Bioseparaciones - ARMANDO TEJEDA PDF

Parte I
Captulo 1
Introduccin
El cultivo de clulas con el objeto de obtener productos tiles, es una
actividad que ha realizado el hombre prcticamente durante toda su
historia. Recientemente a esta actividad se le ha denominado Biotec-
nologa. Esta ha evolucionado a partir de los conocimientos generados
en diversas disciplinas, tanto del rea de las ciencias bsicas como de las
ingenieras. Hoy la Biotecnologa puede ser definida como la coleccin
de procesos industriales que involucran el uso de sistemas biolgicos
(Wang, 1988).
Las operaciones que comprenden los procesos biotecnolgicos a es-
cala comercial, se han dividido tradicionalmente en operaciones pre-
vias (procesos "upstream") y operaciones posteriores o bioseparacio-
nes (procesos "downstream"). Dentro de las primeras se considera la
preparacin del medio, la esterilizacin y el funcionamiento del biorre-
actor (Cooney, 1990). Los procesos de bioseparacin como se muestra
en la Figura 1.1, involucran la recuperacin y purificacin de produc-
tos provenientes del biorreactor. Comprenden todos los tratamientos
que requiere el caldo de cultivo para la obtencin del producto en las
condiciones de pureza y actividad deseadas.
En un proceso dado, la parte correspondiente a las bioseparaciones
puede representar hasta un 60% del costo total de produccin sin con-
siderar las materias primas (Kalk, 1986). Debido a lo anterior, exite una
relacin inversa entre el precio de venta de un producto biotecnolgico y
la concentracin de ste en el caldo del biorreactor (Figura 1.2). Puede
decirse entonces que el xito comercial de un proceso biotecnolgico
6 CAPTULO!. INTRODUCCIN
depende en gran medida de la adecuada seleccin del proceso de biose-
paracin.
1.1 Evolucin de los Bioprocesos
Actualmente se pueden distinguir de manera general tres generaciones
de procesos biotecnolgicos, en relacin al tipo de bioseparaciones que
stos involucran.
La primera generacin comprende el conjunto de procesos desarro-
llados mediante cultivos de organismos no recombinantes, cuyos pro-
ductos se obtienen en forma activa tanto si son intracelulares o si son
secretados al medio de cultivo. En esta generacin se encuentran los
procesos de la Biotecnologa tradicional como los de la produccin de
etanol, enzimas, cido ctrico, y antibiticos. Los productos de estos
procesos se presentan en concentraciones altas al inicio de la etapa de
separacin y no requieren de una extremada pureza para su venta.
Los descubrimientos asociados con la Biologa Molecular y la Inge-
niera Gentica logrados particularmente en las ltimas dos dcadas,
han ampliado las capacidades biotecnologas del hombre. En esta
etapa podemos situar una segunda generacin de productos de la Bio-
tecnologa como la insulina humana, la hormona de crecimiento, y alfa
interfern, entre otros. Estos son producidos intracelularmente uti-
lizando clulas recombinantes de Escherchia coli. Se caracterizan por
encontrarse en bajas concentraciones dentro de la clula, son de ele-
vado peso molecular, tienen propiedades similares a los contaminantes
y requieren un alto grado de pureza. Ademas, generalmente al pro-
ducirse en la clula no poseen actividad biolgica por tratarse de ca-
denas peptdicas sin la conformacin o estructura apropiada; lo que se
traduce en la necesidad de aplicarles tratamientos fisicoqumicos adi-
cionales para lograr el producto en su estado activo.
La tercera generacin de la Biotecnologa, la podemos caracterizar
por procesos mediante los cuales se obtienen productos extracelulares
en clulas recombinantes, la mayora de las cuales son eucariticas.
En estos sistemas se ha observado la capacidad no slo de producir
exgenamente el producto deseado, sino que ste se obtiene en forma
activa. El factor VIII de la sangre y el agente tromboltico Activador
1.1. EVOL UCIN DE LOS BIOPROCESOS
Inoculo
Esterilizacin y preparacin
del medio
Producto intracelular
Esterilizacin del caldo
si es recombinante
Producto extracelular
Rompimiento celular
'
Remocin de desechos
celulares
Separacin celular
Recuperacin y concentracin
del producto
Purificacin del producto
Figura 1.1: Operaciones de un proceso biotecnolgico: a). Operaciones
previas b). Operaciones posteriores o bioseparaciones. Adaptada de:
Bujurstrom, 1985.
Reproducida con el permiso de Me Graw Hill. Copyright 1985. Todos los derechos
reservados.
CAPTULO 1. INTRODUCCIN
( g / i)
O
1
"*
10*
wr
.Etanol
.Acidoctrico MSG
, Penicilina
,Treonina
> Cefalosporna
kGentamioina
.Acido Giberflico
. Enzimas a granel
. Glucosa oxidas
Enzimas d
investigacin y
diagnstica
Anticuerpos
GlioroHosato-
deshidrogenas*
LucHerasa
Factor VIII
Urakinasa
Enzimas teraputicas ^"^
IO
Z
'K) I0
1
K)
2
I0
3
K>
4
K)
5
O
6
KJ
7
K)" O
9
Precio de venta $/Kg
Figura 1.2: Relacin entre la concentracin inicial del producto en el
caldo y el precio final de venta del producto. Fuente: Dwyer, 1984.
Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co. Copyright 1984. Todos los derechos
reservados.
1.2. CARACTERSTICAS DE LOS BIOPROCESOS
Tabla 1.1: Caractersticas de los Procesos Biotecnolgicos.
Caracterstica
Perodo
Tipo de clulas
Fortaleza de
las clulas
Conocimiento de pro-
piedades bsicas
Conocimiento
Tecnolgico
Generacin
Primera
- 1975
No recombinantes
Alta
Alto
Alto
Segunda
1975-
Recombinantes
Alta
Bajo
Bajo
Tercera
1985-
Recombinantes
Baja
Bajo
Bajo
Tabla 1.2: Caractersticas de los Productos Biotecnolgicos
Caracterstica
Producto tipo
Idealizacin
Tamao
Actividad
al secretarse
Pureza deseada
Similitud con
contaminantes
Valor
Generacin
Primera
Antibiticos
Aminocidos
Extracelular
e intracelular
Intermedio
Si
Alta
Baja
Bajo
Segunda
Insulina humana
HC
Intracelular
Macromolculas
No
Muy alta
Alta
Alto
Tercera
Factor VIII
tPA
Extracelular
Macromolculas
Si
Muy alta
Alta
Alto
del Plasmingeno tisular (t-PA de sus siglas en ingls) son produc-
tos caractersticos de esta generacin. Debido a su empleo con fines
teraputicos, estos productos deben ser obtenidos con un alto grado de
pureza (Datar et a/, 1993) .
1.2 Caractersticas de los Bioprocesos
En la Tabla 1.1 y en la Tabla 1.2 se presentan algunas caractersticas
asociadas a los procesos y a los productos de las tres generaciones de
la Biotecnologa, aqu descritas.
10 CAPTULO 1. INTRODUCCIN
Los procesos biotecnolgicos tanto de la segunda como de la ter-
cera generacin, se encuentran en una etapa de desarrollo que requiere
ampliar el conocimiento de las propiedades fisicoqumicas de los pro-
ductos y sus contaminantes, con el objeto de seleccionar las operaciones
de separacin adecuadas debido al alto grado de pureza requerido por
los productos.
Los aspectos de rendimiento y pureza del producto son bsicos para
determinar la viabilidad de un bioproceso, debido a que para lograr
el grado de purificacin requerido por este tipo de productos, general-
mente la purificacin debe realizarse en varios pasos. Un ejemplo de
lo anterior se muestra en la Figura 1.3 con un diagrama de flujo del
proceso para la obtencin de insulina humana a partir clulas de E.
coli recombinante.
Las operaciones de bioseparacin para un proceso deben seleccio-
narse cuidadosamente con el fin de que el costo sea mnimo. Es decir,
si el rendimiento por paso de purificacin es bajo y se requieren varias
pasos, puede tenerse un proceso no viable econmicamente debido a su
an ms bajo rendimiento global.
La Figura 1.4 muestra como decrece el rendimiento global en funcin
del nmero de pasos de purificacin, considerando rendimientos por
paso de 95 %, 90 %, 80 % y 60 %. Por ejemplo, si el rendimiento
promedio por paso en un proceso de purificacin de 10 pasos es de 60 %,
el rendimiento global del proceso de purificacin es de 0.6 %. Si debido
a la desnaturalizacin del producto el rendimiento desciende a 30 %
por etapa, el rendimiento global del proceso es 0.0006%. Esto significa
que se require 1000 veces ms cantidad de materia prima para lograr
la misma masa de protena purificada. Por otra parte si el rendimiento
promedio por paso fuese de 95 %, el rendimiento total alcanzado sera
del 60 % (Hearn y Anspach, 1990).
Ejemplo 1.1: Estimacin de la pureza y el rendimiento de
una enzima en un proceso de purificacin.
En el desarrollo de un proceso para la obtencin de una enzima a
partir de E. coli, se sabe que sta tiene un 80 % de humedad y que
el 60 % de su peso seco es protema. El proceso de purificacin de la
enzima consta de 4 pasos (Figura 1.5). En la tabla siguiente se presenta
1.2. CARACTERSTICAS DE LOS BIOPROCESOS 11
Salida delire
este'ril
Esterilizador i
continua
( A)
Sedimentador 1
(B)
uu
lLJJ
. i [ J Tanques de m
TSrfii r
tHi hi
o*
1
Sedimentador2 I *- * t '.
Tanque de almacenamiento
intercambiador de calor
' Fermentadorde
filtra de aire produccin
esteVH (O)
Centrifugas
Compresor
Tratamiento de
desechos
e
(E)
i*
* 4
Tanque
de
sterilizaon
^ t t
1 1 1
otras corrientes de desecho
CNBr formato
n n
i_r
.f ,
1
Reactor para eliminacin
de CNBr
(H)
Reactor de
solubilizacin
Figura 1.3: Representacin esquemtica del proceso para la obtencin
de Insulina Humana. Fuente: Datar y Rosen, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1985. Todos los derechos
reservados.
Del tratamiento
dCNBr
Reactor de
cuMonan
(K)
bufer bufer bufer
tris enzimas Iris tris*NaCt _,; ?
? ^
T
d**eho i
HiPLC
(O)
desecho
enzimatico (M)
(NJ
acetato de amonio
3r
Reactor de
renaturalizacin
(L)
Uhrafihraein
IjU
Reactor de
cristalizacin
( Q) Centrifugacin
vapor
1
PRODUCTO
Evaporador
instantneo
Figura 1.3: Continuacin.
Rendimiento ( %)
100 _
95%
90%
4 6 8
Nmero de pasos
Figura 1.4: Representacin grfica del rendimiento global de un proceso
de purificacin de un producto biotecnolgico en funcin del nmero de
pasos. Fuente: Hearn y Anspach, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1985. Todos los derechos
reservados.
la cantidad de enzima y de protena total al final de cada paso.
Paso
Rompimiento
celular
Precipitacin
Intercambio
inico
Crom atografa
gel
Protena
total (g)
12.000
1.800
0.240
0.036
Enzima
total (g)
0.080
0.060
0.048
0.036
Fraccin
enzima xlO~
3
6.667
33.333
200.000
1000.000
Se desea obtener el factor de purificacin de la enzima en cada paso,
el rendimiento por paso y el rendimiento global.
/-'
Solucin:
El factor de purificacin, el rendimiento por paso y el rendimiento
global del proceso se presentan junto con los datos del problema en la
tabla siguiente:
Paso
Rompimiento
celular
Precipitacin
Intercambio
inico
Cromatografa
gel
Prot.
tot. (g)
12.000
1.800
0.240
0.036
Enzima
tot. (g)
0.080
0.060
0.048
0.036
Fraccin
enz. XlO~
3
6.667
33.333
200.000
1000.000
Factor de
purific.
1
5
30
150
% Recup*
Por etapa
100
75
80
75
racin
Global
100
75
60
45
a). El factor de purificacin se obtiene mediante el cociente de la
fraccin de enzima en cada paso, entre la fraccin de enzima inicial.
b). El rendimiento en cada paso est dado por el cociente de la
cantidad de enzima total obtenida en cada paso, entre la cantidad total
de enzima al inicio del paso.
c). El rendimiento global al final de cada paso est dado por el
cociente de la cantidad de enzima total obtenida en ese paso entre la
cantidad total de enzima inicial.
Rompimiento celular
i
Precipitacin con
sulfato de amonio
Fraccin
colectada
Cromatografa de
intercambio inico
Cromatrografia de
filtracin por gel
Producto
35 40 45 50 55
% de saturacin
60 70 100
Carga Elucin
Nmero de fraccin
Nmero de fraccin
Figura 1.5: Proceso hipottico de cuatro pasos para la purificacin de
una enzima.
El conocimiento tecnolgico de los procesos biotecnolgicos de se-
gunda y tercera generacin es limitado. Actualmente es necesario pro-
fundizar en los mtodos de escalamiento de algunas operaciones, ya que
generalmente se han adaptado a escala comercial a partir del laborato-
rio. En el proceso de escalamiento es necesario considerar los volmenes
y normas del mercado para el producto (Nuil, 1987).
La Biotecnologa ha adoptado con xito operaciones de la Inge-
niera Qumica, en la purificacin de productos biotecnolgicos tradi-
cionales. Sin embargo, existen limitantes para lograr sto cuando se
trata de obtener productos caractersticos de la segunda y tercera ge-
neracin. Existe una necesidad real de desarrollar procesos de biosepa-
raciones apropiados, con la participacin de bioqumicos y bilogos con
el propsito de lograr, tanto la pureza deseada del producto, como la
eficiencia y rentabilidad del mismo (Wang, 1988).
1.3 Sumario
Los procesos de bioseparacin involucran la recuperacin y purificacin
de productos provenientes del biorreactor. Las bioseparaciones com-
prenden todos los tratamientos que requiere el caldo de cultivo para
obtener un producto biotecnolgico en las condiciones de pureza y ac-
tividad requeridas.
La economa de los procesos biotecnolgicos depende en gran me-
dida de las operaciones de bioseparacin que involucran, de tal manera
que la correcta seleccin de estas operaciones tiene un fuerte impacto
en el xito del proceso.
1.4. PROBLEMAS 17
1.4 Problemas
1.1 .-Efectuar un anlisis comparativo en relacin a las operaciones de
separacin que utilizan, de los procesos para la produccin de cido
ctrico, penicilina e insulina.
1.2.- Un proceso para la recuperacin de hidroxibutirato deshidro-
genasa consta de tres pasos: Un rompimiento de las clulas para liberar
la enzima intracelular, seguido de dos pasos de adsorcin/ desorcin por
afinidad.
En la siguiente Tabla se presentan los datos obtenidos de actividad
de enzima y protena total al final de cada paso.
Calcular la actividad especfica, el ndice de purificacin y el % de
recuperacin.
Paso
Rompimiento
Ads/Des (1)
Ads/Des (2)
Actividad Total
(Unidades)
6,860
6,800
5,380
Protena Total
(mg)
76,200
2,200
267
1.3.- Completar la siguiente tabla relacionada con la purificacin de
una enzima:
Material
Extracto
ler. piso
Vol.
mi
500
50
Conc.
prot.
mg/ml
14
10
Prot.
total
"IR
7
60
Act.
enzim.
U/ ml
Act.
total
U
Act.
esp.
U/ mg
Rend.
Etapa Total
Fac.
purif.
1.4.- En un proceso biotecnolgico para producir una enzima que
se encuentra en desarrollo, se obtiene una concentracin de 0.1 mg/ml
de la enzima en el caldo inicial. Si a los proyectos se les exige un
margen sobre ventas del 50 %, estime el costo de produccin mximo
del producto utilizando la Figura 1.2
18 CAPTULO!. INTRODUCCIN
1.5 Bibliografa
Bujurstrom, E. 1985. Biotechnology. Chem. Eng. Feb. 18. Me Graw
Hill. New York. 126-158.
Cooney, C. L. 1990. Separations for biotechnology. Trends in Bio-
technology. 8, 338-340.
Datar, R.V., Cartwright, T. y Rosen, C.G. 1993. Process economics
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of tissue plasminogen activator. Bio/Technology. 11, 349-357.
Datar, R. y Rosen C. G. 1990. Downstream process economics. En:
Separations Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Mar-
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Dwyer, J. 1984. Scaling up bioproduct separaton with high perfor-
mance liquid chromatography. Biotechnology. 2, 957-964.
Hearn, M. T., y Anspach, B. 1990. Chemical, physical and biochemical
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Nuil, H. R. 1987. Selection of a separation process. En: Handbook
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Wang, D. I. C. 1988. Biotechnology: Status and perspectives. AIChE,
84-18, 1-21.
Captulo 2
Seleccin del Proceso
2.1 Introduccin
El desarrollo de un proceso biotecnolgico para la obtencin de un
producto de inters comprende varios aspectos, fundamentalmente los
econmicos relacionados con el mercado y los tcnicos que involucran
el diseo del proceso .
El estudio de mercado permite evaluar el potencial econmico del
proceso y es requisito indispensable para la formulacin del proyecto
a desarrollar. Por ejemplo, an cuando la factibilidad tcnica de un
proceso dado pueda ser atractiva, el valor esperado del producto pudiera
no justificarlo (Knight, 1990).
En el diseo de un proceso es necesario un trabajo completo y cui-
dadoso que permita desarrollar y evaluar varios esquemas de operacin
con el propsito de aproximarse al diseo ptimo, bajo las restricciones
presupustales establecidas. (Kelly, 1987).
Un aspecto central en el diseo de un bioproceso, es la especificacin
de la secuencia de operaciones de separacin que se requieren, debido
al alto costo que stas representan.
En este captulo en la seccin 2.2 se presenta los principales as-
pectos econmicos y tcnicos a considerar para la seleccin de un pro-
ceso biotecnolgico, particularmente en su secuencia de operaciones de
bioseparacin. Los equipos ms comunes para realizar dichas opera-
ciones se describen en la seccin 2.3. Las metodologs utilizadas para
19
20 CAPTULO 2. SELECCIN DEL PROCESO
MERCADO
ESPECIFICACINDEL
PRODUCTO
PROCESO
- Operaciones y secuencia
-Escala
Etapas o tiempo por
operacin
-Costo
PRODUCTO
Figura 2.1: Elementos para la seleccin de un bioproceso.
la seleccin apropiada de la secuencia de bioseparaciones para un pro-
ceso se establecen en la seccin 2.5.
2.2 Fundamentos
Los factores que intervienen en la seleccin de un proceso biotecnolgico
son de dos tipos (Figura 2.1):
Econmicos: Relacionados principalmente con el mercado y las
especificaciones del producto.
Tcnicos: Relacionados directamente con el el proceso.
2.2. FUNDAMENTOS 21
Tabla 2.1: Influencia del mercado en el precio del producto.
Caso tipo
1
2
Compaa
GENENTECH
Diversas
Producto
t-PA
BST*
Precio
por dosis
$ 2000.00
$ 0.50
Demanda Anual (USA).
No. de Dosis
100,000
5 X 10*
Masa
10 Kg
100 Tons.
Datos de: Spalding, 1991.
* Somatotropina de Bovino
2.2.1 Mercado y Especificacin del Producto
El mercado es un factor muy impoortante para el establecimiento de un
bioproceso, ya que determina el precio del producto. El mercado de los
productos biotecnolgicos puede enmarcarse entre dos casos extremos
(Tabla 2.1):
1. Productos de alto valor, bajo volumen de produccin y libres de
competencia, como el t-PA.
2. Productos de alto volumen de produccin, en mercados muy com-
petitivos, como la BST.
En los productos libres de competencia, es posible que se seleccione
el primer proceso exitoso que se logre en el laboratorio. Sin embargo,
si el mercado del producto aumenta y aparecen nuevos competidores,
la economa del proceso cobra especial importancia (Spalding, 1991).
Actualmente varios productos biotecnolgicos modernos estn libres
de competencia, pero existe una tendencia hacia un incremento en la
competitividad del mercado. Es en esta transicin donde el diseo
adecuado de los bioprocesos presenta especial relevancia.
El primer paso en la seleccin de un proceso es la definicin del
objetivo del mismo, especificando claramente la pureza y recuperacin
que se desea obtener. Con frecuencia las especificaciones sobre pureza
del producto son establecidas por regulaciones legales o por el mer-
cado. Las especificaciones de recuperacin son fijadas para asegurar la
economa del proceso. Idealmente la recuperacin debe ser una variable
dependiente del diseo de proceso, en la bsqueda de la optimizacin
del mismo. En la prctica, debido a limitaciones de tiempo esta fase
no siempre se concluye (Nuil, 1987).
2.2.2 El Proceso
El diseo de un proceso comprende todo el trabajo conceptual que
es necesario realizar antes de construir una planta productiva, y tiene
como objetivo definir las principales caractersticas del proceso como:
La secuencia de operaciones de proceso.
La escala del proceso.
Nmero de etapas por operacin.
El costo del proceso.
Operaciones de Separacin y su Secuencia
Una vez definido el producto (o productos) que se desea obtener, as
como su pureza y la recuperacin deseada, el siguiente paso es deter-
minar que operaciones son capaces de realizar la produccin y la sepa-
racin del producto. En este trabajo slo se abordan estas ltimas.
Las operaciones de separacin se basan en las diferencias que existen
entre las propiedades fsico-qumicas de los componentes presentes en el
caldo de cultivo. El objetivo del diseo de un proceso de separacin es
explotar esta diferencia en las propiedades en la forma mas econmica.
Generalmente existe una propiedad diferente que es la base primaria
para la separacin. Los mtodos de separacin usados con ms frecuen-
cia, as como la propiedad en que se basan, se muestran en la Tabla 2.2
En un anlisis realizado con datos de 100 artculos publicados sobre
purificacin de protenas, se observa que hay una secuencia preferen-
cial aunque no estricta, con la cual se desarrollan las operaciones de
separacin (Bonnerjea y Hoare, 1986). Tal y como se observa en la
2.2. FUNDAMENTOS 23
Tabla 2.2: Operaciones de separacin y su propiedad bsica.
Mtodo (Operacin) Propiedad
Destilacin
Extraccin
Cristalizacin
Adsorcin
Osmosis Inversa
Ultrafiltracin
Intercambio Inico
Dilisis
Electrodilisis
Membranas Lquidas
Electroforesis
Cromatografa
Filtracin por Gel
Presin de vapor
Distribucin entre fases
b'quidas inmiscibles
Punto de fusin o solubilidad
Sorcin superficial
Difusividad y solubilidad
Tamao molecular
Equilibrio
Difusividad
Carga elctrica y movilidad
inica
Difusividad y equilibrio
Carga elctrica y movilidad
inica
Depende del tipo de fase
estacionaria
Tamao y forma molecular
i 2 a 4 s e
__Homogmizactn PrecipiUcin
Intercambio inico Afinidad
Filtracin n Gl
Figura 2.2: Secuencia de operaciones utilizadas en un proceso de pu-
rificacin de protenas. Fuente: Bonnerjea et al, 1986.
reservados.
Figura 2.2 frecuentemente la homogeneizacin va seguida de una preci-
pitacin, despus la cromatografa de intercambio inico, la separacin
por afinidad y finalmente la filtracin por gel. Esta secuencia es valida
generalmente en el caso en que el producto sea una protena, la reali-
dad es que cada producto presenta una secuencia de separacin ptima
diferente.
Escala de Operacin
Frecuentemente la escala de operacin es el factor econmico determi-
nante en la seleccin entre procesos de separacin alternativos. Cual-
quier proceso de separacin que se escoja, deber ser compatible con la
escala industrial a la cual se va a disear. Esto es importante porque
varios procesos desarrollados en el laboratorio no tienen su contraparte
2.2. FUNDAMENTOS 25
industrial. Muchas operaciones de separacin tienen un lmite respecto
de la capacidad mxima que pueden manejar y esto limita la escala
de produccin para la cual esa operacin puede ser considerada. En
algunos casos, este lmite superior se debe a una restriccin impuesta
por un fenmeno fsico inherente a la operacin de separacin, mientras
que en otros casos el lmite superior se debe simplemente a las limita-
ciones que ofrece la fabricacin de equipo comercial. En la Tabla 2.3 se
pueden observar las capacidades mximas en una sola etapa de algunas
operaciones de separacin.
Cada operacin de separacin tiene en s misma una determinada
confiabilidad que es producto de la experiencia y conocimiento de la
misma. As se tiene que la destilacin es la operacin ms confiable
de los procesos de separacin por el conocimiento que de ella se tiene.
La electroforesis en cambio, es una operacin que se realiza a pequea
escala, entonces la nica forma de tener confiabilidad a gran escala es
usando mltiples unidades en arreglo paralelo.
Debido a consideraciones de confiabilidad del diseo, puede ser nece-
saria una planta piloto para probar la operacin integrada del proceso.
En tal caso, todas las operaciones deben ser incluidas en la planta pi-
loto an cuando no se requieran pruebas individuales de confiabilidad
de cada una de ellas.
Nmero de Etapas por Operacin
Otra variable importante en la seleccin de un proceso de separacin
(Figura 2.1), es el nmero de etapas de contacto que se realizan por
operacin. En la mayora de los casos una operacin de una sola etapa
es ms econmica que una operacin de etapas mltiples.
Las operaciones de separacin que aparecen en la Tabla 2.1 tienen
diferente habilidad para realizar una separacin en una sola etapa. As
por ejemplo, la destilacin es una operacin capaz de separar una mez-
cla binaria en una sola etapa, siempre y cuando no haya formacin de
mezclas azeotrpicas entre los componentes que sern separados. La
extraccin requiere de al menos dos etapas de contacto para separar
un flujo de alimentacin en dos corrientes y obtener el producto en
condiciones aceptables. La adsorcin es una operacin que consiste de
Tabla 2.3: Capacidades mximas por operacin.
Operacin de
Separacin
Lmite Comercial
por Operacin Simple
Destilacin
Extraccin
Cristalizacin
Adsorcin
Osmosis Inversa
Ultrafiltracin
Intercambio
Inico
Electrodilisis
Electroforesis
Separaciones
Cromatogrficas
Filtracin por Gel
Sin lmite
Sin lmite
10-70xl0
6
kg/ao
Sin lmite
0.45xl0
6
kg/ao
flujo de agua por mdulo,
con varios mdulos
por unidad
0.45xl0
6
kg/ao de
flujo de agua por mdulo,
con varios mdulos
por unidad
450xl0
6
kg/ao de '
flujo de agua
0.45x10
6
kg/ao de
flujo de agua
1000 kg/ao de
producto
O.OQxlO
6
kg/ao
de lquido
100 kg/ao de
producto
Fuente: Nuil, 1987.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright 1987. Todos los derechos
reservados.
2.2. FUNDAMENTOS 27
dos etapas, la adsorcin en si misma, y la regeneracin del adsorbente.
Tericamente la ultrafiltracin puede separar dos solutos de alto peso
molecular si la diferencia en tamao molecular es del orden de 10; en
caso de que esto no sea as, la separacin requiere varias etapas. En
cualquier caso de los sealados anteriormente, se requieren etapas de
procesamiento adicionales para obtener el producto con la pureza de-
seada. En el caso de las operaciones de electroforsis, cromatografa, y
la filtracin en gel; dado que separan el producto por dilucin, requieren
etapas de concentracin posteriores.
Costos
Una vez que ha sido definido el objetivo de la separacin, esto es, que
se ha identificado el producto que se desea obtener y se ha establecido
el proceso, se debe estimar el costo del mismo. Esto comprende la es-
timacin del costo total del producto y del capital necesario para la
inversin. Ambos parmetros, conjuntamente con los ingresos espera-
dos, determinan la rentabilidad del proceso.
Costo Total del Producto.- Como se muestra en la Tabla 2.4, el
costo total del producto se divide comunmente en dos partes: costos de
fabricacin y gastos generales. En los costos de fabricacin se ubican
los costos de operacin, los costos fijos y la parte proporcional de los
gastos generales de la planta.
Dentro de los costos de operacin directos se puede resaltar los cos-
tos de las materias primas que son consumidas directamente en el pro-
ceso de produccin del producto o que son usadas en la recuperacin del
mismo, debido a que stas constituyen la'mayor parte de estos costos.
Los costos de las materias primas son ms relevantes en sistemas de pro-
duccin basados en procesos biolgicos que en plantas qumicas conven-
cionales. En los primeros las materias primas pueden representar del 30
al 80 % del costo de produccin, mientras que en los convencionales slo
representan del 10 al 50 % de ese costo (Kalk y Langlykke, 1986). En
los procesos de produccin biotecnolgicos, no solamente las materias
primas principales (aquellas que se convierten directamente a producto)
tienen un impacto significativo sobre la economa del proceso, sino que
Tabla 2.4: Factores que intervienen en el costo total del producto.
I.
II.
Costos de Operacin Directos
A. Materias primas y suministros
B. Mano de obra y supervisin
C. Servicios
Costos Fijos
a. materia prima primaria
b. materia prima secundaria
c. fletes
d. operacin
e. mantenimiento
f. laboratorio
g. otros
a. salarios y estmulos
b. horas extras
a. vapor
b. electricidad
c. agua
d. tratamiento de desechos
A. Depreciacin
B. Impuestos
C. Seguros
D. Renta
III.
IV.
V.
VI.
Proporcin de Gastos
Generales de la Planta
Administracin
Mercadotecnia
Investigacin y Desarrollo
Para estimacin de costos:
Costo de Fabricacin (CF) = I+II+IH
Gastos Generales (GG) = IV+V+VI
Costo Total del Producto =CF-f GG
-
2.2. FUNDAMENTOS
29
I. Costos de Operacin Directos (59 % )
II. Costos Fijos ( 11%)
III. Proporcin de Gastos Generales
de la Planta (10 %)
IV . Gastos Generales (20 % )
de

0stos
?
ara un
Producto biotec-
tambin las materias primas secundarias como cofactores, enzimas in-
ductores y materiales de recuperacin, influyen considerablemente en
los costos de produccin.
Los sueldos y salarios representan una fraccin importante del total
de los costos de fabricacin, esto es, del 10 al 40 %.
Los costos fijos comprenden la depreciacin de maquinaria y equipo
impuestos y seguros principalmente. '
La parte proporcional de los gastos generales de la planta que se
le asignan al producto, son aquellos que se requieren para la operacin
eficiente de la planta pero no son asignables directamente al producto y
se estiman entre el 10 y 50 % de los sueldos y salarios (Kalk y Langlykke,
En la Figura 2.3 se presenta una estructura de costos tpica para un
producto biotecnologa).
Estimacin del Capital de Inversin.- El capital de inversin to-
tal se conforma del capital fijo y del capital de trabajo. El capital fijo
se refiere a todos los fondos necesarios para el diseo, construccin y
arranque de la planta. Es en este punto donde se hacen las estimaciones
de escala del proceso y la estimacin del costo de los equipos necesarios
para las operaciones previas y las bioseparaciones. Cuando se com-
paran dos procesos de separacin alternativos, se escoge el que requiere
mayor capital solamente si la rentabilidad generada es tan grande que
justifica la diferencia de requerimientos de capital entre ambas alterna-
tivas. Los costos de arranque son difciles de estimar y pueden ir desde
menos del 5 % del capital de inversin fijo para una planta basada en
una tecnologa ya establecida, hasta ms del 50 % del capital fijo para
nuevas tecnologas donde no se tiene experiencia, como son los proyec-
tos biotecnolgicos. El capital de trabajo es la inversin necesaria para
la operacin normal de la planta una vez contruda, y comprende los
requerimientos de sueldos e inventarios.
Ejemplo 2.1- Produccin de somatotropina porcina.
Cuando se administra a cerdos la hormona somatotropina porcina
(SP) se incrementa la velocidad de su crecimiento hasta en un 30 % y
disminuye su contenido de grasa. Cada cerdo requiere de una sola dosis
de 200 mg.
Para producir SP mediante un cultivo de clulas recombinantes, se
cuenta con los siguientes datos:
1. Mercado:
Produccin estimada = 6,000 Kg/ao
Precio por dosis de 200 mg = $6.00 dlls. (base: 1988)
2. Tcnicos:
Concentracin celular al final de la fermentacin en peso seco 35
g/i
Peso protena/peso celular: 57 %
Protena SP/protena total : 20 %
Recuperacin total esperada: 25 %
Duracin del ciclo de fermentacin: 30 h
Das de operacin anual: 330 das
2.2. FUNDAMENTOS 31
Impuesto sobre la renta (ISR): 45 %
3. Estimados:
(a) Produccin de peso seco celular:
1 Kg 1 Kg 1 Kg
= 6000 x . . x ___? x *
ao 0.25 Kg 0.2 Kg 0.57
= 210,500 Kg/ao
(b) Volumen de fermentacin total (Vt):
210,000 Kg
* ~
35 f
= 6,015,037 /
(c) Volumen por ciclo de fermentacin
6,015,037 /
V
c
=
dias ^ciclo ., 24h
~
x
~
x
"
V
c
= 22,784 I ciclo
Este volumen de 22,784 I/ciclo puede ser manejado por un
solo fermentador. Si se considera el volumen de fermentacin
como el 70 % del volumen total del fermentador, entonces el
volumen de fermentacin V/ es:
Vj = 32,500 /
Considerando este fermentador se realizan las siguientes es-
timaciones de costos.
4. Costos (dlls. base 1988)
I. Costos de operacin directos.
(A) Materias primas y suministros:
(B) Mano de obra y supervisin:
(C) Servicios (agua, vapor, electricidad y
tratamiento de desechos):
II. Costos fijos.
(A) Depreciacin:
(B) Impuestos:
(C) Seguros:
(D) Renta:
(E) Mantenimiento:
III. Gastos generales de planta:
IV . Administracin:
V . Mercadotecnia:
V I. Investigacin y Desarrollo:
5. Capital de inversin:
Inversiones fijas.
(A) Equipo de proceso, instalacin e
instrumentacin:
(B) Instalaciones elctricas:
(C) Edificios:
(D) Instalaciones:
Inversiones diferidas.
(A) Ingeniera, construccin y
contratos:
Capital de trabajo.
2 meses de materias primas, servicios
e investigacin y desarrollo:
Estimar para este proceso:
1. El retorno sobre la inversin.
2. El costo promedio del producto.
6,315,581.00
580,720.00
1,054,864.00
Subtotal:
2,939,746.00
587,949.00
293,975.00
000 000.00
1,763,848.00
Subtotal:
10,618,780.00
487,100.00
2,191,950.00
2,679,050.00
Subtotal:
13,420,579.00
Subtotal:
1,756,141.00
Subtotal:
Total:
7,951,165.00
5,585,518.00
1,469,873.00
85,680.00
000.00
2,500,000.00
Total: $ 17,592,236.00
15,976,880.00
13,420,579.00
1,756,141.00
$ 31,153,600.00
2.2. FUNDAMENTOS 33
3. El costo porcentual de cada concepto del producto.
Solucin:
1. Clculo del retorno sobre la inversin:
Ingreso anual:
6,000 j x ^92 180,000,000
Menos costo anual 17,592,236
Utilidad bruta 162,407,764
Menos 45 % ISR 73,083,494
Utilidad neta 89,324,270
Mas depreciacin 2,939,746
Flujo de efectivo neto $ 92,264,016
El retorno sobre la inversin RSI expresado en porcentaje, est dado
por el cociente del flujo efectivo neto y el capital de inversin por 100,
por lo tanto:
$92,264016
RSI
=
$3115300
RSI = 296%
Esto significa que el proyecto es muy atractivo bajo las condiciones
establecidas.
2. Costo promedio del producto:
El costo promedio del producto se obtiene mediante el cociente del
costo anual y la produccin estimada del producto, esto es:
$17,592,236/ano
G ost o promedio = - - -
F
6, 000 Kg/ao
Costo promedio = 2, 932 $/Kg
3. Costo porcentual del producto por concepto.
Este costo est dado por el cociente del costo de cada concepto entre
el costo de operacin:
Concepto Costo porcentual
Materias primas y suministros
Servicios
Depreciacin
Mantenimiento
Gastos generales
Inversin y desarrollo
Otros
6,315.581
17,592,236
X
1,054,864 ..
17.592,236
X
2.939,746
x
100 - 16 7%
17,592,236
xiuu
~
1D-
'
/0
1,763,848
17,592,236
1,469,873 y 1 00 - 8 4%
17,592,236
X1UU
~O.1V O
2,500,000 ..
17,592.236
X
Total:
8.8%
100.00 %
2.3 Equipo
Parte importante en la seleccin de un proceso biotecnolgico consis-
te en determinar el equipo necesario para realizar una determinada
operacin. Varios tipos de equipos pueden ser empleados para una
misma operacin y la seleccin depende en gran medida del tipo de
producto que va a obtenerse.
La Tabla 2.5 muestra las operaciones ms comunes por etapa en
funcin de las caractersticas de los procesos y productos biotecnolgi-
cos. Algunos de los equipos ms usados en cada una de esas etapas son
los siguientes:
1. Remocin de insolubles: Con frecuencia se usan sistemas de fil-
tracin al vacio, sistemas de filtracin intermitentes, as como
centrfugas tubulares, de discos con descarga intermitente o de
canasta.
2.3. EQUIPO 35
Tabla 2.5: Operaciones de bioseparacin empleadas de acuerdo a las
caractersticas del proceso
Etapa
Generaciones
Primera Segunda Tercera
Remocin de
Insolubles Filtracin
Centrifugacin
- Filtracin
- Microfiltracin
- Ultrafiltracin
- Centrifugacin
Microfiltracin
Ultrafiltracin
Centrifugacin
Rompimiento
- Homogeneizacin
- Abrasin
- Permeabilizacin
Concentracin
- Extraccin por
solventes
- Adsorcin
- Destilacin
- Extraccin en dos fases acuosas
- Adsorcin
- Precipitacin
- Ultraftracin
Purificacin
- Adsorcin
- Cromatografa
- Cromatografa
- Ultrafiltracin
- Electroforesis
2. Rompimiento celular: En esta etapa los equipos que ms se mane-
jan son los homogeneizadores y los molinos de perlas.
3. Concentracin: En la concentracin del producto se emplean ex-
tractores que pueden funcionar en forma continua o intermitente,
as como tambin tanques agitados y lechos empacados con di-
versos tipos de adsorbentes.
4. Purificacin: En esta etapa se emplean diversos sistemas croma-
togrficos que se traducen en la utilizacin desde equipos muy
sencillos como puede ser una simple columna, hasta equipos muy
sofisticados como los utilizados en cromatografa liquida de alta
resolucin. Tambin son utilizados en esta etapa sistemas de elec-
troforsis.
5. Acabado: En la etapa de acabado, dependiendo de la presentacin
con que se va a lanzar el producto al mercado, pueden utilizarse
liofilizadores secadores y cristalizadores.
2.4 Diseo
El diseo de un proceso biotecnologa) comprende diversas actividades
basadas en la experiencia, la teora y el apoyo computacional disponible.
Entre estas actividades podemos destacar las siguientes:
Sntesis: Establecimiento de las operaciones del proceso o diagrama
de flujo.
Anlisis: Modelacin y establecimiento de los valores de las variables
del proceso.
Evaluacin: Economa, seguridad y confiabilidad del proceso.
Optimizacin: Determinacin de las condiciones para lograr el valor
ptimo de una funcin objetivo.
El xito de un diseo depende fuertemente de la sntesis del pro-
ceso ya que las tres actividades restantes: anlisis, evaluacin y opti-
mizacin, se derivan del diagrama de flujo seleccionado.
2.4. DISEO 37
Actualmente existe un gran inters por el desarrollo de mtodos
computacionales para el diseo de procesos que incluyan la sntesis
de los mismos y que permitan el anlisis y la evaluacin de diversas
alternativas, para encontrar en forma rpida el diseo ptimo. En la
prctica los procesos rara vez se seleccionan de esta manera, dado que
ni los algoritmos computacionales, ni las descripciones cuantitativas
de los mtodos de separacin estn suficientemente desarrollados. Sin
embargo, estos mtodos cada vez son ms utilizados como apoyo en
algunas fases de la seleccin del proceso.
En esta seccin se describen los dos enfoques complementarios uti-
lizados para la seleccin de un proceso:
Desarrollo de un Caso Base.
Sntesis de procesos.
Mtodo heurstico
Mtodo algortmico
Sistemas expertos
2.4.1 Desarrollo de un Caso Base
En la prctica normal el caso base representa el juicio cualitativo del
ingeniero de diseo y presupone ser el proceso de separacin ms eco-
nmico que pueda ser desarrollado dentro de las restricciones que en
tiempo y dinero tiene el proyecto (Nuil, l)87).
Una vez que el caso base ha sido seleccionado, el diseador de pro-
ceso determinar los costos de operacin y capital con el mayor detalle
posible. Cuando el caso base ha sido evaluado, se hace un juicio so-
bre el ms prximo proceso econmicamente competitivo. El proceso
alternativo se evala con las mismas restricciones que el caso base. Si
el proceso modificado tiene costos de operacin y capital ms bajos,
entonces ste nos lleva a un nuevo caso base de diseo. Este nuevo caso
base vuelve a probarse hasta encontrar un caso base ptimo.
2.4.2 Sntesis de Proceso
La investigacin que se realiza para seleccionar un proceso, es decir la
secuencia de operaciones para transformar una serie de materias primas
en productos, se llama sntesis de proceso. El mtodo heurstico, el
mtodo algortmico y los sistemas expertos, son producto de este tipo
de trabajos.
Mtodo Heurstico
El mtodo heurstico trata de limitar las alternativas posibles para un
proceso usando reglas desarrolladas a travs de diseos previos y la
experiencia. Al basarse en la experiencia, el sentido comn y la intui-
cin del ingeniero, la aproximacin heurstica no garantiza la solucin
ptima. An as, estos mtodos han probado ser una herramienta
valiosa en la optimizacin de la estructura del proceso. Algunas de estas
reglas heursticas son generales y aplicables para la sntesis de procesos
de bioseparacin. Cuatro de tales reglas heursticas son (Petrides et a/,
1989):
1. Primero remover el componente ms abundante.
2. Primero remover lo que sea mas fcil.
3. Hacer las separaciones mas caras y difciles al final.
4. Seleccionar el proceso que permita aprovechar al mximo las di-
ferencias entre las propiedades del producto y los contaminantes.
Existen reglas heursticas ms especficas que las mencionadas an-
teriormente, como las usadas en el diseo de procesos de purificacin
de protenas a gran escala:
1. Si el producto es intracelular, se requiere romper la clula.
2. Si la clula cultivada es de mamfero, el producto es extracelular.
3. Si el rompimiento de la clula se lleva a cabo por mtodos mec-
nicos, se requiere precipitar los cidos nucleicos.
2.4. DISEO 39
4. Si la concentracin de la protena total al final de la recuperacin
y antes de la purificacin, es menor que 60 g/l, se requiere con-
centrar el producto.
5. Si la alimentacin para la purificacin por cromatografa no es un
caldo claro, se requiere un pretratamiento.
6. Si uno o dos pasos de intercambio inico producen una pureza
similar a la de cromatografa de afinidad, debe escogerse el inter-
cambio inico.
7. La filtracin en gel se puede utilizar como una etapa de separacin
intermedia slo para la eliminacin de sales.
8. La filtracin por gel se puede utilizar como un paso de acabado
slo para separar fracciones proteicas.
Este tipo de reglas son utilizadas conjuntamente con otras an ms
especficas, en el desarrollo de bases de conocimientos para sistemas
expertos (Prokopakis y Asenjo, 1990).
Aproximacin Heurstica para la Seleccin de un Proceso de
Bioseparacin.- Se presenta en esta seccin una aproximacin heu-
rstica de la sntesis de un proceso de bioseparacin de materiales bio-
lgicos tpico (Petrides et a/, 1989). El primer paso en la sntesis de un
proceso, consiste en desarrollar un diagrama de bloques de sus princi-
pales etapas. Posteriormente, se seleccionan para cada etapa las opera-
ciones alternativas posibles. El desarrollo del diagrama de bloques est
basado en la estructura general que se prqsenta en la Figura 2.4
1. Etapas de Recuperacin Primarias: Productos Intracelulares.
En el desarrollo de un diagrama de bloques para un nuevo proceso,
es necesario distinguir entre productos extracelulares e intracelu-
lares. La recuperacin y purificacin de los productos extracelu-
lares es comparativamente ms fcil de realizar que la de los pro-
ductos intracelulares. En el caso de los productos intracelulares,
las operaciones que se utilizan son las siguientes:
BtORREACTOR
Producto intracelular
COSECHA DE CLULAS
Centrifugacin
Microfirtracin
UKraftracin
Producto extraoelular
ROMPIMIENTO DE CLULAS
Homogenizacin
Molino d perlas
Choque osmtico
EXTRACCIN DELPROOUCTO
Solventes orgnicos
REMOCIN DE DESECHOS
Centrifugacin
Micfufilb acin
Filtracin al vaco
Filtracin por presin
Polmero -s
Ruidossupx
Adsorcin
Micelas inv
Destilacin
RENATURAUZACION
Solubilizacin
Reoxidacin
REMCOON DE BIOMASA
Filtracin al vaco
Centrifugacin
Microfiltracin
Ultrafiltradn
Filtracin en prensa
Filtracin en cmara
Rotacin
CONCENTRACIN
Ultrafiltradn
Evaporacin
Osmosis inversa
Precipitacin
Cristalizacin
Extraccin
Adsorcin
Destilacin
Especificaciones de afta pureza Especificaciones de baja pureza
PURIFICACIN FINAL
Adsorcin
Filtracin gei
Eledrodialisis
Diafiltracin
Electroforesis
DESHIDRATAOON
Secado por aspersin
Secado por Ikrfilizaon
Secado en lecho fluidizado
Figura 2.4: Diagrama de flujo de un proceso de bioseparacin. Fuente:
Petrides et al, 1989.
Reproducida con el permiso de American Institute of Chemical Engiixeers. Copyright 1989
AIChE. Todos los derechos reservados.
2.4. DISEO 41
(a) Cosecha de Clulas: El primer paso en un proceso para
la recuperacin de productos intracelulares es la cosecha
de clulas. Remover primero el lquido extracelular, est
en completa concordancia con la primera regla heurstica:
primero remover el componente ms abundante.
Como se establece en la Figura 2.4, la centrifugacin y la
filtracin por membrana son las nicas tcnicas usadas para
cosecha de clulas a gran escala. La centrifugacin tiene ven-
tajas para microorganismos grandes (dimetro mayor que 2
mieras y densidad mayor que 1030 kg/m
3
). Para microor-
ganismos ms pequeos pueden usarse tcnicas de coagu-
lacin para aumentar el tamao de la partcula que sedi-
mentar. La filtracin por membrana tiene ventajas para
cosechar clulas pequeas como la de E. coli. Cuando el
flujo es mayor que 20 //m
2
h, la filtracin por membrana
es la que produce mejores resultados. Otra ventaja de la fil-
tracin por membrana es la recuperacin del producto. Con
la centrifugacin siempre se pierden de 1 a 5 % de las clulas.
Con filtracin por membrana se recuperan todas las clulas,
siempre que no se presente rompimiento o lisis.
(b) Rompimiento de Clulas: Con frecuencia el segundo paso en
la obtencin de productos intracelulares es el rompimiento
de la clula. El rompimiento de bacterias y levaduras es
realizado por homogeneizadores a alta presin o con molinos
de perlas. Para altas capacidades (varios m
3
/h) solamente se
puede disponer de homogeneizadores. Para el rompimiento
celular, tambin se utilizan mtodos qumicos. Dentro de
stos se puede destacar el uso de la digestin enzimtica para
liberar protena intracelular de bacterias gram-positivas, la
disolucin lipdica para el caso de bacterias gram-negativas,
as como el choque osmtico que puede utilizarse para liberar
protenas del espacio periplsmico.
(c) Remocin de Desechos Celulares: Una vez que la clula se
rompe y el producto es liberado, los desechos son eliminados
por medio de una o varias operaciones como: centrifugacin,
microfiltracin o filtracin por presin.
Cuando el producto es soluble, ste es recuperado en la fase
ligera de una centrfuga o en el filtrado de un filtro. Las
centrfugas son eficientes para la separacin de partculas
grandes como los restos celulares, de tal manera que cuando
se usen para este efecto, deben ser acompaadas de una ope-
racin de filtrado para eliminar las partculas ms pequeas;
debido a que stas pueden ocasionar problemas en etapas
de bioseparacin posteriores, principalmente en las de cro-
matografa. Cuando se usan microfiltros para remover los
desechos, se requiere posteriormente realizar una diafiltra-
cin.
Cuando el producto es insoluble (por ejemplo los cuerpos
de inclusin), debe ser separado primero de otras partculas
y posteriormente tratado para que adquiera su forma ac-
tiva. Este es un problema comn de muchas protenas eu-
cariticas producidas por microorganismos procariotes, por
ejemplo la hormona de crecimiento producida por E. coli.
Las protenas recombinantes forman cuerpos de inclusin
dentro de la clula husped. Estos pueden ser separados
de los restos celulares con una centrfuga de discos. La pu-
rificacin es realizada por resuspensin y recentrifugacin de
la fase pesada en 2 o 3 pasos. Posteriormente se pueden usar
detergentes para remover otros contaminantes.
La separacin del producto de los desechos puede ser llevada
a cabo tambin por extraccin con solventes orgnicos o con
algunas soluciones de polmeros.
Los sistemas de dos fases acuosas han sido aplicados para
la recuperacin de protenas. La separacin del producto de
los desechos y su concentracin simultnea puede ser alcan-
zada utilizando tcnicas de extraccin-adsorcin utilizando
ya sea adsorbentes de afinidad o de intercambio inico. En
este proceso, las clulas rotas y el producto son mezclados
en un tanque agitado con un adsorbente. Posteriormente
sigue un paso de lavado en el cual muchos de los desechos y
contaminantes son eliminados.
2.4. DISEO 43
Etapas de Recuperacin Primaria: Productos Extracelulares.
(a) Eliminacin de Biomasa: La eliminacin de biomasa es el
primer paso que se realiza en un proceso de separacin cuan-
do el producto es extracelular. Este paso se ajusta a la
segunda regla heurstica. En esta operacin los equipos ms
empleados son: la centrfuga decantadora, los filtros prensa y
los filtros con membranas. Cada uno de ellos tiene ventajas
y desventajas segn el tipo de producto y tipo de clula,
haciendo de la seleccin un problema difcil. No hay una
alternativa nica para todos los productos.
2. Operaciones de Alta Resolucin.
Una vez realizada la separacin primaria del producto ya sea ste
intracelular o extracelular, la purificacin es llevada a cabo me-
diante operaciones de alta resolucin. Si el producto es soluble,
primero es necesario concentrarlo. Si el producto es insoluble y
se encuentra desnaturalizado, entonces primero se renaturaliza y
despus se purifica.
(a) Concentracin.
Despus de una primera clarificacin del caldo obtenido del
biorreactor o una vez rota la clula, el producto se encuentra
diluido; para su concentracin las operaciones alternativas
son: Ultrafiltracin, Extraccin, Osmosis inversa, Evapora-
cin, Precipitacin y Destilacin.
i. Ultrafiltracin: Es una operacin usada ampliamente
para la concentracin de protenas. La presin de opera-
cin tpica vara entre 0.2 y 0.5 MPa y el flujo promedio
entre 20 y 50 l/m
2
- h.
ii. Extraccin: La extraccin con solventes es una opera-
cin ampliamente usada en la concentracin de produc-
tos biotecnolgicos, particularmente en la obtencin de
antibiticos. Se requiere que el coeficiente de particin
del sistema sea alto para poder llevar a cabo la concen-
tracin del producto en el menor nmero de etapas de
contacto.
iii. Osmosis Inversa: Se usan unidades con membranas de
tamao de poro pequeo para la concentracin de solu-
ciones de productos con bajo peso molecular. Operan a
altas presiones (4 a 6 MPa) y a bajas temperaturas.
iv. Evaporacin: Se utilizan evaporadores de pelculas del-
gadas los cuales operan a bajas temperaturas (40 50(7)
al vaco. Estas unidades compiten en el mercado con la
ultrafiltracin y la osmosis inversa para la concentracin
de compuestos tanto de alto como de bajo peso molecu-
lar.
v. Precipitacin: Es una operacin usada para concen-
tracin y purificacin. Comnmente se usan sales, sol-
ventes y polmeros para la precipitacin selectiva de
compuestos de inters. La precipitacin es usada para
remover contaminantes.
vi. Destilacin: En los procesos de bioseparacin esta ope-
racin se utiliza generalmente para la recuperacin de
solventes orgnicos.
(b) Renaturalizacin.
Las protenas eucariticas producidas por organismos pro-
cariticos, frecuentemente forman cuerpos de inclusin en la
clula recombinante. Estos cuerpos de inclusin pueden ser
solubilizados mediante el uso de sales y agentes reductores.
Despus que la protena desnaturalizada es solubilizada, se
eliminan los solubilizantes utilizando cromatografa o diafil-
tracin. Al final se obtiene una solucin de protena diluida.
3. Purificacin.
Las operaciones para la purificacin final dependen fuertemente
de la pureza requerida del producto, distinguindose los produc-
tos farmacuticos por su alta pureza en comparacin a la de los
productos industriales. Para productos de pureza relativamente
baja como las enzimas para detergentes, la operacin de purifi-
cacin final consiste slo en la eliminacin del solvente. Para
productos de alta pureza, las operaciones de purificacin finales
son normalmente la cromatografa y la ultrafiltracin.
2.4. DISEO 45
(a) Cromatografa: Es una operacin que se realiza al final de
un proceso, en concordancia con la regla heurstica "hacer
las separaciones ms difciles y caras al final". Existen difer-
entes tipos de cromatografa como la de intercambio inico,
la de filtracin por gel y la de afinidad, entre otras. Normal-
mente se requiere de una secuencia de varias operaciones cro-
matogrficas para alcanzar la pureza deseada del producto.
En la seleccin de la secuencia de estas operaciones debe ob-
servarse la cuarta regla heurstica: "seleccionar el proceso
que permita aprovechar al mximo las diferencias entre las
propiedades del producto y los contaminantes.
i. Cromatografa de Filtracin en Gel: Este tipo de cro-
matografa separa molculas en base a su tamao mo-
lecular; tiene dos aplicaciones principales: remocin de
pequeas molculas de las protenas y remocin de pro-
tenas contaminantes de la protena producto. En el
fraccionamiento de protenas, la filtracin por gel es
lenta comparada con otras tcnicas cromatogrficas.
ii. Cromatografa de Intercambio Inico: Esta separacin
se basa en la diferencia de la carga molecular de las
biomolculas. Puesto que el la carga depende del pH
y la fuerza inica, cualquier anin o catin en un so-
porte puede ser usado para realizar la separacin. En
la prctica sin embargo, la seleccin normalmente est
determinada por el pH al cual es estable el producto que
se desea purificar.
iii. Cromatografa de Afinidad: Las separaciones por afini-
dad o reconocimiento molecular, estn basadas en las
interacciones especficas entre biomolculas. Es una o-
peracin apropiada en cualquier etapa de la purificacin
del producto y particularmente lo es para el manejo de
grandes volmenes de material con baja concentracin
de producto y gran cantidad de contaminantes. Es una
operacin altamente eficiente ( ms del 90 % ). Su limi-
tante es el alto costo de los materiales (ligandos) involu-
crados.
4. Acabado.
Las operaciones de acabado comprenden aquellas que se realizan
para la esterilizacin y estabilizacin del producto.
Los microfiltros de membrana son utilizados para esterilizar so-
luciones biofarmacuticas, removiendo cualquier contaminacin
bacteriana. Una limitante de estas membranas es la incapacidad
para la remocin de pirgenos y virus. Para minimizar el riesgo de
contaminacin el agua utilizada deber estar libre de pirgenos.
Para incrementar la vida del producto se utilizan como agentes
estabilizadores algunas sales como sulfato de amonio, cloruro de
calcio o cloruro de sodio. Algunos productos son ms estables
como slidos. Las tcnicas ms comunes de deshidratacin para
productos inestables son la liofilizacin y la cristalizacin.
Mtodo Algortmico
El uso de algoritmos matemticos para desarrollar la sntesis de un
proceso, es en teora el nico camino vlido para desarrollar un proceso
ptimo. Esto se basa en el hecho de que todas las secuencias posibles
para el procesos pueden considerarse rigurosamente. El desarrollo de
estos algoritmos se lleva a cabo mediante tcnicas de programacin
matemtica.
Actualmente la lnea principal de investigacin en tcnicas de pro-
gramacin matemtica, aplicadas a la optimizacin estructural de un
proceso, se basa en el uso de la programacin lineal (o no lineal) entera
mixta (MILP o MINLP de sus siglas en ingls). La idea principal de
estas tcnicas es la formulacin de una superestructura que consiste en
un diagrama de flujo que contiene todas las posibles alternativas de
diseo. A cada operacin unitaria de la superestructura se le asocia
una variable binaria (una variable que slo puede tomar los valores O
1) y se construye una formulacin ptima. A continuacin se presenta
una descripcin de estas tcnicas para una situacin particular.
Generalmente el problema consiste en separar una mezcla que tiene
TV componentes: /4, B, (7,. . . y esta separacin puede ser realizada
mediante M mtodos de separacin. La sntesis consiste en obtener la
2.4. DISEO 47
secuencia ptima de separacin utilizando el costo total como funcin
objetivo.
Para desarrollar este problema se hacen las siguientes considera-
ciones:
1. Se parte de una mezcla ternaria (ABC) y como resultado de una
separacin o varias separaciones de la mezcla se obtienen los sub-
grupos: 1. (ABC), 2. (AB), 3. (BC\ 4. (AC), 5. (A), 6. (),
7. (C)
2. Los mtodos de separacin son: 1. destilacin y 2. extraccin
3. Los componentes en cualquier mezcla estn colocados en orden
descendente con respecto a la propiedad caracterstica en la que
se basa el mtodo de separacin.
En el caso de la destilacin el orden de los compuestos de la
mezcla es (ABC), lo que significa que el compuesto A tiene mayor
volatilidad que el compuesto C. De esta manera pueden tener
lugar dos separaciones en la columna de destilacin: (A/BC) o
(ABIC).
En el caso de la extraccin el orden en el cual se encuentran
los componentes de la mezcla es (BAC), lo que significa que el
componente B tiene mayor solubilidad que el componente C. En
el extractor las separaciones que tienen lugar son: (B/AC) o
(BA/C).
4. La funcin primaria de una etapa de separacin es separar los
dos componentes adyacentes. Se denominan fase ligera y fase
pesada a los componentes adyacentes entre los cuales tiene lugar
la separacin.
En la Figura 2.5. se muestra a superestructura que origina el proble-
ma de separacin de la mezcla ternaria considerando slo los mtodos de
separacin alternativos: destilacin y extraccin. En la parte superior
de dicha figura se muestra el proceso utilizando como operacin de
separacin la destilacin y en la parte inferior se muestra la separacin
por extraccin. La destilacin o la extraccin pueden ser usadas en
cualquier nivel de la separacin.
(ABC)]
->(AB/C)
DESTILAaON
EXTRACCIN
-4(BAq
-H (A/B)
-H (B/A)
-J(A/C)
Figura 2.5: Superestructura de todas las secuencias de separacin al-
ternativas para una mezcla ternaria. Fuente: Prokopakis y Asenjo,
1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1990 . Todos los derechos reser-
vados.
2.4. DISEO 49
Para sistematizar el anlisis se emplean las convenciones siguientes:
1. Se definen los siguientes ndices:
i: subgrupo
j : mtodo de separacin empleado
k: fase ligera obtenida en la separacin
2. Se introduce una variable binaria 3/, ,jk para cada operacin. Por
ejemplo la variable binaria 3/1,1,1 se asocia a la separacin que se
realiza en el grupo ABC ', por medio de la destilacin y cuya fase
ligera es A.
3. Se define la variable costo C , ,jt, para cada operacin. Esta varia-
ble es funcin de parmetros operacionales como : temperatura
(T), presin (P) y flujo (F).
4. Se establece la funcin objetivo que permite la optimizacin del
proceso, para la obtencin de la secuencia de separacin de costo
mnimo. Esta funcin puede puede formularse como:
i 3 k
de tal manera que el costo total CT sea mnimo.
La funcin objetivo est sujeta a las siguientes restricciones:
1. Una y solamente una separacin que involucre al subgrupo con
N componentes (mezcla original) de,be existir en la secuencia.
M N-l
y^
k
=
l
P
ara
= 1, . 2" - 1 (2.2)
j =l k=\
2. Para cualquier subgrupo, cuando mucho una separacin que in-
volucre a ese subgrupo puede existir en la secuencia. Cualquier
subgrupo que haya sido procesado no puede aparecer nuevamente
en otra separacin.
M Ni-1
Z/ZX
fc = 1
P< * = 3, .. . , JV- 1 (2.3)
j=i k=i
donde TV,- es el nmero de componentes en el subgrupo.
3. Cualquier separacin (i,j,k) produce dos subgrupos. Si la separa-
cin (i,j,k) existe, entonces existe una y solamente una separacin
para para cada uno de los dos subgrupos. Sean m y n dos sub-
grupos, entonces:
M N
m
-l
E * *.
p=l g=l
M N
n
-l
p=l g=l
Resolver el sistema de ecuaciones a que da lugar la ecuacin (2.1)
no es fcil, y su complejidad aumenta conforme aumenta el nmero de
mtodos de separacin considerados y el nmero de componentes de la
mezcla respectiva.
En algunos casos la formulacin matemtica de un problema de
secuenciacin de operaciones de separacin puede simplificarse, dando
indicaciones al programa que le permitan la eliminacin de algunas
operaciones de separacin. Por ejemplo: nunca usar la cromatografa de
afinidad en presencia de partculas celulares o no usar la centrifugacin
despus de la filtracin. En particular, los tres conjuntos de ecuaciones
de restriccin dados en la formulacin anterior conjuntamente con las
restricciones de los parmetros operacionales, garantizan la viabilidad
de la solucin (Prokopakis y Asenjo, 1990).
Sistemas Expertos
Un sistema experto es un programa de computadora diseado para
tomar decisiones fundamentadas en una base de conocimientos y en
un sistema de inferencia. Una vez que el diseador ha alimentado al
sistema experto (SE) con datos relativos al producto y a la fuente de
2.4. DISEO 51
Parmetros
generales
Parmetros
especficos
Base de
datos
Sistema Experto
- Base de conocimientos
Sistema de inferencia
Secuencia de Proceso
Figura 2.6: Diagrama de operacin de un sistema experto.
donde se va a obtener, el sistema debe ser capaz de generar un proceso
de recuperacin. En la Figura 2.6 se muestra un diagrama de operacin
de un SE.
En los procesos biotecnolgicos para obtencin de protenas, el di-
seo de la secuencia de las operaciones de recuperacin y purificacin
utilizando un sistema experto, se inicia con la respuesta del usuario a
preguntas bsicas sobre el producto y sobre la clula de la cual se va a
obtener.
Una pregunta tpica es la siguiente: Qu tipo de clula est siendo
crecida para generar la protena en cuestin? cual es la concen-
tracin?. Se preguntar tambin sobre algunas propiedades de la pro-
tena de inters que puedan afectar el proceso de separacin, como
son: punto isoelctrico, hidrofobicidad superficial, peso molecular, lo-
calizacin dentro de la clula y concentracin.
Una vez que se ha alimentado la informacin bsica al sistema, ste
genera el diagrama de bloques de todas las etapas del proceso. Este
diagrama contiene una descripcin de aquellas operaciones en la se-
cuencia de separacin que deben ser llevadas a cabo para para obtener
el producto con el rendimiento y pureza deseada por el usuario. Poste-
riormente el sistema decide sobre la operacin unitaria particular que
debe emplearse en cada etapa. En este tipo de sistemas la informacin
cualitativa se proporciona mediante conjuntos de reglas inferenciales
SI - ENTONCES".
Ejemplo 2.2.- Funcionamiento de los sistemas expertos.
Se desea seleccionar un proceso mediante un sistema experto, para la
obtencin de insulina pura a partir de un caldo de E. coli recombinante
que produce TrpE-Met-proinsulina intracelularmente (Prokopakis y A-
senjo, 1990; Datar y Rosen, 1990).
Solucin:
1. Deben alimentarse al SE los parmetros que caracterizan al pro-
ceso que en este caso son:
Parmetros Generales
Tipo de clula: E. coli recombinante
Producto de inters: protena
Localizacin celular: intracelular
Nombre: insulina
Presentacin en el mercado: cristales de insulina
Parmetros Especficos
Peso molecular
Hidrofobicidad
Punto isoelctrico
Curva de titulacin
Base de datos sobre liberacin diferencial del producto
Base de datos de equilibrio en dos fases
2.4. DISEO 53
2. El sistema experto revisa las reglas de la base de conocimientos
para seleccionar el equipo de cosecha (EC). Cuando existen equipos
alternativos para realizar la misma operacin, el sistema cuenta con
ponderaciones heursticas que auxilian la seleccin.
SI
ENTONCES
Microorganismo =
EC =
EC =
Levadura
Centrfuga de Discos 0.6
Microfiltracin 0.4
SI
ENTONCES
Microorganismo =
EC =
EC =
Bacteria
Centrfuga de Discos 0.5
Microfiltracin 0.5
En este caso debido a las caractersticas de la E. coli y al cono-
cimiento experimental que se proporciona al SE, ste elige la opcin
"centrfuga de discos" para la operacin de cosecha de clulas.
3. Una vez que se ha definido el equipo de cosecha debern estable-
cerse los parmetros de la corriente de salida de la unidad, como son:
concentracin, viscosidad, densidad y otros. El SE consulta al usuario
sobre estos parmetros ya sea que hayan sido medidos o estimados es-
timados.
4. El SE decide sobre las operaciones siguientes en base a la infor-
macin que le proporcione el usuario sobre la localizacin del producto,
usando las siguientes reglas:
SI Microorganismo = Mamfero
ENTONCES El Producto es Extracelular
SI El Producto es Intracelular
ENTONCES Se Requiere Rompimiento
Se Requiere Separacin de Desechos
Se Requiere Precipitacin de cidos Nucleicos
El Producto es Extracelular
No se Requiere Rompimiento
No se Requiere Separacin de Desechos
No se Requiere Precipitacin de cidos Nucleicos
5. En este caso como la protena de inters es intracelular, el SE
establece la necesidad de realizar operaciones de rompimiento celular
y separacin de desechos. Posteriormente el SE selecciona el equipo
requerido para cada una de las operaciones.
1. En el caso de la operacin de rompimiento celular, utiliza las
siguientes reglas para seleccionar el equipo de rompimiento celular
(ER).
2.4. DISEO 55
SI Se Requiere Rompimiento y
Microorganismo =
ENTONCES ER =
Tamao de los Desechos =
Bacteria
Homogeneizador
Pequeo
Microorganismo =
y las proteasas son altas
ENTONCES Agregue un inhibidor de
proteasas al medio
Bacteria
Microorganismo =
ENTONCES ER =
Levadura
Homogeneizador
Pequeo
Microorganismo =
ENTONCES ER =
Hongo
Molino de Perlas
Medio
2. El sistema decide la separapacin de los cuerpos de inclusin del
homogeneizado utilizando el mismo equipo de centrifugacin em-
pleado en la cosecha celular.
Con las letras a, 6, c se muestran en la Figura 2.7 las tres primeras
operaciones generadas con el SE. Hasta este punto del proceso la TrpE-
Met-proinsulina obtenida se encuentra formando cuerpos de inclusin.
6. Se establece la necesidad de solubilizar los cuerpos de inclusin
con una solucin de cido clorhdrico-guanidina (GuHCl) y 3 mer-
captoetanol en un reactor qumico, para obtener una solucin de TrpE-
Met-proinsulina.
7. Se establece la necesidad de concentrar la solucin de TrpE-Met-
proinsulina. Para decidir sobre el mtodo de concentracin y el equipo
(EC) el SE utiliza las siguientes reglas:
SI Se Requiere Concentracin
y la Eficiencia de la Separacin
en Dos Fases = Alta
y la Eficiencia de Adsorcin = Alta
ENTONCES IMPRIME: Debido a que ambas operaciones
tienen una eficiencia alta, el equipo
ms adecuado ser aquel que se haya
utilizado experimentalmente
en Dos Fases =
y la Eficiencia de Adsorcin =
ENTONCES EC =
Alta
Mediana o Baja
Separacin en
Dos fases
2.4. DISEO 57
en Dos Fases = Baja
y la Eficiencia de Adsorcin = Baja
y la Eficiencia de la
Interaccin Hidrofbica = Baja
ENTONCES EC = Precipitacin
(sulfato de amonio)
En los procesos establecidos para la obtencin de insulina, la con-
centracin se realiza mediante una precipitacin.
8. Se decide utilizar el mismo equipo de centrifugacin empleado en
la cosecha de clulas para separar el precipitado de la solucin anterior.
9. El concentrado se somete a un tratamiento en un reactor qumico
para liberar la proinsulina.
10. La solucin obtenida en g est compuesta de proinsulina, frag-
mentos de TrpE y residuos de metionina, que podrn separarse por un
proceso de ultrafiltracin para obtener un concentrado de proinsulina
cruda (operacin h de la Figura 2.7). La concentracin de proinsulina se
incrementa mediante una evaporacin. El concentrado de proinsulina
cruda se renaturaliza en un reactor qumico.
11. Una vez renaturalizada la proinsulina debe ser purificada en una
operacin de alta resolucin. El SE cuenta con reglas para la seleccin
del equipo de alta resolucin (EAR) como las siguientes:
SI Bioespecificidad
es posible
ENTONCES EAR = Cromatografa de Afinidad 0.3
EAR = Cromatografa de Intercambio
Inico de Alta Resolucin 0.6
EAR = Cromatografa de Interaccin
Hidrofbica 0.1
SI Producto = IgG Monoclonal
ENTONCES EAR = Cromatografa de Afinidad 0.6
Bioespecfica
EAR = Cromatografa de Intercambio 0.4
Inico (1 o 2 etapas)
SI Producto = No est Definido
ENTONCES EAR = Cromatografa de Afinidad
EAR = Cromatografa de Intercambio
Inico
0.2
0.8
12. Al llegar a ciertos puntos de la secuencia el SE puede hacer
preguntas adicionales al usuario, para poder determinar la operacin
ms apropiada. Una pregunta puede ser: " Tendr el producto usos
teraputicos?". Si el usuario a su vez pregunta " por qu?", el sistema
responder: "Si el producto va a tener uso mdico la protena debe
tener una pureza de 99.98% y debe estar libre de pirgenos". Cuando
el usuario responde "s" a la pregunta del SE., entonces ste decide
que la operacin de purificacin de insulina proveniente del reactor
enzimtico (en el cual la proinsulina se transform en insulina) debe
ser una cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), operaciones
/, m de la Figura 2.7.
13. Finalmente se puede mencionar que para la seleccin de las
operaciones de acabado el sistema toma en cuenta la presentacin del
producto en el mercado, seleccionando para ello las operaciones o, p, < /,
de la Figura 2.7 y que producen la insulina humana recombinante,
purificada al 99.9%, lista para su comercializacin.
De lo antes expuesto se desprende que los sistemas expertos pueden
ser una herramienta muy til en la sntesis de procesos de bioseparacin.
2.4. DISEO 59
( a )
( b)
( c)
( d)
( e)
Fermentador
Cosecha de Clulas
con centrifuga de discos
Clulas de E. cot
Rompimiento de Clulas
con homogeneizador
Cuerpos de inclusin de
TrpE-Met-Proinsulina + desechos
Separacin por Centrifugacin
con centrfuga de discos
Cuerpos de inclusin de
TrpE-Met-Proinsulina
Solubilizacin
en reactor qumico con GuHCI
Solucin de
Precipitacin
en reactor
Precipitado de
Figura 2.7: Diagrama de bloques para el proceso de obtencin de in-
sulina humana.
( f)
( g)
(h)
( i )
Concentracin por Centrifugacin
con Centrfuga de Discos
i
Separacin Qumica
de Trp-Met-Proinsulina
en Reactor Qumico
\ r
Separacin por
UHrafittracin
1r
Secado con
Evaporador Centrfugo
i
r
Renaturalizacin
en Reactor Qumico
\
r
Purificacin en
Columna de Intercambio inico
1
'2
Concentrado de
Trp E -Met-Proinsulina
Proinsulina + TrpE +
Metionina
Concentrado de
Proinsulina cruda
Concentrado de
Proinsulina cruda
Proinsulina activa
en solucin
Proinsulina activa
Figura 2.7: Continuacin...
2.4. DISEO 61
( i)
( n)
( o)
( P)
( q)
Transformacin en
Reactor Enzimtico
i
r
Purificacin > 99 %
con HPLC
\
r
Concentracin por
UKrafiltran
i
r
Cristalizacin en
Reactor Qumico
ir
Concentracin con
Centrfuga de Discos
\
r
Secado con
Evaporador instantneo
Insulina
Insulina Pura
Concentrado
de Insulina
Cristales de
Insulina
6
-Zn
2
Pasta cristalina de
Insulina
6
-Zn
2
Insulina Humana Recombinate
99.9 % de pureza
2.5 Sumario
La seleccin de un proceso de separacin para la obtencin de un pro-
ducto biotecnolgico se basa fundamentalmente en el mercado del pro-
ducto y en sus especificaciones.
Existen varios mtodos que contribuyen a seleccionar el proceso
de bioseparacin ptimo, sin embargo el proceso final generalmente es
obtenido mediante una combinacin de la teora y la experiencia de que
se dispone.
2.6. PROBLEMAS 63
2.6 Problemas
2.1.- Desarrollar un diagrama de flujo de un proceso para la obtencin
de un producto biotecnolgico.
2.2.- El proceso de obtencin de una enzima consta de cuatro o-
peraciones de separacin, cada una de ellas presenta una eficiencia de
recuperacin del 80 %. Estime la recuperacin global del proceso.
2.3.- Se cuenta con los siguientes datos para producir insulina re-
combinante:
(A) Mercado:
(B) Costos anuales:
(C) Depreciacin:
(D) Inversin fija y diferida:
(E) Capital de Trabajo:
(F) ISR:
Produccin 1,000 kg/ao
ao 1:
ao 2-10:
45%
$34,877.00
$31,525.00
$2,766.00
$30,468.00
$2,742.00
Estimar el precio de venta para obtener un Retorno Sobre la In-
versin (RSI) de 40%.
Resp. $53,664.00/Kg
2.7 Bibliografa
Bonnerjea, J., Oh, S. y Hoare, M. 1986. Protein purification: The
right step at the right time. Bio/Technology. 4, 954-958.
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Demain, A. L. y Solomon, N. (Eds.). American Society for Mi-
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Kelly, R. M. 1987. General processing considerations. En: Handbook
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Knight, P. 1990. Bioseparations: Media and modes. Biotechnology.
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Nuil, H. R. 1987. Selection of a separation process. En: Handbook
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tion to biochemical process design. En: Chemical Enginnering
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processes. En: Separation Processes in Biotechnology. Asenjo, J.
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Spalding, B. 1991. Downstream processing: Key to slashing produc-
tion cost 100 fold. Bio/Technology. 9, 229-240.
Parte II
Remocin de Insolubles y
Ruptura Celular.
67
Del conjunto de operaciones que integran normalmente un proceso
de bioseparacin, en esta parte se revisan las relacionadas con la re-
mocin de insoluoles y la ruptura celular, que son utilizadas en las
primeras etapas de recuperacin del producto de acuerdo a las tres
primeras reglas heursticas de la seleccin del proceso de separacin.
En las operaciones de remocin los principales insoluoles que se con-
sideran son clulas enteras, restos celulares y cuerpos de inclusin. Para
la remocin de insoluoles de un caldo pueden ser utilizados diversos
tipos de equipos; la seleccin depende de varios factores como el tipo
de clula, la disponibilidad de equipos, eficiencias y costos.
Las operaciones tpicas de remocin de insolubles son la filtracin
tradicional, muy utilizada para la separacin de hongos filamentosos; y
la centrifugacin, empleada en la separacin de levaduras, bacterias y
clulas de mamferos. Estas operaciones se tratan en los captulos 3 y
4, respectivamente.
Cuando el producto de inters es intracelular despus que las clulas
han sido separadas del caldo es necesario romperlas. En el captulo 5
se presentan los principales equipos que se emplean en esta operacin
a nivel industrial y los principales factores para su diseo.
Captulo 3
Filtracin
3.1 Introduccin
La filtracin consiste en la separacin de un slido de un fluido por
accin de un medio filtrante y un gradiente de presin.
Normalmente en los procesos biotecnolgicos se utilizan tres tipos
de mecanismos de filtracin (Figura 3.1):
- Filtracin de lecho profundo.
- Filtracin con formacin de torta o filtracin convencional.
- Filtracin por membranas (Microfiltracin y Ultrafiltracin).
En la filtracin de lecho profundo los slidos se depositan dentrc
del medio filtrante. En la filtracin con formacin de torta los slido;
se depositan sobre el medio filtrante formando una pasta. La filtracii
por membrana se realiza utilizando membranas especiales de tamaru
de poro muy pequeo, que generalmente operan con flujo paralelo a 1;
membrana (cruzado), de tal manera que no hay un depsito de slido
sobre la membrana sino una concentracin del caldo.
De los tres mecanismos de filtracin descritos, dos son de partcula
inters en las bioseparaciones slido-lquido: La filtracin convencionc
y la filtracin con membranas.
70
CAPTULOS. FILTRACIN
Suspensin
lili
a). Filtracin de lecho profundo
Medio filtrante
Suspensin
b). Filtracin con formacin de torta
f\Suspensin
c). Filtracin con membrana
> Retenido
Membrana
Filtrado
Figura 3.1: Mecanismos de filtracin.
3.2. FUNDAMENTOS 71
El objetivo este captulo es presentar los aspectos fundamentales
de la filtracin convencional y su aplicacin a la filtracin de caldos
biolgicos. La filtracin por membranas se revisa en el captulo 10.
En la seccin 3.2 de este captulo se centra la atencin en los fun-
damentos de la filtracin convencional. Los principales equipos que se
utilizan en este tipo de filtracin se presentan en la seccin 3.3. La
seccin 3.4 se dedica a presentar los aspectos ms relevantes del diseo
de filtros convencionales.
3.2 Fundamentos
La filtracin convencional forma parte de un conjunto de operaciones
llamadas Bioseparaciones Slido-Lquido (BSL). Para llevar a cabo un
proceso de BSL generalmente es necesario seleccionar entre una opera-
cin de filtracin y una operacin de sedimentacin (como la centrifu-
gacin), y frecuentemente la decisin es instrumentar una combinacin
de estos dos tipos de operaciones.
Debido a la naturaleza de los caldos que se manejan en biosepara-
ciones, es comn que stos sean pretratados mediante agentes fsicos o
qumicos para mejorar su comportamiento en las operaciones de sepa-
racin slido-lquido a que van a ser sometidos.
Un aspecto fundamental en el tratamiento de la operacin de fil-
tracin es la teora bsica existente, la cual contribuye al diseo, se-
leccin y operacin racional de los diferentes equipos de filtracin. De
particular inters es observar como esta teora puede ser utilizada en la
filtracin de caldos biolgicos.
