimicrobiana frente a este tipo de
lxxxix
microorganismos, por ser complejos y adicionalmente poseer diversos mecanismos

de resistencia entre las que encontramos la pared celular compuesta de polisacridos,
protenas, lpidos, iones inorgnicos y mananos. Los polisacridos (Quitina) y
glucanos no celulsicos. Los resultados anteriormente expuestos sugieren que los
extractos evaluados son ms eficientes con bacterias debido a que sus estructuras y
metabolismo celular es mucho menos complejo que el de los hongos (Tavares, 2000).
Para el anlisis de los datos se plante el siguiente modelo:
yij = + i +i+ ()ij +ij
Donde yij es el valor del halo de inhibicin en cada observacin, es la media
general, i es el efecto del factor A (microorganismo), j es el efecto del factor B
(extracto utilizado), ()ij es el efecto de la interaccin de los dos factores ij es el
efecto de error aleatorio. ij = 5
Se plantean hiptesis para probar los efectos de cada factor y de la interaccin de
estos. Para los efectos del factor A (microorganismo) se plantea:
H0: 1 = 2 = 3 = 4 = 5 = 0
Hi: al menos un i 0
Para probar los efectos del factor B (extracto) se plantea:
H0: 1 = 2 = 3 = 4 = 5 = 0
Hi: al menos un i 0
Para probar el efecto de la interaccin de los factores A y B se plantea:
xc
H0: ()ij = 0 para toda i, j

Hi: al menos una ()ij 0
En todas las tablas estn sombreados de rojo los microorganismos que presentaron
mayor resistencia y los extractos que tuvieron mayor actividad antimicrobiana; de
azul estn sombreados los microorganismos ms sensibles y los extractos con menor
actividad antimicrobiana.
Fuente de
variacin
MICR
EXTRAC
MICR *
EXTRAC
Error
Total
Suma de
cuadrados
4783,12
3993,68
3260,8
gl
4
4
16
536,4
12574
100
124
Cuadrados
medios
1195,78
998,42
203,8
F
222,93
186,13
37,99
Sig.
0,000
0,000
0,000
5,36
R Squared = ,957 (Adjusted R Squared = ,947)

La tabla 11 muestra que el nivel de significacin para los efectos de los dos factores
(Microorganismo Extracto) y de la interaccin es menor a 0.05, por lo tanto se
rechazan las hiptesis nulas, es decir, existen diferencias significativas de los halos de
inhibicin entre los microorganismos analizados y se presenta un efecto significativo
del extracto utilizado sobre el tamao de los halos de inhibicin; tambin se presenta
un efecto significativo de la interaccin microorganismo*extracto.
xci

seleccionados
N
SUBSET
Alternaria sp.
25
4.04
C. Albicans
25
4.64
S. aureus
25
E. coli
25
B. subtillis
25
MICR
Sig.
7.92
12.64
20.76
0.89
La prueba de comparacin de medias de Tukey indica que Alternaria sp. y C.

albicans son los microorganismos que presentaron menores halos de inhibicin, los
otros microorganismos presentaron halos de inhibicin significativamente superiores,
en orden de menor a mayor inhibicin estn: S. aureus, E. coli y B. subtillis.
Tabla 11. Prueba de comparacin de medias de Tukey para extractos.
N
SUBSET
25
4.08
Valeriana pilosa
25
4.6
25
Passiflora manicata
25
Control positivo
25
EXT.
Sig.
9.04
13.04
19.24
0.93
La prueba de comparacin de medias de Tukey entre extractos muestra que los

extractos 2 y 1 presentaron menor efecto inhibidos, pues presentan los menores
xcii
promedios de tamao de halo; los extractos 3, 4 y 5 (control positivo) presentan

tamaos de halo progresivamente superiores, con diferencias significativas entre s.
Como se present efecto significativo de la interaccin entre los factores extracto y
microorganismo, se evaluaron las diferencias por cada microorganismo, utilizando el
siguiente modelo:
yijk= + i + ijk
Donde yijk es el valor del halo de inhibicin en cada observacin, es la media
general, i es el efecto del extracto utilizado y ijkes el efecto de error aleatorio.
Tabla 12. Anlisis de varianza para S. aureus
Fuente de
variacin
EXTRAC
Error
Total
Suma de
cuadrados
1407.44
58.4
1465.84
gl
Cuadrados
medios
351.86
2.92
4
20
24
F
120.5
Sig.
0,000
La tabla de anlisis de varianza muestra un efecto significativo del extracto sobre el

