3.

BIOSINTESIS DE NUCLEOTIDOS PURICOS

Vernica Gonzlez Nez

Universidad de Salamanca

ESQUEMA. Biosntesis de nucletidos pricos

1. Va de novo de la biosntesis de nucletidos pricos
- Precursores
- Caractersticas de la va
- Reacciones de la va hasta la sntesis del IMP
- Balance
- Sntesis de ATP y GTP
- Sntesis de nucletidos trifosfato
- Sntesis de purinas vs. pirimidinas
- Agentes bloqueantes de la va de novo
2. Regulacin de la biosntesis de nucletidos pricos
- Regulacin de la va de novo de biosntesis de nucletidos pricos
- Regulacin coordinada de las sntesis de purinas y pirimidinas
3. Va de recaptacin de nucletidos pricos
4. Catabolismo de los nucletidos pricos
5. Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos
- Sndrome de Lesch-Nyhan: deficiencia en HGPRT
- Hiperuricemias y gota

SINTESIS DE NOVO DE NUCLEOTIDOS PURICOS

PRECURSORES

CO2

Gly

Asp

Formato

Formato
Gln
Estudios con marcaje radiactivo

Caractersticas de la va
- 2 procesos: Sntesis del IMP 11 pasos
Sntesis de AMP & GMP
- Los tomos del anillo prico se incorporan 1 a 1, excepto la Gly
- El anillo prico se sintetiza unido a la ribosa-5P
- Elevado gasto : 7 ATP / IMP
- Localizacin: en el hgado

Channeling en animales en la sntesis del IMP

3 polipptidos multifuncionales
- Fosforribosil aminoimidazol sintasa: reacciones 3, 4, 6
- Fosforribosil aminoimidazol succinil carboxamida sintasa: reacciones 7 & 8
- IMP sintasa: reacciones 10 & 11

SINTESIS DEL IMP

Fuente de la imagen
http://en.wikipedia.org/wiki/Category:Biochemistry
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1. Sntesis de la PRPP (I)

-D-ribosa-5P + ATP PRPP + AMP

Ribosa5P

Fosforribosilpirofosfato (PRPP)

Ciclo de las pentosas-P

Precursor de:

Enzima: Ribosa-5P pirofosfokinasa

- nucletidos pirimidnicos
- His & Trp

1. Sntesis de la PRPP (II)

Enzima: Ribosa-5P pirofosfokinasa

Mecanismo: ataque nucleoflico del C1-OH de la ribosa al enlace fosfato- del
ATP y transferencia del grupo pirofosfato
Formacin de un enlace en configuracin entre el fosfato y el C1 de la ribosa
PRPP: reactivo limitante en la sntesis de nucletidos pricos

Regulacin: + PPi, 2,3BPG

- ADP & GDP

2. Adquisicin del N9 de la Gln (I)

PRPP + Gln + H2O P-ribosil--amina + Glu + PPi

PRPP

Enzima: Amido-fosforribosil-transferasa
(PPi 2Pi Enzima: pirofosfohidrolasa)

Fosforribosilamina

2. Adquisicin del N9 de la Gln (II)

PRPP + Gln + H2O P-ribosil--amina + Glu + PPi

Enzima: Amido-fosforribosil-transferasa

(PPi 2Pi Enzima: pirofosfohidrolasa)

- Primera reaccin especfica de la va
- Punto clave en la regulacin
- Inversin de la configuracin
- Inhibicin por retroalimentacin negativa

3. Adquisicin de los tomos C4, C5 & N7 de la Gly

fosforribosil--amina + Gly + ATP GAR + ADP + Pi

Fosforribosilamina

GAR

Enzima: GAR Sintetasa

GAR: Glicinamida ribtido
- Formacin de un enlace amida con el grupo COOH de la Gly
- Formacin de un intermediario activado (acil-P)
Gly + ATP NH2-CH2-COO-PO32- +ADP

4. Adquisicin del C8 (I)

GAR + N10-formil-THF FGAR + THF

GAR

Enzima: GAR Transformilasa

FGAR: Formilglicinamida ribtido

FGAR

4. Adquisicin del C8 (II)

GAR + N10-formil-THF FGAR + THF

Enzima: GAR Transformilasa
- C cedido por el N10-formil-THF procede de Ser / Gly
- Grupo formilo clave en la condensacin del ciclo

Mecanismo
Ataque nucleoflico del grupo NH2 del GAR al grupo formilo del N10-formil-THF
Formacin de un intermediario tetradrico