En base a lo anterior, esta seccin se entra en tres aspectos funda-
mentales:
La filtracin como parte de los sistemas de BSL.
El pretratamiento de caldos biolgicos.
La teora de la filtracin convencional.
72 CAPTULOS. FILTRACIN
Caldo
lquido
liquido
Figura 3.2: Etapas y mtodos de las BSL. Adaptada de Tiller, 1974.
Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. . Copyright 1974. Todos los derechos
reservados.
3.2.1 La Filtracin corno parte de los Sistemas de
BSL
Un proceso de separacin slido-lquido (Figura 3.2) consta general-
mente de una o ms etapas (Tiller, 1974 ), entre las que destacan las
siguientes:
- Pretratamiento.
- Concentracin.
- Separacin de slidos.
- Postratamiento.
El pretratamiento mejora las propiedades del caldo para facilitar la
separacin. La concentracin de slidos permite una separacin gruesa
de slidos que disminuye el volumen a manejar, y puede disminuir los
3.2. FUNDAMENTOS 73
Tabla 3.1: Factores para el diseo y seleccin de procesos de BSL.
Requerimientos
del Proceso
Flujo
Intermitente o continuo
% Separacin
Postratamientos
Esterilidad
Propiedades
del Caldo
Tamao de partcula
densidades
Viscosidad
Tiempo sedimentacin
% Slidos
Tipo de torta
Espumeo
Toxicidad
Labilidad
Caractersticas
del Equipo
Capacidad
Intermitente o continuo
Tamao de partcula
Conc. mxima
Capacidad de lavado
Esterilidad
Claridad descarga
costos del proceso global de separacin slido- lquido. La mayor parte
de los slidos es obtenida en la etapa de separacin . Los slidos re-
cuperados pueden requerir un postratamiento de lavado o secado de
acuerdo con los requerimientos del proceso.
En el diseo y seleccin del proceso de BSL es necesario considerar
varios factores de orden tcnico que deben conjuntarse para una ade-
cuada decisin. En la Tabla 3.1 se presentan algunos de estos factores
agrupados de acuerdo a los requerimientos del proceso, las propiedades
del caldo y los equipos disponibles.
En general todos los sistemas mecnicos de BSL estn basados en
dos principios (Svarovsky, 1979) que dan origen a las operaciones de:
- Sedimentacin.
- Filtracin.
En el proceso de sedimentacin la separacin se basa en una dife-
rencia de densidad entre la fase slida y la fase lquida. Entre mayor
sea esta diferencia la separacin es ms fcil. Cuando esto no ocurre,
la diferencia puede ser aumentada aparentemente aplicando una fuerza
centrfuga o incrementando la densidad de la partcula por medio de
una coagulacin o una floculacin. Los principales equipos utilizados
en BSL que se basan en el principio de sedimentacin, son los sedimen-
tadores por gravedad y las centrfugas.
En la filtracin la separacin se logra utilizando un medio fsico que
no permite el paso de slidos a travs del cual el fluido se hace pasar
por medio de un gradiente de presin.
En general los sistemas de sedimentacin son ms baratos y pueden
operar continuamente, pero no recuperan el 100% de los slidos. Sin
embargo, an cuando el sedimentador no alcance la separacin deseada,
es posible utilizarlo conjuntamente con un filtro como una operacin de
concentracin previa a la de acabado que realiza la filtracin.
En el diseo y seleccin de sistemas para BSL es necesario conside-
rar algunos factores de orden prctico que permiten complementar los
anlisis que se efectan en cada uno de los captulos de esta parte del
libro, dentro de los cuales se puede destacar los siguientes:
- Varias combinaciones de equipos pueden ser tcnicamente factibles
para lograr una determinada separacin . Sin embargo, tratndo-
se de materiales biolgicos el nmero de posibilidades se reduce
considerablemente.
- El anlisis terico que se dispone de las BSL es limitado, as como el
conocimiento de las propiedades bsicas de los medios (porosidad,
permeabilidad, tiempo de sedimentacin, etc.), de tal manera que
en el diseo y seleccin del equipo las pruebas experimentales
directamente con el material, y la experiencia, juegan un papel
muy importante.
- Parte considerable de la informacin, la experiencia y los equipos
para pruebas experimentales, est en manos de las compaas
fabricantes y/o distribuidoras del equipo.
- La escala de experimentacin vara con el tipo de operacin. En
el diseo de filtros puede ser suficiente los datos obtenidos en el
laboratorio. En el caso de centrfugas es generalmente necesario
realizar pruebas a nivel piloto o a escala industrial.
3.2.2 Pretratamiento de Caldos para BSL
Las propiedades de los caldos sujetos a BSL pueden ser mejoradas por
medio de pretratamientos fsicos, qumicos o biolgicos con el objeto de
3.2. FUNDAMENTOS 75
facilitar estas operaciones. A continuacin se describen tres tipos de
pretratamientos comnmente empleados para caldos biolgicos.
Pretratamiento Trmico
El calentamiento de los caldos permite reducir su viscosidad, su vo-
lumen y romper estructuras gelatinosas que dificultan las operaciones
posteriores. En el caso de caldos de clulas recombinantes esta ope-
racin es obligada por cuestiones de seguridad ambiental. Por otro
lado, esta operacin es de uso limitado cuando se manejan productos
termolbiles.
Coagulacin y Floculacin
Debido a que los caldos biolgicos sujetos a BSL presentan partculas
muy pequeas (0.5 a 100 /m), los pretratamientos para incrementar el
tamao de partcula facilitan su manejo.
Las partculas coloidales (tamao en el rango de una miera) no sedi-
mentan fcilmente debido a que por accin de sus cargas superficiales
forman suspensiones muy estables llamadas soles, a diferencia de las
suspensiones formadas por partculas de mayor tamao que sedimen-
tan con relativa facilidad.
Las soles pueden ser alteradas por medio de agentes qumicos. En
el proceso de coagulacin se emplean electrolitos simples que neutra-
lizan las cargas repulsivas superficiales de las clulas o partculas, lo
cual genera fuerzas de atraccin del tipo de London- Van Der Waals
entre ellas, que permiten formar partculas ms grandes y densas. Los
electrolitos ms empleados son derivados de iones polivalentes positivos
como fierro, aluminio y calcio. La coagulacin tambin puede ser efec-
tuada empleando sustancias que varen el pH del caldo y por lo tanto
la carga superficial de las partculas.
En el proceso de floculacin se utilizan sustancias qumicas sintticas
de alto peso molecular llamadas polielectroltos. Estos producen un
efecto combinado (Figura 3.3) ya que actan neutralizando las cargas
superficiales de las partculas y provocan su atrapamiento por medio
de las redes que forman.
Los polielectroltos pueden ser aninicos, catinicos o neutros. Los
Figura 3.3: Mecanismo de floculacin.
materiales disponibles comercialmente son derivados de la poliacril-
amida, polietilenimina y la poliamina.
Es importante sealar que los pretratamientos qumicos son de uso
limitado dado que implican la adicin de sustancias al caldo que pueden
agregar toxicidad o impurezas a ste.
Uso de Ayudas-Filtro
En las operaciones de filtracin convencional se emplean sustancias
slidas llamadas Ayudas-Filtro (AF). Estas sustancias se adicionan al
caldo antes de la filtracin y/o se utilizan como precubierta del filtro.
Los AF actan como adsorbentes de las partculas coloidales mejorando
el tamao de partcula, y mejorando la incompresibilidad y permeabi-
lidad de los slidos, de tal manera que se facilite su filtracin.
Los AF mas utilizados son las tierras diatnicas (Rees, 1990) y las
perlitas. Las tierras diatnicas son restos de esqueletos de pequeas
plantas acuticas prehistricas que se obtienen de depsitos naturales.
Las perlitas se obtienen de vidrios volcnicos que contienen de 2 a 5% de
agua, que permite romperlos por accin trmica o de presin, formando
un polvo con caractersticas apropiadas como AF.
3.2. FUNDAMENTOS 77
Con el uso de los AF la filtracin se convierte en una operacin de
tres pasos:
- Primero se forma una precubierta de AF sobre el medio filtrante
haciendo reciclar sobre ste una lechada de AF.
- Una vez formada la precubierta se inicia la alimentacin del caldo
a filtrar, al cual se le agrega continuamente una dosis de AF.
Esto permite que las caractersticas de la superficie de filtracin
se mantengan uniformes.
- Al final del ciclo la precubierta de AF debe ser removida.
La precubierta de AF permite retardar el taponamiento del filtro,
facilita su limpieza, disminuye la cada de presin y produce un filtrado
de calidad uniforme. La adicin continua de AF al caldo es uno de los
mtodos ms efectivos para minimizar los costos de filtracin. La dosis
de AF que es necesario agregar continuamente es funcin directa de
la concentracin y compresibilidad de los slidos del caldo. Asimismo,
entre ms rpido se desee efectuar la filtracin, la dosis necesaria es
mayor, ya que para aumentar la velocidad de filtracin se requiere un
mayor gradiente de presin, lo que hace necesario aumentar la incom-
presibilidad y porosidad del material slido.
Existen diversas marcas comerciales de AF que difieren bsicamente
en el tamao de partcula. Los de partculas ms grandes facilitan la
filtracin pero producen filtrados ms turbios. La seleccin implica un
compromiso entre el flujo deseado y la claridad aceptable.
3.2.3 Teora de la Filtracin,
La filtracin convencional (Figura 3.4) puede ser definida como la se-
paracin de los slidos de un lquido. Esta se efecta haciendo pasar
una suspensin a travs de un medio permeable que retiene los slidos
utilizando un gradiente de presin.
La teora de la filtracin convencional se deriva de los estudios de
la mecnica de fluidos en medios porosos. La ecuacin que describe
el movimiento de fluidos newtonianos a travs de medios porosos, fue
formulada en 1856 por el gelogo Francs D' Arcy. La aplicacin de
4>
N
/ i
Suspensin
Fuerza impulsora
Presion
Vaco
O o . 0*0
0
oo
0
oo
0
o
0
c?o
0
o
0
cP
lifllllll
Medio filtrante
EQUIPO DE
FILTRADO
r
Filtrado
Figura 3.4: Concepto de filtracin.
esta ecuacin al caso particular donde se desprecian los efectos gravita-
cionales (lechos cortos), puede ser escrita como:
v =
kAP
V*
(3.1)
donde
1
:
1
Las unidades de los miembros de las ecuaciones se presentan en trminos de
dimensiones fundamentales y entre parntesis cuadrados. Las dimensiones funda-
mentales se representan como:
F: Fuerza.
M: Masa.
L: Longitud,
: Tiempo.
: Temperatura.
Las unidades bsicas empleadas en la mayor parte del texto corresponden a las
del Sistema Internacional de medidas (SI).
3.2. FUNDAMENTOS 79
v: Velocidad superficial de lquido (flujo volumtrico por rea de fil-
tracin). [L/t].
k: Permeabilidad del lecho. [Z/
2
].
AP: Cada de presin a travs del lecho. [F/L
2
].
i\ Profundidad del lecho filtrante. [L].
f j , : Viscosidad del fluido. [M/L t].
La velocidad de filtracin puede ser descrita en trminos del volu-
men de filtrado y el rea de filtracin (dos parmetros ms fcilmente
medibles) como:
Combinando las ecuaciones (3.1) y (3.2) y expresando la relacin

i/k como una resistencia /?, se puede obtener la ecuacin diferencial
bsica de la filtracin convencional:
A d t
En la ecuacin (3.3) R es la resistencia total a la filtracin. Esta
resistencia puede expresarse como la suma de dos resistencias en serie:
R = R
t
+ R
m
(3.4)
donde R
t
es la resistencia de la torta y R
m
es la resistencia del medio
filtrante.
Combinando la ecuaciones (3.3) y (3.4) se obtiene:
^ '
}
A d t
Las ecuaciones (3.3) y (3.5) slo pueden ser aplicadas a soluciones
diluidas en rgimen laminar, cuando el nmero de Reynolds modificado
es menor a 5, :
80
CAPTULOS. FILTRACIN
Filtros
Lecho
Torta
1
Membrana
Batch a presin <
Continuos alvacio
Uttrafiltradn
Microfiftractn
Marcos y Placas
Elementos
Hojas
Charolas
Figura 3.5: Clasificacin de filtros.
<5 (3.6)
donded p es el dimetro de partcula o dimetro del poro en la torta,
p es la densidad del fluido y e es la fraccin de espacio vaco del lecho.
En general las biofiltraciones cumplen con esta condicin.
3.3 Equipo de Filtracin
Existe una gran variedad de filtros (Figura 3.5) cuyo mecanismo de
filtracin es la formacin de torta (Moir, 1982). Estos tipos de filtros
se pueden dividir en dos grandes grupos:
Filtros intermitentes a presin.
Filtros continuos al vaco.
3.3.1 Filtros Intermitentes a Presin
En los filtros intermitentes a presin la solucin que contiene el slido
a separar, es alimentada continuamente al filtro. Una vez que se acu-
3.3. EQUIPO DE FILTRACIN 81
mua una determinada cantidad de slido sobre el medio filtrante, la
operacin es interumpida para descargar la torta, limpiar el filtro e ini-
ciar un nuevo ciclo. Este tipo de filtros pueden ser agrupados en dos
categoras (Figura 3.6):
- Filtros prensa de marcos y placas.
- Filtros de cmara con elementos filtrantes (hojas, charolas o tubos).
Los filtros intermitentes de uso ms amplio son los filtros de mar-
cos y placas. La unidad de filtracin est formada por un marco que
contiene dos placas formando una cmara de filtracin. Los filtros cons-
tan de varias de estas unidades que operan en paralelo produciendo un
slido bastante seco. Los filtros de marcos y placas normalmente ope-
ran en contacto con el ambiente y no son recomendables para cuando
se trabaja con sustancias txicas.
Los filtros de cmara con elementos filtrantes toman su nombre del
tipo y orientacin de los elementos filtrantes. Operan en ambientes
cerrados, tienen una relacin de rea/volumen relativamente alta y son
utilizados cuando los volmenes de filtracin son bajos.
En los filtros intermitentes al finalizar cada ciclo de filtracin la
torta debe ser descargada manualmente, por lo que este tipo de equipos
puede tipificarse como de mano de obra intensiva, recomendables slo
para bajas escalas de produccin.
3.3.2 Filtros Continuos al Vaco
Los filtros continuos ms utilizados en las bioseparaciones, principal-
mente en la produccin de antibiticos, son los tipo tambor rotatorio
al vaco (Figura 3.7). Este tipo de filtros se distinguen de los intermi-
tentes por el hecho de que al girar permiten una descarga continua de
la torta, de tal manera que pueden operar continuamente por perodos
largos de tiempo con flujos entre 200-1000 //m
2
h (Petrides et a/,
1989). Normalmente utilizan ayudas-filtro en dosis equivalentes a la
concentracin de slidos del caldo que origina un problema de deseche
de slidos.
82
CAPTULOS. FILTRACIN
Suspensin
Placas
Marcos
+Filtrado
Filtro de placa y marcos
Tela
Marcos
Placas
Mecanismo de
filtrado
Espacio torta
Suspensin
Figura 3.6: Filtros intermitentes. Tomada de: Svarouvsky, 1979.
Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. Copyright 1979. Todos los derechos reservados.
3.3. EQUIPO DE FILTRACIN 83
Mecanismo de descarga
de torta
Suspensin
nitro horizontal con hojas verticales
Venteo
nitrado
Tubos
Formado
de torta e
lpade
extema
del tubo
Suspensin
Filtrado
Suspensin
Filtro tubular
Filtro de hojas
Rotacin
Sistema de
' aspersin
Descarga
torta
Caldo
Figura 3.7: Vista lateral de filtro continuo tipo tambor.
3.4 Diseo de Equipo de Filtracin
En esta seccin se centra la atencin en el uso de la teora fundamental
de la filtracin en el diseo de dos tipos de filtros:
Filtros Intermitentes.
Filtros Continuos.
En primer trmino se revisa el caso de la filtracin intermitente
donde la torta es incompresible y la filtracin se realiza con un gra-
diente de presin constante. En segundo trmino se revisa este mismo
desarrollo pero para el caso donde la torta es compresible, que es el tipo
de filtracin ms comnmente empleada en bioseparaciones a escala
moderada. Finalmente, se aborda el diseo de los filtros continuos con
tortas compresibles que es el caso ms comn para las filtraciones de
caldos biolgicos a gran escala.
3A. DISEO DE EQUIPO DE FILTRACIN 85
3.4.1 Filtracin Intermitente
En la filtracin intermitente con formacin de torta la separacin de-
pende de varios factores dentro de los que destacan la permeabilidad
de la torta que forme el slido que se desea separar, el tamao del poro
de la torta, el tamao de la partcula del slido y la compresibilidad de
la torta.
Desde el punto de vista de los parmetros de operacin dos tipos
particulares de filtracin intermitente son industrialmente importantes
(Brown, 1982):
- La filtracin intermitente a flujo constante.
- La filtracin intermitente con cada de presin constante.
La filtracin intermitente a flujo constante se produce debido a que
algunos tipos de bombas producen el mismo flujo a diferentes cabezales.
En la filtracin intermitente con cada de presin constante, se pro-
duce una disminucin gradual del flujo conforme aumenta el espesor de
la torta. Este tipo de filtracin es especialmente til en la adquisicin
experimental de datos para diseo, ya que el seguimiento del volumen
del filtrado con el tiempo es relativamente fcil de medir.
Tanto en el caso de la filtracin intermitente a cada de presin
constante, como en la de flujo constante , la resistencia de la torta vara
conforme avanza el tiempo de filtracin al irse acumulando slidos. Sin
embargo, la resistencia especfica de la torta puede ser variable o no.
Esta variacin depende de la naturaleza de la torta.
El anlisis general de la filtracin intermitente que se desarrolla en
este captulo, inicia con el tratamiento de tortas incompresibles cuya
resistencia especfica es constante. Posteriormente este tratamiento se
aplica al caso particular de tortas compresibles, las cuales son carac-
tersticas de materiales biolgicos. Este desarrollo slo ser referido al
caso en el cual la cada de presin es constante.
Filtracin Intermitente: Tortas incompresibles y AP constante
En el caso de tortas incompresibles la resistencia de la torta puede
suponerse directamente proporcional a la cantidad de slidos (peso
seco) depositados por unidad de rea. Esto puede expresarse como:
R
t
= aw (3.7)
donde w es la cantidad de slidos secos depositados por unidad de
rea y a es la resistencia especfica de la torta. La ecuacin (3.7) puede
ser expresada en trminos de parmetros ms fcilmente medibles:
R, = < *P, -r (3-8)
donde p
0
es la cantidad de masa slida seca por unidad de volumen
libre de slidos o volumen de filtrado del caldo a separar.
Combinando las ecuaciones (3.5) y (3.8) se tiene:
d i ~p [ap
0
(
La ecuacin (3.9) puede escribirse en su forma recproca, e integrarla
con las siguientes condiciones iniciales:
p ara t =Q V = 0
y obtener la siguiente ecuacin:
M ta V ,
+ l
' V V2AP/ A
La ecuacin (3.10) puede ser utilizada para la obtencin de parme-
tros de filtracin en equipos intermitentes a presin constante. Guando
se grfica At/V vs V/A se produce una lnea recta con:
p end iente =
ord enad a en el origen =
2AP
AP
Un caso particular de la ecuacin (3.10) se presenta cuando la re-
sistencia del medio es despreciable, entonces la ordenada en el origen
toma el valor de cero y la ecuacia se reduce a:
V
(3J1)
3.4. DISEO DE EQUIPO DE FILTRACIN
87
AP
Cido de Operacin
Rujo
constante
Cada de Descarga
Figura 3.8: Cada de presin contra tiempo en una filtracin intermi-
tente.
Otro caso particular de la filtracin intermitente con cada de pre-
sin constante se produce cuando se desea asegurar una formacin uni-
forme de la torta evitando flujos altos al inicio de una corrida, que in-
ducen la penetracin de slidos sobre el medio filtrante. En este caso la
cada de presin se incrementa gradualmente hasta alcanzar una cada
de presin constante (Figura 3.8).
Bajo estas condiciones la integracin de la ecuacin (3.9) se efecta
en el rango de cada de presin constante, con las condiciones iniciales
p ara t = t
s
' V = V
s
obtenindose la ecuacin:
(t-t
s
)A _ anp
0
(V + V, )
_ i ^
rim
(312)
(V-V
S
) 2AP A AP
v
'
la que nos permite calcular parmetros experimentales al graficar:
(t-t, )A
(v-v
s
)
vs
A
Filtracin Intermitente: Tortas compresibles y AP constante
La compresibilidad de una torta se caracteriza por un aumento de su
resistencia especfica al aumentar el gradiente de presin que acta
sobre la torta.
La mayora de las tortas de material biolgico son compresibles. En
estos casos la resistencia especfica puede ser correlacionada con el gra-
diente de presin mediante la siguiente ecuacin emprica (Silverblatt
et al, 1974):
a = a'(AP)
5
(3.13)
donde a
1
es una constante relacionada principalmente con el tamao
y forma de las parculas de la torta, y s es el ndice de compresibilidad.
Este vara de cero para una torta incompresible a 0.8 para una torta
altamente compresible (la correlacin es aceptable para s < 0.6 y AP >
0.2 atmsferas).
La determinacin experimental de 5 y a
1
requiere la realizacin de
varias corridas de filtracin con cada de presin constante a varios
niveles. Los datos pueden ser correlacionados en una grfica log(a) vs
log(AP). Entre mayor sea el valor de s el efecto de la presin sobre
la resistencia de la torta es ms severo, en estos casos es recomendable
utilizar ayudas-filtro.
Combinando las ecuaciones (3.10) y (3.13) se puede obtener la e-
cuacin para describir la filtracin intermitente de tortas compresibles
con cada de presin constante:
Ai
=
p a>p
0
V ^
V 2AP
1
-* A AP
V
' '
Ejemplo 3.1.- Filtracin de actinomicetos.
Es bien conocido que los cultivos de actinomicetos como el Strep to-
myces griseus presentan una gran resistencia a la filtracin (Aiba et a/,
1972).
En una filtracin intermitente a presin constante con un filtro de
laboratorio de 110 era
2
de rea y una cada de presin de 70,000 N/m
2
,
3.4. DISEO DE EQUIPO DE FILTRACIN 89
Tabla 3.2: Datos y clculos de filtracin del ejemplo 3.1.
Datos
t( s)
19
80
210
380
700
978
1215
V(cm
3
)
100
200
300
400
500
600
650
Clculos
V/A (cm)
0.91
1.82
2.73
3.64
4.55
5.45
5.91
At/V (s/cm)
20.90
44.00
77.00
104.50
154.00
179.30
205.61
se procesa un caldo de una concentracin de 0.015 Kg/1 peso seco de
clulas y una viscosidad de 0.0011 N s/ra
2
(el caldo se adicion con
1% de tierras diatomeas, a un pH de 3.7 y una temperatura de 10C),
obtenindose los datos que aparecen en las primeras dos columnas de
la Tabla 3.2:
Estimar la resistencia especfica de la torta a y la resistencia del
medio
Solucin:
En base a la ecuacin (3.10) y los datos que se presentan, se calculan
primeramente los grupos At/V y V/A. Estos clculos se muestran en
las columnas 3 y 4 de la Tabla 3.2 y se presentan en forma grfica la
Figura 3.9 . ,
a).- Clculo de la resistencia del medio.
De acuerdo a la Figura 3.9 la ordenada en el origen es cero y por lo
tanto la resistencia del medio no tiene un valor significativo:
b).- Clculo de la resistencia especfica de la torta.
De acuerdo al resultado del inciso a) se utiliza la ecuacin (3.10)
para calcular la resistencia especfica de la torta.
90
CAPTULOS. FILTRACIN
zoo
Figura 3.9: Datos de filtracin ejemplo 3.1.
p end iente =
F
2AP
/120 -40 _
V4-1.23,/ cm
2
" 2x70, 000 $
28.88-^ x 140,000
a =
.0011 x .015
a = 2.45 x 10
11
cm
cm
Optimizacin de la Filtracin Intermitente.- En la filtracin
intermitente se presenta un problema de optimizacin relacionado con el
tiempo de duracin de cada ciclo o tiempo de procesamiento de un lote
de caldo: Si el tiempo de duracin de cada ciclo se acorta, el tiempo
total de descarga y limpieza del filtro se incrementa. Por otro lado,
conforme se incrementa el tiempo del ciclo, la velocidad de filtracin
promedio disminuye. En el siguiente ejemplo se aborda este tipo de
problema.
Ejemplo 3.2.- Clculo del nmero de ciclos ptimo para una
filtracin intermitente.
En el procesamiento de un caldo micelial para la recuperacin de
un antibitico, en un filtro de laboratorio de 110 cm
2
de rea a una
presin de 19.6 x 10
4
N/rn?, se obtuvieron los datos que aparecen en
las columnas 1 y 2 de la Tabla 3.3.
i
La viscosidad del caldo fue de 2 x 10~
3
N-s/m
2
y la masa de slidos
secos por unidad de volumen de filtrado de 40 Kg/m
3
Estimar:
a).- La resistencia especfica del caldo a.
b).- El nmero de ciclos del filtro por da, si cada operacin de
descarga y limpieza del filtro tiene una duracin de 0.5 h y el filtro
opera 24 h al da.
Solucin:
Tabla 3.3: Datos y clculos de ejemplo 3.2.
Datos
t(s)
9
46
126
240
405
610
860
V x 10
4
m
3
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
Clculos
Ai IV (s/m)
990.0
2530.0
4620.0
6600.0
8910.0
11183.3
13514.3
VI A (m)
0.009
0.018
0.027
0.036
0.045
0.055
0.064
a).- De acuerdo a la ecuacin (3.10), a partir de los datos es necesario
calcular los grupos At/V y V/A. Estos clculos se presentan en las
columnas 3 y 4 de la Tabla 3.3. Mediante una regresin lineal es posible
obtener la pendiente de los datos ajustados a dicha ecuacin,
a =
a =
(p end iente)(2)(AP)
(232451.7 -V x 10
4
-^
m
( 2x II
a = 1.14 x 10
12
b).- El nmero de ciclos por da est dado por:
Nmero d e ciclos =
donde t
c
es el tiempo de filtracin por ciclo.
El volumen total de filtrado Vt se relaciona con el volumen de filtrado
por ciclo V
c
mediante la siguiente expresin:
24 h
0.5 +1
V,
la resistencia del medio filtrante puede ser despreciada, entonces
puede ser utilizada la ecuacin (3.11) para obtener:
v
-v
de tal manera que:
derivando la expresin anterior con respecto al tiempo del ciclo e
igualando el resultado a cero, se obtiene el tiempo de duracin del ciclo
para el cual el volumen total de filtrado es mximo, es decir:
d V
L
_d _ I ti
d t ~ d t \t
c
+ 0.05
de donde se obtiene que el tiempo ptimo t* :
f* = 0.5 h
el nmero de ciclos por da est dado por:
24 h
Nmero d e ciclos = ; = 24 ciclos
0.5 /*+ 0.5fc
Filtracin Intermitente en Paralelo.- En el caso de los filtros
de marcos y placas, cada marco consta de dos caras de filtracin. La
alimentacin a cada marco se hace de man'era independiente de tal ma-
nera que cada superficie de filtracin acta en paralelo respecto al flujo
de alimentacin. Debido a lo anterior los datos de diseo de este tipo
de filtros pueden ser generados en un filtro intermitente de laboratorio.
El siguiente ejemplo se refiere a este procedimiento.
Ejemplo 3.3.- Filtracin de cristales de un esteroide.
Con datos de una filtracin de laboratorio de una suspensin de un
esteroide se desea disear un filtro intermitente de marcos y placas.
Las pruebas de laboratorio se realizan en un tubo de vidrio con una
malla en el extremo inferior de resistencia despreciable. Los datos de
los resultados del laboratorio son los siguientes:
Peso seco de los cristales
Volumen de la torta
Profundidad de la torta
Tiempo de filtracin
Gradiente de presin
Torta incompresible
0.063 Kg.
253 era
3
12.5 cm
9780 s
1.01 Kg/cm
2
si
Estimar el nmero de marcos de 430 x 430 x 30 mm y el tiempo de
filtrado, para procesar 40 Kg/lote de peso seco de producto. Suponer
que la bomba de alimentacin produce una presin a la entrada del
filtro de 0.68 Kg/cm
2
y que descarga a la atmsfera.
Solucin:
a).- Estimacin de parmetros a partir de datos de laboratorio.
De acuerdo con los datos de laboratorio es necesario utilizar la
ecuacin (3.11) arreglada de la siguiente forma:
lia _ t&PA
2
2p
0
~ W
2
donde W = p
0
V es el peso seco de la torta,
sustituyendo valores en la expresin anterior se obtiene:
Ha (9780 5)(1.0:
(0.063 Kg)<
s cm'
= 1.01 x 10
9
b).- Clculo del nmero de marcos necesarios para la filtracin de
40 Kg peso seco del esteroide.
El clculo se basa en el hecho t[ue el volumen de todos los marcos
del filtro debe ser suficiente para alojar el volumen de la torta hmeda,
de tal manera que :
Nmero d e marcos =
Nmero d e marcos =
Nmero d e marcos =
volumen torta hmed a
volumen d e un marco
Ka\(
253 cm3
ÂQ. .Q63
(43 x 43 x 3) cm
3
29
c).- Clculo del rea de filtracin del filtro prensa.
El rea de filtracin para filtros prensa de marcos se calcula tomando
en cuenta que por cada marco existen dos placas o superficies de fil-
tracin.
rea d e f iltracin Arta p or marco x 2 x Nmero d e marcos
rea d e f iltracin = (43 x 43) cm
2
x 2 x 29
rea d e f iltracin = 107,242 era
2
d).- Clculo del tiempo de filtracin en el filtro prensa.
El tiempo de filtracin puede ser calculado mediante la modificacin
de la ecuacin (3.11),
t =
APA*
t = (1.01 x 10
9
t = 206 s
s cm
Kg
x
(40 Kg)<
(0.68 ^ ) x (107,242 cm
2
)
2
Ejemplo 3.4.- Clculo del ndice eje compresibilidad.
Se desea correlacionar la resistencia especfica de la torta que forma
una levadura con la cada de presin, para lo cual se realizan pruebas
de filtracin bajo las siguientes condiciones:
rea de filtracin
Viscosidad
Masa de slido seco
por volumen de filtrado
9.3 era
2
0.001 N-s/m
2
10g/l
Las pruebas se realizan a cuatro gradientes de presin diferentes.
Los datos de cada corrida fueron correlacionados mediante la ecuacin
(3.10) obtenindose los siguientes resultados:
Corrida
Num.
1
2
3
4
AP
Atm.
0.68
1.36
2.04
3.40
Ordenada
Origen s/cm.
26
12
8
5
Pendiente
s/cm
2
3.00
2.00
1.60
1.10
Estimar el ndice de compresibilidad s para este material.
Solucin:
El empleo de la ecuacin (3.13) permite calcular el ndice de com-
presibilidad, para lo cual es necesario el clculo de a para cada corrida
mediante la ecuacin (3.10),
p end iente =
2AP
Para la primera corrida se tiene:
0.001 *? x a, x 10 *f x Ofit x
2 x 0.68 Atm x ''*"< f
Atm
ai =4.13 x 10
10
cm
De igual manera pueden obtenerse a
2
> 3 y #4- Estos valores son
los siguientes:
10.9-
Log a
10.8-
10.7-
10.6
-0.2 0.2
Log AP
0.4
Figura 3.10: Resistencia especfica contra cada de presin.
Corrida
Nmero
1
2
3
4
AP
Atmsferas
0.68
1.36
2.04
3.40
a
cm/g
4.13 xlO
10
5.51 xlO
10
6.61 xlO
10
7.58 xlO
10
Los datos de a y AP para cada una de las corridas pueden ser co-
rrelacionados de acuerdo con la ecuacin (3.13) en una grfica log(AP)
vs log(a), tal como aparecen en la Figura 3.10. Se puede estimar con
la pendiente de la curva el valor:
s = 0.42
3.4.2 Filtracin Continua
En un filtro continuo (Figura 3.7) el ciclo de filtracin consta de tres
pasos principales:
- Formacin de la torta.
- Lavado de la torta.
- Descarga de la torta.
Los primeros dos pasos se relacionan con el proceso de filtracin en
s y el tercero es un aspecto de diseo mecnico. Esta seccin enfatiza
lo referente a los dos primeros pasos.
Formacin de la torta
En los procesos de filtracin intermitente el rea de filtracin es cons-
tante y el espesor de la torta vara con el tiempo de filtrado. En la
filtracin continua se puede suponer que el espesor de la torta es cons-
tante y el rea de filtracin vara con el tiempo.
La ecuacin (3.14) puede ser adaptada a la filtracin continua. Esta
ecuacin cuando la resistencia del medio es despreciable puede ser ex-
presada como:
V
f
2AP
1
- A
donde tj es el tiempo que dura un paso de la formacin de la torta
y Vf es el volumen de filtrado colectado en ese perodo. A es el rea
expuesta de filtracin por ciclo o por revolucin. Esta ecuacin es til
para diseo de filtros continuos a partir de datos de filtracin intermi-
tente.
La ecuacin (3.15) puede ser expresada en trminos de los parme-
tros de diseo siguientes:
Q: Flujo de filtrado. [L
3
/t]. *
(j >: ngulo de formacin de la torta. [Radianes].
TV: Velocidad angular del tambor. [ t~
1
].
R: Radio del tambor. [L].
L: Longitud del tambor. [L].
Entonces es posible relacionar el volumen de filtrado de un ciclo por
unidad de rea, con el gasto Q :
Vj Q
T
=
donde ,
27rRL = rea lateral d el f iltro.
El tiempo que dura cada etapa de filtracin se puede relacionar con
el ngulo de filtracin y la velocidad de giro del tambor, mediante la
ecuacin siguiente:
Combinando las ecuaciones (3.15), (3.16) y (3.17) se obtiene el flujo
de filtracin :
V P<*Po )
i
o en trminos de la velocidad de formacin de la torta W = p
0
Q :
2
(3,9)
J L O '
Las ecuaciones (3.18) y (3.19) pueden ser utilizadas para predecii
cambios de la velocidad de filtracin con respecto a cambios de las
variables de diseo y operacin en filtros continuos al vaco.
1.00 _Caso ideal: desplazamiento hidrulico
~ 0.10-
0.01
Controlde la transferencia
de masa
volumn d*liquido dlayado
volumen d liquido retenido
Figura 3.11: Mecanismos de lavado.
Lavado de la torta
Una vez que se ha formado la torta sobre la superficie del filtro, me-
diante un lavado se remueve del soluto retenido en el lquido y en la
masa celular de la torta.
Existen diferentes tcnicas de lavado, siendo la ms utilizada la de
lavado por desplazamiento. En esta tcnica el lquido de lavado se aplica
directamente sobre la superficie de la torta. Inicialmente el lquido de
lavado produce un desplazamiento hidrulico del filtrado retenido por
la torta. Si el lavado contina parte del soluto contenido en el interior
de la biomasa puede pasar al lquido de lavado mediante mecanismos
de transferencia de masa (Figura 3.11).
En la etapa de lavado la cantidad de solutos que puede ser recu-
perada depende del volumen del lquido de lavado que se emplee. Un
factor de diseo es el tiempo requerido para aplicar el lquido de lavado
o tiempo de lavado, el cual depende de la naturaleza de la torta. Debido
a lo anterior el anlisis de la etapa de lavado se efecta en dos pasos:
1.- Clculo del volumen de lavado en funcin de la recuperacin de
soluto que se especifique.
2.- Clculo del tiempo de lavado en funcin del tipo de torta.
Clculo del volumen del lquido de lavado.- Si el desplaza-
miento por lavado del lquido retenido en la torta extrajera todo el
soluto, el volumen necesario de lquido de lavado sera equivalente al
volumen del lquido retenido por la torta (fraccin vaca del lecho).
La operacin de lavado sera 100 % eficiente. Sin embargo, debido a
los fenmenos de difusin y mezclado en el lecho, esto no ocurre en la
prctica.
Conforme la eficiencia de lavado disminuye debido a los mecanismos
de difusin y mezclado, para lograr una determinada extraccin del
soluto, la razn del volumen del lquido de lavado al volumen de lquido
retenido se incrementa.
Existen varios anlisis tericos para correlacionar los parmetros
de lavado, pero debido a lo complejo del fenmeno frecuentemente se
utilizan correlaciones empricas que ofrecen buenos resultados. Una
correlacin emprica que ha sido utilizada para materiales biolgicos
est dada por la siguiente ecuacin:
r = (l-e)
n
(3.20)
donde:
Soluto retenid o en torta
Soluto inicial en la torta
e = Ef iciencia d e lavad o.
Volumen d e liquid o d e lavad o
n =
Volumen d el liquid o retenid o p or la torta
La ecuacin (3.20) puede ser utilizada en grficas semilogartmicas
para correlacionar datos de lavado (Figura 3.12). Con estas correla-
ciones es posible calcular el lquido de lavado necesario para lograr un
determinado porciento de extraccin.
Clculo del tiempo de lavado.- Para el clculo del tiempo de
lavado, se puede suponer que el gasto durante la fase de lavado es
constante dado que el lquido de lavado no tiene slidos. Este gasto
puede igualarse al gasto final de la fase de filtrado. En base a lo anterior,
la ecuacin (3.9) con R
m
= O y a = a'AP
s
se escribe:
LOO
Predomina el
desplazamiento
hidrulico
3.0
! _ Volumen lquido de lavado
~~ Volumen liquido retenido
Figura 3.12: Curvas de lavado.
d V_
d t
El gasto cuando V = V/ es constante e igual a:
d V_
d t ~
Integrando la ecuacin (3.22) con los lmites:
(3.21)
(3.22)
donde V es el volumen del lquido de lavado y ti es el tiempo de
lavado requerido, se obtiene la siguiente ecuacin:
VL =
(3.23)
Combinando las ecuaciones (3.15) y (3.23) se obtiene:
i-
3
ii/2
*L (
3
-
24
)
VL
=
A
Los volmenes y tiempos, de filtrado y lavado, se relacionan direc-
tamente mediante las ecuaciones (3.15) y (3.24) obtenindose:
- = 2^ (3.25)
Es conveniente expresar la ecuacin (3.25) en trminos de par-
metros de diseo, como la relacin de volumen de lavado a volumen
retenido n, y la relacin de la fraccin del lquido retenido con respecto
al volumen del filtrado /, de tal manera que
ir V, I/D
r = 2-^ = 2n/ (
3
-
26
)
tf VR Vf
Ejemplo 3.5.- Filtracin continua al vaco.
Se dispone de un filtro tipo tambor rotatorio continuo de 3 m de
dimetro y 4.3 m de largo, el cual puede ser operado a 1.2 rpm con un
ngulo de filtracin efectiva dej65. Con este filtro se desea separar un
caldo de eritromicina. El caldo pretratado se puede suponer incompre-
sible. La resistencia del medio filtrante es muy pequea comparada con
la resistencia de la torta. El filtro opera a 51 cm de mercurio de vaco.
Bajo estas condiciones:
2AP era
2
Se desea extraer el 99% de los solutos retenidos en la torta. Debido
a las caractersticas de la torta se espera un 80% de eficiencia en el
lavado y que la torta retenga 1% del volumen de filtrado.
a).- Estimar el tiempo de filtrado.
b).- El gasto que puede manejar el filtro.
c).- El tiempo de lavado.
Solucin:
a).- Clculo del tiempo de filtrado.
La ecuacin (3.17) permite estimar el tiempo de filtrado en base a
los parmetros del filtro, de tal manera que,
2?r x 1.2
(El ciclo d el f iltro es d e 50 segund os)
b).- El gasto que puede manejar el filtro puede ser estimado por
medio de la ecuacin (3.18).
= RL(
V>0i'p
c
por las caractersticas de la torta s = O y a' = a, entonces la
ecuacin anterior se puede expresar como:
sustituyendo valores:
/2?r x ^x 2?r x 1.2 min"
l
\
l/2
Q = 150
C
mx430
CT
n( - g _^ - J
x
cm
2
mtn /
Q = 4520 cm
3
/5
O = 16,272 L/h
c).- Clculo del tiempo de lavado.
Mediante la ecuacin (3.20) se calcula n. De acuerdo a los datos del
ejemplo : *
r = (1 - e)"
o ' - o, - .
3.5. SUMARIO^ " J 105
r
O Q
O
c
0.01 = (1 - .8)*
;
entonces,
Volumen d e lavad o
n = 2.86
Volumen retenid o
Aplicando la ecuacin (3.26) conociendo que el volumen retenido e
0.01 volumen del filtrado,
i
L
= (9 s)(2)(0.01)(2.86)
t
L
= 0.5 s
3.5 Sumario
La filtracin es ampliamente utilizada en los procesos biotecnolgicc
para remover slidos de lquidos. La teora bsica conjuntamente co
algunos experimentos de laboratorio permiten el diseo y operaci
racional de los procesos de filtracin. i
Los equipos de filtracin empleados en bioseparaciones operan m<
diante la formacin de una torta sobre una superficie filtrante por accic
de un gradiente de presin. El filtro ms empleado en bioseparaciom
es el filtro continuo tipo tambor operado mediante vaco, y en men<
proporcin el filtro intermitente de marcos de placas.
Los procedimientos de diseo de filtros que se presentan, considere
la compresibilidad caracterstica de las tortas que forman los material
biolgicos, tanto para la operacin intermitente como para la continua
106
3.6 Problemas
CAPTULOS. FILTRACIN
3.1.- En la filtracin a nivel laboratorio de un caldo para la recuperacin
de gentamicina, la solucin present una viscosidad de 1.2 cp y un
contenido de slidos de 5 g/1. El rea de filtracin empleada fue de 100
crn
2
y el gradiente de presin de 1.8 m de agua. Los datos de filtracin
son los siguientes:
Estimar el tiempo de filtrado para procesar 5000 1 de este caldo en
un filtro de 1.5 m
2
de rea, si el proceso se realiza con un gradiente de
presin igual al empleado en el laboratorio.
Resp. 12 h
3.2.- Los datos de filtracin de S. griseu a un pH de 3.8 y a 2 atm de
presin, se ajustan a una recta que pasa por los puntos (V/A, At/V)
siguientes: (3,70) y (6,180), donde V/A est en cm y At/V en s/cm.
Calcular el rea de filtracin necesaria para procesar 1000 1 de este
caldo en un tiempo de 15 min bajo las mismas condiciones.
Resp. 18 m
2
3.3.- Se efectuaron pruebas de filtracin con un filtro prensa de
marcos y placas bajo las siguientes condiciones:
Po = 10.037 Kg/m
3
l = 0.001 N - s/m
2
Marcos = 430 x 430 x 30 mm
Los datos obtenidos durante el experimento aparecen en las prime-
ras tres columnas de la Tabla siguiente:
3.6. PROBLEMAS 107
Datos
P
N/m
2
0.4
0.7
1.1
1.3
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
t
s
447
1262
1886
2552
3381
3686
4043
4793
5652
6610
8680
9256
V
m
3
0:04
0.10
0.16
0.22
0.28
0.30
0.32
0.36
0.40
0.44
0.52
0.54
Clculos
(V + V.)/A
m
0.9
1.1
1.2
1.4.
1.6
1.7
1.8
1.9
2.0
2.2
2.3
(t-f,)/(V-V.)
s/m
3
4609.3
4484.4
4757.1
5244.8
5642.5
6604.5
6826.5
7274.2
7727.7
8399.0
8587.1
Estimar:
a).- a
a).- Resp. a = 1.069 x 10
11
m/Kg
b).- Resp. Rm = 6.61 x 10
10
m"
1
3.4.- Un caldo de actinomicetos adicionado con 5 % de ayudas-filtro
se procesa en un filtro prototipo de 35 cm
2
de rea y a una presin de
99,990 7V/m
2
, obtenindose los datos siguientes:
t(s)
20
40
60
120
180
300
420
V x 10
6
(m
3
)
'9.5
16.5
22.0
35.0
45.0
61.0
74.5
Estimar :
a).- //a/>
0
/2AP.
a).- Resp. 674,356.5 s/m
2
b).- Resp. 5367.71 s/m
3.5.- Considerando los datos del ejemplo 3.3.
a).- Cuntos marcos se requieren si la dimensin de stos es de
75 x 75 x 3 crn
b).- Calcular el tiempo de filtrado si la descarga del filtro se localiza
a 3 m de altura.
3.6.- Estimar Rm y a' para la filtracin del ejemplo 3.4.
3.7.- Se desea filtrar un caldo que contiene cristales de un antibitico.
Las pruebas de filtracin en el laboratorio presentan los siguientes datos:
rea = 89 crn
2
AP = 2.6 m d e Hg
o = 0.34 100 era
3
t(s) V (litros)
10 0.500
20 0.707
30 0.866
Estimar el tiempo de filtracin si el volumen que se desea filtrar es
de 7300 litros en un filtro de 1.3 m
2
de rea y la solucin tiene una p
0
de 0.28 g/cm
3
. La presin a esta escala es la misma.
Resp: 23 horas.
3.8.- Las levaduras forman tortas compresibles (Gerstenberg y Sit-
ting, 1980) cuya resistencia especfica ha sido correlacionada con la
expresin emprica ,
a= 1.25 x 10
n
(AP)
3.6. PROBLEMAS 109
donde a tiene unidades de cm/g y AP de atmsferas.
Estimar el tiempo necesario para procesar 3000 1 de un caldo que
contiene 30 g/1 de la levadura y presenta una viscosidad de 1.2 cp, en un
filtro piloto de 5 m
2
de rea con una cada de presin de 4 atmsferas.
Resp. 19.6 h
3.9.- El procesamiento de 30 cm
3
de un caldo de P. chrysogenum
(de 86 h de cultivo) en un filtro utilizado para medicin de biomasa en
linea, produjo los siguientes datos:
AP (cm de Hg)
10
20
30
40
tiempo de filtracin
271
191
163
138
Estimar el ndice de compresibilidad de la torta considerando des-
preciable la resistencia del medio.
Resp. 0.52
3.10.- Calcular el incremento en flujo de un filtro continuo tipo tam-
bor giratorio al vaco cuando:
a).- Se incrementa la velocidad del filtro de 0.3 rpm a 0.5 rpm,
mantenindose el resto de los parmetros constantes.
b).- Se incrementa de 30 a 40 % el porcentaje de rea sumergida
(rea sumergida/ rea total de filtracin).
a).- Resp. 29 %
b).- Resp. 15 %
3.7 Bibliografa
Aiba, S., Humphrey, A.E. y Mills, N.F. 1972. Biochemical Engineer-
ing. Academic Press. New York. 355-356.
Brown, T.R. 1982. Designing batch pressure filters. Chem. Eng. Julio
26. 58-63.
Moir, D.N. 1982. Selecting batch pressure filters. Chem. Eng. Julio
26. 47-57.
Gerstenberg, H. y Sitting, W. 1980. Recovery of fermentation pro-
ducts. Chem. Eng. Technol. 52, 1, 19-31.
Petrides, D.P., Cooney, C.L. y Evans, L.B. 1989. An intoducction to
biochemical process design. En: Chemical Engineering Problems
in Biotechnology. Shuler, M.L. (Ed.). AIChE. New York. 351-391
Svarouvsky, L. 1979. Filtration and allied operations. Chem. Eng.
Julio 2. 63-76
Rees, R.H. 1990. Let diatomite enhance your filtration. Ch. Eng.
Agosto 30. 76-79.
Tiller, F.M. 1974. Bench-Scale design of SLS systems. Ch. Eng. Abril
29. 117-119.
Captulo 4
Centrifugacin
4.1 Introduccin
La separacin de substancias de diferente densidad mediante movimien-
to giratorio se conoce como centrifugacin.
La centrifugacin es una de las principales operaciones utilizada
para la separacin de clulas de caldos biolgicos (Wiesmann y Eider,
1982), especialmente cuando los caldos no son fcilmente filtrables, o
la adicin de ayudas-filtro no es recomendable por razones de costos o
de produccin excesiva de desechos contaminantes.
La centrifugacin tambin es empleada en la remocin de desechos
celulares de caldos de clulas que han sido sujetas a rompimiento, sepa-
racin de precipitados proteicos (Bell et a/, 1983) y para recuperacin
de productos insolubles como los cuerpos de inclusin. Estos ltimos
debido a su tamao (de 0.3 a 1 /zm) y alta densidad (1.3-1.5 g/cm
3
)
pueden ser separados de los restos celulares por centrifugacin en dos
o tres pasos, utilizando agua de lavado y detergentes para facilitar la
separacin.
Cuando se utiliza la centrifugacin la diferencia entre la densidad de
los slidos (clulas o partculas) y el caldo, se incrementa por la accin
de las fuerzas centrfugas que se generan por las altas velocidades de
rotacin de los equipos que se emplean (Bjurstrom, 1985).
En la seccin 4.2 de este captulo se presentan los fundamentos de
la centrifugacin que se derivan de la Ley de Stokes la cual describe
111
112 CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
los aspectos bsicos del movimiento de un slido en un lquido cuando
existe un gradiente de densidad.
Existen diferentes tipos de centrfugas que se utilizan tanto a nivel
laboratorio como a escala industrial y su aplicacin depende de varios
factores anlogos a los mencionados para la filtracin en la Tabla 3.1.
En la seccin 4.3 se hace una descripcin general de estos equipos. La
seccin 4.4 se centra en los aspectos bsicos del diseo de centrfugas.
4.2 Fundamentos de la Centrifugacin
El estudio de las separaciones slido-lquido por centrifugacin est
basado en la teora de la sedimentacin. Esta permite desarrollar algu-
nas predicciones del comportamiento de los equipos centrfugos, no slo
para poder especificarlos y dimensionarlos, sino que tambin ofrece un
apoyo adecuado para su correcta operacin.
La teora de la sedimentacin est basada en la Ley de Stokes que
establece los aspectos bsicos del movimiento de un slido en un lquido
cuando existe un gradiente de densidad. Este movimiento puede ser
causado por la fuerza gravitacional o por una fuerza centrfuga. En base
a lo anterior, esta seccin se centra en cuatro aspectos fundamentales:
La Ley de Stokes.
La sedimentacin por accin de la gravedad.
La sedimentacin por accin de una fuerza centrfuga.
El factor G
4.2.1 Ley de Stokes
La velocidad de sedimentacin de una partcula esfrica en un medio
continuo para Reynolds menores a 1 (regin de resistencia viscosa), est
descrita por la Ley de Stokes (Figura 4.1).
Se puede suponer que para las suspensiones diluidas caractersticas
de los caldos biolgicos esta ley es aplicable.
La Ley de Stokes establece que cuando se aplica una fuerza a una
partcula en un medio continuo sta se acelera (F = ma), hasta que
4.2. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIN 11
1O
9
ir 2
I
10
'
e
a
1
2
l' :
1
2
i "
i *
i
9
2
O.1
1(
\
\
S
\
s
\
L
\
S
k
1
\
^
Asntota * =-|-
s
^ \*
-^
S

V
>
X
s
v.
->
^1
i
:= _ >
5:
^^
1 =0.4
m^m
A
3
32 6^22 9
l ( J
2 9
t
2 9 ^2 9^22 9 ^2 3
|Q
4 2 5 ^
Nmero d Reynolds Re = Ou,, /><l
Figura 4.1: Factor de friccin para esferas. Fuente: Bird et a/, 1964.
Reproducida con el permiso de Reverte S.A. Copyright 1964. Todos los derechos reservados.
alcanza una velocidad a la cual la resistencia a su movimiento iguala a
la fuerza aplicada.
En una sedimentacin libre la fuerza que acta sobre la partcula es
la de la gravedad, y en una sedimentacin centrfuga la fuerza es la del
campo centrfugo.
Las fuerzas que se oponen al movimiento de las partculas pueden
agruparse en la fuerza de empuje descrita por el principio de Arqumi-
des, y la fuerza de arrastre (resistencia de forma y de friccin) descrita
por la Ley de Stokes. De acuerdo a lo anterior, el balance de fuerzas
para una partcula en equilibrio en un medio continuo se expresa de la
siguiente manera:
Fuerza de aceleracin = Fuerza de flotacin -f Fuerza de arrastre
Para el caso de partculas esfricas el balance anterior puede expre-
sarse como:
, .
(4.1)
donde:
d
p
: Dimetro de la partcula. [L].
p
p
: Densidad de la partcula. [M/L
3
].
a: Aceleracin. [L/t
2
].
/> ,: Densidad del fluido. [M/L
3
].
\\ Viscosidad del fluido. [M/L t].
V Q O' . Velocidad terminal de la esfera. [L/t].
Es importante hacer notar que si la partcula parte del reposo en
el proceso de sedimentacin, conforme la velocidad de la partcula se
incrementa la fuerza de arrastre se incrementa. Al alcanzar el equilibrio
de fuerzas la partcula se mueve a la velocidad constante V Q Q (velocidad
terminal).
La ecuacin (4.1) puede ser modificada para presentarse como una
expresin de la Ley de Stokes, de la siguiente manera:
(p
p
- PL) (4.2)
O
La velocidad de sedimentacin de una partcula de acuerdo a la
ecuacin (4.2) es la siguiente:
" =
donde: A/> = p
p
p
L
Se puede expresar la velocidad de sedimentacin de la partcula en
dos casos lmites de inters:
- Sedimentacin por accin de la gravedad.
- Sedimentacin por accin de una fuerza centrfuga.
4.2.2 Sedimentacin por Accin de la Gravedad
En varios procesos de separacin slido-lquido la fuerza impulsora de la
sedimentacin es slo la de la gravedad. La velocidad de sedimentacin
por gravedad de una sustancia, proporciona informacin bsica nece-
saria para el diseo de cualquiera de los procesos de sedimentacin.
De acuerdo a la Ley de Stokes si la aceleracin de la sedimentacin
es la de la gravedad, la velocidad de sedimentacin que se obtiene por
medio de la ecuacin (4.3) es:
(
(A A\
( 4
-
4 )
donde:
a = g: Aceleracin de la gravedad. [L/t
2
].
v
g
: Velocidad terminal en un campo gravitacional. [L/t].
4.2.3 Sedimentacin Centrfuga
En las separaciones centrfugas slido-lquido la velocidad de sedimen-
tacin es mayor que la sedimentacin libre o gravitacional, debido a que
los equipos al girar producen una mayor aceleracin de las partculas
(Brunner y Hemfort, 1988). Bajo estas condiciones la velocidad de
sedimentacin derivada de la ecuacin (4.3) es:
2
r
donde:
a =w
2
r: Aceleracin centrfuga. [L/t
2
].
u> : Velocidad de rotacin en radianes, ["
1
].
r: Distancia radial del eje de rotacin a la partcula. [L].
Varias aplicaciones importantes pueden obtenerse de los principios
inherentes a las ecuaciones (4.4) y (4.5), a continuacin se presentan
algunas de ellas:
El dimetro aparente de las bacterias es del orden de diez veces menor
que el de las levaduras, por lo que su velocidad de sedimentacin
es cien veces menor, ya que sta es proporcional al cuadrado del
dimetro de la partcula.
Las clulas contienen ms del 70 % de agua por lo que su densidad es
muy semejante a la de los caldos, por lo tanto el parmetro A/9
puede ser muy bajo.
Algunos caldos biolgicos son muy viscosos propiedad que dificulta la
sedimentacin.
La velocidad de sedimentacin puede ser incrementada en un equipo
centrfugo aumentando la velocidad de rotacin o la distancia de
sedimentacin (dimetro de la centrfuga).
Para obtener una expresin para flujo no laminar la ecuacin (4.2)
puede ser expresada como:
24
= AKf
o
donde:
A: rea caracterstica. [L
2
].
K: Energa por unidad de volumen. [M/Lt
2
].
f : Factor de friccin. [Adimensional.]
En la Figura 4.1 tambin se presentan correlaciones de factores de
friccin para casos diferentes a la Ley de Stokes.
Ejemplo 4.1.- Separacin centrfuga diferencial.
El principio de separacin por centrifugacin diferencial se basa en
las diferentes velocidades de sedimentacin de las partculas.En el caso
de hornogeneizados biolgicos las diferentes partculas celulares suelen
ser separadas por centrifugacin diferencial.
Estimar el tiempo de sedimentacin relativo de una partcula celular
de dimetro 5 /zm (ncleo) con respecto al de una de dimetro de 1
fim (mitocondria), suponiendo que ambas tienen la misma densidad y
estn sujetas al mismo campo centrfugo
1
en una centrfuga de tubos
(Figura 4.2) los cuales giran perpendicularmente al eje .
Solucin:
De acuerdo a la ecuacin (4.5) y a la geometra del sistema, la
velocidad de sedimentacin est dada por:
dr
v,,, = =
dt 18/i
118
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
s
Fuerza Centrfuga
Figura 4.2: Centrifugacin diferencial. Fuente: Bailey y Ollis, 1986
La expresin anterior puede ser utilizada para el clculo del tiempo
de sedimentacin integrando entre los lmites:
una vez realizada la integracin se obtiene la expresin siguiente:
t = In
Ri
Aplicando la expresin anterior a cada partcula, (al ncleo N y a
la mitoconda M) se pueden obtener las siguientes proporciones:
N
M
N =
25
donde tj y es el tiempo que tarda la partcula N en avanzar de R\ a
R< . Anlogamente, M es el tiempo que tarda la partcula M en avanzar
de R\ a /2
2
-
Ejemplo 4.2.-Tiempo de sedimentacin.
La centrfuga del ejemplo anterior va a ser utilizada para separar
levaduras con dimetro de Stokes de 10 //m y 1.05 g/cm
3
de densidad.
Las propiedades del caldo se pueden suponer iguales a las del agua.
La distancia del eje de giro a la superficie del lquido en los tubos
es RI = 3 cm y la longitud del tubo es de 10 cm . La centrfuga gira a
400 rpm .
Estimar el tiempo para lograr una sedimentacin completa de las
levaduras de la suspensin.
Solucin:
Se debe estimar el tiempo que tardan en sedimentar las levaduras
que estn ms apartadas del fondo del tubo, es decir en la superficie
del lquido del tubo.
Aplicando la expresin desarrollada para el tiempo de sedimentacin
en el ejemplo anterior se tiene:
_
~
18
> < 0-01 lr. > < h f
(10 x 10-
4
)
2
cm' x (1.05 - 1) ^3 x
= 2471 s
4.2.4 Factor G
En la caracterizacin y escalamiento de centrfugas frecuentemente se
emplea el factor G, que es una medida relativa de la velocidad de sedi-
mentacin de una partcula en un campo centrfugo con respecto a su
velocidad de sedimentacin en el campo gravitacional. De acuerdo a lo
anterior mediante las ecuaciones (4.4) y (4.5) se obtiene:
( 4 .6)
G puede ser referida a un radio caracterstico el cual generalmente
es el radio exterior del campo centrfugo. Esto permite desarrollar
expresiones prcticas para estimar la G como la siguiente:
G = 5.6 x W~
7
N
2
D
donde N est en rpm, el dimetro del tazn de la centrfuga (o punto
de inters) D en mm y G es adimensional.
4.3 Equipo de Centrifugacin
La filtracin y la sedimentacin centrfuga constituyen los principios
bsicos de los principales equipos de centrifugacin que se emplean
para separar lquidos, o lquidos de slidos (Svarousky, 1979).
La principal clasificacin de los equipos de centrifugacin se basa
en el diseo de su tazn o tina, y en la forma como se descargan de los
slidos sedimentados (Figura 4.3).
En esta seccin se presentan los principales equipos de centrifu-
gacin existentes de acuerdo a su clasificacin, en dos grupos:
Equipos de Centrifugacin-Filtracin.
Equipos de Sedimentacin Centfuga: Centrfugas tubulares, de
cmara mltiple, de tazn slido, decantadoras y de discos.
4.3.1 Equipos de Filtracin-Centrfuga
Los equipos de filtracin centrfuga constan de una tina o canasta per-
forada la cual est recubierta con un medio filtrante (una tela o mem-
brana). La suspensin de slidos es alimentada a la tina que al girar a
altas velocidades provoca el depsito de slidos sobre el medio filtrante
y la salida de lquido claro. Estos equipos funcionan como un filtro, slo
que la fuerza impulsora del filtrado es la centrfuga y no una diferencia
de presin (Figura 4.4).
4.3. EQ UIPO DE CENTRIFUGACIN 121
Centrfugas <
Sedimentadoras
Tubular
Cmara mltiple
Tazn slido
Decantadoras
Discos
Filtrantes
Figura 4.3: Clasificacin de centrfugas.
4.3.2 Equipos de Sedimentacin Centrfuga
En los equipos de sedimentacin centrfuga tambin llamados de tazn
slido o canasta no-perforada (para distinguirlos de los de canasta per-
forada), la suspensin se alimenta a un tazn que se hace girar provo-
cando que los slidos se colecten sobre una pared y el sobrenante se
recupere por rebosamiento o por accin de un colector de lquido.
En relacin a la forma de descargar los slidos las centrfugas se-
dimentadoras pueden operar en forma intermitente, semintermitente o
continua. i
Las centrfugas sedimentadoras se pueden utilizar en operaciones de
separacin slido-lquido tanto para remocin de biomasa (clarificacin)
como para recuperar slidos durante la cosecha celular.
En las operaciones de clarificacin el caldo a procesar generalmente
contiene una baja cantidad de slidos, del orden del 1 %, y el objetivo
es producir un lquido claro de tal manera que en las operaciones de
separacin posteriores la interferencia por slidos sea mnima. En las
operaciones de recuperacin de slidos las corrientes de salida pueden
Alimentacin
-# nitrado
Figura 4.4: Centrfuga de canasta perforada. Fuente: Jacobs y Penney,
1987.
Reproducida con el permiso de Jolm Wiloy and Suns. Copyright 1987. Todos los derechos
reservados.
Sobrenadante
Alimentacin
Figura 4.5: Centrfuga tubular.
contener hasta un 40 % de slidos en volumen.
A continuacin se efecta una breve descripcin de los principales
tipos de centrfugas sedimentadoras utilizadas en las bioseparaciones.
Centrfuga Tubular
Las Centrfugas Tubulares (CT) consisten bsicamente de un tubo ver-
tical esbelto que gira a altas velocidades por la accin de un motor
elctrico, o una turbina de aire o vapor (Figura 4.5).
Este tipo de centrfuga es uno de los mas eficientes y sencillos, capaz
de separar partculas hasta de 0.1 //m. Las CT pueden contar con un
sistema de enfriamiento por lo que son empleadas en el manejo de caldos
con enzimas o protenas.
Como se observa en la Figura 4.5, durante la operacin de la CT la
suspensin es alimentada por la parte inferior y los slidos sedimentan
en la pared del tubo. El lquido claro se colecta por rebosamiento en
la parte superior. Conforme se forma la torta el rea de flujo se reduce
y el tiempo de residencia del lquido disminuye. Esto se traduce en
un aumento gradual del contenido de slidos en el sobrenadante que
puede ser determinado por mediciones de turbidez. La torta tiene que
ser descargada manualmente, por lo que su operacin es intermitente.
Un modelo tpico de laboratorio consta de un tubo de 4.5 cm de
dimetro por 25 cm de longitud, el cual puede girar a una velocidad
de hasta 50,000 rpm, desarrollando campos hasta de 62,000 G, con una
capacidad de hasta 100 1/h.
Los modelos industriales tpicos cuentan con un tubo de 11.5 cm de
dimetro por 76 cm de longitud, el cual puede girar hasta con 15,000
rpm desarrollando campos de hasta de 12,000 G, con capacidad entre
500 y 3,500 1/h. La capacidad de slidos es de 2 a 4 Kg por lote.
Este tipo de centrfugas presentan algunos modelos completamente
sellados para minimizar problemas de formacin de espuma y aerosoles,
lo cual puede ocasionar fugas del sistema y debe ser evitado cuando se
trabaja con sustancias txicas o clulas recombinantes.
Centrfugas de Cmara Mltiple
Las centrfugas de cmara mltiple (Figura 4.6) fueron creadas para
incrementar la capacidad de manejo de slidos de las centrfugas tubu-
lares. Estas centrfugas consisten de una serie de tazones concntricos
con deflectores que provocan un flujo en serie de la suspensin. Su ope-
racin permite la clasificacin de las partculas conforme pasan de una
cmara a otra. El lquido claro se obtiene por rebosamiento en la ltima
cmara. Este arreglo genera un mayor tiempo de residencia del lquido,
en relacin al de la centrfuga tubular, as como mayor capacidad de
manejo de slidos.
El dimetro de los equipos de cmara mltiple vara de 335 a 615
mm, con velocidades de rotacin entre 5,000 y 8,400 rpm, produciendo
campos entre 5,000 y 9,000 G, respectivamente. Los tipos ms comunes
constan de 2 a 6 cmaras. La capacidad de manejo de slidos vara entre
2.5 y 60 litros dependiendo del material y el nmero de cmaras. La
descarga de slidos y mantenimiento de estos equipos es ms difcil
que el de las centrfugas tubulares, ya que la centrfuga tiene que ser
desmantelada para sacar los slidos. Este tipo de equipo no permite el
lavado de la torta.
Alimentacin
Sobrenadante
Figura 4.6: Centrfuga de cmara mltiple. Fuente: Axelsson, 1985.
Reproducida con el permiso de Ekevier Science Inc. Copyright 1985. Todos los derechos reser-
vados.
126
CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
Alimentacin Rasador
Torta
Sobrenadante
Figura 4.7: Centrfuga de tazn slido.
Centrfugas de Tazn Slido
Las centrfugas de tazn slido (Figura 4.7) o centrfugas intermitentes
son muy similares a las centrfugas tubulares pero menos esbeltas; su
relacin de longitud a dimetro es de alrededor de 0.6 mientras que el
de las tubulares es de 4-8.
Las centrfugas de tazn slido normalmente son operadas con su
eje en posicin vertical. La alimentacin de la suspensin se efecta en
el fondo de el tazn, el cual al girar permite que los slidos se depositen
sobre la superficie de la pared del tazn y el sobrenadante se obtenga
por rebosamiento en la parte superior en forma continua. En algunos
modelos el ciclo se controla por medio de un detector del espesor de la
torta. El lquido residual sobre la torta puede ser removido utilizando
un tubo rasador mvil.
La forma de descarga de los slidos depende de su naturaleza. Los
slidos muy fluidos pueden descargarse sin parar la centrfuga y los
slidos muy compactos pueden descargarse) utilizando una cuchilla in-
terior de la centrfuga que permite raspar la pared del tazn para des-
Sobrenadante
j Alimentacin
Figura 4.8: Centrfugas de tazn triple. Fuente: Svarousky, 1979.
prender la torta. Ambos tipos de descarga se realizan a travs de la
parte inferior de la centrfuga. Un tipo especial de centrfuga intermi-
tentes es la de tazn triple (Figura 4.8).
Las centrfugas intermitentes en su versin de laboratorio presentan
tazones de 15 cm de dimetro y las de planta piloto entre 23-53 cm,
con capacidades volumtricas de 2.7 a 27 litros. Las industriales tienen
tazones entre 95-125 cm con capacidades volumtricas de 100 a 300
litros.
Centrfugas Decantadoras o de Tornillo
Las centrfugas decantadoras (Figura 4.9) 'se caracterizan por un tazn
horizontal con una seccin cilindrica y una seccin cnica, con una
relacin de longitud a dimetro entre 1.5-3.5. El tazn contiene un
tornillo transportador que gira en la misma direccin, pero a una ve-
locidad ligeramente superior o inferior que el tazn (entre 5- 100 rpm
de diferencia). Las velocidades de rotacin son de 1,600 a 6,000 rpm por
lo que los campos centrfugos son menores que los de los otros equipos.
En las centrfugas decantadoras la suspensin es introducida a travs
de perforaciones por un tubo axial concntrico a la flecha del tornillo, al
Alimentacin
Sobrenadante Slidos
Figura 4.9: Centrfuga decantadora. Fuente: Axelsson, 1985.
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyrigllt 1985. Todos los derechos reser-
vados.
final de la seccin cnica o de compresin de slidos. Los slidos que se
depositan en la pared son transportados y descargados continuamente
por el extremo cnico de la centrfuga, donde escurren antes de salir. El
lquido claro se obtiene por rebosamiento en el extremo opuesto a travs
de orificios de descarga que fijan el nivel del lquido en la centrfuga.
Existen diversos diseos de centrfugas decantadoras. Los dimetros
de los tazones varan de 15 a 140 cm para los modelos piloto e indus-
triales. La descarga de slidos vara de 30 Kg/h hasta 60 Ton/h, con
alimentaciones entre 3.8 y 1890 1/min, respectivamente. La longitud
de la seccin cilindrica y la seccin cnica pueden variar de acuerdo
a las aplicaciones. Entre ms larga sea la seccin cilindrica mayor es
la clarificacin alcanzada. Por otro lado, el aumento de longitud en la
seccin cnica permite la obtencin de tortas con menor contenido de
agua.
Entre mayor sea el nivel de lquido dentro de la centrfuga se ob-
tendr una mejor clarificacin, pero un menor escurrimiento de la torta
en la seccin cnica. La disminucin de la velocidad de rotacin del
tornillo transportador aumenta la capacidad de desage de la torta
Alimentacin
I
Sobrenadante
t
Figura 4.10: Centrfugas de discos, a) Retencin de slidos, b) Tazn
abierto. Fuente: Jacobs y Penney, 1987.
reservados.
pero disminuye la capacidad de manejo de slidos.
La centrfuga de tornillo es una de las ms utilizadas en biosepa-
raciones principalmente para manejo de grandes cantidades de slidos
como es el caso del tratamiento de aguas residuales.
Centrfuga de Discos
La centrfuga de discos consta de un eje vertical sobre el cual se montan
un conjunto de discos en forma de conos truncados, uno sobre otro. El
rotor de la centrfuga provoca el giro tanto de los discos como del tazn
de la centrfuga (Figura 4.10).
Las centrfugas de discos son las ms utilizadas en BSL. Los discos
constan de bordos internos que permiten mantener pequeas separa-
ciones entre ellos, del orden de 0.5 a 2.0 mm. El ngulo que forman
los conos con la vertical vara entre 35 y 50 dependiendo de la apli-
Alimentacin
_ . Descarga de
slidos
Figura 4.10: Continuacin ...
cacin particular. Entre la pila de discos y el tazn existe un espacio
que permite la acumulacin de los slidos. o,
Durante la operacin de la centrfuga de discos la suspensin es
alimentada continuamente en el fondo del tazn a travs de la parte
central de la flecha, y fluye hacia arriba entre las placas hacia la salida
en la parte central superior del equipo. Debido a la fuerza centrfuga los
slidos se depositan en la cara interna de los discos, resbalando hacia
la cmara colectora debido al ngulo de los discos.
Existen diferentes centrfugas de discos en relacin a la forma de
descarga de slidos, las principales son las siguientes:
Las de operacin intermitente con respecto a la descarga de slidos,
tambin llamadas de retencin de slidos.
Las de tazn abierto de descarga intermitente de slidos.
Las de vlvula tipo boquilla de descarga intermitente de slidos.
Las de boquilla para la descarga continua de slidos.
En las centrfugas de retencin de slidos (Figura 4.10a) stos se
acumulan hasta que la cmara se llena. La centrfuga tiene que ser
detenida y descargada manualmente o con auxilio de un forro que se
coloca previamente sobre la pared del tazn. Debido a la forma de
su descarga de slidos, este tipo de centrfuga es recomendable slo
para suspensiones diluidas conteniendo alrededor de 1% en volumen de
slidos.
El dimetro de los tazones de las centrfugas de retencin de slidos
vara de 24 a 44 cm y las fuerzas centrfugas de 5,000 a 8,000 G. La
capacidad de slidos vara de 5-20 litros y los flujos de 0.4 a 1,500 1/min.
Las centrfugas de disco de tazn abierto (Figura 4.10b) constan de
dos piezas cnicas unidas horizontalmente por sus caras ms grandes.
La descarga de slidos se realiza por medio de un sistema hidrulico
que permite abrir y cerrar los orificios de descarga entre las piezas.
La duracin y frecuencia de la apertura de la descarga depende de la
cantidad y fluidez de los slidos. Los valores tpicos son de 0.13 a
0.3 segundos de apertura por minuto de operacin. Esta frecuencia
es controlada con relojes acoplados a medidores de lodo o medidores
de turbidez en el lquido de salida. Este tipo de centrfugas permite
manejar caldos con contenido de slidos hasta del 10 % . Las fuerzas
centrfugas varan de 5,000 a 7,000 G y los gastos de 3.8 a 1,500 1/min.
En las centrfugas con vlvulas tipo boquilla la descarga de slidos
se controla con este tipo de vlvulas situadas en la periferia del tazn.
Sus ciclos varan de 0.07 a 0.10 segundos de apertura por minuto de
operacin. Tal precisin no puede ser lograda por las centrfugas de
tazn abierto. La ventaja de este tipo de centrfugas, debido a que
generan campos de hasta 15,000 G, es que son especialmente tiles para
caldos biolgicos donde el diferencial de densidad suele ser bajo y la
viscosidad alta. Las suspensiones que pueclen ser manejadas, alcanzan
hasta un 10 % en volumen de slidos.
En las centrfugas de boquillas con descarga continua stas se sitan
en la periferia del tazn. El nmero y el tamao de las boquillas se
ajusta de tal manera que exista un flujo continuo de slidos, sin que
stos se acumulen. El espaciamiento de las boquillas debe prevenir
zonas muertas de depsitos de slidos. La principal ventaja de este tipo
de unidades es que pueden manejar suspensiones ms concentradas.
Las centrfugas de discos en general poseen una gran capacidad de
sedimentacin debido principalmente a su gran rea, a sus cortas dis-
tancias de sedimentacin y a los altos campos centrfugos que generan.
Por otro lado, requieren de medidas de higiene y seguridad especiales
como:
Manejo mecnico seguro.
Proteccin contra ruido y daos corporales.
Proteccin contra incendios, explosiones o diseminacin de sustancias
txicas o contaminantes.
4.4 Diseo de Equipo de Centrifugacin
El diseo de los equipos de centrifugacin est basado en la teora de
sedimentacin, lo cual puede visualizarse .ms fcilmente en el caso de
las centrfugas tubulares debido a la sencillez de su geometra. Este
anlisis puede ser extendido al caso de las centrfugas de discos. Por
otro lado, los equipos que operan por filtracin centrfuga presentan
variantes de diseo respecto a los dos anteriores. En base a lo anterior
esta seccin se centra en cuatro aspectos :
Diseo de Centrfugas Tubulares.
Diseo de Centrfugas de Discos.
Escalamiento de Centrfugas.
Diseo de Equipo de Filtracin Centrfuga.
4.4.1 Diseo de Centrfugas Tubulares
En el diseo de los equipos de centrifugacin se debe considerar los
siguientes hechos:
De acuerdo con la teora de sedimentacin desarrollada en la seccin
4.2, las propiedades del caldo (tamao de partcula, diferencia de
densidad entre el slido y el lquido, y la viscosidad del lquido).
DISEO DE EQ UIPO DE CENTRIFUGACIN 133
Torta
Trayectoria de^x
las partculas
Ro
z
u,
m OOU
**
Sobrenadante
I nterfase
liquida
i
t
Alimentacin
Figura 4.11: Esquema de una centrfuga tubular.
la velocidad de rotacin y el radio del giro de la centrfuga, deter-
minan la velocidad de sedimentacin que se puede lograr en un
equipo de sedimentacin centrfugo.
La velocidad de sedimentacin cojuntamente con la distancia de sedi-
mentacin, determinan el tiempo de sedimentacin.
El gasto determina el tiempo de residencia de las partculas en un
equipo dado.
El gasto manejable en una sedimentacin centrfuga depende de
la geometra especfica del equipo, de su velocidad de giro y de las
propiedades del caldo. Para producir un lquido libre de slidos, el
tiempo de sedimentacin en el equipo debe ser igual o menor al tiempo
de residencia de las partculas impuesto por el flujo o gasto volumtrico.
Esto constituye una condicin de diseo para este tipo de centrfugas.
La Figura 4.11 muestra una centrfuga tubular que al girar forma
una capa anular de lquido sobre la pared del tazn. La posicin de las
partculas en esta capa vara tanto por el flujo convectivo axial como
por la sedimentacin radial.
Se puede desarrollar un anlisis sencillo e ilustrativo de la centrfuga
tubular mediante las siguientes suposiciones:
- La alimentacin es una solucin diluida.
- Las partculas se distribuyen uniformemente en la capa anular.
- Las partculas sedimentan de acuerdo a la Ley de Stokes.
- La distancia entre la superficie del lquido y la pared de la centrfuga
es constante.
- No existe retroflujo (flujo tapn).
En el anlisis primero se desarrolla una expresin para el tiempo
de residencia en la centrfuga, posteriormente una expresin para el
tiempo de sedimentacin y finalmente se combinan ambas expresiones
para relacionar el gasto volumtrico manejable con las propiedades del
caldo y la geomertra de la centrfuga.
Tiempo de Residencia
La velocidad del fluido en el sentido axial est dada por:
dz
donde:
Q : Gasto volumtrico. [L
3
/i\.
A: rea de flujo. [L
2
].
v
z
: Velocidad de la partcula en el sentido axial. [L/t].
El rea de flujo es igual a la seccin transversal de la capa anular
de fluido y est dada por:
= 7r(R
2
0
- R\) (4.8)
donde:
4.4. DISEO DE EQ UIPO DE CENTRIFUGACIN 135
Ri' . Distancia radial del eje de giro a la superficie del lquido. [Lj.
R
0
: Distancia del eje de giro a la pared del tazn. [L].
Con los lmites de integracin apropiados se puede obtener una
ecuacin para el tiempo de residencia de las partculas dentro de la
centfuga empleando las ecuaciones (4.7) y (4.8), esto es:
*
(4
'
9)
donde:
L: Longitud de la centrfuga. [L].
t
r
: Tiempo de residencia de la partcula, [t].
La integracin de la ecuacin anterior permite obtener la expresin
para el tiempo de residencia de la partcula siguiente:
(4.10)
Tiempo de Sedimentacin y Gasto Volumtrico
Para desarrollar la expresin del tiempo de sedimentacin de una par-
tcula, que a su vez permita desarrollar una expresin para el gasto
manejable en una centrfuga tubular, se consideran dos casos de inters:
- Tiempo para el 100 % de sedimentacin.
- Tiempo para el 50 % sedimentacin.