halo de inhibicin en S. aureus.
xciii
SUBSET
Passiflora manicata
1.2
Valeriana pilosa
Control positivo
EXT.
4
4.6
4.6
7.4
22.4
Sig.
0.11
0.98
0.11
La prueba de comparacin de medias de Tukey indica que el control positivo presenta

un promedio de halo de inhibicin significativamente superior al observado con los
extractos; el extracto 3 presenta un efecto significativamente superior al del extracto
2.
Fuente de
variacin
EXTRAC
Error
Total
Suma de
cuadrados
1060.56
177.2
1237.76
gl
Cuadrados
medios
265.14
8.86
4
20
24
F
29.92551
Sig.
0,000

halo de inhibicin en E. coli.
xciv
SUBSET
5.4
Valeriana pilosa
7.2
10
Passiflora manicata
18.6
Control positivo
22
EXT.
Sig.
0.144481
0.397581

extractos 1,2 y 3. El extracto 4 presenta un efecto significativamente al del extracto 2.
Fuente de
variacin
EXTRAC
Error
Total
Suma de
cuadrados
4602.96
149.6
4752.56
gl
Cuadrados
medios
1150.74
7.48
4
20
24
F
153.8422
Sig.
0,000

halo de inhibicin en B. subtillis.
xcv
SUBSET
5.2
Valeriana pilosa
7.2
Passiflora manicata
35.8
Control positivo
37
EXT.
18.6
Sig.
0.775186
0.955519

extractos 1,2 y 3. El extracto 4 presenta un efecto significativamente al del extracto 2.
Los extracto 4 y 5 no presentan diferencia significativa entre ellos.
Fuente de
variacin
EXTRAC
Error
Total
Suma de
cuadrados
130.16
97.6
227.76
gl
Cuadrados
Medios
32.54
4.88
4
20
24
F
6.668033
Sig.
0,001

halo de inhibicin en Candida albicans.
xcvi
SUBSET
Valeriana pilosa
1.6
3.2
4.6
4.6
Passiflora manicata
5.4
5.4
Control positivo
EXT.
8.4
Sig.
0.086117
0.086117

extractos 1, 2. Los extractos 3 y 4 no presentan diferencias significativas entre ellos.
Fuente de
variacin
EXTRAC
Error
Total
Suma de
cuadrados
53.36
53.6
106.96
gl
Cuadrados
Medios
13.34
2.68
4
20
24
F
4.977612
Sig.
0,006

halo de inhibicin en Alternaria sp.
xcvii
SUBSET
Valeriana pilosa
2.4
2.6
Passiflora manicata
4.2
4.2
4.6
4.6
Control positivo
EXT.
6.4
Sig.
0.248543
0.248543

un promedio de halo de inhibicin estadsticamente no significativo entre todos los
extractos. Los extractos 1 y 2 no presentan diferencias significativas entre ellos, al
igual que los extractos 3 y 4.
fraccionamiento de hojas de Passiflora manicata para E. coli.
Extracto
Passiflora
Replica 1
manicata
(mm)
FR1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
10
8.6
0.894
FR2
FR3
0.6
0.894
Control
21
22
18
19
21
20.2
1.643
positivo
xcviii

fraccionamiento de hojas de Passiflora manicata para S. aureus.
Extracto
Passiflora
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
manicata
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
FR1
FR2
FR3
Control
18
19
18
20
20
19
positivo

fraccionamiento de hojas de Passiflora manicata para B. subtillis.
Extracto
Passiflora
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
manicata
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
FR1
5.2
0.836
FR2
FR3
0.707
Control
30
32
34
32
34
32.4
1.673
positivo
xcix

fraccionamiento de hojas de Passiflora manicata para Candida albicans.
Extracto
Passiflora
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
manicata
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
FR1
FR2
FR3
Control
12
11
Replica 5
3.8
0.836
0.4
0.547
13
11
13
12
(mm)
positivo
Tabla 26. Tamao halos de inhibicin (mm), promedio, desviacin estndar y de