Transferencia del grupo formilo

5. Adquisicin del N3 (I)

FGAR + Gln + ATP + H2O FGAM + Glu + ADP + Pi

FGAR
Enzima: FGAM Sintetasa
FGAM
Formilglicinamida ribtido

FGAM

5. Adquisicin del N3 (II)

FGAR + Gln + ATP + H2O FGAM + Glu + ADP + Pi

Mecanismo de accin de la FGAM sintetasa
1. C=O de FGAR (forma isoamida) + ATP intermediario P-ster
Gln (C amidado) + SH de la enzima formacin de un tioster

2. Hidrlisis del tioster: Glu + NH3

3. NH3 + P-ster formacin de un aducto tetradrico
4. Desfosforilacin y formacin del enlace imino

6. Cierre del anillo imidazol

FGAM + ATP AIR + ADP + Pi

FGAM

AIR

Enzima: AIR Sintetasa

AIR: 5-aminoimidazol ribtido
- Condensacin intramolecular
- Tautomerizacin imino # enamino propiedades aromticas

7. Adquisicin del C6 (I)

AIR + ATP + HCO3- CAIR + ADP + Pi

AIR

Enzima: AIR Carboxilasa

CAIR: Carboxiaminoimidazol ribotido

CAIR

7. Adquisicin del C6 (II)

AIR + ATP + HCO3- CAIR + ADP + Pi

Enzima: AIR Carboxilasa
- Carboxilacin directa con aporte de
- Ausencia de biotina
- AIR carboxilasa de E. coli: heterodmero PurE & PurK
(sinergia cataltica)

8. Adquisicin del N1

CAIR + Asp + ATP SACAIR + ADP + Pi

CAIR

SAICAR

Enzima: SACAIR Sintetasa

SACAIR: 5-aminoimidazol-4-N-succinil carboxamida ribtido
- Condensacin y formacin de un enlace amida
- Reaccin parecida a la reaccin 3 (GAR sintetasa)

9. Eliminacin del fumarato (I)

SACAIR AICAR + fumarato

SAICAR

AICAR

Enzima: Adenilsuccinato liasa

AICAR: 5-aminoimidazol-4-carboxamida ribtido

9. Eliminacin del fumarato (II)

SACAIR AICAR + fumarato

Enzima: Adenilsuccinato liasa

- Transformacin de un grupo carboxilo en un grupo amida

- Reaccin anaplertica del ciclo de Krebs

Gran importancia en el metabolismo muscular

- Reacciones 8 + 9 anlogas a la amidacin de la citrulina para formar Arg

(en el ciclo de la urea)

10. Adquisicin del C2

AICAR + N10-formil-THF FAICAR + THF

AICAR

FAICAR

Enzima: AICAR Transformilasa

FAICAR: 5-formaminoimidazol-4-carboxamida ribotido
- Similar a la reaccin 4
- Grupo formilo clave para la condensacin del ciclo

11. Cierre del anillo y formacin del IMP (I)

FAICAR IMP + H2O

FAICAR

Enzima: IMP Ciclohidrolasa

IMP: Inosina monofosfato
Base prica del IMP: hipoxantina

IMP

11. Cierre del anillo y formacin del IMP (II)

FAICAR IMP + H2O

Enzima: IMP Ciclohidrolasa
- Condensacin intramolecular en ausencia de hidrlisis de ATP
- El IMP no se acumula en la clula, sino que se transforma rpidamente
en AMP & GMP
Balance de la sntesis de IMP
2 ATP en el paso 1: sntesis de PRPP
1 ATP en el paso 3: GAR sintetasa
1 ATP en el paso 5: FGAM sintetasa
1 ATP en el paso 6: AIR sintetasa
1 ATP en el paso 7: AIR carboxilasa
1 ATP en el paso 8: SACAIR sintetasa
Balance total: 7 ATP

SINTESIS DE AMP (I)

IMP + Asp + GTP adenilsuccinato + GDP + Pi

IMP

Enzima: Adenil-succinato sintetasa

Adenilsuccinato

Sntesis de AMP (II)

Adenilsuccinato fumarato + AMP

Adenilsuccinato

AMP

Enzima: Adenilsuccinato liasa

Reaccin global: sustitucin del grupo ceto en C6 por un grupo amino
Es la misma enzima que la que cataliza la reaccin 9 de la sntesis del IMP
Balance : + 1 ATP

SINTESIS DE GMP (I)

IMP + NAD+ +H2O XMP + NADH + H+

IMP

Enzima: IMP DH
Flavoenzima
XMP: Xantosina monofosfato

XMP

Sntesis de GMP (II)

XMP + Gln + ATP + H2O GMP + Glu + AMP + PPi

XMP

Enzima: GMP sintetasa (PPi 2Pi)