Tiempo para el 100% de Sedimentacin y Gasto Volum-
trico .- El tiempo de sedimentacin t
s
de una partcula localizada en
la superficie de la capa anular del fluido en R\ (que es la ms alejada
de la pared, o ms difcil de sedimentar), puede ser obtenido a partir
de la Ley de Stokes considerando el movimiento de la partcula en el
sentido radial,
dr
v
r
= = - (4.11)
dt
V
'
en este caso inicialmente la partcula se localiza en RI y en el mo-
mento t
a
de alcanzar la pared en R
0 1
de tal manera que:
' dr d Apu> f
ts
= * / dt (4.12)
r 18/ J
0
V
'
y la expresin para el tiempo de sedimentacin de la partcula en
este caso es:
Es ms conveniente expresar la ecuacin (4.13) en trminos de v
g
dada por la ecuacin (4.4), para obtener:
La condicin de diseo donde el tiempo de sedimentacin debe ser
menor o igual al tiempo de residencia, puede alcanzarse mediante la
igualacin de las ecuaciones (4.10) y (4.14). Este resultado permite
obtener una expresin para el gasto manejable en una centrfuga tubular
para producir un lquido claro o lograr un 100 % de sedimentacin. Esta
expresin es la siguiente:
Q = [,]
< J
(4.15)
En el resultado anterior es importante hacer notar que el flujo es
funcin de las propiedades del caldo contenidas en v
g
, y de las carac-
tersticas de la centrfuga contenidas en el parntesis cuadrado de la
derecha.
Tiempo para el 50 % de Sedimentacin y Gasto Volum-
trico.- Es una prctica comn en las bioseparaciones slido-lquido,
el que los equipos se especifiquen para la remocin del 50 % de las
partculas de una suspensin de un tamao dado o tamao de corte.
Otra interpretacin del tamao de corte, es la de especificar el tamao
de partcula para el cual todas las partculas mayores sedimentan en
mayor proporcin y todas las menores de ese tamao sedimentan en
menor proporcin.
Si se considera que en la capa anular del lquido de una centrfuga
tubular las partculas del slido se distribuyen uniformemente, stas
se encontrarn en cantidades iguales en subcapas anulares de caldo de
igual rea transversal. El radio R
50
que divide la capa anular en dos
subcapas de igual volumen puede obtenerse de la igualdad siguiente:
*(Rl - R
2
50
)L = 7r(Rl
Q
- R\)L (4.16)
de tal manera que:
( 4 .17)
La ecuacin (4.11) debe ser integrada para este caso con lmites
nuevos para expresarla en la forma siguiente:
* dr c??
0
A/9a;
2
f
t s
= / dt (4-18)
r 18/ JQ
El resultado de la integracin anterior expresado en trminos de v
g
es:
(4.19)
v
' R
50
donde t
s
es el tiempo para lograr un 50 % de sedimentacin.
Combinando las ecuaciones (4.17) y (4.19) se obtiene la expresin
para el tiempo de sedimentacin en trminos de parmetros medibles.
( 4 .20)
La igualacin de las ecuaciones (4.10) y (4.20) permite obtener una
expresin para el flujo para este caso:
- R\
9 ln
(4.21)
donde Q ' es el flujo para sedimentar el 50 % de las partculas de
dimetro c/so en una centrfuga tubular.
La ecuacin (4.21) puede ser expresada de otra forma considerando
la siguiente igualdad:
2
l n
2 '"/*
r
R
0
* )
--
1
ln
~ 2
RO
.V *) .
T 2
para obtener:
7TU>
2
tf
2
_
(4.22)
Definicin de Sigma.- El concepto sigma ha sido muy utilizado
en el campo de la sedimentacin centrfuga desde que ste fue desarro-
llado (Ambler, 1957). Sigma es un rea caracterstica de cada tipo de
centrfuga y se utiliza para efectuar comparaciones y escalamiento de
equipo. En el caso de la centrfuga tubular el valor de sigma puede ser
definido a partir de la ecuacin (4.22) de la siguiente manera:
Q ' =
(4.23)
donde:
E = (4.24)
La ecuacin (4.24) es la expresin bsica del concepto sigma, el cual
es una constante que contiene slo parmetros relacionados a la geome-
tra de la centrfuga y su velocidad angular (es independiente del tipo
de caldo). Por otro laclo v
g
se relaciona slo con las propiedades del
caldo y es independiente del tipo de centrfuga.
En la subseccin (4.4.2) se presenta para las centrfugas de discos un
desarrollo anlogo al efectuado para la centrfuga tubular, obtenindose
tambin una expresin para sigma. La aplicacin de este concepto a
problemas de escalamiento se revisa en la siguiente seccin.
Ejemplo 4.3.-Separacin Centrfuga.
Al separar clulas de E. coli de un caldo diluido en una centrfuga
tubular, se obtiene un lquido claro bajo las siguientes condiciones:
Propiedades del caldo
J*
A,
d
p
0.001 N - s/m
2
50 Kg/m
3
10-
6
m
Carac. Centrfuga
N
R0
Ri
L
20,000 rpm
0.022 m
0.011 m
0.2 m
Se desea utilizar la misma centrfuga para separar restos celulares
de dimetro promedio 0.5 x 10~
6
m. Se estima que la viscosidad del
caldo se incrementa a 0.004 Ns/m
2
al salir del equipo de rompimiento
celular.
Se pide :
a) Calcular el flujo manejado en la separacin de clulas.
b) Calcular la relacin de flujos para claridad completa de sobre-
nadante con respecto al flujo para 50 % de corte, en la separacin de
clulas.
c) Calcular el flujo para separacin completa de los restos celulares.
Solucin:
a) Para el clculo del flujo manejado eri la separacin de clulas se
supone que todas las partculas de la suspensin sedimentan, entonces
se utilizar la ecuacin (4.15), para lo cual es necesario calcular primero
V g-
Sustituyendo datos en la ecuacin (4.4) se tiene:
v
n
=
(10-
6
m)
2
(50) x9. 8^
18 x 0.001
N S m-s
v
g
= 2.7 x 1(T
8
-
s
v
g
= 2.7 x 10-
6

s
Mediante ecuacin (4.15):
2.7 X 10 ~
6
22- X 7T X (
2
*
X
'
0
Y S~
2
X20 C77?
Q =
V 60 /
980 ^
\ 2
- .
2
x
- -T5 -
cm
ln
rr
g = 3.97
< 3 = 14.31 -
a
b) Para el clculo del flujo para un corte del 50 % se utiliza la
ecuacin (4.22), sustituyendo valores se tiene:
_ 2 x 2.7 x 1Q-
6
aa x TT x (
27rx
6
2
0
'
000
)%-
2
x 20 cm
980 3?
(2.2)
2
-(l.l)
2
cm
2
x\
In
2( 2.2)
2
5
Q' = 42.19
l
-
por lo tanto:
Q ' _ 42.19
< 9 ~~ 14.31 {
- = 2.94
Tambin puede ser demostrado utilizando las ecuaciones (4.15) y
(4.22) que:
Q '
2/
"gf
En la expresin anterior es importante hacer notar que cuando la
pelcula de fluido al interior de la centrfuga es muy delgada, R\ tiende
a R
0
entonces:
c) Para facilitar los clculos se puede calcular el cociente de los flujos
de cada tipo de caldo empleando la ecuacin (4.15) y obtener:
Q c &
MC
Donde el subndice R se refiere a los restos celulares y el C a las
clulas enteras de tal manera que:
Q R =
acUR
3.97 2 x (0.5 x 10-
4
)
2
cm
2
x 0.01
Q R =
(1 x 10-
4
)
2
cm
2
x 0.04 -J- v
' cms
3.97 cm
3
Q R = -77
16 5
Q R = 0.89 [
a
La reduccin del tamao de partcula y el aumento de viscosidad
reduce dramticamente la capacidad de la centrfuga.
4.4.2 Centrfuga de Discos
En esta seccin se desarrolla un anlisis para la centrfuga de discos
anlogo al efectuado para la centrfuga tubular. La geometra del sis-
tema es diferente (Figura 4.12), entonces se puede intuir que la ex-
presin para el clculo del flujo en este caso tambin es diferente.
Figura 4.12: Esquema de una centrfuga de discos.
En el anlisis se supone que el flujo global Q se divide equitativa-
mente entre los espacios formados por todos los discos, de tal manera
que el flujo en cada espacio es Q
n
= Q /n, donde n es el numero de
espacios formados entre los discos .
El flujo se presenta tanto en la direccin angular como en direccin
paralela a los discos. En el sentido angular se supone que el lquido gira
a la misma velocidad que los discos.
Primero se desarrolla una expresin para el tiempo de residencia
en la centrfuga, posteriormente una expresin para el tiempo de sedi-
mentacin, y finalmente se combinan ambas expresiones para relacionar
el gasto volumtrico manejable con las propiedades del caldo y la geo-
metra de la centrfuga.
Tiempo de Residencia en una Centrfuga de Discos
En una centrfuga de discos la partcula que se desea sedimentar se
mueve por conveccin y por sedimentacin. El movimiento convectivo
es paralelo a los discos y el movimiento por sedimentacin es en sentido
horizontal.
Si los ejes de referencia se fij an como aparece en la Figura 4.12, el
Figura 4.13: Perfil de velocidades en una centrfuga de discos.
movimiento producido por sedimentacin tiene componentes tanto en
x como en y, de tal manera que la velocidad neta de la partcula en la
direccin x, es la resultante de la velocidad convectiva del fluido (aqu
se supone que la partcula se mueve a la misma velocidad que el fluido)
y la componente en x de la velocidad de sedimentacin que se opone a
este movimiento.
Una condicin necesaria para alcanzar una separacin efectiva, es
que la velocidad convectiva de la partcula sea mucho mayor que el
componente de la velocidad de sedimentacin que acta en sentido o-
puesto. En el siguiente desarrollo se parte de este supuesto cuando se
analiza la velocidad de la partcula en el sentido x.
Expresin para v
x
.- Para obtener una expresin del tiempo de
residencia de una partcula en una centrifuga de discos es necesario
primero desarrollar una expresin para la velocidad de la partcula en
el sentido , v
x
.
En el desarrollo de la expresin para v
x
se supone un arreglo geo-
mtrico sencillo como se muestra en la Figura 4.13.
La velocidad v
x
vara con la distancia x dado que el gasto es constan-
te en toda la seccin de cada pelcula y dado que la seccin transversal
de flujo disminuye conforme x aumenta (se supone que el lquido es
incompresible). La velocidad v
x
tambin vara en el sentido y formando
un perfil de velocidades con v
x
= O en las superficies de los discos.
Si se considera una seccin de pelcula de longitud L, donde la
velocidad v
x
slo depende de y pero no de x; cuando se desprecian los
efectos inerciales, se considera que el sistema se encuentra en el estado
estacionario y el flujo es laminar, la ecuacin de movimiento para este
sistema puede ser escrita de la siguiente forma:
p_
dx dy
2
(4.25)
Esta expresin puede ser integrada dos veces entre los lmites:
a
Para y = - , v
x
= O
a
Para y = , v
x
= O
y obtener la expresin:
APa
2
(4.26)
donde a es el espesor de la pelcula y P la presin.
La ecuacin (4.26) se puede expresar en trminos de Q
n
si se integra
a lo largo del rea de flujo con los lmites apropiados. Considerando
que la rea de flujo puede ser aproximada por un rectngulo de ancho
a y largo 2?rr entonces:
[*** rf APa
2
[ / 2y\ ]
Qn= I
Q
, 1-1
Jo 7^ 8/^L L \
a
J.
dy dz (4.27)
donde Q
n
es el flujo volumtrico entre dos discos de la centrfuga.
La integracin de la ecuacin (4.27) conduce a:
Q n =
7rAP
3
r
6/L
Combinando las ecuaciones (4.26) y (4.28) se tiene que:
4 7T7Y
(4.28)
(4.29)
o bien en trminos del flujo volumtrico total:
( 3Q \
u
*
=
-x
4ri7rra
( 4 .30)
La ecuacin (4.30) describe el perfil de la velocidad de la pelcula as
como su comportamiento en diferentes planos en funcin de la velocidad
promedio.
De la ecuacin (4.30) se puede obtener una expresin para un dife-
rencial de tiempo de residencia de la siguiente forma:
dx
dt
r
= - p - -=- (4.31)
) i _ f^)
2 V ;
/ [
1
V a / J ara
Clculo del Tiempo de Sedimentacin y el Gasto Volumtrico
Para desarrollar la expresin del tiempo de sedimentacin de una par-
tcu la, que a su vez permita desarrollar una expresin para el gasto
manejable en una centrfuga de discos, al igual que en en las centrfugas
tubulares se consideran dos casos de inters:
- Tiempo para el 100 % de sedimentacin
- Tiempo para el 50 % sedimentacin.
trico.- En este caso la partcula ms difcil de capturar se localiza en
la parte inferior derecha de la pelcula eni (x = O , y = ^r), y la parte
mas lejana en la que puede sedimentar es en la parte superior izquierda
de la pelcula en [x =(R
0
Ri)/senO , y = |].
La velocidad de sedimentacin en el sentido radial est dada por la
Ley de Stokes:
dr u
2
r , .
= v
g
(4.32)
dt
s
g
por lo tanto:
dt, = -gL (4.33)
La condicin de diseo que establece que el tiempo de sedimentacin
debe ser menor o igual que el tiempo de residencia puede lograrse igua-
lando las ecuaciones (4.31) y (4.33) para obtener la expresin:
9dr dX
(4.34)
4nirra
I -(**)'
V a /
de acuerdo a la geometra del sistema se puede efectuar el siguiente
cambio de variables:
dy cosOdr
r = R
0
xsenO
con estas nuevas variables la ecuacin (4.34) se transforma en:
2a
/o \
2
(2y \
l
- IT)
Q g
n
- \(R
0
- xsenO)
2
x cosOdx (4.35)
la ecuacin (4.35) puede ser integrada utilizando el cambio de va-
riable u = (R
0
xsenO) y los lmites siguientes:
Para x = O , y
L
R
0
RI a
rara x = , y =
senO 2
obtenindose:
^Rocoto (4.36)
La ecuacin anterior tambin puede ser expresada en funcin del
parmetro E de la siguiente manera:
Q = v
g
X (4.37)
donde E para este caso est definida por la expresin dentro del
parntesis cuadrado de la ecuacin (4.36).
trico.-Para calcular el gasto que puede manejar la centrfuga para un
corte del 50 %, debido a la separacin tan pequea de los discos una
buena aproximacin est dada por:
Q - = 2v
g
Z (4.38)
donde E est dada por la misma expresin que la de la ecuacin
(4.36).(ver ejemplo 4.3 inciso b).
Ejemplo 4.4.-Separacin de E. coli mediante una centrfuga
de discos.
Estimar el gasto volumtrico para producir un lquido claro de E.
coli en una centrfuga de discos (Brunner, 1983) bajo las siguientes
condiciones:
Datos Centrfuga
radio externo
radio interno
nmero de discos
velocidad
ngulo
8.1 cm
3.6 cm
72
8,400 rpm
38
Datos caldo
dimetro celular
densidad celular
densidad del medio
viscosidad
0.8 fim
1.05 g/1
1.02 g/1
1.02 xlO'
3
Solucin:
El gasto de la centrfuga de discos puede ser calculado mediante
la ecuacin (4.36). Para aplicar esta ecuacin es necesario calcula:
primero v
g
. De acuerdo a la ecuacin (4.4),
v
n
=
(0.8 x 10~
4
cm)' (1.05 - 1.02) x 980 ^
18 x 1.02 x x
x
v
9
= 1.02 x 1(T
6

s
en seguida se calcula S de la ecuacin (4.36),
x 72 \ /2?r x8400\
2
3 x 980 2? j V 6 0 )
/ /l /" v I \I iH XN <J-W \
L = ... ._ s'
2
x(S.l
3
-3.6
3
) cm
3
x co 38
E - 7.39 x 10
7
cm
2
El gasto volumtrico que puede manejar la centrfuga es:
Q = 1.02 x 10~
6
x 7.39 x 10
7
cm
2
5
< 3 = 75.35^
S
Q = 271 |
4.4.3 Escalamiento
En el anlisis de la operacin de la sedimentacin centrfuga se han
desarrollado expresiones para el clculo del gasto manejable por una
centrfuga de una geometra particular. Este enfoque es debido a que
los equipos disponibles se construyen en tamaos especficos, de tal
manera que gran parte del problema de separacin centrfuga se reduce
a una seleccin del equipo ms que a un diseo especfico para un
trabajo particular. Por otro lado, las velocidades de sedimentacin que
se predicen con la Ley de Stokes pueden ser adecuadas para el caso de
las centrfugas tubulares, pero pueden resultar hasta dos veces mayores
de las realmente obtenidas en las centrfugas de discos. En la seleccin
de equipo de centrifugacin una combinacin adecuada de los principios
tericos con pruebas experimentales directamente con el material, es lo
ms recomendable.
Existen dos enfoques para el escalamiento de datos, uno basado en el
tiempo equivalente de centrifugacin y otro en el rea de centrifugacin.
DISEO DE EQ UIPO DE CENTRIFUGACIN
Tabla 4.1: Valores de Gt.
149
Partcula
Ncleo
Mitocondria
Ribosomas
G
600
15,000
100,000
t (min)
5
5
60
Gt (min)
3,000
75,000
6,000,000
Tiempo Equivalente
Este enfoque consiste en determinar el producto Gt, donde G est dado
por la ecuacin (4.6) y t es el tiempo necesario para producir una cen-
trifugacin aceptable, de tal manera que la igualdad:
G& = G
2
t
2
(4.39)
puede ser utilizada como un criterio de escalamiento. Los subndices
1 y 2 se refieren a las escalas estudiadas.
Las pruebas de sedimentacin sobre las muestras se pueden realizar
en el laboratorio en una centrfuga de tubos o en una centrfuga de
tazn. Las muestras se hacen girar a velocidades especficas a diferentes
tiempos hasta producir un sobrenadante claro. El valor de Gt obtenido
se usa para la seleccin de equipos a escala industrial.
La consistencia de los slidos puede ser estudiada preliminarmente
utilizando una varilla de laboratorio sobre la torta despus de decantar
el sobrenadante. En la Tabla 4.1 se presentan valores de Gt carac-
tersticos de algunas partculas biolgicas.
Factor Sigrna
La expresin para calcular el parmetro Sigma de cada tipo de centrfu-
ga es caracterstica de cada geometra particular (Axelsson, 1985). Esta
rea caracterstica o factor S ha sido empleada para escalar equipos
con similitud geomtrica. En Ja Tabla 4.2 se presentan los rangos de
los factores E para diferentes tipos de centrfugas.
El escalamiento utilizando el factor sigma supone que para una
Tabla 4.2: Factores Sigma.
Centrfuga
Intermitente
Decantadora
Tubular
Discos
E , m
2
20 - 200
150 - 2,500
2,000 - 3,000
400 - 120,000
Fuente: Moir, 1988
misma suspensin la velocidad de sedimentacin de las partculas es
independiente de la escala. Este supuesto es ms utilizado cuando se
escalan centrfugas del mismo tipo, de tal manera que:
y utilizando la ecuacin (4.23) se obtiene:
O
( 4 .4 0)
Se debe recordar en este punto que la seleccin del equipo de cen-
trifugacin debe combinar la teora, la experimentacin directa con
el material (incluyendo pruebas a nivel piloto) y la experencia (Moir,
1988).
En la Tabla 4.3 se presenta una gua general para la seleccin de
centrfugas sedimentadoras.
El tamao de partcula a que se refiere la Tabla 4.3 est basado en
la sedimentacin en agua de esferas de cuarzo de densidad relativa 2.65.
Para calcular el dimetro equivalente de las partculas de cuarzo, al de
las partculas de inters en una suspensin dada, se establece que las
velocidades de sedimentacin son iguales en ambos medios, obteniendo
la siguiente expresin:
PP ~ PL
pe - PA
1/2
( 4 .4 1)
Tabla 4.3: Gua para la seleccin de centrfugas.
Caractersticas manejables de la Alimentacin
Tipo de
Centrfuga
Tubular
Cmara Mltiple
Discos y boquillas
Discos Tazn abierto
Discos y boquillas
Discos Intermitente
Tazn Slido
Decantadora
Tamao de
Partcula
mieras
0.1 - 200
0.5 - 5,000
0.5 - 200
0.5 - 200
0.5 - 200
0.25 - 200
2- 5,000
2 - 5,000
Contenido
Slidos
%
< 0.5
1 - 5
2- 20
< 10
< 10
< 1
1-5
2 - 60
Prueba de
Sedimentacin
a 1,000 G (min)
2- 20
2- 20
1 - 10
1 - 10
1 - 10
1 - 10
0- 3
0- 3
Prueba de
Consistencia
de los slidos
torta firme
torta firme
lodo
lodo
lodo
torta firme
torta firme
lodo - torta
Caractrsticas de Procesamiento
Tipo de
Centrfuga
Tubular
Cmara Mltiple
Discos y boquillas
Discos Tazn abierto
Discos y boquillas
Discos Intermitente
Tazn Slido
Decantadora
Mtodo de
descarga de
slidos
Intermitente
Intermitente
Continuo
Intermitente
Intermitente
Intermitente
Intermitente
Continuo
Capacidad
lavado de
torta
Ninguna
Ninguna
Moderada
Ninguna
Ninguna
Ninguna
Ninguna
Moderada
Flujo de la
Alimntacin
1/min
8- 120
1.5 - 335
38 - 3,780
3.8- 1,500
3.8 - 570
0.38- 1,500
1.5- 250
3.8- 1,890
Fuerza g
Mxima
12,000- 16,000
5,000 - 9,000
5,000 - 8,500
5,000 - 7,000
14,000- 15,000
5,000 - 8,000
500 - 800
2,000 - 3,200
Adaptada de: Moir, 1988
Reproducida con elpermisode Me Graw Hill Inc. Copyright 1988. Todos los derechos reservados.
donde:
pe' - Densidad del cuarzo (2.65). [M/L
3
].
p
p
: Densidad de la partcula en suspensin. [M/L
3
].
PL: Densidad del lquido . [M/L
3
].
p : Densidad del agua. [M/L
3
].
H A' - Viscosidad del agua. [M/L t].
H L' - Viscosidad del lquido. [M/L t].
d
p
: Dimetro partcula. [L].
d
c
: Dimetro equivalente de una esfera de cuarzo. [L].
Ejemplo 4.5.- rea de centrifugacin.
Una centrfuga de discos de laboratorio produce un sobrenadan-
te claro con una alimentacin de 2.1 1/h de una solucin diluida de
clulas. El rea caracterstica de la centrfuga es de 233 ra
2
.
Estimar el rea necesaria para manejar un flujo de 1,000 1/h en una
centrfuga similar.
Solucin:
Se puede utilizar la ecuacin (4.40) para el caso de manejo de un
flujo claro a la salida de la centrfuga:
1 nivel laboratorio, 2 nivel industrial,
sustituyendo valores,
< 2
2
i (1000 ///i)(233 m
2
)
Q i (2.1 ///O
= 111,000 m
2
Figura 4.14: Filtracin centrfuga.
4.4.4 Filtracin Centrfuga
La filtracin centrfuga combina los dos principios de separacin me-
cnica: filtracin y centrifugacin. La aplicacin de este mtodo ha
conducido al desarrollo de diferentes tipos de equipos de diferentes geo-
metras y formas de descarga de la torta. En esta seccin el tratamiento
se limita al de geometra cilindrica.
Considrese una tina o canasta de una operacin de filtracin cen-
trfuga (Figura 4.14) donde se alimenta la suspensin a tratar, y por
accin de la fuerza centrfuga se forma una torta homognea sobre la
pared de la tina.
La canasta perforada tiene un radio R
0
y est recubierta de un
medio filtrante de resistencia despreciable. En un instante t durante la
operacin, la superficie del lquido est localizada en RI y la interfase
lquido- slido se localiza en RT-
Generalmente el inters de diseo es contar con expresiones para el
clculo del gasto volumtrico manejable por la centrfuga y del tiempo
de filtrado para realizar una determinada operacin en un equipo dado.
Gasto Volumtrico Q
El gasto volumtrico a travs de la torta en una operacin de filtracin
centrfuga, est relacionado con la ecuacin de D'arcy para medios
porosos. Debido a que la torta no es plana el rea de filtrado vara
con r, entonces la ecuacin de D'arcy debe expresarse en forma dife-
rencial como:
-dP
( 4 .4 2)
ar
donde v es la velocidad superficial de filtrado.
En el instante t el flujo volumtrico Q en la direccin radial es cons-
tante a lo largo del espesor de la torta, y se relaciona con la velocidad
de filtracin (variable a lo largo del espesor de la torta) mediante la
siguiente expresin:
v = -Q (4.43)
v
'
donde t es la altura de la canasta de la centrfuga.
( 4
-
4 4 )
la ecuacin (4.44) puede ser integrada entre R
0
y RT para encontrar
la cada de presin en la torta:
El gradiente de presin generado por el movimiento circular del
lquido puede ser calculado utilizando la expresin:
( 4 .4 6)
donde pi es la densidad del lquido.
Integrando la ecuacin (4.46) entre R
0
y R\ se puede encontrar una
expresin para el gradiente de presin generado por la fuerza centrfuga.
Esta expresin es:
( 4 .4 7)
La ecuacin (4.47) puede ser sustituida en la ecuacin (4.45) para
obtener una expresin del gasto volumtrico en cualquier instante ,
obtenindose:
(4.48)
La ecuacin anterior concuerda con el hecho que durante una o-
peracin de filtracin centrfuga, R? disminuye conforme transcurre el
tiempo de filtracin (al aumentar el espesor de la torta), disminuyendo
tambin Q .
Tiempo de Filtracin-Centrfuga
La ecuacin (4.48) puede ser utilizada para desarrollar una expresin
para calcular el tiempo necesario para procesar un volumen de caldo
dado (o una torta de un espesor fsicamente alcanzable). Es necesario
efectuar primero algunos cambios de variables.
El gasto volumtrico Q puede ser relacionado con el volumen de
filtrado por la ecuacin:
(4.49)
dt
Por medio de un balance de masa en la pelcula cilindrica que forma
la torta se obtiene que: ,
- T/ _ _ I" /02 D2 \ f\ A CQ\
donde px es la densidad de la torta en peso seco por unidad de
volumen. A partir de la ecuacin (4.50 ) se puede definir el diferencia
de volumen de filtrado siguiente:
dV =
Po
(4.51;
Combinando las ecuaciones (4.48), (4.49) y (4.51) e integrando la
expresin resultante entre los lmites:
i - O R
T
= O
t = t
se obtiene:
RT
- R\]
(4.52)
donde t es el tiempo necesario para obtener una torta de espesor
(R
0
RT)
De acuerdo a la ecuacin (4.52) el tiempo de filtrado es funcin de
la resistencia especfica de la torta entre otros parmetros. Debido a
que la torta puede sufrir compactacin cuando se expone a un campo
centrfugo, las mediciones de resistencia especfica hechas en equipos
de laboratorio de filtracin intermitente pueden conducir a resultados
incorrectos. Entonces es preferible realizar estas mediciones en equipo
de laboratorio apropiado para la filtracin centrfuga.
Ejemplo 4.6.- Tiempo de Filtracin.
Se desea estimar el tiempo de filtracin centrfuga de 1,600 litros de
una suspensin que contiene 0.02 (//cm
3
de una hormona. Las pruebas
de laboratorio indican que la torta que forma esta suspensin tiene una
resistencia especfica de 2.67 x 10
10
cm/g y una densidad de 1.1 g/cm
3
de slidos secos de torta hmeda. Las propiedades del lquido pueden
ser consideradas iguales a las del agua.
La centrfuga que se va a utilizar gira a 650 rpin, tiene un radio de
51 cm y una altura de 45 cm. Una vez llena la centrfuga y girando
puede formar una pelcula de 5.5 cm de lquido y torta.
Solucin:
cin (4.52). Para tal efecto es necesario calcular primero la Idealizacin
. SUMARIO 157
de la superficie de la torta RT mediante la ecuacin (4.50) de tal manera
que:
0.02 x 1600 x 10
3
cm
3
1
1/2
1.1 -^j x TT x 45 era
crn
1
*
= 48.9 era
entonces de acuerdo a la ecuacin (4.52) el tiempo de filtrado es:
t =
t =
-l-21n4?
0.01-^x 2.67 x 10
10
^ x 1.1-Ay
x
48.9
2
cm
2
cmo p cm
2 x
X
'_5T
48.9
v
8.6 min
(51
2
-45.5
2
) cm
2
-l-21n
51
48^9
La centrifugacin se emplea para separar diversos tipos de slidos (clu-
las, desechos, precipitados y cuerpos de inclusin) de caldos biolgicos.
La teora de la sedimentacin combinada con la experimentacin en
equipos pilotos, permite operar y disear racionalmente los equipos de
centrifugacin.
Existen varios tipos de equipos para efectuar la operacin de cen-
trifugacin los cuales pueden operar tanto en forma intermitente como
en forma continua.
De acuerdo con la teora de la sedimentacin, el gasto manejable
en una centrfuga depende de la geometra especfica del equipo, de la
velocidad de giro y de las propiedades del caldo que se desea procesar.
4.6 Problemas
4.1.- Estimar la velocidad de sedimentacin de una partcula de 5
de dimetro y 1,100 Kg/m
3
de densidad, en agua a 20 C con una
viscosidad de 1.01 x 10~
3
N-s/ra
2
y una densidad de 1,000 Kg/m
3
,
cuando:
a).- Sedimenta libremente.
b).- Se localiza en un punto r = 0.15 ra y gira a 3,000 rpm.
a).- Resp. 1.35 x lO"
6
m/s
b).- Resp. 2.04 x 10"
3
m/s
4.2.- Una centrfuga tubular de 12.4 x 72.5 cm gira a una velocidad
tal que genera un campo de 15,600 G. La pelcula que forma el lquido
al girar tiene un espesor de 5 cm.
Estimar el gasto volumtrico que puede manejar este equipo en la
separacin de restos celulares de E. coli que presentan un dimetro
promedio de 0.25 firn y se encuentran en una solucin con 4 cp de
viscosidad. La diferencia de densidad entre las partculas y la solucin
es de 0.03 g/cm
3
.
Resp. 1.18 l/h
4.3.- Estimar el rea caracterstica de centrifugacin para procesar
3.34 x 10~
3
m
3
/s de un caldo de cultivo bacteriano. Las clulas del
caldo presentan un dimetro promedio de 1 m y una densidad de
1096.7 Kg/m
3
. La viscosidad del caldo es de 2.682 x 10~
3
N - s/ra
2
y
su densidad de 997 Kg/m
3
.
Resp. 82,670 m
2
4.4.- Una centrfuga tubular que gira a 4,000 rpm cuando se alimenta
con un caldo de levaduras a razn de 12 1/min, logra recuperar el 60 %
de slidos. Sabiendo que la recuperacin es inversamente proporcional
al flujo, estimar:
a).- La velocidad a la que debe girar la centrfuga para obtener un
95 % de recuperacin.
b).- El flujo que puede ser alimentado a la centrfuga cuando gira a
4,000 rpm y se desea una recuperacin del 95 %.
a).- Resp. 4,845 rpm
b).- Resp. 8.18 l/min
4.6. PROBLEMAS 159
4.5.- El procesamiento inicial de 30,000 / de un caldo celular que
contiene 0.15 /// de clulas (base hmeda de slidos) es necesario rea-
lizarlo de acuerdo a las siguientes tres etapas:
i).- Concentracin del caldo hasta 0.8 ///.
ii).- Resuspensin del caldo en una solucin amortiguadora apropia-
da hasta 0.5 ///.
iii).- Rompimiento de las clulas mediante un homogeneizador. Los
restos celulares obtenidos en este paso tienen la mitad del dimetro de
las clulas originales y el caldo es cuatro veces ms viscoso.
iv).- Separacin de los restos celulares del homogeneizado. Este
paso debe ser realizado en menos de 15 horas para evitar degradacin
del producto.
a).- Estimar el nmero de centrfugas con capacidad de 400 1/h de
homogeneizado para realizar el paso iv).
b).- Estimar el tiempo necesario para el paso iv).
c).- Estimar el tiempo necesario para realizar el paso i) con el mismo
equipo.
d).- Establecer de que otra forma se puede realizar este proceso.
a).- Resp. 2
b).- Resp. 11.25 h
c).- 2.34 h
4.6.- En una operacin para la obtencin de una enzima se utiliza
un sistema de extraccin de dos fases acuosas inmiscibles. Una vez
realizada la extraccin las fases se separan mediante una centrfuga
tubular. Las propiedades de las fases son las siguientes:
Fase Ligera (B)
Nombre
Densidad
Viscosidad
Temperatura
PEG 4000 9 %
1046 Kg/m
3
0.008 Kg/m-s
20C
Fase Pesada (A)
Nombre
(
Densidad
Viscosidad
Temperatura
Dextrano T 5000 2 %
1144 Kg/m
3
0.008 Kg/m-s
20C
La centrfuga gira a 12,000 rpm, tiene un radio externo R
0
= 0.05 ra
y una longitud L = 0.9 m.
La salida de la fase pesada en la centrfuga se localiza a una distancia
radial RB 0.02 ra. La salida de la fase ligera se localiza en RA
0.022 ra mediante un arreglo que la coloca por encima de la fase ligera,
de tal manera que la interfase lquido-lquido se forma a una distancia
R mayor que R .
a).- Desarrollar una expresin para obtener el gradiente de presin
generado por la fase ligera al girar.
b).- Desarrollar una expresin para obtener el gradiente de presin
generado por la fase pesada al girar.
c).- Desarollar una expresin para el clculo de la posicin de la
interfase suponiendo que los gradientes anteriores son iguales.
d).- Calcular la posicin de la interfase.
d).- Resp. 3.76 x 10~
2
m
4.7.- La centrfuga del problema anterior se alimenta con un flujo
de 1 x 10~
4
m
3
/s de una mezcla de las fases que se encuentra en una
proporcin de 3.5:1 de fase pesada a fase ligera.
a).- Calcular el flujo de la fase ligera que se alimenta a la centrfuga.
b).- Utilizando la ecuacin (4.15) calcular la velocidad de sedi-
mentacin mnima para la fase pesada en la fase ligera.
c).- Calcular el da metro mnimo de las gotas de fase pesada para
obtener un 100 % de separacin de las fases.
a).- Resp. 7.78 x 10~
5
m
3
/s
c).- Resp. 4 //m
4.8.- La extraccin lquido-lquido del ejemplo anterior se desea es-
calar utilizando una centrfuga ms grande donde:
R
B
= 0.06 m, R
A
= 0.066 m, L = 1.5 m y N = 8,000 rpm.
Partiendo de que cuando se maneja el flujo de 1 x 10~
4
rn
3
/s en
la centrfuga ms chica se tiene una separacin adecuada de las fases,
realizar los siguientes clculos:
Sea:
1: Operacin en el equipo menor.
2: Operacin en el equipo mayor.
a).- Calcular ( 5)1
b).- Calcular (Ri)2
c).- Calcular (E3)2
d).- Calcular (Q s)2
e).- Calcular el gasto total que puede manej ar la nueva centrfuga.
a).- Resp. 730 m
2
4.6. PROBLEMAS 161
c).- Resp. 4,782 m
2
d).- Resp. 6.56 x 10~
4
m
3
/s
4.9.- Se desea procesar una suspensin diluida de levaduras de 10 /zra
de dimetro y densidad de 1.01 g/cm
3
, con una centrfuga de tubos que
opera a 8,000 rpm. Los tubos se llenan con la suspensin hasta una
altura de 5 cm. Cuando la centrfuga est operando los tubos giran
perpendicularmente al eje y el fondo de los tubos se localiza a 9 era del
eje. Estimar el tiempo para sedimentar la mitad de las partculas si
se supone que stas se distribuyen en forma uniforme en la suspensin.
Las propiedades del lquido pueden ser tomadas como las del agua.
4.10.- Se desea procesar 1,000 l/rnin de una suspensin que contiene
20 % de levaduras. En pruebas de laboratorio la suspensin puede cla-
rificarse en 6 min a 1,000 G. Se desea descargar los slidos continua-
mente. La torta que forman los slidos es bastante fluida. En base a
los datos anteriores y utilizando la Tabla 4
r
3 efecte la seleccin de una
centrfuga.
4.11.- Una centrfuga de discos recupera el 50 % de clulas a un
gasto de 10 l/min. Qu gasto se puede manejar para lograr 80 % de
recuperacin en la misma centrfuga?.
4.7 Bibliografa
Ambler, C.M. 1961. Centrifugation equipment: Theory. Ind. Eng.
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4.7. BIBLIOGRAFA 163
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Wiesmann, U y Binder, H. 1982. Biomass separation from liquids
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119-171.
Captulo 5
Rompimiento de Clulas
5.1 Introduccin
El rompimiento celular es una operacin unitaria de gran importan-
cia industrial. Algunos de los productos biotecnolgicos producidos a
escala industrial son extracelulares y no requieren ser extrados de la
clula. Cuando el producto de inters es intracelular (Tabla 5.1), una
vez realizada la cosecha de clulas una operacin necesaria para la li-
beracin del producto es el rompimiento de la clula misma (Petrides
et al, 1989).
Algunas protenas eucariticas recombinantes producidas por mi-
croorganismos procariotes no son secretadas por la clula recombinante
y constituyen productos intracelulares, los cuales pueden estar en forma
activa o en forma desnaturalizada. Las protenas intracelulares desna-
turalizadas con frecuencia forman cuerpos de inclusin insolubles.
Otras protenas de inters permanecen en el espacio periplsmico
entre la membrana y la pared celular. Slo algunas clulas presentan
mecanismos de secrecin celular del producto de inters. Esto hace
necesario contar con tcnicas de rompimiento celular eficientes y selec-
tivas en la produccin de protena intracelular.
La tcnica de rompimiento celular seleccionada determina el tamao
de los desechos resultantes y la influencia que estos tendrn en las
operaciones que se ut i l i cen para su separacin. Asimismo, la. tcnica es
funcin del tipo de mi croorgani smo que cont i ene al product o de inters,
165
166 CAPTULOS. ROMPIMIENTO DE CLULAS
Tabla 5.1: Productos que requieren de una ruptura celular.
Tipo de Producto
Protenas Recombinantes
Enzimas
Vacunas
Otros
Ejemplos
Insulina, HC, Protema A, Protena G.
1-Asparaginasa, Invertasa, Glucocinasa.
Ttanos, Meningitis.
DNA, Mitocondrias, Esporas, Toxinas.
Adaptada de: Foster, 1992
reservados.
particularmente en relacin a su estructura externa (Asenjo, 1990).
En este captulo en la seccin 5.2 se presentan los fundamentos de
la operacin de rompimiento. La seccin 5.3 se centra en los equipos
de rompimiento que se utilizan a nivel industrial. El diseo de estos
equipos se discute en la seccin 5.4.
5.2 Fundamentos
La recuperacin ptima de productos intracelulares requiere del conoci-
miento de la estructura de las capas externas que protegen a las clulas:
la membrana y la pared celular. Requiere adems del conocimiento de
los sistemas que permiten a ciertas clulas secretar los productos de
inters en forma activa, evitando con sto la necesidad de romper la
clula para recuperar el producto.
Existen varios mtodos para la recuperacin de productos intracelu-
lares, los ms drsticos involucran el rompimiento completo de la clula.
Los mtodos de recuperacin menos severos involucran una alteracin
qumica de las cubiertas celulares o permeabilizacin que facilita la sa-
lida del producto.
Esta seccin se centra en cuatro aspectos fundamentales para el
anlisis de la operacin de rompi mi ent o:
Estructura de la pared celular.
5.2. FUNDAMENTOS 167
Sistemas celulares de secrecin.
Mtodos de rompimiento celular.
Mtodos de permeabilizacin celular.
5.2.1 Estructura de la Pared Celular
En esta seccin se describe brevemente la estructura de las paredes
microbianas, particularmente la estructura de las paredes bacterianas,
debido al relevante papel que tienen las bacterias como la E. coli como
organismos husped de varios productos biotecnolgicos recombinantes
(Wang, 1988).
Las paredes celulares de las bacterias son rgidas y porosas, debido
a que las bacterias poseen una elevada presin osmtica interna y a
que frecuentemente pueden hallarse expuestas a diferentes condiciones
ambientales externas.
Las paredes celulares de las bacterias Gram-positivas y Gram-ne-
gativas poseen una caracterstica molecular comn: en ambas existe
un rgido esqueleto peptidoglucano o murena. La unidad bsica que
se repite en la estructura del peptidoglucano es la del disacrido con-
stituido por N-acetil-D-glucosamina y el cido N-acetilmurmico.
En las clulas Gram-positivas la capa de peptidoglucano es mucho
ms gruesa que en las clulas Gram-negativas. En stas la capa de
peptidoglucano se encuentra localizada en el espacio periplsmico en-
lazndose covalentemente a las lipoprotenas de la capa exterior de la
pared celular.
El espacio periplsmico est constituido por una sustancia seme-
jante a un gel, que contiene una alta concentracin de enzimas degrada-
tivas y protenas de transporte.
La estructura del peptidoglucano de la pared celular bacteriana es
resistente a la accin de las enzimas que hidrolizan los pptidos, las
cuales no atacan a los pptidos que contienen D-aminocidos como los
que se encuentran en la estructura de la pared (como D-alanina y D-
glutamina).
En las clulas Gram positivas la enzi ma li sozi rna se u t i l i z a para el
rompimiento celular ya que su mecanismo de accin es el rompimiento
168 CAPTULO 5. ROMPIMIENTO DE CLULAS
de los enlaces glucosdicos del esqueleto polisacrido del peptidoglu-
cano, que en este tip.o de clulas se localizan en la parte externa. Una
vez roto el esqueleto de esta manera, la clula se expande con la con-
secuente ruptura de la membrana y liberacin del contenido celular
(Lehninger, 1989).
La diferencia en el grosor de la capa de peptidoglucano y su ubi-
cacin, permite que las clulas Gram-positivas sean ms sensibles a la
accin de la lizosima que las Gram-negativas.
Las paredes celulares de las bacterias Gram-negativas que presentan
dificultad al rompimiento por la lizosima, pueden romperse en molinos
de perlas de vidrio.
La pared celular de las levaduras consta de dos capas: una capa
externa formada de un complejo manano-protena y una capa interne
de glucano.
Cuando es necesario romper completamente la clula recombinant*
para liberar el material intracelular, deben considerarse las caracters
ticas estructurales de la clula para la seleccin adecuada de la tcnic
de rompimiento.
5.2,2 Sistemas Celulares de Secrecin
Se llama secrecin al movimiento de un soluto a travs de la men
brana celular hacia el exterior de la clula. Tambin se considera corr
secrecin cuando, como en el caso de algunas protenas, stas queda
atrapadas en el espacio periplsmico o entre la membrana y la pare
celular.
En la produccin de protenas de inters comercial los mecanism
de secrecin y la modificacin post-traduccional que sufren algunas <
estas protenas en su ruta de secrecin, son de gran importancia en
desarrollo de los procesos correspondientes.
Cuando se utiliza E. coli para la produccin de protenas recom
nantes se obtienen rendimientos muy altos, sin embargo este tipo
clula presenta dos problemas caractersticos :
- Las protenas no son secretadas por las clulas.
- Las protenas no se producen en forma activa, permaneciendo er
protoplasma en forma insoluble formando precipitados llamados
cuerpos de inclusin.
Cuando se presentan los problemas mencionados anteriormente, el
proceso para la obtencin de la protena de inters debe incluir opera-
ciones de rompimiento celular, reacciones equivalentes a las de modi-
ficacin post-traduccional "in vivo", y complejas operaciones de recu-
peracin y purificacin.
El hecho de que varias de las modificaciones post-traduccionales
sean realizadas en las rutas de secrecin de las clulas que tienen esta
capacidad, conjuntamente con la eliminacin de la operacin de rup-
tura que sto implica, ha conducido al empleo de otro tipo de clulas
recombinantes diferentes a la E. coli.
El primer proceso industrial que utiliza clulas recombinantes de
mamfero (clulas de ovario de hmster), se emplea para la obtencin
del agente tromboltico llamado "Activador del Plasmingeno Tisular"
(t-PA de sus siglas en ingls) (Datar et a/, 1993).
La pureza y seguridad de los productos de ambos tipos de procesos
es de gran importancia, particularmente en el caso de las protenas de
uso clnico. Los productos de E. coli disminuyen el riesgo de trans-
misin de protenas carcinognicas, pero presentan riesgos potenciales
de generacin de respuestas inmunolgicas.
5.2.3 Mtodos de Rompimiento Celular
Una gran variedad de tcnicas de rompimiento celular son usadas en el
laboratorio, pero slo algunas de ellas a escala industrial. Los mtodos
de rompimiento celular (Tabla 5.2) pueden ser divididos en mtodos
qumicos y mtodos mecnicos. Dentro d los primeros se encuentra:
el choque osmtico, la disolucin lipdica, la digestin enzimtica y el
tratamiento alcalino. Dentro de los segundos se encuentran la agitacin
con abrasivos y la homogeneizacin.
Mtodos Qumicos
Choque Osmtico.- El. rompimiento de clulas por medio de choque
osmtico se fundament a en el conocimiento del fenmeno de osmosis.
Tabla 5.2: Mtodos de rompimiento celular.
Mtodo
Qumico
Mecnicos
Tcnica
Choque
osmtico
Disolucin
lipdica
Digestin
enzimtica
Tratamiento
alcalino
Molido en
Molinos de
Perlas
Homogenei-
zacin
Principio
Ruptura osmtica
de membrana
Desestabilizacin
de la pared celular
por solventes org.
Digestin de la
pared celular
Solubilizacin de
membranas por
saponificacin de
b'pidos
pequeo
Las clulas son
prensadas entre
perlas de vidrio
Las clulas se
rompen por fuerzas
de corte al pasar
por un orificio
pequeo
Ejemplos
Ruptura de
glbulos rojos
Rompimiento de
levaduras por
tolueno
M. lysodeikticus
tratados con
lisozima
Tratamiento de
suspensiones
celulares a
gran escala
Tratamiento de
suspensiones
celulares a
gran escala
Adaptada de Scopes, 1994
Reproducida con el pernso de Spriiiger-Verlag. Copyrigllt 1994. Todos los derechos reservados.
a) 1 = 0
C, < C2 [conc. H2OJ
b) t = t
C, = C,
Figura 5.1: Osmosis y presin osmtica.
Cuando una membrana semipermeable separa dos soluciones de diferen-
te concentracin de soluto (Figura 5.1), se produce un movimiento neto
de agua a travs de la membrana hacia el compartimento que contiene
el soluto ms concentrado. La presin osmtica es la fuerza que debe
aplicarse para contrarrestar la fuerza del flujo osmtico producido.
La presin osmtica es una de las propiedades coligativas de las
soluciones; depende del nmero de partculas de soluto por unidad de
volumen pero es independiente de la naturaleza molecular del soluto y
de la forma de sus partculas.
El rompimiento celular por choque osmtico consiste en la carga
de un volumen dado de clulas dentro de agua pura (con frecuencia se
utiliza el doble del volumen de las clulas por volumen de agua). La
clula se expande debido a que contiene solutos que ocasionan un flujo
osmtico del agua hacsu interior. Esta expansin puede conducir a su
lisis o rompimiento. La factibilidad del uso de este mtodo depende de
la resistencia mecnica de las clulas de inters.
Se puede desarrollar una expresin para el clculo de la presin
osmtica necesaria para romper una clula a partir de la definicin de
equilibrio qumico. En el equilibrio el potencial qumico de las solu-
ciones acuosas es igual en ambos lados de la membrana celular, de tal
manera que:
///
2
o (externo) = ^H
2
o(interno) (5-1)
El potencial qumico externo del agua pura debe incluir un valor de
referencia y una correccin en la presin. El potencial qumico interno
involucra un valor de referencia, la correccin en la presin y una co-
rreccin para la concentracin de la solucin; de tal manera que para
una solucin ideal incompresible, la ecuacin (5.1) se expresa como:
4o +V
H
,oP
e
= 4o + V
H0
Pi +RTln(l - x,) (5.2)
donde:
/4o
:
Pt
e
ncial de referencia. [/ atm/mol].
VHÔ' Volumen parcial molar del agua. [/ /mol].
x\ : es la fraccin molar de soluto dentro de la clula.
Tomando el contenido celular como una solucin diluida, el volumen
parcial del agua VHÔ
es
aproximadamente igual al volumen molar del
agua V//
2
o, y Xi es pequea. De esta manera se tiene:
VH* O
y finalmente:
P P RTr (^ ^}
e i j / t- Cj ^ .Oy
Esta relacin es llamada ley de van't HofF y en ella c\ es la concen-
tracin del soluto 1.
Disolucin Lipdica.- La extraccin por solventes ha sido usada
para la disolucin selectiva de ciertos componentes celulares. Un gran
nmero de solventes orgnicos han sido investigados en el laboratorio
para ser utilizados con este fin, sin embargo su uso es limitado debido
a que pueden inhibir severamente las actividades biolgicas.
La tcnica de disolucin lipdica es relativamente simple, se aade
a la suspensin celular un volumen de tolueno aproximadamente igual
al 10% de la biomasa. El tolueno es absorbido dentro de los lpidos de
la pared celular, lo que produce la expansin de la pared y la ruptura
de sta. El contenido celular es liberado y entonces puede ser separado
el producto de inters.
Otros tipos de solventes adems del tolueno tambin son efectivos
para este propsito. El benceno es efectivo pero es carcinognico y
altamente voltil. El tolueno tambin es carcinognico pero es menos
voltil.
Para la aplicacin de la tcnica de disolucin lipdica se requiere
hacer con anticipacin un buen nmero de experimentos de laboratorio,
para verificar los parmetros de solubilidad que reflejen las interacciones
lpido-solvente. En la prctica los solventes con similares parmetros
de solubilidad atacarn a las clulas en forma similar.
Idealmente se deben seleccionar solventes cuyos parmetros de so-
lubilidad sean apropiados para los lpidos de la pared celular pero in-
adecuados para disolver al producto de inters localizado dentro de la
clula. Esto casi nunca se conoce entonces es necesario realizar experi-
mentos.
Digestin Enzimtica.- La digestin enzimtica consiste en el
empleo de enzimas que atacan la pared y provocan el rompimiento
celular.
Una de las enzimas ms utilizada en la digestin enzimtica de
bacterias es la lisozima. Esta enzima rompe el enlace (3 1-4 entre el
cido N-acetilmurmico y la N-acetil glucosamina de la capa de pepti-
doglucano de la pared celular, provocando el rompimiento de la pared
y consecuentementemente la ruptura de ,1a clula. A pH' s menores
de 5 las clulas no se rompen an cuando la pared celular haya sido
destruida por digestin. Esto se debe a la baja solubilidad del proto-
plasma a estos pH's y enfatiza la necesidad tanto de rompimiento de la
pared celular como de condiciones favorables de solubilidad, para una
liberacin eficiente de los materiales intracelulares (Edebo, 1969).
El alto costo de las enzimas no permite que esta tcnica sea usada
ampliamente en el rompimiento celular a nivel i ndust ri al a pesar de ser
altamente selectiva (Andrews ti a/, 1990).
Mtodos Mecnicos
En el rompimiento d clulas a gran escala se han preferido los mtodos
mecnicos. Las tcnicas empleadas son: la molienda hmeda en molinos
de perlas agitados a alta velocidad y la homogeneizacin a alta presin
(Bjustrom, 1985; Kula y Schtte, 1987).
El equipo que se utiliza en estas tcnicas originalmente fue diseado
para otros usos. El uso del molino de perlas se origin en la industria de
la pintura por la necesidad de obtener mezclas homogneas de los pig-
mentos constituyentes de la pintura. El uso del homogeneizador se ori-
gin en la industria alimenticia, particularmente en la homogeneizacin
de leche y productos lcteos (obviamente la ruptura celular no es una
homogeneizacin). Estos equipos han sido adaptados para utilizarse en
la desintegracin celular.
La desintegracin celular no es una tarea fcil si se considera la alta
resistencia mecnica de las paredes celulares y el tamao tan pequeo
de los microorganismos (1-10 /m). Para poder alcanzar rendimientos
altos, esto es, obtener un grado de desintegracin celular mayor que
90%, con frecuencia se requieren dos o tres pasos tanto en el homo-
geneizador como en el molino.
El paso repetido de la suspensin celular a travs de los equipos
de rompimiento produce una distribucin amplia del tamao de los
residuos de la pared celular, extendindose hasta por abajo de las 3 fim.
En esta operacin es importante controlar el tamao de los desechos
celulares debido a que la separacin slido-lquido posterior depende
del tamao de las partculas.
5.2.4 Mtodos de Permeabilizacin
Los mtodos de permeabilizacin (Figura 5.2) consisten en alterar la
estructura de la pared y la membrana celular para facilitar la difusin
del producto hacia el exterior de la clula. Debido a los problemas
asociados con la purificacin de productos obtenidos por rompimiento
celular, existe un gran inters en el empleo de estos mtodos alternativos
a la rupt ura mecnica empleada a ni vel i ndust r i al .
Existen diversos mtodos para realizar la permeabilizacin celular,
varios de los cuales son iguales a los empleados en el rompimiento celular
Figura 5.2: Comparacin conceptual de permeabilizacin (lado dere-
cho) y rompimiento mecnico (lado izquierdo) Fuente: Naglak et a/,
1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Deker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
pero se realizan a condiciones ms leves. Por ejemplo, mediante presin
osmtica controlada es posible liberar protenas localizadas en el espacio
periplsmico de clulas Gram negativas.
Varios de los trabajos sobre permeabilizacin han sido desarrollados
en bacterias gram-negativas, principalmente E. coli, usando solventes
como tolueno al 5%, detergentes aninicos y no inicos como el do-
decil sulfato de sodio (SDS) y Tritn X-100, agentes caotrpicos come
guanidina y urea, y agentes quelantes como el EDTA (Naglak et al
1990).
La base de una solubilizacin efectiva radica en la estructura qumi
ca del detergente o agente solubilizante (Figura 5.3). Estas estructura?
tienen una porcin hidroflica (generalmente inica) y una parte hi
drofbica (generalmente un radical orgnico). Como resultado de k
anterior, todos los detergentes son anfipticos, capaces de interacciona:
tanto con el agua como con un lpido, esto permite que sean empleado:
para solubilizar la pared de las bacterias Gram negativas.
La naturaleza anfiptica se mantiene si los detergentes son ani
Dodedl Sulfato de Sodio (SDS)
(aninico)
CH
3
(CH
2
)
n
S0
3
Na
Sultanato de Sodio
(aninico)
CH
3
(CH
2
)
9
- SCf, Na
Bromuro de
Cetiltrimetil Amonio
(CTAB) (catinico)
CH
3
(CH
2
),
5
N*(CH
3
)
3
Br
Tritn X- 100
(no inico, poli disperso)
OH
Taurocolato de Sodio
(aninico)
OH
OH
NCH
2
CH
2
SO
3
Na
OH
Figura 5.3: Estructuras qumicas de agentes solubilizadores. Fuente:
Belter et a/, 1988
reservados.
nicos, catinicos o no inicos. Dentro de los materiales amnicos se
encuentran los jabones los cuales son sales de los cidos grasos. Debido
a que los jabones presentan un grupo carboxilico slo son detergentes
efectivos a pH altos, donde este grupo permanece ionizado (los jabones
no son efectivos en aguas duras, donde los iones de calcio pueden reac-
cionar con ellos para formar precipitados insolubles). La desventaja de
los jabones convencionales como permeabilizantes, puede ser evitada
reemplazando el grupo carboxlico con un grupo sulfato. El sulfato
puede estar ligado a un anillo bencnico formando un sulfonato seme-
jante al que se muestra en la Figura 5.3. Este sulfonato es ms efectivo
que los sulfates alcalinos en la ruptura de clulas; por esta misma razn
los sulfonatos no son fcilmente degradados microbiolgicamente.
Los detergentes no inicos comerciales como el Tritn X-100 estn
menos definidos qumicamente. Las molculas de este detergente tienen
tambin una porcin hidrofbica y una hidroflica. La parte hidroflica
no es un sulfato sino un alcohol. El aspecto importante de estos deter-
gentes es su habilidad para solubilizar lpidos de la pared celular y de
esta manera modificar la estructura de la clula.
En soluciones muy diluidas de detergentes, casi no hay disolucin de
lpidos. Existe una concentracin a la cual los lpidos repentinamente
comienzan a solubilizarse; arriba de esta concentracin la solubilidad
de los lpidos vara linealmente con la concentracin de detergente como
se muestra en la Figura 5.4.
Permeabilizando la clula de E. coli con guanidina y Tritn X-100,
en concentraciones de 0.1 M de guanidina y 0.5% de Tritn, se libera
cerca del 50% de la protena intracelular (Naglak ti a/, 1990).
La protena recombinante /3 - lactamasa ha sido recuperada con toda
su actividad (de E. coli) utilizando una solucin 0.2 M de guanidina.
A concentraciones de guanidina cercanas a 2 M, las protenas pueden
desnaturalizarse an cuando este proceso sea irreversible. Se ha en-
contrado que con la permeabilizacin con guanidina a concentraciones
de 6 M, algunas protenas como las que se encuentran en cuerpos de
inclusin, conservan toda o parte de su actividad biolgica. Por esta
razn, este mtodo de permeabilizacin celular puede ser muy apropi-
ado para algunos productos recombinantes .
Debido a que la permeabilizacin qumica puede ser llevada a cabo
en un simple recipiente agitado, sus costos de operacin y de inversin
Figura 5.4: Efecto de la concentracin de detergentes sobre la disolucin
de lpidos. Fuente: Belter et a/, 1988
reservados.
son ms bajos que los de los mtodos de rompimiento celular mecnicos.
La principal desventaja de la permeabilizacin con respecto a los m-
todos mecnicos y a la lisis enzimtica, es que libera menos protena
por unidad de tiempo.
5.3 Equipo de Rompimiento Celular
La operacin de rompimiento celular a nivel industrial actualmente se
realiza en tres tipos de equipos de rompimiento mecnico:
Molinos de Perlas de Alt a Velocidad.
Homogeneizadores de Alta Presin.
Microfluidizadores.
5.3.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad
Los molinos de perlas de alta velocidad (Fi gura 5.5) constan funda-
mentalmente de un ci l i ndr o en posicin hori zont al (o vertical) llamado
5.3. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 179
cmara de molienda, un agitador (Figura 5.6) que consiste de una flecha
giratoria sobre la que se monta un sistema de discos, barras o anillos
que provoca el movimiento del contenido del molino, y una gran can-
tidad de pequeas perlas de vidrio que son los elementos activos de
molienda.
El material celular se introduce por uno de los extremos de la cmara
de molienda . El agitador produce el movimiento necesario de la masa
celular y las perlas de vidrio. Los discos presentan perforaciones cu-
biertas con membranas que permiten el paso del material celular pero
no as el de las perlas. Los discos o impulsores pueden montarse sobre
la flecha ya sea en forma concntrica o excntrica.
El tipo de agitador est directamente relacionado con el transporte
de energa ptimo de las partes en rotacin a las perlas de vidrio. El
tipo de flechas e impulsores que se utilicen depende de la aplicacin
concreta que se le dar al molino.
Los molinos de perlas agitados a alta velocidad que se encuentran
disponibles en el mercado, difieren en la relacin de longitud a dimetro
de la cmara de molienda. La relacin ptima se encuentra entre 1:2.5
y 1:3.5. Los volmenes varan entre 50 mi y 250 litros para equipos
de laboratorio, planta piloto y produccin a escala industrial. Estos
ltimos permiten manejar flujos de hasta. 2,000 l/h. Desafortunada-
mente los modelos de laboratorio no son geomtricamente similares a
los usados a nivel industrial, lo que dificulta el escalamiento de datos.
Una variante del molino de perlas es el molino de cmara mltiple.
Mecanismo de Desintegracin Celular
El transporte de energa cintica desde el agitador a las perlas de vidrio
se efecta por fuerzas de adherencia en combinacin con fuerzas de des-
plazamiento. Ambas relacionadas con el diseo geomtrico, y con las
propiedades de la superficie y del impulsor. El volumen de la cmara
de molienda se activa a travs de la aceleracin de las perlas en di-
reccin radial formando capas de corriente de diferente velocidad. Los
perfiles de velocidad diferencial generan considerables fuerzas de corte
dependiendo de la velocidad y el tamao de las perlas de vidrio. Las
fuerzas de corte generadas, conjuntamente con la frecuencia y la fuerza
de las colisiones entre las perlas, son la causa de la desintegracin de
Medio
( b )
Figura 5.5: Esquema del Molino de Perlas: a) vista lateral; b) corte
transversal. Fuente: Schtte y Kula, 1990
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reser-
vados.
Impulsor Concntrico
Impulsor Excntrico
Figura 5.6: Diferentes arreglos de impulsores, a) concntrico b)
excntrico. Fuente: Kula y Schtte, 1987
Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. Copyright 1987
Tabla 5.3: Molino de perlas agitado.
Parmetros Operacionales.
Velocidad del agitador
Velocidad de alimentacin de la suspensin celular
Diseo del agitador
Tamao de las perlas de vidrio
Carga de las perlas de vidrio
Concentracin celular
Temperatura
Adaptada de: Kula y Schtte, 1987
las clulas.
Parmetros Operacionales
El molino de perlas est caracterizado por un gran nmero de par-
metros (Kula y Schtte, 1987). Los ms importantes para la desin-
tegracin celular se muestran en la Tabla 5.3 y algunos de ellos son
discutidos a continuacin.
Velocidad del Agitador. El agitador es responsable de la trans-
ferencia de energa y de la activacin de las perlas en la cmara de
molienda. La velocidad perifrica normalizada de los anillos se uti-
liza para comparar molinos diferentes, debido a que proporciona mayor
informacin tcnica al agrupar varios parmetros relacionados con la
velocidad de agitacin.
Para impulsores montados excntricamente, se toma un promedio de
velocidades perifricas U el cual es calculado ce acuerdo a la ecuacin:
_ D
m
irn
60 x 1000
(5.4)
con:
n
(
2\/e
2
4- d
2
/4
*-^Yft ~~~
J
\/ ^ 1^** /
donde:
D
m
: Dimetro promedio de los anillos excntricos, [mm].
e: Dimetro de la flecha del agitador, [mm].
d: Dimetro de los anillos del agitador, [mm].
n: Velocidad angular del agitador, [rpm].
En el caso de impulsores concnticos en la ecuacin (5.4) se utiliza
directamente el dimetro del impulsor.
Normalmente la velocidad perifrica flucta entre 5 y 15 ra/s. Al
incrementar la velocidad perifrica la fuerza de corte generada se incre-
menta, y con sta la frecuencia de colisin. Paralelamente la tempera-
tura se incrementar dependiendo de la carga de perlas la cmara de
molienda. La erosin de las perlas tambin se incrementar y con esto,
la energa necesaria para manejar el agitador.
La Figura 5.7 muestra el efecto de la velocidad del agitador sobre
la desintegracin de Sacharomises cerevisiae en un molino de perlas
agitado de 4 litros. Se puede observar que a una velocidad perifrica de
8 m/s (1500 rpm) se obtiene la velocidad ptima para la desintegracin
celular (velocidades mayores producen slo ms calentamiento). En
microorganismos pequeos como las bacterias, la velocidad perifrica
ptima para este tipo de molino se encuentra alrededor de 10 m/s
(1900 rpm).
Para un flujo de alimentacin constante, no existe una relacin lineal
entre el grado de desintegracin celular y la velocidad perifrica, lo
cual puede ser atribuido a los cambios en la distribucin del tiempo de
residencia con la variacin de la velocidad de agitacin.
Velocidad de Alimentacin de la suspensin celular. El flujo
permisible en un molino de perlas es funcin del volumen del molino,
de la carga de perlas y de la velocidad del agitador.
^ 20 H
20
- 10 -o
5 ~
1000 1500 2000
Velocidad del agitador ( rpm)
2500
Figura 5.7: Efecto de la velocidad del agitador sobre la liberacin de en-
zima y protena intracelular en S. cerevisiae. Molino de perlas: Netzsch
LME4. Fuente: Kula y Schtte, 1987
El molino Netzsch LME4 (Netzsch-Feinmahltechnik GmbH, Selb,
F.R.G) cuyo volumen es de 4 litros, puede ser operado con flujos de
alimentacin mayores de 100 l/h.
El consumo de potencia del molino depende en primer lugar de la
velocidad del agitador y slo ligeramente del flujo de alimentacin. Por
lo tanto, los flujos de alimentacin altos pueden ser ms econmicos.
En teora el grado de desintegracin celular alcanzado por paso,
es inversamente proporcional al flujo de alimentacin. Para levaduras
sin embargo, esto no se cumple. La Figura 5.8 muestra la poca in-
fluencia del flujo de alimentacin sobre el grado de desintegracin de
Sacharomyces cerevisiae. Un incremento de un orden de magnitud en
la velocidad de alimentacin, desde 10 a 100 l/h produce un decre-
mento en el grado de desintegracin del microorganismo de solamente
18%. Por otra parte, la liberacin de enzima intracelular a partir de
Brevibacterium ammoniagenes disminuye en forma ms marcada con
el incremento en la razn de alimentacin (esto se debe principalmente
a la diferencia de tamao y a la mayor resistencia de la pared de las
bacterias Gram positivas).
Considerando los tiempos de residencia y la demanda de energa, es
aconsejable operar los molinos de perlas a altos flujos de alimentacin
y utilizar varios pasos para alcanzar el rendimiento requerido.
Diseo del Agitador y Efectos del Mezclado. El comportamien-
to de un molino de perlas depende en gran medida del patrn de flujo y
mezclado que produce el agitador. El patrn se sita entre los patrones
de mezclado ideal conocidos: el tipo tapn (sin mezclado) y el tipo
tanque continuo completamente agitado (100 % agitado). El compor-
tamiento de mezclado en un molino de perlas puede ser determinado
mediante tcnicas con trazadores (tintas, sales, etc) que permiten es-
tablecer la distribucin de tiempos de residencia de los elementos del
fluido en el molino (Levenspiel, 1972).
El rompimiento celular es funcin de la velocidad del agitador y del
flujo de alimentacin de la suspensin. Esta funcionalidad es lineal slo
si los microorganismos son transportados como flujo tapn (sin mez-
clado axial), lo que significa idnticas velocidades de t ransport e axiales
a travs de la cmara de molienda. Sin embargo, en los agitadores de
t o o -
60 -
60-
40 -
20 -
100 20 40 60 80
Velocidad de Alimentacin ( l/ h)
Fumarasa: (o) de S. cerevisiae: () de B. ammoniagenes
Figura 5.8: Efecto del flujo de la alimentacin sobre la liberacin de
fumarasa en S. cerevisiae y B. ammoniagenes. Fuente: Kula y Schtte,
1987
Reproducida con el permiso de el American Iiistitute of Chemical Engineers. Copyright 1987
1.0-
0.8-
E 0.6-
0.4-
0.2-
0.0
A\
**t-
e
=-T
*R
Figura 5.9: Efecto de la geometra del agitador sobre el tiempo de
residencia, a un flujo de alimentacin de 180 l/h. Fuente: Kula y
Schtte, 1987
los molinos comerciales se presentan efectos que provocan el mezclado
de todas las partculas introducidas en la cmara. Ocasionalmente, un
microorganismo a la entrada de la cmara que tiene un tiempo de resi-
dencia igual a cero, tendr la misma probabilidad de dejar la cmara de
molienda que un microorganismo que haya entrado en ella previamente.
La Figura 5.9 muestra la distribucin d tiempos de residencia en un
molino Netzsche LME 20 en respuesta a un pulso de colorante, usando
tres tipos diferentes agitadores con la misma cmara. La distribucin
de la concentracin de tinta en la corriente de salida puede ser correla-
cionada directamente con la distribucin normalizada de tiempos de
residencia. En general se requieren cuatro o cinco tiempos de residen-
cia ideales para cambiar completamente el contenido de la cmara de
molienda.
Puesto que la clula est presente en la cmara de molienda con una
probabilidad y perodos de tiempo diferentes, el tiempo de residencia
promedio , no es idntico al tiempo de residencia ideal IR.
Con los tres tipos de agitadores a que se refiere la Figura 5.9 se
ha observado que un incremento en la velocidad de rotacin produce
una distribucin ms amplia de tiempos de residencia. Se ha observado
tambin que un incremento en la velocidad de alimentacin produce una
distribucin ms estrecha de tiempos de residencia con los tres tipos de
agitadores. Esto permite incrementar, la eficiencia de los molinos y
explica por que la velocidad de alimentacin aparentemente no afecta
considerablemente el grado de desintegracin alcanzado en un solo paso.
Tamao de las Perlas de Vidrio. En la desintegracin celular se
utilizan perlas de vidrio libres de plomo con un dimetro entre 0.2 y
1.5 mm. En molinos de laboratorio pueden utilizarse perlas hasta de
0.2 mm. Sin embargo a escala industrial el tamao de las perlas debe
ser mayor 0.4 mm para facilitar su separacin continua.
Algunas observaciones experimentales indican que el tamao ptimo
de las perlas depende del tipo de clula: para levaduras, se requieren
dimetros mayores a 0.5 mm y para bacterias menores que 0.5 mm.
Las enzimas localizadas en el espacio periplsmico son ms fcilmente
liberadas utilizando perlas de vidrio mayores en relacin a las utilizadas
para liberar enzimas protoplasmticas (Keshavarz et a/, 1987).
Existe un dimetro ptimo para las perlas. Dada una relacin de
volumen del molino a volumen de perlas, el nmero de perlas aumenta
al disminuir el dimetro de stas. Esto aumenta la frecuencia de las
colisiones entre las perlas y por lo tanto la eficiencia de la ruptura. Por
otro lado, al disminuir el dimetro de las perlas aumenta su tendencia
a flotar produciendo el efecto contrario.
Carga de Perlas. La cantidad de perlas que debe ser cargada al
molino depende del tipo de clulas y del tamao de las perlas. Una
carga baja de perlas produce una eficiencia baja, mientras que una
carga alta genera mayor consumo de potencia y libera ms calor.
Empricamente se ha determinado que la carga ptima de un molino
flucta entre el 80 y 90 %. Con perlas de 0.5 mm se recomienda una
carga del 85 % y de 80 % cuando las perlas son de 1 mm. La carga de
perlas se define como:
Carga = ^ (5.5)
donde:
V
p
: Volumen del lecho de perlas. [L
3
].
V
c
= V
t
- V
a
.
V
t
: Volumen de la cmara de molienda. [L
3
].
V
a
'. Volumen del agitador (discos o barras y flecha). [L
3
].
Ejemplo 5.1.- Carga de un molino de perlas.
El lecho formado por las perlas de un molino tiene una porosidad
de 0.375. Estimar la fraccin de volumen vaco de la cmara del molino
cuando la carga es del 80%.
Solucin:
De acuerdo con la ecuacin (5.5),
- *
la fraccin vaca est dada por:
_ .. (VJ)(0.375) +0.2V
C
r raccin =
'C
combinando las expresiones anteriores,
(0.8V
C
)(0.375)+0.2V;
r raccion =
Fraccin = 0.5
Cuando la carga de perlas es del 80% el volumen de las perlas es
igual al volumen libre total VM-
Concentracin de la Suspensin Celular. La concentracin de
clulas en la suspensin no afecta considerablemente la efectividad de
la desintegracin celular. Se ha reportado un grado de desintegracin
idntico para clulas de levadura en concentraciones de 4 a 20% de
peso seco de clulas, en un molino Dyno KD5. La generacin de calor
disminuye con el decremento de la concentracin celular mientras que el
consumo de energa por unidad de peso se incrementa. El peso hmedo
de clulas ptimo para la desintegracin celular en un molino de perlas
agitado se encuentra entre el 40 y 50% .
Efecto de la Temperatura La temperatura de molienda facilita
el rompimiento celular pero puede afectar al producto. En general el
rompimiento celular se realiza a una temperatura de entre 5 y 15 C. Es
difcil llevar un control preciso de la temperatura puesto que una gran
parte de la energa introducida por el agitador dentro de la mezcla es
transformada en calor. Por ejemplo, en un molino Netzsch LME20 que
consume una potencia de 7.5 Kwh aproximadamente cerca de 6000
kcal/h tienen que ser removidas por el sistema de enfriamiento.
5.3.2 Homogeneizador de Alta Presin
Los homogeneizadores de alta presin son los equipos ms ampliamente
utilizados para el rompimiento celular gran escala (Keshavarz ti a/,
1987). El homogeneizador de ms amplio uso es el Mantn-Gaulin, sin
embargo existen otros tipos de homogeneizadores como el Microfluidi-
zador.
Un homogeneizador de alta presin del tipo Manton-Gaulin consta
de dos partes principales: una bomba de pistn de alta presin y una
vlvula. El nmero de pistones de la bomba depende del tamao del
homogeneizador, en los equipos de laboratorio las bombas constan de
uno o dos pistones, mientras que las de los equipos industriales tienen
de tres a cinco.
Durante una operacin normal, se utiliza una bomba de alimenta-
cin para transportar la suspensin celular con una presin entre 0.1
y 0.5 MPa (millones de Rscales) a la bomba de alta presin, donde
la suspensin es comprimida hasta 60 MPa. La vlvula acoplada a
la bomba (Figura, 5.10), se abre cuando la presin excede un valor
Vlvula plana
suspensin
celular
anillo de impacto
Vlvula de cuchilla
producto
homogenizado
anillo de impacto
suspensin
celular
\ / ,
/
\
i
* *< producto
r. ) homogenizado
Figura 5.10: Configuracin de las vlvulas usadas en el homo-
geneizador: a).- Unidad plana b).- Unidad de cuchilla. Fuente: Kula y
Schtte, 1987
determinado. La suspensin de clulas es liberada a travs de la vlvula
con una velocidad muy alta, y despus de cambiar dos veces de direccin
choca contra un anillo de impacto.
Mecanismo de Desintegracin Celular
La desintegracin celular se inicia cuando la suspensin celular pasa a
alta presin por la vlvula de descarga, donde las clulas se someten a
turbulencia, cavitacin y esfuerzos de corte lquido. En experimentos
realizados cuyos resultados se muestran en la Figura 5.11, parece razo-
nable suponer que en el homogeneizador de Gaul i n, la fuerza del choque
sobre el anillo es directamente proporcional a la presin de operacin
y es la causa principal del rompimiento.
50-
20 30 40
Presin (MPa)
Vlvula: ( + ) de cuchilla; ( o ) plana
50
Figura 5.11: Rompimiento de Sacharomyses cerevisiae con homoge-
neizador a alta presin usando diferentes vlvulas. Enzima glucosa
-6-fosfato hidrogenasa. Fuente: Kula y Schtte, 1987
Tabla 5.4: homogeneizador de alta presin.
Parmetros Operacionales.
Presin de operacin
- Diseo de la vlvula
Concentracin celular
Temperatura
Reproducida con el permiso de el American Institua of Chemical Engineers. Copyright 1987
El mtodo de rompimiento por homogeneizacin no es selectivo. No
existe forma de diferenciar entre la liberacin de protenas del espacio
periplsmico y las protoplasmticas, por lo que no es recomendable
como rompimiento selectivo.
La homogeneizacin no es efectiva para la desintegracin de algunas
bacterias Gram-positivas que presentan una pared celular muy gruesa
y aparentemente no pueden ser desintegradas en el homogeneizador de
alta presin, al menos a presiones hasta de 55 MPa. Sin embargo,
se ha realizado con xito el rompimiento de levaduras y de bacterias
Gram-negativas como la Alcaligenes eutrophus (Harrison et a/, 1990).
En la Tabla 5.4 se listan los parmetros Operacionales que tienen in-
fluencia en el rompimiento celular en el homogeneizador de alta presin
(Kula y Schtte, 1987). Como puede observarse el nmero de parme-
tros es menor que los correspondientes al molino de perlas lo que facilita
la optimizacin de este tipo de procesos.
Presin de Operacin. Para lograr un rompimiento eficiente de c-
lulas la presin de operacin del homogeneizador debe ser superior a 35
MPa (la industria alimenticia opera sus homogeneizadores a una presin
de 35 MPa). En la Figura 5.11 se muestra como vara con la presin
de operacin en un solo paso, la liberacin de la enzima D-glucosa-6-
fosfato-deshidrogenasa de S. cerevisiae. Se puede observar que a 55
MPa hay tres veces mas enzima en la fraccin libre de clulas, que a
30 MPa. Sin embargo, la enzima liberada en un solo paso representa
solamente cerca del 45% de la cantidad total presente en la suspensin.
La presin de operacin del homogeneizador depende del producto
que se desee liberar. Durante una operacin se empieza a observar
liberacin de protena soluble a presiones mayores que 10 MPa, sin
embargo para liberar ADN se requieren presiones por arriba de 25 MPa.
En general las presiones de operacin ms usadas son de 55 MPa.
Diseo de la Vlvula. En la Figura 5.10 se muestran las configu-
raciones de las vlvulas que se usan con ms frecuencia en los homo-
geneizadores: la unidad plana y la unidad de cuchilla.
En la Figura 5.11 se muestra el comportamiento de los dos tipos
de vlvulas en el rompimiento celular como una funcin de la presin
de operacin, se puede observar que por arriba de una presin de 20
MPa la vlvula de cuchilla libera mayor cantidad de enzima que la
vlvula plana, por abajo de esta presin la cantidad de enzima liberada
es aproximadamente igual para ambos tipos de vlvulas.
En la Figura 5.12 se presenta el comportamiento de la liberacin
de una enzima en funcin del tiempo de recirculacin a tres diferentes
presiones y para dos tipos de vlvula, se puede observar que la cantidad
de enzima liberada aumenta con la presin, y para una presin dada el
incremento es mayor si se utiliza una vlvula de cuchilla.
Concentracin de la Suspensin Celular y Temperatura. La
desintegracin celular es independiente de la concentracin de clulas
de levaduras en concentraciones entre 100 y 600 gramos de peso seco
por litro.
Durante la homogeneizacin la temperatura de la suspensin celu-
lar es un parmetro que no se mant i ene constante y por lo tanto es
difcil correlacionarlo. La constante especfica de la velocidad de ho-
mogeneizacin vara directamente con la temperatura hasta un valor
de 30C. Se han observado diferencias de alrededor de 40% en este
parmetro en el rango de 5 a 30C. An as, se requieren tres pasos a
r
I
1
j?
1.0-
0.8-
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-
10 20 30 40 50 60
Tiempo de Recirculacin ( min )
Vlvula: (o ) de cuchilla: ( * ) plana
Presin: ( ) 55 MPa: ( ) 30 MPa; ( ) ISMPa
Figura 5.12: Efecto del tipo de vlvula sobre la liberacin de enzima
Fuente: Kula y Schtte, 1987
una presin mxima de 55 MPa y a 30C para alcanzar una desinte-
gracin celular mayor del 90%.
5.3.3 Microfluidizador
El microfluidizador es un homogeneizador de alta_4êsin_que tiene
un mecanismo de rompimiento celular diferente al del homogeneizador
Manton-Gaulin. Su mecanismo de rompimiento utiliza una bomba de
alta presin manejada con aire y una cmara especial de rompimiento
conectada a un dispositivo de contrapresin, como se muestra en la
Figura 5.13.
La suspensin celular se divide en dos corrientes hacindola pasar
a presin a travs de dos microcanales de seccin transversal de 2 x
100 //ra. Seguidamente las corrientes son impactadas a alta velocidad
y mezcladas en una pared estacionaria de la cmara de rompimiento
(Figura 5.14). Mediante este mecanismo la energa de entrada se disipa
casi instantneamente producindose la ruptura celular.