fraccionamiento de hojas de Passiflora manicata para Alternaria sp.
Extracto
Passiflora
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
manicata
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
FR1
4.7
0.577
FR2
FR3
Control
22
23
22
20
20
21.4
1.342
positivo
Grfica 6. Dimetro de halos de inhibicin Vs. Microorganismos seleccionados para

las diferentes fases.
Con base en el anlisis de los resultados estadsticos se determin que el extracto ms

eficiente frente a todos los microorganismos evaluados fue el de la especie Passiflora
manicata, siendo este extracto el candidato para realizar el fraccionamiento para
determinar cual fracin era la responsable de la actividad antimicrobiana. En la
Grfica 6 se aprecian las diferencias entre el dimetro promedio del halo de
inhibicin del extracto vegetal Passiflora manicata en presencia de los
microorganismos seleccionados para cada una de las fases (FR1, FR2, FR3). Se
observa que el comportamiento del halo de inhibicin en FR2 y FR3 del extracto
vegetal es muy similar, adicionalmente que el dimetro del halo de inhibicin en FR1
es ms parecido al halo del Control Positivo (C+) en comparacin a las otras dos
fases.
ci
Grfica 7. Halos de inhibicin Vs. Fracciones para cada microorganismo
En la Grfica 7 se aprecian las diferencias entre el dimetro promedio del halo de

inhibicin del extracto vegetal Passiflora manicata en sus tres fases para todos los
microorganismos seleccionados. Se observa que el comportamiento de Bacillus
subtillis es mayor para FR1 en comparacin con las siguientes fases (FR2 y FR3).
Tambin se muestra que el microorganismo con menos actividad antimicrobiana fue
C. albicans ya que el promedio de halos de inhibicin fue tan solo 3.8 mm para FR1
en comparacin con el mejor de B. subtillis que fue de 5.2 mm, en este caso el
Control positivo (C+) fue de 12 mm.
Por otra parte las tres fases evaluadas (FR1, FR2, FR3) estuvieron definidas de
acuerdo a la polaridad de cada solvente, es decir, de mayor a menor polaridad. Donde
FR1 es una mezcla de compuestos de alta polaridad en los cuales posiblemente se
pueden encontrar taninos, protenas hidrosolubles y azcares responsables de la
actividad antimicrobiana evaluada, tal como lo sugiere Domingo & Lopez Brea
(2003) 1 al definir que los extractos vegetales poseen una gran cantidad de
compuestos qumicos con carcter antimicrobiano, algunos de los cuales muestran
una actividad in Vitro comparable a los de los microbianos sintticos utilizados en la
cii
clnica, lo que podemos comparar con el extracto etanlico de Passiflora manicata al

observar los resultados obtenidos en el tamao de halos de inhibicin del extracto
Vs. control positivo.
De esta manera en la fase FR1 se observ halos de inhibicin superiores a los de las
dems fases indicando que en ella se encuentra la molcula responsable del principio
activo con marcada actividad antimicrobiana. La fraccin FR2 fue la que obtuvo el
menor rendimiento en la evaluacin antimicrobiana para el extracto vegetal de
Passiflora manicata.
Fuente de
variacin
MICR
FRAC
MICR *
FRAC
Error
Total
Suma de
cuadrados
347.76
7306.59
836.96
gl
4
3
12
83.2
8574.51
80
99
Cuadrados
medios
86.94
2435.53
69.74667
F
83.59615
2341.856
67.0641
Sig.
0,000
0,000
0,000
1.04

La tabla 29 muestra que el nivel de significacin para los efectos de los dos factores
(Microorganismo Extracto) y de la interaccin es menor a 0.05. Existen diferencias
significativas de los halos de inhibicin entre los microorganismos analizados y se
presenta un efecto significativo de la fraccin utilizada sobre el tamao de los halos
de inhibicin; tambin se presenta un efecto significativo de la interaccin
microorganismo*fraccin.
ciii

seleccionados
.
N
SUBSET
C. albicans
20
4.05
S. aureus
20
5.75
Alternaria sp.
20
6.05
E. coli
20
B. subtillis
20
MICR
7.35
9.65
Sig.
0.884324
La prueba de comparacin de medias de Tukey indica que Candida albicans y S.