Reaccin global: introduccin de un grupo amino en C2
Balance : + 2 ATP

GMP

SINTESIS DE NUCLEOTIDOS DI- & TRIFOSFATO

Nuclesido monofosfato kinasas
AMP+ATP 2ADP

Enzima:Adenilato kinasa

GMP+ATP GDP+ADP Enzima:Guanilato kinasa

NodistinguenNMPsdedNMPs
Altaespecificidaddebasenitrogenada
Nuclesido difosfato kinasa
ATP+GDP ADP+GTP
Bajaespecificidaddebasenitrogenada
Reaccionescercanasalequilibrio
Mecanismocatalticodepingpong
1.NTPfosforila unresiduodeHis delaenzima
2.Laenzimatransfiereelgrupofosforilo alotroNDP NTP
ImportanciaBiomedica: Activacindenuclesidos antiviralescomolaAZT

SINTESIS DE PURINAS vs. PIRIMIDINAS

Purinas
Adicindelostomos1a1
(exceptolaGly)

Pirimidinas
Sntesisapartirde2precursores
metablicos

Adicindelostomossobrela Sntesisdelanillopirimidnico y
ribosa5P

posterioruninalaribosa5P

ObtencindeIMP

ObtencindeUMP&CMP

Balance:7ATP(hastaIMP)

Balance:4ATP(hastaUMP)

+12ATP(ATP/GTP)
RegulacinporATP&GTP
(productosfinales)

+1ATP(sntesisdeCTP)
RegulacinporUTP
(productofinal)

AGENTES BLOQUEANTES DE LA VIA DE NOVO (I)

Gln

Azaserina

Anlogos de la Gln
Impiden la donacin de grupos de NH4+

Acido micofenlico
Inhibe la IMP DH
Inhibe la proliferacin
de linfocitos

6-mercaptopurina
Competicin con el IMP en la sntesis del AMP
Droga inmunosupresora
Tratamiento de leucemias

Agentes bloqueantes de la va de novo (II)

Sulfonamidas
Anlogos del cido p-aminobenzoico (PABA)
Inhibidores competitivos de la sntesis del cido flico en bacterias
Inhibicin de la dihidropteroato sintetasa no se genera THF
Inhibicin de la sntesis de timina y de purinas
Inhibicin del crecimiento bacteriano (bacteriosttico)

Animales: las sulfonamidas no tienen efecto

Causa: los animales no pueden sintetizar el cido flico, sino que han
de ingerirlo con la dieta
Nota: Importancia del cido flico como suplemento alimentario durante el
primer trimestre del embarazo

Agentes bloqueantes de la va de novo (III)

Resistencia a las sulfamidas

Mutaciones que producen alteraciones en el centro activo menor afinidad
Aumento de la produccin de PABA neutraliza la competicin
Plsmido que codifica para una dihidropteroato sintetasa alterada con menor
afinidad por las sulfamidas que por PABA (1/1000 afinidad)

Trimetoprima
Antibitico bacteriosttico que inhibe la dihidrofolato reductasa
Accin sinrgica junto con las sulfamidas

La combinacin de sulfamidas y trimetoprima es un potente bactericida

REGULACIN DE LA BIOSNTESIS DE NUCLETIDOS PRICOS (I)

Importancia
1. Regulacincoordinadadelabiosntesisdelosnucletidospricos
Obtencindecantidadesequimolares denucletidosdeadenina&guanina
2.Regulacindelosniveles intracelulares(nivelesdeATP&GTP)
Importancia:losniveles intracelularesregulanmuchosprocesosmetablicos

2procesosimplicadosenlaregulacin
1.Inhibicincompetitivaporproductofinal
Importancia:evitarlaacumulacindeexcesodeproducto
2.CrossestimulacindelasntesisdeATP&GTP
Importancia:obtencindecantidadesequimolares deambosnucletidos

Punto clave
Regulacin recproca desustratos
ElGTPestaimplicadoenlasntesisdeATPyviceversa

Regulacin de la biosntesis de nucletidos pricos (II)

Puntos de regulacin en la via de novo
Sntesis de IMP
Ribosa-P pirofosfokinasa (R1): - ADP & GDP (negative feedback)
+ PPi & 2,3BPG
Amidofosforribosil-transferasa (R2): - ATP, ADP & AMP (sitio 1) sinergia
- GTP, GDP & GMP (sitio 2) neg. feedback
+ PRPP (feedforward activation)
Sntesis IMP AMP
- AMP (inhibicin competitiva por producto final)
(adenilsuccinato sintetasa) + GTP (sntesis coordinada de ATP & GTP)
Sntesis IMP GMP - GMP (inhibicin competitiva por producto final)
(IMP DH)
+ ATP (sntesis coordinada de ATP & GTP)
PurK: represor de purinas en bacterias