Los lmites de operacin del microfluidizador estn dados por: la
presin de aire requerida para manejar la bomba, las propiedades fisi-
coqumicas del lquido bombeado y la presin mxima de trabajo per-
mitida que es de 140 MPa.
Alguna ventajas que presenta el microfluidizador en comparacin
con el homogeneizador Manton-Gaulin (Sauer et a/, 1989) son las si-
guientes:
Es muy compacto, se puede montar sobre una charola de acero inoxi-
dable de 30 x 35 cm.
Permite un mayor enfriamiento del sistema: Adicionalmente a los ser-
pentines de enfriamiento que tambin presenta el Manton-Gaulin,
la cmara de rompimiento puede colocarse en un bao de hielo.
Puede alcanzarse un rompimiento celular ms eficiente (en el caso de
bacterias).
Permite flujos ms bajos (2 23 l/h con presiones de operacin de
10 95 MPa] y maneja volmenes menores (30 m/ ), lo que lo
hace compatible con operaciones de flujo continuo.
Figura 5.13: Diagrama del Microfluidizador; BA: bomba accionada por
aire; CC: cmara de contrapresin; SE: serpentn de enfriamiento; CR:
cmara de rompimiento; MP: medidor de presin; RP: regulador de
presin; C: contenedor; V: vlvula. Fuente: Sauer et a/, 1989
reservados.
Figura 5.14: Representacin esquemtica de la cmara de rompimiento
del microfluidizador. Fuente: Sauer et a/, 1989
reservados.
Es relativamente fcil de operar.
A continuacin se describe el efecto de la temperatura, del tamao de
los restos celulares y de la concentracin celular en el proceso de ruptura
utilizando un microfluidizador.
Temperatura de Operacin. Generalmente cuando se trabaja con
presiones altas es necesario enfriar el sistema. Si el homogeneizador no
tiene un sistema de enfriamiento eficiente de la cmara de rompimiento,
puede presentarse un incremento hasta de 80C en la temperatura de
la suspensin celular, lo cual puede ocasionar la desnaturalizacin de
la protena de inters.
El microfluidizador permite mantener incrementos de temperatura
menores a 20(7 en la cmara de rompimiento, que es la parte de mayor
temperatura. Por otro lado, el tiempo durante el cual las clulas estn
expuestas a temperaturas elevadas es muy corto, dado que el tiempo
de residencia de las clulas en la cmara de rompimiento es de 0.025 a
0.04 segundos. Ambos efectos contribuyen a, incrementar la eficiencia
de la operacin.
5.4. DISEO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 199
En estudios sobre el rompimiento de clulas de E. coli (Agerkvist
y Enfors 1990), se enfri la cmara de rompimiento por inmersin en
un bao de agua helada para proporcionar enfriamiento adicional al
proporcionado por el serpentn del equipo. La suspensin celular se ali-
ment a una presin de 60 MPa y a un flujo de 18 l/h. La temperatura
de la suspensin a la entrada vari entre 8 y 10C. Despus del primer
paso la temperatura a la salida fue aproximadamente de 23C, de cerca
de 27 C despus del segundo y aproximadamente de 28C despus de
tres pasos.
Tamao de los restos celulares. El microfluidizador produce restos
celulares de mayor tamao que los producidos en el homogeneizador
Manton-Gaulin, generndose suspensiones de menor viscosidad. Am-
bos efectos facilitan la separacin de los restos celulares durante la
centrifugacin. Este efecto disminuye al aumentar el nmero de pasos
(Agerkvist y Enfors, 1990).
Concentracin Celular. En investigaciones realizadas con E. coli
(Sauer et a/, 1989), se encontr que el microfluidizador puede romper
clulas que se encuentran en soluciones cuyas concentraciones varan de
5.6 a 174 gramos de peso seco por litro.
El hecho de que en el microfluidizador puedan manejarse concentra-
ciones hasta de 5.6 gramos de peso seco por litro tiene implicaciones en
el diseo ptimo del proceso de bioseparacin, dado que es posible pasar
el caldo del fermentador directamente al microfluidizador para efectuar
la ruptura celular. De esta manera puede eliminarse la operacin de
cosecha de clulas, o disminuir el grado de concentracin necesario pre-
vio a la ruptura. El costo del proceso en forma integral puede ser menor
an cuando las etapas de concentracin y purificacin posteriores a la
ruptura tambin se vean modificadas.
5.4 Diseo de Equipo de Rompimiento
En esta seccin se presentan los pr i nci pi os de diseo de los dos tipos de
equipos ms empleados en el rompi mi ent o celular a ni vel i ndust r i al :
Molino de Perlas de Alta Velocidad.
homogeneizador de Alta Presin.
5.4.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad
Los molinos de perlas de alta velocidad pueden ser operados en dos
formas:
- Operacin Intermitente.
- Operacin Continua.
Operacin Intermitente
Los molinos de perlas pueden ser operados en forma intermitente cuan-
do el volumen de la suspensin celular a tratar es bajo, o cuando se
desea efectuar experimentos para generar datos de diseo.
En una operacin intermitente, inicialmente se carga el molino con
las perlas y la suspensin celular. Durante la operacin se cierra la
salida de suspensin y se agita a la velocidad establecida.
El grado de rompimiento logrado puede ser determinado de dos
formas:
- Directamente: Contando el nmero de clulas intactas por unidad
de volumen.
- Indirectamente: Mediante la medicin de un componente liberado
durante el rompimiento. En el caso de productos de tipo proteico
la determinacin de protena total y/o la actividad enzimtica
son mediciones comnmente utilizadas.
El rompimiento celular intermitente en molinos de perlas agitados
a altas velocidades sigue una cintica de primer orden. El balance de
masa de protena liberada puede ser expresado mediante la ecuacin
siguiente:
df
(5.6)
La ecuacin anterior establece que la velocidad de liberacin de la
masa de protena (clulas rotas) es proporcional a la masa de protena
presente no liberada.
donde:
VM- Volumen libre del molino. [L
3
]
R
m
: Concentracin mxima de protena obtenible. [M/L
3
]
R: Concentracin de protena liberada en el tiempo t. [M/L
3
]
t: Tiempo de operacin. En el caso de la molienda intermitente el
tiempo de operacin t es igual al tiempo de residencia de las
clulas en el molino, [t]
k: Constante de velocidad especfica de primer orden que depende del
tipo de clula, del tipo y velocidad del agitador, de la carga y
tamao de las perlas, de la concentracin celular y de la tempe-
ratura. [t'
1
}
La ecuacin anterior puede ser integrada arreglndola de la siguiente
forma:
f
I
JO
dt (5
'
7)
O m
0
Para obtener la ecuacin de la operacin intermitente:
(5.8)
/tm t
De acuerdo a la ecuacin anterior las grficas de
InRmHRn-R)] vs t
producirn rectas de pendiente k y ordenada al origen cero.
En la Figura 5.15 se muestra la liberacin de protena a partir de
Sacharomyses cerevisiae utilizando un molino Netzsch LME20 con di-
ferentes tipos de agitadores. El resultado muestra claramente que la
desintegracin celular sigue una cintica de pri mer orden independiente
202
0.7-
0.6-
_ 0.5-
D?
I 0.4 -\
KW
E
S
0.3-
0.2-
0.1 -
0.0
CAPTULO 5. ROMPIMIENTO DE CLULAS
10 20 30
Impulsores: (A) de postes: (o) de discos;
( a ) excntrico.
Figura 5.15: Liberacin de protena a partir de Sacharomyses cerevisiae
en experimentos con recirculacin para diferentes tipos de agitadores.
Fuente: Kula y Schtte, 1987
Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engiiieers. Copyright 1987
5.4. DISEO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 20 3
del tipo de agitador. Observndose tambin diferentes valores de k para
cada tipo de agitador.
En el caso que el grado de rompimiento sea seguido mediante la
actividad enzimtica /I, la ecuacin (5.8) puede ser expresada como:
In
A
= kt (5.9)
Ejemplo 5.2.- Cintica de rompimiento intermitente.
En el rompimiento intermitente para la obtencin de una enzima de
S. cerevisiae, se utiliz un molino de perlas de alta velocidad de 4 litros
obtenindose los siguientes datos:
tiempo
(s)
00
15
30
45
60
Max.
Rx 10
2
(Kg/Kg)
0.000
1.025
2.150
2.525
3.425
10.000
x 10
2
(mol/min-Kg)
0.000
0.625
1.150
1.675
2.150
6.700
a).- Calcular la constante cintica para la liberacin de protena,
b).- Calcular la constante cintica para la liberacin de enzima.
Solucin:
Las constantes cinticas pueden ser obtenidas mediante el empleo de
las ecuaciones (5.8) y (5.9). Los clculos necesarios son los siguientes:
tiempo (s)
00
15
30
45
60
1n rtm
ln
R
m
-R
0.0000
0.1081
0.2421
0.2910
0.4193
in A 4
AmA
0.0000
0.0979
0.1883
0.2877
0.3870
a).- Mediante un ajuste de los datos por mnimos cuadrados se puede
obtener para la liberacin de protena la constante,
k = 6.984 x 1(T
3
s~
l
b).- De igual manera, para la liberacin de enzima la constante es:
ib = 6.412 x 1(T
3
s~
l
Operacin Continua
Durante la operacin continua del molino de perlas la suspensin celular
a tratar es alimentada continuamente al molino en uno de sus extremos
y retirada continuamente en el extremo opuesto.
En el diseo de los molinos de perlas es necesario considerar el grado
de dispersin de los tiempos de residencia de las clulas en el molino.
A diferencia de la operacin intermitente, en una operacin continua el
tiempo de residencia vara para las diferentes clulas de la suspensin,
generndose una distribucin de tiempos de residencia de la poblacin
celular.
El tiempo de residencia medio t de la distribucin de tiempos de
residencia es diferente al tiempo de residencia ideal R dado por:
donde:
R: Tiempo de residencia ideal, [t].
VM'- Volumen libre del molino. [L
3
].
F: Flujo alimentado al molino. [L
3
/t].
Grado de Mezclado en un Molino de Perlas. El grado de des-
viacin del flujo tapn ideal en los molinos de perlas comerciales, ha
sido simulado utilizando el modelo de "Reactores continuos en serie
tipo tanque perfectamente agitados". Mediante el uso de este modelo
los experimentos con pulsos de t i nt a permi t en determinar el nmero
de tanques perfectamente agitados en serie a que equivale el grado de
mezclado que se presenta en el molino (Shtte y Kula, 1990).
Al aplicar un pulso de tinta en la primera etapa de una serie de
tanques perfectamente agitados, el balance de la masa de tinta para
cualquier etapa n est dado por la expresin:
-0.) (5,0)
donde:
N: Nmero de etapas de la serie.
C
n
: Concentracin de tinta en la etapa n. [M/ L
3
].
Utilizando un tiempo adimensional definido por:
la ecuacin (5.10) puede expresarse como:
n
\r1f~i C* \ (t 1 1 \
-TT-- Y V( C
n
_i -G
n
) (5.11J
av
con las condiciones:
e < o d = o
0 = 0 d = A^Co
<9 > O C
0
= Q
Para la etapa nmero 1 la ecuacin de balance se reduce a:
(5.12;
e
y la forma integrada es:
I ' ^r = -N dO (5.13;
JNC
0
de tal manera que:
Q- = Nexp(-N0) (5.14)
Co
Sustituyendo la expresin anterior en la ecuacin de balance para
la segunda, etapa y efectuando la integracin correspondiente, es posi-
ble obtener una expresin para la concentracin en la segunda etapa.
Siguiendo este procedimiento es posible demostrar que para la etapa TV
se tiene que:
C
N
_Nff
N
C
0
~ (
En los estudios de mezclado al cociente CN/CQ se le denota como E
y es una medida de la distribucin de tiempos de residencia del fluido
dentro del recipiente (Levenspiel, 1972).
La aplicacin prctica del desarrollo anterior puede visualizarse de- ]
rivando la ecuacin (5.15) respecto a 6 e igualando el resultado a cero ]
para obtener: j
N = I (5.16)
donde 9
m
ax es el tiempo adimensional al cual E es mxima. De tal
manera que el nmero de etapas a que equivale el grado de mezclado de
un molino, puede ser determinado a partir de los datos experimentales
de concentracin contra tiempo que resultan al aplicar un pulso de
trazador.
Eficiencia de los Molinos de Perlas. El nmero de etapas de un
molino de perlas obtenido mediante experimentos de pulsos, puede ser
empleado para calcular la eficiencia de rompimiento esperada.
Para relacionar el nmero de etapas con la eficiencia de rompimiento
es necesario realizar un balance de protena liberada (clulas rotas) con-
siderando que el molino consta de ,/V etapas tipo tanque perfectamente
mezclados en serie, y que el rompimiento sigue una cintica de primer
orden.
El balance de protena liberada en la primera etapa de la serie est
dado por:
donde:
RI: Concentracin de protena liberada en la etapa 1. [M/L
3
].
t: Tiempo de operacin, [t]
k: Constante de velocidad especfica de primer orden. [
-1
]
La ecuacin anterior puede ser expresada en funcin de un tiempo
adimensional dado por:
y obtener,
f, IcV* ,
lm-R\) (5.19) jn .* . -mjt , _, y- - ~7fi "!/
La ecuacin anterior puede ser integrada con las condiciones:
O = O RI = O
E> D
0 =_ R
l = Rl
y obtener:
/ kV\f i \
(5.20)
" NF
La ecuacin anterior tambin puede ser expresada como:
Continuando con este procedimiento puede ser demostrado que para
la etapa TV se tiene:
20 8 CAPTULO 5. ROMPIMIENTO DE CLULAS
Rr
RN
= 1 +
kV
NF )
(5.22)
Ejemplo 5.3.- Determinacin del nmero de etapas equiva-
lentes de un molino de perlas.
Un molino de perlas tipo piloto con cmara de 4 litros de volumen,
se carga de perlas de tal manera que la fraccin de volumen libre es de
0.48 respecto al volumen de la cmara.
Para determinar el nmero de etapas del molino de acuerdo al mo-
delo de tanques en serie, se introduce un pulso de tinta al molino cuando
ste opera en forma estacionaria con un flujo de 50 l/h. Los datos de
concentracin a la salida del molino aparecen en las columnas (1) y (2)
de la Tabla siguiente :
(1)
t ( s )
25
50
75
100
125
150
175
200
225
250
275
300
325
350
375
400
425
(2)
C( U)
11.5
52.2
93.0
107.3
101.7
85.3
65.0
47.5
32.8
21.8
14.1
8.8
5.4
3.3
1.9
1.1
0.6
Suma =
(3)
CA
287.5
1305.0
2325.0
2682.5
2542.5
2132.5
1625.0
1187.5
820.0
545.0
352.0
220.0
135.0
82.5
47.5
27.5
15.0
16,332.5
(4)
e
0.18
0.36
0.54
0.72
0.90
1.09
1.27
1.45
1.63
1.81
1.99
2.17
2.35
2.53
2.71
2.89
3.07
(5)
E
0.097
0.442
0.787
0.908
0.861
0.722
0.550
0.402
0.278
0.185
0.119
0.074
0.046
0.028
0.016
0.009
0.005
a).- Calcular el tiempo de resi denci a i deal.
b).- Estimar el valor de CQ.
c).- Obtener la grfica de E vs 0.
d).- Estimar el nmero de etapas N.
e).- Calcular la eficiencia por etapa si k = 1.93 x 10~
2
s~
l
f).- Calcular la eficiencia global de las N etapas.
Solucin:
a).- El tiempo de residencia ideal est dado por:
V
M
R =
-y
4 / x 0 .48 x 360 0 f
* *
=
50
R = 138.24 s
b).- El valor de CQ puede ser estimado mediante la expresin:
Co=
M
De acuerdo a los clculos de la columna (3) de la Tabla anterior,
_ 16332.5
C
~ T38^4~
CQ = 118.15 Unidades
c).- En las columnas (4) y (5) de la Tabla anterior aparecen los
clculos del tiempo adimensional 9 y la concentracin adimensional E
La Figura 5.16 muestra la grfica de estos datos.
d).- De la Figura 5.16 se puede determinar que cuando E present
un mximo,
Vma.x
=
U. I O
Utilizando la ecuacin (5.16) se obtiene:
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0
0.0
e =t /t
n
Figura 5.16: Distribucin de tiempos de residencia del ejemplo 5.3.
N =
i-o,
N = --
N = 4
e).- La eficiencia de rompimiento en cada etapa de acuerdo con la
ecuacin (5.20) es:
Eficiencia =
* ~^ V NF )
el valor del grupo entre parntesis de la expresin anterior es:
W
M
_ (1.93 x 1Q-
2
s-
l
)(m.24s)
__ _ _ _
- -
667
de tal manera que:
0.667
Eficiencia =
i -t-
Eficiencia = 0.4
f).- La eficiencia global puede ser obtenida a partir de la ecuacin
(5.22),
^= (1+0.667)"
R
m
R
de tal manera que:
RN
= 7.716
-0.87
La eficiencia global de rompimiento en el molino es del 87%
5.4.2 homogeneizador de Alta Presin
La desintegracin celular en un homogeneizador de alta presin a una
presin fija dada puede ser descrita mediante una cintica de primer
orden respecto al nmero de pasos, de tal manera que:
~ = k'(R
m
- R) (5.23)
donde:
R: Concentracin de protema liberada (clulas rotas) despus de N
pasos. [M/L
3
].
R
m
\ Concentracin mxima de protena que puede ser liberada.
[M/L
3
].
N: Nmero de pasos a travs de la vlvula del homogeneizador.
k : Constante cintica de primer orden. [1/pasos]
La ecuacin anterior puede ser integrada con las condiciones:
N = 0 R = 0
N = N R= R
obtenindose la ecuacin:
\~~ = k'N (5.24)
n
m
n
Se ha determinado experimentalmente que la constante k tiene una
dependencia con la presin dada por:
k' = k"P
a
(5.25)
donde:
P: Presin de operacin. [M/t
2
L}.
fe": Constante dimensional de rompimiento. [M~
a
t
2a
L
2a
/pasos].
a: Parmetro constante en rangos limitados de presin. Un valor
tpico para levaduras es a = 2.9 y para E. coli a = 2.2.
ln
D
Rm
D
= k"NP
a
(5.26)
Rm R
El proceso de rompimiento celular descrito por la ecuacin (5.26),
es independiente de la concentracin celular. Por otra parte, se ha re-
portado que la actividad de enzima liberada en relacin a la protena
total liberada, es independiente de la presin de operacin, de la tem-
peratura, y de la concentracin inicial de clulas en el caso de levaduras.
Sin embargo, la fraccin de enzima liberada respecto a la enzima total
presente depende de la localizacin de la enzima particular dentro de
la estructura celular (Sauer et a/, 1989).
Microfluidizador
En el caso del microfluidizador la cintica de rompimiento presenta una
cierta dependencia no lineal con el nmero de pasos expresada mediante
la ecuacin:
ln
m
=k"N
b
P
a
(5.27;
R
m
R
donde 6 es un exponente que vara con el tipo de clula y tom
valores entre 0.28 y 1.00 (Sauer et al, 1989).
I
Ejemplo 5.4.- Rompimiento de E. coli en un microfluidiza-
dor.
En la recuperacin de /3 galactosidasa de E. coli, se hace pasar poi
un microfluidizador tipo M-110 una suspensin celular que contien*
47.6 g/l en peso seco. La presin de operacin utilizada fue de 60 MPa
La cantidad de protena liberada despus de cada paso se present
en las columnas (1) y (2) de la Tabla siguiente:
(1)
Paso
1
2
3
5
10
(2)
% Protena
Liberada
63.0
79.0
88.0
96.0
99.9
' (3)
ln[R
m
/(R
m
- R)]
0.994
1.560
2.120
3.219
6.908
a).- Estimar el valor de la constante cintica de rompimiento con-
siderando que para este caso a = 2.2 y 6 = 1.
b).-Estimar el nmero de pasos para liberar el 93 % de protena en
este proceso.
Solucin:
De acuerdo a la ecuacin (5.27) el grado de rompimiento para este
caso puede ser expresado como:
In
Rr
Rm R
de tal manera que de la pendiente de la grfica de ln[R
m
/(R
m
R)]
contra TV es posible estimar k". Los clculos necesarios se muestran en
la columna (3) de la Tabla anterior. Mediante un ajuste por mnimos
cuadrados de estos datos se obtiene:
k P
'
= 0.688
y para P=60 MPa,
k" = 8.4 x 10~
5
MPa~
2
'
2
b).- El nmero de pasos requeridos para una liberacin del 93 % de
protena es:
5.5. SUMARIO 215
yy _ 1.00-0.93 /
0.000084 x 60
2
-
2
N = 3.88 pasos
Se necesitan 4 pasos de molienda.
Comparacin de los Mtodos Mecnicos de Ruptura Celular
La Tabla 5.5 muestra datos de produccin de algunas enzimas uti-
lizando el molino de perlas y el homogeneizador Manton-Gaulin. La
ruptura celular utilizando el molino de perlas permite la obtencin de
un mayor porcentaje de enzima activa en un nmero menor de pasos
en comparacin con el homogeneizador. Sin embargo, la produccin
de protena en el molino es en general menor que la obtenida en el
homogeinizador.
La Tabla 5.6 muestra los datos para la liberacin de la enzima { 3
galactosidasa de clulas de E. coli utilizando un molino de perlas tipo
Dyno Mili, un homogeneizador tipo Manton-Gaulin y un Microfluidi-
zador. Estos datos muestran que el Microfluidizador permite manejar
mayores concentraciones de biomasa y produce un rendimiento mayor
de enzima activa. Adems, el tamao medio de los restos celulares
que se producen en un paso es mayor que el encontrado en las mismas
condiciones en el homogeneizador Manton-Gaulin.
5.5 Sumario
I
El rompimiento celular es una operacin necesaria cuando el producto
de inters se localiza al interior de la clula. Existen varios mtodos para
efectuar esta operacin. A nivel industrial slo se emplean los molinos
de perlas agitados y los homogeneizadores de alta presin. El diseo de
los molinos est basado en ecuaciones empricas y en en experimentos
piloto.
Tabla 5.5: Comparacin de mtodos de rompimiento celular.
Micro-
organismo
Levaduras
Saccharomyces
carlsbergensis
Saccharomyces
cerevisiae
Candida
boidinii
Bacterias
B. cercus
Brevibacterium
ammoniagenes
E. coli
Laclo bacillus
confuius
Enzima
liberada
Molino de Perlas**
Act.
solub.*
Pasos
No.
Prod.
kg/h
homogenei zador * * *
Act.
solub.*
Pasos
No.
Prod.
kg/h
D-glucosa
6- fosfato
deshidrogenasa
D-glucosa
6-fosfato
deshidrogenasa
Formato
Deshidrogenasa
86%
98%
95%
1
1
1
60
70
40
91%
95%
88%
4
4
3
60
60
65
Leucina
deshidrogenasa
Fumarasa
Penicilina
acilasa
D-Lactato
deshidrogenasa
84%
85%
95%
92%
2
3
3
2
16
12
7
20
82%
10%
89%
84%
3
4
3
3
67
-
67
65
* Actividad solubilizada
** Netzsch LME 20
*** Gaulin M3
Reproducida con el permiso de el American Iiistitute of Chemical Engineers. Copyright 1987
5.5. SUMARIO 217
Ruptura de clulas de E. coli con diferentes mtodos.
Mtodo
Molino de
Perlas*
2 min.
3 min.
4 min.
Manton-
Gaulin**
1 paso
2 pasos
3 pasos
Microflui -
dizador**
1 paso
1 paso
1 paso
2 pasos
3 pasos
5 pasos
10 pasos
Peso seco
de
biomasa
(9/1)
liberacin de
/3- G alactosidasa
Protena
(%)
Actividad
(%)
Distribucin de
tamao
media
(nm)
Pico(s)
(nm)
Viscosidad
a
10 s~
l
(mPa s)
100 s~
l
(mPa s)
49.5
49.5
49.5
62
72
79
62
74
79
612
553
529
461, 806
465, 787
471, 777
63
38
19
28
19
14
48.4
48.4
48.4
66
76
82
58
75
78
501
414
217
457
180, 457
191
113
8
8
30
6
6
101.9
73.2
47.6
47.6
47.6
47.6
47.6
62
65
63
79
88
96
100
62
61
61
76
87
97
100
693
693
673
480
451
493, 833
489, 800
486, 800
468
445
51
35
28
10
6
26
15
10
7
6
*Dyno Mili KDL a diferentes tiempos promedios de residencia
** homogeneizador
Adaptada de: Agerkvist y Enfors, 1990
reservados.
5.6 Problemas
5.1.- En estudios de liberacin de protena intracelular en funcin de
la velocidad del agitador empleando un molino de perlas tipo Netzsch
LME 4, con perlas de dimetro entre 0.55 y 0.85 mm , se utiliz una
suspensin celular de concentracin de 50% (peso/volumen), un flujo
de alimentacin de 50 l/h y una carga de perlas del 85 %. Bajo estas
condiciones se obtuvieron los siguientes datos:
rpm
1200
1500
1750
2000
2250
Protena
liberada
(mg/ml)
15.88
22.35
22.90
22.94
23.00
a. Estimar la velocidad ptima para el agitador.
a).- Resp. 1500 rpm
b. Discutir sobre el consumo de potencia del agitador para veloci-
dades superiores a la ptima.
5.2 .- La desintegracin celular intermitente con dos tipos de agita-
dores utilizados en un molino de perlas producen los siguientes datos:
Agitador 1
Tiempo
de residencia
(min)
3
5
10
15
20
25
30
log[fl
m
/(#
m
- R)]
0.037
0.090
0.160
0.225
0.300
0.365
0.437
Agitador 2
Tiempo
de residencia
(min)
3
5
10
15
20
25
30
log[#
m
/(#m - R)]
0.060
0.150
0.225
0.325
0.425
0.525
0.650
5.6. PROBLEMAS 219
a).- Estimar la constante cintica k para cada tipo de agitador,
b. Calcule el tiempo para el cual se obtiene el 80% de rompimiento
con cada tipo de agitador.
a).- Resp. ki = 0.015 min~
l
b).- Resp. t\ = 53.33 min
5.3.- Una suspensin celular que contiene la bacteria gram nega-
tiva Alcaligenes eutrophus, se hace pasar por un homogeneizador APV
Gaulin 15M 8BA con el propsito de estudiar la recuperacin de poli-
(3- hidroxibutirato (PHB) un termoplstico potencial (Harrinson et al
,1990) .
Cuando se opera a una presin constante de 15.2 MPa la constante
k" del homogeneizador toma un valor 5.05 x 10~
4
MPa~
2
-
2
.
a).- Estimar el nmero de pasos necesarios para lograr el 63 % de
rompimiento.
b).- Si la presin de operacin se duplica en cuantos pasos se ob-
tendr el mismo rendimiento.
a).- Resp. 5 pasos.
5.4.- Ha sido reportado (Bjustrom, 1985) que el calor liberado por
compresin adiabtica durante un proceso de homogeneizacin puede
elevar la temperatura de la corriente que entra al homogeneizador 1.5
0
(7
por cada 6.895 MPa de presin de operacin. Calcular cuanto repre-
senta este valor del correspondiente al 100 % de conversin trabajo-
calor.
Resp. 91 %
5.5.- Obtener las ecuaciones (5.15) y (5.16) mediante el desarrollo
descrito en el texto.
5.6.- En un rompimiento celular utilizando un homogeneizador es
posible lograr 80 % de rompimiento bajo las dos diferentes condiciones
siguientes:
Condicin
1
2
Presin (MPa)
90
50
Pasos
1
3
a).- Estimar los parmetros cinticos del homogeneizador.
b).- Comparar la energa por unidad de masa de alimentacin nece-
saria para cada condicin.
c).- Que condicin se recomienda para realizar la ruptura,
a).- Resp. jfc" = 3.56 x 10~
4
MPa~
1
-
87
b).- Resp. 67 % de diferencia.
5.7.- Obtener la ecuacin (5.22) mediante el procedimiento descrito
en el texto .
5.8.- Graficar la distribucin terica de E vs 9 de un molino de
perlas al que se le ha aplicado un pulso de tinta, para valores de TV de
1, 2, 3, 5, 10 y 20, respectivamente.
a).- Indique la forma que adopta la distribucin conforme TV crece.
b).- Como se explica que C pueda ser mayor que CQ.
5.7 Bibliografa
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84,18, 1-21.
Parte III
Concentracin del Producto
Esta parte trata sobre las operaciones de extraccin y c
que son utilizadas para concentrar los producto diluidos de L
biolgicos que son obtenidos en la etapa de separacin de solide
la extraccin como la adsorcin son tcnicas de separacin
selectivas. Sin embargo, la adsorcin cuando se realiza por af
una tcnica de separacin altamente selectiva y necesaria en la
purificacin de productos en los cuales se requiere de una alt<
Captulo 6
Extraccin
6.1 Introduccin
L a extraccin lquido-lquido es una operacin que permite la recu-
peracin de un soluto de una solucin mediante su mezcla con un sol-
vente. El solvente de extraccin debe ser insoluble o soluble en grado
limitado en la solucin que se va a extraer y el soluto a extraer debe pre-
sentar una elevada afinidad por el solvente de extraccin. L a extraccin
lquido-lquido se realiza bsicamente en dos pasos:
- Mezcla ntima del solvente de extraccin con la solucin a procesar.
- Separacin de la mezcla en dos fases lquidas inmiscibles.
L as sustancias que componen la solucin original se distribuyen de
diferente forma entre las dos fases lquidas y se logra un cierto grado
de separacin, mismo que puede incrementarse mediante el contacto
sucesivo entre los dos lquidos.
En las operaciones de extraccin la solucin de la que se va a ex-
traer el soluto se llama alimentacin y el lquido con el cual se pone en
contacto la alimentacin se denomina solvente. El producto de la ope-
racin rico en solvente se llama extracto y el lquido residual de donde
se separ el soluto es el refinado.
En muchos procesos tradicionales de la Ingeniera Qumica la opera-
cin de separacin ms usada es la destilacin debido a su simplicidad.
228 CAPTULO ti.
Sin embargo, en muchas bioseparaciones la destilacin no puede ser
utilizada debido a la sensibilidad de los productos a la temperatura, a
su baja volatilidad y a las concentraciones tan bajas que se manejan.
L a extraccin es una tcnica de separacin que posee algunas ven-
tajas que la hacen atractiva para los procesos de bioseparacin. Entre
ellas se encuentran la vasta experiencia y desarrollo tecnolgico alcan-
zado en muchos aos, as como tambin la relativa facilidad con que se
pueden escalar los procesos extractivos.
L a extraccin agua-solvente orgnico se emplea ampliamente en la
industria de los antibiticos, mientras que la extraccin que utiliza dos
fases acuosas inmiscibles se utiliza para concentrar protenas y separar
componentes biolgicos. L a extraccin tambin puede ser usada para
remover impurezas de una corriente.
En este captulo en la seccin 6.2 se abordan los aspectos funda-
mentales de la extraccin. L os equipos ms utilizados para realizar
operaciones de extraccin se presentan en la seccin 6.3, y los aspectos
bsicos del diseo de extractores intermitentes y continuos se revisan
en la seccin 6.4.
L a operacin de extraccin implica el uso de tres tipos de sustancias
cuando menos: el soluto de inters y los componentes puros de cada una
de las dos fases. L a interaccin de estos componentes y/o la presencia
de ms solutos o solventes genera cierto grado de complejidad de la
operacin.
El establecimiento de los aspectos termodinmicos bsicos de la ex-
traccin permiten visualizar algunos caminos que contribuyen a realizar
esta operacin en forma ms racional, particularmente contribuyen a
una seleccin adecuada del solvente de extraccin y de las condiciones
de operacin.
L os principios bsicos de la extraccin convencional lquido-lquido
pueden ser extendidos a los sistemas de extraccin de dos fases acuosas
inmiscibles que son ms empleados en la recuperacin de protenas y
en la separacin de algunas sustancias biolgicas.
En base a lo anterior esta seccin se centra en cuatro aspectos:
Tipos de sistemas de extraccin lquido-lquido.
Qumica de la extraccin.
Seleccin del solvente.
Sistemas de dos fases acuosas inmiscibles.
6.2.1 Tipos de Sistemas de Extraccin Lquido-
Lquido
L os sistemas de extraccin existentes presentan diferente grado de com-
plejidad debido principalmente a lo siguiente:
- L as fases pueden ser completamente o parcialmente miscibles. En
este ltimo caso, las relaciones de equilibrio y los balances de
masa necesarios para el diseo de los equipos son ms complejos.
- L a presencia de otros solutos diferentes al soluto de inters.
- L a naturaleza de las fases. En la extraccin convencional lquido-
lquido generalmente una fase es acuosa y la otra la constituye
un solvente orgnico. Otros sistemas emplean dos fases acuosas
inmiscibles.
En este captulo se analiza bsicamente los aspectos de la extraccin
en sistemas de un soluto diluido en dos fases inmiscibles y la extraccin
en dos fases acuosas.
i
6.2.2 Qumica de la Extraccin Lquido-Lquido
L a extraccin de un soluto desde el agua a una fase no polar, in-
volucra con frecuencia interacciones hidrofbicas. L as interacciones
hidrofbicas son responsables de un gran nmero de fenmenos fsicos
en soluciones acuosas. An en ausencia de interacciones especficas, le
transferencia al solvente de un soluto no polar desde el agua, es favore
cida debido al incremento en la entropa asociada con el desorden de
agua.
6.2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIN 229
Tipos de sistemas de extraccin lquido-lquido.
Qumica de la extraccin.
Seleccin del solvente.
Sistemas de dos fases acuosas inmiscibles.
6.2.1 Tipos de Sistemas de Extraccin Lquido-
Lquido
L os sistemas de extraccin existentes presentan diferente grado de com-
plejidad debido principalmente a lo siguiente:
- L as fases pueden ser completamente o parcialmente irascibles. En
este ltimo caso, las relaciones de equilibrio y los balances de
masa necesarios para el diseo de los equipos son ms complejos.
- L a presencia de otros solutos diferentes al soluto de inters.
- L a naturaleza de las fases. En la extraccin convencional lquido-
lquido generalmente una fase es acuosa y la otra la constituye
un solvente orgnico. Otros sistemas emplean dos fases acuosas
inmiscibles.
En este captulo se analiza bsicamente los aspectos de la extraccin
en sistemas de un soluto diluido en dos fases inmiscibles y la extraccin
en dos fases acuosas.
6.2.2 Qumica de la Extraccin Lquido-Lquido
L a extraccin de un soluto desde el agua a una fase no polar, in-
volucra con frecuencia interacciones hidrofbicas. L as interacciones
hidrofbicas son responsables de un gran nmero de fenmenos fsico
en soluciones acuosas. An en ausencia de interacciones especficas, le
transferencia al solvente de un soluto no polar desde el agua, es favore
cida debido al incremento en la entrop a asociada con el desorden de
agua.
230 CAPTULO 6. EXTRACCIN
Cuando un soluto es repartido entre dos fases E y R formando
soluciones diluidas, al alcanzarse el equilibrio los potenciales qumicos
del soluto en ambas fases son iguales, es decir:
(6.1)
El potencial qumico de las fases est dado por:
H(R) + RT ln A
R
= fi(E) + RT In A
E
(6.2)
donde AE y AR son las actividades del soluto en las fases E y
R respectivamente, R es la constante .de los gases ideales y T es la
temperatura.
En el caso de soluciones diluidas ideales la concentracin es una me-
dida apropiada de la actividad, de tal manera que la ecuacin anterior
se puede escribir como:
/jf(R) + RT ln y = fjf(E) + RT ln x (6.3)
En extraccin se define el coeficiente de particin como la relacin
de las concentraciones de soluto en el equilibrio, es decir:
K, = (6.4)
donde:
K
p
es el coeficiente de particin, x es la concentracin de soluto en
la fase ligera J5, o fase rica en solvente y y es la concentracin de soluto
en la fase pesada R, o fase correspondiente a la alimentacin.
L a ecuacin (6.4) es conocida como L ey de la distribucin de Nerst
y establece que en el equilibrio existe una relacin constante de las
actividades del soluto en las dos fases para una temperatura dada.
L a ecuacin (6.3) puede escribirse como:
(6.5)
o bien como:
(6.6)
Tabla 6.1: Coeficientes de particin para algunos solutos de inters.
Compuesto Tipo
Aminocidos
Antibiticos
Protenas
Soluto
Glicina
L isina
Ac. Glutmico
Celesticetina
Eritromicina
Novobiocina
Penicilina F
Penicilina K
Glucosa
isomerasa
Catalasa
Solvente
n-butanol/agua
n-butanol/agua
n-butanol/agua
n-butanol/agua
Amil acetato/agua
Butil acetato/agua
Amil acetato/agua
Amil acetato/agua
PEG 1550/fosfato
de potasio
PEG/dextrano crudo
K
p
0.01
0.20
0.07
110.00
120.00
0.04
100.00
0.01
32.00
0.06
12.00
0.10
3.00
3.00
Observa-
ciones.
25C
a pH 7.0
apH 10.5
a pH 4.0
a pH 6.0
a pH 4.0
a pH 6.0
Adaptada de: Belter ei al, 1988.
reservados.
donde AG es cambio en energa libre en el estado estndar. El
logaritmo natural del coeficiente de particin K
p
es proporcional a la
diferencia de los potenciales qumicos en los estados estndar de las
fases puras.
En la Tabla 6.1 se muestran los valores del coeficiente de particin
K
p
para algunos solutos de inters en sistemas especficos.
Debido a la importancia del equilibrio };ermodinmico es conveniente
puntualizar las propiedades del coeficiente de particin en la extraccin.
- El coeficiente se define slo en un punto de equilibrio. No se aplica
a todas las concentraciones posibles de encontrar en un sistema,
sino nicamente en el equilibrio verdadero. En este sentido nc
debe confundirse con la constante de equilibrio del sistema.
El coeficiente de particin vara con el nivel de concentracin de
equilibrio.
- Para sistemas diluidos el coeficiente de particin puede considerarse
constante e igual a la constante de equilibrio.
- L a constante K
p
a una temperatura dada, es independiente de la
concentracin o presin global del sistema.
- L a magnitud de la constante K
p
, determina la extensin a la cual pro-
ceder una extraccin particular bajo condiciones establecidas.
Un valor alto de K
p
indica que en el equilibrio la concentracin
de soluto en el extracto es mayor que en el refinado.
- L os valores de K
p
deben ser determinados experimentalmente.
Cuando se grfica el potencial qumico \i contra la concentracin
de soluto en la fase ligera x (Figura 6.1), en condiciones tales que una
pequea cantidad de fase ligera E est en equilibrio con un exceso
de fase pesada R, se tiene lo siguiente: debido a que R est presente
en exceso, el potencial qumico f(R) es constante, mientras que /(E)
vara con la concentracin x. En la interseccin de //(-") y 1(R) se
puede localizar la concentracin x, en equilibrio, de soluto presente en
E.
Cuando la concentracin x aumenta, f(E] aumenta y se aproxima
a f(E). Entonces se puede establecer que los cambios en el tipo de
solvente cambian la concentracin x en equilibrio. Por ejemplo, para
el solvente 1 la concentracin de equilibrio es x\ y para el solvente 2
la concentracin de equilibrio es #2, entonces se puede concluir que el
solvente 2 favorece esta extraccin.
No slo los cambios en el tipo de solvente pueden mejorar la ex-
traccin, sino tambin los cambios en el soluto que afecten su potencial
qumico fj,(E).
Cambios en el Solvente
L o primero que puede hacerse para mejorar un sistema de extraccin
es cambiar el solvente de extraccin, esto es, elegir uno cuyo potencial
qumico en el estado estndar est ms prximo a ^(R). Desafortuna-
damente esto no es fcil de lograr debido a que la teora termodinmica
Fraccin mol de soluto (x)
en fase ligera
Figura 6.1: Comportamiento del potencial qumico en funcin de la
concentracin x de soluto.
no puede predecir con segundad los potenciales qumicos para determi-
nar el mejor solvente. Sin embargo, es posible utilizar enfoques aproxi-
mados para estimar 1(E) utilizando parmetros de solubilidad, en el
clculo de coeficientes de particin . De acuerdo con esto, el coeficiente
de particin K
p
dado por la ecuacin (6.4) puede ser expresado como:
donde V son los volmenes molares parciales del solvente pesado
/?, el solvente ligero E, y el soluto A respectivamente, y Si son los
parmetros de solubilidad correspondientes.
El grado de disolucin de slidos en lquidos vara considerablemente
con la naturaleza del slido y del lquido, la temperatura y en grado
menor con la presin. En todos los casos el lmite de solubilidad es
la saturacin. En un sistema de un solvente y un soluto particular,
la concentracin de saturacin a una temperatura y presin dadas es
constante y no depende de la manera en que se prepara la solucin.
L a influencia de la temperatura sobre la solubilidad de un soluto
en un solvente particular es generalmente muy pronunciada, debido a
que la mayora de las sustancias absorben calor al disolverse y son ms
solubles a una temperatura elevada.
Para estimar el parmetro de solubilidad del soluto de inters u,
es necesario realizar dos extracciones con diferente solvente cada una
de ellas y cuyas solubilidades Si sean conocidas. Una vez determinado
8 se pueden estimar los coeficientes de particin para nuevos solventes
a partir de los valores Si conocidos. Estas son slo estimaciones que
pueden servir de gua para nuevos experimentos. En la Tabla 6.2 se
muestran los parmetros de solubilidad para algunos solventes.
Cambios en el Soluto
Cuando no es factible cambiar el solvente para mejorar una extraccin
ya sea por razones econmicas o tcnicas, entonces es necesario ver
la posibilidad de realizar cambios en el soluto. Dado que el soluto es
el producto que se desea obtener mediante la extraccin, los posibles
cambios deben ser de carter reversible.
FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIN 235
Tabla 6.2: Parmetros de solubilidad para algunos solventes.
Solvente
Amilacetato
Disulfuro de carbono
Tetracloruro de carbono
Cloroformo
Ciclohexano
Tolueno
Agua
8 (ca/
1
/
2
era
8.0
10.0
8.6
9.2
8.2
8.9
9.4
-3/2)
Cambios en el Soluto por Pares de Iones.- L os cambios en c
soluto dependen del comportamiento inico que ste pueda tener. Si <
soluto tiene comportamiento inico y es posible encontrar un materi
que permita suprimir esta ionicidad sin alterar el soluto, entonces 1
unin del soluto a este material permitir aumentar la solubilidad d<
soluto en el solvente de extraccin.
L os cambios a solutos empleando contraiones se basan en el hech
de que un soluto que es inico en el agua, formar un par-in sin carg
neta en un solvente orgnico.
Esta formacin de par-in se puede ejemplificar de la siguiente m,
era: Si de una solucin acuosa de cloruro de tetrabutilamonio se extr;
el catin utilizando cloroformo, se tiene:
_ [N(C
4
H
9
) en cloroformo] _
g )4 en ag ua]
(6.
Si se agrega acetato de sodio a la solucin acuosa de cloruro <
tetrabutilamonio y se realiza nuevamente la extraccin, se encuentra
en cloroformo]
en ag ua]
= 132 (6.
Puede observarse que en el primer caso se extrae una solucin dilu
de par - ion de N(C^H^]\Cl" y que en el segundo caso, se obtiene u
Tabla 6.3: Contraiones tpicos usados en extraccin por pares de iones.
Ion
Acetato
Butirato
Tetrabutil-
amonio
Hexadecil-
tributilamonio
Perfluor-
octanato
Dodecanato
L inolato
Tetrafenil-
boruro
Estructura Qumica
CH
3
COO-
CH
3
(CH
2
)2COO-
(C4#9)4W-
CH
3
(CH
2
)
1&
(dH
9
)
3
N+
CF
3
(CF
2
)
6
COO~
CH
3
(CH
2
)
10
COO-
CH
3
(CH
2
)tCH = CHCH
2
CH = (CH
2
)
7
COO-
B(C
6
H
5
)
4
~
Observaciones
Simple, no es muy
soluble en sol-
ventes orgnicos.
Ms soluble en
solventes orgnicos
que el Acetato.
Slido
Puede formar
ncelas.
Puede permanecer
inico en solventes
orgnicos.
Puede formar
ncelas.
Puede formar
cristales lquidos.
Puede degradarse
en varios
solventes.
Adaptada de: Belter ef al, 1988.
reservados.
solucin ms concentrada de par - ion de CH^COO
El empleo de pares inicos, requiere de la seleccin de contraiones
solubles en la fase no polar. Este tipo de sustancias se conoce como
sales grasas y se listan en la Tabla 6.3
Cambios en el Soluto por pH.- Algunos productos que son de in-
ters biotecnolgico como las protenas o los constituyentes de stas los
aminocidos, son sensibles a cambios en el pH por lo que el conocimiento
y comprensin de las propiedades cido - bsicas de los aminocidos es
sumamente importante en las bioseparaciones de protenas. Muchos de
los solutos.que se desean aislar son cidos o bases dbiles, su extraccin
puede ser fuertemente afectada por cambios en el pH.
Un cido dbil puede ionizarse parcialmente en agua y no ionizarse
significativamente en un solvente orgnico.
El cido dbil RCOOH, en solucin acuosa, se disocia de la siguiente
manera:
RCOOH ^ RCOO- + //+
as que su constante de disociacin K
a
est dada por:
[RCOO-)
R
[H+]
R
[RCOOH]
R
(
'
Cuando este cido dbil se distribuye entre dos fases, una orgnica
E y una acuosa R, el coeficiente de particin aparente agrupa las con-
centraciones de la forma ionizada y no ionizada del cido en la fase
acuosa. Este coeficiente de particin se expresa como:
[RCOOH}
B
" [RCOOH}
R
+ [RCOO-]
R
(
'
donde K{ es el coeficiente de particin intrnseco de las especies no
ionizadas definido por:
_ [RCOOH}
E
Ki
~ [RCOOH]
R
(6J3)
se sabe que pK
a
logA^, entonces si se combinan las ecuaciones
(6.12) y (6.13) se obtiene:
log
10
K
r
-}-l\=pH-pK
a
(6.14)
En la Tabla 6.4 se muestran los valores de pK
a
para algunos solutos
de inters biolgico.
El desarrollo anterior para el caso de una base dbil es anlogo y
conduce a:
(6-15)
L as ecuaciones (6.14) y (6.15) muestran que el coeficiente de par-
ticin puede ser alterado cambiando el pH de la solucin acuosa. L os
cambios en el coeficiente de particin pueden ser usados tambin para
seleccionar el pH al que debe extraerse preferentemente un soluto de-
terminado. Para dos soluto A y B la selectividad de la separacin est
dada por /?, donde:
K
r
(B)
(6.16)
es un indicador del grado de pureza que se puede lograr en un sis-
tema de extraccin determinado.
Ejemplo 6.1.- Disociacin de cido propinico.
El pH de una solucin 0.1 M de cido propinico es de 2.935. De-
terminar:
a).- L a constante de disociacin aparente K
a
.
b). El pK
a
del cido.
c).- El grado de disociacin del cido.
Solucin:
a).- L a constante de disociacin de un cido est dada por la ecua-
cin (6.10), en este caso se tiene que:
_ [ //+] (CH
3
- CH;\
^-a
[CH
3
- CH
2
- COOH]
dado que la concentracin de la solucin es de 0.1 M,
[ C//3 - CH
2
- COOH} + [ //+] - 0.1 M
y a un pH de 2.935, la concentracin de H
+
es
[ //+] = -^ = 1.16 x 10~
3
M
L J
Tabla 6.4: V alores de pK
a
para algunos solutos biolgicos.
Bases y cidos Simples
Compuesto
+ Acido Actico
+ H
3
P0
4
+ CH
3
NH+
pKa
4.76
2.14
10.6
Aminocidos
Compuesto
+ L eucina
-f Histidina
+ L isina
pKi
COOH
2.36
1.82
2.18
pK-2
aNH+
9.6
9.17
8.95
pKs
Grupo R
6.0
10.53
Pptidos
Compuesto
+ Gly-Gly
-I- Ala
-f Gly-Asp
-f Ala-Ala-L ys-Ala
pffi
COOH
3.06
2.34
2.81
3.58
pKi
aNH+
8.13
9.69
8.60
8.01
- pK
3
Grupo R
4.45
10.58
Antibiticos
Compuesto
+ Cefalosporina C
4- L incomicina
(base libre)
4- Penicilamina
(carboxil)
pK'a*
3.9
7.6
1.8 ,
5.3 10.5
Adaptada de Belter, P.A. et a/, 1988.
reservados.
de tal manera que:
[ C//3 - CH
2
- COOH] = 9.88 x 10~
2
M
sustituyendo en (6.10) estos resultados se obtiene:
(1.16 x 1Q-
3
M) (1.16 xlQ-
3
M)
a
~~ 9.88 x 10-
2
M
K
a
= 1.36 x 10~
5
M
b).- De acuerdo a la definicin de pK
a
->
pK
a
= log(-)
pKa =
pK
a
= 4.87
c).- El grado de disociacin es igual a la concentracin de cido
disociado entre la concentracin inicial de cido, de tal manera que:
Ejemplo 6.2.- Separacin de dos tipos de penicilina.
En el sistema agua-amilacetato la penicilina "K" y la penicilina "F"
tienen valores de K de 215 y 131, respectivamente. Sus pK
a
's son de
2.77 y 3.51.
Si se desea recuperar penicilina "F", determinar como se alcanza
mayor pureza del producto: Si se extrae a pH 3.0 o a pH 4.0.
Solucin:
L a selectividad de la extraccin est dada por la ecuacin (6.16).
Para aplicar esta ecuacin es necesario calcular primero K
p
mediante la
ecuacin (6.14), para cada penicilina a cada uno de los pH's de inters.
Para la penicilina "K" a un pH de 3.0 se tiene:
log
10
- 1 = pH -
P
K
a
= 3.0 - 2.77 - 0.23
por lo tanto:
K
p
(
u
K
n
) = 79.68
Para la penicilina "F" a un pH de 3.0 se tiene:
K \
log
10
por lo tanto:
se tiene entonces que:
= pH -
P
K
a
= 3.0 - 3.51 = -0.51
K
P
(F") = 100.0
K
P
("F") 100.0
A
^("/n 79.68
= L 26
El clculo de /fp para las dos penicilinas a pH = 4.0 se realiza de
manera similar, encontrndose para este caso que:
A=2.67
L os resultados obtenidos para las dos penicilinas con los pH's res-
pectivos se muestran en la siguiente Tabla:
P
H
3.0
4.0
K
P
("K)
79.68
12.00
K
P
(
U
F)
100.00
32.00
' o_ A'pC'F")
P ~ K
P
("K")
1.3
2.7
Estos resultados indican que si la extraccin se realiza a un pH = 4
se obtiene la penicilina "F" en forma ms pura, an cuando la ex-
traccin es ms difcil dado que el A^C'/
7
"') = 32 es menor que el
correspondiente al pH=3.0.
Tabla 6.5: Criterios utilizados en la seleccin de solventes.
Selectividad.
Coeficiente de particin adecuado para el producto.
Grado de solubilidad.
Facilidad de recuperacin.
Densidad.
Tensin superficial.
Estabilidad para el soluto.
Inocuo
6.2.3 Seleccin del Solvente
En la operacin de extraccin generalmente es posible seleccionar el tip
de solvente que se va emplear para realizar la extraccin ( Mattiasso
y L ing, 1989). Para tomar esta decisin es conveniente considerar h
siguientes caractersticas (Tabla 6.5) del solvente:
Selectividad.- En el caso de que se desee adems de concentrar logn
un cierto grado de purificacin, el solvente debe ser selectivo pai
el soluto de inters.
Coeficiente de particin.- Entre mayor sea el coeficiente de partici
menor es la cantidad necesaria de solvente.
Grado de solubilidad.- Entre ms insoluble sea el solvente en la a
mentacin, la extraccin se realizar ms fcilmente.
Facilidad de recuperacin.- Por cuestiones econmicas es necesario qi
el solvente pueda ser recuperado para su reutilizacin.
Densidad.- L a separacin de las fases una vez que se efecta la e
traccin, es ms rpida entre mayor sea la diferencia de densid.
entre las fases.
Tensin superficial.- Un solvente con una tensin superficial alta, fa-
cilita la coalescencia de las emulsiones, en la separacin de las
fases.
Estabilidad para el soluto.- El solvente no debe alterar al producto.
Otras.- El solvente debe ser inocuo, esterilizable, no-inflamable, barato
y disponible en las cantidades deseadas.
6.2.4 Extraccin en Dos Fases Acuosas Inmisci-
bles
Cuando se opera con sistemas biolgicos hay un nmero limitado de
solventes que pueden ser usados en los procesos de extraccin, esto es
debido a que algunas de las biomolculas de inters como las protenas,
son desnaturalizadas por los solventes orgnicos (Mattiasson y Rajni,
1991). Una tcnica de bioseparacin que preserva la actividad de las
biomolculas, en este caso de las protenas, es la extraccin en sistemas
de dos fases acuosas inmiscibles (SDFA).
En la Tabla 6.6 se listan algunos sistemas que pueden ser usados
para formar sistemas de dos fases acuosas. En general los sistemas de
dos fases acuosas se pueden clasificar en dos tipos:
- L os sistemas polmero-polmero.
- L os sistemas polmero-sal.
L os sistemas de dos fases acuosas inmiscibles polmero-polmero se
forman cuando dos polmeros como el polietilen-glicol (PEG) y el dex-
trano (un carbohidrato) se mezclan en presencia de agua. En el caso
de los sistemas polmero-sal, el sistema se forma por la mezcla en agua
de un polmero y una sal como el fosfato de potasio. El hecho comn
de estos sistemas es que ambas fases son acuosas, el contenido de agua
de cada fase vara entre 85 y 99 %.
L os sistemas de dos fases se caracterizan por presentar una baja
tensin interfacial en el rango de 0.0001 a 0.1 d7ia/an. El tiempo de
sedimentacin (separacin de las fases) slo por accin de la gravedad es
Tabla 6.6: Sistemas de dos fases acuosas.
Componente 1
Polietilen-glicol
Polietilen-glicol
Polietilen-glicol
Polietilen-glicol
Ficoll
Componente 2
Dextrano
Hidroxipropil de almidn
Fosfato de potasio
Sulfato de potasio
Dextrano
Referencia
Albertsson (1986)
Tjerneld (1986)
Albertsson (1986)
Albertsson (1986)
Albertsson (1986)
Fuente: Albertsson et a/, 1990.
vados.
de 5 min a varias horas debido a la pequea diferencia de densidades y a
la relativamente alta viscosidad entre las fases. El tiempo de separacin
puede reducirse utilizando centrifugacin a baja velocidad (Albertsson
et al, 1990).
El hecho de que ambas fases sean acuosas y tengan una tensin
interfacial tan pequea, proporciona un medio ambiente tal que permite
que las biomolculas y partculas celulares puedan repartirse entre las
fases conservando su actividad (Diamond y Hsu, 1990).
L a extraccin en SDFA es un proceso sumamente atractivo para
la separacin de enzimas y protenas de inters biotecnolgico debido
principalmente a que:
- El escalamiento es sencillo y puede realizarse a partir de datos de
laboratorio en forma confiable, dado que el coeficiente de particin
no vara con la escala.
- L a transferencia de masa es alta y el equilibrio se alcanza con poca
energa de mezclado.
- Se puede realizar en forma continua.
- L os polmeros le confieren estabilidad a las protenas.
6
.2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIN 245
15-
10.
O 5 10 15
% (w/w) Dextrano
Figura 6.2: Curva binodal para un sistema de dos fases acuosas inmis-
cibles PEG 3400/Dextrano T-5000/Agua. Adaptada de: Huddleston
et al, 1991
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1991. Todos los derechos reser-
vados.
- L a separacin puede ser selectiva y rpida.
- L a separacin puede efectuarse a temperatura ambiente debido a su
rapidez.
- Es ms econmica que otros procesos.
Diagramas de Fases
L os sistemas de dos fases acuosas pueden ser caracterizados mediante
diagramas de fases nicos donde se granean la composicin de las fases
en el equilibrio. L a Figura 6.2 muestra un diagrama de fases para el
sistema PEG 3400/Dextrano T-5000/Agua. L a curva binodal carac-
terstica de estos sistemas pasa por los puntos DPC.
- El punto P representa el punto crtico y es el punto donde terica-
mente la composicin y los volmenes de ambas fases son iguales.
- El punto A se sita en una regin a la izquierda de la curva binodal
donde el sistema consta de una sola fase.
- El punto B se localiza en una regin donde coexisten las dos fases
y representa la fraccin peso de cada uno de los componentes de
una mezcla formada por fases de composicin C y D.
- L as lineas como la CBD se conocen como lineas de unin.
Si se considera la linea de unin que pasa por los puntos Ql, Q2
y Q3, todos los puntos estn formados por fases de igual composicin,
pero en diferente proporcin de volumen.
L a proporcin de volmenes de las fases conjuntamente con el coe-
ficiente de particin constituyen un factor de diseo fundamental de la
extraccin. L a proporcin de volmenes de las fases puede obtenerse
grficamente utilizando balances de masa. Considrese la linea CBD
de la Figura 6.2 y sea:
M: Masa total del sistema de dos fases. [ M] .
ME'- Masa de la fase rica en PEG. [ M] .
MR: Masa de la fase rica en dextrano. [ M] .
qE'. Fraccin masa de PEG en fase rica de PEG. [ Adim.j.
PE'- Fraccin masa de dextrano en fase rica de PEG. [ Adim.] .
qpt: Fraccin masa de PEG en fase rica de dextrano. [ Adim.] .
PR: Fraccin masa de dextrano en fase rica de dextrano. [ Adim.] .
entonces el balance de masa total del sistema es:
M = M
E
+ M
R
(6.17)
el balance de PEG es:
$.2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIN 247
Mq
M
= M
E
qE + M
R
q
R
(6.18)
combinando las dos ecuaciones anteriores se obtiene:
R q
E
- qM
L a diferencia de fracciones masa de la ecuacin anterior puede en-
contrarse grficamente en la Figura 6.2. Asimismo por tringulos se-
mejantes se puede demostrar que:
=
BC
donde BD y BC son las longitudes de los segmentos entre los puntos
respectivos.
Cuando la densidad de las fases es muy prxima, la relacin de
volmenes de las fases est dada por:
f = (6.21)
R BC
donde E y R son los volmenes de la fase superior e inferior, res-
pectivamente.
Comportamiento de las Fases
El comportamiento de un sistema polmero A-polmero B-agua, de-
pende de las interacciones entre las molculas presentes. Estas inter-
acciones pueden ser puentes de hidrgeno, fuerzas de van der Waals
o inicas, interacciones dipolo-dipolo e interacciones hidrofbicas. En
un sistema pueden presentarse simultneamente varios tipos de estas
interacciones dependiendo del tipo de polmeros que formen el sistema.
L os polmeros que se utilizan para los SDFA se caracterizan por su
capacidad para formar puentes de hidrgeno con el agua, de tal mane-
ra que las interacciones polmero A- polmero B estn en competencia
con las interacciones polmero A-agua, polmero B-agua. Si las inter-
acciones polmero-agua son ms fuertes que las interacciones polmero-
polmero, entonces estas ltimas son menos frecuentes. Entonces se for-
248
CAPTULO 6. EXTRACCIN
man regiones en cada uno de los polmeros que estn estadsticamente
excluidas de interaccionar.
Este efecto de regiones excluidas de los polmeros produce la se-
paracin de fases en la mayora de los sistemas de dos fases acuosas
polmero-polmero. L os polmeros que se repelen debido a este efecto
se denominan polmeros incompatibles.
En el caso de los sistemas polmero-sal-agua la segregacin de las
fases se puede deber al grado de hidratacin del grupo ter del PEG.
Un estado de equilibrio se caracteriza por presentar energa de Gibss
mnima a una temperatura, presin y composicin dadas. En un sis-
tema de dos fases acuosas la separacin de fases ocurre en aquellas
mezclas cuya energa de Gibss es menor cuando el sistema existe como
dos fases que cuando permanece como una. El criterio de equilibrio
puede ser expresado tambin en trminos de los potenciales qumicos
//,- de los componentes como:
= 1,2,. ..TV (6.22)
donde la prima (') y la doble prima ("), representan la fase superior y
la fase inferior respectivamente, y N es el nmero total de componentes.
Existen varios modelos que tratan de explicar el comportamiento
terico de la particin o distribucin de las protenas en los sistemas
de dos fases acuosas a partir de considerar una serie de factores que
afectan la particin de este tipo de soluto en el equilibrio.
Factores que Afectan al Coeficiente de Particin
L os estudios empricos realizados en sistemas de dos fases acuosas han
mostrado que la particin de protenas es una funcin compleja que de-
pende de factores tales como: hidrofobicidad, tamao molecular, con-
formacin molecular, bioespecificidad de la protena, electroqumica,
pH, concentracin del buffer, fuerza inica, temperatura y concen-
tracin de la protena (Baskir et a/, 1989).
En general la particin de protenas en sistemas de dos fases est
definida por el coeficiente de particin
K- ~~ (6.23)
donde [P]i y [ P]
2
son las concentraciones de soluto en este caso
protena en las fases 1 y 2, respectivamente. Esta ecuacin es equiva-
lente a la ecuacin (6.4).
Debido a la dependencia del coeficiente de particin K
p
de los fac-
tores arriba mencionados, ste se puede expresar como el producto de
varias contribuciones:
K
p
= K K
dq
K
hf
K
bioe
K
am
K
conf
(6.24)
donde los subndices: elq, /i/, bioe, am, y conf, indican las con-
tribuciones que sobre el coeficiente de particin tienen las propieda-
des electroqumicas, hidrofbicas, de bioespecificidad, tamao y con-
formacin, respectivamente, entre el soluto y los polmeros que forman
las fases. K incluye otros factores tales como la solvatacin del soluto
en las fases. Es til expresar el coeficiente de particin en la forma
logartmica de la ecuacin (6.50) misma que se puede escribir como:
In K
p
= ln K + In K
elq
+ In K
h
+ In K
bioe
+ In K
tam
+ ln K
conf
(6.25)
A continuacin se describe el efecto especfico de algunos de es-
tos parmetros sobre el fenmeno de particin en dos fases acuosas
(Figura 6.3).
Tamao de las Biomolculas.- L as molculas pequeas como
los aminocidos se distribuyen uniformemente entre las fases. Con las
partculas ms grandes la particin no es tan uniforme, de tal manera
que las protenas grandes tienden a repartirse menos uniformemente que
las protenas pequeas (Figura 6.4). L as molculas de peso molecular
muy grande como el ADN y los virus se reparten casi por completo
en una sola fase. Sin embargo, las partculas extremadamente grandes
como las clulas, se distribuyen entre la interfase y una de las fases o
pueden agruparse completamente en la interfase (Baskir et a/, 1989).
Peso Molecular de los Polmeros.- El peso molecular de los
polmeros utilizados en los sistemas de dos fases, tiene inf luencia sobre
el reparto del biomaterial debido a que altera la composicin de las
fases y cambia el nmero de interacciones protena - polmero.
El coeficiente de particin de una protena en un sistema dextra-
no/polietilen-glicol se incrementar si el peso molecular del polietilen-
Caractersticas del
Sistema:
1. Incrementar el pH arriba del Pl
2. Incrementar el peso molecular
del Dextrano.
3. Promover interacciones especficas.
4. Reducir el peso molecular del PEG.
PEG
Caractersticas de la Protena
de inters.
1. Incrementar los residuos hidrofbicos
2. Disminuir el nmero de cadenas
laterales amino.
3. Incrementar el nmero de cadenas
laterales carboxilo.
Se incrementa Kp
Disminuye Kp
1. Reducir el peso molecular
del Dextrano.
2. Disminuir el pH del sistema abajo del Pl
3. Incrementar el peso molecular del PEG
1. Disminuir los residuos hidrofbicos.
2. Disminuir el nmero de cadenas
laterales carboxilo.
3. Incrementar el nmero de cadenas
laterales amino.
Figura 6.3: Factores que afectan al coeficiente de particin. Adaptada
de: Huddleston ti a/, 1991.
vados.
2 0-
1.0-
0.1
0.05
Ovalbumina
a-Amilasa (bactarial)
sozima
(pollo y pavo)
ABS
Transf errina
(humana)
Papana
Tripsina
a-Quimiotrpsina
ft Galactosidasa
(d* EcoiiVM y WL)
50
PMxIO "
Figura 6.4: Efecto del peso molecular de las biomolculas en el coefi-
ciente de particin de una enzima. Fuente: Baskir, 1989.
reservados.
1.5 :
0.5 .
Composicin del Sistema
12 % de O xido de Polietilen Glicol ( O PE )
1 X de Dextrano ( Dx ) T- 500
10000 20000 30000
Peso Molecular del OPE
40000
Figura 6.5: Efecto del peso molecular de los polmeros en el coeficiente
de particin. Fuente: Baskir et a/, 1989.
reservados.
glicol se reduce o el peso molecular del dextrano se incrementa. In-
versamente, la particin de la protena decrecer si el peso molecular
del polietilen-glicol se incrementa o el peso molecular del dextrano se
reduce.
L as protenas con peso molecular elevado son ms influenciadas por
cambios en el peso molecular de los polmeros que las de peso molecular
bajo, como se muestra en la Figura 6.5. Consecuentemente, pueden
utilizarse polmeros de diferente peso molecular para optimizar la se-
paracin de protenas de diferente tamao (Albertsson et al, 1990).
Carga de la Protema.- Muchas protenas y enzimas contienen
un gran nmero de grupos cargados o que pueden cargarse en solucin
variando el.pH. Estos grupos generalmente tienen diferentes valores de
pK. Cuando el pH de la solucin cambia desde valores cidos a bsicos,
la protena incrementa su carga negativa y/o reduce su carga positiva.
Cuando la protena est en su pH isoelctrico, la. suma de todas las
6,2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIN 253
cargas es cero. En todos los dems pH's la protena tiene una carga
neta.
Con frecuencia se observa que cuando se agregan sales a un sistema
de dos fases en concentraciones entre 100 y 200 mM, se crea una dis-
tribucin de diferencia de potencial entre las fases. Esta diferencia de
potencial resulta de las preferencias de los diferentes iones de la sal por
las diferentes fases lo que puede afectar fuertemente la particin de las
biomolculas cargadas .
El pH de la Solucin.- Adems de los efectos del pH mencionados
en el prrafo anterior, los cambios en el pH pueden inducir tambin
cambios conformacionales en la estructura de la protena que alteran
su particin.
Concentracin de la Protena.- Si la concentracin de la prote-
na permanece baja (un orden de magnitud ms baja que la concentra-
cin del polmero), sta no afecta significativamente al coeficiente de
particin. Sin embargo, a altas concentraciones de protena es posible
que la concentracin afecte el coeficiente de particin ya que pueden
alterarse significativamente las propiedades del sistema. L as protenas
pueden inclusive formar fases separadas si su concentracin es suficien-
temente alta.
Modelos para el Coef iciente de Particin en Sistemas de Dos
Fases
Existen varios desarrollos para obtener modelos que permitan predecir
el coeficiente de particin en un sistema dado, de los cuales se presentan
tres a continuacin.
Modelo Emprico de Bronsted.- El primer modelo sobre la par-
ticin de partculas en sistemas de dos fases acuosas fue propuesto por
Bronsted (Baskir et a/,1989) , quien desarroll una relacin aproximada
para describir el efecto del tamao de la partcula sobre el coeficiente
de particin. Esta relacin es:
K
p
= exp (6.26)
donde:
M: Peso molecular de la partcula que se particiona.
[ M/mol] .
/c: Constante de Boltzmann
T: Temperatura absoluta.
A: Constante que expresa tanto las caractersticas de las fases como
las de la partcula que se particiona.
L a ecuacin (6.26) muestra que tan sensible puede ser el coeficiente
de particin al tamao de la partcula, pero no considera la influencia
de otros factores sobre el mismo coeficiente.
Modelos Termo dinmicos Generales.- L os modelos termodi-
nmicos para determinar el coeficiente de particin toman en consi-
deracin la influencia de varios factores como la carga, hidrofobicidad
de la partcula y composicin inica del sistema. El potencial qumico
se expresa como una funcin de factores relacionados con la partcula
tales como: la concentracin, la energa de superficie, el rea y la carga.
Tambin incluye la diferencia de potencial entre las fases. (Baskir
et al 1989).
/z, = ^ -f KT In di -f /^7 -f 2 ,
donde:
/ ?: Potencial qumico en el estado estndar.
a,: Actividad.
A: rea superficial de la partcula.
7: Energa superficial de la partcula en una fase dada.
Zii Carga total sobre la partcula.
J-: Constante de Faraday.
$: Potencial elctrico en la fase.
N
0
: Nmero de Avogadro.
(6.27)
En la ecuacin anterior la actividad se puede expresar como:
donde /, es el coeficiente de fugacidad para la partcula y m
t
es la
concentracin molal de la partcula en la fase.
En el equilibrio los potenciales qumicos de las fases son iguales y
la ecuacin (6.27) puede expresarse como:
TI '
2
A O ,
T}
2 , , ,
A
, .
-T In - - A - -f /C-Tln -f A(\~f) -\
(m,-)i (/O
o como:
-
K
T In K = A/.? + T In ^f + ( A
7
) + '" ~ (6-28)
donde A/ ? es la diferencia de potenciales qumicos en los estados
estndar en las dos fases, A7 es la diferencia en la energa superficial
de la partcula en las dos fases y A ^ es la diferencia en la distribucin
de potencial entre las dos fases.
En el caso de una solucin infinitamente diluida (cuando no hay
interacciones partcula-partcula), la fugacidad se aproxima a la unidad,
de tal manera que la ecuacin (6.28) puede ser escrita como:
z
K = A/ + A( A
7
) + ' (6.29)
en la ecuacin anterior la diferencia en los potenciales qumicos del

estado estndar es una constante, de tal manera que en una serie de
experientos con una misma partcula los cambios en K son resultado
de cambios en la energa superficial de la partcula A
7
, la carga de la
partcula Z{ y de la diferencia de potencial entre las dos fases A^.
Modelo de Edmond y Ogston.- Otro modelo que puede ser
usado para describir el comportamiento de un sistema de dos fases
acuosas, fue propuesto por Edmond y Ogston (Clark, 1989). Este es
un modelo en el cual los potenciales qumicos se expresan en trminos
de la molalidad de los componentes del sistema. En este modelo los
potenciales qumicos de los
:
solutos 2 y 3 (polmeros) se escriben como:
256
(2 =(2
2,2^2 + 2,3^3)
(6.30)
RT(ln m
3
+ a
3)3
m
3
+ 2,3^2) (6.31)
donde R es la constante de los gases ideales, m es la concentracin
molal de soluto, // es el potencial qumico para el componente i en el
estado estndar, 02,2, 3,3 y 2,3 son los coeficientes que caracterizan la
interaccin de dos molculas del polmero 2, dos molculas del polmero
3 y una molcula del polmero 2 con una molcula del polmero 3,
respectivamente. Esta interaccin se lleva a cabo en el solvente agua.
El potencial qumico del agua se obtiene aplicando la ecuacin de Gibbs-
Duhem, y est dado por:
RTM
l
1000(m
2
+ m
3 -f
(6.32)
donde MI es el peso molecular del solvente (agua).
L os parmetros de interaccin a^j de este modelo pueden ser deter-
minados ajustando las ecuaciones a datos experimentales de equilibrio,
o por mediciones termodinmicas independientes en los sistemas bina-
rios. Cuando los parmetros de interaccin son conocidos las ecuaciones
de Edmond y Ogston pueden ser usadas para describir el compor-
tamiento de las fases.
6.3 Equipo de Extraccin
Existen diferentes tipos de equipos para realizar una operacin de ex-
traccin (Tabla 6.7). De acuerdo a la forma en que estos equipos pueden
ser operados se dividen en extractores intermitentes y extractores con-
tinuos. A su vez los equipos de operacin continua pueden ser de con-
tacto por etapas o de contacto diferencial. Otra caracterstica de los
equipos de extraccin es la forma en que las fases se separan una vez
realizada la extraccin, lo cual puede realizarse slo por gravedad o por
medio de una fuerza centrfuga.
6.3. EQUIPO DE EXTRACCIN 257
Tabla 6.7: Clasificacin y ejemplos de equipos de extraccin.
Separacin de
las fases por:
Tamao
de gotas
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Gravedad
Centrifuga
Agitacin
Agitacin
Gravedad
Gravedad
Agitacin
Agitacin
Agitacin
Pulsos
Deflectores
Equipo
Intermitente
M-S*
Westfalia y
Robatel
Continuo
Etapas mltiples
M-S
Platos perforados
Podbielniak y
Alfa L aval
Columnas de
contacto diferencial
Aspersor
L echo empacado
Aspersin tipo
Rushton-Oldshue
Discos giratorios
Tipo Karr
platos y empacadas
* M-S Mezclador-Sedimentador
En los equipos de extraccin el control del tamao de las gotas de
la fase dispersa puede realizarse por medio de agitacin mecnica o por
pulsaciones.
En esta seccin se presentan algunos equipos de extraccin agru-
pndolos en:
Extractores intermitentes
Extractores continuos
6.3.1 Equipo de Extraccin Intermitente
En la extraccin itermitente o de una etapa la solucin que contiene el
soluto de inters se mezcla con el solvente y posteriormente las fases
se separan. En la Figura 6.6 se muestran algunos de los equipos uti-
lizados para este tipo de extraccin. En la Figura 6.6(a) se muestra
un mezclador sedimentador tpico donde el mezclador o agitador est
completamente separado del sedimentador. L a fase acuosa y la fase
orgnica se alimentan al mezclador y las fases mezcladas se separan
en el sedimentador. En la Figura 6.6(b) se muestra .una combinacin
de mezclador-sedimentador. L os mezcladores sedimentadores pueden
combinarse en serie para extraccin en etapas mltiples o a contraco-
rriente.
Para obtener una transferencia de masa eficiente con frecuencia se
usa un mezclador mecnico que proporciona un contacto ntimo entre
las dos fases lquidas. En general una de las fases se dispersa en la otra
en forma de gotas pequeas y debe existir un tiempo de contacto sufi-
ciente para que se realice la extraccin. L as gotas pequeas producen
reas interfaciales grandes que provocan una extraccin ms rpida; sin
embargo, las gotas no deben ser tan pequeas como para que el tiempo
de sedimentacin o coalescencia subsecuente resulte demasiado largo.
6.3.2 Equipo de Extraccin Continua
Esencialmente existen dos tipos de equipos para realizar extracciones
en forma continua:
- Equipos continuos de etapas mltiples.
- Equipos continuos de contacto diferencial
Equipo de Extraccin de Etapas Mltiples
El equipo utilizado en extraccin de etapas mltiples vara amplia-
mente, pero todas las modalidades involucran extracciones intermi-
tentes repetidas. En la Figura 6.7 se muestra un sistema de este tipo
donde el flujo de alimentacin y solvente se suministran a contraco-
rriente en una serie de mezcladores sedimentadores.
El tamao del mezclador debe dimensionarse para proporcionar su-
ficiente agitacin y tiempo de contacto para lograr el equilibrio entre
las fases. Este depender del flujo a ser procesado y de las propiedades
fsicas de ambos lquidos. Cuando la extraccin involucra reacciones
qumicas el tiempo de contacto puede ser muy importante.
En el diseo de equipo de etapas mltiples hay un compromiso:
Si los dos lquidos son mezclados intensamente pueden formar gotas
pequeas las cuales permitirn una extraccin rpida pero una sepa-
racin lenta; si los lquidos son mezclados ligeramente se formarn gotas
6.3. EQUIPO DE EXTRACCIN 259
. XA
E0 . X0
En . X,
a y
a)
R.jfc
E
0
. x
a
o
O D
E. x
b)
Figura 6.6: Esquema de equipos utilizados en la extraccin intermi-
tente: a), mezclador sedimentador separado; b). mezclador sedimen-
tador integrado.
E.x
Et,
^ AT
i
JL
.t.
apa
1
L
U>~
L
\
]
Et
^ AJ
1
cJo
t
apa
2
_
A ^
\ '
L
J \
j
]
\
Et
^ AJ
1
C*0
.t.
apa
3
A _
\ )
L *
Figura 6.7: Mezcladores sedimentadores conectados a contracorriente
en etapas mltiples.
grandes, habr menos rea de contacto, la extraccin es lenta, pero la
separacin ms rpida.
Algunos extractores de etapas mltiples como los Westfalia y los
Robatel emplean fuerzas centrfugas para separar las fases durante la
extraccin.
Equipo de Extraccin Dif erencial
L as columnas de extraccin empacadas y las de aspersin, proporcionan
contactos diferenciales donde el mezclado y la sedimentacin se suceden
en forma continua y simultanea.
En la Figura 6.8 se puede observar que en una columna de aspersin
el lquido pesado entra por la parte superior y llena la columna for-
mando la fase continua y sale por el fondo. El lquido ligero entra a
travs de un distribuidor de tovera en el fondo, mismo que lo dispersa
haca arriba en forma de gotas muy pequeas. El lquido ligero se co-
liga o junta en la parte superior y sale. En algunos casos el lquido
pesado se dispersa haca abajo sobre la fase ligera continua que se va
elevando. Tanto el lquido pesado como el lquido ligero se pueden in-
troducir dentro de la columna como la fase dispersa. L as columnas de
aspersin presentan por regla general bajas eficiencias debido al poco
EQUIPO DE EXTRACCIN 261
salida del
lquido ligero
lquido pesado
lquido ligero
coalescenda de
la nterfase
gotas
elevndose
tobera de
rociado
Figura 6.8: Columna de extraccin por aspersin.
mezclado y como consecuencia su uso es reducido en la industria.
El contacto entre las fases puede mejorarse proporcionando una su-
perficie mayor. Esta superficie es proporcionada al rellenar la columna
con un empaque como los anillos de Rasching o las sillas de Berl. Estos
empaques promueven la unin de las gotas y la redispersin de las mis-
mas a intervalos frecuentes a lo largo de la columna. Evidentemente en
este tipo de columnas se pierde capacidad debido al espacio que ocupa
el empaque, sin embargo esto se ve compensado por la gran mejora
que se tiene en la transferencia de masa.
L as columnas empacadas tienen una eficiencia mayor que las de
aspersin, misma que puede incrementarse aplicando una pulsacin os-
cilante a los fluidos contenidos en la columna. En la Figura 6.9 se
presentan esquemas de tres diferentes tipos de columnas de extraccin.
L a columna de platos perforados (Figura 6.10) proporciona un m-
todo seguro y eficiente en los procesos de extraccin lquido-lquido. El
esquema de la Figura 6.10 muestra una torre de extraccin de platos
perforados donde se dispersan las gotas del l quido ligero que tienden a
elevarse. L as gotas dispersadas se j untan debaj o de cada plato y vuelven
262 CAPTULOS. EXTRACCIN
E. x
_
empacado
E0,
discos
ET.~D
E, x
R. y
Figura 6.9: Columnas de extraccin: a) L echo empacado b) Aspersin
tipo Rushton-Oldshue c) Discos giratorios.