aureus son los microorganismos que presentaron menores halos de inhibicin, los
otros microorganismos presentaron halos de inhibicin significativamente superiores,
en orden de menor a mayor inhibicin estn: Alternaria sp., E. coli y B. subtillis.
Tabla 29. Prueba de comparacin de medias de Tukey para fracciones.
N
SUBSET
FR2
25
0.08
FR3
25
0.32
FR1
25
C+
25
EXT.
Sig.
4.88
21
0.83908
civ
La prueba de comparacin de medias de Tukey entre fracciones muestra que las

fracciones 2 y 3 presentaron menor efecto inhibidor, pues presentan los menores
promedios de tamao de halo; las fracciones 1 y 4 (control positivo) presentan
tamaos de halo progresivamente superiores, con grandes diferencias significativas
entre s.
Tabla 31. Anlisis de varianza para S. aureus con las diferentes fracciones
Fuente de
variacin
FRAC
Error
Total
Suma de
cuadrados
1223.75
8
1231.75
gl
Cuadrados
medios
407.9167
0.5
3
16
19
F
815.8333
Sig.
0,000

halo de inhibicin en S. aureus.
N
SUBSET
FR2
FR3
FR1
C+
FRAC.
4
19
1
Sig.
cv

un promedio de halo de inhibicin significativamente superior al observado con las
fracciones; la fraccin 1 presenta un efecto significativamente al de las dems
fracciones.
Tabla 32. Anlisis de varianza para E. coli con las diferentes fracciones
Fuente de
variacin
FRAC
Error
Total
Suma de
cuadrados
1331.35
17.2
1348.55
gl
Cuadrados
Medios
443.7833
1.075
3
16
19
F
412.8217
Sig.
0,000
La tabla de anlisis de varianza muestra un efecto significativo de las fracciones sobre

el halo de inhibicin en E. coli.
N
SUBSET
FR2
FR3
0.6
FR1
C+
FRAC.
Sig.
8.6
20.2
0.797264

un promedio de halo de inhibicin significativamente superior al observado con todas
cvi
las fracciones. La fraccin 1 presenta un efecto significativamente superior a las

fracciones 2 y 3.
Tabla 34. Anlisis de varianza para B. subtillis con las diferentes fracciones
Fuente de
variacin
FRAC.
Error
Total
Suma de
cuadrados
3526.55
16
3542.55
gl
Cuadrados
medios
1175.517
1
3
16
19
F
1175.517
Sig.
0,000
La tabla de anlisis de varianza muestra un efecto significativo de la fraccin sobre el

halo de inhibicin en B. subtillis.
N
SUBSET
FR2
FR3
FR1
C+
FRAC.
Sig.
5.2
32.4
0.416163

fracciones 1,2 y 3. La fraccin 1 presenta un efecto significativamente superior al de
las otras.
cvii

Fuente de
variacin
FRAC.
Error
Total
Suma de
cuadrados
464.95
8
472.95
gl
Cuadrados
Medios
154.9833
0.5
3
16
19
F
309.9667
Sig.
0,000

halo de inhibicin en Candida albicans.
N
SUBSET
FR3
FR2
0.4
FR1
C+
FRAC.
Sig.
3.8
12
0.807829

fracciones. La fraccin 1 presentan diferencias significativas con respecto a las
fracciones 2 y 3.
cviii

Fuente de
variacin
FRAC
Error
Total
Suma de
cuadrados
1596.95
34
1630.95
gl
Cuadrados
Medios
532.3167
2.125
3
16
19
F
250.502
Sig.
0,000

halo de inhibicin en Alternaria sp.
N
SUBSET
FR2
FR3
FR1
C+
FRAC.
Sig.
2.8
21.4
1

un promedio de halo de inhibicin estadsticamente significativo para todas las
fracciones. La fraccin 1 presenta diferencias significativas entre ellas.
cix
esencial de hojas de Myrcianthes rhopaloides para B. subtillis.
Aceite
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
Esencial
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
AE 1
4.123
Control
34
37
34
39
34
35.6
2.302
positivo
esencial de hojas de Myrcianthes rhopaloides para S. aureus.
Aceite
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
Esencial
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
AE 1
24
19
19
14
19
19
3.535
Control
27
27
30
29
29
28.4
1.341
positivo