Regulacin coordinada de purinas y pirimidinas (I)

PRPP: Activa la biosntesis de IMP (amidofosforribosil-transferasa)
Orotato fosforribosil transferasa depende de la disponibilidad de PRPP

ATP: estimula la sntesis de pirimidinas: ATCasa (bacterias)

carbamil-P sintetasa II (animales)
inhibe la sntesis de PRPP
inhibe la sntesis de IMP
Efector Accin / Va

PRPP
Pur / Pir
ATP
Pir / GTP
Pur / ATP / PRPP
GTP
ATP
Pur / GTP / PRPP
CTP
Pir
UTP
Pir
dTDP
PRPP

Regulacin coordinada de purinas y pirimidinas (II)

VA DE RECAPTACIN DE NUCLETIDOS PRICOS (I)

Salvage pathway

En animales: Necesidad de la recaptacin de bases pricas

- A partir de la degradacin de DNA & RNA se obtienen bases pricas
- La va de novo de biosntesis de purinas es muy cara
- La va de novo no puede satisfacer las necesidades totales de purinas en
determinados tejidos (especialmente en el tejido nervioso)
- El 90% de las bases pricas libres son recuperadas y recicladas

PRPP: metabolito comn a las vas de sntesis de novo y de recaptacin

Va de recaptacin de nucletidos pricos (II)

Enzima: APRT - Adenina fosforribosil-transferasa
adenina + PRPP AMP + PPi
Enzima: HGPRT Hipoxantina - Guanina fosforribosil transferasa
hipoxantina + PRPP IMP + PPi
guanina + PRPP GMP + PPi
Posteriormente: PPi 2Pi Enzima: Pirofosforilasa
Fosforilaciones sucesivas hasta obtener los NDPs & NTPS
AMP + ATP 2 ADP & GMP + ATP GDP + ADP
ATP + GDP ADP + GTP
Balance : 2 ATP

CATABOLISMO DE NUCLEOTIDOS PRICOS (I)

Enanimales,lasbasespricas sondegradadashastaelcidorico
Enzima:5nucleotidasa (hidrlisis)
Nucletidos+H2O nuclesidos+Pi
Enzima: PNP Purinanuclesidofosforilasa
Nucleosido+Pi ribosa1P+purina
Isomerizacindelaribosa:ribosa1Pribosa5P
Enzima:AMPdesaminasa
AMP+H2O IMP+NH4+
Enzima:Adenosinadesaminasa(ADA)
Adenosina+H2O Inosina+NH4+
Enzima: Guaninadesaminasa
Guanina+H2O Xantina+NH4+

Catabolismo de nucletidos pricos (II)

Enzima:PurinaNuclesidofosforilasa(PNP)
Inosina Hipoxantina (Hipoxantina=6oxopurina)
Xantosina Xantina (Xantina=2,6dioxopurina)
Guanosina Guanina
Enzima: Xantinaoxidasa
Hipoxantina+O2 +H2O Xantina+H2O2
Lahipoxantinapuedeserrecaptada
Enzima: Guaninadesaminasa
Guanina+H2O Xantina+NH4+
Enzima:Xantinaoxidasa
Xantina+O2 +H2O cidorico+H2O2
Enzima:catalasa:H2O2 H2O+ O2

Catabolismo de nucletidos pricos (III)

Reacciones catalizadas por la xantina oxidasa

hipoxantina

xantina

Tautomera ceto-enlica (lactama-lactima) del cido rico

El cido rico es un cido dbil

acido urico

Catabolismo de nucleotidos puricos (IV)

Importanciafisiolgicadelurato

1. Es un potente antioxidante, ya que elimina ROS (Reactive Oxygen Species:

radicaleshidroxilo,anionessuperxido,oxgenoatmicoetc.)
Enhumanos,laconcentracinde urato ensangre est prxima a su lmite de
solubilidad(7mg/dL a37Cdeuratomonosdico)

2.Elcidoricononecesitaagua ensuexcrecin,mientrasqueelNH4+ s
Mantenimientode losnivelesdeaguaenespeciesterrestres
Importanciaevolutiva
La evolucinha favorecidolaacumulacindeun metabolito hasta ellmite
desusolubilidadporquedesempea otra importante funcin fisiolgica?