5.4. DISEO DE EQUIPO DE EXTRACCIN 263
L iquidopesado
Elevacin de gotas
del disolvente
ligero
O O
O O
O o
_Coalescencia
del disolvente
Figura 6.10: Seccin de una columna de extraccin de platos perforados.
a formarse por encima de ste al pasar a travs de las perforaciones. El
lquido pesado fluye hacia abajo de los platos donde se pone en contacto
con las gotas y despus pasa hacia el plato inferior.
Al igual que en las columnas empacadas, la eficiencia de separacin
en las columnas con platos perforados puede incrementar mediante pul-
saciones que promueven la coalisin y dispersin de la fase dispersa.
Algunos equipos de extraccin diferencial utilizan la fuerza centr-
fuga para el manejo de las fases como el extractor Podbielniak y el
extractor Alfa L aval.
6.4 Diseo de Equipo de Extraccin
Esta seccin se centra en los aspectos relevantes del diseo de de tres
sistemas de inters en bioseparaciones:
Extraccin intermitente.
Extraccin continua
Extraccin fraccionaria
264
Solvente
E..x
Figura 6.11: Esquema de un proceso de extraccin en una sola etapa.
6.4.1 Extraccin Intermitente
L a extraccin intermitente, tambin llamada extraccin de una sola
etapa, consiste en poner en contacto ntimo la solucin a tratar con el
solvente de extraccin y formar dos fases. Despus de este contacto y
una vez que se ha alcanzado el equilibrio, las fases deben separarse. En
este proceso es conveniente que el contacto se realice con un alto grado
de turbulencia para obtener altas velocidades de transferencia de masa.
El proceso de extraccin en una sola etapa se presenta en la Figu-
ra 6.11. El separador est incluido en la etapa debido a que la extraccin
del soluto persite en tanto las dos fases se encuentren en contacto y
hasta que se alcance el equilibrio.
Existen dos mtodos para el clculo de extractores intermitentes
que dependen de la informacin disponible y de la complejidad de sta.
- Mtodos Analticos
- Mtodos Grficos
Mtodo Analtico: Extractores Intermitentes
El rendimiento alcanzado en una operacin de extraccin es un factor
de diseo importante y puede ser obtenido mediante el clculo de la
concentracin final del soluto de inters en las fases. Como general-
mente la extraccin se realiza de tal manera que las fases interactar
hasta alcanzar el equilibrio, la concentracin final del soluto puede sei
obtenida en algunos casos en forma analtica mediante el empleo de do
ecuaciones. L a primera de ellas es una relacin de equilibrio para la:
soluciones que intervienen en el proceso y la segunda es un balance d<
masa para el soluto.
Cuando la relacin de equilibrio es lineal se tiene:
x = Ky (6.33
donde x es la concentracin del soluto en la fase ligera E] y es 1
concentracin del soluto en la fase pesada /?, y K es la constante d
equilibrio. L a ecuacin (6.33) es la ecuacin de una recta que pasa po
el origen.
L a segunda relacin es un balance de masa que indica que en (
proceso de extraccin:
el soluto inicial = al soluto final.
El balance de masa para el soluto, referido a la Figura 6.12 es:
R
0
y
A
+ E
0
x
0
= Ry + Ex (6.3<
donde y es la concentracin de soluto en la alimentacin o fa:
pesada, y es la concentracin de soluto en el refinado, esto es, la coi
centracin del soluto que permanece en la alimentacin despus de
extraccin, x
0
es la concentracin inicial de soluto en el solvente <
extraccin y generalmente es igual cero, x es la concentracin de solu
en el extracto al final de la extraccin . En esta ecuacin se supone qi
E y R son constantes.
Para encontrar una expresin para calcular la concentracin al fin
de la extraccin o de equilibrio, se sustituye el valor de x dado por
ecuacin (6.33) en la ecuacin (6.34). El valor para y se obtiene
manera similar. Esta combinacin de ecuaciones conduce a:
. X0
o . XA
E. x
a y
Figura 6.12: Esquema para el balance de masa del soluto en extraccin
intermitente.
x =
y =
Ky,
1 +F
donde F es el factor de extraccin y est dado por:
KE
171
R
(6.35)
(6.36)
(6.37)
El factor de extraccin rene dos factores de diseo importantes, la
constante de equilibrio y la relacin de las fases.
Es posible desarrollar una expresin para calcular el rendimiento de
la operacin o la fracin extrada p, definida por:
Ex
p = (6.38)
misma que puede ser escrita en trminos del factor de extraccin
para dar:
F
\ +F
(6.39)
6A. DISEO DE EQUIPO DE EXTRACCIN 267
Consecuentemente la fraccin de producto no recuperado es igual a
uno menos la fraccin extrada.
L as expresiones desarrolladas son diferentes en el caso que la ex-
traccin se realice de la fase pesada a la ligera.
Ejemplo 6.3.- Clculo de la f raccin extrada de un pro-
ducto proveniente de un caldo de f ermentacin.
En la recuperacin de productos de fermentacin con frecuencia
se emplean extractores agitados. En este caso se ponen en contacto
10 litros de un caldo de fermentacin acuoso que contiene 10 g/1 del
producto que quiere extraerse con 1 litro de un solvente orgnico. Si
el coeficiente de distribucin es 20 y se establece el equilibrio en el
extractor, calcule la fraccin extrada de producto.
Solucin:
El esquema que representa el sistema de extraccin es similar al de
la Figura 6.12. El balance de masa para el soluto en este sistema es:
R
0
y
A
+ E
0
x
0
= Ry + Ex
como inicialmente en el solvente de extraccin la concentracin del
producto es cero, el balance de masa del soluto queda como:
RoVA = Ry + Ex (a)
combinando la ecuacin anterior con la ecuacin de equilibrio x =
Ky y suponiendo R
0
= /?, se obtiene la concentracin del soluto en el
solvente de extraccin en el equilibrio. Esta concentracin est dada
por:
Ky
A
KE
X
=
con F =
sustituyendo los datos del problema se tiene:
=
_
R 10 /
la concentracin x es:
T
*AS ~~-
Ky
A =
20(10 g /l)
1 + F 1 + 2
- 66.6 g /l
y la fraccin extrada p es:
Ex F
P =
Ry
A
1 + F 1 + 2
= 0.666
despus de la extraccin el porcentaje del producto en el extracto
es de 66.6% y en el refinado es de 33.3%. Si se desea extraer casi todo
el producto se debern realizar ms etapas de contacto entre las fases
0 aumentar el volumen del solvente de extraccin.
Ejemplo 6.4.- Sistema de dos f ases acuosas para separar
virus.
Se emplea un sistema de extraccin de dos fases acuosas para separar
y concentrar virus de un caldo biolgico.
El volumen inicial V
0
de la solucin que contiene los virus es de
3 x 10~
3
m
3
y el volumen inicial V de la solucin de polmeros es de
1 x 10~
4
m
3
. El coeficiente de particin K
p
es de 4 x 10~
4
. Una vez que
se mezclan ambas soluciones el volumen R de la fase pesada formada
es de 5 x 10~
5
m
3
.
a).- Estimar las veces que se concentr la solucin o grado de con-
centracin obtenido.
b).- El rendimiento de la operacin.
Solucin:
a).- El grado de concentracin GC puede ser expresado como:
y
GC =
C
0
donde C
0
es la concentracin de partculas en la solucin original.
Mediante un balance de virus se puede obtener la siguiente ex-
presin:
combinando ambas expresiones se obtiene:
GC =
V
y
xE + yR
GC =
V
0
donde:
F =
R
Para utilizar la ecuacin anterior es necesario calcular primero el
valor de E mediante un balance,
entonces,
E = (3 x 1(T
3
+ 1 x 10~
4
- 5 x 10~
5
) m
5
E = 3.05 x 10~
3
m
3
y el grado de concentracin est dado por:
3 x 10~
3
m
3
GC =
n in *> 1\ (\ . (4xlO-
4
)x(3. 05xlO-
3
m
(5 x 10~
5
m
3
) 1 + i -
;
v
;
n
-
5
3
^ ' \ O X 1U 771
GC = 58.57
b).- El rendimiento de la operacin puede expresarse como:
y R
p =
C
0
V
0
combinando la expresin anterior con la del balance de virus se
obtiene:
270
P =
yR
xE + yR
y en trminos del grado de concentracin:
R
p = (58.57)
5 x 1Q-
5
m
3
3 x 10~
3
m
3
0.976
97.6%
Mtodo Grfico: Extractores Intermitentes
En la solucin de problemas de extraccin intermitente se emplean con
mucha frecuencia mtodos grficos. Estos mtodos son tiles en situa-
ciones en las que el equilibrio es complejo y no se ajusta a una relacin
lineal como la ecuacin (6.33).
Al igual que el mtodo analtico el mtodo grfico tambin depende
de dos ecuaciones bsicas: una relativa al equilibrio y otra al balance
de masa del soluto.
L a relacin de equilibrio establece que la concentracin x del soluto
en el solvente de extraccin despus de que las fases se ponen en con-
tacto, es una funcin que depende de la concentracin y del soluto en
el refinado,
= f ( y )
(6.40)
Atendiendo al esquema de la Figura 6.12 la ecuacin para el balance
de masa del soluto es:
R
0
yA = Ry + Ex
consecuentemente:
lnea de equilibrio -
(*. y )
(*-" o)
Fraccin mol de soluto en el refinado (y )
Figura 6.13: Extraccin intermitente: En la interseccin de la lnea de
operacin con la de equilibrio se obtienen las concentraciones que se
alcanzan al final de la operacin.
(6.41)
L a ecuacin anterior es la de una recta llamada lnea de operacin
cuya pendiente es m = R/E y cuya ordenada al origen es b Ry/ E
Si se grafican los datos de equilibrio (ya sea en forma de una ecuacin
o de datos tabulados) y la lnea de operacin como se muestra en la
Figura 6.13, en la interseccin de las curvas se obtienen los valores de
equilibrio y y x.
Ejemplo 6.5.- Extraccin de un aminocido.
L a relacin de equilibrio entre el tolueno y el agua pura en la ex-
traccin de un aminocido no esencial est dada por:
E
n
= 4.7
0.006 M
Ro-1
y
A
=o
E =4.7 I
x =
R =1 I
y
Figura 6.14: Esquema de la extraccin de un aminocido en un sistema
intermitente tolueno- agua. Ejemplo 6.5.
*> = (0.001
Estimar la fraccin de aminocido extrada al poner en contacto
4.7 litros de solucin de tolueno, con una concentracin 0.006 M del
aminocido, con un litro de agua.
Solucin:
El esquema del proceso se presenta en la Figura 6.14:
El balance de masa para el aminocido es:
R
0
y
A
+ E
0
x
0
= Ry + Ex (a)
de tal manera que la expresin de linea de operacin est dada por:
p
y = ~^(x
0
- x)
sustituyendo valores se obtiene:
y
=4. 7(0. 006 - x
0.012 -
(0.006 . 0)
Figura 6.15: Curva de equilibrio y lnea de operacin para el sistema
tolueno- agua. Ejemplo 6.5.
En la Figura 6.15 se muestra la curva de equilibrio y la lnea de
operacin para este sistema. En la interseccin de estas dos lneas se
puede encontrar la concentracin y de soluto al final de la extraccin.
Esta concentracin en el equilibrio es:
y = 0.012
la fraccin extrada p es:
P =
P =
P =
Ry
Ex
0
_ (L O /) (0.012 2^
~ (4.7 /) (0.006 2^
0.43
6.4.2 Extraccin Continua
El tratamiento del diseo de extractores continuos puede dividirse en :
- Extraccin en etapas mltiples
- Extraccin diferencial
E, xn
E. xn-i
n-1
E. x2
R. y3
\
2
E.x,
R. y2
1
En. Xo
R.y ,
Figura 6.16: Esquema de un proceso de extraccin a contracorriente en
etapas mltiples.
Extraccin en Etapas Mltiples
En la extraccin intermitente se usa una sola etapa para transferir el
soluto de la fase acuosa a la fase ligera. Para transferir ms soluto
puede repetirse el contacto mezclando la corriente de salida de refinado
con disolvente nuevo. De esta manera se logra un mayor porcentaje
de extraccin del soluto, sin embargo este procedimiento emplea una
mayor cantidad de solvente y da lugar a la formacin de corrientes
muy diluidas. Para emplear menos solvente y obtener una corriente de
extracto de salida ms concentrada, generalmente se usa un contacto
a contracorriente en etapas mltiples como el que se muestra en la
Figura 6.16.
En este esquema cada etapa est identificada por un nmero, ini-
ciando con el nmero 1 a la derecha. L a solucin pesada R
0
(ali-
mentacin) entra a la cascada por el lado izquierdo y el solvente puro
o fase ligera E
0
entra por la derecha.
L as concentraciones con las que sale cada uno de los lquidos de cada
etapa son las correspondientes al equilibrio. Por ejemplo, el lquido
ligero que deja la primera etapa tiene una concentracin de equilibrio
Xi. El lquido pesado que deja la segunda etapa tiene una concentracin
de equilibrio y
2
-
Dos mtodos son comnmente utilizados para analizar este tipo de
operaciones:
- El mtodo Analtico
- El mtodo Grfico
Mtodo Analtico: Extractores Continuos Multietapas.-
El rendimiento alcanzado en una operacin de extraccin es un fac-
tor de diseo importante y puede ser obtenido mediante el clculo de
la concentracin final del soluto de inters en las fases. Debido a que
generalmente la extraccin se realiza de tal manera que las fases in-
teractan hasta alcanzar el equilibrio, la concentracin final del soluto
puede ser obtenida en algunos casos en forma analtica, mediante el
empleo de dos ecuaciones: una relacin de equilibrio y un balance de
masa.
Cuando el equilibrio puede ser expresado por una relacin lineal
para la etapa n se tiene:
x
n
= Ky
n
(6.42)
El balance de masa para el soluto debe realizarse en cada etapa. De
acuerdo a la Figura 6.16 dicho balance para la primera etapa es:
Ry
2
+ E
0
x
0
= R
yi
+ E
Xl
(6.43)
Cuando las concentraciones de las corrientes de salida de cada etapa
son las de equilibrio y el solvente est libre de soluto x
0
= O, las ecua-
ciones (6.42) y (6.43) se combinan para obtener:
2/2 = (F + l)i/i (6.44)
como se mencion anteriormente F EK/ R es el factor de ex-
traccin.
Para la segunda etapa el balance de masa es:
Ry
3
+ Ex
l
= Ry
2
+ Ex (6.45)
y de acuerdo a la relacin de equilibrio, x\ = Ky\ y x
2
= K y< de
tal manera que:
combinando la ecuacin anterior con la ecuacin (6.44) se obtiene:
2/3 = (1 -f F + F
2
)
yi
(6.46)
mediante este procedimiento se puede obtener una expresin para
el clculo de la concentracin de soluto en la fase pesada a la salida en
funcin de la concentracin a la entrada, el factor de extraccin y el
nmero de etapas, de la forma:
j/n+i - (1 + F + F
2
+ ... -f F
n
)
yi
(6.47)
que tambin puede escribirse como:
(6.48)
L a ecuacin (6.48) puede ser utilizada de varias formas:
- Si se conoce la concentracin de la alimentacin y
n
+i, el factor
de extraccin F y el nmero de etapas n, entonces se puede calcular
la concentracin del soluto a la salida t/i, y por lo tanto la fraccin
extrada.
- Si se conoce la concentracin de soluto a la entrada en la corriente
de alimentacin y la concentracin deseada a la salida y el factor de
extraccin F, entonces se puede calcular el nmero de etapas necesarias
para el proceso de extraccin.
- Si se conoce la fraccin que no es extrada yi/y
n
+i y el nmero
de etapas, se puede conocer el factor de extraccin F; esto permite
seleccionar flujos adecuados para E y R.
El clculo de las concentraciones de salida permite estimar el ren-
dimiento o la fraccin extrada p, que en este caso est dado por :
Ex
n
P
Ry
n
+i
combinando la ecuacin anterior con las ecuaciones (6.42) y (6.48),
De la ecuacin (6.49) se desprende que cuando F es muy grande,
p se aproxima a 1. Por otro lado, cuando F tiende a cero tambin p
tiende a cero. En el caso particular cuando F es igual a la unidad, se
cumple que p = n/(n + 1).
Ejemplo 6.6.- Clculo de la f raccin extrada de un pro-
ducto proveniente de un caldb de f ermentacin en una ex-
traccin por etapas.
En una operacin de extraccin se ponen en contacto 10 l/rnin de
un caldo de fermentacin acuoso que contiene 10 g /l del producto que
se desea extraer, con un flujo de 1 l/min de un solvente orgnico. Si
la constante de equilibrio es de 20 y se establece el equilibrio en el
extractor, calcular la fraccin extrada de producto en un sistema de
extraccin de tres etapas.
Solucin:
De acuerdo a los datos
y
n+
i = 10 g /l; K = 20; R = 10 l/min] E = 1 l/min y n = 3.
L a fraccin extrada puede ser obtenida mediante la ecuacin (6.49}
y es necesario calcular primero el factor de extraccin, entonces:
F =
EK
(1 -4-) (20)
P
v
min' v /
10-4-
mtn
F = 2
la fraccin extrada o recuperada en el solvente de extraccin es:
P =
F(F
n
- 1)
Fn+l _ 1
2(2
3
- 1)
2
4
- 1
0.93
Otro camino para resolver el problema no tan directamente, consist
en utilizar la ecuacin (6.48) para calcular la concentracin de soluto
la salida en el refinado y\ . Conociendo este valor se puede encontrar la
fraccin no extrada y la fraccin extrada. Se tiene entonces:
n
g
10
7 -
la concentracin de salida de soluto en el refinado es:
10 9/1
15
/7
9/1
la fraccin no extrada es igual a la concentracn y\ dividida entre
concentracin de soluto en la alimentacin, de tal manera que:
0.66 g /l ., ,
- 77- = 0.066 fraccin no extrada
10 g /l
y la fraccin extrada p es:
p = 1 - 0.066 = 0.93
Ejemplo 6.7.- Extraccin continua de penicilina.-
Se extrae penicilina de un caldo de fermentacin utilizando isoami-
lacetato como solvente orgnico en un arreglo tipo cascada a contraco-
rriente.
L os flujos de la fase orgnica y de la fase acuosa son E 10 l/min
y R = 100 l/min, respectivamente. El coeficiente de particin de la
penicilina a pH=3 es K = 50.
Si la concentracin de penicilina en la alimentacin es de 20 g /l,
calcular el nmero de etapas necesarias para obtener una concentracin
de 0.1 g /l de penicilina en la corriente de salida.
Solucin:
El nmero de etapas puede ser calculado mediante la ecuacin (6.48)
y para lo cual primero es necesario calcular el factor de extraccin,
.4. DISEO DE EQUIPO DE EXTRACCIN 279
o
F
F
KE
(50)(10 l/m)
100 l/min
= 5
el nmero de etapas puede obtenerse mediante la expresin:
2/1
20 f
0.1 f
n =
n =
/F
n+l
V F
5
n+l _
5-1
3.15
4
Mtodo Grf ico: Extraccin continua de Etapas Mltiples.-
Al igual que en la extraccin intermitente, los mtodos grficos son
muy usados en ingeniera en la solucin de problemas de extraccin poi
etapas. Se requieren dos tipos bsicos de relaciones: una relacin d(
equilibrio y un balance de masa.
L a relacin de equilibrio se expresa como:
n
= f(y
n
)
(6.50;
El balance de masa global para el soluto, es decir en todo el equipo
es de la forma:
R
f
H = -j(y
n
+i
(6.51
las ecuaciones (6.50) y (6.51) pueden granearse sobre el mismo plan<
coordenado para obtener las lneas de equilibrio y operacin, respecti
vamente. En la Figura 6.17 se muestra una grfica de este tipo.
Cuando interesa calcular del nmero de etapas n requeridas en un
operacin de extraccin, el procedimiento es el siguiente (Figura 6.17"
8 2
0)
i
o 5
II
Lnea de operacin
L nea de equilibrio
X) Alimentacin
< y
A
)
Concentracin de soluto en el
refinado ( y )
Figura 6.17: Anlisis grfico de una extraccin a contracorriente en
etapas mltiples.
- Se calcula la concentracin de soluto en la corriente de la alimentacin
en la parte final de la cascada t/i, mediante la ecuacin (6.51).
- Se localiza sobre la grfica el punto (y
1?
x = 0). Este punto representa
la interseccin de la lnea de operacin con el eje de las abscisas.
- Una vez localizado el punto (y\, x 0), se traza una lnea vertical
en 7/1.
- En la interseccin de la linea vertical con la curva de equilibrio se
localiza el punto (yi, x\] de la lnea de equilibrio.
- En x\ se traza una linea horizontal.
- En la interseccin de la linea horizontal con la lnea de operacin s
localiza el punto (1/2, x\].
- Se repite el procedimiento anterior hasta alcanzar el punto (y
n
+i, x
n
]
En este punto la concentracin del soluto en el refinado iguala
excede la concentracin en la alimentacin.
El nmero de etapas se determina contando el nmero de escaln*
trazados.
Ejemplo 6.8.- Extraccin por etapas de Actinomicina D.
Se desea extraer Actinomicina D de un caldo de fermentacin q
contiene 260 mg /l de este antibitico, utilizando butil-acetato cor
solvente. L a constante de equilibrio K de este sistema tiene un val
de 57 al pH 3.5 al que se realiza la extraccin. El flujo de la fase acuc
R es de 450 l/h y el de la fase orgnica E es de 37 l/h.
Calcular el nmero de etapas necesarias para lograr el 99% de
cuperacin del antibitico.
Solucin:
Solucin grfica.- Para calcular grficamente el nmero de eta
es necesario obtener una expresin para la curva de operacin media
\
la ecuacin (6.51), para lo cual es necesario calcular primero la concen- ;
tracin de soluto a la salida en el refinado. Dado que se desea recuperar j
el 99% del soluto esta concentracin es: J
yi = 0.01 x (260 mg /l) = 2.6 mg /l
i
\
la expresin para la curva de operacin es:
450
x
n
= (y
n
+i - y\) = 12.2 y
n+l
- 31.62 [mg /l]
la relacin de equilibrio para este caso est dada por:
Para realizar el clculo grfico se traza la curva de equilibrio uti-
lizando el punto (O, 0) y la pendiente de 57. Se traza la lnea de
operacin a partir del punto (2.6, 0) y la pendiente 12.2. Una vez
obtenidas las curvas se puede estimar el nmero de etapas mediante el
proceso de trazado de escalones sobre la curva. En este caso es necesario
utilizar dos escalas debido al rango tan amplio de variacin de las con-
centraciones. L as curvas resultantes se muestran en la Figura 6.18. Se
puede estimar que el proceso de extraccin se completa en tres etapas.
Solucin analtica.- Dado que la relacin de equilibrio es lineal,
el clculo tambin puede realizarse mediante el mtodo analtico por
medio de la ecuacin (6.48), de tal manera que:
2/n+i = -= r- 0.01 y
n+1
\ F - l J
y en este caso el factor de extraccin es:
_ (57)(37 l/h) _
~ 450 l/h ~
de tal manera que:
y
n+
i ^
=
(4.69)"
+1
- 1
0.01 y
n+]
4.69 - 1
a). lma de equilibrio
b). linea de operacin
Figura 6.18: Etapas requeridas en la extraccin de actinomicina de
Ejemplo 6.8.
rearreglando y tomando logaritmos se tiene:
In370 = (n + l)ln4. 69
por lo tanto
n = 2.8
se requieren tres etapas para esta extraccin lo que coincide con el
resultado obtenido por el mtodo grfico.
Extraccin Diferencial
Cuando el contacto de la fase pesada y la fase ligera se efecta en forma
continua, se dice que la extraccin se realiza en forma diferencial. El so-
luto se transfiere de una fase a otra a travs de un contacto ntimo entre
stas, pero no se llega a alcanzar el equilibrio. Sin embargo, el resul-
tado de este proceso es una extraccin significativa del soluto deseado.
Este tipo de extraccin no es usado comunmente para el asilamiento
de molculas biolgicas importantes, sin embargo se considera que en
el futuro jugar un papel importante en bioseparaciones.
El anlisis de la extraccin diferencial depende de tres relaciones
bsicas. L a primera de ellas es una relacin de equilibrio similar a las
utilizadas en extraccin por etapas y est dada por:
x = Ky* (6.52)
donde T/* es la concentracin hipottica de soluto en la fase pesada
en equilibrio con la concentracin de soluto x en la fase ligera, en una
altura dada de la columna.
L a segunda relacin es un balance de masa tomado en la base de la
columna como se muestra en la Figura 6.19. En esta figura se puede
observar que la concentracin de soluto a la entrada en la fase pesada
R es y^, y a la salida es y
0
. L a concentracin de soluto a la entrada en
la fase ligera E es x
0
= O y a la salida es XL.
El balance de masa que resulta para este proceso a cualquier altura
de la columna es:
Ry + E(x
0
) = Ry
0
4- Ex (6.53)
L T
i r
Concentracin x, y
en el volumen AAz
" Xo o"o
Figura 6.19: Esquema idealizado de una columna de extraccin dife-
rencial.
que tambin puede ser escrito como:
/?
x = (y - y
0
) (6.54)
donde x y y son las concentraciones de soluto en la posicin z, las
cuales no estn en equilibrio. L a linea de operacin del proceso est
dada por la expresin ( 6.54 ).
L a tercera relacin es un balance de masa del soluto que expresa la
velocidad con que ste se transfiere de la fase pesada a la fase ligera.
Este balance se realiza en un diferencial de volumen AV = AAz. En
la Figura 6.19 se muestra el esquema para el balance de masa en este
diferencial de volumen y que se expresa en palabras como:
Acumulacin de soluto en fase R = Entrada de soluto
Salida de soluto
-^-Produccin Transferencia
Este balance puede ser simplificado considerando que la acumu-
lacin es nula. Debido a que no hay produccin de soluto el trmino
correspondiente tambin es nulo. L a velocidad de transferencia de so-
luto de la fase R a la fase E est dada por rA Az, donde r es la velocidad
de transferencia volumtrica.
El balance de masa en el diferencial de volumen se puede escribir
entonces como:
O - R(y*+*z - y
z
) - rA&z (6.55)
si se divide la ecuacin anterior entre AAz y se toma el lmite cuando
Az * O, la ecuacin (6.55) se puede escribir como:
^ - , (6.56)
dz
En la extraccin diferencial una fase se dispersa en la otra en forma
de gotas pequeas, y el rea de contacto es un factor muy importante
para lograr una extraccin rpida y eficiente. L a velocidad de trans-
ferencia r es proporcional al rea superficial de las gotas por unidad
de volumen. L a velocidad de transferencia / tambin es proporcional
a que tan lejos est la concentracin y del equilibrio. De acuerdo a lo
anterior r se puede escribir como:
r = ka(y y*) (6.57)
donde a es el rea superficial de contacto por unidad de volumen,
y* es la concentracin hipottica de soluto en la fase pesada en equi-
librio con la concentracin de soluto en la fase ligera x, y k es una
constante de velocidad llamada coeficiente de transferencia de masa.
Esta depende de las propiedades fsicas de los fluidos en contacto tales
como viscosidad, densidad y flujo. L a constante k tiene dimensiones de
velocidad.
L a tercera relacin requerida para el anlisis de la extraccin difer-
encial se obtiene combinando las ecuaciones (6.56) y (6.57),
dy
. .
(y - *)
(6.58)
Una vez obtenidas estas tres relaciones se puede describir como se
relacionan entre si para obtener una ecuacin de diseo.
L a ecuacin (6.58) est en funcin del diferencial dz. Esto permite
calcular la longitud del extractor diferencial utilizando para ello la
ecuaciones (6.52) y (6.54). L a longitud del extractor est dada por:
rL
L = I dz
y de acuerdo a la ecuacin (6.58) :
R f
yL
dy
L =
kaA
yL
__dl
Jy
0
y -
mediante la ecuacin (6.52) se obtiene la expresin,
x
~K
por lo tanto:
L =
R dy
(y - f<
de la ecuacin (6.54) se obtiene,
R
( ^
x = -j;(y - y
0
}
entonces:
R f
yL
dy
L =
y - my - y
0
dado que F = EK/R, la ecuacin anterior se puede escribir como:
R F
L =
kaA(F-l)
finalmente integrando se obtiene:
R
f
yL
dy
Jy
0
y + JT
ka A. * * ~ - "
(6
'
59)
Al trmino de la ecuacin (6.59) que aparece dentro de los parntesis
cuadrados se le llama en ingeniera "altura de una unidad de transferen-
cia" HTU (de sus siglas en ingls), tiene unidades de longitud y es una
medida de la eficiencia del equipo. El trmino que aparece entre llaves
es una cantidad adimensional llamado "nmero de unidades de trans-
ferencia" NTU ( de sus siglas en ingls) que permite medir el grado de
dificultad de la extraccin. V alores grandes de NTU significan mayor
dificultad en la extraccin que valores pequeos.
L a expresin (6.59) se puede escribir como:
L = (HTU}{NTU] (6.60)
L a ecuacin (6.60) es la base para el diseo de un proceso de ex-
traccin diferencial lquido-lquido.
Ejemplo 6.9.- Separacin de una mezcla racmica de leuci-
na.
L os mdulos de fibras huecas constituyen una alternativa atractiva
respecto aj uso de equipos de extraccin convencional debido su alta
relacin rea/volumen (Ding et a/, 1992).
Se utiliza una unidad de fibras huecas operando a contracorriente
para separar 1-leucina de d-Ieucina bajo las siguientes condiciones:
Fase extractla ligera
Fase acuosa
L ongitud de la unidad
Dimetro de las fibras
Nmero de fibras
Flujo de la fase acuosa R
Flujo de la fase orgnica E
Coeficiente de particin K
N-n-dodecil-1-hidroxiprolina en octanol
Agua (conteniendo 1-leucina y
d-leucina)
64 cm
240 / m
96
19.2 cm
3
/h
76.8 cm
3
/h
0.331 d-leucina
L os microporos de las fibras se rellenaron con gel de polivinil-alcoho
de tal manera que los solutos difunden a travs de los poros sin que la
fases se mezclen.
Estimar el coeficiente de transferencia de masa volumtrico k
a
de
sistema, si bajo las condiciones enunciadas la recuperacin de d-leucin;
en la fase ligera fue del 99.97 %.
Solucin:
Se requiere utilizar la ecuacin (6.59) para estimar el parmetro k
y expresarla en trminos de la recuperacin p que en este caso est dad,
por la expresin:
P =
Ex
~Ryi
otra expresin necesaria es la del balance global del soluto que es:
Ex
L
= R(y
L
- y
0
)
combinando las dos ecuaciones anteriores,
Ex
L
Ryi
en base a lo anterior la ecuacin (6.59) puede expresarse como:
L-
L
-
[kaA\{F-\ \
VL
(1-P)
o bien como:
~ R '
L =
kaA
L a expresin anterior permite calcular fc
a
, para lo cual es necesario
obtener primero el rea de flujo A, que es la suma del rea transversal
de las 96 fibras.
(96) TT x (240 x 10~
6
m)'
A =
l
-
4
A = 4.34 x 10~
2
cm
2
tambin es necesario calcular el factor de extraccin F,
R
0.331 x 76.8
F _ _
19.2 2
F = 1.324
el coeficiente de transferencia de masa est dado por:
10 9 cm
3
/i i or,, / i _ 0.9997 \
_ /i 3600 5
1
-'
3
~^ i / 1.324 \
(64 c7/?.)(4.43 x 10~
2
C77i
2
) 1.324 - 1 \\ - 0.9997^
k
a
= 526 x 10
Un mtodo simplificado para el diseo de columnas considera a la
columna formada por un conj unto de platos tericos o etapas ideales.
El nmero de platos tericos N de una columna de contacto diferencial
se calcula mediante los mtodos empleados para la extraccin continua
de etapas mltiples. Este tratamiento da origen al concepto de altura
equivalente a un plato terico HETP (de sus siglas en ingls), de tal
manera que:
L = (HETP)(N) (6.61)
Ejemplo 6.10.- Extraccin diferencial de penicilina.
L a extraccin de penicilina a partir de una fase acuosa mediante
una fase orgnica debe realizarse a pH cido. Es recomendable que
esta extraccin se realice en un tiempo corto debido a que la penicilina
es inestable a pH cido. Esto puede lograrse en un extractor diferencial
centrfugo tipo Podbielniak. Este extractor funciona como una columna
de platos perforados enrollada sobre un eje giratorio que favorece el flujo
a contracorriente de las fases.
Se cuenta con los siguientes datos de operacin de un extractor tipo
Podbielniak:
Coeficiente de particin 25 (fraccin libre soluto).
Conc. de penicilina a la entrada 3.3 x 1(T
4 moles
,
de
P
enicilina
r
moles de ag ua
Conc. penicilina en el solvente O
Flujo de alimentacin 70 moles de agua/min
Flujo de extracto 3.5 moles de solvente/min
Prdidas de penicilina 10 %
Calcular:
a).- L a fraccin mol de penicilina en el extracto de salida.
b).- El nmero de etapas tericas de la operacin.
Solucin:
a).- L a fraccin de soluto en el extracto de salida puede ser obtenida
mediante la ecuacin (6.54),
XL = TT (y.L ~ yo)
292
70
[ 3. 3xlO-
4
-(0. 1)(3. 3xlO-
4
)] gg
o c mol
min
x
L
= 5.94 x 10
_
3
moles de penicilina
moles de solvente
b).- El nmero de etapas tericas puede ser calculado mediante la
ecuacin (6.48) que en este caso se puede escribir como:
Vr, F-I
se requiere calcular el factor de extraccin,
F =
KE
R
mol
7fl
mo
min
F = 1.25
entonces el clculo del nmero de etapas mediante la ecuacin (6.48)
modificada es:
0.1 =
1.25- 1
n = 4.6
6.4.3 Extraccin Fraccionaria
L a extraccin fraccionaria es una tcnica de separacin en la cual una
fase ligera E que contiene varios solutos, se pone en contacto con una
serie de tubos que contienen originalmente, fase pesada R pura. El
resultado de este proceso es la separacin de los distintos solutos con-
tenidos en el solvente E.
Este proceso de extraccin tambin es conocido como extraccin
Craig (debido a que fue desarrollado inicialmente por L .C. Craig como
extraccin a contracorriente) o como extraccin fraccionaria con una
fase estacionaria.
L a extraccin fraccionaria se fundamenta en la diferencia del coe-
ficiente de particin de los solutos. Cuando se tiene un solvente con-
teniendo varios solutos que poseen diferentes coeficientes de particin,
stos pueden separarse entre si por medio de la extraccin fraccionaria.
L a extraccin fraccionaria consiste de repartos repetidos de una
mezcla de solutos entre dos disolventes inmiscibles. El fundamento
se muestra en la Figura 6.20 (a), donde un soluto A que posee un
coeficiente de particin entre los disolventes E y R dado por:
K
P
(A) = = 1
yA
es extrado por este proceso de la siguiente forma:
- Inicialmente el soluto A (64 unidades) se encuentra disuelto en un
volumen de fase ligera E y se localiza en el tubo 1 junto con un
volumen de fase pesada R.
- Inicialmente los tubos del 2 al 7 contienen volmenes iguales de
disolvente puro R.
- El tubo 1 se agita hasta alcanzar el equilibrio; el resultado es una
distribucin del soluto A entre las fases E y R en cantidades
iguales, es decir 32 unidades en cada una.
- El solvente E de la capa superior del tubo 1, se transfiere al tubo 2.
- Se aade al tubo 1 un volumen de solvente fresco E.
- Se agitan los tubos 1 y 2 hasta alcanzar el equilibrio, donde cada fase
en ambos tubos contiene 16 unidades de soluto A, puesto que el
coeficiente de distribucin K
P
(] = 1.0.
- Se separa la fase ligera de los tubos y se aade al siguiente de la
derecha.
- Se aade al tubo 1 un volumen de solvente fresco E.
- Se repite el proceso las veces que sea necesario.
Disolvente E Disolvente R
Tubo 1 2 3 4 5 6
DDDnn
IlaaaaD
DDnnHHE
nnn
nn
1
2
n
Total y
Tubo
5 [ MO l [ 10
ri no] fio
nnnn
mnnn
DD
n
H0Blll3
1 6 15 20 15 6 1
1 2 3 4 5 6 7
20 -
3 4 5
Nmero de tubo
Figura 6.20: Extraccin de Craig: a) Esquema del principio de ex-
traccin fraccionaria con una fase mvil; b) Grfica para cada tubo y
varios solutos.
El esquema de la Figura 6.20 muestra los resultados de siete trans-
ferencias. Comunmente en la prctica real de laboratorio, se emplean
100 o ms etapas de distribucin para separar mezclas de aminocidos
o de protenas. L a cantidad total de soluto A, en cada uno de los siete
tubos, se puede ver en la grfica de la Figura 6.20 (b).
Con el fin de comparar la forma en que se distribuyen varios solutos
con diferente coeficiente de particin, tambin se muestra en la Figura
6.20 (b) la distribucin de los solutos B y C en concentraciones arbi-
trarias de 64 unidades cada uno. El soluto B, posee un coeficiente de
particin,
y el soluto C,
K
P
(B) = = 0.33
K
P
(C) = = 3.0
ye
L a figura indica que a mayor coeficiente de particin K
p
, mayor es 1<
cantidad de soluto desplazada en cada transferencia. Debido a que cad<
soluto se mueve independientemente del otro de acuerdo a su coeficient<
de particin, la mezcla de solutos A, B y C se separar por complet<
en tres picos despus de un nmero determinado de transferencias.
L a extraccin fraccionaria con una fase mvil es de aplicacin ge
neral y puede emplearse como tcnica de bioseparacin para diferente
tipos de solutos como: protenas, cidos nucleicos, lpidos y aminoci
dos. Este principio tambin sirve de base para las operaciones croma
togrficas que se revisan posteriormente.
Perfil de Concentracin
A diferencia de los procesos de extraccin vistos en las secciones an
tenores, en la extraccin fraccionaria el soluto desarrolla un perfil d
concentraciones distribuido a travs de todos los tubos, lo cual no s
presenta en otro tipo de procesos de extraccin. Otra forma de repre
sentar la extraccin fraccionaria es mediante el esquema que se muestr
en la Figura 6.21.
Transferencia
0
Agitacin
Equilibrio
Transferencia
1
100
Zm
q
::. P - ' :
w:;
q
Agitacin
Equilibrio
Transferencia
2
Agitacin
Equilibrio
Transferencia
3
Agitacin
Equilibrio
Transferencia
pq
P
2
P
2
q
2
pq
pq
pq
q
2
2pq
P2q
q3
q3
P3q
3pq3
pq
3
3pq3
J J J J J
4pq
3
Figura 6.21: Representacin esquemtica de la distribucin de la con-
centracin de un soluto en la extracin fraccionaria con una fase mvil.
4. DISEO DE EQUIPO DE EXTRACCIN 297
En la Figura 6.21 se muestra la distribucin de soluto en cada tubo
despus que se realiza la transferencia y se alcanza el equilibrio, cuando
la recuperacin en cada etapa es p. Se muestra que al final de la cuarta
transferencia, la distribucin de la concentracin en los tubos sigue una
forma binomial.
Cuando la extraccin fraccionaria se realiza con n transferencias la
fraccin / de soluto original que se encuentra en el tubo r, (en ambas
fases) depus de las n transferencias est dado por:
donde:
r!(n r)!
p
r+l
(l-
P
)
n
-
r
(6.62)
F =
EK
r= 1,2,3....n+1
Cuando el nmero de transferencias n es muy grande la ecuacir
(6.62) se aproxima a una distribucin gausiana y se tiene que:
1
exp -
:
(r np)'
(6.63
'
v >
' [2*np(l-p)]
l
~"
f
\ 2np(l-
P
)
Este perfil tiene un mximo cuando r = np.
Ejemplo 6.11.- Aislamiento de cido quenodeoxicolico.
El cido biliar quenodeoxicolico es aislado mediante una extracci
de Craig usando 400 transferencias. L a fase pesada es agua y la fas
ligera es n-butanol; la proporcin de las fases se ajusta de tal maner
que el factor de extraccin F sea igual a uno.
Una vez que se realizan las 400 transferencias, determinar:
a).- El nmero de tubo de mxima concentracin.
b).- L a concentracin de soluto en dicho tubo.
Solucin:
a).-De acuerdo a la ecuacin (6.63) la fraccin de soluto / tiene un
mximo cuando r = np, ya que en este punto el valor de la exponencial
es mximo e igual a uno.
El tubo que tiene la concentracin mxima de soluto es:
r = np = 400 = 200
b).- La fraccin de soluto en el tubo 200 despus de 400 transferen-
cias est dada de acuerdo a la ecuacin (6.47) por:
/(r,n) = /(200,400)=
[27r(400)(0.5)(0.5)]
1
/2
/(200,400)-0.04
esto significa que solamente el 4% de la concentracin de soluto
original est presente en el tubo de mxima concentracin despus de
400 transferencias.
6.5 Sumario
La extraccin es una operacin que se emplea para concentrar solutos
de inters a partir de caldos biolgicos. Se basa en la diferencia de
solubilidad de los solutos entre dos fases: el caldo biolgico y el solvente
de extraccin.
En la extraccin se emplean diversos solventes que pueden ser selec-
cionados combinando criterios establecidos y la teora que se dispone.
En el caso de productos como las protenas se utilizan sistemas de dos
fases acuosas inmiscibles que permiten el manejo de estos productos en
forma ms apropiada.
Existe una gran variedad de equipos para realizar la operacin de
extraccin y sta puede realizarse en forma i nt er mi t ent e o continua. Los
mtodos d diseo de los extractores pueden ser grficos o analticos y
estn basados en relaciones de equi li bri o y balances de masa.
6.6. PROBLEMAS
6.6 Problemas
299
6.1.- En la separacin de Ajmalicina de pK
a
= 6.3 y Serpentina de
pK
a
= 10.8, dos alcaloides vegetales de estructura muy semejante; se
dispone de un solvente en el cual el coeficiente de particin intrnseco
es igual para ambas especies.
a).- Calcular el valor de K
p
/Ki para ambas especies a los pH de 2,
4, 6, 8, 10 y 12.
b).- Calcular la selectividad de Ajmalicina a los pH de 2, 4, 6, 8, 10
y 12.
c).- Qu sistema recominda a para realizar la extraccin.?
b).- Resp.
pH
( 3
2
31,621
4
31,465
6
21,065
8
620
10
7.3
12
1.1
6.2.- Una solucin de cido actico al 0.01 M presenta una diso-
ciacin del 4 % a 25 C.
a).- Calcular su constante de disociacin,
b).- Calcular su pK
a
b).- Resp. 4.77
6.3.- Un volumen V
0
de solucin con una concentracin C
0
del soluto
de inters, se mezcla con un volumen V de una solucin que contiene
dos polmeros dando origen a dos fases acuosas inmiscibles ( E -f R)
entre las cuales se reparte el soluto.
En el caso que el soluto se distribuya preferentemente en la fase
superior ", expresar el grado de concentracin (GC) y el rendimiento
(p) en funcin de V
0
, E, R y K
p
.
6.4.- Se desea separar una mezcla que contiene igual cantidad de
masa de dos enzimas, en un sistema de dos fases acuosas inmiscibles
en el cual las enzimas C y D presentan coeficientes de particin de
K
p
C = 0.5 y K
P
D = 0.011, respectivamente.
a).- Estimar la proporcin E/R para que la masa de C en la fase
ligera E sea igual a la masa de D en la fase pesada/?.
b).- Estimar el rendimiento y la pureza de la extraccin de la enzima
(7, si la relacin E/R es la determinada en a).
b).- resp. 96.4 % y 87 %
6.5.- Una solucin que contiene 20 g/l de estreptomicina se procesa
en un sistema continuo de etapas mltiples, en el cual el factor de
extraccin empleado es igual a 3.
a).- Calcular la concentracin de estreptomicina en el refinado a la
salida en los casos que el sistema conste de 1, 2, 3 y 10 etapas.
b).- Cuntas etapas se recomiendan para realizar esta extraccin.?
a).- Resp. 1 etapa: 5 g/l.
6.6.- Demostrar que en una extraccin diferencial con yi, = O y con
extraccin de soluto de la fase E a la fase /?, la longitud de la columna
est dada por:
1
in
K
a
A F - 1 x
0
- Ky
0
6.7.- Se extrae estreptomicina de un caldo de cultivo utilizando un
solvente orgnico, en un sistema de extraccin a contracorriente de 5
etapas. El coeficiente de particin de la estreptomicina en el sistema a
un pH de 4 es de 40. El flujo de la fase pesada R es de 150 l/min.
Estimar el flujo de fase ligera E para reducir la concentracin de
estreptomicina en la solucin de 10 a 0.2 g/l.
Resp. 7 l/min
6.8.- En el desarrollo de un proceso (Wisniak et al , 1990) para
la eliminacin de mercurio(II) de corrientes industriales de desecho, se
emplea como fase extractiva aceite de jojoba sulfurado (acomplejante
de Hg II) disuelto en queroseno.
El coeficiente de particin del Hg(I) en el sistema agua-aceite de
jojoba (queroseno) vara directamente con la concentracin de jojoba
en el queroceno e inversamente con la concentracin inicial de Hg(II)
en la fase acuosa.
Los datos obtenidos en cinco etapas de extraccin intermitente uti-
lizando extractante fresco (20 g/l de aceite sulfurado de jojoba) en cada
una de ellas, se muestran en la Tabla siguiente:
PROBLEMAS 301
Etapa
1
2
3
4
5
Fase acuosa
ppm de Hg(II)
Inicial
1091.00
146.40
19.60
2.00
0.09
Final
146.400
19.600
2.000
0.090
0.005
Coeficiente
de particin
KP
6.4
54.6
555.0
12,499.0
100,000.0
I
a).- Calcular la eficiencia de recuperacin de cada etapa.
b).- Calcular la eficiencia de recuperacin global al final de cada
etapa.
c).- Calcular la relacin de fase acuosa a fase orgnica empleada en
cada etapa ( R/E).
d).- Calcular la cantidad de fase orgnica por litro de fase acuosa
utilizada en cada etapa y la cantidad total para las cinco etapas.
e).- Estimar la cantidad de fase orgnica necesaria para procesar un
litro de solucin acuosa en una etapa y obtener la misma eficiencia que
la alcanzada en las cinco etapas.
f).- En base a los resultados anteriores que proceso se recomienda
si el lmite tolerable de Hg(II) es de 0.005 ppm.
Respuestas para etapa 3
a).- 89.8 % b).- 99.82 % c).- 63
6.9.- En una columna empacada con anillos rashing se utiliza ur
sistema de dos fases inmiscibles PEG 4000 - Na^SO^ para extrae]
amiloglucosidasa de la fase ligera dispersa (PEG 4000) hacia la fase
continua ( Na^SO^}. La enzima presenta un coeficiente de particin er
el sistema de 0.0345 (Patil et a/, 1991). La viscosidad de la fase dispers
es de 24 x 10~
3
Kg/m - s.
La resistencia a la transferencia de masa se localiza en la fase ligen
dispersa y puede ser caracterizada mediante el coeficiente de transfe
rencia de masa dado por:
k
a
= 6 x I D
'
7
donde:
v: Velocidad superficial de la fase dispersa.[ m/s] .
^: Viscosidad de la fase dispersa. [Kg/m s].
k
a
: Coeficiente de transferencia de masa. [s~
1
].
a).- Determinar la longitud necesaria de una columna de 56 mrr
de dimetro interno, alimentada con un flujo de 985 mm
3
/s de fase
dispersa y 68 mm
3
/s de fase pesada, para producir una disminucin
del 20 % de la concentracin de enzima de la fase ligera.
b).- Obtener una grfica de la longitud necesaria de la columna en
funcin de R para las condiciones de extraccin anteriores.
c).- Que flujo R recomienda a para esta operacin?
a).- Resp. 1053 mm
6.10.- En un sistema de extraccin fraccionaria tipo Craig los com-
ponentes B y C de una mezcla presentan coeficientes de particin de
K
P
B = 0.33 y K
P
C 3.0, respectivamente.
Obtener el perfil de concentracin de cada uno de los solutos a lo
largo de los tubos, en los siguientes casos:
a).- E/R = 0.2 y nmero de transferencias 30, 60 y 90.
b).- E/R = 1 y nmero de transferencias de 30, 60 y 90.
c).- E/R = 5 y nmero de transferencias de 30, 60 y 90.
d).- Cul de los 9 sistemas recomienda?
6.11.- Las protenas pueden ser extradas sin ser desnaturalizadas
con soluciones de iso-octano que contengan el detergente aerosol OT.
Las protenas se solubilizan dentro de las micelas que forma el de-
tergente. Debido a que la cantidad de protena solubilizada depende
fuertemente del pH, las protenas pueden ser extradas con el solvente
orgnico a un pH dado cercano al punto isoelctrico, y posteriormente
desorberse a un pH diferente.
Se est estudiando una solucin acuosa que contiene 0.2% en volu-
men de protena, cuya relacin de equilibrio est dada por:
x= 2.9?/*
donde xes la concentracin de protena en la fase orgnica y y* es la
concentracin de equi li bri o en la fase acuosa. La relacin volumtrica
6.6. PROBLEMAS 303
entre las fases es de 6.8 litros de solucin acuosa por cada 3.8 litros de
solucin orgnica.
Calcular la concentracin del refinado a la salida y la fraccin ex-
trada cuando se utiliza una columna de extraccin diferencial de 2.0 m.
en la cual el HTU (basado en la concentracin acuosa) es 0.85 m.
Resp. y = 0.04 p = O.
6.7 Bibliografa
Albertsson, R, Johansson, G. y Tjerneld, F. 1990. Aqueous two-phase
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Diamond, A. D., Hsu, J. T. 1990. Protein partitioning in PEG/Dex-
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Ding, H.B., Carr, P.W. y Cussler E.L. 1992. Racemic leucine separa-
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Huddleston, J., Veide, A., Kohler, K., Flanagan, J., Enfors, S. y Lyd-
diatt, A. 1991. The molecular basis of partitioning in aqueous
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Mattiasson, B. y Ling, T.G.I. 1987. Extraction in aqueous two-phase
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Verral, M.S. y Hudson, M.J. (Eds.). Ellis Horwood Limited. New
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Mattiasson, B. y Raj ni , K. 1991. Extractive bioconversions in aqueous
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B. y Holst, O. (Eds.). Marcel Dekker Inc. New York. 173-188.
Patil, T.A., Jafarabad, K.R., Sawant, S.B. y Joshi J.B. 1991. Enzime
mass t r ansf er coefficient in aqueos tvvo phase system using packed
extraction col umn. The Canadian J. of Chem. Eng. 69, 548-556.
Wisniak, J., Schorr, G., Zcovsky, D. y Belter S. 1990. Extraction of
mercury(II) wi t h sulfurized jojoba oil. Ind. Eng. Chem. Res.
29, 1907-1914. - -
Captulo 7
Adsorcin.
7.1 Introduccin
La adsorcin es una de las operaciones ms utilizadas en la etapa de
concentracin de caldos acuosos diluidos. Mediante la adsorcin las
molculas de un soluto se concentran en una superficie slida por la
accin de fuerzas intermoleculares entre el soluto y el slido. Debidc
a la naturaleza de estas fuerzas el fenmeno es fcilmente reversible
La adsorcin es esencialmente un fenmeno de superficie y debe distin-
guirse de la absorcin la cual implica la penetracin de una sustancia
en el cuerpo de otra.
La concentracin de uno o varios solutos de un caldo por medio d(
la operacin de adsorcin requiere cuatro pasos (Figura 7.1). Primen
el adsorbente y la solucin se ponen en contacto. Al efectuarse la ad
sorcin el soluto se une preferentemente a la superficie del adsorbent<
respecto a otros solutos. Una vez concluida la adsorcin es necesari
lavar la columna con una solucin que no provoque la desorcin de
soluto de inters. Finalmente se efecta la recuperacin del soluto uti
lizando un fluido que favorezca la desorcin, operacin conocida com
elucin.
Es i mport ant e resaltar que el anlisis de las etapas de adsorcin
lavado y elucin, es anlogo. En este cap t ulo slo se revisa lo referente
la etapa de adsorcin por considerarse que los pr i nci pi os aqu expuest o
pueden extenderse al anlisis de las otras etapas.
307
308 CAPTULO 7. ADSORCIN.
Adsorcin
e
Lavado de impurezas
Elucin de soluto
Figura 7.1: Etapas de la adsorcin. Fuente: Clonis, 1990.
vados.
7.2. FUNDAMENTOS 30
En el anlisis de la operacin de adsorcin, al igual que en otra
operaciones de transferencia de masa, se utilizan modelos para el disee
anlisis de alternativas (columnas en serie vs. columnas en paralelo)
optimizacin, o simplemente para la obtencin de datos experimentale
La formulacin de algunos de estos modelos requiere:
- El establecimiento de las relaciones de equilibrio y de la capacida
de adsorcin de los sistemas.
- El establecimiento de la rapidez de la adsorcin con respecto a lo
fenmenos difusivos y cinticos de superficie.
- Los balances de masa y energa del sistema de adsorcin especfic
(intermitente, continuo, serie, paralelo, etc.).
- Las condiciones iniciales y de frontera del sistema.
En la seccin 7.2 de este captulo se presentan los fundamentos d
la operacin de adsorcin, como la qumica de la adsorcin, los tipo
de adsorbentes, las curvas de equilibrio de los sistemas llamadas isotei
mas de adsorcin y los aspectos bsicos de la cintica de la adsorcir
En la seccin 7.3 se describen los principales equipos' utilizados en la
operaciones de adsorcin y en la seccin 7.4 se presentan los principie
para el diseo de tales equipos.
7.2 Fundamentos
Las operaciones de adsorcin son utilizadas en la obtencin de vari
tipos de productos biotecnolgicos como aminocidos, antibiticos, v
taminas y protenas. Debido a lo anterior, cada vez existe una maye
necesidad de profundizar en los aspectos fundamentales de la operaci
(principalmente en el contexto del procesamiento de caldos biolgicos
de los cuales se pueden destacar cuatro:
Los tipos de adsorcin segn el t i po de interaccin soluto-adso
bente.
Los tipos de adsorbentes.
Las relaciones de equilibrio.
La cintica de la adsorcin.
7.2.1 Tipos de Adsorcin Segn el Tipo de Inter-
accin Soluto-Adsorbente
De acuerdo al tipo de interaccin del soluto con el adsorbente, se pueden
distinguir cuatro tipos bsicos de adsorcin (Figura 7.2):
- Fsica
- Inica
- Hidrofbica
- Por afinidad
En la adsorcin fsica las fuerzas de atraccin entre el soluto y el
adsorbente son de tipo London-van Der Waals. En la adsorcin inica la
diferencia de cargas entre el adsorbente y el soluto genera atracciones
electrostticas ms fuertes y selectivas. La adsorcin hidrofbica se
produce por interacciones entre regiones hidrofbicas del soluto y el
adsorbente. La adsorcin por afinidad est basada en interacciones
altamente especficas entre el adsorbente y el soluto, lo que caracteriza
a este tipo de adsorcin como altamente selectiva.
7.2.2 Tipos de Adsorbentes
En el establecimiento de un sistema de adsorcin es necesario selec-
cionar cuidadosamente el tipo de adsorbente que se va a utilizar. En
este proceso de seleccin los principales parmetros a considerar son las
propiedades fsicas del adsorbente, tales como: resistencia mecnica,
rea por unidad de volumen, porosidad i nt er na y del lecho, forma de
la partcula y tamao. Asimismo, es de fundament al importancia la
capacidad de adsorcin del slido, la cual est fuertemente influida por
su carga y su relativa hidrofobicidad.
Actualmente se ut i li zan:di ferent es tipos de adsorbentes en la ope-
racin de adsorcin. En el caso de la adsorcin fsica, el adsorbente
7
,2. FUNDAMENTOS 311
interacciones
van der Waals
adsorbente
/.
(a)
adsorbente
hidrofcibica
(b)
interacciones
electrostticas
Figura 7.2: Tipos de adsorcin, a) Fsica b) Inica c) Hidrofbica d)
Afinidad.
/?\ A /K /N
Carbn activado Slca gel
Figura 7.3: Adsorbentes fsicos.
ms utilizado en bioseparaciones es el carbn activado (vegetal), y en
menor grado la silica gel (Figura 7.3). Tambin son utilizadas como
adsorbentes resinas sintticas. Las resinas no polares derivadas del
estireno-divinilbenceno son utilizadas para la adsorcin de solutos no
polares a partir de solventes polares. Las resinas basadas en esteres
acrlicos tienden a ser ms efectivas para remover solutos polares de
solventes no polares.
Los adsorbentes utilizados en intercambio inico pueden ser in-
orgnicos o sintticos (Figura 7.4). Los inorgnicos como las zeolitas
son poco utilizados. Los adsorbentes inicos sintticos estn formados
por matrices de polmeros unidos lateralmente. A la matriz se le unen
grupos funcionales que le dan la capacidad de intercambio inico. Las
resinas de estireno-divinilbenceno catinicas se producen en un paso
por accin de un cido sobre el grupo'benceno. Las amnicas se pro-
ducen en dos pasos: Primeramente, se produce una cloro-metilacin del
benceno. En el segundo paso, se efecta una animacin. Las matrices
de celulosa activada tambin son muy utilizadas para adsorcin por
intercambio inico.
En la adsorcin por afinidad el adsorbente consta de dos partes, el
soporte o matriz y el ligando. El ligando se une a la matriz por medio de
un brazo que evita impedimentos estricos en un determinado arreglo
(Figura 7.5).
Las matrices utilizadas en la adsorcin por afinidad son fabricadas
de: celulosa, celulosa modificada, poliacrilamida (o derivados), dex-
trano y agarosa (Figura 7.6). En la Tabla 7.1 se presentan algunas
caractersticas de estas matrices.
/\ /\
A A I
Zeolitas
Figura 7.4: Tipos de adsorbentes de intercambio inico: a) Adsorbentes
inorgnicos.
Resina catinica
Resina
anin ica
-CH-CH,-
-CH-CH,-
CH-CH,
i
H2S04
I
SO;H*
N(CH3)3
CH3
CH2N -CH3Cr
CH,
CHN -CHCr
Clorometilacin
I Aminacin
N(CH3)2
Base dbil
Figura 7.4: Cont i nuaci n. . . b) Adsorbentes de i nt ercambi o inico
derivados del es t i r eno- di vi ni l benceno.
314
CAPTULO 7. ADSORCIN.
CHjOH
-O
OH
OH
OH
~VOH
x^CHoOH
O_
CH
2
OR
R = -PO
3
H
2
-SO
2
OCH
2
CH
2
NH2
- CH
2
COOH
-CH
2
CH
2
NR
2
-CH
2
CH
2
NR
3
*X'
-C-CH
2
-CH
2
-COOH
Figura 7.4: Continuacin... c) Adsorbentes de intercambio inico

derivados de celulosa
A, C H, >, , x , ^, , ^, v
x
,
N
C , v
N
c ,
N
<,, v
N
;
t
x
c , Y
N
c Hr^"LP
Figura 7.5: Adsorcin por afinidad, a) Soporte de slice b) ligando fijo
c) ligando mvil parte hidrofbica d) ligando mvi l parte hidroflica e)
piridina f) protema Fuente: Torres et al, 1988.
Reproducida con el permiso de Academic Press. Copyright 1988. Todos los derechos reservados.
Soporte (marca)
Agarosa
Materiales silceos
(vidrio de poro
controlado. Spherosil)
Matrices comerciales
Estructura qumica
CH2OH
O
OH
O Si OH
O Si OH
I
O
Poliacrilamida rv(CH2 CH) Ofe CH C (CH2 CH CH
NH
I
C =0
I
NH
f
NH
C =0
C opolmero de
Hidroximetil metac rilado
C H2
1
-C
1
-C Hz
C OOOH2C H2OH
-C
1
-C Hz
C OOOH2C H2OH
C H
1
C
1
C O
1
o
1
OH2
C H2
1
O
1
C O
1
C -
1
C H3
C H3
1
C H2 C C H2 C
1 1
OOOOHZC H2OH C O
1
0
1
C H2
C H2
1
0
1
C O
C H2 C C H2 C
1 1
C OOOH2C H2OH C H3
CH2-
Celulosa
CH2OH
OH
Figura 7.6: Matrices de adsorcin por afinidad. Fuente: Yarmush
Colton, 1985.
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985. Todos los derechos res
vados.
Tabla 7.1: Propiedades de matrices.
Propiedad
Estabilidad
Reactividad
Permeabilidad
Especificidad
No. de ligandos
Costo
Material
Slice
buena
alta
buena
baja
bajo
bajo
Celulosa | Poliacrilamida
buena
alta
baja
baja
bajo
bajo
buena
alta
buena
baja
alto
medio
Agarosa
buena
baja
buena
alta
alto
alto
Existen varios procedimientos para inmovilizar el ligando en la ma-
triz, los cuales dependen del tipo de grupo funcional sobre la matriz,
del ligando y de la estabilidad de stos. Generalmente los grupos fun-
cionales utilizados son hidroxilos, aminos y carbonilos. En la Figura 7.7
se presenta uno de los procedimientos utilizados para activar una matriz
de agarosa, lo cual se efecta mediante dos pasos qumicos. Inicialmente
se activa la matriz con bromuro de ciangeno. Posteriormente se puede
unir un radical por medio de un grupo amino para formar un derivado
de la isourea.
Los ligandos son molculas de alta afinidad por el soluto de inters
y pueden ser de varios tipos (Figura 7.8):
- Bioespecficos estrictos:
Sustratos para adsorcin de enzimas.
Antgenos para adsorcin de anticuerpos.
Sondas para obtencin de cidos nucleicos.
Protenas acarreadoras para obtencin de hormonas.
- Bioespecficos amplios: Cofactores y lectinas.
- Pseudoespecficos biolgicos: Aminocidos.
- Pseudoespecficos no biolgicos: Colorantes y Metales.
I
BrCN. -_=
OH * -
H
Ester de aanato
24- c >
||_(X>
C =NH
Amidocarbonato
o
^-ocNH Carbamato
b)
'/A
3CN+ NHjR-
Figura 7.7: a) Activacin de matrices con bromuro de ciangeno. b)
Reaccin del ster de cianato con un derivado amino para obtener un
derivado de isourea. Fuente: Yarmush y Colton, 1985.
vados.
ugandos
Pseudobioespeficos
Figura 7.8: Tipos de ligandos en adsorbentes de afinidad. Adaptada
de: Vijayalakshmi, 1989.
vados.
7.2.3 Relaciones de Equilibrio
El anlisis de los procesos de adsorcin requiere de datos de equilibrio
que se expresan normalmente como isotermas de adsorcin. Las isoter-
mas son parte esencial para modelar la adsorcin y por lo tanto para el
diseo, clculo de eficiencias y costos de la adsorcin. Las isotermas nos
permiten estimar el grado de purificacin que puede ser alcanzado, la
cantidad de adsorbente requerido, y la sensibilidad del proceso respecto
a la concentracin del producto.
En los procesos de adsorcin que se presentan en las bioseparaciones
existen cuatro tipos bsicos de isotermas (Figura 7.9): la isoterma de
Freundlich, la lineal, la de Langmuir y la irreversible (Hall et a/, 1966).
Las isotermas tipo Freundlich normalmente se presentan en sistemas-'
de adsorcin por intercambio inico; la adsorcin por afinidad general-
mente presenta isotermas tipo Langmuir. La isoterma lineal es menos
comn, pero puede ser utilizada para aproximar las otras isotermas en
la regin de baja concentracin de soluto. Las isotermas irreversibles
son caractersticas de sistemas altamente especficos.
La isoterma de Freundlich se describe por medio de una ecuacin
exponencial emprica de la siguiente forma:
q = Ky" (7.1)
donde q es la cantidad de soluto adsorbida (incluyendo el soluto en el
lquido de los poros del adsorbente) por cantidad de adsorbente, y es la
concentracin de soluto en la solucin, n es una constante adimensional
y K es una constante cuyas unidades dependen de n. Tanto K como n
deben ser obtenidas experimentalmente. En este tipo de experimentos
generalmente se pone en contacto cantidades iguales del adsorbente
con soluciones de soluto de diferentes concentraciones y se mide las
concentraciones una vez alcanzado el equilibrio.
Las constantes de la isoterma de Freundlich pueden ser obtenidas
por medio de una grfica log-log de los datos experimentales, deter-
minndose K con la ordenada en el origen y n de la pendi ent e de la
recta que se obtiene.
Cuando las isotermas de adsorcin son cncavas hacia el eje de las
abcisas o sea cuando n < 1, la i sot erma se l l ama favorable, ya que
se puede obtener una buena adsorcin an a concent r a ci ones bajas de
320 CAPTULO 7. ADSORCIh
Freundlich (comn ^
emprica)
Figura 7.9: Isotermas de adsorcin ms comunes. Fuente: Belter et a
1988.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright 1988. Todos los derech
reservados.
soluto. Las isotermas concavas hacia el eje de las ordenadas o sea para
n > 1, se llaman desfavorables.
Las isotermas lineales pueden ser descritas por la ecuacin de una
recta que pasa por el origen de la forma:
9 =Ky (7.2)
en este caso los datos experimentales se grafican en coordenadas carte-
sianas para determinar K.
Las isotermas tipo Langmuir estn dadas por expresiones de la si-
guiente forma:
Vy i - ? Q ^ q= (7
-
3)
donde q
0
es la capacidad mxima del adsorbente y K es la cons-
tante de equilibrio de desorcin. Estas constantes deben ser obtenidas
experimentalmente. En este caso es preferible manejar los datos exper-
imentales con la forma reciproca de la ecuacin 7.3:
9 < i o y q
0
de tal manera que en una grfica cartesiana de l/q vs 1/y, se puede
obtener una recta de pendiente Kd/q
0
y ordenada en el origen l/q
0
- La;
unidades de q
0
y K de esta isoterma son las mismas que las de q y y
respectivamente.
Un caso particular de la isoterma de Langmuir se presenta cuand<
K es muy pequea y la adsorcin es irreversible. En este caso q = q
para cualquier valor de y.
La forma de las isotermas de Langmuir puede explicarse mediant
un mecanismo terico bien fundamentado. Se propone que sobre la su
perficie del adsorbente existen sitios especficos en los que las partcula
de soluto se unen reversiblemente. En un momento dado durante 1
adsorcin, coexisten sitios ocupados por soluto y sitios vacos. La ac
sorcin en el sentido directo es proporcional a la concentracin de solut
y a la concentracin de sitios vacios. En el sentido inverso la adsorci
es proporcional a la concentracin de sitios ocupados.
De acuerdo a lo anterior, la adsorcin puede ser expresada en forrr
de una ecuacin qumica de la siguiente forma:
so luto -f si ti o s vado s ^ si ti o s o cupado s (7-5)
En el equilibrio se puede definir una constante de equilibrio de de-
sorcin K de acuerdo con la siguiente expresin:
k - 2 [so luto ][si ti o s vado s]
I< d - - j- = 7-rr. y; (7.6)
KI [si ti o s o cupado s]
El nmero total de sitios activos para la adsorcin es constante e
igual al nmero de sitios vacos ms los sitios ocupados o sea:
[si ti o s to tales] [si ti o s vado s] -j- [si ti o s o cupado s] (7.7)
Combinando las ecuaciones (7.6) y (7.7) se puede llegar a la ex-
presin:
. . . . [si ti o s to tal es][so luto ]
[si ti o s o cupado s] = : (7.8
1 F J
K
d
+[so luto ]
v l
debido a que q es proporcional a la concentracin de sitios ocupa-
dos y q
0
a la concentracin de sitios totales, la ecuacin (7.3) puede
ser obtenida a partir de la expresin (7.8), es decir este mecanismc
fundamenta la expresin de Langmuir.
Las isotermas de intercambio inico pueden ser racionalizadas er
forma anloga. Sin embargo, en este caso los sitios de adsorcin en ur
momento dado, o estn ocupados por el ion de soluto o estn ocupado;
por el ion que normalmente est unido a la superficie del adsorbente
La expresin final depende del nmero de iones de soluto que se nter
cambian por ion de adsorbente.
En el caso de un intercambio monovalente caracterstico de la
resinas sintticas la adsorcin puede ser expresada como:
Na
+
+ HR ^NaR + / / + (7.9
donde HR representa los sitios de i nt ercambi o inico en estado or
mal del adsorbente, y NaR representa los sitios de intercambio una ve
que ha sido intercambiado el ion de soluto. En equi l i br i o la constant
de desorcin est dada por:
7.2. FUNDAMENTOS 32
[Na
+
][HR]
[NaR][H+]
(7.H
La concentracin de radicales R totales en la superficie del adso
bente est dada por:
[R~] = [NaR] + [HR] (7.1
Combinando las ecuaciones (7.10) y (7.11) se puede obtener la
cuacin:
[NaR] =
[RT][Na
+1
K
d
[H+] + [Na-
(7.1:
como q es proporcional a [7Va.] y q
0
es proporcional a [R ],
adsorcin inica monovalente puede ser descrita por medio de una e
presin tipo Langmuir, siempre y cuando la concentracin [H
+
] pe
manezca constante; como en el caso de que se utilice una soluci<
amortiguadora.
En el caso de adsorciones inicas no monovalentes el anlisis anlo
frecuentemente conduce a expresiones tipo Freundlich.
Ejemplo 7.1.- Adsorcin de Albmina de Suero de Bovii
(ASB) a pH =7 en un adsorbente aninico Q -Sefarosa.
Los datos de equilibrio de la adsorcin de ASB en Q -Sefarosa
presentan en la Tabla 7.2.
Encontrar la expresin matemtica de la isoterma que mejor aju
los datos.
Solucin:
La solucin se presenta en forma grfica en la Figura 7.10.
acuerdo con la Figura 7.10a los datos no se ajustan a una isoten
lineal. La grfica log-log de los datos (Figura 7.10b) no produce u
linea recta, entonces la isoterma no es del t i po Freundli ch.
324 CAPTULO 7. ADSORCIN
Tabla 7.2: Datos de equilibrio.
y mg/ml
0.05
0.10
0.20
1.00
2.00
4.00
q mg/ml
30.00
43.70
56.53
73.85
76.81
78.37
Log(y)
-1.30
-1.00
-0.70
0.00
0.30
0.60
Log(q)
1.477
1.640
1.752
1.868
1.885
1.894
i/ y
20.00
10.00
5.00
1.00
0.50
0.25
i/q
0.0333
0.0229
0.0177
0.0135
0.0130
0.0128
Fuente: Draeger y Chase, 1990.
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1990. Todos los derechos rese
vados.
Los datos ajustan la isoterma de Langmuir (Figura 7.10c). La o
denada en el origen es 0.0125, por lo que q
0
=80 mg/ml. La pendient
de la recta es igual a 1.0375 x 10~
3
, entonces K = 0.083 mg/ml.
7.2.4 Cintica de la Adsorcin
El estudio de las isotermas de adsorcin nos permite determinar par
un sistema soluto-adsorbente dado, el grado de separacin que pued
ser logrado y la sensibilidad del proceso con respecto a la concentraci
del soluto. Sin embargo, para el desarrollo del modelo de la adsorci
es necesario poder establecer, mediante el empleo de coeficientes d
transferencia de masa, la velocidad de la adsorcin o el tiempo necesari
para alcanzar una cierta separacin (Figura 7.11).
En el caso que la adsorcin sea bastante rpida, el sistema pe
manecer esencialmente en equilibrio y el modelo se simplifica. E
la mayora de los casos las interacciones soluto-adsorbente no ocurre
instantneamente.
La velocidad efectiva de la adsorcin depende tanto de las cond
cienes de operacin (flujo, t emperat ura, composicin y presin), con
de la configuracin del sistema (i nt ermi t ent e, columna, etc.) y d
tamao del equipo donde se realizar la operacin. El estudio de an
7.2. FUNDAMENTOS 32
80
70
60
q (mg/ml)
50
40
30
20
10
0.00 1.00 2.00 3.00
y (mg/ml)
Figura 7.10: Ejemplo 7.1.- Ajuste de datos, a).- Isoterma lineal
2.0
1.8
log(q)
1.6
1.4
1.2
1.0
-1 50 -1.00 -0.50 0.00
log(y)
0.50
Fi gur a 7.10: Continuacin... b).- isoterma de Freundli ch.
1/q
0.030
0.025
0.020
0.015
0.010
0.005
0.000
I
10
I/y
I
15
Figura 7.10: Continuacin...c).- Isoterma de Langmuir.
Relac iones de Equilibrio
C oefic ientes de T. de Masa
Mtodo de Operac in
'C onc entrac in Alimentac in
Rujo
Tamao Partc ula
Temperatura
Modelo del Adsorbedor
Simulac in
Perfiles de C onc entrac in
Dinmic os
Tiempo del C ido
Produc tividad
Figura 7.11: Diseo de adsorbedores. Adaptada de: Wang, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos rese
vados.
328 CAPTULO 7. ADSORCIOh
bos efectos se divide en dos grandes conceptos :
- Los mecanismos de transporte (fsicos y qumicos).
- Los efectos de mezclado.
Mecanismos de Transporte
El estudio de los mecanismos de transporte consiste en establecer la
expresiones de la rapidez de la adsorcin a nivel local, es decir con
siderando el comportamiento de una partcula de adsorbente o un ele
ment de volumen de un sistema.
En los procesos de adsorcin se utilizan materiales porosos que ofre
cen una gran rea por unidad de volumen con el propsito de recupera
la mayor cantidad de soluto posible en un volumen dado. Para que un
partcula de soluto pueda ser adsorbida en la superficie de un poro de
adsorbente, el soluto tiene que pasar del seno de la fase lquida a 1
superficie del adsorbente (Figura 7.12).
Varias resistencias al movimiento del soluto existen en este preces
que pueden visualizarse principalmente como:
- Resistencia de la pelcula del lquido que rodea el adsorbente.- Pr
mero el soluto difunde desde el seno del lquido a travs de 1
pelcula de lquido que rodea a la partcula de adsorbente.
- Resistencia a la difusin en el seno del adsorbente.- En algunos tipc
de adsorbentes el soluto difunde a travs del seno del adsorbent<
A este fenmeno se le conoce como difusin en la fase del adso
bente.
- Resistencia a la difusin dentro del poro.- Debido a que el rea de 1
superficie interior del poro es mucho mayor que la superficie ext<
rior, generalmente la adsorcin se efecta principalmente denti
del poro, por lo que el soluto debe difundir a travs del lquido i
interior de los poros.
- Resistencia a la reaccin en la superficie.- El soluto una vez situad
en el sitio de adsorcin se une a ste por medio de una reaccic
de superficie, la cual es un proceso finito pero generalmente m
rpido que los procesos anteriores.
7.2. FUNDAMENTOS 32
a)
d)
Resistencia a la difusin
al interior del poro
Resistencias de la superficie
Resistencia de la
pelcula de lquido
Figura 7.12: Resistencias en la adsorcin. Adaptada de: Levensj
1962.
Reproducida con el permiso de J ohn Wiley and Sons. Copyright 1962. Todos los den
reservados.
Control de la resistencia en la pelcula.- Las resistencias an
teriores no actan slo en serie o en paralelo como puede apreciarse ei
la Figura 7.12. Particularmente, la resistencia de la difusin en el por*
no puede relacionarse directamente con las otras dos. Generalmente 1,
resistencia de la pelcula o la del poro o una combinacin de ambas
controla la velocidad de adsorcin local.
Cuando la resistencia de la pelcula es mucho mayor que la de
poro o la de la reaccin de superficie, la velocidad de adsorcin est;
controlada a nivel local por el flujo del soluto a travs de la pelcul
que rodea al adsorbente. En este caso la expresin de la velocidad d<
adsorcin puede expresarse como:
R=k
L
a(y- y*) (7.13
donde:
&,: Coeficiente de transferencia de masa. [M/(TL
2
M/L
3
lquido)]
a: rea de adsorbente por unidad de volumen de lecho (adsorbente 3
lquido). [L
2
/L
3
].
y: Concentracin de soluto en el seno de la fase lquida. [M/L
3
].
y*: Concentracin hipottica de soluto en el lquido, en equilibrio cor
la concentracin de soluto en el adsorbente. [M/L
3
].
R: Velocidad de adsorcin referida al volumen del lecho (adsorbente
y solucin). [M/L
3
t].
(En la literatura tambin se utiliza R' =R/e velocidad de adsorcir.
por volumen del lquido).
El parmetro a puede ser correlacionado con la porosidad del leche
6 (volumen del lquido sin incluir el lquido de los poros/volumen de
lecho) y el dimetro de la partcula de adsorbente d
p
de acuerdo a le
expresin:
(7.14)
p
7.2. FUNDAMENTOS
La resistencia de la pelcula por si misma rara vez controla la rapidez
de la transferencia de masa, excepto en los casos en que la partcula de
adsorbente es pequea y la difusividad en el poro grande.
Para sistemas de adsorcin en columnas, fc generalmente se puede
correlacionar con una expresin de la forma:
Sh = C
l
- i - C
2
(Re)
a
(Sc)
b
(7.15;
donde Ci, ^ 2, a Y b son constantes, y Sh, Re y Se, son los nmero
adimensionales de Sherwood, Reynolds y Schmidt dados por las siguien
tes relaciones:
Sh =
k
L
d
f
AB
(7.16
(7
.
17
(
7
-
18
En el caso de protenas se han utilizado las siguientes correlacione
para estimar &,:
Para tanques agitados:
d
p
' \PLÂB
-2/3
Para columnas:
S/ i - 2- f 1.45/?e
1/2
Sc
1/3
estimndose la difusividad mediante la expresin:
T
=9.4 x 1(T
15
donde:
AB'- Difusividad. [m
2
/s].
: Viscosidad. [Kg/m s].
(7.19
(7.2C
(7.21
T: Temperatura. [K].
MA\ Peso molecular soluto.
Control de la difusin del soluto en el seno del adsorbente.-
La difusin en la fase slida del soluto una vez que ha pasado del sene
del lquido a la fase slida, se presenta en algunos slidos homogneos
permeables como las resinas que se utilizan en intercambio inico o en
adsorbentes con porosos cubiertos con pelculas mviles, o en lquidos
utilizados para impregnar la partcula porosa. Considerando una geo-
metra esfrica uniforme el balance de soluto en la partcula est dado
por:
donde:
D
a
: Difusividad efectiva del soluto en la fase slida. [(L
2
/t)].
r: La coordenada radial al interior de la partcula. [L].
q: Concentracin de soluto en la fase slida. [M/L
3
].
La velocidad de transferencia de masa entre las fases puede ser ex-
presada por la ley de Fick como:
R=- aD
s
^\
r=Ra
(7.23)
o r
donde R
a
es el radio externo de la partcula.