aceite esencial de hojas de Myrcianthes rhopaloides para E. coli.
Aceite
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
Esencial
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
AE 1
4.8
1.643
Control
16
15
15
17
15
15.6
0.894
positivo
cx
esencial de hojas de Myrcianthes rhopaloides para Alternaria sp.
Aceite
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
Esencial
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
AE 1
19
14
19
17
19
17.6
2.191
Control
28
27
27
29
29
28
positivo

aceite esencial de hojas de Myrcianthes rhopaloides para Candida albicans.
Aceite
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Replica 4
Replica 5
Esencial
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
AE 1
24
22
20
24
22
22.4
1.673
Control
26
24
29
27
24
26
2.121
positivo
Grfica 8. Halos de inhibicin Vs Microorganismos seleccionados frente al aceite

esencial de M. rhopaloides
La Grfica 8 muestra que el microorganismo que mejor se comporto frente al aceite

cxi
esencial fue Candida albicans. En general las bacterias Gram positivas (Bacillus
subtillis, S. aureus) fueron mas sensibles que la bacteria Gram negativa (E. coli) la
cual fue ms resistente frente a este, pudiendo tener su causa en la diferencia que
presentan estas bacterias en cuanto a su pared celular, lo cual determinar la
penetracin o no del terpenoide a la clula bacteriana para que produzca su accin
bacterioestatica ( Maguna, 2006).
Segn Maguna (2006) uno de los principales mecanismos de accin propuestos para
los terpenoides consiste en la disrupcin de la membrana celular bacteriana mediante
tres (3)
posibles vas: aumentando la permeabilidad de la membrana a iones
pequeos, afectando la estabilidad estructural de la membrana y desestabilizando el

empaquetamiento de la bicapa lipdica, cualquiera de estos tres efectos produce la
muerte en la clula bacteriana
Entonces podramos considerar que el hecho de que las bacterias Gram negativas
presenten mayor sensibilidad, entre otras cosas, puede deberse a su pared celular
menos compleja dado que tiene una capa simple (red de murena delgada), mientras
que en las Gram positivas es una estructura de multicapa (red de murena muy
desarrollada y llega a tener hasta 40 capas) (Maguna, 2006).
Con base en lo anterior y de acuerdo con lo reportado por iii Hernndez & Rodrguez
(2001), se confirma con los resultados obtenidos para el aceite esencial evaluado de
las hojas de Myrchianthes rhopaloides encontrando que tambin posee actividad
antibacteriana y antifngica como otras especies vegetales de familia de Myrtaceae.
Finalmente se puede establecer que los extractos etanlicos de las especies vegetales
evaluados poseen de leve a moderada actividad antimicrobiana frente a los
microorganismos seleccionados, encontrando que el que posee mas potencial
bacteriosttico y fungisttico es el extracto obtenido a partir de las hojas de Passiflora
manicata, el cual teniendo un amplio espectro de inhibicin puede ser capaz de
cxii
inhibir tanto micoorganismos Gram positivos, Gram negativos y hongos siendo mas
efectivos frente al primer grupo mencionado, adicionalmente la fraccin del extracto
crudo identificada con potencial antimicrobiano fue la fase en donde pueden
encontrarse compuestos de alta polaridad como taninos y protenas entre otros
reportados por diversos autores como responsables de dicha actividad (Ver figura 18,
19 y 20 )
En cuanto Myrcinathes rhopaloides se confirma que al aceite esencial obtenido a
partir de las hojas posee actividad antibacterina como lo han reportado para especies
de la familia de las Mirtaceas.
Fuente de
variacin
MICR
ACEITE
MICR *
ACEITE
Error
Total
Suma de
cuadrados
1352.72
2035.22
970.48
gl
212.8
4571.22
40
49
4
1
4
Cuadrados
medios
338.18
2035.22
242.62
F
63.56767
382.5602
45.60526
Sig.
0,000
0,000
0,000
5.32