ALTERACIONES DEL METABOLISMO DE PURINAS EN HUMANOS (I)

No en genes de la va de novo letales durante el desarrollo

Sndrome de Lesch-Nyhan: Deficiencia en HGPRT

- Enfermedad congnita ligada al sexo (cromosoma X). Carcter recesivo
- Manifestaciones
hiperuricemias y gota
desrdenes neurolgicos: espasticidad, retardo mental y comportamiento
agresivo y destructivo (automutilaciones en labios y dedos)
- La muerte suele estar causada por fallo renal (por depsitos de urato
monosdico)
- Fue la primera enfermedad psiquitrica asociada al defecto en una sola enzima
La aparicin de alteraciones neurolgicas indica que la va de recaptacin de
purinas es clave en el tejido nervioso

Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (II)

Causa bioqumica del Sndrome de Lesch-Nyhan

Ausencia de actividad HGPRT
Bloqueo de la va de recaptacin de purinas

Consecuencias
Acumulacin de PRPP
Estimulacin de la biosntesis de novo de nucletidos
(x200 biosntesis de purinas)
Aumento de la degradacin de purinas  cido rico hiperuricemia y gota
Depsitos de urato

Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (III)

Hiperuricemia
Aumento de los niveles de cido rico en sangre y otros fluidos

Gota
Enfermedad causada por la hiperuricemia
Cursa con
- inflamacin de las articulaciones y dolor articular muy intenso, generalmente
en el dedo pulgar del pie, y en hombres
- depsito de cristales de urato (monosdico) en las articulaciones
- depsito de cristales en el rin y urteres dao renal y obstruccin del
tracto urinario

Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (IV)

Causas de la gota
Fallos en la excrecin de cido rico

Superproduccin de urato
- Deficiencia en HGPRT
- PRPP sintetasa hiperactiva: se salta la retroinhibicin alostrica
- Glucogenosis de von Gierke: la Glc se desva hacia la ruta de las
pentosas-P  sntesis de PRPP
- Frmacos que pueden producir hiperuricemia
niacina, diurticos, aspirina, ciclosporina, drogas citotxicas

Tratamiento de la gota (I)

Tratamiento no farmacolgico de la gota
- Prdida de peso
- Evitar comidas ricas en purinas: carne roja y casquera, mariscos,
arenques, anchoas
- Evitar el alcohol
- No utilizar frmacos hiperuricmicos (aspirina)

Tratamiento farmacolgico de la gota (I)

Colchicina
Disminucin de la movilidad de leucocitos, de la fagocitosis y la lactiacidosis

Tratamiento farmacolgico de la gota (III)

Agentes uricosricos probenecid: inhibe la reabsorcin tubular de urato

Tratamiento de la gota (II)

Tratamiento farmacolgico de la gota (III)
Alopurinol
Anlogo de la hipoxantina
Mecanismo
1. El alopurinol se comporta primero como sustrato de la xantina oxidasa
alopurinol aloxantina
2. La aloxantina permanece fuertemente unida al centro activo
INHIBIDOR SUICIDA

hipoxantina

alopurinol

aloxantina

Tratamiento de la gota (III)

Consecuencias
-  produccin de cido rico y  niveles de hipoxantina y xantina
La hipoxantina y la xantina son ms solubles en agua, por lo que se eliminan
mejor por va renal

- El alopurinol secuestra PRPP

 estimulacin de la biosntesis de purinas
 cantidad de sustrato (PRPP) disponible para la amido-fosforribosil-transferasa
Disminucin de la produccin de cido rico

Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (IV)

Deficiencia en AMP desaminasa

No tiene lugar la reaccin: Adenosina + H2O Inosina + NH4+
Importancia
En la conversin de IMP AMP, se produce fumarato
En el msculo, no se expresan otras enzimas de las reacciones anaplerticas
del ciclo de Krebs (el fumarato es un intermediario del ciclo de Krebs)
La deficiencia gentica en AMP desaminasa produce fatiga muscular y
calambres tras realizar ejercicio fsico

Alteraciones del metabolismo de purinas en humanos (IV)

Sndrome de inmunodeficiencia causado por deficiencia en PNP
Muerte selectiva de linfocitos T
Causa
El tejido linfoide presenta una elevada actividad del metabolismo de los
nucletidos (alta tasa proliferativa)
La ausencia de alguna de las enzimas implicadas en estas rutas provoca una
manifestacin muy clara en el tejido linfoide

Idea para el tratamiento

La ausencia de respuesta de linfocitos T podra aprovecharse como
tratamiento para enfermedades autoimnunes (artritis reumatoide, psoriasis),
algn tipo de diabetes, as como para frenar el crecimiento de linfomas de
clulas T
Estructura de rayos X de la PNP diseo de inhibidores especficos