La ecuacin (7.22) suele ser aproximada utilizando una fuerza im-
pulsora lineal de la siguiente forma:
|? =^
s
k
s
a(q* - q) (7.24)
q* es una concentracin hipottica de equilibrio con la concentracin
de soluto en el seno de la fase lquida, i p
s
es un factor de correccin
>
2. FUNDAMENTOS 333
Dimensional que se introduce al linearizar la expresin. k
s
es el coefi-
ciente de transferencia de masa (L
3
(total)/rea-tiempo). Con la linea-
rizacin anterior la expresin de la velocidad de transferencia de masa
por unidad de volumen de lecho es:
R= (1 - e)i >
s
k
s
a(q* - q)
k *a se correlaciona con la difusividad mediante la ecuacin:
k < ,a =
600,
(7.25)
(7.26)
Control de la difusin del soluto en la fase lquida al interior
de los poros.- Cuando la velocidad de adsorcin est controlada por la
difusin del soluto al interior de los poros de la partcula de adsorbente,
hasta el sitio de adsorcin, el balance de soluto al interior de la partcula
est dado por la expresin:
o,
ot \ dr
2
r o r
-d-.)f (7.27)
y
t
-: Concentracin de soluto en la fase lquida al interior del poro.
[M/L
3
].
qi \ Concentracin de soluto en la fase slida. [M/L
3
].
D
p
: Difusividad efectiva del soluto al interior del poro. [ L
2
/ t ] .
e,-: Porosidad de la partcula al soluto de inters. [L
3
/Z/
3
].
Para el caso en que la acumulacin del soluto al interior del poro
sea mucho menor que la velocidad de la adsorcin la ecuacin (7.27)
puede ser escrita como:
dt
|
2%
<9r
2
r dr
(7.28)
La velocidad de transferencia de masa entre las fases puede ser ex-
presada por la ley de Fick como:
r=R
a
para lquidos la difusividad D
p
puede ser expresada como:
D
p
= ^^ (7.30)
* o
donde Y
0
es la tortuosidad del adsorbente (una medida de la es-
tructura de los poros) y DAB es la difusin molecular del soluto en un
lquido libre de adsorbente.
La ecuacin (7.28), puede aproximarse utilizando una fuerza impul-
sora lineal como la siguiente:
VA
de tal manera que,
r) ysp'vp ^ * f * j ) ( < - ! < tc\\
H = (7.32)
donde q* es una concentracin hipottica de equilibrio con la concen-
tracin de soluto en el seno de lquido , q es la concentracin promedio
de soluto en el adsorbente, qx es la concentracin de la fase slida en
equilibrio con la concentracin y A de la solucin que se va a tratar y i fr
p
es un factor de correccin por linearizacin. k
p
a puede correlacionarse
con la difusividad efectiva del poro mediante la siguiente expresin:
f^ (7.33)
Control de la reaccin de superficie.- Generalmente la reaccin
de adsorcin en la superficie del adsorbente es mucho ms rpida que
los otros mecanismos y rara vez es el mecanismo controlante.
En las expresiones cinticas ms utilizadas la reaccin de superficie
es tratada como una reaccin qumica, reversible o irreversible, de un
cierto orden.
Dos expresiones comunmente utilizadas principalmente para sis-
temas de intercambio inico, son:
Cintica reversible de primer orden:
R =e(k
i y
- k
2
q) (7.34)
7.2. FUNDAMENTOS
Cintica reversible de segundo orden:
R -
(7.35;
donde k \ y k % son las constantes cinticas de adsorcin y desorcin
respectivamente. q
0
es la capacidad mxima de adsorcin del adsor
bente.
Efectos de Mezclado
La velocidad de adsorcin efectiva tambin puede disminuir por efecto;
de un mezclado imperfecto. Esta situacin es caracterstica de columna;
largas donde se presentan irregularidades en el flujo (canalamiento) o ei
el mezclado (espacios muertos, difusin molecular o dispersin axial).
En la construccin de algunos modelos de adsorcin no se considerai
los efectos de mezclado y de flujo no ideal. Sin embargo, debido .
que en el proceso de escalamiento de columnas este efecto puede se
importante, es necesario considerar algunos aspectos fundamentales d
este fenmeno.
Uno de los modelos ms utilizados para describir la desviacin de
comportamiento ideal del flujo al interior de columnas, es el modelo d
flujo tapn con dispersin (Figura 7.13), donde los efectos de la dis
persin axial debida a remolinos y de la difusin molecular, se agrupa!
en el concepto del coeficiente efectivo de dispersin axial, en funcin d(
cual se puede definir un coeficiente aparente de transferencia de mas
dado por:
I
(7.36
donde:
E: Es el coeficiente de dispersin axial. [L
2
/t].
v: Es la velocidad superficial de flujo. [L/t].
Es conocido que para flujo laminar de lquidos en lechos empacadc
(caso ms comn) el nmero de Reynolds basado en el di met ro de h
partculas del lecho es menor a 10. Bajo esta consi deraci n el nmei
336 CAPTULO 7. ADSORCII
Perfil plano de velocidad
Fluctuaciones debidas a
difusin molecular y
turbulencia
-
Figura 7.13: Modelo de flujo tapn con dispersin. Adaptada de: L
venspiel, 1962.
reservados.
Pe:
0.1
1000 2000
Re =
Figura 7.14: Dispersin en lechos empacados. Adaptada de: Leven;
piel, 1962.
reservados.
de Peclet (el cual es una medida del grado de dispersin en la columna)
toma un valor constante de 2 (Figura 7.14) entonces,
Pe = ^= 2 . (7.37)
hi
donde P
e
es el nmero de Peclet (adimensional). Las ecuaciones
(7.36) y (7.37) permiten obtener una expresin para el coeficiente a-
parente de transferencia de masa por dispersin, de tal manera que la
expresin de la velocidad de adsorcin se puede aproximar a:
R =k
d
a(y - y*) (7.38)
Resistencias Combinadas
En la elaboracin de un modelo cintico se puede suponer que una re-
sistencia a la transferencia de masa es la controlante, lo cual simplifica
la solucin matemtica del modelo de adsorcin. Sin embargo en al-
gunos sistemas, la cintica de la adsorcin puede ser descrita en forma
ms adecuada utilizando un modelo donde la combinacin de resisten-
cias (por ejemplo pelcula y poro) describen en forma ms precisa la
cintica. En estos casos, la combinacin de resistencias se presenta por
medio de un coeficiente de transferencia de masa global que agrupa el
efecto de las resistencias individuales.
Para el establecimiento del coeficiente global de transferencia de
masa es necesario fijar la forma en que las resistencias individuales
estn relacionadas: en serie o en paralelo.
Si se considera como ejemplo el caso de la resistencia de la pelcula
y la del poro actuando en serie, para el clculo del coeficiente global se
deben sumar los inversos de los coeficientes individuales (para equili-
brios lineales).
~^
=
r~
+
r (
T
'
39
^
donde K
0
es el coeficiente global de t ransferenci a de masa referido
a la fase lquida.
< ^_
0
O
0
o
0 0
_^>
0
0*.
Q(~\
4-
b o
0
0
0
o O o
Adsorbente
Solucin
< =__
-
0
O
0 o
o c d
_-->
0
O4-
Oo
0
4-
"^ O
0
0
0
0 O o*"
r
Ad
So
V
Adsorbente
(a) Tanque agitado intermitente (b) Tanque agitado continuo
Figura 7.15: Sistemas de adsorcin tipo tanque agitado.
Las operaciones de adsorcin pueden llevarse a cabo en tanques agita-
dos, en forma intermitente o continua (Figura 7.15). Este tipo de sis-
temas son poco usados a nivel industrial por incosteables, pero resultan
muy tiles en la experimentacin de laboratorio para la obtencin de
datos de diseo.
Los equipos industriales de adsorcin ms empleados son los tipo
columna de lecho fijo. Estas columnas pueden ser operadas simu-
lando un sistema a contracorriente mediante el sistema de carrusel
(Figura 7.16). En este tipo de arreglo se cuenta con varias columnas
operando en serie. Cuando se agota la columna que est siendo alimen-
tada, se avanza la posicin de la alimentacin a la siguiente columna,
simulndose una operacin a contracorriente. La columna agotada se
descarga y posteriormente se convierte en la columna final de la serie.
En los equipos de lecho fluidizado las partculas de adsorbente se
suspenden mediante un flujo ascendente de la solucin de inters. Este
tipo de arreglo se considera t i l para el t rat ami ent o directo de caldos
7.3. EQUIPOS DE ADSORCIN 339
F
XA'
Alimentacin
Qdol
Solucin de
lavado
Cido2
Cido3
oooo
oooo
oooo
oooo
oooo
oooo
oooo
oooo
oooo
T
F
y ( U t )
a) Columna de lecho fijo
"1
A
L_
~l
B
L_
1
c
L_
Se
as
~l
D
1
)luc n
otada
r
E
^^^
Soluc in
de
lavado
Alimentacin
T
Producto
Solucin
agotada
;?d
n
0
ae
Alimentacin
77 T
Solucin Producto
agotada
b) Sistema de Carrusel
Figura 7.16: Adsorcin en columnas.
con slidos en suspensin, suprimiendo la operacin slido-lquido pre-
via a la adsorcin. Con esta misma intencin existen desarrollos donde
se emplea una combinacin de un tanque adsorbedor y uno desorbedor
operando en forma continua (Figura 7.17).
7.3. EQUIPOS DE ADSORCIN 341
Etapa de
adsorcin
Altura de lecho expandido -
Altura de lecho sedimentado -
Solucin de
lavado
J
a) Adsorcin en lecho fluidizado
Solucin agotada
y
Slidos celulares
Alimen
F
lac tn
O
0 o d
n
0 0
Solu
lav
ande
UlO
O
b o
o o
0
F +
'
o^c T O~o
v
O0^>
IX
XI
< PoOo~ J> OOoO
"M f
0
0 o d
n
0 0
Solu
e
c in de
uc in
O
0
V
o o
O
Etapa de
desorcin
F
Producto
b) Adsorcin continua con recirculacin de adsorbente
Figura 7.17: Adsorcin en caldos completos. Adaptada de: Gailliot et
a/, 1990 y Pungor et a/, 1987.
Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. Copyright 1990 y con el permiso
de Nature Publishing Co. Copyright 1987. Todos los derechos reservados.
7.4 Diseo de Adsorbedores
El diseo de adsorbedores mediante modelos (Figura 7.11) permite es-
timar algunos parmetros importantes como:
- Concentracin de soluto al final de la adsorcin (prdidas o eficien-
cia).
- Tiempo necesario para llevar a cabo el proceso.
- Cantidad de adsorbente necesario.
- Etapas necesarias o longitud de una columna.
Como se estableci en la introduccin de este captulo la formulacin
del modelo requiere de los datos de equilibrio de sistema, las expresiones
de la velocidad de adsorcin, los balances y las condiciones de frontera.
En las secciones 7.2 y 7.3 se han revisado los primeros dos aspectos.
En esta seccin se revisa la integracin de estos cuatro aspectos en el
diseo de arreglos especficos de sistemas de adsorcin, debido a que
los balances y condiciones de frontera son caractersticos de cada tipo
de arreglo. En general los arreglos ms comunmente empleados son:
El tanque agitado intermitente.
El tanque agitado con alimentacin continua.
Las columnas empacadas de lecho fijo.
7.4.1 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Inter-
mitentes
En una operacin de adsorcin tipo tanque agitado intermitente el ad-
sorbente se agrega a la solucin dentro de un tanque, se agita la sus-
pensin y posteriormente se separa la fase lquida y slida. Las opera-
ciones de este tipo son utilizadas cuando la capacidad del adsorbente
es muy alta.
A escala industrial estas operaciones son poco utilizadas por in-
costeables. Sin embargo, gran parte de los datos de equilibrio o las
7.4. DISEO DE ABSORBEDORES 343
cinticas de adsorcin para otro tipo de diseos son obtenidos en este
tipo de arreglos. Es importante mencionar que en algunos casos, las
operaciones de lavado y elucin se realizan en tanques agitados en forma
intermitente.
Considrese una operacin tipo tanque agitado intermitente. Si se
proporciona un tiempo de contacto adecuado se alcanza el equilibrio
entre las fases. Por otro lado, si el tiempo de contacto es menor que el
necesario para alcanzar el equilibrio la operacin no ser 100 %eficiente.
En el caso de adsorciones lentas, una alternativa de diseo es utilizar
curvas de equilibrio prcticas que tomen en cuenta directamente la
eficiencia de etapa, considerando tiempos de contacto menores a los del
equilibrio real.
En el anlisis que sigue se considera que cada etapa es una etapa
ideal, por lo tanto el adsorbente y la solucin estn en equilibrio al
trmino de la operacin (o bien una etapa real si se utilizan curvas
de equilibrio modificadas). Bajo esta consideracin el anlisis de este
tipo de operacin se simplifica, y slo requiere de la combinacin de
Jas expresiones de equilibrio y los balances de masa, ya sea en forma
grfica o en forma analtica.
La expresin de equilibrio es la isoterma que depende de cada tipo
* de adsorcin, por ejemplo:
q = Ky
n
(7.40)
El balance de masa del soluto de acuerdo a la Figura 7.18 puede ser
expresado como:
Fy
A
+ Sq
A
= Fyi + Sq
2
(7.41)
donde F es la cantidad de la fase lquida y S la cantidad de adsor-
bente (se suponen constantes como es el caso para soluciones diluidas
de caldos biolgicos), y A y 2/2
son
l
as
concentraciones de soluto en el
lquido al inicio y final del proceso, respectivamente. Asimismo, q y
<?2 son las concentraciones de soluto en el adsorbente al inicio y final
del proceso.
La ecuacin (7.41) puede arreglarse para expresarse como la ecua-
cin de una lnea recta, llamada linea de operacin,
ô o
o
0
o d
0'0
boO
0 0 O O
Sq.
t = 0
(a)
'::.
Sq
t = t
(b)
Curva equilibrio
y
(c)
Figura 7.18: Adsorcin intermitente.
92 =qA + - 2/2)
(7.42)
La solucin grfica de las ecuaciones (7.40) y (7.42) se representa en
la Figura 7.18c, donde la curva de equilibrio utilizada para la ilustracin
refleja una adsorcin favorable (n < 1). La interseccin de la curva de
equilibrio con la lnea de operacin permite calcular las concentraciones
de equilibrio (7/2, # 2) al final del proceso.
Ejemplo 7.2.- Adsorcin de estreptomicina.
La estreptomicina se recupera utilizando adsorcin por intercambio
catinico. Se ha observado que 1.56 g de este antibitico pueden ser
adsorbidos por cada gramo de resina. Debido a que la curva de equi-
librio es muy favorable para este proceso; slo cuando la concentracin
en la solucin es muy baja la concentracin del soluto en el adsorbente
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 345
e
s menor de este valor.
Estimar la cantidad de resina necesaria para procesar 100,000 / de
un caldo de fermentacin que contiene 6 g/l de estreptomicina en una
operacin intermitente.
Solucin:
El balance de masa para esta operacin es:
S(q- 2 - QA) = F(y
A
- y
2
)
con los valores:
<M =0
q
2
=1.56 g/g
7/2 = 0
se puede calcular S:
s =
FyA
s =
< 1 2
100,000 1x6 g/l
1-560/0
S 384,615 0 de adso rbente.
Como puede observarse se requiere una gran cantidad de adsorbente.
Esto implica que sera adecuada una operacin continua , sin embargo
el problema que significa el movimiento continuo de los slidos, conlleva
a utilizar con ms frecuencia operaciones semi-continuas.
Ejemplo 7.3.- Adsorcin de fenilalanina.
La adsorcin de fenilalanina en un adsorbente de poliestireno (am-
berlita XAD-2) puede ser descrita por la siguiente isoterma:
q = 6.1 x 10~V'
9
donde q tiene unidades de g/g y y de g/l.
Si se ponen en contacto 300 g de adsorbente con 2 litros de solucin
que contiene 15 g/l de f eni l a l a ni na , est i mar:
o.io
0.08
0.06
q (g/g)
0.04
0.02
o.oo
i
10
I
12
I
14
(15.0)
i
16
Figura 7.19: Solucin grfica del Ejemplo 7.3.
a) Las composiciones en el equilibrio.
b) El porcentaje de recuperacin.
Solucin:
Utilizando el mtodo grfico el balance de masa para esta operacin
(ecuacin 7.42), permite encontrar la ecuacin de la lnea de operacin.
a) La curva de operacin y de equilibrio se grafican en la Figura 7.19,
el punto donde intersectan representa las condiciones al final de la o-
peracin, por lo tanto:
92
=0.0420/0
2/2 = 8.6 g/l
b) El porcentaje de recuperacin puede ser expresado como:
Fy
A
-
Fy
A
y A - y2
15-8.6
RE =
~~l^~
RE = 43 %
Ejemplo 7.4.- Adsorcin de Desacetilcefalosporina C (DAC-
C), utilizando amberlita XAD-2 modificada.
La principal impureza en el proceso de obtencin de cefalosporina C
es la DAC-C. La isoterma de adsorcin de esta impureza en amberlita
XAD 2 CHi CH< Br, a un pH de 2.8, est dada por la siguiente
expresin:
donde q est en g/g y y en g/l.
Si se utiliza un proceso intermitente en equilibrio, qu cantidad de
h
f
, adsorbente es necesario agregar a 2 litros de una solucin de DAC - C
;
: con una concentracin de 2 g/l, para recuperar el 90 %de la impureza?.
Solucin:
Debido a que la isoterma es lineal se facilita una solucin analtica
al problema. Del balance de masa se obtiene:
en el equilibrio:
92
- 0.0877/
2
y de acuerdo a la recuperacin deseada,
Combinando las dos expresiones anteriores se puede encontrar la
interseccin de la curva de operacin con la de equilibrio,
#2 =0.0174 g de so luto g de adso rbente
y- 2 = 0.2 g de so luto /li tro
del balance de masa,
S =206.9 g
En la adsorcin intermitente puede considerarse el proceso de tran-
sicin del sistema de su estado inicial hasta su estado final. Este pro-
ceso est descrito por el modelo en estado no estacionario del proceso,
el cual como ya se ha mencionado depende del mecanismo controlante
de la adsorcin. En el siguiente ejemplo se revisan algunos de los casos
particulares de la adsorcin intermitente.
Ejemplo 7.5.- Adsorcin de Inmunoglobulina G (ImG) en
protema A inmovilizada en una matriz de agarosa en un sis-
tema intermitente.
Se desea predecir la variacin de la concentracin de ImG en un
sistema experimental intermitente (Figura 7.20).
La adsorcin se efecta utilizando protena A inmovilizada en una
matriz de Sefarosa B en una solucin amortiguadora al 0.1 M de tris -
HC1 a pH=7 y a 25 C. El equilibrio del sistema es tipo Langmuir.
Datos:
Adsorbente:
d
p
= 90 x 10'
6
m
G = 0.96
A/? =28 Kg/m
3
Protena:
M
A
= 150,000 daltons
K
d
=0.019 mg/ml
q
0
= 40 mg/ml
D
p
= 6x 10~
12
m
2
/s
,4. DISEO DE ADSORBEDORES 349
Adsorbente en
suspensin
Filtro
Bao de agua agitado
Figura 7.20: Sistema experimental de adsorcin intermitente con agi-
tacin.
Solucin:
p = 1000 Kg / m
3
H
L
= 9.5 x 10~
4
Kg/m - s
e = 0.99
y
A
=0.5 mg/ml
El coeficiente de transferencia de masa de la pelcula puede ser es-
timado en este sistema intermitente utilizando la siguiente correlacin:
.
n Q 1
1- 0.31
/ 1*1
\P
P
DAB
donde p
p
es la densidad del adsorbente, A/9 es la diferencia de den-
sidad entre el adsorbente y el lquido y m es la viscosidad del lquido.
La difusividad de la protena puede ser estimada por medio de la
siguiente correlacin emprica:
-15
T
._ _ = 9.4 x 10
donde:
i: Difusividad molecular. [m
2
/s]
T: Temperatura absoluta. [K]
MA'- Masa molecular de la protena. [Daltons].
Solucin:
Para mostrar el uso de modelos cinticos, en este ejemplo se desa-
rrolla una solucin empleando tres modelos diferentes.
Primero se pueden realizar los clculos comunes a las tres soluciones,
a) Clculo de la difusividad:
DAB = 9.4 x 10~
15
x
D
AB
= 5.5 x 10~
n
-
298
9.5 x
2
771
S
1
-4
JA. DISEO DE ABSORBEDORES 351
b) Clculo del coeficiente de transferencia de masa:
2 x 5.5 x lT
11
=
k
L
= - 2- +
90 x 10-
6
m
+ 0.31
1028 x5. 5 x 10-
11
=
X
(1028 f)
k
L
= 4 x 1(T
6
-
6
Solucin 1.- Equilibrio lineal y control de la pelcula.
En esta solucin se supone un equilibrio lineal y que el coeficiente de
transferencia de masa de la pelcula controla la rapidez de la adsorcin.
' La relacin de equilibrio est dada por una aproximacin lineal al
equilibrio en el rango O < y < 0.5, de tal manera que:
q = 80</* (A)
el balance de soluto en el lquido es:
eV J =- RV (B)
el balance de soluto en el adsorbente es:
(C)
la transferencia entre las fases:
R=k
L
a(y- y*) (D)
combinando las expresiones A, B y D, se tiene:
352 CAPTULO 7. ADSORCIN \
combinando B y C e integrando con las condiciones:
y = y A ; q = o j
y = y ; q =q \
se obtiene la linea de operacin, \
q = 7f~y(^ ~ y) (
F
)
sustituyendo (F) en (E) y rearreglando:
dy , AL a , k
L
a \ k
L
ay
A
integrando ( G ) con las condiciones:
t = O y = yA
se puede obtener:
c ( c _
Bt
(H)
donde:
k
L
a
e K(l- e)
(>
La ecuacin (H) describe la variacin de la concentracin de soluto
en la fase lquida conforme transcurre el tiempo de adsorcin t.
Clculos Numricos:
6(1- =
~
u
p
6(1 -0.99)
90 x 10~
6
m
a = 666 m"
1
TTL
k
L
a = 4 x 10~
6
x 666 m"
1
s
k
L
a = 2.66 x 10~
3
5~
J
Utilizando (I):
2.66 x lO"
3
^
1
2.66 x
+
0.99 80x ( l - . 99)
B = 6.011 x 10~
3
s~
l
Utilizando (J ):
_ (2.66 x 10~
3
s~
1
)(0.5 mg/ml)
80(1 -0.99)
C = 1.66 x 10~
3
mg/s - mi
y (H) queda expresada como:
g y = 0.276 + 0.224 ezp(-6.011 x 10~
3
)
k ' = 0.553 + 0.447 ezp(-6.011 x 10'
3
)
b
t
* En la Figura 7.21 se muestra la variacin de la concentracin de
^ soluto en la fase lquida en funcin del tiempo de adsorcin, tal y como
E lo predice la expresin anterior con k i 4 x 10~
6
m/s. Asimismo, se
r^ r
^ presentan los resultados para k i = 1 x 10 m/s para fines de com-
p^ paracin.
sas?-
Solucin 2.- Equilibrio de Langmuir y pelcula controlante.
En esta solucin se considera que el equilibrio es de tipo Langmuir
y la resistencia controlante est localizada en la pelcula de lquido.
La expresin de equilibrio est dada por:
=
q
y
*
El balance global de soluto:
1
0.9
0.7
120.0
I I
160.0 200.0
t (min)
Figura 7.21: Ejemplo 7.5.- Adsorcin intermitente de ImG. Equilibrio
lineal y pelcula controlante, a) fc =7 x 10~
7
771/5 b) &L =4 x 10~
6
m/s
La velocidad de transferencia de soluto por:
R =k
L
a(y - y*)
El balance de soluto entre las fases por:
(C
dy
- y
Las ecuaciones A, B y D, pueden ser resueltas utilizando un mtod
de integracin numrico, para obtener la variacin de la concentracic
con el tiempo. En la Figura 7.22 se muestra la curva obtenida utilizanc
un valor de k i = 7 x 10~
7
m/s, en lugar del valor obtenido median
la correlacin, con el objeto de aproximar ms el modelo a los dat<
experimentales.
Solucin 3.- Equilibrio tipo Langmuir y resistencias cornt
nadas poro y pelcula.
En este modelo se supone que la velocidad de adsorcin est conti
y/y*
0.8-
0.4-
0.2-
0.0-
" T"
50
1
I ' ' ' ' I ' '
100 150
Tiempo (min)
M'
200
tipo Langmuir. Cintica lineal. Modelo y datos experimentales. Datos
de: Horstman y Chase, 1989.
lada por la transferencia de la protena a travs de la pelcula que rodea
la partcula del adsorbente y por la difusin efectiva de la protena al
interior de los poros del adsorbente. Asimismo, se supone que en la
superficie del adsorbente la concentracin de protena en el lquido est
en equilibrio con la concentracin de protena en el slido, relacionadas
por una expresin tipo Langmuir.
El balance de soluto al interior del poro es:
' -&
(A)
donde R
a
es el radio de la partcula.
El balance de soluto entre las fases en la superficie del adsorbente:
- \
r
- R
a
= k i (y yi ] \
r=
P
3r
El cambio de la concentracin en el seno del solvente :
dy
-7T =- k i a(y - y
l
dt
La relacin de equi li bri o:
(B)
(C)
dt dyi dt
derivando la ecuacin (D)
dqi K
d
q
0
dy
t
(K
d
+ y,-)
2
'
combinando las ecuaciones (G) y (H),
dqj K
d
q
0
d
dyi (K + y i )
2
dt
combinando el resultado anterior con la ecuacin (A),
2
y; 2 dyi
_
d t
e
l - c - d r rdr
y las condiciones iniciales y de frontera,
r =0 7^ =0 (F)
o r
v
'
de acuerdo a la regla de derivacin de la cadena,
r\ 7 r\
(G)
(H)
(I)
Las ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimensiona
utilizando el siguiente cambio de variables:
D
p
t
T =
Efectuando el cambio de variables se obtiene el siguiente sistema d<
ecuaciones:
0.6-
y/y
A
I
0.4-4
Pelc ula-Poro
> I' ' ' '
100 1!
Tiempo (min)
r
l '
200
Langmuir y resistencias combinadas pelcula y poro. Datos: Horstman
y Chase, 1989.
dr
2
z dz
(K)
(L)
dw - 3(l- e)N
SH
(w Wi
dr e
donde NSH
es
un grupo adimensional dado por:
(M)
NSH =
D
(N)
Este sistema de ecuaciones puede ser resuelto por integracin con
diferencias finitas. En la Figura 7.23 se presenta la curva obtenida
mediante este mtodo.
Figura 7.24: Sistema de adsorcin tipo tanque agitado continuo.
7.4.2 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Con-
tinuo
Otro tipo de arreglo utilizado en procesos de adsorcin industriales es
el adsorbedor tipo tanque agitado con alimentacin continua.
Una aplicacin particular de este arreglo es en el procesamiento de
caldos de fermentacin completos (con una filtracin gruesa previa en
cribas vibradoras), ya que no presenta los problemas de taponamiento
con la biomasa como cuando se trata de procesar estos caldos directa-
mente en columnas de lecho fijo.
La operacin se efecta (Figura 7.24) alimentando al tanque ad-
sorbedor, donde inicialmente se coloca el adsorbente en solvente puro,
un flujo F de solucin con una concentracin de soluto y A- Durante
la operacin el adsorbente se mantiene en el interior del tanque y la
corriente agotada se retira continuamente del tanque . Una vez que
se alcanza cierta concentracin de soluto en la corriente de salida, se
interrumpe la operacin y se recupera el soluto concentrado en el ad-
sorbente.
En una primera aproximacin para obtener el modelo del proceso del
proceso, se puede considerar que el tanque est perfectamente agitado,
de tal manera que la concentracin de soluto a la salida es igual a la
y (t )
Adsorcin rpida
Tiempo t
Figura 7.25: Concentracin en el lquido de salida de un adsorbedor
continuo tipo tanque agitado. Fuente: Belter et a/, 1988.
reservados.
concentracin de ste en la solucin dentro del tanque.
En este sistema la cantidad de soluto adsorbido sobre la superficie
de adsorbente vara con el tiempo, lo que se traduce en una operacin
en estado no-estacionario. Por lo tanto, la concentracin de soluto
en la superficie del adsorbente q y la concentracin de soluto en la
solucin de salida t/, son ambas funciones del tiempo de operacin. El
comportamiento cualitativo del sistema puede representarse de acuerdo
a la Figura 7.25.
De acuerdo con la figura an en ausencia de adsorcin, la concen-
tracin de soluto en la corriente de salida vara con el tiempo. Por
otro lado, si la adsorcin es muy rpida, la concentracin de soluto en
la solucin ser baja por un cierto tiempo, hasta que se alcance la sa-
turacin del adsorbente; una vez ocurrido lo anterior la concentracin
aumentar siguiendo un patrn muy semejante al caso en que no existe
adsorcin. En el caso general la velocidad de adsorcin es intermedia
entre los dos casos descritos anteriormente.
Para un adsorbedor continuo t i po t a nque agitado el modelo que
describe la adsorcin, debe integrar la isoterma de adsorcin, el balance
de masa, la expresin de la rapidez de la adsorcin y las condiciones de
frontera.
El balance de masa del soluto en la fase lquida se puede expresar
en palabras como:
velo ci dad de acumulaci n velo ci dad de entrada velo ci dad de
sali da velo ci dad de adso rci n
V<
dt
= F(yA
~
y
)-
VR
(
7
-
43
)
el balance de soluto en el adsorbente:
V(l- e) = VR (7.44)
donde V es el volumen de la mezcla (solucin y adsorbente) en el
adsorbedor, y A y y son las concentraciones de soluto a la entrada y la
salida, respectivamente. La fraccin de volumen de lquido ( sin incluir
el lquido en los poros) al volumen total de la mezcla es e. El flujo de
alimentacin es F. La velocidad de adsorcin de soluto por unidad de
volumen de la mezcla de adsorcin es R.
Como se present en seccin 7.2, la velocidad de adsorcin depende
de los mecanismos controlantes de la transferencia de masa. De tal
manera que la expresin para R depende del sistema particular y debe
ser determinada experimentalmente.
El caso ms sencillo que permite obtener un modelo mediante inte-
gracin analtica, es el caso donde la velocidad de adsorcin puede ser
aproximada mediante un modelo lineal y la isoterma de adsorcin es
lineal. Para este caso la velocidad de transferencia de masa est dada
por:
R = k a(y- y*) (7.45)
donde k es nuevamente el coeficiente de transferencia de masa, a
es el rea de adsorbente por unidad de volumen de mezcla, y es la
concentracin de soluto en el seno del lquido, y ?/* la concentracin
hipottica de lquido en equilibrio con la concentracin de soluto en el
adsorbente.
La isoterma de adsorcin lineal se puede expresar como:
q = Ky* (7.46)
La solucin de las ecuaciones (7.43), (7.44), (7.45 ) y (7.46) es:
y* - y
r
*
eri i r
^
T2t
(7.47)
y A r
2
- r
l
r
2
- r
l
que es la la expresin de la variacin de la concentracin de soluto
en la fase lquida con el tiempo de adsorcin.
en la expresin anterior:
2A
- B-
r2 =
2A
A =1
B = 4
+
^ d
+
(l- e)K
=
fcaF
eA' ( l - e) V
Ejemplo 7.6.- Recuperacin de antibiticos por adsorcin.
Como alternativa a los procesos tradicionales de recuperacin de
antibiticos, donde el primer paso consiste en una filtracin para la
eliminacin de micelio y esporas, se desea analizar la posibilidad de
una recuperacin directa del producto por medio de adsorcin inica
en un arreglo tipo tanque agitado continuo.
En un estudio piloto se desea estimar el tiempo para obtener el 90%
de recuperacin de un antibitico de una corriente de alimentacin que
fluye a razn de 3 l/h con una concentracin de 1 mg/l de antibitico.
El adsorbente empleado inicialmente est libre de soluto y su cons-
tante de equi l i br i o li neal es 110. La relacin de volumen de lquido a
362 CAPTULO 7. ADSORCIC
volumen total que va a ser empleada es de 0.8. El volumen de reacci
es de un litro.
Como primera aproximacin se puede considerar que la resisten<
controlante es la de la pelcula con un k i a = 62.4 h~
l
.
Solucin:
Las constantes A, B y C estn dadas por:
A =1
3 62.4 h~
l
0.8
*- * /.-> / ~ V \ / 1 1\ I /-i /-, I ^ "I
(0. 8)(l/ ) 0.8 (I -0.8)110
B = 84.59 /T
2
(62.4 ft-*)(3 {)
C = 10.63 h~
2
Asimismo r\ y r
2
estn dadas por:
(-84.59 h~
l
) v/(84.59 /i'
1
)
2
- 4(1)(10.63 /i'
2
)
Y . -
==
_ i
2
rj = -0.126 /T
1
r
2
= -84.46 /T
1
Se puede definir el grado de recuperacin mediante la siguiente
presin:
., /' Fy
x
df - /' Fyof
Recuperaci n =
;
J o Fy
dt
combinando la expresin anterior con la ecuacin (7.47),
f'dt- f ' f i - r z ^ +115
J O J O V r
2
-r! r
2
-r
Recuperaci n =
;
/o*
efectuando la integracin,
f 7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 363
_ t
2
T
(e
r i t
-1)4- ,
n
,(e
r2t
- 1)1
. , T-
1
r
2
- r
1
) V ) r
2
( r
2
-r!) V / I
Recuperaci n = - - -
t/
7.95(1 - e"
0
-
126
*) + 1.8 x 1Q ~
5
(1 -
e
-
8
-
440f
)
U 7 -" ~ ~ ~ '~ ~
t
de donde:
t 1.75 h
7.4.3 Adsorcin en Lecho Fijo
La adsorcin en lecho fijo es la operacin ms empleada a escala in-
dustrial para la concentracin de caldos . Este tipo de operacin se
efecta en columnas empacadas con adsorbente. Por la parte superior
de la columna se alimenta la solucin que contiene el soluto de inters.
Durante su paso por la columna el soluto es adsorbido en el lecho y la
solucin agotada es obtenida en el fondo de la columna. Una vez que
la concentracin de soluto a la salida alcanza una cierta concentracin,
se interumpe la operacin y se recupera el soluto concentrado. A esta
tcnica tambin se le conoce como Cromatografa Frontal.
En la descripcin de la adsorcin en columna se utilizan grficas de
la variacin de la concentracin de soluto la salida de la columna con
el tiempo. Estas grficas son llamadas curvas de ruptura.
Curva de Ruptura
En la Figura 7.26 se presenta un esquema de adsorcin en una columna
de longitud L (la columna se presenta acostada slo para efectos ex-
plicativos).
La parte de la figura llamada "Lecho de Adsorbente" muestra como
se va cargando de soluto el adsorbente del lecho conforme t r a nscur r e el
tiempo. En tin tiempo intermedio (t -f di ] cuando an no se agota la
columna, se pueden di st i ngui r tres zonas en el lecho de adsorcin:
. XA
. X( L. t )
Tiempo Lecho de Adsorbente Solucin de Salida
t<t
=t
t >t ,
(a)
(b)
ZE ZTM ZNU
(c)
(d)
(e)
(g)
(h)
0)
(k)
(I)
(m)
(n)
Figura,7.26: Adsorcin de soluto y curva de r upt ur a en columnas.
14. DISEO DE ABSORBEDORES 365
La Zona de Equilibrio (ZE) donde el adsorbente se encuentra en equi-
librio con la concentracin de soluto y A de la solucin de entrada.
En esta zona la concentracin de soluto en el adsorbente es cons-
tante e igual a q = f(yA), donde la funcionalidad / depende del
tipo de equilibrio.
La Zona de Transferencia de Masa (ZTM) donde la concentracin de
soluto en el adsorbente vara a lo largo de la zona.
La Zona No Utilizada (ZNU) donde no se ha presentado adsorcin,
de tal manera que la concentracin de soluto en el adsorbente es
igual a la que tena inicialmente q
x
.
Conforme transcurre la adsorcin la ZE va ocupando toda la co-
lumna, la ZTM se acerca a la salida de la columna y la ZNU tiende a
desaparecer.
En la misma Figura 7.26 la parte "Solucin de Salida" muestra
como vara la concentracin de soluto en la solucin a la salida de
la columna y( Z/ , ) , conforme transcurre el tiempo de adsorcin. Se
pueden ditinguir tres eventos importantes en esta parte de la figura:
Para tiempos menores a R cuando la Zona de Transferencia de Masa
an no llega a la salida de la columna, la concentracin de soluto
en la solucin a la salida de la columna y (L , ), es muy baja e igual
a la mnima detectada por el adsorbente y
x
(para fines prcticos
esta concentracin puede tomarse como cero).
En el tiempo de ruptura R la Zona de Transferencia de Masa ha
alcanzado la salida de la columna, de tal manera que se ha in-
crementado la concentracin de soluto en la solucin de salida
alcanzando el valor de diseo ya. Este valor es la mxima con-
centracn de soluto permitida en la solucin de salida y representa
las prdidas de soluto tolerables en el proceso. El tiempo R marca
la terminacin del ciclo de adsorcin.
En caso de continuar la operacin la concentracin de soluto en la
solucin de salida seguir incrementndose hasta igualar la con-
centracin de soluto y A-
La curva que describe la concentracin de soluto en la solucin de
salida en el tiempo, y (L , t ) vs , se llama Curva de Ruptura. La forma
particular que toma la curva de ruptura depende tanto del tipo de equi-
* ^f^^,,^^,^,^^^^ ..-,,.>.,-,-^ J ;, ,,,.-,-.--=,*.*>**<.-."-; .v3-..,.'.---. ' - **-
J
-..,,,.-.-^ v*--v --'-'*-'*'---.v-^ iJ U,.^
librio del sistema que se trate, como de los mecanismos de transporte
involucrados. **
Ejemplo 7.7.- Adsorcin en una columna ideal.
O
Calcular la duracin del ciclo de una colun/na que opera con un
flujo d^ flO l/mi n de una solucin que contiene o g/l de estreptomicina.
La columna est empacada con 10,000 < ?j de una resina cationica cuya
adsorcin mxima es: q
0
= 1.56 g/g (Payne, 1989). <t:tr.i r 4 f- \
Suponer que en el rompimiento toda la columna est en equilibrio
con la solucin de entrada.
Solucin:
El balance de masa global en la columna es:
Fy
A
At = q
0
S
despejando Ai y sustituyendo valores se tiene:
Ai =
Fy,
n
Ai =
(10 / / mt n)(6 g/l)
Ai = 260 mi n
Ai = 4.3 h
En la Figura 7.27 se presenta un esquema de la columna y de la
curva de ruptura para este ejemplo.
Ejemplo 7.8.- Adsorcin de lisina.
Se desean producir 8000 to n/ao de lisina a partir de un caldo que
contiene 20 g/l de este aminocido, utilizando adsorcin por intercam-
bio inico. Los datos de equi li bri o muestran que q
0
110 g/l.
y (i.t)
F=10l/min
y
A
-6g/i
o --
4.3
Tiempo (h)
Curva de ruptura ideal
Figura 7.27: Columna y curva de r upt ur a para Ejemplo 7.7.

Estimar las dimensiones volumtricas de un sistema de 3 adsorbe-
dores en carrusel, en el cual cada lecho es lavado y eludo una vez que
est completamente agotado. Se estima que el ciclo tiene una duracin
de 4 horas (adsorcin, elucin y lavado).
Solucin:
a) Clculo del flujo total a procesar (3 turnos 310 das laborables).
pro ducci n
4 -- .....
yA
S v Ifl
9
3
v
ao
v
di a
_ O A. 1 U - A. or J" A. o . i
171 _ _ ano 310 atas 24 h
20 f
F = 5.37 x 10
4
l/h
b) Clculo de la cantidad de resina necesaria en proceso:
5.37 x 10
4
{ x 20?
C * _ _ n _ /
6
~ ~?
S = 9763 *
de r
**
i na
h
c) Clculo del volumen del adsorbedor:
V = St
V = 9763 |x 4 h
h
V = 39, 000 /
Se requieren 3 adsorbedores de 39 m
3
cada uno.
J dLB^ ^ %J
a
-3
a
-
J
de^ ^
nlisis frontal), permite disear columnas para lograr ci
recuperacin, estimar las prdidas y det ermi nar el tiempo # de cada
ciclo, as como para estimar dimensiones y arreglos de los equipos para
ia fase de adsorcin (Yang y Tsao, 1982).
Existen diferentes mtodos para predecir la forma de la curva de
ruptura entre los cuales se encuentran:
- Los mtodos aproximados.
- Los mtodos basados en la teora de platos.
- Los mtodos basados en la teora cintica.
- Los mtodos basados en la teora de equilibrio
Los dos primeros mtodos no estn basados en la obtencin de mo-
delos a partir de relaciones de equilibrio y balances de masa, mientras
que los mtodos tercero y cuarto si lo estn. Esta variedad de mtodos
se debe principalmente a que las expresiones matemticas de las curvas
de ruptura son difciles de manejar en algunos casos.
Anlisis Aproximado
Este mtodo es especialmente til para isotermas de adsorcin favora-
bles. Bajo estas condiciones, se supone que la adsorcin se desarrolla
formndose una zona de transferencia de masa dentro de la columna con
un perfil de concentracin constante que viaja a lo largo de la columna
(Figura 7.28).
Para caracterizar la curva de ruptura se seleccionan dos concentra-
ciones. La concentracin yp, de ruptura que es la mxima concentracin
que se puede tolerar a la salida, y la concentracin y3 que corresponde
a la concentracin a la salida cuando el lecho se considera agotado. Una
gua general es considerar:
y
R
= Q.lyA
ys = 0.9y
donde y A es la concentracin de soluto en la solucin a la entrada.
Si se supone que la zona de transferencia de masa (ZTM) se mueve
a lo largo del lecho con una velocidad constante i?, en el t i empo IR
370
CAPTULO 7. ADSORCIN
Concentracin d
la solucin de
alimentacin =
Concentracin del
efluente =
Zona de
adsorcin
i
Zona de
adsorcin
(c)
tiempo
Figura 7.28: Adsorcin con patrn constante.
existe una zona en la parte superior de la columna donde el adsorbente
est saturado y una zona en el fondo de la columna donde se localiza
la ZTM.
El tiempo que tarda en salir la ZTM de la columna es A =t$ tp_ .
Por lo tanto se puede establecer que la longitud de la columna que est
saturada Zs en el tiempo IR es :
Z
s
= MR - i?A (7.48)
donde
ti = (7.49)
IR
y L la longitud de la columna.
Combinando las expresiones anteriores se obtiene:
- (7.50)
RJ
La longitud de la ZTM ZA est dada por:
Z
A
= L^ (7.51)
IR
Se pueden utilizar estas relaciones para estimar la fraccin de lecho
que est utilizado cuando termina la operacin o sea en el tiempo #,
considerando simtrica la curva de ruptura, de tal manera que :
En la zona de saturacin:
q = f(yA)
y en la ZTM :
donde la funcionalidad depender del tipo de isoterma.
En base a lo anterior la fraccin de lecho utilizado O est dada por:
f ( y
A
) L
(y*)
0=1
- 2*
(7
'
52
>
La fraccin de lecho utilizado dada por la ecuacin (7.52) debe ser
obtenida experi mentalmente y puede ser utilizada para escalamiento.
En este proceso, la longitud de la columna y la velocidad de alimen-
tacin deben permanecer iguales en ambas escalas para mantener el
mismo patrn de adsorcin. Esto conduce al diseo de columnas poco
esbeltas con poca cada de presin en J as cuales debe asegurarse una
distribucin uniforme del lquido.
Teora de Platos
Cuando se utiliza la teora de platos la columna se modela mediante
una serie de etapas en equilibrio como se muestra en la Figura 7.29.
De acuerdo a dicha figura la cantidad de adsorbente est fija en cada
etapa y el lquido fluye a travs de todas las etapas transportando al
soluto. El empleo de esta teora permite disear columnas en forma
muy sencilla.
Una limitacin del empleo de la teora de platos es que slo puede
ser utilizada para sistemas con isotermas lineales. Adems, en su forma
original esta teora es de uso limitado por su incapacidad de predecir el
nmero de etapas o la altura real de cada etapa y el efecto del cambio
de las condiciones de operacin sobre el comportamiento de la columna.
Considerando el arreglo que se muestra en la Figura 7.29, el balance
de masa de soluto en la fase lquida en la etapa n, puede expresarse en
palabras como:
Velocidad de acumulacin de soluto en el lquido =Velocidad de en-
trada de soluto - Velocidad de salida de soluto - Velocidad de adsorcin
de soluto
y por medio de la ecuacin :
(7.53)
n
.
n
di dt
donde:
n: Nmero de etapa.
Etapa
1
F
y,
Etapa
2
Figura 7.29: Teora de platos en adsorcin.
V: Volumen de la etapa (vol. del lquido + vol. adsorbente).
e: Volumen de lquido por volumen de etapa.
F: Flujo de alimentacin (constante entre etapas para soluciones
diluidas).
y
n
: Concentracin de soluto en la solucin en la etapa n (masa de
soluto por volumen de solvente).
q
n
: Concentracin de soluto en el adsorbente en la etapa n (masa de
soluto por volumen de adsorbente).
El modelo supone que cada etapa est en equilibrio de tal manera
que para isotermas lineales:
q
n
=Ky
n
(7.54)
combinando las ecuaciones (7.53) y (7.54) se obtiene:
l(e + (I- c)K)V}$ =F(y
n
,
1
- y
n
) (7.55)
donde el trmino en el parntesis cuadrado de la izquierda de la
expresin anterior representa un volumen hipottico.
La ecuacin (7.55) puede ser resuelta con las siguientes condiciones:
- En el tiempo t =O, y
n
O para n =1, 2,3,4, ...N
- En cualquier tiempo t=t, t/( al i mentacin) =y A
La solucin del anterior sistema de ecuaciones se facilita definiendo
un tiempo adimensional mediante la siguiente expresin:
Ft
T =
{(e + (1 -
E
)K)V]
o bien en trminos del volumen de lecho V
c
= NV,
NFt
T
((e + (\ - e)K]V
c
donde N es el nmero de etapas.
La ecuacin (7.55) queda expresada como:
dy
n
La solucin de la ecuacin (7.56) est dada por:
y
n
=
(7.56)
(7.57)
La ecuacin anterior puede ser expresada de forma ms compacta
manejando su forma diferencial:
dy
n
(7.58)
dr (n-1)!
que representa una distribucin de Poisson. Puede observarse en
la Figura 7.30 que conforme se incrementa el nmero de etapas, la
distribucin de Poisson se aproxima a una distribucin normal, entonces
se puede efectuar la siguiente aproximacin:
dy
n
_._
dr ~
VA
exp
T - T
1
'
(7.59)
De acuerdo a la definicin de media y desviacin estndar, con ayuda
de la ecuacin (7.58) se puede encontrar que la expresin (7.59) tiene
una media r
0
= N y una desviacin estndar a A = yN cuando n N
(a la salida de la columna).
La forma integrada de la ecuacin (7.59) para el caso de n =N,
conduce a una expresin de la siguiente forma:
(7.60)
donde:
0,5
o.io-
0.05 -
0.00
N= 10
\
50
= 100
100
I
150
Figura 7.30: Aproximacin de la distribucin de Poisson a la dis-
tribucin Normal.
Tabla 7.3: Valores de la funcin error Erf(x).
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
1.1
1.2
1.3
1.4
1.5
1.6
1.7
1.8
1.9
2.0
0.000
0.112
0.223
0.329
0.428
0.521
0.604
0.678
0.742
0.797
0.843
0.880
0.910
0.934
0.952
0.966
0.976
0.984
0.989
0.993
0.995
0.011
0.124
0.234
0.340
0.438
0.529
0.611
0.685
0.748
0.802
0.847
0.884
0.913
0.936
0.954
0.967
0.977
0.984
0.990
0.993
0.997
0.023
0.135
0.244
0.349
0.447
0.538
0.619
0.691
0.754
0.807
0.851
0.887
0.916
0.938
0.955
0.968
0.978
0.985
0.990
0.993
0.998
0.034
0.146
0.255
0.359
0.457
0.546
0.627
0.698
0.759
0.812
0.855
0.890
0.918
0.940
0.957
0.970
0.979
0.986
0.990
0.994
0.999
0.045
0.157
0.266
0.369
0.446
0.555
0.634
0.705
0.765
0.816
0.859
0.893
0.921
0.942
0.958
0.971
0.980
0.986
0.991
0.994
0.999
0.056
0.168
0.276
0.379
0.475
0.563
0.642
0.711
0.771
0.821
0.862
0.896
0.923
0.944
0.960
0.972
0.980
0.987
0.991
0.994
1.000
0.068
0.179
0.287
0.389
0.485
0.572
0.649
0.717
0.776
0.825
0.866
0.899
0.925
0.946
0.961
0.973
0.981
0.987
0.991
0.994
1.000
0.079
0.190
0.297
0.399
0.494
0.580
0.657
0.724
0.781
0.830
0.870
0.902
0.928
0.947
0.962
0.974
0.982
0.988
0.992
0.995
1.000
0.090
0.201
0.308
0.409
0.503
0.588
0.664
0.730
0.787
0.834
0.873
0.905
0.930
0.949
0.964
0.975
0.982
0.988
0.992
0.995
1.000
0.101
0.212
0.318
0.419
0.512
0.596
0.671
0.736
0.792
0.839
0.877
0.908
0.932
0.951
0.965
0.975
0.983
0.989
0.992
0.995
1.000
y Erf es la funcin error dada por:
- "*dri
Los valores de esta funcin simtrica estn dados en la Tabla 7.3.
En la Figura 7.31 se presenta la curva de y(L, r} vs r para el caso
de N =100. En la misma figura se presenta la curva para la derivada
de la funcin:
_1_ dy(L,r)
VA dr
La ecuacin (7.60) puede ser expresada en f unci n del t i empo real
utilizando la definicin de T para obtener:
i
Figura 7.31: Curva de ruptura por teora de platos con N=100.
(7.61)
o bien como:
(T 4\
y(M) = y
1 + Erf
t-t
t
22<0
\/
(7.62)
donde la desviacin estndar a est dada por 4=.
La ecuacin (7.62) describe la curva de ruptura que predice la teora
de platos. Esta permite caracterizar columnas mediante el ajuste de
datos experimentales y la determinacin de los parmetros hipotticos
N y HETP dados por la ecuacin :
HETP = - (7.63)
donde HEPT es la altura equivalente de un plato terico (de sus
siglas en ingls).
La teora de platos no permite predecir la forma de la curva de
ruptura cuando cambian las condiciones de operacin. Sin embargo,
con este propsito suelen combinarse frecuentemente los resultados de
la teora de platos con los de la teora cintica que se presenta en la
siguiente seccin.
Teora Cintica
Los modelos de columnas de adsorcin que se enmarcan dentro de la
teoras cintica se desarrollan mediante la combinacin de balances de
masa, relaciones de equilibrio, relaciones de transferencia de masa entre
las fases y las condiciones iniciales y de frontera del sistema.
Considerando una seccin de una columna como la que se muestra
en la Figura 7.32, el balance de soluto en la fase lquida en un elemento
de volumen puede ser expresado en palabras como:
Velocidad de acumulacin de soluto en la fase lquida = Velocidad
de entrada de soluto por conveccin -Velocidad de salida de soluto por
conveccin -f- Velocidad de ent rada de soluto por dispersin -Velocidad
Az
Acumulacin
de A
Entrada de Entrada de
A por A por
conveccin dispersin
Adsorcin de A
Salida de Salida de
A por A por
conveccin dispersin
y(L.t)
Figura 7.32: Componentes del balance de soluto en un elemento d<
volumen de una columna de adsorcin.
de salida de soluto por dispersin -Velocidad de adsorcin de soluto
por
el slido.
En un sistema isotrmico y despreciando los efectos radiales este
balance puede ser escrito como:
Ai
dz
Edy
dz
A
dividiendo entre AV = A&z y tomando lmites, se obtiene la ecua-
cin diferencial que describe el balance de soluto en una columna:
dt
d
2
y dy
_ J ET; _
v
_ ft
dz
2
dz
(7.64)
donde E es el coeficiente de dispersin axial basado en el rea
transversal del lecho (este coeficiente debe distinguirse del coeficiente
D el cual est basado en el rea transversal slo del lquido), v es h
velocidad superficial del fluido (F/A), R es la velocidad de transieren
ca de masa entre las fases por unidad de volumen del lecho (slido -\
lquido).
La diversidad de modelos existentes para lechos empacados de a
cuerdo a la teora cintica, se deriva por un lado de los diferente
mecanismos que pueden controlar la velocidad de transferencia de mas
entre las fases (pelcula, poro, resistencias combinadas, etc.), es dec
de la forma que adopta el trmino R de la ecuacin (7.64), y por oti
lado de la forma de la curva de equilibrio (lineal, Langmuir, etc.) qi
tambin introduce variabilidad al modelo. Adems, el modelo puede
no considerar los efectos de flujo no ideal contemplados en el trmii
de dispersin axial (Tabla 7.4).
En los siguientes prrafos se presentan algunos modelos particular
de la teora cintica.
Modelo Cintico : Equilibrio no Lineal Favorable y Fuer
Impulsora Lineal.-En algunos casos la acumulacin en la (ase l qui
Tabla 7.4: Algunos factores a considerar en un modelo cintico de ad-
sorcin.
Tipo de
Equilibrio
Lineal
Favorable
Desfavorable
Irreversible
Resistencia
Controlante
Poro
Superficie
Pelcula
Combinadas
Efecto
Mezclado
Flujo ideal tipo
Flujo tapn con
tapn
dispersin axial
es mucho menor que la acumulacin en la fase slida (equilibrios favo-
rables) y la dispersin es despreciable. En estos casos el retardamiento
de la curva de ruptura slo obedece a los mecanismos de transferencia
de masa. Bajo estas condiciones la ecuacin (7.64) se puede escribir
como:
r >
-v= R
oz
(7.65)
El balance de masa del soluto sobre el adsorbente se puede expresar
como:
a
\ a r~ > /i-r /?/> \
)TT- = -/t (7.DO)
El trmino R de las ecuaciones (7.65) y (7.66) slo depende del
mecanismo controlante de la transferencia de masa. A continuacin se
presentan algunos casos particulares:
Caso 1 : Control de la transferencia en la pelcula.-Si la velocidad
de transferencia de masa est controlada slo por la pelcula de fluido
que rodea la partcula de adsorbente entonces,
R =k
L
a(y -y*) (7.67)
combinando las ecuaciones (7.65), (7.66) y (7.67) se obtiene el si-
guiente par de ecuaciones:
dy
-v= k
L
a(y -y*) (7.68)
(I -c) =k
L
a(y -y ' ) (7.69)
Estas ecuaciones pueden expresarse en forma adimensional (solucin
universal) utilizando el siguiente cambio de variables:
zk
L
a
v
k
T =
k
L
a (t-K
VA
y
-y -
2M
y
=
J_
9*
donde:
: Distancia axial adimensional.
T: Tiempo adimensional medido a partir de que la solucin alcanza el
punto z.
y A' Concentracin de soluto en el lquido a la entrada de la columna.
<//?: Concentracin de referencia del soluto sobre el adsorbente.
X' Concentracin adimensional de soluto en el lquido.
Y: Concentracin adimensional de soluto en el adsorbente.
Las ecuaciones (7.68) y (7.69) adimensionalizadas se expresan:
Caso 2 : Control de la difusin del soluto en el seno del slido del
adsorbente.- En este caso la velocidad de transferencia de masa slo
est controlada por la difusin del soluto en el seno del slido y de
acuerdo a la ecuacin (7.25):
R= (l -e)VaX<7*-<?) (7.71)
La combinacin de las ecuaciones (7.65), (7.66) y (7.71) conduce a:
-v^-= (\-e}il>
s
k
s
a(q*-q) (7.72)
(I -e)^
t
=(I -e)^
s
k
s
a(q* -q) (7.73)
estas dos ecuaciones pueden ser expresadas en forma adimensional
con:
. ( Z
= ip
s
k
s
a [t --
\ v
x =
Y = q/q
R
obtenindose la siguiente expresin :
-| = f = (
y
*-
r
'
(7
'
74)
Caso 3 : Control de la difusin del soluto al interior del poro.-En
este caso la velocidad de transferencia de masa slo est controlada por
la difusin del soluto al interior del poro del adsorbente y de acuerdo a
la ecuacin (7.32):
R = ^*y -
q)
(7.75)
Q R/yA
La combinacin de las ecuaciones (7.65), (7.66) y (7.75) conduce a:
dy ^
p
k
p
a(q* -q)
v-= (7.76)
n --
1 j
~ (7.77)
Las dos ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimen-
sional con:
=
zijjpkpd
T
X =
Y =
JM
=(y* -Y) (7.78)
c/c; C/T
Caso 4 : Control de la dispersin.- Si el mecanismo controlante de
la transferencia de masa es slo la dispersin axial, la ecuacin (7.65)
se puede aproximar a:
dy
-v=k
d
a(y -y*)
uz
y el balance de soluto sobre el adsorebente como:
(7.79)
Las ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimensional
utilizando el siguiente cambio de variables :
=
T =
zka
v
(<-- V t
VA
386 CAPTULO 7. ADSORCIN \
y
x =
i
Y = '
_9x
d '
El anlisis presentado para cada uno de los casos anteriores puede
ser extendido para el caso en que el mecanismo controlante sea la
reaccin de superficie. Sin embargo, como se ha planteado anterior-
mente este mecanismo generalmente no es el controlante. Asimismo el
anlisis puede extenderse para el caso donde exista una combinacin
de mecanismos controlantes, utilizando un coeficiente global de trans-
ferencia.
Nmero de Unidades de Transferencia (NTU).-En las colum-
nas de contacto diferencial no existen etapas reales de contacto y sepa-
racin, como en el caso de las operaciones que se realizan en tanques.
Debido a lo anterior estas columnas se caracterizan utilizando el nmero
de unidades de transferencia, que es una medida de la dificultad de la
operacin.
Las ecuaciones adimensionales de cada uno de los cuatro casos an-
teriores, permiten definir el concepto de nmero de unidades de trans-
ferencia de una columna de adsorcin de acuerdo al tipo de mecanismo
controlante. Este nmero se define como la expresin que adimensio-
naliza la ecuacin de balance. De acuerdo a lo anterior:
NT
U
L
= (7.82)
y A
N =
zâ
4)
v
NT
U
d
= (7.85)
v
donde los subndices L, s, p y c/, especifican que el mecanismo con-
trolante es la pelcula, la difusin en el seno del adsorbente, la difusin
dentro del poro o la dispersin, respectivamente.
Si se utilizan las correlaciones (7.26), (7.32) y (7.36), las ecuaciones
anteriores pueden expresarse como:
NTU
L
=
NTU
S
=
NTU
n
=
v
Wzi/>,D,g
R
(l -e)
y
A
p
(l -e)
zv
NTU
d
=
(7.86)
(7.87)
(7.88)
(7.89)
Los valores de NTU pueden ser estimados con las ecuaciones an-
teriores y con correlaciones para clculo de parmetros de acuerdo a
la geometra del sistema y a las condiciones de operacin. Por otro
lado, estas mismas expresiones pueden ser utilizadas para el clculo de
parmetros utilizando datos experimentales. El mecanismo controlante
es aqul cuya NTU sea el menor.
En trminos de los grupos adimensionales anteriores, las concentra-
ciones adimensionales de la curva de ruptura son funcin de f y r, es
decir:
r
) (7-90)
No existe una solucin general para estas ecuaciones diferenciales.
Sin embargo, estas ecuaciones han sido resueltas para algunos casos
particulares. Dentro de stos se puede destacar el caso desarrollado
en la literatura para equilibrios favorables llamado "Patrn constante"
(Hall eta/, 1966). En este caso la curva de rupt ura es caracterstica de
cada mecanismo controlante.
Asimismo se puede citar los resultados que se obtienen cuando la
curva de equilibrio es lineal o cuando se usa el modelo de adsorcin a
contracorriente.
Estos dos ltimos casos se presentan en los siguientes prrafos, 1
0
cual permite precisar la metodologa del uso de los modelos cinticos.
Modelo Cintico: Equilibrio Lineal y Fuerza Impulsora Li-
neal en el Lquido.
Este modelo puede ser aplicado cuando se utilizan razonablemente
las siguientes consideraciones:
- El proceso es isotrmico.
- La relacin de equilibrio es lineal.
- La fuerza impulsora de la adsorcin es lineal.
- No existe dispersin en la columna.
-La acumulacin de soluto en la fase lquida es despreciable.
- La distribucin y el tamao de las partculas del adsorbente son
uniformes.
Con las consideraciones anteriores el sistema de ecuaciones que des-
cribe el comportamiento de la columna, en el caso de que el control de
la transferencia de masa est dado por una resistencia lineal es:
Relacin de equilibrio.
9 = Ky' (7.91)
Balance de soluto en fase lquida.
O --v^--R (7.92)
z
Velocidad de transferencia de masa.
R = ka(y-y*) (7.93)
Balance de soluto en el adsorbente.
( l -e) f f = * (7.94)
Condiciones iniciales y de frontera.
t =0, V z, 9 =0
> O, z =0, y =JM
La combinacin de las ecuaciones (7.91)-(7.94) conduce a las si-
guientes dos expresiones:
dy_ _
dz
(7.95)
(7.96)
Estas dos ecuaciones conjuntamente con las condiciones iniciales y
de frontera, pueden adimensionalizarse con las siguientes variables:
zka
v
T =
X =
fi
y
K(l -e)
y
Ky
A
obtenindose el siguiente sistema de ecuaciones:
(7.97)
(7.98)
con las condiciones:
r =0, Y =0, V
=O, x =O, V r
0.999
0.998
0.995
0.99
0.98
0.95
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.05
0.02
0.01
0.005
0.002
0.001
: i
000
10 20 50 200 500 1000
Figura 7.33: Solucin grfica de la ecuacin de la curva de ruptura.
Modelo cintico: equilibrio lineal, resistencia lineal. Fuente: Vermeulen
etal, 1973.
Las ecuaciones (7.97 ) y (7.98) han sido resueltas utilizando transfor-
madas de Laplace (Bird et/, 1960), obtenindose la siguiente expresin
para la curva de ruptura:
X = 1 ~
(7.99)
donde i = \/T, y J
0
es una funcin Bessel de primera especie y
orden 0.
En la Figura 7.33 se presenta una solucin grfica de la ecuacin
(7.99). Esta grfica puede ser usada para evaluar ka a partir de datos de
laboratorio o predecir curvas de rompimiento utilizando correlaciones.
Sin embargo, es importante recordar que las consideraciones del modelo
deben ser aplicables al caso particular.
Cuando el equilibrio es lineal estos resultados son anlogos para cada
uno de los casos donde un mecanismo es el controlante, de tal manera
que o el nmero de unidades de transferencia que se puede utilizar
en la ecuacin (7.99) es cualquiera de los establecidos en las ecuaciones
(7.86)-(7.89), debido a que para un equilibrio lineal Y* Y =x~X*-La
curva de ruptura tiene igual forma independientemente del mecanismo
controlante (Hall eta/, 1966).
Modelo de Adsorcin de Lecho a Contracorriente.- En una
adsorcin de lecho fijo la zona de adsorcin se mueve hacia abajo de
la columna. En el modelo de adsorcin de lecho a contracorriente, se
supone que el adsorbente se mueve hacia arriba a contracorriente del
fluido, de tal manera que la zona de adsorcin en la columna permanece
estacionaria (Figura 7.34).
El modelo supone que la longitud de la columna es infinita, de tal
manera que en la parte superior de la columna el adsorbente est en
equilibrio con la solucin de entrada y en la parte inferior la solucin
est libre de soluto. El modelo supone adems:
Adsorcin isotrmica.
Dispersin despreciable.
Volumen lquido en la columna mucho menor que el volumen proce-
sado.
Mecanismo de transferencia de masa lineal.
El balance de soluto entre la salida de la columna y un punto z est
dado por:
F(y -0) = S(g -0) (7.100)
que es la curva de operacin del sistema. S es un flujo hipottico
de adsorbente.
De acuerdo a la ecuacin (7.64) y las suposiciones del modelo, el
balance de soluto entre las fases est dado por:
y*) (7.101)
dz
F S
q =0
Figura 7.34: Modelo de adsorcin de lecho a contracorriente.
La ecuacin anterior puede integrarse para encontrar la longitud
necesaria de la columna para lograr un determinado grado de sepa-
racin, de tal manera que:
dz
=/ "
JyA
dy
(y -y*)
integrando se obtiene:
dy
y ( y-y*)
(7.102)
o bien,
L = [HTU][NTU]
La aplicacin de este mtodo requiere una integracin numrica de
datos de laboratorio para evaluar fca, con el cual se pueden efectuar
estudios de escalamiento.
Combinacin Teora de Platos - Teora Cintica (Equili-
brio lineal).- La combinacin de modelos obtenidos por medio de la
teora de platos con modelos obtenidos por medio de la teora cintica,
permite mantener la estructura sencilla de la teora de platos y poder
correlacionar el efecto de los cambios en las variables de operacin sobre
la forma de la curva de ruptura, lo cual es til para establecer las rela-
ciones necesarias para mantener los mismos perfiles de concentracir
(prdidas, tiempo de operacin, etc.) entre dos escalas de operacin d(
inters.
Una primera aproximacin a este enfoque es la combinacin de lo
resultados de la teora de platos resumidos en la ecuacin (7.62), coi
los resultados de la teora cintica con un mecanismo lineal controlant
y equilibrio lineal, resumidos en la ecuacin (7.99), de tal manera qu
N =NTU
Esta aproximacin permite correlacionar la pendiente de la curva c
rompimiento con variables de operacin, de tal manera que para cae
uno de los casos estudiados se tiene lo siguiente:
y_
=
l
VA 2
l + Erf\ -r-
\ _25_
v/J V
(7.103) !
Cuando el mecanismo controlante de la adsorcin est localizado en
la pelcula de lquido que rodea a la partcula de adsorbente, de acuerdo J
a la ecuacin (7.86),
v
por ecuacin (7.21),
1/2
por ecuacin (7.14),
entonces,
N
L
V
Cuando el mecanismo controlante es la difusin del soluto en el seno
del adsorbente, de acuerdo con la ecuacin (7.87):
L
S el mecanismo de control es la difusin del soluto al interior del
poro, de acuerdo con la ecuacin (7.88):
L
yv
En el caso que el mecanismo controlante sea la dispersin, de acuer-
do con la ecuaciones (7.37) y (7.89):
Lv
N
~ T-
P
De tal manera que para el modelo combinado lineal se puede gene-
ralizar que:
N -- 4 (7.104)
Kv
nn+l V y
donde K, es una constante de proporcionalidad.
con
n = 1/2 para control de la pelcula.
n = 1 para control de la difusin en el slido.
n = 1 para control de la difusin al interior del poro.
n = O para control de la dispersin.
Ejemplo 7.9.- Adsorcin de Inmunoglobulina G en protena
A inmovilizada en una matriz de agarosa, en una columna
empacada.
Se utiliza una columna de 1 cm de dimetro empacada con agarosa
con protena A inmovilizada para adsorber ImG, a partir de una solu-
cin que contiene 1.71 mg/ml de esta protena. El volumen del lecho
es de 2.1 mi con una porosidad de 0.35. El equilibrio es tipo Langmuir.
Datos del adsorbente:
d
p
= 90 x 10~
6
m
\-G
- IV.
e
l
= 0.96
A/9 = 28
rrr
Kd = 0.019
mi
11
9
f
h = 43 -
Datos solucin:
p
L
= 1000
TU"
UL = 9.5 x 10~
4
D
p
= 3.9 xl O-
12
s
F = 0.4
m s
min
m
2
DAB = 5.5 x 1Q-
11

s
Datos de la Columna:
D
c
= 1c m
A = 0.785 cm
2
Correlaciones:
El coeficiente de transferencia de masa puede ser estimado uti-
lizando la siguiente correlacin:
1/3
DAB V PL ) \PLD
AB
La curva de ruptura experimental se muestra en la Figura 7.35.
Se pide:
a) Estimar grficamente el porcentaje de prdidas si se deja correr
la adsorcin hasta que y/yA = 0.1.
b) Estimar a partir de la curva de ruptura la fraccin de lecho
ocupado cuando y/yA = 0.1, suponiendo que el lecho se agota a los 200
min.
c) Comparar los datos experimentales con la prediccin del modelo
de platos.
d) Comparar los resultados experimentales con la prediccin del
modelo cintico: equilibrio lineal-resistencia lineal.
_y
V A
O ' "'' ' O O 150 200' ' 'V ' 300 ' ' ' '
t (min)
Figura 7.35: Curva de ruptura experimental ImG-Prot eina A. Datos
de: Hortsman y Chase, 1989.
e) Comparar los resultados experimentales con los del modelo de
lecho continuo.
Solucin.-
a) Las prdidas se pueden calcular mediante la siguiente expresin:
L ydt
Prdidas = -^
En forma aproximada la expresin anterior equivale a el rea del
tringulo bajo la curva de ruptura en el punt o de rupt ura, la cual de
acuerdo a la curva de ruptura experimental es :
Prdidas =
(0.1 -0) ( 110-9 0)
Prdidas = 0.9 %
b) La fraccin de lecho ocupado de acuerdo a ! a ecuaci n ( 7. 52) :
c) El Modelo platos est dado por la ecuacin (7.62):
+
^-/ f
-
t
De la Figura 7.35 se pueden obtener dos pares de datos para calcular
Para -^= 0.5 t
0
= 140 min
y A
Para -^= 0.1 t
R
= 110 min
Con estos dos puntos sobre la curva de ruptura se puede estimar a
-i
110-140
con auxilio de la Tabla 7.3 se obtiene:
<j = 23.33 min
En la Figura 7.36 se muestra la curva de ruptura de acuerdo a este
modelo.
d) Modelo Cintico. La curva de ruptura en este caso est dada por
la ecuacin (7.99) que puede aproximarse a (Vermeulen et
-
a/, 1973):
Clculos:
rea de la seccin transversal de la columna:
0.8
0.6
0.4
0.2
O ~
200 300
t (min)
Figura 7.36: Curva de ruptura. Modelo de platos. Ejemplo 7.9 c.
A =
4
TT x 1 cm
2
A
=
A = 0.785 cm
2
Velocidad superficial:
F
0.4 sa
t? =
mtn
0.785 cm
2
u = 8.3 x 10~
5

s
Coeficiente de Transferencia de Masa:
Utilizando la correlacin proporcionada se puede calcular
x 1Q-
6
m)
5.5 x 10-
11
sji
90 x 10~
6
m x 8.3 x 10~
5
^x 1000 *'"
N 1/2
2 + 1.45"
9.5 x 10-
4
x
lOOO^f x 5.5 x 10-
11
^
k
L
= 3xl O-
6
-
s
rea por volumen de lecho:
6(1
a =
-
6(1 -0.35)
a =
90 x 10~
6
m
a = 43,333 m"
1
Coeficiente de transferencia de masa volumtrico:
777
k
L
a = 3 x 10~
6
x 43,333 m~
l
= 0.13 s~
l
s
Variables adimensionales:
_
V
(2.67 cm)(0.13 s'
1
)
(8.3 x 10-
5
^
= 41.8
( -f )
-e)
Q 10 -1 / i 2.67 cmxO.35
=
J V 8.3X10-5 ?xigÊ
25(1 -0.35)
r = 8x 10~
3
(-112.6)
donde i est dado en segundos.
En la Figura 7.37 se muestran los resultados en forma grfica. En la
Figura 7.37a se observa que el ajuste del modelo a la curva real es muy
pobre. Utilizando el mismo modelo con K = 33 y ki 1.5 x 10~
5
m/s,
se produce un ajuste ms adecuado (Figura 7.37b).
e) Modelo Contracorriente. De acuerdo a la ecuacin (7.138) el em-
pleo de este modelo implica una integracin como la que se muestra en
la parte inferior de la Figura 7.38. La curva de operacin que se mues-
tra en la parte superior de la Figura est comprendida entre los puntos
(O, 0) y [ yA,<l(yA) } La curva de equilibrio se obtiene dando valores
a y, en el rango de O a T/, en la ecuacin de equilibrio. Los valores
de y* se obtienen con valores de q tomados de la curva de operacin
y sustituidos la ecuacin de equilibrio. La Tabla 7.5 muestra algunos
valores de estos clculos.
El rea bajo la curva de la Figura 7.38b es de 1.346 y de acuerdo a la
ecuacin (7.102),
L
='f . ka
402
CAPTULO 7. ADSORCIN
y_
Xa
i.o-
0.8-
0.6-
0.4-
0.2-
0
50 100 150 200
t (min)
250
Figura 7.37: Curva de ruptura. Modelo cintico lineal. Ejemplo 7.9d.
K = 25 y k
L
= 3 x 10'
6
m/s
i.o-
0.8-
0.6-
0.4-
0.2-
0
O 50 100 150 200 250
t (min)
Figura 7.37: Continuacin...Modelo cintico lineal. Ejemplo 7.9d. K =
33 y k
L
= 1.5 x 1CT
5
m/s
Tabla 7.5: Clculos para el modelo contracorriente. Ejemplo 7.9 e.
y
1.7099
1.7095
1.7090
1.7050
0.5000
0.2000
0.1000
0.0500
0.0300
0.0100
0.0050
q
42.5250
42.5150
42.5026
42.4031
12.4349
04.9740
02.4870
01.2435
00.7461
00.2487
00.1243
y *
1.7009
1.6657
1.6236
1.3498
0.0077
0.0025
0.0012
0.0006
0.0003
0.0001
0.0001
q *
42.5274
42.5273
42.5272
42.5261
41.4258
39.2694
36.1345
31.1594
26.3265
14.8276
08.9583
i/ ( y - y * )
111.7
022.8
011.7
002.8
002.0
005.1
010.1
020.2
033.7
101.1
202.2
L =
x 10~
5
^x
100 cni
2.675 cm
0.00417 s~
l
(1.346)
Teora de Equilibrio
La forma cualitativa de la respuesta dinmica de una columna est de-
terminada completamente por las relaciones de equilibrio. La forma
de los perfiles de concentracin y por lo tanto de las curvas de ruptura
puede ser modificada considerablemente por efectos cinticos, pero stos
siempre son secundarios, en el sentido que no introducen nuevos pa-
trones de comportamiento, sino que slo modifican el comportamiento
pronosticado a partir de consideraciones de equilibrio.
En la teora de equilibrio en la cual todos los efectos cinticos se
ignoran, la respuesta dinmica se est ima con la suposicin que existe
I I I
1.2 1.4 1.6
y (mg/ml)
Figura 7.38: Modelo lecho a contracorriente, a) Curvas de equilibrio y
operacin, b) Integracin grfica. Ejemplo 7.9e.
i/ y -y *
i i i i i
0.2 0.4 0.6 0.8 1
y (mg/ml)
l i l i
1.2 1.4 1.6 1.8
un equilibrio local a travs de la columna. Este enfoque ha sido til
para el anlisis preliminar de columnas, as como para el anlisis del
comportamineto de sistemas complejos.
La utilidad del enfoque de la teora de equilibrio puede ser ilustrado
considerando el caso simple de un sistema en el cual el flujo es ideal y
se alcanza el equilibrio local. Bajo estas condiciones la ecuacin (7.64)
se reduce a:
e= v R (7.105)
con,
R = (l-
)-J. (7.106)
Por regla de la cadena:
dq dq dy
dt dy dt
combinando las ecuaciones anteriores se obtiene:
dy^
=
_ dy__
(l
_ \^[dy_
_ .dq] dy _ dy
)
dy\ 8t ~ ~
V
dz
rearreglando,
f) f\
flii 7i r\ii
p- = O (7.107)
A partir de la ecuacin anterior se puede definir W(y) como la
velocidad del frente de concentracin de una onda.
dy.
dt
dy
dz
W(y) = -- --j- (7.108)
7.5. SUMARIO 407
Cuando la isoterma es desfavorable el trmino dq/dy de la ecuacin
anterior aumenta al aumentar la concentracin y la velocidad de onda
disminuye. La zona de transferencia de masa se ensancha conforme
avanza la onda a travs de la columna, formando un patrn llamado
proporcional.
Cuando la isoterma es favorable dq/dy disminuye al aumentar la
concentracin y la velocidad de onda aumenta. La zona de transferencia
de masa tiende a desaparecer debido a que se forman perfiles invertidos
ilgicos. En tales situaciones la onda debe ser sustituida por el frente
de choque.
En el comportamiento llamado de patrn constante el efecto de
compactacin de la onda cuando el equilibrio es favorable, se compensa
con los efectos dispersivos y la onda no se altera a lo largo de la columna
(Ruthven, 1987).
7.5 Sumario
La adsorcin permite procesar soluciones diluidas para concentrar so-
lutos mediante su inmovilizacin reversible en slidos especializados
llamados adsorbentes.
En el estudio de la adsorcin son de fundamental importancia cua-
tro aspectos: Los mecanismos de adsorcin de acuerdo al tipo de in-
teraccin soluto-adsorbente, los tipos de adsorbentes disponibles, las
relaciones de equlibrio de los sistemas y la cintica de la adsorcin.
La operacin de adsorcin puede realizarse en forma intermitente
o continua en tanques agitados, pero se realiza ms frecuentemente en
columnas de lecho fijo.
La descripcin de la dinmica de la adsorcin es relativamente com-
pleja y puede ser abordada mediante diferentes enfoques que conducen a
diseos que varan desde los puramente empricos hasta los muy sofisti-
cados.
q (mg / mi)
120
110
100
090
oao
070
060
050
040
030
020
010
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8
y (mg / mi )
Figura 7.39: Curva de equilibrio para albmina. Fuente: Skidmore et
al, 1990.
vados.
7.6 Problemas
7.1.-Calcular las constantes k y q
0
para el sistema Albmina-S Sefarosa
FF a pH=5 y T=25C a partir de la Figura 7.39.
7.2.- Un volumen de 2 litros de una solucin proteica con una con-
centracin de soluto de 0.5 mg/ml, se mezcla con 50 mi de adsorbente
en una operacin intermitente y se obtiene un 90 % de recuperacin.
Estimar la concentracin final de soluto en el adsorbente.
7.3.- Estimar el porcentaje de prdidas del Ejemplo 7.6 si la ad-
sorcin se deja a correr 2.5 horas.
7.6. PROBLEMAS 409
7.4.- Encontrar la expresin matemtica para q(t) en el caso del
adsorbedor tipo tanque agitado continuo.
7.5.- Simular el perfil adimensional de un adsorbedor utilizando el
modelo de la teora de platos con
0
=30 min y:
a) N=50
b) N=100
c) N=300
7.6.- La curva de ruptura de una columna puede simularse ade-
cuadamente mediante un modelo cintico lineal con K = 150, 6 = 0.35,
k
L
= 10~
4
m/5, F = 50 cm
3
/mm, A = 0.785 cm
2
y L = 10 cm.
Analizar el efecto sobre la curva de ruptura de 20 % de variacin
en ki,a, K y F, considerando los parmetros restantes constantes.