La Tabla 47 muestra que el nivel de significacin para los efectos de los dos factores
(Microorganismo Aceite) y de la interaccin es menor a 0.05. Existen diferencias
significativas de los halos de inhibicin entre los microorganismos analizados y se
presenta un efecto significativo del aceite utilizado sobre el tamao de los halos de
inhibicin; tambin se presenta un efecto significativo de la interaccin
microorganismo*aceite.
cxiii

seleccionados con respecto al aceite esencial.
N
SUBSET
E. coli
10
10.2
B. subtillis
10
20.8
Alternaria sp.
10
22.8
22.8
S. aureus
10
23.7
23.7
C. albicans
10
MICR
Sig.
24.2
1
0.055535
0.657771
La prueba de comparacin de medias de Tukey indica que E. coli y S. aureus son los
microorganismos que presentaron menores halos de inhibicin, en general no hay
diferencias significativas entre el valor promedio de los halos de inhibicin y los
microorganismos seleccionados.
cxiv
Figura 17. Ensayos biolgicos con extractos vegetales EX1 (Valeriana pilosa), EX2
(Hesperomeles ferruginea), EX3 (Myrcianthes rhopaloides), EX4(Passiflora
manicata) , C+ (Control positivo), C- (Control Negativo) frente a microorganismos
patgenos y fitopatgenos A. Escherichia coli, B. Candida albicans, C.
Staphylococcus aureus, D. Bacillus subtillis, E. Alternaria sp.
Figura 18. Ensayo biolgico de las fracciones (FR1: Fase acuosa, FR2: Fase Diclorometano,
FR3: Alcohol isoamilico) del extracto de Passiflora manicata frente a E. coli
cxv
Figura 19. Ensayo biolgico del aceite esencial del extracto de M. rhopaloides frente A. B.
subtillis y B. C. albicans
cxvi
7. CONCLUSIONES
El extracto etanlico de hojas de Passiflora manicata revel la mayor

actividad antimicrobiana contra los microorganismos seleccionados, siendo
Bacillus subtillis el microorganismo con los valores ms altos de inhibicin.
Los microrganismos Gram positivos evaluados fueron ms sensibles al poder
inhibidor de los extractos etanlicos, siendo los hongos los que mostraron
ms resistencia.
La fase acuosa del extracto etanlico crudo
manicata
mostr
mayor
actividad
de las
antimicrobiana
hojas de Passiflora
con
todos
los
microorganismo seleccionados en comparacin con la fase de diclorometano y

la fase de alcohol isoamlico evaluada.
El aceite esencial obtenido de las hojas de Myrchiantes rhopaloides present
mayor actividad antimicrobiana obtenida frente a los microorganismos
evaluados.
El extracto etanlico obtenido de Passiflora manicata puede constituirse en
una fuente de principios activos que contribuyan al descubrimiento de
antimicrobianos de origen natural los cuales pueden ser utilizados como linea
base para la sintesis de molculas tiles a nvel farmacutico.
El estudio realizado permiti conocer algunas de las potencialidades de uso de
las especies Passiflora manicata, Hesperomeles ferruginea, Myrcianthes
rhopaloides y Valeriana pilosa
presentes en los ecositemas del Distrito
Capital y la regin contribuyendo al aumento del conocimiento de las mismas.
cxvii
8.RECOMENDACIONES
Se recomienda identificar, separar y elucidar la molcula presente en la fase

acuosa del extracto crudo de Passiflora manicata responsable de la actividad
antimicrobiana reportada en el presente trabajo, con el fin de generar
alternativas para la obtencin de nuevos antimicrobianos de amplio espectro a
partir de una fuente de origen natural .
Se recomienda realizar estudios in vivo con el fin de determinar la

concentracin inhibitoria mnima de la fase acuosa con el objetivo de utilizar
el extracto obtenido en la formulacin de nuevos productos con potencial
biocida.
Se recomienda realizar estudios in vivo con el fin de determinar la estabilidad

del extracto obtenido frente a agentes fsicos y qumicos que puedan interferir
en la actividad antimicrobiana descrita en el presente trabajo.
cxviii
9.BIBLIOGRAFIA
ALONSO G.N., BETANCOURT B.J., MARTNEZ M.J. 1996. Actividad

