UNIVERSIDAD DEL QUINDIO

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS Y TECNOLOGAS

PROGRAMA DE QUMICA
Prof. Fernando Agudelo A.
FITOQUMICA II

LABORATORIO DE FITOQUMICA II
EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DE LIGNANOS
Los lignanos son metabolitos secundarios de las plantas encontrados en una
variedad de plantas que incluyen las semillas de lino (linaza), semillas de
calabaza, semillas de ajonjol, centeno, soya, brcoli, frjoles, y en algunas bayas.
Qumicamente son sustancias polifenlicas, derivadas de la fenilalanina a travs
de la dimerizacin de alcoholes cinmicos sustituidos.

Patrn Estructural Fundamental

Los lignanos y neolignanos son una clase de productos naturales derivados del
acoplamiento de dos molculas C6C3. El trmino lignano fue introducido por
Haworth para las estructuras donde las dos unidades estn enlazadas por la
posicin, . Cuando los dos estn acoplados de otras maneras (m, m; , ; ,
m; etc.) ellas son llamadas neolignanos.
Para el propsito de nombrar las diversas estructuras patrones debemos tener en
cuenta lo siguiente:
La unidad C6C3 (I) es numerada de 1 a 9
donde la posicin es la 9,
es la 8 y
es la 7.

1
3

2
9'

9
3

II

8'

7'

2'

3'

1'

1
5

4'
6'

5'

Si las dos unidades C6C3 estn unidas por la posicin , el patrn estructural es
de lignano.
Los lignanos no tienen pruebas de identificacin propias, por lo tanto es necesario
realizar pruebas de identificacin para los grupos funcionales existentes en su
estructura: muchos de los lignanos son polifenoles, por lo tanto, se debe realizar la
prueba de FeCl3 para su identificacin. Los lignanos, adems, se caracterizan por
ser dmeros del anillo de benceno, lo cual genera una reaccin positiva con el
cloruro de aluminio sublimado.

PREPARACIN DEL MATERIAL VEGETAL.

El material vegetal escogido para la extraccin e identificacin de lignanos es la
linaza, ya que sta presenta una cantidad considerable de lignina (metabolito
secundario). Seleccionado el material vegetal se debe secar a una temperatura
menor de 50 C y luego pulverizar la linaza y llevarla a completa sequedad.

REACTIVOS
250 mL. Solucin NaOH 0.1 N
100 mL. Solucin H2SO4 10%
10 mL FeCl3 1% en etanol
5 g de Tricloruro de aluminio (sublimado)
10 mL. de gelatina sal
10 mL de acetato de plomo
2.0 litros de agua destilada
Papel indicador
Tela para filtrar

MATERIALES
1 Baln de 100 mL
1 Condensador de reflujo (para el baln) y sus mangueras
2 Pinzas y sus nueces
1 Probeta de 100 mL
1 Gradilla
1 Esptula metlica
5 Tubos de ensayo pequeos
2 Beaker de 50 mL
1 Embudo de gravedad pequeo
1 Aro pequeo y su nuez (para el embudo)
1 Pipeta de 5.0 mL. graduada
1 Pipeta de 1.0 mL. graduada
1 Estufa elctrica
1 Erlenmeyer de 150 mL
1 Balanza de 2 cifras decimales
20 Hojas de papel filtro
1 Pera succionadora
3 Gafas de seguridad

PROCEDIMIENTO
Teniendo el material vegetal seco y molido, tome en el baln 25 g de linaza y
adicione 50 mL de solucin de NaOH. Somtalo a reflujo durante 2 horas.
Terminado el reflujo separe por gravedad el extracto del precipitado. Es importante
recordar que el precipitado formado es la celulosa, por lo que las pruebas de
identificacin deben realizarse al extracto obtenido en el cual se encuentra la sal
formada de lignato de sodio.
Nota: Si al realizar las pruebas, stas arrojan resultados negativos, realice el
siguiente procedimiento: Al extracto recogido, adicione solucin de H 2SO4 10%
hasta neutralizarlo. Una vez terminada la neutralizacin, el precipitado
corresponde a la lignina.