7.7.-Obtener la ecuacin (7.99). (Ver Problema 22L
4
de Bird, 1960)
7.8.- El procesamiento directo de caldos completos para la recu-
peracin de productos extracelulares, se ha estudiado como una alter-
nativa para disminuir las prdidas asociadas a varios pasos de recu-
peracin, y por lo tanto incrementar la recuperacin. Sin embargo, el
procesamiento de caldos completos en columnas puede originar proble-
mas de taponamiento de stas, entonces una alternativa es el uso de
adsorbedores continuos tipo tanque. Este sistema ha sido utilizado en
la recuperacin de novobiocina (Payne, 1989).
Obtener la variacin de la concentracin de novobiocina en la salida
del tanque si el tiempo de residencia en el tanque VL/IF = 0.33 /i, la
relacin de adsorbente a flujo es S/F =98 g h/l y la concentracin
de la solucin a la entrada y A 2 g/L
Considere un tanque perfectamente agitado en el cual la solucin y
el adsorbente siempre estn en equilibrio, y que el equilibrio es lineal
con K = 0.015 l/g adsorbente.
7.9.- Se utiliza una columna de intercambio inico de lecho mvil
para separar cefalosporina de un caldo de fermentacin que contiene 5
g/l del antibitico, utilizando una relacin de flujos de 10 a 1.
Determinar la altura necesaria de la columna para recuperar el 96
% de cefalosporina, si la velocidad de flujo de lquido permisible es de
1.5 m/h y el coeficiente volumtrico de transferencia de masa toma un
valor de 12 h~
l
. La relacin de equilibrio del sistema es:
q = 25y'
/2
donde q est en g/l de resina mientras que y en g/l de solucin.
Resp. L = 0.6 ra
7.10.- Un nuevo antibitico se va a separar de un caldo de fer-
mentacin mediante una operacin de adsorcin en lecho fijo, utilizando
una columna de 5 era de dimetro y 50 cm de longitud. En esta co-
lumna el coeficiente de transferencia de masa volumtrico esperado es
de 9 h~
l
.
La alimentacin a la columna tiene una concentracin de 4 g/l y se
desea que la corriente de salida contenga solamente 0.1 g/l.
La relacin de equlbrio del sistema es:
q = 20J /
1
/
2
y la linea de operacin est dada por:
9 = 5(y-0.1)
Estimar el flujo manejable por la columna.
Resp. 150 l/h
7.11.- En la adsorcin intermitente de /3-galactosidasa la relacin
de la actividad inicial de la enzima en la solucin a la actividad de la
enzima en solucin a los 10 min es de 2.86; y a los 30 min de 5.755.
Para tiempos muy grandes el valor es de 7.39 ( Pungor eta/, 1987).
Considerando el modelo de adsorcin intermitente (equilibrio lineal y
control de la pelcula) siguiente:
^-= P + (1 -P)exp(-Bt)
VA
estimar los parmetros P y B.
Resp. P =0.135 y B = 0.103
7.12.- En la adsorcin intermitente de albmina en un adsorbente
de Sefarosa la curva de equil ibrio se puede aproximar en forma lineal a:
7.6. PROBLEMAS 411
q
Los parmetros de la adsorcin son:
k
L
= 5 x 10~
6
m/5
e = 0.99
dp = 105 x 10-6 m
y
= 2 mg/ml
Representar grficamente la variacin de la concentracin de soluto
en la fase lquida con el tiempo de adsorcin, suponiendo una sola
resistencia controlante y equilibrio lineal.
7.13.- En una columna de lecho fijo empacada con S Sefarosa se
realiza la adsorcin de albmina bajo las siguientes condiciones:
q = l3Q y(aprox.)
k
L
= 5.6 x 10~
6
m/s
e = 0.35
d
p
= 105 x 10~
6
m
y A = 1 mg/ml
D
c
= 1 era
L = 2.3 era
F = 1 cra
3
/ran
Mediante el modelo cintico de resistencia en la pelcula y equilibrio
lineal, obtener una representacin grfica de la curva de rompimiento
del sistema.
7.14.- En condiciones de adsorcin muy favorables (irreversible), la
forma de la zona de transferencia de masa de la columna es indepen-
diente del tiempo (patrn constante). Bajo estas condiciones y con el
control de la resistencia a la transferencia de masa al int erior del poro
(modelo adecuado para algunos procesos de afinidad), la curva de rup-
tura adimensional es nica, permite representar varias condiciones de
operacin, y est dada por (Arnold eta/, 1985):
X = 1 - -0.2737Vrt/
p
--1
Cuando se emplea una columna de Sefarosa 4B-Acido-Arsanlico
para adsorber anticuerpos monoclonales bajo las siguientes condiciones:
d
p
= 0.01 era
v = 0.011 cm/s
L = 16.5 era
e = 0.6
^= 18.1
VA
el modelo se ajusta a los datos experimentales con NTU
P
= 8.
a).- Gra,ficar la curva de ruptura para el escalamiento del sistema
con qn/yA
=
18.1 y una columna de 15 x 60 era , en los siguientes tres
casos:
al.-v= 0.020 cm/s a2.-v= 0.015 cm/s a3.-v= 0.010 cm/s
b).- Graficar x
vs
volumen alimentado (FteV) en el rango de 70
a 86 litros, para cada uno de los tres casos anteriores.
c).- Que significa el punto de interseccin de las tres curvas?
7.7 Bibliografa
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Parte IV
Purificacin del Producto
417
Una vez que los caldos biolgicos han sido concentrados el paso si-
guiente dentro de un esquema general de separacin, es la purificacin
del producto de inters. En esta parte se presentan los principios gene-
rales de las operaciones ms utilizadas para efectuar esta purificacin:
la cromatografa por elucin, la precipitacin, la ultrafiltracin y la
electroforesis.
La cromatografa por elucin puede analizarse empleando gran parte
de los conceptos utilizados para describir la adsorcin en lecho fijo, por
lo que es la primera operacin tratada en esta parte. En el captulo
9 se presenta la operacin de precipitacin, que requiere un enfoque
fuertemente fisicoqumico, muy caracterstico de esta operacin. En
los captulos 10 y 11, se presentan las operaciones de ultrafiltracin y
electroforesis dado que sus principios permiten una presentacin ms
unificada.
Captulo 8
Cromatografa por Elucin.
8.1 Introduccin
La cromatografa por elucin es un mtodo para separar en sus compo-
nentes (resolver) una mezcla de solutos y es empleada con el propsito
de puricar productos de inters. Esta se efecta en columnas empacadas
con adsorbentes que pueden ser slidos, slidos porosos o geles. El ad-
sorbente constituye la fase estacionaria de la columna.
En la operacin de una columna cromatogrfica se aplica una pe-
quena cantidad de muestra en la parte superior de la columna. Una vez
colocada la mezcla se hace pasar un lquido que favorezca la desorcin
llamado eluyente (fase mvil). Conforme avanzan los solutos sobre la
columna stos se separan permitiendo su purificacin.
En la cromatografa por elucin isocrtica la composicin del elu-
yente se mantiene constante durante el proceso. En la elucin por
gradiente la composicin del eluyente se vara gradualmente.
La operacin de una columna de cromatografa es similar a la de una
columna de adsorcin. Sin embargo, en la cromatografa por elucin la
columna no se satura completamente con soluto, sino que slo se carga
en forma controlada una porcin de sta..
La decisin entre emplear adsorcin frontal o cromatografa por
elucin en una separacin, radica principalmente en la dilucin del
soluto. Por' ejemplo, si se desea remover dos compuestos orgnicos
A y B muy similares que se encuentran diluidos en agua, la operacin
419
420 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN.
apropiada es una adsorcin frontal. Por otro lado, si estos mismos com-
puestos se desean separar entre s con una alta pureza a partir de una
muestra concentrada, la seleccin apropiada es la cromatografa por
elucin. Entre estos dos casos extremos de separaciones en columna, se
han desarrollado otros modos intermedios como la cromatografa por
desplazamiento y la de recirculacin.
En la Figura 8.1 se ilustra la separacin cromatogrfica de una mez-
cla de tres solutos. Cada soluto tiene diferente grado de retencin en
la columna de tal manera que la velocidad de avance de cada uno es
diferente, siendo el soluto A el ms lento y el soluto C el ms rpido.
Un detector de solutos a la salida de la columna obtendra una grfica
como la de la Figura 8.2, llamada cromatograma.
En la cromatografa por elucin el soluto se purifica a expensas de
cierto grado de dilucin, mientras que en la adsorcin el soluto se retiene
en la columna y posteriormente se eluye concentrado.
Para abordar el tema de cromatografa por elucin en la seccin
8.2 de este captulo se presentan los fundamentos de la cromatografa,
describiendo las principales tcnicas cromatogrficas, tipos de adsor-
bentes, las relaciones de equilibrio y cinticas que son utilizadas en esta
operacin. En la seccin 8.3 se revisan los principales equipos utiliza-
dos en las operaciones cromatogrficas. En la seccin 8.4 se presentan
algunos de los modelos para el diseo de equipos cromatogrficos que
nos permiten predecir y analizar los perfiles de concentracin o cro-
matogramas.
8.2 Fundamentos
Existen varias tcnicas cromatogrficas basadas en la interaccin de
una fase mvil lquida y una fase estacionaria. Cinco aspectos funda-
mentales permiten distinguir las semejanzas y diferencias entre ellas:
El tipo de principio de separacin que emplea cada una de ellas.
Las caractersticas de las matrices que utilizan.
La presin a la que se desarrollan.
La relacin de equilibrio.
Eluyente
Eluyente
Eluyente
Eluyente
f Eluyente
Eluyente <
Columna empacada
con adsorbente
Inyeccin de muestra
(componentes O, A, O)
>
"
A
*MA"
AAAA
>
0TO D 00 D
F^
0 0
o D a
D
'
D D
D
O
1
-
1
D
0
0
0O
o ooo
Tiempo
Figura 8.1: Esquema de una columna de cromatografa. Adaptada de:
Belter et al, 1588.
reservados.
Tiempo
Figura 8.2: Cromatograma tpico. Adaptada de: Belter et al, 1988.
reservados.
La cintica de la adsorcin.
8.2.1 Tipos de Cromatografa Lquida segn el
Principio de Separacin
De acuerdo al principio utilizado para la separacin se pueden distinguir <
tres tipos bsicos de cromatografa por elucin:
- Cromatografa lquido-lquido.
- Cromatografa de filtracin en gel o cromatografa por exclusin.
- Cromatografa por adsorcin.
Cromatografa Lquido-Lquido
En la cromatografa lquido-lquido se utiliza un adsorbente slido im-
pregnado con un lquido que funciona como fase estacionaria. La sepa-
racin de los solutos es resultado de las diferencias en los coeficientes de
particin de cada uno de los solutos de la mezcla entre las fases lquidas
(estacionaria y mvil).
Cromatografa por Filtracin en Gel
La cromatografa por filtracin en gel utiliza partculas fabricadas de
geles porosas que actan como mallas moleculares que permiten separar
molculas en funcin de su tamao. Este tipo de cromatografa es co-
munmente empleada en las ltimas etapas de los procesos de obtencin
de protenas.
Cromatografa por Adsorcin
La cromatografa por adsorcin emplea adsorbentes en los que los solu-
tos a separar presentan diferentes grados de retencin. Existen varias
modalidades caracterizadas bsicamente por el tipo de adsorbente que
emplea, llamadas cromatografa de adsorcin:
- Fsica.
- Por intercambio inico.
- De interaccin hidrofbica.
- De fase inversa.
- De afinidad.
Cromatografa de adsorcin simple.- Se caracteriza por la u-
nin del soluto al adsorbente por fuerzas dbiles del tipo de van Der
Waals. Este tipo de cromatografa es poco selectiva entonces se uti-
liza poco a nivel analtico, pero por su bajo costo es utilizada a nivel
industrial.
Cromatografa por intercambio inico.- La cromatografa por
intercambio inico se basa en la interaccin electorosttica entre los
grupos cargados del soluto y los grupos cargados de los adsorbentes
utilizados en sta.
Cromatografa de interaccin hidrofbica y cromatografa
de fase inversa.- Tanto la cromatografa de interaccin hidrofbica
como la de fase inversa, se basan en la interaccin entre las regiones
hidrofbicas de molculas como las protenas y los grupos hidrofbicos
de los adsorbentes empleados.
Cromatografa por afinidad.- La cromatografa por afinidad est
basada en interacciones altamente especficas entre el soluto de inters y
el adsorbente. Este tipo de cromatografa es muy empleada en la purifi-
cacin de protenas. Los adsorbentes utilizados en esta cromatografa
presentan grupos qumicos llamados ligandos que son altamente es-
pecficos para la unin con los solutos.
8.2.2 Matrices
Actualmente diversos tipos de materiales o matrices son utilizados para
fabricar los soportes (empaques) de las columnas cromatogrficas. En
algunos casos estos materiales se modifican qumicamente para incre-
mentar su especificidad. Alrededor del 90 % de las matrices que se
emplean actualmente estn hechas de materiales que forman geles de
alto poder hidratante, los cuales se comercializan en forma de pequeas
esferas cuyo dimetro vara entre 10 y 100 /ra.
La Figura 8.3 muestra la estructura de algunas de las matrices em-
pleadas en cromatografa. En general los materiales de las matrices
pueden ser de cuatro tipos:
Materiales inorgnicos.
Slica porosa
Vidrio de poro controlado (Marca Spherosill)
Hidroxiapatita
Polmeros orgnicos sintticos.
Poliacrilamida (Marca Biogel P)
Polimetacrilato (Marca Spheron)
poliestireno
Polisacridos
Celulosa (Marcas Whatman, Cellulofine y Sephacel)
Dextrano (Marca Sephadex)
Agarosa (Marcas Sepharosa, Superosa, Ultrogel A y BoGel.)
Compuestos: polmeros orgnicos-polisacridos.
Poli-N ,./V -bisacrilamida-dextrano (Marca Sephacryl)
S.2. FUNDAMENTOS 425
B
CH
2
OH
n
HO
n
OH
OH
H
H
n
D
NH
2
C=O
I
CHaCH CHaCH CHzCH
C=O C =O
I I
HN NH
2
r
HN
I
C = O
I
CH2CH CH2CH CH
2
CH
I I
c = o c o
I I
HN NH
2
n
Figura 8.3: Estructuras de matrices, a) Celulosa ( f i 1-4). b) Dextrano
( d i 1-6). c) Agarosa. d) Poliacrilamida entrecruzada. Fuente: Janson,
1989.
Reproducida con el permiso de VCH Publishers. Copyright 1995. Todos los derechos reservados.
Agarosa-dextrano (Marca Superdex)
Agarosa-poliacrilamida (Marca Ultrogel AcA)
Desde el punto de vista funcional se pueden distinguir dos tipos de
geles: microporosas y macroporosas (Figura 8.4).
Las geles microporosas se obtienen por entrecruzamiento puntual
de polmeros lineales como el dextrano y la poliacrilamida. Este tipo
de geles son utilizadas en cromatografa de filtracin en gel y tienen
baja resistencia mecnica. Las geles macroporosas se obtienen por en-
trecruzamiento y agregacin de polmeros, como la agarosa y la po-
liacrilamida macroreticular. Este tipo de geles son empleadas en cro-
matografa de intercambio inico y de afinidad donde se requieren poros
ms grandes. Las geles compuestas se forman al introducir geles de mi-
croporos en los poros de las geles de macroporos, para combinar las
ventajas de ambos tipos de materiales.
De acuerdo a su comportamiento con relacin al solvente, se pueden
distinguir dos tipos de geles: xerogeles y aerogeles. Las xerogeles se
caracterizan por arrugarse e hincharse en la ausencia y presencia del
solvente, respectivamente. Por otro lado, el volumen de las aeroge-
les es independiente del solvente. Las geles de dextrano entrecruzadc
(Sephadex) y las de poliacrilamida, pertenecen a las xerogeles; mientra*
que las geles de vidrio poroso, slica, poliestireno y polimetacrilato sor
aerogeles.
Tipo de Cromatografa y Tipo de Matriz
Existe una relacin directa entre el tipo de cromatografa y el tipo d<
matriz empleada, a continuacin se presentan algunos ejemplos parti
culares.
Cromatografa Lquido-Lquido.- En la cromatografa lquido
lquido se emplean partculas de tierras diatnicas impregnadas coi
propilen-glicol. Esta tcnica es poco selectiva por lo que no es mu;
utilizada en el laboratorio, pero debido a su bajo costo es utilizada
escala industrial.
Cromatografa de filtracin en gel.- En la cromatografa de fil
tracin en gel se emplean bsicamente geles de microporos de dextran
o poliacrilamida.
(b) ( c)
Figura 8.4: Matrices microporosas y macroporosas. a) Celulosa, b)
Polmeros entrecruzados como poliacrilamida y dextrano. c) Agarosa.
Fuente: Janson, 1989.
Reproducida con el permiso de VCH Publishers. Copyright 1995. Todos los derechos reservados.
428 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN
/J-OCH
2
COO Carboximetil
2
Fosfato
-OCH
2
CH
2
SO
3
Sulfoetil
Sulfopropil
X
CH2CH
3
OCH
2
CH
2
N( Dietilamino-etil
I CH
2
CH
3
n
' *"' Chfe Chb Trietilamino-etil
CH
2
CH
3
Figura 8.5: Grupos funcionales de adsorbentes inicos.
Cromatografa por adsorcin.- Los procesos cromatogrficos
basados en la adsorcin simple de solutos en un adsorbente slido
poroso, utilizan adsorbentes como almina y slica-gel. Como ya se
ha mencionado este tipo de adsorbentes son poco selectivos, pero de-
bido a su bajo costo este tipo de cromatografa tambin se aplica slo
en separaciones en procesos industriales.
La cromatografa por intercambio inico es una de las ms utilizadas
a nivel industrial para la purificacin de diferentes tipos de compuestos.
Las resinas utilizadas son de dos tipos: catinicas y amnicas, depen-
diendo del grupo inico (Figura 8.5).
S.2. FUNDAMENTOS 429
Fenil
Octadel
Octil
Butil
Etil
C
6
Hs-
Figura 8.6: Grupos funcionales comunes de la cromatografa de inter-
accin hidrofbica y de fase inversa.
En las tcnicas cromatogrficas de interaccin hidrofbica y fase
inversa, la fase estacionaria consiste de una matriz con ligandos no
polares (Figura 8.6). La separacin se basa en el hecho de que algunas
molculas como las protenas presentan residuos externos no polares, de
tal manera que en soluciones no acuosas estos tienden a interaccionar
con los ligandos no polares de los soportes.
Las interacciones hidrofbicas entre la protena y el ligando del so-
porte, se fortalecen utilizando medios con altas concentraciones salinas,
por ejemplo: sulfato de amonio a una concentracin cercana a la de pre-
cipitacin de la de la protena. Para elur las protenas se utiliza una
solucin con concentracin salina baja o un solvente de baja polaridad.
En la cromatografa de fase inversa no se utilizan solventes de baja
polaridad para elur, para evitar la desnaturalizacin de las protenas,
y ese es su rasgo distintivo respecto a la cromatografa de interaccin
hidrofbica.
En la cromatografa con iones metlicos, el adsorbente contiene
iones metlicos inmovilizados sobre el soporte por medio de grupos
quelantes como el cido iminodiactico. El tipo de iones ms utilizados
son el Cu
+2
y el Zn
+2
. Estos iones interactan con los grupos cargados
de las protenas como es el caso de los residuos de histidina.
La cromatografa que utiliza colorantes como ligandos, se basa en el
hecho que cierto tipo de estos colorantes interactan fuertemente con
los grupos aninicos de las protenas.
Los colorantes asemejan estructuras biolgicas como los cofactores
430 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN,
,S0
3
H
S0
3
H
SO
3
H(m/p)
H0
3
S SO
3
H
H0
3
S
H0
3
S
0
3
H
0
3
H
S0
3
H
S0
3
H
Figura 8.7: Colorantes utilizados como ligandos. a) Azul A. b) Rojo
A. c) N aranja A.
$.2. FUNDAMENTOS 431
Tabla 8.1: Tipos de cromatografas de acuerdo a su presin de opera-
cin.
Tipo
Baja
Moderada
Alta
Presin (atm)
1
2-50
51-350
Dimetro ( ( m)
90-100
30-50
5-10
NAD y ATP y permiten la interaccin con ciertas protenas. La ventaja
es que son ms baratos que dichos cofactores, ms fciles de unir a las
matrices y ms estables (Figura 8.7).
Otro tipo de cromatografa utiliza ligandos biolgicos altamente es-
pecficos para ciertos sustratos. Las diferentes modalidades de la ad-
sorcin por afinidad se presentan en la Figura 7.8.
8.2.3 Tipo de Cromatografa de Acuerdo a la Pre-
sin de Operacin
De acuerdo al tamao de partcula y a la presin de operacin que em-
plea, la cromatografa lquida se puede clasificar en cromatografa de
presin baja, presin moderada y presin alta (la cromatografa lquida
a presin alta es caracterstica de la tcnica llamada cromatografa
lquida de alta resolucin, HPLC de sus siglas en ingls). En la Tabla 8.1
se presentan las presiones y el tamao de partcula caractersticas de
cada una de ellas.
8.2.4 Relaciones de Equilibrio
En el anlisis de columnas cromatogrficas, las relaciones de equilibrio
se expresan por medio de isotermas de adsorcin o curvas que relacionan
la concentracin en el equilibrio del soluto en la fase estacionaria y de!
soluto en la fase mvil. Dichas isotermas son generalmente no linea-
les mostrando comportamientos tipo Langmuir o Freundlich. Esta
isotermas son iguales a las descritas en el captulo anterior.
8.2.5 Cintica de la Adsorcin
Algunos modelos utilizados para describir una operacin cromatogrfica
toman en cuenta las resistencias a la transferencia de masa involucrada?
en el proceso, las cuales pueden ser descritas mediante un mecanisrnc
de cinco pasos:
1. Difusin del soluto del seno del lquido a travs de una pelcul;
de lquido que rodea al adsorbente.
2. Difusin del soluto dentro del poro del adsorbente.
3. Reaccin reversible del soluto con el adsorbente (la reaccin pued
involucrar adsorcin, reaccin y desorcin de superficie).
4. Contradifusin del soluto en el poro hacia la superficie del adso
bente.
5. Contradifusin del soluto de la superficie del adsorbente hacia
seno del lquido, a travs de la pelcula de lquido.
Generalmente uno o dos de los pasos descritos anteriormente son 1<
ms lentos, de tal manera que son los que controlan la velocidad glob
de transporte del soluto.
8.3 Equipo Cromatogrfico
Los principales equipos cromatogrficos son columnas fabricadas
plstico, vidrio o acero inoxidable. Las columnas para cromatogra
en gel tienen relaciones LD muy bajas, en el rango de 0.3 a 3; c
dimetros mximos de 1.5 rn. En el caso de geles blandas la longit
necesaria de la columna se alcanza por medio de sistemas de varias
columnas cortas.
Las columnas empleadas en cromatografa HPLC tienen dimet
de hasta 80 cm y altura de lecho de 120 era (Figura 8.8). Este t:
de columnas deben ser empacadas utilizando sistemas hidrulicos (
permitan el manejo adecuado del empaque.
S.3. EQUIPO CROMATOGRAFICO 433
Salida
Distribuidor
Bomba
Figura 8.8: Columna cromatogrfica. Adaptada de: N icoud y Perrut,
1991.
Reproducida con el permiso de Kluwer Acadeiic Publishers. Copyright 1991. Todos los dere-
chos reservados.
8.4 Diseo de Columnas Cromatogrfi-
cas
La obtencin de productos biotecnolgicos con grados de pureza y mer-
cados cada vez mayores, ha creado la necesidad de llevar a escala de
proceso las tcnicas que tradicionalmente se utilizan slo a nivel labora-
torio. Es en esta transicin donde los conocimientos ingenenles juegan
un papel muy importante.
Una de las tcnicas que ha recibido ms atencin en este sentido es
la cromatografa, particularmente en el arreglo tipo columna de lecho
fijo. Tres conceptos se combinan para lograr un diseo apropiado de
estas columnas cromatogrficas:
El modelo de la columna.
Los criterios para la evaluacin tcnica del comportamiento de la
columna: Resolucin, Pureza y Rendimiento.
Los procedimientos de escalamiento y optimizacin de la columna.
8.4.1 Modelos Cromatogrficos
Varios modelos empleados para el anlisis y diseo de columnas croma-
togrficas que operan bajo condiciones isocrticas, utilizan isotermas
lineales para describir las relaciones de equilibrio que se presentan en
stas, debido a que por su simplicidad dichos modelos pueden ser re-
sueltos analticamente para obtener los perfiles de concentracin tipo
campana de Gauss, que se observan experimentalmente en algunos cro-
matogramas.
La suposicin de una isoterma lineal se puede justificar en funcin
de que un gran nmero de sistemas cromatogrficos se trabajan con
muestras pequeas, de tal manera que el rango de concentraciones en
la columna es bajo, y puede ser situado en el rango lineal de cualquier
tipo de isoterma (en la regin de baja concentracin). El trabajar con
muestras pequeas permite tener una buena separacin de los solutos
de la mezcla (resolucin) a expensas de un bajo rendimiento o canti-
dad de muestra que puede ser procesada. Sin embargo, es conveniente
8. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRFICAS 435
establecer que este enfoque tiene sus limitaciones , principalmente para
los sistema cromatogrficos muy selectivos como los de afinidad.
Cuando la elucin es por gradiente, las relaciones de equilibrio
varan conforme cambia la composicin de los eluyentes y los modelos
basados en isotermas lineales no son aplicables directamente. Actual-
mente se cuenta con algunas tcnicas cromatogrficas que emplean otros
principios como es la cromatografa por desplazamiento y la de cambio
cclico de la zona de adsorcin, donde tampoco son aplicables los mode-
los basados en isotermas lineales. A nivel preparativo la cromatografa
por elucin se utiliza bajo condiciones de sobrecarga con el propsito
de incrementar la productividad de la columna; esto puede lograrse in-
crementando el volumen o la concentracin de la muestra (Figura 8.9).
Bajo estas condiciones la aplicacin de los modelos lineales tambin es
limitada.
Esta seccin slo se refiere a los principios bsicos de la cromatogra-
fa por elucin isocrtica en columna y principalmente a los modelos
basados en isotermas lineales. Existen tres enfoques bsicos para la
obtencin de estos modelos cromatogrficos de columnas:
La teora de platos.
La teora cintica.
Teora de platos y Teora cintica combinadas.
Modelo de Platos Tericos o Etapas
El modelo de platos tericos es uno de los ms usados el anlisis de la
cromatografa por elucin. Sin embargo, este modelo tiene sus limita-
ciones en lo que se refiere al diseo y escalamiento de columnas, por lo
que su uso es cada vez ms limitado.
En el desarrollo del modelo de platos tericos se supone que la
columna se comporta como una serie de etapas en equilibrio. Cada
etapa puede visualizarse como un adsorbedor tipo tanque de volumen
constante. El solvente fluye de un tanque hacia el otro, mientras que
el adsorbente permanece fijo en su tanque respectivo (Figura 8.10).
El balance de masa del soluto para la etapa ?i puede ser escrito
como:
Figura 8.9: Cromatografa analtica y preparativa, a) Analtica, b
Sobrecarga de volumen, c) Sobrecarga de concentracin. Fuente: Kno:
y Pyper, 1986.
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1986. Todos los derechos rese
vados.
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 437
y(L.t)
Etapa
1
F
y,
Etapa
2
Figura 8.10: Modelo por etapas.
Acumulaci n en el li qui d o Entrad a Sali d a Ad sorci n
lo cual pude ser expresado mediante la siguiente ecuacin:
7T - Fy
n
-i - Fy
n
- (1 - e)V
E
- (8.1)
\i t cLt
donde:
VE' - Volumen de la etapa (lquido ms adsorbente).
: Volumen del lquido por volumen de etapa.
F: Flujo de alimentacin.
y
n
: Concentracin de soluto en la solucin en la etapa n.
q
n
: Concentracin de soluto en el adsorbente en la etapa n.
El modelo supone que cada etapa est en equilibrio y que la relacin
de equilibrio est dada por una isoterma lineal, de tal manera que en
cada etapa la relacin de concentraciones puede ser expresada como:
qn =Ky
n
(8-2)
{[e + (1 - e)K] VE] % - F(y
n
_, - y
n
) (8.3)
donde la cantidad entre corchetes es un volumen hipottico de lqui-
do V* =[e + (1 E)K\VE que contiene al soluto de las fases lquida y
slida (de tal manera que la expresin (8.3) es equivalente a un balance
de masa de un tanque de volumen V* con entrada y salida).
La ecuacin (8.3) puede ser resuelta con las siguientes condiciones:
1. Inicialmente ninguna etapa contiene soluto.
para t < O, y
n
=O para n = 1, 2, ...N
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRAFAS 439
donde N es el nmero total de etapas en la columna.
2. Al inicio de la operacin de la columna se inyecta un pulso muy
corto de tal manera que:
para t = O, yi = y
A
(lo anterior corresponde a considerar que la masa de soluto que se
alimenta a la primera etapa en el tiempo cero es M = V*y).
La forma integrada es:
y
n
=y A
(8.4)
donde el tiempo adimensional r est dado por:
Ft
T =
(
+ ( l-e)K]V
E
(8.5)
o bien
como el volumen total del lecho V
c
se puede expresar como: V
c
=
entonces la ecuacin (8.5) tambin puede ser expresada de la
siguiente forma:
NFt
r =
( l-e)K]V
c
(8.6)
La ecuacin (8.4) es la expresin de una distribucin de Poisson.
Para N grandes (mayores a 30) sta se aproxima a una distribucin
de Gauss (Figura 8.11), caracterstica de los cromatogramas que se
observan experimentalmente en comatografas de laboratorio donde la
cantidad de muestra es pequea.
En el modelo de platos tericos la variacin con el tiempo de la
concentracin de soluto a la salida de la columna, puede aproximarse
con la ecuacin de una distribucin de Gauss, de tal manera que:
o.io-
o.os -
o.oo
N =10
N=100
50
I
100 150
Figura 8.11: Aproximacin de la distribucin de Poisson a la de Gauss.
(r -
y = y ex
P
-Hr-5^ (8-7)
donde:
y
0
: Concentracin mxima de soluto a la salida de la columna.
T^: Desviacin estndar del perfil de concentracin de soluto.
T
O
: Tiempo adimensional para el cual la concentracin de salida es
mxima (tiempo adimensional de retencin).
La ecuacin (8.7) relaciona la concentracin y con los parmetros
yo
?
o A Y TO] Y con la variable r. Para poder utilizar dicha ecuacin es
necesario relacionar estos parmetros con el sistema fsico particular.
El parmetro y
0
puede ser relacionado con el sistema mediante un
balance de masa en toda la columna. De este balance se obtiene la
expresin de la masa M de soluto alimentada al sistema,
yoo
M=I Fyd t
Jo
la cual puede ser aproximada a
M = Fyd t
(8.8)
(8.9)
la ecuacin anterior se integra combinndola con la ecuacin (8.7),
sustituyendo dt por V*d r/F, y multiplicando y dividiendo por (2
de tal manera que:
M = exp d r} (8.10)
puede encontrarse en cualquier texto de probabilidad y estadstica
que la expresin entre corchetes de la ecuacin anterior vale uno, de tal
manera que:
como M = V*yA, entonces,
y o =
(8.11)
(8.12)
que es la expresin que se busca para el primer parmetro.
Mediante las definiciones de media y desviacin estndar, y \i t\- \
lizando la ecuacin (8.4), es posible relacionar a A y T
O
con el nmero
de etapas de la columna, de tal manera que:
(8.13)
Mediante la ecuacin (8.5) se puede definir un t
0
, dado por:
NFt
0
7-
* n ~~
como T
O
=N, entonces:
t
0
=
( l-e)K]V
e
( l-e)K]V
e
(8.14)
(8.15)
(8.16)
(El tiempo real de retencin de un soluto en la columna, es funcin
del tiempo de residencia del fluido en la columna (V^/ F), la porosidad
e del lecho y la constante K.)
Finalmente, la ecuacin (8.7) puede ser escrita en trminos de las
caractersticas y condiciones de la columna como:
y =yoexp
(-0
2_
N
(8.17)
La ecuacin (8.17) es una distribucin normal que tiene un mximo
> en t =t
0
igual a:
y o =
(27TJV)
y una desviacin estndar:
a =
x/TV
La ecuacin (8.17) tambin puede expresarse en trminos del volu-
men V de solvente aadido a la columna, considerando un flujo cons-
tante, de tal manera que:
V
t=
F
Vo
F
y entonces,
y = yoexp
(8.18)
(8.19)
(*-')
_ _
N
(8.20)
Aplicacin del Modelo de Platos.- Las ecuaciones (8.17) y
(8.20) pueden ser utilizadas para estimar el nmero de etapas de una
columna a partir de datos experimentales de concentracin contra tiem-
po. Una vez calculada N y contando con la longitud de la columna L,
se puede obtener la altura equivalente de un plato terico (HETP de
sus siglas en ingls) de la columna, la cual es una medida de la eficiencia
de sta, mediante la siguiente ecuacin:
HETP= - (8.21)
Asimismo, dichas ecuaciones han demostrado ser tiles en el anlisis
de la dispersin y la resolucin de los picos de un cromatograma. Sin
444 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCll
embargo, no pueden ser utilizadas para predecir el nmero de etapj
o la altura equivalente de un plato terico, ni para predecir en
forma el cambio de las condiciones de operacin de la columna afect
su comportamiento.
Ejemplo 8.1.- Clculo del nmero de etapas en la cro-1
matografa de Inmunoglobulina G.
La cromatografa de perfusin-afinidad de alta resolucin de In-
munoglobulina G (Fulton et a/, 1991) produce un cromatograma con
un pico cuyo tiempo medio de retencin es de 32.5 s. El ancho del pico
cuando la concentracin es la mitad de la mxima es de 1.60 s.
Estimar el nmero de etapas tericas de esta columna.
Solucin:
Se puede utilizar la ecuacin (8.17) para determinar el nmero de
etapas tericas de la columna. Sustituyendo valores,
0.5 = exp
2_
N
aplicando logaritmos en ambos lados de la expresin anterior se
obtiene,
N = 2287
Es importante hacer notar que entre ms ancho sea el pico del cro-
matograma, N ser ms pequea y por lo tanto HETP ms grande, y
viceversa. Consecuentemente, la HETP es una medida de la amplitud
de un pico cromatografa) (eficiencia de la columna). Entre menor sea
HETP, mayor eficiencia de la columna.
Mtodos grficos para determinar N.- Existen varias formas
para calcular N a partir de un cromatograma gausiano. Una de las ms
utilizadas emplea la siguiente expresin:
W
2
(8.22)
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATO GRFICAS 445
1.2-
JL
Xo
0.8-
0.6-
0.4-
0.2-J
55
Tiempo (min)
Figura 8.12: Clculo del nmero de unidades de transferencia en forma
grfica.
446 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR
donde W es el ancho de la base del cromatograma medido entre
las rectas tangentes que pasan por los puntos de infleccin del cro-
matograma. La teora de platos es muy utilizada debido a que permite
una rpida caracterizacin y una comparacin sencilla entre columnas
Ejemplo 8.2.- Clculo grfico del nmero de etapas tericas.
Estimar a partir del cromatograma que se muestra en la Figura 8.12
el numero de etapas tericas obtenidas en la cromatografa de transfe-
rrina.
Solucin:
Utilizando la ecuacin (8.22) se puede calcular N. Para realizar el
clculo es necesario determinar el ancho del cromatograma,
W =49 mi n 33 mi n = 16 mi n
y el tiempo de retencin,
t
0
=41 mi n
N =
16(41 mi n)' '
(16 mi n)
2
N = 105
Modelos Basados en la Teora Cintica
Los modelos basados en la teora cintica describen el comportamien-
to de una cromatografa mediante los perfiles de concentracin de los
solutos obtenidos mediante balances de masa, relaciones de equilibrio
y expresiones cinticas. Este enfoque resulta ms complejo que el de la
teora de platos pero permite mejorar la descripcin y comprensin de
estos sistemas.
Para iniciar la revisin de algunos modelos cinticos es conveniente
describir cuatro comportamientos generales de una columna cromato-
grfica operando en modo elucin socrtica, descritos en la Figura 8.13.
Caso 1.- Un pulso inyectado a una columna no sufrir ningn cambio
a la salida de la columna, slo si:
Casal
Caso 2
Caso 3
Caso 4
Figura 8.13: Descripcin cualitativa del comportamiento de una
columna.
- El flujo en la columna es idel o tipo tapn.
- Los solutos no penetran al interior del adsorbente.
- Los solutos no reaccionan (no se adsorben) con el adsorbente.
Caso 2.- Un pulso inyectado a una columna donde exista un cierto
grado de flujo no ideal debido a un empaque deficiente o a fenmenos
de difusin axial, pero no exista adsorcin, presentar un tiempo de
retencin promedio igual al del pulso del caso 1, pero con cierto grado
de dispersin.
Caso 3.- Un pulso que contenga un soluto que pueda ser adsor-
bido, sufrir un retardo y un cierto grado de dispersin al pasar por
la columna. La dimensin de estos efectos depender de de la natu-
raleza de la adsorcin. La tcnica cromatogrfica se basa en el hecho
de que diferentes solutos pueden sufrir diferentes retardos en un mismo
adsorbente.
Caso 4.- Un pulso inyectado a una columna donde exista adsorcin
y efectos de flujo no ideal simultneamente, tendr un tiempo de re-
tencin igual al del caso 3, pero una mayor dispersin.
Se han desarrollado varios modelos para predecir los perfiles de con-
centracin de las colunas cromatogrficas desde el punto cintico, los
cuales presentan diferentes grados de complejidad y difieren entre s en:
- El tipo de equilibrio que consideran.
- El nmero y tipo de resistencias a la transferencia de masa que toman
en cuenta.
- La cintica en la superficie del adsorbente.
- Los efectos de mezclado que incorporan.
La elaboracin del modelo de la columna se inicia con el balance de
masa de; soluto en la fase lquida en una seccin de la misma.
d t d z
2
d z
donde:
8A. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRFICAS 449
e: Fraccin vaca del lecho. [L
3
/L
3
].
y: Concentracin de soluto en el lquido. [M/L
3
].
t: Tiempo, [t].
E: Coeficiente de dispersin axial. [L
2
/t].
z: Distancia axial. [L].
v: Velocidad superficial (flujo por rea de seccin transversal de co-
lumna). [L/i \.
R: Velocidad de adsorcin de soluto en el adsorbente. [M/L
3
t].
El balance de soluto sobre el adsorbente complementa al balance
anterior y puede ser expresado como:
/2
=
(l_
e
)|? (8.24)
A continuacin se revisan dos modelos cinticos de diferente grado
de complejidad, el modelo cintico lineal y el modelo cintico general;
ambos consideran relaciones de equilibrio lineales.
En este punto es importante recordar que los balances de masa y
las relaciones de equilibrio para columnas cromatogrficas son iguales
que los de adsorcin en columna, mientras que las condiciones iniciales
son diferentes.
Modelo Cintico Lineal.- Este modelo supone que slo una re-
sistencias controla la transferencia de masa. En el caso que la resistencia
en la pelcula sea la controlante, la velocidad de transferencia de masa
del lquido al adsorbente puede ser expresada como:
R =k
L
a( y - y*) (8.25)
donde y* es una concentracin hipottica en el lquido en equilibrio
con la concentracin de soluto en el adsorbente (en algunos casos la kâ
se toma como un coeficiente que agrupa todas las resistencias, debido
a la dificultad experimental de mediciones que puedan dis tinguir entre
los diferentes mecanismos de control).
El modelo supone adems que la dispersin axial y la acumulacin
en la fase lquida son despreciables, entonces la ecuacin (8.23) se trans-
forma en:
R = -v (8.26)
d v
k
L
a( y-y*) =-v-^ (8.27)
Esta ecuacin puede ser integrada para obtener la longitud necesaria
de la columna para un determinado grado de separacin,
L
L= d z =
V d y
y -y")
(8.28)
al trmino entre parntesis cuadrados de la ecuacin anterior se le
llama altura de una unidad de transferencia HTU (de sus siglas en
ingls), y al trmino entre corchetes se le llama nmero de unidades
de trasferencia NTU (de sus siglas en ingls); de tal manera que la
ecuacin anterior puede ser expresada como:
L =HTU- NTU (8.29)
La ecuacin anterior puede ser utilizada para calcular la longitud
necesaria de una columna cuando se conoce kâ. Los modelos cuando
la resistencia controlante es otra son anlogos.
Modelo cintico general: Teora de momentos.- El modelo
cintico general para describir una columna cromatogrfica es ms com-
plejo e incluye los efectos de:
- Resistencia a la transferencia de masa en la pelcula.
- Resistencia a la difusin al interior de la partcula.
- Adsorcin reversible de primer orden sobre la superficie de los poros
(isoterma lineal).
- Dispersin axial.
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRFICAS 451
Estos efectos se integran mediante un modelo pseudocontinuo des-
crito por el sistema de ecuaciones que se lista a continuacin.
1. Balance de soluto en el seno del lquido de la columna:
d y d
2
y d y
y c
1
" " D ( Q Q n\
6 = -T-T v- ri ( 0.60)
ot oz
oz
En la expresin anterior, R es la velocidad de transferencia de masa
de soluto entre el lquido y el adsorbente por unidad de volumen de
lecho, dada por:
/ " / 1 \ O
6(1 e) oyi .
Ri D
p
-;r- \
r
=R
a
(8.31)
d
p
or
donde:
e: porosidad del lecho.
d
p
: Dimetro de la partcula de adsorbente.
D
p
: Difusividad del soluto al interior del poro del adsorbente.
r: Distancia radial del centro de la partcula a un punto dado en la
partcula de adsorbente.
R
a
: Radio de la partcula.
y
t
-: Concentracin de soluto en la fase lquida al interior del poro.
2. Balance de soluto al interior del poro:
> . i i _ _ ^ _ ^ _ i _ ^ _ _ i / 1 . \ _ ^ ^ ^ ^ _ w < y \
l
~d t~
p
( "--"
+
~
Q
~ ' ""
( t j
^
( j
donde < /, es la concentracin de soluto en el adsorbente y e, es la
porosidad de la partcula de adsorbente al soluto de inters.
3. Balance de soluto interfacial en la superficie del adsorbente:
D
p
-^-\
r=Ra
=k
L
( y - y
l
)\
r
=R
a
(8.33)
4. Adsorcin reversible de primer orden en la superficie del adsor-
bente:
(8.34)
donde & i es la constante cintica de la reaccin de superficie en
el sentido directo y Kes la constante de equilibrio de la reaccin de
superficie.
Las condiciones iniciales y de frontera del sistema de ecuaciones
anterior son:
en: para: se tiene:
r =0 > O fr = O
2 > O t =0 y = O
r > O = O y i - O
2 = 0 O < < p y =y
A
2 = 0 t > t
p
/ = O
donde
p
= Vp/ F es la duracin de un pulso rectangular de volumen
V
p
inyectado a la columna.
El sistema de ecuaciones (8.30)-(8.34) fue resuelto en el dominio
de de las Transformadas de Laplace (Furusawa et a/, 1976), pero la |
solucin no pudo ser invertida para obtener la expresin de la concen-
tracin a la salida como una funcin del tiempo. La solucin en el
dominio de Laplace fue utilizada para calcular los momentos del perfil
de concentracin del soluto dados por las expresiones siguientes:
La ecuacin para el momento u del perfil de concentracin del soluto
en un lecho de longitud L es,
oo
m
n
= y( t,L)t
n
d t (8.35)
Jo
de tal manera que el momento absoluto n es,
rn
n
Jy( t,L)t
n
d t
m
(8.36)
SA. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRAFAS 453
y el momento central n,
. J?y( t,L)( t-
rn roo /
Jo 2/0
Dos momentos tienen un significado fsico y son de particular inters
en cromatografa:
1.- El primer momento absoluto o tiempo de retencin promedio
dado por:
^y( t,L)td t
^ / o y(*,)< ft
y de acuerdo al modelo est dado por,
L
v
e + (l- eWl + ^l '
tp
+ f (8.39)
De acuerdo a la ecuacin anterior, el tiempo de retencin de un
soluto en la columna depende del tiempo de residencia del eluyente, el
tipo de empaque y de la constante de equilibrio.
Se puede utilizar la expresin del primer momento absoluto para
estimar la porosidad de lechos cuando el soluto es tan grande que e, = O
y no existe adsorcin, de tal manera que la ecuacin (8.39) se reduce a:
t
p
_ Le
2.- El segundo momento central es una medida de la dispersin del
pico y est dado por:
8 4fn
(8
'
40)
' J~y( t,L)d t
y de acuerdo al modelo general,
12
(8.41
La ecuacin anterior muestra que la dispersin del pico respecto
al tiempo de elucin o segundo momento central, es funcin de varios
parmetros como el coeficiente de transferencia de masa en la pelcula,
el coeficiente de difusin efectiva al interior del poro, la constante
cintica de adsorcin, la constante de equilibrio, el coeficiente de dis-
persin y los parmetros del empaque.
El mtodo de momentos elimina la necesidad de una solucin nu-
mrica del sistema de ecuaciones de conservacin de la columna. Sin
embargo, su uso est restringido a sistemas que presenten isotermas
y expresiones de transferencia de masa lineales. Otra desventaja del
mtodo de momentos es que la solucin no se obtiene en el tiempo real
y no se puede predecir el efecto de los parmetros o variables de diseo
sobre los perfiles de concentracin.
Una de las principales aplicaciones del modelo es en la estimacin
de parmetros para diseo, pero slo de aquellos que no varian con la
escala, como la difusividad efectiva de partcula, las constantes cinticas
de adsorcin y la porosidad de la partcula. Sin embargo, los coeficientes
de dispersin que se determinen en una columna de laboratorio pueden
ser muy diferentes a los de una columna industrial.
Ejemplo 8.3 .- Estimacin de la porosidad de un adsor-
bente.
Se determinaron (Arnold et a/, 1985) los tiempos de retencin pro-
medio de mioglobulina y albmina de suero de bovino (ASB), utilizando
pulsos de 1 -mi en una columna de 1.6 cm de dimetro, variando su
longitud entre 26 y 31 cm. Los estudios se realizaron bajo condiciones
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRAFAS
455
de no-adsorcin (columna equilibrada con solucin amortiguadora de
elucin K= 0), utilizando Sefarosa CL-4B (100 /im).
Los resultados se correlacionaron con L/v y se ajustaron a las rectas:
Para Mioglobulina:
Para Albmina:
Mi - =.
2 v
_ |
=
0.69-
2 v
La porosidad de la columna se estim utilizando datos de tiempo de
residencia de azul de dextrano (molcula que no penetra en los poros
del adsorbente ni se adsorbe) y fue de e =0.35.
A partir de estos resultados estimar la porosidad del empaque e.
Solucin:
En el caso que no existe adsorcin (K=0), la ecuacin (8.39) se
puede expresar como:
entonces,
- = [e
sustituyendo valores en la expresin anterior para el caso de la
mioglobulina se tiene:
0.87 = 0.35 + (l-0.35)e
= 0.8
sustituyendo valores para el caso de la albmina se tiene:
0.69 = 0.35+ (1 -0.35)e
e = 0.52
El adsorbente presenta diferente porosidad dependiendo del tamao
del soluto: BSA (PM=67,000) y Mioglobulina (PM = 17,500)
Modelos Combinados: Teora de Platos y Teora Cintica
Las teora de plato es sencilla en su desarrollo matemtico, pero no
puede ser usada para predecir el comportamiento de columnas a par-
tir de datos fundamentales. Se han efectuado diferentes intentos para
superar esta limitacin de la teora de platos, todos los desarrollos efec-
tuados han producido expresiones en las que la HETP (medida del
grado de dispersin del pico) se relaciona con parmetros que permiten
predecir el comportamiento de la columna. Sobre este tipo de enfoque
dos tipos de modelos resultan de particular inters:
- El modelo combinado lineal.
- El modelo de van Deemter.
Modelo Combinado Lineal.- Una primera aproximacin para la
obtencin de expresiones de HETP en funcin de variables de operador
de la columna, es igualar el nmero de platos tericos de la teor
de platos (N) con el nmero de unidades de transferencia (N TU) de
modelo cintico lineal, considerando que ambos modelos describen ui
comportamiento gausiano similar, de tal manera que de acuerdo a la,
ecuaciones (8.28) y (8.29):
N =NTU=
J
!^L
(8
.42
v
y combinando esta ecuacin con la ecuacin (8.17) se puede obtene
el perfil de concentracin en funcin de las variables de operacin,
y =yoexp
2v
En la ecuacin (8.43) la desviacin estndar del pico est dada po
por otro lado se sabe que:
HETP= (8.4
yv
8A. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRAFAS 457
y se puede expresar el HETP no slo en trminos de un parmetro
hipottico TV, sino en funcin de caractersticas fsicas del sistema ,
HETP =
v
(8.46)
Ejemplo 8.4.- Cromatografa de aspartamo.
La cromatografa de d-aspartamo (Belter et al, 1988) en slica gel
modificada, con silanos como brazos espaciadores y 1-prolina como li-
gando, produce un cromatograma en el cual el tiempo de elucin del
d-aspartamo es t
0
=62 mi n y la desviacin estndar a = 3 razn, cuando
se utiliza una columna de 25 cm de longitud y 0.41 era de dimetro, re-
llena de partculas esfricas de 0.0045 era de dimetro. La fraccin vaca
de la columna se estim en 0.38 y el flujo utilizado fue de 2 cm
3
/mi n.
La cintica de adsorcin puede suponerse que es controlada por el
coeficiente de transferecia de masa de la pelcula, el cual puede ser
estimado por medio de la siguiente correlacin:
k
L
=l.llv
-0.67
-5
La difusividad del d-aspartamo en estas condiciones es 0.7 x 10
cm
2
/s. La viscosidad y densidad pueden ser tomadas como las del agua.
Se pide calcular:
a) La constante de equilibrio del sistema.
b) N y HETP de acuerdo al modelo de platos.
c) N, cr
2
y HETP de acuerdo al modelo lineal combinado.
d) El efecto de variaciones de 20 % de la longitud de la columna,
sobre N y t
0
.
Solucin:
a) Clculo de la constante de equilibrio.
Se puede utilizar la ecuacin (8.16) para obtener A', para lo cual es
necesario calcular primero el volumen del lecho V
c
:
V, =
7r(0.41 era)'
x 25 cm
V
c
= 0.132 cm
2
x 25 cm
V
c
= 3.30 cm
3
rearreglando la ecuacin (8.16) y sustituyendo valores se tiene:
K =
tnF
K =
62 mi n x
1 - 0.38
K = 60
3.30 cm
3
b) Clculo de N y HETP con el modelo de platos.
De acuerdo con las ecuaciones (8.45) y (8.46),
N
= -\
62
2
mi n
2
N
= 15^
6
mi n
N = 427
por la definicin de HETP dada en la ecuacin (8.45),
HETP =
HETP =
HETP =
L^
~
25 cm
427
0.0585 cm
c) Clculo TV, cr
2
y HETP con el modelo combinado lineal.
Para calcular TV se utiliza la ecuacin (8.42). Para tal efecto primero
se calcula la velocidad superficial v,
v =
2
cm ., T7ii n
X _
mi n 60 s
0.132
= 0.25
cm
El coeficiente de transferencia de masa se calcula utilizando la co-
r rrelacin dada de tal manera que:
cm 0.0045 cm x 0.25 22. x
k
L
= 1.17 x 0.25 x *
s \ 0.01 -f-
-0.42
0.01
-0.67
X
x 0.7 x 10~
5
sai
cm
Jb
L
= 5.67 x 10-
J

s
El clculo del rea interfacial es:
a =
a =
6(1-g)
d
p
6(1 - 0.38)
0.0045 cm
826.67 cm'
1
entonces,
N =
v
(5.67 x 10~
3
sa)(826.67 cm~
1
)(25 cm)
0.25 ss.
s
TV = 468
De acuerdo a la ecuacin (8.46),
a i ,
62 mi n
\/468
2.86
De la ecuacin (8.47),
HETP = -^-
HETp =
(2.86 min)
2
x 25 cm
(63 mi n)
2
HETP = 0.052 cm
d) Para resolver este inciso necesariamente se tiene que hacer uso
del modelo combinado lineal. Esta es la ventaja de este tipo de mode-
lo; es decir, nos permite hacer predicciones con la variacin de ciertos
parmetros.
Una columna de 20 cm representa la reduccin de un 20 % en lon-
gitud de tal manera que:
(5.67 x 10~
3
^f)(826.67 cm~
1
)(20 cm)
_____
TV = 374
por otra parte:
. = [0.38
+
(1-0.38) 60]
x
"-"E cm^x 20 cm
rntn
t
0
= 49.6 mi n
De la misma manera se pueden efectuar los clculos para L 30 era
(+20%).
Modelo de van Deemter.- El modelo de van Deemter (van Deem-
ter ti a/, 1956) es uno de los ms conocidos para cromatografa por
elucin. Estos autores combinaron los resultados de la teora de platos
con los del modelo cintico de Lapidus y Amundson (Lapidus y Amund-
son, 1952). Este ltimo fue utilizado en forma simplificada para el caso
de un sistema con isoterma de adsorcin lineal y una columna larga,
de tal manera que el perfil de concentracin del soluto a la salida de la
columna tambin sea gausiano como el de la teora de platos. El resul-
tado fue obtener una expresin para HETP en funcin de los parmetros
considerados por Lapidus y Amundson para su modelo cintico. Dado
que el modelo de Lapidus y Amundson incluye los efectos de dispersin
axial (difusin molecular y mezclado), resistencia a la transferencia de
masa en la pelcula y al interior del poro, la expresin de van Deemter
considera todos estos efectos en tiempo real.
Una versin reciente (Arnold et a/, 1985) de la expresin de van
Deemter es:
HETP =
1 2
(8
'
47)
donde:
t\ Longitud de mezclado. [L].
DAB' - Coeficiente de difusin del soluto. [L
2
/t].
?/: Tortuosidad del lecho.
En la expresin anterior el coeficiente de dispersin axial E se con-
sidera que est conformado por dos contribuciones: la difusin molecu-
lar en la direccin axial y un trmino de mezclado que es proporcional
a la velocidad, esto es,
E =rjD
AB
+ i v (8.48)
En el caso de cromatografa lquida de molculas de tamao grande
(por ejemplo protenas), el segundo trmino del lado derecho de la
ecuacin (8.47) puede ser despreciado.
Ejemplo 8.5.- Comparacin de los resultados de la teora
de momentos con el modelo de van Deemter.
Demostrar < que para el caso de perfiles de concentracin gausianos la
teora de momentos y la de van Deemter producen resultados idnticos,
462 CAPTULO 8, CROMATOGRAFA POR ELUCIN.
cuando se considera que existe equilibrio sobre la superficie del adsor-
bente (slo existen las resistencias de la pelcula y del poro) y que el
pulso alimentado es de duracin corta.
Solucin:
En el caso de perfiles gausianos se cumple que:
de tal manera que:
HETP =
La expresin anterior conjuntamente con las ecuaciones (8.39),
(8.41), (8.48) y las condiciones particulares:
t
p
= O
A g
conducen a: j
\l Hj J. i )momentos \f * KJi i )van Deemter
La ecuacin de van Deemter (8.47) en su versin ms popular y
simplificada se escribe como:
HETP =A + - + Cv (8.49)
v
donde:
El trmino A es funcin del tamao y uniformidad del adsorbente de
la columna, ya que esto determina la longitud y uniformidad del
mezclado. Las partculas de dimetro pequeo, producen valores
bajos de A.
K
El trmino B se relaciona con la difusin molecular axial. Este trmino
puede ser despreciado en el caso de cromatografa lquida y par-
f ticularmente cuando el soluto es una molcula grande como una
protena.
Si la velocidad superficial en una columna disminuye, el trmino
B/v aumenta, esto significa que al ser mayor el tiempo de re-
tencin hay ms tiempo para que el pulso se disperse por difusin
molecular. Consecuentemente la contribucin de este trmino
tiende a disminuir la eficiencia de la columna; es decir, a incre-
mentar el HETP.
El trmino C representa la dispersin del pulso debida a la resistencia a
la transferencia de masa. Este trmino es funcin de la geometra
de la fase estacionaria, del coeficiente de distribucin del soluto
y de las velocidades de transferencia. Si la velocidad superficial
se incrementa, el trmino Cv se incrementa. Esto significa que a
mayor velocidad superficial en la columna, el tiempo para lograr
el equilibrio es menor. Consecuentemente la contribucin de este
trmino tiende a disminuir la eficiencia de la columna.
En la Figura 8.14 se muestra el efecto de la velocidad superficial en
la columna sobre el HETP, de acuerdo al modelo de van Deemter. Se
observa que existe una velocidad ptima debido a los efectos opuestos
de los trminos B/v y Cv.
Para una columna particular es posible encontrar la ecuacin de van
Deemter efectuando mediciones de HETP a tres velocidades diferentes.
8.4.2 Criterios de Evaluacin Tcnica del Com-
portamiento de las Columnas: Resolucin,
Pureza y Rendimiento
El objetivo de un proceso cromatogrfico puede ser alguno o algunos
de los siguientes: alta purificacin de un componente, anlisis rpido
de un componente o una alta productividad. Cuando el rendimiento de
una operacin disminuye conforme la pureza deseada aumenta, estos
objetivos no pueden lograrse simultneamente.
no-equilibrio
Calidad de empaque
Difusin longitudinal
U
Figura 8.14: Efecto de la velocidad superficial sobre HETP. Fuente:
Janson y Hedman, 1982.
Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright 1982. Todos los derechos reservados.
La teora cromatogrfica permite evaluar el comportamiento de una
operacin mediante el uso de tres criterios:
Resolucin.
Pureza.
Rendimiento.
Resolucin
En la cromatografa por elucin un objetivo puede ser el separar los
componentes de una muestra en forma satisfactoria. La medida del
grado de separacin de dos componentes en una operacin cromatogr-
fica se conoce como resolucin o eficiencia de separacin.
La resolucin de una columna depende de dos factores:
La selectividad de la columna.- Este factor es una medida de la afini-
dad de los solutos por el adsorbente (Figura 8.15 a y b ).
Respuesta
Factor de separacin pobre.
Numera de platos pequefio
c)
Factor de separacin pobr
Nmero de platos grande
_ j
^
<
|
^
^
>X
SS
^
v
^^
\
/
/
/
/
^' A
/
/
^
1*
Factor d separacin bueno
Nmero de platos pequeo
d)
Factor de separacin bueno
Nmero de platos grande
J
\
^
$
|
^
iÔ
o<N
vo
^
\
*
t
t
+
y
j
<. i/s
'
/
/
t
Tiempo
Figura 8.15: Efecto de la selectividad y de la eficiencia sobre la resolu-
cin.
La eficiencia de la columna.- Este factor est relacionado con el grado
de dispersin de los picos (Figura 8.15 c y 8.15 d).
Si se considera la Figura 8.16 una separacin completa de dos picos
puede lograrse cuando las rectas que definen la amplitud de la base de
los picos W', se intersectan abajo del eje t. Puede ser demostrado que
cuando esto sucede:
Rs =
2(
*
Q 2
"*
Q l)
> 2 (8.50)
W =4< r (8.51)
donde ,Rs es la resolucin. Generalmente una Rs =1.5 es satisfac-
toria.
Respuesta
Tiempo
Figura 8.16: Medicin de la resolucin.
Una resolucin adecuada puede ser difcil de obtener cuendo se trata
de resolver una mezcla de componentes con propiedades similares, como
en la separacin de mezclas de protenas. En este caso la mejor forma
para mejorar la resolucin depende del tipo de cromatografa, pero
existen algunas lineas generales como las siguientes:
1. Para incrementar A = t
0
2 t
0
\.
(a) Incrementar la longitud de la columna L.
(b) Aumentar la cantidad de la fase estacionaria.
(c) Mejorar la selectividad, selecionando otra fase estacionaria
u otra fase mvil.
2. Para disminuir el ancho de los picos.
(a) Empacar ms uniformemente la columna y/o disminuir el
tamao de las partculas del empaque.
(b) Optimizar el flujo.
(c) Reducir el tamao de la muestra.
La ecuacin (8.50) puede ser utilizada conj untamente con los mo-
delos cromatogrficos apropiados para analizar este tipo de acciones y
generar las decisiones correspondientes. Por ejemplo, se puede estimar
la longitud necesaria de una columna para alcanzar una determinada
resolucin.
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATO GRAFIO AS 467
Ejemplo 8.6.- Clculo de la resolucin de una columna.
Calcular la resolucin lograda en una columna de filtracin en gel
en la que se separa un anticuerpo de una impureza y se obtienen los
siguientes resultados:
0
( h)
< 7(h)
y
0
Anticuerpo
6.42
0.80
82
Impureza
7.600
0.175
43
Solucin:
Se puede calcular el ancho de las bases de los picos W utilizando la
ecuacin (8.51),
W
l
=4< 7! = (4)(0.80 h) =3.2 h
W
2
=4< r
2
= (4)(0.175 h) =0.7 h
la resolucin se calcula con la ecuacin (8.50),
esta resolucin es demasiado baja.
Pureza
Cuando se tiene una resolucin muy baja debido a propiedades muy se-
mejantes entre los solutos de una mezcla o por cuestiones de productivi-
dad, existe un compromiso entre el rendimiento alcanzable y la pureza
deseada. Entre mayor sea la pureza requerida, menor rendimiento
puede ser obtenido.
Es posible efectuar un anlisis de pureza y rendimiento de columnas,
empleando los modelos revisados. Considerando que en una operacin
cromatogrfica la masa eluda del soluto j de una mezcla, en el intervalo
de t a t est dada por:
SE
3 = / Fyjd t (8.52)
j t
donde:
j Masa del soluto j eluda en el intervalo de tiempo.
F: Flujo de solvente en la columna.
yji Concentracin del soluto j a la salida de la columna.
la pureza del soluto j, PRj, se define como la razn de la masa de
soluto j obtenida en el intervalo de t a t, entre la masa total obtenida
en ese mismo intervalo, es decir:
ti
F
y
d t
PR
j
=
Jt yj
- 8.53)
^=J
tl
Fy,d t
]
donde n es el nmero de solutos presentes.
Rendimiento
El rendimiento de una operacin cromatogrfica puede ser definido
como la cantidad de soluto recuperado en un cierto intervalo, respecto
a la cantidad aplicada en la muestra original.
La masa total de soluto j inyectada a la columna est dada por:
r
= I
Jo
F
yj
d t (8.54)
la proporcin de soluto j recuperada en el intervalo de t a, t o
rendimiento REj puede entonces expresarse como:
SE, f i Fy
3
d t
reo ,,
Jo Fyjd t
Las ecuaciones (8.53) y (8.55) combinadas con los modelos que des-
criben los perfiles de concentracin en las columnas, nos permiten cal-
cular y/o predecir (segn el tipo de modelo) rendimientos y pureza en
columnas.
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATO GRFICAS 469
90-
80-
70-
60-
50-
40-^
30-
20-
10-
0
Anticuerpo
Impureza
10
t(h)
Figura 8.17: Perfiles de concentracin del Ejemplo 8.7.
Ejemplo 8.7.- Pureza y Rendimiento
La Figura 8.17 muestra los prefiles de concentracin del anticuerpo
y la impureza del Ejemplo 8.6. Puede observarse un traslape de los
picos de estas sustancias debido a la baja resolucin de la operacin.
Describir la variacin de la pureza y el rendimiento del anticuerpo
con el tiempo de operacin, si la masa de anticuerpo y la masa de im-
pureza alimentadas a la columna son 1.63 g y 0.45 g. respectivamente
(se usa el subndice 1 para el anticuerpo y el subndice 2 para la im-
pureza).
Solucin:
Combinando las ecuaciones (8.17) y (8.55) se obtiene una expresin
para el rendimiento en funcin del tiempo,
REi =
"
=
1
y
iexp
i
(
^
o
j,
La expresin anterior puede integrarse expresando la integral del
numerador como una diferencia de integrales y utilizando la definicin
de la funcin error, obtenindose:
=-\Erf
2
J
-Erf
t' -
cuando i O la expresin anterior puede aproximarse a:
i o
1 + Erf
La variacin de la pureza con el tiempo de operacin se obtiene
combinando las ecuaciones (8.17) y (8.53),
PRr
'/' Fy
0
i exp [-^l^p-J
d i
+ J
t
' Fyoi exp [-^l^~J
d t
utilizando la definicin de funcin error la expresin anterior puede
expresarse como:
sustituyendo valores en las expresiones desarrolladas se tiene:
f F
1 ILJ\
RE
2
=
pp.
1
2
1
2
1 + Erf [
1 + Erf (
82 RE
l
' -6. 42V
,> / 2(0.8)JJ
' -7. 60 V
,N / 2(0.175)J.
82 RE
l
+ 43
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATO GRAFIO AS 471
o.o
Figura 8.18: Perfiles de pureza y rendimiento del Ejemplo 8.7.
Los resultados sobre los clculos de los rendimientos y la pureza de
anticuerpo se muestran en forma grfica en la Figura 8.18. Se puede
constatar en la figura el hecho de que en una operacin de separacin
generalmente se pueden obtener altas purezas o altos rendimientos, pero
no ambos.
8.4.3 Escalamiento y Optimizacin
El escalamiento de una columna cromatogrfica consiste generalmente
en determinar el diseo de la columna que permita cumplir con una
productividad mayor a la de la columna empleada en la obtencin de
los datos para el el diseo.
En general las tcnicas de escalamiento surgen del reconocimiento
de la imposibilidad del diseo de este tipo de equipo mediante modelos
estrictamente tericos (Gibbs y Lighfoot, 1986).
Son varios los factores a considerar en el escalamiento de columnas
cromatogrficas dentro de los cuales se pueden destacar los siguientes.
1. Objetivo del escalamiento:
Generalmente el objetivo de un escalamiento es incrementar la
productividad. En algunos casos slo se busca incrementar la
produccin.
2. Criterio de escalamiento: Existen varias alternativas no exclu-
yentes que pueden servir de base para realizar el estudio de es-
calamiento como:
- Incrementar el flujo volumtrico a procesar.
- Incrementar la concentracin de la muestra.
- Incrementar el volumen de la muestra.
El incrementar slo el flujo volumtrico, manteniendo la concen-
tracin y el tamao relativo de la muestra, permite conservar la
linearidad del proceso.
Cuando se incrementa la concentracin y/o el volumen de la mues-
tra se produce una condicin de sobrecarga, que produce un perfil
de concentracin no gausiano a la salida de la columna (Figura
8.9). En el caso de muestras ms concentradas generalmente se
producen isotermas no lineales y efectos de interferencia de los
solutos en la adsorcin, que se traducen en una disminucin del
grado de purificacin obtenible. En estos casos no puede ser apli-
cado el concepto de HETP desarrollado para sistemas lineales.
3. Restricciones: El escalamiento adems de cumplir con el objetivo
fundamental de incrementar la productividad (o al menos la pro-
duccin), debe tambin cumplir con las restricciones del proceso
en cuanto a pureza, rendimiento, concentracin del producto y
duracin de cada ciclo.
4. Caractersticas de flujo: El escalamiento de columnas presenta
varios problemas asociados al flujo dentro del lecho:
- El incremento de la longitud de la columna es imposible sin re-
ducir la velocidad de percolacin debido a que generalmente
las cadas de presin de las columnas de laboratorio estn en
el lmite del colapso de los adsorbentes empleados.
- El incremento del dimetro produce problemas de distribuccin
del flujo y de incremento del gradiante de presin por dis-
minucin de soporte por la pared.
La caida de presin en una columna empacada en rgimen laminar
est dada por la ecuacin de Blake-Kozeny (Bird et a/, 1960),
donde v es la velocidad superficial y est dada por la relacin:
4F
(8
'
57)
donde D es el dimetro de la columna.
5, Geometra: Los parmetros bsicos que define la geometra de
una columna y que pueden ser modificados son: c/
p
, D
c
y L.
6. Dinmica de la columna. En el proceso de escalamiento es funda-
mental tomar en cuenta los grupos adimensionales que se derivan
de la expresiones diferenciales que describen los perfiles de con-
centracin en la columna; de particular importancia son el tiempo
t/t
0
y el nmero de unidades de transferencia NTU o de etapas
tericas N.
En el proceso de escalamiento generalmente tambin se busca opti-
mizar la columna fijando criterios de mxima productividad o mnimo
costo.
Es importante distinguir dos mtodos de escalamiento comunmente
empleados en cromatografa:
Mtodo de escalamiento directo.
Mtodo de escalamiento mediante modelos.
Escalamiento Directo
La mayora de los procesos cromatogrficos han sido escalados direc-
tamente de los sistemas analticos de laboratorio (Wang, 1990).
el mtodo de escalamiento directo se parte de un diseo ptimo de-
sarrollado generalmente a nivel laboratorio (puede ser terico) y
se
supone que los fenmenos difusionales no varan dentro del rango de
escalas que se estudia. Este mtodo permite determinar el tamao y
las condiciones de operacin de la escala nueva en forma rpida. Una
limitacin de este mtodo es la escasa informacin que genera sobre los
mecanismos cinticos controlantes.
A continuacin se presenta caso particular de escalamiento directo
con el proposito de ilustrar este mtodo.
Caso de escalamiento directo de un sistema lineal.- Uno
de los enfoques ms utilizados en el escalamiento de columnas cro-
matogrficas, consiste en seleccionar como parmetro de escalamiento
un incremento del flujo de la columna, lo que permite mantener la linea-
ridad del proceso. Generalmente las restricciones son de igual pureza y
rendimiento en ambas escalas (Cowan ti a/, 1987).
Estas restricciones requieren que la dinmica de la columna no cam-
bie. El perfil de concentracin de los solutos a la salida de la columna
debe mantenerse igual en ambas escalas. En este caso lineal los perfiles
gausianos estn dados por la relacin ya conocida,
= y
0
exp
(""O
21
_
N
mantener los perfiles iguales durante el escalamiento, requiere man-
tener iguales ?/
0
, TV y t/t
0
, para cada uno de los solutos en ambas escalas
(escalas 1 y 2).
Si el escalamiento es slo a travs del incremento de flujo, la con-
centraccin mxima de soluto, la cual es funcin de la concentracin
de entrada principalmente, puede considerarse igual en ambas escalas,
o sea y
0l
=y
0i n
donde los subndices I y II se refieren a cada una de
las escalas.
El nmero de etapas cuando slo un mecanismo controla la rapidez
de la adsorcin puede ser expresado como:
N = ^ (8.58)
Asimismo, el tiempo de retencin est dado por:
t
0
=[e + ( l-e)K]- (8.59)
v
Como primer alternativa se puede considerar incrementar Z)
c
, d
p
y L; sin embargo, no es posible hacer este cambio sin alterar el per-
fil de concentracin dado que el valor de N cambia con todos estos
parmetros, independientemente del valor que tome n en la ecuacin
(8.58) o mecanismo controlante de la cintica.
Tambin se puede considerar incrementar D
c
y d
p
, de tal manera
que su razn se mantenga constante; sin embargo esto tambin conduce
a un cambio en el valor de N.
Como tercera alternativa se puede considerar mantener d
p
igual para
ambas escalas e incrementar v y L, de tal manera que la relacin L/v sea
igual en ambas escalas, lo que permite mantener t
0
y N constantes entre
las escalas, en casi todos los casos de un slo mecanismo controlante.
Sin embargo, incrementar simultneamente L y v produce un efecto
dramtico sobre la cada de presin, de acuerdo a lo que establece la
ecuacin (8.56).
La solucin comnmente empleada consiste en usar columnas poco
esbeltas (gordas) con d
p
, L y v iguales a las de la columna de escala la-
boratorio. Esto permite aumentar la produccin (no la productividad),
al aumentar el rea de flujo o dimetro de columna.
En el caso de que en el proceso de escalamiento pudiera disminuirse
el dimetro del empaque utilizado a nivel laboratorio d
p
, es posible rea-
lizar el escalamiento y obtener una mejor resolucin, con una columna
de menor volumen y conservando la misma cada de presin (Wankat
y Koo, 1988).
Para reducir los costos asociados a la inversin inicial en las colum-
nas, es preferible utilizar cada columna en varios ciclos procesando
alcuotas del material inicial, entonces el problema de optimizacin de
la columna escalada se traduce en encontrar el dimetro de columna
que produce el menor costo del producto. De tal manera que el proceso
de escalamiento y el de optimizacin, se desarrollan simultneamente
(Janson y Hedman, 1987).
Ejemplo 8.8.- Optimizacin de una columna.
Con el propsito de separar una protena de sus sales acompaantes,
se utiliza una columna cromatogrfica de 5 cm de dimetro y 15 cm
de longitud, empacada con sefacril S-200 superfino (dextrano). La a-
limentacin consiste en una solucin diluida que contiene una mezcla
de solutos, 80 % de la cual es transferrina y 20 % sales (como NaCl).
Guarido la columna se opera a 10 cm/h se produce una separacin
caracterizada de la siguiente manera (Janson y Hedman, 1982):
Transferrina Sales
t
0
(min)
< j (min)
41
4
88
4
Se pide:
a) Calcular el tiempo necesario para obtener el 90% de rendimient<
de transferrina.
b) Si se desea incrementar la productividad de la columna mante
niendo la misma geometra y suponiendo que la etapa controlante es te
que la desviacin estndar es proporcional a v~, calcular la velocida
de alimentacin mxima y el tiempo del ciclo necesario para obtener u
rendimiento de 99% de transferrina con 98% de pureza (transferrina^
y sales=2; escalas I y II).
Solucin:
a) De acuerdo a la ecuacin desarrollada en el Ejemplo 8.7,
1 + Erf
(
t-t
0\
0.90 = - 1 + Erf
i -41
2 x 4
de tal manera que,
90% =46.1 mi n
b) De acuerdo a las expresiones tambin desarrolladas en el Ejem-
plo 8.7, la pureza de la transferrina en la masa total colectada en un
intervalo de tiempo est dada por:
masa d e transf erri na
PR\ - 7T~j
masa total
( masa d e transf erri na)( RE\)
( masa d e transf erri na]( RE\] -f ( masa d e sal^RE?)
Por otro lado, como a oc t> ~2
?
se pueden desarrollar la siguientes
relaciones:
= (-)*
\vi i j
utilizando la ecuacin (8.59), se obtiene:
t
on
Sustituyendo valores se puede establecer el siguiente sistema de
ecuaciones:
(0.8) ( REu),
!_
2
1
2
12.65
12.65
Erf
| LJf "\
410
880
VJ1
El sistema anterior puede ser resuelto mediante el mtodo de clculo
siguiente:
. Suponer una t?//.
. Calcular cr// y t
on
para ambos solutos.
. Calcular t de la ecuacin de rendimiento de transferrina.
. Calcular el rendimiento de sal.
. Con los datos anteriores calcular la pureza de la transferrina. La
suposicin de v ser correcta cuando sta sea del 98 %.
De acuerdo a lo anterior el resultados es:
v
tl
=93
cm
t = 7.4 mi n
Esto representa aumentar 9.3 veces la velocidad en la columna. La
Figura 8.19 muestra los perfiles de los solutos para el caso base y la
situacin nueva. Los resultados sugieren que a nivel laboratorio la
optimizacin consiste en incrementar la velocidad manteniendo una re-
solucin o pureza adecuada.
El anlisis anterior es vlido, siempre y cuando el mecanismo con-
trolante se mantenga en ambas situaciones. Tambin es importante
hacer notar que para otro tipo de cromatografa la expresin de la
desviacin estndar utilizada en este ejemplo, puede ser diferente.
4.000-
3.500-
3.000-
1>
2.500-
2.000-
1.500-
1.000-
0.500-
0.000
Escala I
Escala I
10 20 30 40 50
t (min)
80 90 100
Figura 8.19: Perfiles de concentracin del Ejemplo 8.8.
Los casos de escalamiento directo no lineal escapan al alcance de este
trabajo pero existen varias publicaciones especializadas que pueden ser
consultadas (Wankat y Koo, 1988).
Escalamiento Mediante Modelos
La mayora de los sistemas cromatogrficos han sido escalados directa-
mente de los sistemas analticos de laboratorio. Este enfoque conduce a
utilizar partculas muy pequeas (5-100 //m) que incrementan el costo
del proceso; an cuando producen buena resolucin, poca dispersin y
tiempos cortos de ciclo . Esto se debe a que las resistencias por difusin
dentro de la partcula y los fenmenos de dispersin son menores con
partculas pequeas.
Estas partculas pequeas no siempre son las ms adecuadas en
un proceso industrial, dado que el objetivo en stos es incrementar la
productividad y no la resolucin de todos los componentes. Por otro
lado, el escalamiento directo conduce a la utilizacin de una fraccin
muy pequea del lecho cromatogrfico, aspecto que tambin impacta el
costo. Las limitaciones del escalamiento directo han conducido a tratar
de incorporar metodologas ingenenles al diseo de las columnas. En
la Figura 8.20 se presenta la metodologa para el escalamiento mediante
el uso de modleos de columnas.
Cuando se utiliza este enfoque, los experimentos que se realizan ms
que tener como objetivo desarrollar una optimizacin de la columna,
estn orientados a la validacin del modelo y a la obtencin de los
parmetros del mismo.
Los modelos desarrollados son utilizados para predecir los perfiles
de concentracin a la salida de la columna, por medio de una simulacin
por computadora, , as como el impacto que sobre los perfiles producen
los cambios en:
- La geometra del sistema: D
c
, L y d
p
.
- La operacin del sistema: Flujo, concentracin, volumen y tamao
de muestra.
- Q umica del sistema: Tipo de eluyente, tipo de adsorbente y tipo de
isoterma.
Mtodo de Operacin
'Concentracin Alimentacin
Rujo
Tamao Partcula
Temperatura
Relaciones de Equilibrio
Coeficientes de T. de Masa
Modelo Cromatografa)
Simulacin
Perfiles de Concentracin
Dinmicos
Tiempo del Cido
Productividad
Figura 8.20: Metodologa para escalamiento y optimizacin de colum-
nas. Adaptada de: Wang, 1990.
vados.
- Modo de operacin.
de tal manera que sea posible obtener un diseo ptimo bajo res-
tricciones de costos, tiempo de ciclo, productividad, pureza y concen-
tracin. Los modelos cromatogrficos presentados en este captulo son
particularmente tiles cuando se trata de seguir este enfoque de esca-
lamiento.
8.5 Sumario
La cromatografa por elucin se utiliza para obtener productos biotec-
nolgicos con un alto grado de pureza. Existen varias formas para
llevar a cabo una operacin cromatogrfica que dependen del tipo de
adsorbente empleado y las condiciones en las que se realiza.
Las operaciones cromatogrficas se desarrollan generalmente en co-
lumnas empacadas fabricadas en diversos tipos de materiales y operadas
tanto a presiones moderadas como a altas presiones.
Las columnas cromatogrficas han sido escaladas principalmente a
partir de columnas de laboratorio, pero existe creciente necesidad de
apoyar el diseo de las columnas mediante el empleo de modelos.