Antimicrobiana de Schinus terebentnifolius Raddi (Copal), Rev. Cubana plant Med
Mxico D.F. 1(3): 37-39
ARVALO A. MYRIAM, ENCISO R ALEXANDRA. 1996. Determinacin de la
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Ciencias Bsicas. Departamento Microbiologa. Pontificia Universidad Javeriana.
Trabajo de Pregado. Bogot D.C. Pg. 14,16 ,17 ,18 , 21, 22, 23, 24, 25.
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Pontificia Universidad Javeriana. Trabajo de Pregado. Bogot D.C. Pg. 21 y 22.
cxxiv
ANEXO 1
PREPARACIN AGAR MUELLER HINTON
Composicin
g/L
Infusin de carne
Hidrolizado de casena
17.5
Almidn
Agar Agar
1.5
13
Preparacin
Disolver 34 g/L, esterilizar con cuidado en autoclave (10 min a 115C). Enfriar
eventualmente a 45 50 C para incorporar del 5 al 10% de sangre desfibrinada.
Verter placas. pH: 7.4 0.2. Las placas con medio de cultivo sin la sangre son claras
y de color parduzco opalecescent.
cxxv
ANEXO 2
PREPARACIN AGAR CHROMOCULT
Composicin
g/L
Peptona
Cloruro sdico
Dihidrgenofosfato potsico
1.7
Hidrgenofosfato dipotsico
Piruvato sdico
Triptfano
Lauril sulfato sdico
0.1
Mezcla de cromgenos
0.2
Agar Agar
12
Preparacin
Disolver 27 g/L en agua desmineralizada por calentamiento en el bao de agua
hirviendo o en vapor fluente, enfriar a 45 50 C y verter en placas. pH 6.8 0.1 a
25 C.
El empleo se rige segn los correspondientes mtodos de investigacin para agua y
alimentos. Incubacin: 24 horas, eventualmente hasta 48 horas a 35 37 C.
cxxvi
ANEXO 3
PREPARACIN AGAR PAPA DEXTROSA (PDA)
Composicin
g/L
Infusin de patata (preparada a partir de 200 g de patata)
Glucosa
20
Agar Agar
15
Preparacin
Disolver 39 g/L y esterilizar en autoclave (15 min, a 121C). pH: 5,6 0,1.
Para ajustar el pH a aprox. 3,5, incorporar al medio de cultivo, a 45 50C, una
solucin estril de cido tartrico al 10%, a razn de 14 mL/L.
Las placas con medio de cultivo son claras e incoloras.
Este medio de cultivo se siembra, por estra, en superficie, o mediante el
procedimiento de incorporacin. Incubacin: hasta 5 das a temperatura ambiente.
Levar a cabo la investigacin de acuerdo con los correspondientes fines de empleo.
ANEXO 4
cxxvii
PREPARACIN AGAR BAIRD PARKER
Composicin
g/L
Peptona de casena
10
Extracto de carne
Extracto de levadura
Piruvato sdico
10
Glicina
12
Cloruro de Litio
Agar Agar
15
Preparacin
Disolver 58 g en 0.95 L, esterilizar en autoclave (15 min, a 121C), enfriar a 45 50
C, aadir mezclando 50 mL de emulsin de yema de huevo telurito y,
eventualmente, 50 mg/L de Sulfametacina. Verter en placas. pH: 6,8 0,2.
En tanto que el medio de cultivo basal puede guardarse de 1 a 2 meses a 4C, el
medio de cultivo completo, vertido en placas, ha de ser utilizado dentro de las 24
horas siguientes a su preparacin.
Diluir convenientemente el material a investigar y extenderlo finamente sobre la
superficie del medio de cultivo. Incubacin: desde 24 hasta 48 horas a 37C.
ANEXO 5
cxxviii
PREPARACIN DE AGAR BPLS (Verde brillante, Rojo de fenol, Lactosa y