PRUEBAS DE IDENTIFICACIN
Reaccin de Tricloruro Frrico
En un tubo de ensayo tome 1-2 mL de extracto y adicione solucin de cloruro
frrico al 1% en etanol. La formacin de una coloracin azul es prueba positiva.
Reaccin de gelatina-sal

En un tubo de ensayo tome 1-2 mL de extracto y adicione solucin de gelatina

sal. La aparicin de turbidez blanca floculenta es indicativa de prueba positiva.
Reaccin de Acetato de Plomo
En un tubo de ensayo tome 1-2 mL de extracto y adicione solucin de acetato
de plomo. La formacin de un precipitado blanco indica prueba positiva para
lignanos.
Reaccin de AlCl3 sublimado
En un tubo de ensayo tome 1 mL de extracto y agregue una pequea fraccin
de tricloruro de aluminio sublimado. La coloracin roja, amarilla o naranja es
resultado positivo de la presencia de anillos aromticos (benceno).

Ensayos a la gota
Manejar 3 tubos de ensayo y utilizarlos as:
-Colocar en el primero 1 ml del extracto etanlico a ensayar (testigo).
-En el segundo adicionar 1 ml del extracto etanlico a ensayar + 2 ml de
HCl 0.5 N, aadir 2 ml de solucin acuosa de nitrito de sodio al 10%
(reactivo de Arnow) y finalmente agregar 2 ml de solucin acuosa de NaOH
2N.
-En el tercer tubo agregar toda la mezcla de reactivos sin la muestra
(testigo)
Interpretacin: El reactivo de Arnow en presencia de fenilpropanoides,
presenta coloracin naranja y despus de la adicin de la soda se genera un
rosado prpura.
Determinacin de la presencia de FENILPROPANOIDES
Los fenilpropanos son sustancias naturales ampliamente distribuidas en los
vegetales caracterizadas por un anillo aromtico unido a una cadena de 3
carbonos y derivados biosintticamente del cido shiqumico, son
constituyentes principales de algunos aceites esenciales, tales como el de
clavo, canela, ans, algunas albahacas, etc. A su vez los aceites esenciales son
fracciones lquidas voltiles, generalmente destilables por arrastre con vapor
de agua, que contienen las sustancias responsables del aroma de las plantas y
que son importantes en la industria cosmtica (perfumes y aromatizantes), de
alimentos (condimentos y saborizantes) y farmacutica (saborizantes); todo lo
cual evidencia la importancia de los fenilpropanos.
1 Reconocimiento en el laboratorio
1.1 Ensayos a la gota
Manejar 3 tubos de ensayo y utilizarlos as:

-Colocar en el primero 1 ml del extracto etanlico a ensayar (testigo).

-En el segundo adicionar 1 ml del extracto etanlico a ensayar + 2 ml de HCl
0.5 N, aadir 2 ml de solucin acuosa de nitrito de sodio al 10% (reactivo de
Arnow) y finalmente agregar 2 ml de solucin acuosa de NaOH 2N.
-En el tercer tubo agregar toda la mezcla de reactivos sin la muestra (testigo)
Interpretacin: El reactivo de Arnow en presencia de fenilpropanoides,
presenta coloracin naranja y despus de la adicin de la soda se genera un
rosado prpura.
1.2 Cromatografa de capa delgada (TLC)
f. estacionaria: slica gel
f. mvil: n-hexano-cloroformo 3:2
revelador: vainillina al 1% em H2SO4 al 5%, seguido de calor
Interpretacin:
Rf y color de algunos fenilpropanoides:
-Safrol 0.74 0.86 - Gris
-Estragol 0.72 - Rosado
-Anetol 0.69 - Rojo
-Miristicina 0.50 0.71 Pardo
-Apiol 0.39 0.41 Pardo Pardo
-Timol 0.38 - Rojo
-Eugenol 0.20 0.31 Pardo
-Isoeugenol 0.29 0.27 Rojo Amarillo
-Metileugenol - 0.42 - Rojo pardo
-Metilisoeugenol - 0.42 - Prpura
-Elemicina - 0.27 Amarillo