Sacarosa)
Composicin
g/L
Peptona de
Peptona de casena
Extracto de carne
Cloruro sdico
Hidrogenofosfato disdico
Lactosa
10
Sacarosa
10
Rojo de Fenol
0,08
Verde Brillante
0,0125
Agar Agar
12
Preparacin
Disolver 52 g/L, esterilizar en autoclave (15 min, a 37C) y verter en placas. Ph: 6,9
0,1.
Las placas con medio de cultivo son claras con un color ligeramente rojizo.
Sembrar directamente con el material objeto de investigacin, o a partir de un cultivo
de enriquecimiento. Deben utilizarse en paralelo medios de cultivo menos
inhibidores. Incubacin: 18 a 24 horas a 37C.
cxxix
cxxx
cxxxi

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EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS

EXTRACTOS ETANLICOS Y/O ACEITES ESENCIALES DE LAS

ANDREA JIMENA LIZCANO RAMN

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

Bogot D.C., Colombia

EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS

ANDREA JIMENA LIZCANO RAMN

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS

ANDREA JIMENA LIZCANO RAMN

EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS

ANDREA JIMENA LIZCANO RAMN

Ingrid Schuler. Phd

Janeth Arias Palacios M.Sc.

Durante estos aos ha habido momentos inolvidables, para alegrarse, para

PDA (Agar papa dextrosa)

4.2 Objetivos Especficos

Tabla 1. Anlisis bromatolgicos proximales para M. rhopaloides (contenido/100g

Tabla 16. Anlisis de varianza para B. subtillis

PREPARACIN AGAR MUELLER HINTON

PREPARACIN AGAR CHROMOCULT

PREPARACIN AGAR PAPA DEXTROSA (PDA)

PREPARACIN AGAR BAIRD PARKER

PREPARACIN DE AGAR BPLS (Verde brillante, Rojo de fenol,

y aceite esencial obtenidos a partir de 4 especies Valeriana pilosa,

Hesperomeles ferruginea, Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata priorizadas

Escherichia coli, Bacillus subtillis, Staphylococcus

aureus, Candida albicans y un hongo fitopatgeno Alternaria sp, cepas adquiridas de

reflujo con etanol-agua(9:1) para su posterior

extracto obtenido por especie vegetal,

utilizando de igual manera como control positivo 10 g de cloramfenicol y agua

Colombia cuenta con un extenso banco de germoplasma, rico en molculas activas de

dada la gran disminucin de

disponibilidad, uso y aprovechamiento de especies vegetales que se encuentran en

semillas, hojas y tallos) y de la

identificacin y caracterizacin de los metabolitos secundarios de especies vegetales

uso sostenible de todos aquellos recursos vegetales

disponible en el entorno trabajando activamente en la deteccin y caracterizacin de

que pueden tener

aplicacin en la industria (cosmtica, farmacutica, textilera y agroalimentaria)

2.1.3 Metabolito secundario

2.2.1.1 Extractos blandos

2.2.2 Caractersticas de los extractos

para observar su calidad

y composicin final. Estos trabajos fueron

remontados por Corpas, quien propuso realizar ensayos de identidad a los

En el primer grupo tenemos aquellos a los cuales no se les ha adicionado ninguna

2.4 MOLCULAS ACTIVAS EN EL MBITO MEDICINAL E INDUSTRIAL

Fitoterapia que acta a nivel de los vasos sanguneos.

tetrahidrocannabinol es alucingeno. Los polifenoles del helecho son antihelmnticos

grupo fitoqumico tienen propiedades antispticas. La vainilla por ejemplo tienen

antispticas. El ascaridol, tiene propiedades vermfugas. La tuyona tiene propiedades

Rubefaciente se refiere a la sustancia que produce un enrojecimiento en la piel debido al flujo de la

metabolitos de estrs biolgico. Ellos pueden ser constitutivos o tambin ser

con los hetersidos y los

nitrgeno y oxgeno. Excepcionalmente algunos alcaloides

contienen azufre (Torres C, 2004).

polimricas y se pueden dividir en hidrolizables y condensados, en funcin de que

2.4.15 Cromenos y Benzofuranos: Los cromenos y benzofuranos son productos

demostrado: accin citotxica, antitumoral, analgsica, inhibidoras del crecimiento de

Figura 1. Valeriana pilosa Fuente: Autores

Sinnimos: Valeriana longifolia H.B.K., Valeriana longifolia var. pilosa

2.5.1.1.3 Fitoqumica: Los anlisis fitoqumicos preeliminares uno realizado en las