8.6. PROBLEMAS 483
8.6 Problemas
8.1.- El ancho W de un pico es de 50 s y el tiempo de retencin es de
50 mi n. Calcular el nmero de platos tericos de la columna bajo estas
condiciones.
R: 57,600
8.2.- Los tiempos de retencin de los compuestos A y B, son de 800
y 815 5, respectivamente. La columna se puede considerar que tiene
8,100 etapas tericas para ambos compuestos.
(a) Calcular la resolucin para estos compuestos en la columna.
R: 0.42
(b) Suponiendo que los tiempos de retencin son iguales, estimar el
nmero de etapas para obtener una resolucin de 1.
R: 45,500
8.3.- Obtener una expresin para la v ptima y la altura equivalente
de un plato terico (HETP) mnima, a partir de la ecuacin (8.49).
8.4.- Utilizando el modelo de platos tericos y considerando iguales
la altura equivalente de un plato terico para dos solutos que se desea
separar, demostrar que:
a-1 F ..i
Rs - - - - N*
esta ecuacin se conoce como la ecuacin fundamental de la cro-
matografa lineal, donde:
u i
_ K ! -f-
A I
1: Soluto 1
2: Soluto 2
a: Selectividad
k{: Factor de capacidad del soluto 1.
k'
2
: Factor de capacidad del soluto 2.
k' \ Factor de capacidad promedio.
K\: Constante de equilibrio del soluto 1.
K-2' - Constante de equilibrio del soluto 2.
e: Porosidad del lecho. 1
I
i
|
8.5.- En el caso de la cromatografa lquida de alta resolucin puede
considerarse que el ancho de los picos es igual, entonces: W\ W-.
Demostrar que bajo estas condiciones,
donde el subndice 2 corresponde al soluto ms lento.
8.6.- En la separacin de albmina de suero de bovino (ASB) y
mioglobulina (Mg), mediante una columna de laboratorio de cromato-
grafa lquida de alta resolucin (HPLC), se determin que los factores
de capacidad de los solutos son: k
ASB
0.8 y k
Mg
= 1.1.
La altura equivalente de un plato terico para la mioglobulina est
dada por:
6.2 x l(T
5
-M.13u
donde HETP est en metros y v en m/s.
Estimar la resolucin esperada si la columna tiene un dimetro de
7.5 x 10~
3
m y una longitud de 0.6 ni . El volumen de la muestra es de
10~
7
m
3
y la velocidad superficial en la columna es de 2.17 x 10~
4
m/s
Resp. R
s
=1.58
8.7.- Utilizando la expresin del problema 8.4, estimar la resolucin
que se obtiene en una columna de 50 c??i, si en una columna de 20 era la
8.6. PROBLEMAS 485
resolucin obtenida es de 0.8 (considere como nica variable la longitud
de la columna).
R: 1.27
8.8.- Una mezcla contiene 70% de una droga y 30% de una impureza.
Cuando esta mezcla se corre en una columna de laboratorio, los tiempos
de retencin son de 9.7 y 8.7 h y la desviacin estndar de 0.5 y 0.2 /i,
respectivamente.
a).- Calcular el rendimiento de la droga si desea separarse mediante
cromatografa y obtener una pureza del 99%.
b).- Simular los perfiles de concentracin, pureza y rendimiento da-
dos por las condiciones del problema utilizando la computadora.
c).- Simular el efecto de variar la proporcin de soluto a 50:50%
sobre los perfiles de concentracin, rendimiento y pureza.
d).- Repita la simulacin para una proporcin 90:10%
8.9.- Cuando se procesa una mezcla de Lincomicina A y B, en una
columna de partculas de celulosa, se colecta el 2.2%, 15.8% y 50% de
lincomicina A a 600, 650 y 700 litros de elucin, respectivamente. Cal-
cular el volumen para obtener un rendimiento del 95% de lincomicina
A.
R: 780 1
8.10.- Una columna de laboratorio ( Ghose, 1990) de 0.02 m de
dimetro, se empaca con 0.065 Kg de Sephadex G-100 cuyo poder
hidratante es de 0.003 m
3
/Kg de gel seca, producindose un lecho em-
pacado de 100 cm de altura.
La columna se utiliza para separar una mezcla de albmina de suero
de bovino (ASB) de glucosa. El volumen utilizado de muestra es de
2 x 10~
6
ra
3
, el cual tiene una concentracin de ASB de 5 Kg/m
3
y
10 Kg/m
3
de glucosa.
La cromatografa se desarrolla utilizando agua como eluyente. El
volumen de elucin ( V
0
) de la ASB es de 1.05 x 10~
4
m
3
y el de glucosa
de 2.95 x 10~
4
m
3
.
El volumen vaco de la columna( e V] se midi utilizando el polmero
de alto peso molecular dextrano y fue de 1.05 x 10~
4
m
3
(en cro-
matografa en gel donde la cantidad de lquido en los poros de la matriz
es considerable, esta medicin con dextrano no incluye el volumen de
dicho lquido V).
El coeficiente de particin de los solutos A (ASB) y B (glucosa) est
dado por:
donde V
c
es el volumen total del lecho de la columna y K
p
y K
B
son los coeficientes de particin.
El volumen de los poros V puede ser calculado con la expresin:
K = aW
r
donde a es la masa seca de gel y W
T
la capacidad hidratanten de la
gel.
Se desea escalar la operacin de esta columna a una columna de
0.06 m de dimetro y 3 m de lecho manteniendo la relacin de volumen
vaco a volumen total constante (K/ K) =
c
e
? y 1
a
realcin de volumen
de los poros a volumen total constante.
a). Determinar los volmenes de elucin de la ASB y de la glucosa
en la nueva columna.
b). La masa del adsorbente a emplear en la segunda columna.
c). Demostrar que en cromatografa en gel el modelo de van Deemter
conduce a:
_
~
V
c
( l-e)e
p
V ,
Cul es el significado fsico de A'
p
?.
d). Comparar la ecuacin (8.16) con la (8.39) para su uso en cro-
matografa en gel.
a). Resp. ( V
0
)
A
=2.834 x 10~
3
m
3
b). Resp. 1.76 Kg
8.11.- Se desea efectuar un anlisis econmico de una operacin
cromatogrfica, considerando los siguientes parmetros:
S: Costo del adsorbente. \j Ky d e. ad sorbente}.
8.6. PROBLEMAS 487
p: Productividad promedio. [Kg d e prod ucto/Kg d e ad sorbente
ci clo].
n: Duracin del ciclo, [ci clo/h].
t: Tiempo de vida del adsorbente, [h].
CA
:
Impacto del costo del adsorbente sobre el producto.
a). Obtener una expresin del impacto del costo del adsorbente
sobre el costo del producto.
b). Graficar CA vs P para valores de S/nt de 0.1, 0.5 y 1.0, en el
rango de O < P < 0.05
c). En una operacin cromatogrfica el adsorbente tiene un costo
de $10.00//f< 7 y tiene una vida de 2,000 h. La operacin se efecta
de tal forma que se inyecta una muestra cada 2.5 h y la productividad
promedio P es de 0.02 Kg d eprod ucto/Kg d e ad sorbente ci clo.
Estimar el impacto del costo del adsorbente sobre el producto.
c). Resp. CA =$0.625//f < jr d e prod ucto
8.12.- Se desea efectuar un anlisis econmico de una operacin
cromatogrfica, considerando los siguientes parmetros:
S: Costo del adsorbente. [$/Kg d e ad sorbente].
P: Productividad promedio. [Kg d e prod ucto/Kg d e ad sorbente
ci clo].
n: Duracin del ciclo, [ci cloh].
t: Tiempo de vida del adsorbente, [h].
L = nt: N mero de ciclos en la vida del adsorbente.
CT' . Impacto del costo del adsorbente, regenerante y eluyente sobre el
producto. [/Kg].
CA: Impacto del costo del adsorbente sobre el producto. [$/Kg].
CR: Impacto del costo del regenerante sobre el producto. [/Kg].
CE' . Impacto del costo del eluyente sobre el producto. [/Kg].
488 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR
R: Costo del regenerante. [/Kg d e ad sorbente ci clo d e regenera-
ci n].
Lf t' . Ciclos por ciclo de regeneracin.
M: Costo de eluyente. [$/ Kg d e ad sorbente ci clo].
Demostrar que:
8.13.- En la cromatografa de ASB se obtienen los siguientes datos:
v^f HETP ( cm)
0.005 0.12
0.010 0.19
0.015 0.26
Estimar los parmetros A, B, y C de la ecuacin de van Deemter
para la columan empleada.
Resp. A =0.05 cm, B =O, C =14 s
8.14.- En una separacin cromatogrfica se obtiene un pico de he-
moglobina con una concentracin mxima de 0.22 g/l a los 820 s y una
concentracin de 0.10 g/l a los 670 s.
Estimar el nmero de etapas tericas y la altura equivalente de una
etapa terica, si la columna utilizada tiene una longitud de 16.5 cm
Resp. TV = 47 y HETP =0.35 cm
8.15.- En una separacin cromatogrfica de albmina y hemoglobina
se aplica una muestra que contiene un gramo de cada una de estas
protenas, la cual se eluye con un flujo de 5 cra
3
/ram, obtenindose dos
picos con las siguientes caractersticas:
8.6. PROBLEMAS 489
Albmina Hemoglobina
Conc. mxima 0.25 g/l 0.22 g/l
Tiempo de elucin 680 s 820 3
Conc. en un tiempo t 0.11 g/l 0.10 g/l
Tiempo t 600 s 670 s
Calcular el rendimiento y la pureza de la albmina a los:
a). 500 s
b). 600 5
c). 1,200 s
b). Resp. Para albmina RE =0.1 y PR =0.775
8.16.- La porosidad de un lecho medida con azul de dextrano es de
0.4. Cuando se corre albmina en una columna de 16.5 cm de altura y
2.5 cm de dimetro con un flujo de 5 cm
3
/mw su tiempo de retencin
es de 680 s.
Calcular la porosidad interna del empaque de la columna para esta
protena.
Resp. i =0.5
8.17.- El valor experimental para la difusin en el poro en una matriz
de agarosa es de 3.9 x 10~
7
cm
2
/s. Comparar este valor con el que se
obtiene mediante la correlacin para este tipo de geles (Boyer y Hsu,
1992):
D
p
=8.34 x 10'
10
(-7777^ 1 exp [-0.1307 (M
1/3
+ 1245) C
/2
1
V uM
1
/
3
/ L
v
'
J
J
donde:
Ai: Peso molecular de la mioglobina= 16890 Da.
T: Temperatura=293 K.
//: Viscosidad del solvente=0.01 g/cm s
Cf . Concentracin de polmero en la partcula de adsorbente^
0.04 *g/cm?
8.7 Bibliografa
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Captulo 9
Precipitacin
9.1 Introduccin
Algunos productos biotecnolgicos presentan solubilidades que varan
con la temperatura, el pH, la fuerza inica y con la constante dielctrica
del medio. Esta propiedad puede ser utilizada para concentrar y pu-
rificar estos productos mediante la operacin de precipitacin.
En la precipitacin se concentra el soluto de una solucin convirtien-
dolo en slido mediante la accin del agente precipitante. Tericamente
la precipitacin debe producir un soluto concentrado y puro, por lo que
es una operacin que se usa con frecuencia al inicio de un proceso de
bioseparacin. Los agentes precipitantes seleccionados no deben pro-
ducir desnaturalizacin del soluto y deben proveer una mayor estabili-
dad del soluto en el precipitado que en la solucin.
La precipitacin de protenas y la subsecuente recuperacin del pre-
cipitado, son de las operaciones ms importantes para la recuperacin
y purificacin de protenas tanto a nivel laboratorio como a escala in-
dustrial.
Las ventajas de usar la precipitacin para la concentracin y purifi-
cacin de solutos S O D . entre otras, las siguientes:
1. Es una operacicn que se adapta fcilmente a gran escala.
2. Puede realizars- en forma continua.
3. El equipo que
;
- utiliza es sencillo.
493
494
CAPTULO 9. PRECIPITACIN
Tabla 9.1: Pincipios de la precipitacin de protenas.
Principio Agente Precipitante
D isminucin de la solubilidad
D esnaturalizacin selectiva.
Afinidad
S ales (S ulfato de Amonio)
pH (Precipitacin isoelctrica)
S olventes (etanol)
Polmeros no inicos
Ligandos
4. S e dispone de diversos agentes precipitantes y en muchos casos
stos son baratos.
Este captulo se enfoca a la precipitacin de protenas debido a su
gran inters biotecnolgico. En la seccin 9.2 se revisan los fundamentos
de la precipitacin incluyendo algunos mtodos para la precipitacin de
protenas. En la S eccin 9.3 se hace mencin de los equipos utilizados
en esta operacin y en la S eccin 9.4 se presentan algunos aspectos del
diseo de dichos equipos.
9.2 Fundamentos
La precipitacin de protenas puede realizarse empleando diferentes
principios (Tabla 9.1).
La precipitacin por disminucin de la solubilidad de la protena de
inters se efecta por medio de un agente precipitante. Este puede ser
una sal neutra como el sulfato de amonio; un agente que altere el pH de
la solucin"; un solvente orgnico como etanol, acetona o ter; o algn
polmero como el polietilenglicol.
En la desnaturalizacin selectiva se producen cambios en la confor-
macin de las protenas contaminantes con el propsito de aislar en la
solucin la protena de inters, utilizando como agentes precipitantes
temperatura, pH y algunos solventes orgnicos.
Un tipo reciente de precipitacin lo conforman los mtodos que se
basan en la capacidad que tienen las protenas de formar complejos
mediante la interaccin de los sitios activos de stas con ligandos es-
pecficos.
En esta seccin se revisan los tres mtodos bsicos de precipitacin:
Precipitacin por D isminucin de la S olubilidad.
Precipitacin por D esnaturalizacin S electiva.
Precipitacin por Afinidad.
9.2.1 Precipitacin por Disminucin de la Solu-
bilidad
El hecho de que las protenas sean molculas anfotricas se debe a que
sus superficies (Figura 9.1) presentan regiones hidrofbicas, y regiones
hidroflicas cargadas ya sea positiva o negativamente.
D ebido a su naturaleza anfotrica cuando una protena se encuentra
en solucin acuosa produce complejas interacciones con la solucin que
la rodea. Particularmente, cuando se agrega un agente precipitante a la
solucin, las protenas que presentan mayor hidrofobocidad (por contar
con mayor cantidad de aminocidos hidrofbicos en su superficie) pre-
cipitan ms fcilmente que las de menor hidrofobocidad. En el primer
caso las protenas tienen una baja solubilidad y en el segundo caso una
alta solubilidad. D e lo anterior se desprende que la estructura de la
protena determina su solubilidad.
La protena permanece en solucin cuando termodinmicamente es
ms favorable estar rodeada por el solvente que estar en un agregado
con otra protena formando una fase slida. La protema puede insolu-
bilizarse ya sea cambiando las caractersticas de su superficie, o cam-
biando el solvente que la rodea. Como el cambiar las caractersticas de
la superficie de la molcula puede impl icar cambiar la protena misma,
496 CAPTULO 9. PRECIPITACIN
wm Regiones
hidrofbicas
Figura 9.1: Esquema de la distribucin de carga y de zonas hidrofbicas
en una molcula de protena tpica.
generalmente se opta hacer cambios en el solvente que alteren la solu-
bilidad de la protena.
Los mtodos utilizados para la precipitacin de protenas que se
revisan en esta seccin y que estn basados en la disminucin de la
solubilidad por alteracin del solvente son:
- Precipitacin con sales.
- Precipitacin isoelctrica.
- Precipitacin con solventes.
- Precipitacin con polmeros no inicos.
Precipitacin con Sales
Una de las tcnicas ms ampliamente utilizadas para la purificacin de
enzimas es la llamada precipitacin por insolubilizacin por salado o
"salting out". S e realiza agregando altas concentraciones de sales a la
solucin en le que se encuentra la protena para producir su precipita-
cin.
2, FUNDAMENTOS 497
Insolubilizacin
por salado
[Sal]
Figura 9.2: Efecto de la concentracin de sal en la solubilidad de
protenas: Regiones de solubilizacin por salado e insolubilizacin por
salado.
La Figura 9.2 muestra una curva caracterstica de la solubilidad
de una protena como una funcin de la concentracin de la sal en el
medio. En esta figura se pueden apreciar dos regiones, la primera del
lado izquierdo de la figura, donde la solubilidad de la protena se incre-
menta con la concentracin de la sal, llamada regin de solubilizacin
por salado o "salting-in", y la otra donde la solubilidad de la protena
disminuye a medida que la concentracin de sal aumenta llamada regin
de insolubilizacin por salado o "salting out". El punto mximo de esta
curva es caracterstico de cada tipo de protena.
Mecanismo: Una descripcin simplificada del mecanismo de insolu-
bilizacin por salado est basada en el hecho de que la adicin de las
sales elimina el agua de la protema hidratada, dejando las regiones
hidrofbicas en libertad de combinarse intennolecularmente (Glatz,
1990). Aquellas protenas que presentan mayor nmero de regiones
hidrofbicas sobre su superficie, forman agregados y precipitan ms
498
Figura 9.3: O rdenamiento de las molculas de agua frente a las regiones
hidrofbicas de la molcula de protena.
rpidamente que aquellas que presenten pocas regiones hidrofbicas.
D ebido a esta propiedad hay protenas que pueden permanecer en
solucin a altas concentraciones de sal.
Una descripcin ms detallada de la precipitacin con sales es la
siguiente (S copes, 1994): Cuando las molculas de protena estn en
solucin las molculas de agua presentan un ordenamiento como el que
se muestra en la Figura 9.3. Este ordenamiento lo produce el contacto
entre regiones hidrofbicas de la protena con la solucin acuosa. Este
ordenamiento es inestable termodinmicamente comparado con el que
presentan las protenas sin solvatar conjuntamente con las molculas
de agua libre.
S i la precipitacin de protenas utilizando sales se presenta como
una serie de tres procesos, de tal forma que en el primer proceso se
considere la disolucin de la protena en agua, esta disolucin puede
ser representa por:
P + nH
2
O -> P nH
2
O (9.1)
donde nH
2
O representa el agua ordenada alrededor de los residuos
hidrofbicos de la protena P (el proceso tiene una AS y una AG
negativas y por lo tanto una A// tambin negativa).
En el segundo proceso que es hipottico, se considera a dos molcu-
las de protena en disolucin que podran unirse al interactuar a travs
de sus residuos hidrofbicos. D e esta unin se liberara agua por medio
de la siguiente reaccin:
P
ni
H
2
0+ P' n
2
H
2
O -+(P- P') + (ri! + n
2
)H
2
O (9.2)
donde (P P') representa el agregado de protena que puede ser
formado. En este segundo proceso se tiene que A5 es grande y positiva,
el cambio en la entalpia se espera que sea aproximadamente el inverso
del que presenta el proceso de la ecuacin (9.1). A (7 puede ser pequeo
y su signo depende de la magnitudes de AS
0
y A//. AG a bajas
concentraciones de sal ser positiva para una protena soluble en agua.
Puesto que la protena es soluble no ocurre el agregado dado por la
ecuacin (9.2).
En el tercer proceso se agrega una sal a la solucin, las molculas
de agua liberadas de acuerdo al proceso hipottico de la ecuacin (9.2)
son atrapadas por la sal, se producen agregados de protena y stos
precipitan. Esto es:
(AB)
ml
+ (ri! + n
2
)H
2
O -> A+-
ni
H
2
O + B' n
2
H
2
O (9.3)
para esta reaccin A// es positiva. El proceso completo puede
describirse de la siguiente manera:
P-P' +(
ni
+ni)H
2
0 +(AB)
aa
i-* (9.4)
P - P' + A+
ni
H
2
O 4- B~ n
2
H
2
O (9.5)
La Figura 9.4 muestra un esquema del efecto de una sal en la preci-
pitacin de protenas (insolubilizacin por salado) basado en el proceso
descrito anteriormente.
500
+ Sal
Solucin
salina
(Agregado
que
Precipita)
Figura 9.4: Esquema de la precipitacin de protenas por insolubi-
lizacin por salado.
Ecuacin de la Precipitacin con S ales: El mecanismo de pre-
cipitacin descrito anteriormente proporciona una explicacin para la
precipitacin de protenas por insolubilizacin por salado, sin embargo
la teora de este fenmeno an est en desarrollo. D ebido a lo anterior
los modelos de precipitacin son de carcter emprico. Uno de los ms
ampliamente utilizados es el de Cohn. En este modelo la solubilidad
de la protena est dada por:
log S = A m[conc. de sal] (9.6'
la ecuacin (9.5) es la ecuacin de una recta con pendiente m y ordenada
al origen A. En esta ecuacin:
S: S olubilidad de la protena a un valor dado de concentracin salina
A: Constante que depende fuertemente del pH y la temperatura
Esta constante usualmente toma un valor mnimo en el punt(
isoelctrico, es caracterstica de cada protena e independient<
del tipo de sal.
m: Pendiente de la curva de insolubilizacin por salado. Esta e;
independiente del pH y de la temperatura, pero vara con el t i p<
de sal y de protena. Las sales que contienen aniones polivalente
tales como sulfates y fosfatos tienen valores de ra mayores qui
las sales univalentes. Los cationes polivalentes como el calcio o e
magnesio disminuyen los valores de m.
o -
TJ
1 -H
-2-
50
2.0
60
2.4
70 % Sat.
2.8 M
Figura 9.5: S olubilidad de aldolasa de msculo de conejo a pH 7.0 en
solucin de sulfato de amonio: (o), solubilidad de la enzima pura; (-f)
solubilidad en una mezcla de enzimas de msculo de conejo: aldolasa,
piruvato kinasa, gliceraldehido fosfatasa deshidrogenasa y lactato deshi-
dogenasa en proporciones 3:3:3:1. Fuente: S copes, 1994.
Los datos experimentales que se presentan en la Figura 9.5 permiten
apreciar el grado de ajuste del modelo dado por la ecuacin (9.5) para
dos casos, el de una enzima pura y el de una mezcla de enzimas. S e
observa para este ltimo caso una ligera desviacin respecto al compor-
tamiento terico.
En la Figura 9.6 se muestra otro ejemplo experimental de precipi-
tacin de protena que obedece la ecuacin (9.5) (la escala de las orde-
nadas es logartmica). En esta figura se observa que el comportamiento
lineal depende de la concentracin inicial de la enzima.
Naturaleza' de la S al: La naturaleza de la sal que se ut i l i z a en el
proceso descrito por la ecuacin (9.3) es un aspecto muy importante
502
E 10
T3
'E
D
'
1 1- 1
0.5-
0.1
Fuerza inica ( moles/1)
4 5 6
30 40 50
% de saturacin
60
Figura 9.6: Efecto de la concentracin de enzima en la insolubilizacin
por salado de fumarasa por sulfato de amonio a 6C. Concentraciones
iniciales de enzima (unidades/mi): (A) 5.4; (o) 15.2; ( + ) 25.2. Adap-
tada de: Bell etal, 1983
que debe considerarse. Las sales que producen enlaces e interactan
directamente con la protena tienen efectos desestabilizadores. Las
sales que producen mejores resultados, esto es, una mayor precipita-
cin de la protena, son aquellas que producen deshidratacin de las
regiones hidrofbicas y fomentan la hidratacin de las regiones polares
de la protena, sin interaccionar directamente con sta. Existen reglas
heursticas para seleccionar la sal ms adecuada para un proceso de
precipitacin, algunas de ellas son las siguientes:
1. Los aniones son ms efectivos en el siguiente orden (S eries de
Hofmeister):
citrato'
3
> tartato'
2
> SO'
2
> F~ > IO^ > H
2
PO~ >
CH
3
COO- > Cl~ > C/03 > Br~ > N0~ > CIO~ > I~
2. Los cationes son efectivos en el siguiente orden:
NH+> K
+
> Na+
3. S eleccionar una sal que sea barata debido a las altas concentra-
ciones que requiere el mtodo.
4. S eleccionar una sal que produzca un precipitado cuya densidad
sea diferente a la de la solucin para facilitar su separacin.
5. Aadir la sal en forma slida y no como solucin, para minimizar
la dilucin.
Ejemplo 9.1.- D eterminacin de la solubilidad de piruvato
quinasa de msculo de conejo.
En un experimento de precipitacin de la enzima piruvato quinasa
con sulfato de amonio a pH 7, se obtuvieron los siguientes resultados
(S copes, 1994):
04
D ato
No.
1
2
3
4
S
(mg/ml)
0.079
0.316
1.258
3.162
Concentracin
sulfato de amonio (M)
2.60
2.50
2.37
2.24
a). D eterminar los parmetros de la ecuacin de solubilidad A y m.
b). Calcular la solubilidad de la enzima para una concentracin
!.34 M de sulfato de amonio.
Solucin:
a). D e acuerdo a la ecuacin (9.5) la solubilidad de la enzima est
lada por:
log S = A m[conc.salina]
donde A es la ordenada al origen y m es la pendiente de la curva.
Para determinar los valores de los parmetros de la ecuacin ante-
rior, los valores experimentales se ajustan por mnimos cuadrados y se
abtiene que A = 10.540 y m = 4.43. La Figura 9.7 muestra la grfica
correspondiente.
La ecuacin de solubilidad para la enzima piruvato quinasa est
dada por:
logS " = 10.540 4.43 x [conc.salina]
b). S ustituyendo el valor de la concentracin salina en la expresin
anterior, se tiene que la solubilidad de la enzima a una concentracin
2.34 M de sulfato de amonio es:
S = 1.4918 mg/ml
Precipitacin Isoelctrica
O tra tcnica para precipitar protenas se basa en la disminucin de su
solubilidad en el punto isoelctrico.
-2 -
2.0 2.4
70 % saturacin
2.8 M
Figura 9.7: Variacin de la solubilidad de la enzima piruvato quinasa
en funcin de la concentracin de sulfato de amonio. Fuente: S copes,
1994.
Mecanismo: Las protenas por su naturaleza anfotrica presentan
una carga neta negativa a pH altos y una carga neta positiva a pH
bajos. Existe un pH llamado pH isoelctrico al cual la carga neta de la
protena es cero. A este pH la molcula es incapaz de desplazarse en
un campo elctrico.
En la Figura 9.8 se muestra el tipo de interacciones que se presentan
entre molculas cargadas:
- Cuando la protena se encuentra a un pH diferente de su pH isoelc-
trico, las molculas proteicas poseen una carga elctrica neta del
mismo signo. D ebido a esto existe una repulsin electrosttica
entre las molculas ocasionando que su solubilidad se incremente.
- Las atracciones electrostticas son bloqueadas por pequeos agrega-
dos de molculas.
- En punto isoelctrico el efecto de las fuerzas electrostticas entre las
protenas es casi nulo. En estas condiciones la solubilidad de la
protena es mnima, y en consecuencia las molculas de protena
tienden 'a unirse y a precipitarse. A este tipo de precipitacin se
le llama precipitacin isoelctrica.
506
Baja interaccin * +
f \ en el punto
isoelctrico
Figura 9.8: Representacin esquemtica del efecto de las fuerzas elec-
trosttica sobre la protena: a), atraccin, b). repulsin, c). atraccin
nnima a pH isoelctrico.
La Figura 9.9 muestra una curva tpica de la variacin de la can-
;idad de protena no precipitada con respecto al pH. En esta figura
D uede observarse que existe un pH al cual la fraccin de protena no
precipitada es mnima, ste es el pH isoelctrico.
Cada protena tiene un pH isoelctrico caracterstico por lo que la
precipitacin isoelctrica puede utilizarse como una operacin de pu-
ificacin de protenas. S in embargo, cabe hacer notar que hay algunas
)rotenas como las globulinas, que presentan una solubilidad conside-
able an cuando se encuentren en su pH isoelctrico. En la Tabla 9.2
e muestran pH's isoelctricos de algunas protenas.
S eleccin del agente precipitante. La precipitacin isoelctrica
:omunmente se realiza a pH' s cidos, debido a que los cidos son baratos
r varios de ellos como el fosfrico, clorhdrico y sulfrico son aceptables
:n productos alimenticios. La principal desventaja de usar cidos es su
>otencial de producir daos irreversibles a la protena.
.2. FUNDAMENTOS 507
0.8
0.6
0.4
0.2
pH
7
igura 9.9: Efecto del pH sobre la concentracin de .protena de soya
jue permanece en solucin, expresada como una fraccin de la concen-
.racin inicial del extracto acuoso. Fuente: Bell et al, 1983.
leproducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright 1983. Todos los derechos reservados.
508
Tabla 9.2: pH' s isoelctricos de algunas protenas.
Protena
Pepsina
O voalbmina
S eroalbmina
Ureasa
(3 -Lactoglobulina
71 - Globulina
Hemoglobina
Mioglobina
Ribonucleasa
Lisozima
pH
~ 1.0
4.6
4.0
5.0
5.2
6.6
6.8
7.0
9.6
11.0
Precipitacin con Solventes
La precipitacin de las protenas de una solucin tambin puede reali-
zarse mediante la adicin de un solvente orgnico ligeramente polar.
Mecanismo: El agua se caracteriza por su alta constante dielctrica
(Tabla 9.3), lo cual significa que los iones en solucin acuosa presentan
interacciones ms dbiles que en otros medios.
Cuando se agrega un solvente orgnico como etanol o acetona, a
una solucin acuosa de protenas (a un pH y temperatura dados), se
producen agregados de molculas proteicas que tienden a precipitar.
Este efecto se debe principalmente a que el solvente presenta una cons-
tante dielctrica menor que la del agua, lo cual produce un incremento
en las fuerzas de atraccin entre cargas opuestas y una disminucin en
el grado de ionizacin de los radicales de la protena, y en consecuencia
una disminucin de la solubilidad de sta.
O tra forma de explicar la precipitacin por solventes (Figura 9.10)
consiste en considerar un desplazamiento global del agua por el sol-
vente, conjuntamente con una inmovilizacin parcial de las molculas
2. FUNDAMENTOS 509
Tabla 9.3: Constantes dielctricas de algunos lquidos a 20(7.
Lquido
Agua
Metanol
Etanol
Acetona
Benceno
Hexano
D
80.0
33.0
24.0
21.4
2.3
1.9
; agua por la hidratacin del solvente. El solvente puede desplazar las
olculas ordenadas de agua de las regiones hidrofbicas estimulando
precipitacin de la protena.
D ebido a que la influencia de la constante dielctrica es muy sensible
la temperatura, este tipo de precipitacin debe trabajarse a tempe-
,turas bajas. Por ejemplo, la precipitacin de protenas de plasma
imano utilizando etanol, se lleva a cabo a temperaturas tan bajas
uno 10
0
(7. Trabajar con temperaturas por arriba de 10C provoca
jsnaturalizacin de la protena.
cuacin de la precipitacin con S olventes: La expresin que
tlaciona el cambio en la solubilidad de una protena en su punto
oelctrico con un cambio en la constante dielctrica del medio es una
cpresin emprica (Bell et a/, 1983) que est dada por:
log S = log S
0
-f (9.7)
donde D
s
es la constante dielctrica de la mezcla solvente-agua,
lisma que vara dependiendo de la cantidad de solvente agregada; K
> una constante que toma en cuenta la constante dielctrica original
el medio acuoso. S
0
es la solubilidad extrapolada.
eleccin del solvente: La mayor desventaja de la precipitacin con
)lventes es la desnaturalizacin que puede suf r i r la protena por accin
510
Solvente orgnico
Regin hidrofbica
Figura 9.10: Representacin esquemtica de las interacciones electros-
tticas de agregacin entre las protenas en presencia de un solvente
orgnico. Fuente: S copes, 1994.
Reproducida con el penniso de Springer-Verlag. Copyright 1994. Todos los derechos reservados.
del solvente, de tal manera que es importante seleccionar adecuada-
mente ste. D ebe tenerse muy en cuenta la flamabilidad del solvente
principalmente cuando se trabaja a gran escala, ya que algunos de e-
llos como los alcoholes son altamente inflamables y el uso seguro de los
mismos ocasiona incrementos en los costos.
Algunos factores que deben considerarse en la seleccin del solvente
son:
El solvente debe ser completamente miscible en agua.
No debe reaccionar con las protenas.
D ebe ser un buen agente precipitante.
D ebe ser seguro.
Precipitacin con Polmeros no Inicos
La precipitacin de protenas tambin puede realizarse utilizando po-
lmeros neutros como el polietilenglicol (PEG) en lugar de sales o sol-
ventes. D ichos polmeros de elevado peso molecular son solubles en
agua y sus soluciones presentan viscosidades moderadas.
Mecanismo: El mecanismo por el cual ocurre la precipitacin cuando
se utilizan estos polmeros no est claramente establecido, sin em-
bargo existen dos modelos que permiten una buena comprensin de
este fenmeno. Los modelos desarrollados por O gston y Laurent (Clark,
1989) conducen a una ecuacin de solubilidad de la misma forma que la
ecuacin (9.5), y sugieren que los polmeros excluyen a las protenas de
parte de la solucin y reducen la cantidad efectiva de agua disponible
para su solvatacin.
El modelo de O gston se basa en la teora termodinmica y con-
cluye que los sistemas (protena en solucin acuosa-polmero) pueden
ser explicados en trminos de los coeficientes de interaccin protena-
polmero, y protena-protena de las especies presentes.
El modelo propuesto por Laurent se basa en un mecanismo de ex-
clusin geomtrica de regiones hidratadas de la protena por el polmero.
El modelo de Laurent (Juckes, 1971) considera, a la protena como una
esfera y al polmero como un cilindro, supone que la protena es incapaz
de distribuirse dentro del polmero y, por lo tanto, que la solubilidad
(S) de la protena es proporcional slo al volumen disponible (V ) dado
por:
V
d
= exp [-7r/(r
a
+ r
p
)
2
] (9.8)
donde:
r
s
: Radio de la molcula de protena. [//].
r
p
: Radio del cilindro del polimero. [L].
1 : Longitud total de la molcula de polmero por unidad de volumen
[i].
Considerando que el volumen total (V
t
) es igual al volumen dispo-
nible (Vd) ms el volumen excluido (K), el volumen excluido por peso
del polmero (W) est dado por:
|= 1(1 - 10-
KC
) (9.9)
donde: C es la concentracin del polmero y
/ i \ 3
2.303 V r
p
)
donde v es el volumen parcial especfico del polmero,
la fraccin de volumen excluido V
e
> y la fraccin de volumen dispo-
nible Vd> estn dadas por las siguientes expresiones:
VO = 1 - 10
-KC
como la solubilidad de la protena es proporcional a la fraccin de
volumen disponible:
= x
FUNDAMENTOS 513
donde k es una constante de proporcionalidad. La ecuacin anterior
de ser escrita en forma ms conveniente como:
l ogS ^l ogk- KC
o bien como:
l ogS ^X- KC (9.10)
que es la ecuacin de una recta con pendiente K y ordenada en el
jen X.
El uso de la ecuacin (9.9) proporciona un resultado similar (Juckes,
1) al que se obtiene utilizando el volumen disponible expresado en
:cuacin (9.7). La ecuacin (9.9) es equivalente a la ecuacin corres-
idiente a la precipitacin por insolubilizacin por salado.
El modelo de O gston que se deriva de una simplificacin termodi-
nica establece que la protena permanece en solucin siempre que
potencial qumico en solucin sea menor que su potencial en la fase
icipitada. Considera que el potencial qumico de la protena //
t
en
enca de un polmero, est dado por:
pi = f
0
. + R!T(lnm + c
t
-m + c ,-mj) (9.11)
donde:
Protena
Polmero
: Es el potencial qumico de la protena en el estado estndar
: Es la constante de los gases ideales
': Es la temperatura absoluta
til Es la molalidad de la protena
ij\ Es la molalidad del polmero
: Es el coeficiente de interaccin protena-protena
514 CAPTULO 9. PRECIPITACI1
Ciji Es el coeficiente de interaccin protena-polmero
Cuando la molalidad del polmero rrij se incrementa, el potencia
qumico se eleva y el sistema reacciona insolubilizando protena inician
dose la precipitacin. D espus de sto el potencial permanece constan
te.
En un sistema polietilenglicol y protena en solucin acuosa, en e
que solamente las interacciones polietilenglicol-protena y protena
protena son significativas, la ecuacin (9.10) puede ser escrita corn
(Foster et al, 1973):
(9.12
donde S es la solubilidad de la protena, C la concentracin d
polietilenglicol, / el coeficiente de interaccin protena-protena y a c
coeficiente de interaccin protena-polietilenglicol. La ecuacin (9.11
puede ser rearreglada en forma ms conveniente como:
(9.13
donde:
RT
En este sistema puede suponerse que el trmino f S es mucho m
pequeo que In5 entonces la ecuacin (9.12) puede ser escrita como:
\nS = X-aC (9.14
que resulta ser anloga a la ecuacin de insolubilizacin por saladc
La ecuacin (9.13) puede ser utilizada para calcular la solubilidad d
la protena a diferentes concentraciones del polmero.
La Figura 9.11 muestra el comportamiento de la solubilidad de 1
alcohol deshidrogenasa en funcin de la concentracin de PEG, a de
niveles de concentracin de la enzima. S e puede apreciar que la cor
centracin de PEG requerido para reducir la solubilidad depende de 1
concentracin de enzima. El grado de ajuste del modelo depende de 1
concentracin de la enzima, de tal manera que cuando la concentrado
de la enzima es alta es necesario considerar en la ecuacin el trmin
de interaccin protena-protena f S para un mejor ajuste.
p.2. FUNDAMENTOS 515
1.5-
1.0-
0.5-
1.5-
1.0-
0.5-
6 10 14 6 10 14
Concentracin de polietilenglicol ( % w/v)
Figura 9.11: Relacin entre la solubilidad S de la alcohol deshidroge-
nasa y la concentracin C de PEG a dos concentraciones de la enzima:
() 8 mg/ml; (o) 75 mg/ml. a) log (S) vs C, b) log (S) + f S vs C.
Fuente: Foster, et al, 1973.
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Lie. Copyright 1973. Todos los derechos reser-
vados.
S eleccin del Polmero: Es importante seleccionar adecuadamente
el polmero que se utilice como agente precipitante. Varios tipos de
polmeros pueden ser efectivos en la precipitacin de las protenas el
incoveniente es que algunos pueden generar una alta viscosidad que 5
dificulta su manejo.
El polietilenglicol es un polmero disponible en varios grados de ''
polimerizacin y presenta una viscosidad moderada. El polietilenglicol
de peso molecular 4000 o mayor es ms efectivo en la precipitacin de
protenas que el de bajo peso molecular. S e ha observado tambin (Bell
et a/, 1983) que se requieren bajas concentraciones de polietilenglicol
para precipitar protenas de alto peso molecular, mientras que para
precipitar protenas de bajo peso molecular las concentraciones deben
ser mayores.
Una ventaja adicional de la precipitacin con polmeros no inicos
es que stos estabilizan la protena y permiten realizar la precipitacin
a temperatura ambiente. Adems, a diferencia de la precipitacin por ;
salado en la cual debe eliminarse la sal antes de seguir con cualquier i
operacin de fraccionamiento por intercambio inico, los polmeros no ]
inicos generalmente pueden ser eludos durante el paso de la protena I
por un intercambiador inico.
9.2.2 Precipitacin de Protenas por Desnatura-
lizacin Selectiva
Los mtodos de precipitacin por disminucin de la solubilidad son
efectuados a condiciones moderadas de tal manera que la protena de
inters no se desnaturalice.
S i la protena que se desea purificar presenta estabilidad en condi-
ciones extremas de temperatura, pH, o en solventes orgnicos, puede
utilizarse esta propiedad en las primeras etapas del proceso de purifi-
cacin sujetando a la solucin de protenas a estas condiciones extremas,
de tal manera que se eliminen por desnaturalizacin las protenas con-
taminantes y se obtenga una buena recuperacin de la protena deseada.
El objetivo de la desnaturalizacin selectiva es crear las condiciones
en las cuales la protena de inters no se desnaturaliza o su desnatura-
lizacin es mnima.
g.2. FUNDAMENTOS 517
D esnaturalizacin por Temperatura
En general las protenas son muy sensibles a la temperatura. S in em-
bargo, hay protenas que se mantienen estables a temperaturas altas.
Cuando esto sucede, puede usarse la temperatura para desnaturalizar
y precipitar protenas contaminantes y aislar la protena de inters.
El proceso de desnaturalizacin de la protena por efecto de la tem-
peratura puede ser descrito como un proceso de primer orden de acuerdo
a la siguiente expresin:
= -k[P] (9.15)
donde:
[P]: Concentracin de protena disuelta. [M/L
3
].
t: Tiempo, [t].
k: Velocidad especfica de desnaturalizacin. [t~
1
].
La dependencia del proceso de desnaturalizacin con la temperatura
est dada por:
(9-16)
de tal manera que la influencia de la concentracin de protena y la
temperatura sobre el cambio en la concentracin est dado por:
P] (9.17)
donde:
k
0
: Constante caracterstica. [t~
l
],
E: Energa de activacin de la desnaturalizacin. [KJ /mol}.
R: Constante de los gases ideales. [KJ /mol K}.
518
1-s
45 50 55
Temperatura (C )
Figura 9.12: D iagrama terico de protena que permanece estable des-
pus de 10 min de incubacin, con E 400 kj rao/"
1
. Fuente: S copes,
1994.
Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright 1994. Todos los derechos reservados
Las protenas tienen energas de activacin relativamente altas de ta
manera que presentan una variacin muy significativa de la velocidac
de desnaturalizacin con la temperatura. El mecanismo de desnatu
ralizacin puede involucrar varios pasos, lo importante es determina;
cual es la energa de activacin del paso ms lento o controlante. Po;
regla general el primer paso es el ms lento e involucra el rompirnient<
de los enlaces que le dan la conformacin a la protena. La Figura 9.1^
muestra un diagrama terico del porcentaje de protena que permanec
estable despus de 10 minutos de incubacin, cuando la energa d<
activacin es de E 400 kj mol~
l
.
La Figura 9.13 muestra un esquema terico de las posibles curva
de desnaturalizacin para diferentes enzimas. Cuando la enzima d>
inters es la P5, siendo sta estable a temperaturas de hasta 58, si L
solucin se calienta a 57, se desnaturalizan completamente las enzima
Pl y P1 - y en grado substancial la P3 y la P4. Esto significa qu
es posible seleccionar una temperatura, que produzca por un lado 1
2. FUNDAMENTOS 519
100-
1-s
50-
25-
40 45 50 55 60
Temperatura (C )
'igura 9.13: Esquema terico de las posibles curvas de desnaturaliza-
in por temperatura de diferentes protenas. Fuente: scopes, 1994.
lesnaturalizacin completa de una enzima y por otro permita que otra
>ermanezca estable.
La precipitacin con temperatura puede ser riesgosa debido a que
os daos que se ocasionen a la enzima de inters son irreversibles. La
elucin se calienta hasta una temperatura dada, se mantiene por un
)erodo de tiempo a dicha temperatura y enseguida se enfria rpida-
nente. Por lo tanto, se requiere contar con sistemas de enfriamiento
idecuados, sobre todo en tanques agitados, para lograr bajar adecuada-
nente la temperatura y evitar as que sta pueda daar a la protena de
nters. Es conveniente realizar el calentamiento en presencia de sulfato
le amonio en la solucin, debido a que ste estabiliza las protenas e
nhibe la actividad de las proteasas, que como es sabido se incrementa
:on la temperatura.
Ejemplo 9.2.- Cintica de desnaturalizacin .
La desnaturalizacin de una protema tiene una energa de activacin
de 400,000 J/mol. Cuando esta protena se mantiene a 50 C por u
n
lapso de lO min se desnaturaliza en un 50 %.
a).- Calcular la constante de la velocidad especfica de desnaturali-
zacin.
b).- Calcular la temperaratura a la cual la protena slo se desnatu-
raliza el 10 % en l O mi n.
S olucin:
a).- La forma integrada de la ecuacin (9.14) es:
P / , x
= exp(-kt)
In
cuando la desnaturalizacin es del 50 % la constante k est dada
por:
-ln(0.5)
k =
l O mi n
k = 0.0693 min~
l
k = 1.155 x 10~
3
s~
l
b).- D e acuerdo a la forma integrada de la ecuacin (9.14),
^323 K
k
T
^323 K
kr
ln(0.5)
ln(0.9)
= 6.58
combinando el resultado anterior con la ecuacin (9.15) se obtiene:
^323 K
k
T
6.58 -
'E /323 -T\l
R V 323T )\
400000 -^-7 /323 - T\
mol 1 \
o q i J 1 ^^1T j/
O . O r - \ O <J J /
mol-\
x x
FUNDAMENTOS 521
H,0
ura 9.14: Esquema de la desnaturalizacin de una protena por
:to del pH. Las fuerzas internas obligan a la molcula a abrirse provo-
do su desnaturalizacin. Fuente: S copes, 1994.
oducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright 1994. Todos los derechos reservados.
la temperatura es:
T = 46C'
snaturalizacin por pH
3do a que ciertas protenas de inters son estables a pH' s extremos,
la utilizado esta propiedad para purificarlas mediante la precipita-
i por desnaturalizacin selectiva de sus protenas contaminantes.
La desnaturalizacin por pH ocurre tanto por la formacin en la
lcula de protena de regiones con cargas iguales que tienden a re-
srse, como por el rompimiento de las fuerzas de atraccin que le dan
:onformacin a la protena (Figura 9.14).
La velocidad de desnaturalizacin a pH' s extremos ya sea cidos o
icos depende del tiempo que tarde la protena en abrirse y perder
conformacin. Este proceso es esencialmente similar al que ocurre
la desnaturalizacin por t emperat ura.
Desnaturalizacin por Solventes Orgnicos
La estabilidad que presentan algunas protenas en una solucin con
solventes orgnicos es una propiedad que ha sido utilizada en procesos
de purificacin, mediante la precipitacin de protenas contaminantes
con estos solventes.
Cuando se utilizan solventes orgnicos como etanol, acetona o clo-
roformo para desnaturalizar protenas, la temperatura de la solucin se
mantiene entre 20 y 30C con el fin de acelerar el proceso. D espus
de un tiempo de incubacin a esta temperatura la solucin se enfra.
El aumento de temperatura permite que la cantidad de solvente uti-
lizada sea menor que la empleada en la precipitacin convencional de
protenas.
El pH y la temperatura de la solucin deben definirse y manejarse
cuidadosamente (pues tambin actan sobre la protena de inters) con
el fin de maximizar el rendimiento y la pureza de la protena de inters,
y de lograr la mxima precipitacin de las protenas contaminantes.
Una protena estable en solventes orgnicos es la alcohol deshidro-
genasa de levadura. Esta enzima puede ser purificada mediante un
tratamiento con 33% vol/vol de etanol.a 25C. Este tratamiento per-
mite desnaturalizar las protenas contaminantes y obtener la deshidro-
genasa. En la Figura 9.15 se muestra la desnaturalizacin de la enzima
gliceraldehido fosfato deshidrogenasa con varios alcoholes a una tem-
peratura de 30(7 y un tiempo de incubacin de 30 minutos (S copes,
1994).
9.2.3 Precipitacin por Afinidad
La precipitacin de protenas por afinidad es un mtodo de precipita-
cin selectivo que se basa en la capacidad que tienen las protenas para
unirse con ligandos por medio de sus sitios activos. En el caso de la
afinidad bioespecfica el ligando puede ser un sustrato, un inhibidor, o
un anticuerpo. En el caso de pseudoafinidad los ligandos utilizados son
colorantes o metales.
La simple adicin de ligandos a una solucin proteica generalmente
no es suficiente para que ocurra la precipitacin. Es necesario que
el ligando propicie un estado de agregacin de los complejos ligando-
10
Figura 9.15: D esnaturalizacin de gliceraldehido fosfato deshidroge-
nasa: (o), metanol; (), etanol; (O ), 1-propanol; (), 1-butanol; (<),
1-pentanol; (+), 2-propanol. S copes, 1994.
524
1
a)
b)
Figura 9.16: Representacin esquemtica de la formacin de agregados
por inmunoafinidad y por afinidad, a). Agregado en forma de cadena
constituido por un anticuerpo policlonal y una protena monomrica.
b) Agregado en forma de red producido por un anticuerpo policlonal
y una protena tetramrica o por ligandos bis-NAD y una protena
tetramrica. Fuente: S copes, 1994.
Reproducida con el permiso de Spriiiger-Verlag. Copyright 1994. Todos los derechos reservados.
protena.
La precipitacin por afinidad bioespecfica ocurre slo cuando se
agrega un ligando especfico a la solucin de protenas. Este ligando se
une con las protenas o enzimas y forma agregados. El tipo de agregados
que se forman depende del tipo de ligando y de la protena. En la
Figura 9.16 se presentan dos sistemas de precipitacin por afinidad.
La Figura 9.16a presenta un agregado producido por la unin de un
anticuerpo policlonal y una protema monomrica, llamado inmunopre-
cipitado. Este tipo de agregados se producen en forma natural en el
caso de los sistemas antgeno-anticuerpo. En el caso de que las protenas
sean oligomricas se originan redes como la que se muestra en la Figura
9.18b.
El principio de precipitacin por inmunoaf inidad se ha generalizado
. EQUIPO DE PRECIPITACIN 525
ra el uso de otro tipo de ligandos que no son anticuerpos y que se
>ducen de manera artificial, dando origen a un nuevo enfoque en la
jcipitacin por afinidad al utilizar ligandos bifuncionales bis-NAD .
tos ligandos se enlazan covalentemente a los sitios activos de las
)tenas oligomricas y forman redes semejantes a la que se muestra
la Figura 9.16b. Esta tcnica de precipitacin por afinidad ha tenido
m xito en la precipitacin de deshidrogenasas utilizando como pre-
titante el ligando Bis-NAD . S e ha reportado un rendimiento del 85%
la recuperacin de la enzima lactato deshidrogenasa (Luong et a/,
37). La limitacin de este enfoque de la precipitacin radica en que se
lica nicamente a protenas oligomricas, y es necesario llevar a cabo
rias pruebas experimentales para determinar cul es la concentracin
tima de bis-ligando a la que ocurre la precipitacin de la totalidad
la protena.
En la Figura 9.17 se muestra un esquema de otro enfoque de la
?cipitacin por afinidad, el cual ya ha sido aplicado a escala industrial,
insiste en sujetar el ligando a un polmero obtenindose as agentes
iltifuncionales (macroligandos) que se unen con la protena de inters
forman agregados. Posteriormente se produce la precipitacin del
nplejo ligando-protena al agregar sal a la solucin o al cambiar el
[ de la misma (Janson, 1984).
3 Equipo de Precipitacin
operacin de precipitacin puede realizarse en diferentes tipos de
ictores entre los que se encuentran los reactores intermitentes, tubu-
es y continuos tipo tanque agitado (Figura 9.18).
4 Diseo de Precipitadores
el diseo de un proceso de precipitacin debe tomarse como base el
nportamiento cintico de las partculas en solucin. El conocimiento
este comportamiento permite hacer la seleccin adecuada de la geo-
>tra en que se realizar el proceso. En base a lo anterior, esta seccin
enfoca a dos aspectos:
526
A//
Extracto crudo
Formaoibod
agregado*
maoofigafldo - produca
Precipitado
maerotiga'ido producto
0
b
p.-.
o 0 0
o
a
Cambia tn I pH
d* Usolucin
S*pvcin
Ipredudo
o
o o
o O
9.17: Representacin esquemtica, de la precipitacin del com-
gando-protena al agregar una sal o cambiar el pH de Ja solucin,
icin del macroligando a la solucin proteica; b). formacin del
|o ligando-protena; c). precipitacin del complejo, d). diso-
de la protema del macroligando.
DISEO DE PRECIPITADORES 527
Alimentacin
( b)
( a)
Alimentacin
to
^
C
P
/->--v-
:-.?.:
2
^ S
V^ ^
(c)
V
Producto
a 9.18: Tipos de reactores utilizados en la precipitacin de
nas. a) Intermitente b) Tubular c) Continuo tipo tanque agitado.
Cintica de la Precipitacin.
D iseo del Precipitador.
1 Cintica de la Precipitacin
ecipitacin de protenas puede efectuarse ya sea desnaturalizando
desnaturalizar stas. En este apartado se revisan los aspectos
;cos relacionados con la precipitacin sin que ocurra desnaturali-
n de la protena.
a una solucin proteica las molculas presentan por efecto de su
a cintica un movimiento al azar que produce choques entre s.
que las molculas de protena queden asociadas al chocar se re-
e eliminar tanto las barreras producidas por las molculas de agua
is rodean, como las que originan sus cargas elctricas,
ira facilitar su estudio la cintica de la precipitacin se divide en
fruientes fases:
Mezclado inicial: La solucin proteica se mezcla con el agente
precipitante para eliminar las barreras.
Nucleacin: Al disminuir la solubilidad de la protena se inicia
la precipitacin al formarse en el seno de la solucin pequeas
partculas (ncleos).
3. Crecimiento limitado por difusin: En esta fase los ncleos van
creciendo conforme la protena difunde del seno de la solucin
hasta los ncleos. La frecuncia de las colisiones est limitada por
la velocidad de difusin de las molculas y no por el mezclado. S e
forman las partculas primarias de tamao entre 0.1 y 10
4. Crecimiento influenciado por el flujo: El mezclado favorece el
crecimiento del agregado formndose partculas en el rango de 1
a 100
5. Floculacin: Los agregados se juntan formando los grandes flcu-
los.
En la descripcin anterior las fases de crecimiento 3 y 4 son llamadas
tambin crecimiento pericintico y agregacin ortocintica, respectiva-
mente.
Mezclado Inicial Una vez que se agrega el agente precipitante (sal,
solvente o polmero no inico) a la solucin de protenas, se requiere que :
ste se difunda rpidamente para obtener una mezcla homognea. El f
tiempo requerido para obtener una mezcla homognea esta dado por:
donde:
D: Coeficiente de difusin. [cm
2
/s].
1 : D imetro promedio de los remolinos ocasionados por la agitacin.
[cmj.
D e acuerdo a la teora de dif usin de remolinos el dimetro de stos
est dado por:
donde:
-.4. DISEO DE PRECIPITAD ORES 529
p: D ensidad de la solucin, [g/cm
3
].
i/: Viscosidad cinemtica. [cm
2
/s].
P/V: Razn de potencia por unidad de volumen del sistema de agi-
tacin. [HP/cm
3
].
Combinando las ecuaciones (9.17) y (9.18) se pueden estimar tiern-
as de mezclado mediante parmetros del sistema. Este tiempo es una
ledida del tiempo necesario para tener una mezcla homognea.
ucleacin. En esta fase del proceso se inicia la formacin de las
equeas partculas de precipitado (ncleos) que aparecen despus de
gregar el agente precipitante. En algunos casos como en los sistemas
oloidales esta etapa es instantnea, por lo que el tiempo en que esto
curre puede despreciarse. En esta etapa las partculas de precipitado
e encuentran dispersas en el lquido.
Crecimiento Limitado por D ifusin o Crecimiento Pericin-
ico. En esta fase la velocidad con que disminuye la concentracin
e partculas de soluto suspendidas en el seno del lquido, puede ser
escrita de acuerdo a la teora de S moluchowski por un proceso de
egundo orden:
- =
ks/
-
2 (9
-
20)
donde:
yi\ Concentracin de partculas de soluto en el tiempo t. [mol/I].
t: Tiempo, [s]
k: Constante del proceso. [I/mol s].
Considerando un tiempo de nucleacin instantneo la integracin
e la ecuacin (9.19) conduce a:
-- = k* (9.21)
y^ yio
donde y
to
es la concentracin inicial del soluto i.
La ecuacin (9.20) describe una recta con ordenada al origen \/y
i
y pendiente k.
D ebido a que es difcil medir la concentracin y, la ecuacin (9.20)
puede escribirse en trminos del peso molecular promedio del precipi-
tado utilizando un balance de masa. Esto es:
y M = y
lo
M
0
(9.22)
combinando las ecuaciones (9.20) y (9.21), se puede obtener la si-
guiente expresin:
M = M
0
+ M
0
y
io
k (9.23)
donde:
M
0
: Peso molecular del soluto.
M: Peso molecular promedio de las partculas de precipitado.
La ecuacin (9.22) se representa grficamente en la Figura 9.19.
La ordenada al origen es M
0
y el valor de la pendiente est dada por
M
0
/,-
0
k. S i se conocen 7/
to
y M
0
puede estimarse k.
La constante k del crecimiento pericintico, de acuerdo con la teora
de S moluchowski, slo depende de la difusividad y el dimetro de la
partcula de soluto. D e aqu que esta etapa est limitada por la veloci-
dad de difusin. D e acuerdo a esta teora k est dada por:
k = SnDdN (9.24)
donde:
, es el dimetro de la partcula; D , es el coeficiente de difusin; y
TV, es el nmero de Avogadro.
El valor del coeficiente de difusin de la ecuacin anterior es un valor
promedio de todas las partculas en el sistema, de tal forma que a me-
dida que la partcula crece el valor del coeficiente de difusin disminuye.
D e acuerdo a la ecuacin (9.23) an cuando esto suceda, el valor de la
constante no se altera pues la disminucin en D tiene como causa un
incremento en la misma proporcin del dimetro de la partcula d, de
9.4. DISEO DE PRECIPITAD O RES 531
m = pendiente
Figura 9.19: Representacin esquemtica de M vs t para determinar
experimentalmente el valor de la constante k.
tal manera que el producto Dd permanece constante, y en consecuencia
k permanece constante. Es decir, la determinacin experimental de k
puede ser aplicada a diversos sistemas.
Generalmente el tiempo de formacin de las partculas primarias es
mucho menor que el tiempo global del proceso de precipitacin.
Crecimiento Limitado por el Flujo o Agregacin Ortocintica.
La difusin puede limitar el crecimiento de partculas pequeas, pero
es menos importante en el crecimiento de partculas grandes. En el
proceso de precipitacin cuando se agita una suspensin de partculas
cuyo dimetro es mayor que una f j, m aproximadamente, el movimiento
del fluido provocar que las partculas choquen y formen agregados.
Estos choques tambin pueden ocasionar rompimiento de los agregados.
El crecimiento de las partculas estar limitado tanto por el movimiento
del fluido como por la concentracin de partculas.
En una suspensin agitada de partculas esfricas de tamao uni-
forme de dimetro e?, la velocidad con que disminuye la concentracin
inicial de esas partculas debido a los choques que f orman agregados,
est dada por:
532
= k V? (9 2^
I i >1 \&-\J)
idealmente la ecuacin anterior debera incluir un trmino para
tomar en cuenta el crecimiento pericintico. S in embargo, dicho trmino
se hace menos importante conforme aumenta el tamao de las partcu-
las.
La constante k de la ecuacin (9.24) est dada por:
[ pv
1/2
(9.26)
en esta ecuacin a representa un coeficiente que indica la eficien-
cia del choque, indica la frecuencia con que un choque da lugar a un
agregado. Este coeficiente puede ser estimado estudiando la veloci-
dad con que decrece el nmero de partculas durante el crecimiento
pericintico. S e ha encontrado que en ausencia de fuerzas repulsivas
entre las partculas, la eficiencia de la colisin es proporcional a la
(velocidad de corte)~'
1 8
y aproximadamente proporcional a d~-
73
.
S i se sustituye la expresin de k en la ecuacin (9.24) se obtiene:
(9.27)
v,
3
= -aNd
dt 3 P"
En la ecuacin (9.26) el dimetro d de las partculas depende del
tiempo, por lo que para su integracin se considera una fraccin cons-
tante f de volumen de partculas del soluto a volumen de la solucin.
Esta fraccin esta dada por:
7TC?
2
(9.28)
si ce esta ecuacin se despeja d
3
y se sustituye en la ecuacin (9.26)
se obtiene una ecuacin en la cual no esta involucrado el dimetro de
las partculas y es
dt
f P/V\
~
1/2
(9.29)
malmente, integrando la ecuacin (9.28) se tiene:
/p/vY'
2
] }
(~~J * }
(9
-
30)
londe j/io es la concentracin inicial de soluto en la solucin bajo
consideraciones del modelo.
l)n un proceso de precipitacin en el cual el crecimiento de las
culas est limitado por el flujo, el cambio en la concentracin de
s tiene un decaimiento exponencial.
D
ara determinar el coeficiente de eficiencia de colisin a, debe con-
rarse que ste depende no slo del tamao de las partculas sino
bien de la velocidad de corte del fluido. Lo anterior se debe a que
partculas que aparentemente pueden ir directo a una colisin, tien-
a seguir las lneas de corriente del fluido con lo que disminuye la
>abilidad de la colisin.
culacin. La aglomeracin o floculacin de las partculas de pre-
tado es la ltima fase del proceso de precipitacin.
D urante la agregacin ortocintica el crecimiento es funcin directa
mezclado. S in embargo, este mismo mezclado puede causar el
pimiento de los flocules formados. D ebido a lo anterior la fase
loculacin generalmente se realiza a bajas velocidades de agitacin
L ocasiones sin agitacin, proceso conocido como envejecimiento del
ipitado.
La floculacin espontanea de la suspensin puede ser estimulada por
licin de agentes floculantes, en este caso la velocidad de floculacin
ender del mezclado del agente con la solucin de protenas, de la
'Cidad de difusin y de la unin del agente floculante a la superficie
a molcula de protena. Todas estas etapas determinan el tiempo
;spera antes de que la floculacin comience. Estos aspectos deben
arse en consideracin en el diseo del precipitador.
:
.2 Diseo de Precipitadores
)roceso de crecimiento de las partculas en la precipitacin puede
T limitado por varios mecanismos. An cuando hay pocos datos
para definir la relacin que existe entre las condiciones de mezclado
inicial y el tamao de partcula, puede suponerse que para protenas
que precipitan rpidamente, la velocidad de mezclado de los reactantes
afectar el tamao inicial de la partcula y las caractersticas de su
crecimiento posterior. D e tal manera que en el diseo del precipitador
deben tenerse muy en cuenta las condiciones de mezclado en las que se
realizar la precipitacin, existiendo dos arreglos bsicos:
- Precipitador intermitente.
- Precipitador Continuo.
Precipitador Intermitente
En un precipitador intermitente la protena est expuesta a un rango
de condiciones creadas por el agente precipitante durante el tiempo en
que ste se agrega a la solucin, entonces las condiciones inicales de
precipitacin del material son diferentes a las condiciones finales. Para
disminuir este efecto el agente precipitante debe agregarse lentamente
y bien dispersado.
En un precipitador intermitente todas las partculas son sometidas a
fuerzas de corte similares, y cuando stas son controladas, se producen
partculas primarias ms grandes que las obtenidas en los precipitadores
tubulares.
A nivel laboratorio es muy usado el precipitador intermitente que
consiste en un tubo de ensayo que se agita en vortex por un corto tiempo
inmediatamente despus de agregar el agente precipitante. Posterior-
mente se deja en reposo toda la noche. O tro arreglo bsico es el vaso
de precipitados agitado magnticamente (Chan et a/, 1986).
En el escalamiento de un proceso de precipitacin lo que interesa
es que la cintica que se observa a nivel laboratorio sea la misma que
la que se presente a gran escala. Cuando la velocidad de crecimien-
to pericintico es alta con respecto a la velocidad del proceso global
de precipitacin, como generalmente es el caso de la precipitacin de
protenas, las ecuaciones (9.18) y (9.29) establecen que la cintica de
precipitadra a nivel laboratorio y a gran escala ser la misma siempre
que la razn P/V permanezca constante entre ambas escalas, dado que
. DISEO DE PRECIPITADORES 535
densidad de la solucin /o, la viscosidad cinemtica /, a y t/> no
ibian con la escala.
Ejemplo 9.3. Precipitacin de Casena.
La casena a de bovino es una protena que precipita en presencia de
-uro de calcio a concentraciones 0.008 M. S e va a precipitar casena
artir de una solucin que presenta una densidad p
s
de 1.032 g/cm
3
y
i viscosidad cinemtica v de 0.01 era
2
/s. El proceso se va a realizar
un tanque agitado con una potencia P de 1.0 HP y un volumen V
1000 /.
La concentracin de la casena en la solucin alimentada ?/,
0
es de
g/l. El peso molecular M de la caseina-a es de 27,000, la densidad
precipitado p
p
medida a nivel laboratorio es de 1.367 g/cm
3
, el
metro, d es de 0.002 x 10~
4
cm y el coeficiente de difusin, D es de
x 10~
7
cm
2
/s.
S e estima que el coeficiente de aglomeracin a tiene un valor de 0.08
ue el tiempo en que se realiza la nucleacin es instantneo. A partir
ia informacin anterior estimar:
a). El tiempo en que el crecimiento est limitado por la difusin y
oncentracin de partculas al final de este tiempo,
b). El tiempo para alcanzar un tamao de partcula de 50 //m.
S olucin:
S e tienen los siguientes datos:
= 1.032 g/cm
3
= 1.367 g/cm
3
= 0.01 cm
2
/s
= 1 HP = 746 x 10
7
g - cm
2
/s
3
= 1000 /
-0.1 g/l
= 27,000
536
d = 0.002 x 10~
4
cm
D = 8.5 x 10~
7
cm
2
/s
a = 0.08
a).- El tiempo requerido para un mezclado homogneo est dadc
por la ecuacin (9.17). El tiempo t corresponde al tiempo en el cual e
crecimiento est limitado por la difusin.
combinando las ecuaciones (9.17) y (9.18) y sustituyendo valores s<
tiene:
3 \ 1/2
t
=
t =
4D \P/VJ
1
4(8.5
x
lQ-7 cffil)
1.032 -^ (o.O l sai)
746xlo
r^2
10
6
cm
3
-,1/2
t = 3.46 s
La concentracin de partculas T/ al final de este tiempo se determin;
combinando las ecuaciones (9.20) y (9.23) para obtener:
- = + (SxDdN)t
de tal manera que:
27000
0.1
,
w
8(7r)(8.5 x 10
7 ~
7
cm
10
3
cm
3
1
(0.002 x 10~
4
cm) x 6.02 x 10
J
-(3.46 s)
mol
,3
1
3.7 x 10-
9
^
mol
8.9 x 10
1
cm"
mol
entonces,
i = 1.12 x 10
-13
mol
0.4. DISEO DE PRECIPITADORES 537
la concentracin final es mucho menor que la inicial.
b).- El tiempo necesario para obtener partculas de 50 //m de di-
metro est dado por la ecuacin (9.29):
In
J
de acuerdo al balance expresado en la ecuacin (9.21),
y el peso molecular promedio M de las partculas de 50 f im es:
M =
M =
1Q
23 rnolec
4
TT (50 x 10
4
)
o
M = 5.39 x 10
entonces,
l6 9
mol
27,000
y
io
5.39 x 10
16
W MI
= 5 x 10~
13
yio
la fraccin de volumen de soluto en la solucin es:
/ 1.367 o
w = : ^r
^ 10
3
cm
3
0.10 g
i) = 7.31 x 1CT
5
sustituyendo estos valores se tiene:
ln(5 x 1Q-
13
)
1/2
_ /4xO.Q8x7.31xlQ-
5
\ / /4bxiu
^ * 'I 10
6
cm
3
x 1.032
t - 4474 5
el paso controlante en esta precipitacin es el crecimiento ortocin-
tico.
Precipitadores Continuos
En un reactor tubular cuando se tiene un buen mezclado en el punte
donde se agrega el agente precipitante, la protena se ubica rpidament<
a las condiciones finales en que ocurre la precipitacin. Las fuerzas d(
corte a las que estn sujetas las partculas pueden ser las que produc<
el flujo laminar, an cuando la velocidad media de corte puede excede
a la de un tanque agitado.
En un reactor continuo tipo tanque agitado la protena es puesta ei
contacto instantneamente con el agente precipitante, alcanzndose a
mismo tiempo las condiciones finales de precipitacin. Las condicione
de corte son muy parecidas a las de un precipitador intermitente, y la
partculas estarn sujetas a las fuerzas de corte durante el tiempo d
residencia en el reactor (Glatz, 1990) .
La Figura 9.20 muestra la influencia del tipo de reactor sobre 1
curva de insolubilizacin por salado de la fumarasa (Bell et a/, 1983]
Puede observarse que existe un desplazamiento en la curvas, que pued
ser debido a diferencias locales en el pH, provocadas por la forma com
se agrega el sulfato de amonio. El mismo corrimiento se observa cuand
hay variacin en el grado de mezclado en un tanque agitado.
Los resultados anteriores sugieren que un factor importante a cor
siderar en el diseo del reactor, es la agitacin que se proporciona a 1
solucin en la que se encuentra la protena de inters. Esto es part
cularmente importante cuando se desea escalar el proceso debido a 1
relacin que hay entre potencia y agitacin.
Para' visualizar el diseo de precipitadores continuos, se puede part
de un sistema sencillo donde se cuenta con una suspensin di l ui da (
. DISEO DE PRECIPITADORES 539
15.0
10.0
1.0
Fuerza inica ( mol"
1
)
7 8 9
SO 60 70 80
% de saturacin
$ura 9.20: Influencia del tipo de contacto sobre la curva de insolubi-
icin por salado de fumarasa. V Contacto intermitente con sulfato
amonio slido, o Contacto intermitente con solucin saturada de
fato de amonio, Contacto continuo r = 96 s , V=0.38 1 y solucin
rUrada de sulfato de amonio. < Contacto continuo r = 918 s V=1.87
solucin saturada de sulfato de amonio. Bell et a/, 1983.
reducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright 1983. Todos los derechos reservados.
20 g/l) y velocidades de agitacin moderadas, de tal manera qu
e e
rompimiento de los agregados pueda ser despreciado (Rohani y Chen
1993). Bajo estas condiciones es posible utilizar balances poblacionale
para derivar expresiones de las velocidades de nucleacin, crecimienti
y agregacin a partir de datos experimentales. Las correlaciones emp
ricas que se obtienen son de la siguiente forma:
(9.31
til
= k
G
exp v
e
Iu
9
T (9.32
(9.33
V
J
^ /
donde:
B: Velocidad de nucleacin. [nmero de ncleos// h].
G: Velocidad de crecimiento pericintico. [f j, m/h].
I
a
gg- ndice de agregacin. Medida del crecimiento ortocintico.
[adim.].
ks, ko y k: Constantes cinticas. [Unidades consistentes.].
EB, EG y E A- Energas de activacin. [KJ/mol].
cr: S obresaturacin aparente.
/: Fuerza inica. [mol/I].
u: Velocidad de agitacin, [rpra].
r: Tiempo de residencia promedio, [h].
a, b, c, d, e, f, g, h, p, q, r, s: Constantes empricas.
A su vez el ndice de agregacin est dado por:
TT (9.34)
donde:
0
: Nmero de partculas por unidad de volumen en el precipitado.
[nm/
3
].
^: Nmero de partculas formadas por nucleacin en un tiempo de
residencia. [nm/L
3
].
Cuando la agregacin es total el ndice toma el valor de uno, cuando
existe agregacin el ndice toma el valor de cero.
La definicin de sobresaturacin en un proceso de precipitacin es
ipleja. En el caso de una precipitacin continua la sobresaturacin
;de definirse como:
/n oc\
(
9
'
35
)
donde C
e
y C
a
son las concentraciones proteicas a la entrada y salida
precipitador.
Ejemplo 9.4.- Precipitacin isoelctrica de protenas de una
aginosa.
En el estudio cintico de la precipitacin de protena a partir de una
tcin obtenida de una pasta de una semilla oleaginosa, se obtuvieron
correlaciones empricas siguientes:
B = 4.;
G = 0.
l
agg
= 1.2exp
RT J
a).- Estimar la velocidad de nucleacin, la velocidad de crecimiento
y el ndice de agregacin cundo la precipitacin se efecta a las condi-
ciones siguientes: a =0.6246, r = 0.048 /, u= 270 rpm, 7=0.027 rnol/
y T=295K.
b).- Estimar el nmero de partculas por unidad de volumen en el
precipitado.
Solucin:
a).- Aplicando las correlaciones correspondientes se tiene:
B" = 4.8x10" exp
1654
8.314 ** x 295/T
mcp/-/\
((0.6246)
5
'
723
(0.027)--
1
(270)-
905
(0.048)--
215
)
? = 1.67 x 10
15
^^
/ h
-2860 ^
G = 0.7 exp'
m
l
8.314 F x 295K
molh
((0.6246)-
67
(0.027)--
091
(270)
0
-
625
(0.048)-
0
-
833
)
X-Y no o ^
m
G = 93.0
h
-470
I
agg
= 1.2 exp
8.314
mo
7_
0
^
x 295
A
'
((0.6746)
0
-
007
(0.027)--
003
(270)
0
-
004
(0.048)
0
-
008
)
/a
55
- 0.99
b).- D e acuerdo a la ecuacin que define al ndice de agregacin,
9.5. SUMARIO 543
N
p
= Br(l-I
ag3
)
N
p
= f l.67 x 10
15
^^\ (0.048 h) (1 - 0.99)
Np = 8
.oi6 xlO
11
^
9.5 Sumario
La precipitacin es una operacin empleada tanto para la concentracin
como para la purificacin de soluciones proteicas.
Existen varias formas de realizar una operacin de precipitacin,
dependiendo del tipo de agente precipitante que se utilice y el principio
que se emplee. D e tal manera que la precipitacin puede realizarse
por disminucin de la solubilidad, por desnaturalizacin selectiva y por
afinidad.
Los equipos empleados en la precipitacin pueden ser intermitentes
o continuos en diseos convencionales. El diseo de estos equipos se
realiza mediante una combinacin de experimentos y modelos cinticos
de cierto grado de complejidad.
544
9.6 Problemas
9.1.- En la precipitacin de alcohol deshidrogenasa con sulfato de amo-
nio utilizando un volumen de 30 mi, en determinaciones realizadas en
el sobrenadante se obtuvieron los resultados siguientes:
% de S aturacin
(NH
4
)
2
S0
4
50
45
40
35
25
Actividad
Especfica
180,000
200,000
650,000
440,000
430,000
Protena
total (mg)
29.80
21.28
17.87
8.65
23.87
O btener los parmetros A y m de la curva de precipitacin para la
actividad de la enzima en U/ml.
Resp A=5.7 y m=-0.244
9.2.- Una protena se desnaturaliza el 50 % cuando se calienta a 50C
por lO min. Estimar el tiempo de calentamiento para que la desnatu-
ralizacin sea slo del 10 %.
Resp. 1.51 min
9.7 Bibliografa
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Preciptales and their Centrifugal Recovery. En: D ownstream
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ger-Verlag. New Y ork. 3, 41-71.
Jltrafiltracin
D.l Introduccin
, ultrafiltracin (UF) es una operacin que emplea membranas espe-
jes en diferentes tipos de arreglos para separar macromolculas en
ucin de contaminantes ms pequeos, por medio de un gradiente
presin.
La ultrafiltracin es utilizada en la etapa de purificacin de caldos
)lgicos. En esta etapa los caldos sujetos a purificacin contienen al
uto de inters en forma ms concentrada y pura que el caldo original,
bido a sto los volmenes a tratar son menores que los correspondi-
tes a las primeras etapas del proceso.
Para describir un proceso de membrana es necesario poder estable-
el movimiento relativo de los componentes de la mezcla a travs de
membrana, debido a la fuerza originada por el gradiente de presin,
neralmente se realiza una descripcin fenomenolgica donde la mem-
ina se considera como una caja negra, es decir, el mecanismo mi-
>scpico de flujo (y rechazo) no es explicado en este enfoque. Este
amiento es caracterstico del enfoque de los fenmenos de trans-
rte.
La ultrafiltracin forma parte de un conjunto de "operaciones de
mbrana" empleadas en diferentes etapas de los procesos de biosepa-
;in. Es importante hacer notar que los principios bsicos de estas
oraciones son comunes.
547
548 CAPTULO 10. ULTRAFILTRACIN
En la seccin 10.2 de este captulo se efecta una descripcin general
de los diferentes procesos de membrana existentes con el propsito de
establecer las principales similitudes y diferencias de stos con respecto
a la ultrafiltracin. Se resalta la importancia que tiene la operacin en
flujo tangencial para este tipo de sistemas. Se presenta tambin en esta
seccin la teora de la ultrafiltracin que permite analizar el efecto de
los diversos parmetros sobre el comportamiento de esta operacin. En
la seccin 10.3 se se describen las caractersticas ms importantes de
los principales equipos utilizados en los procesos de membrana.
La seccin 10.4 presenta los fundamentos del diseo de equipos de
UF haciendo nfasis en el clculo de reas y tiempo de UF de dichos
sistemas. Se presenta una discusin sobre las condiciones ptimas de
operacin de un sistema en el marco de la mecnica de fluidos y los
esquemas de operacin ms frecuentes en los sistemas de UF.
10.2 Fundamentos
Para el tratamiento de la operacin de UF es conveniente establecer
primero el marco donde se desarrolla. Asimismo, es conveniente revisar
los fundamentos tericos de la operacin que facilitan su uso y correcta
aplicacin. En este sentido, esta seccin hace nfasis en tres aspectos:
Los procesos de membrana.
Flujo cruzado o tangencial
La teora de UF.
10.2.1 Procesos de Membrana
Actualmente existen varios procesos que emplean una membrana par
lograr una separacin dada (Me Gregor, 1986). Estos procesos s<
pueden caracterizar en forma general en base a:
- La fuerza impulsora del proceso.
- El tipo de membrana que emplean.
12. FUNDAMENTOS 549
Cabla 10.1: Principales caractersticas de los procesos de membrana.
MF UF o D
Fuerza impulsora
Presin de operacin (KPa)
fipo de membrana
Flux Ifm
2
h
flango de retencin
Especie
Hongos
Levaduras
Bacterias
Coloides
Virus
Protenas
Polisacrido
Enzimas
Antibiticos
Azcar
Ac. Orgnico
[on inorgnico
Peso
molecular
D
10* - 10
b
10* - 10
6
10* - 10
6
300 - 10
J
200 - 400
100- 500
10 - 100
Tamao
mn
10
J
- 10*
10
J
- 10*
300- 10
4
300- 10-
5
30 - 300
2-10
2-10
2-5
0.6- 1.2
0.8- 1
0.4 - 0.8
0.2 - 0.4
AP
100-500
Micro-
porosa
Simtrica
50-1000
AP
100-500
Micro-
porosa
Asimtrica
10-200
AP
700-20, 000
Semiper-
meable
Asimtrica
1-20
AC-
-
Dilisis
Simtrica
-
X
X
X
X X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Adaptada de: Fane y Radovich, 1990.
producida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reser-
dos.
El rango de tamao de partcula que retienen sus membranas.
De acuerdo al tipo de fuerza impulsora los principales procesos de
embrana (Tabla 10.1) se pueden clasificar de la siguiente forma:
Gradiente de presin.
Ultrafiltracin (UF).
Microfiltracin (MF).
Osmosis Inversa (01).
Gradiente de concentracin
D ilisis (D ).
550 CAPTULO 10. ULTRAFILTRAC1N
OPartculas
Macromolculas
o Microsolutos AP
Alimentacin_jo u-o
Ao 0
ô ^
u
0
ao<oA ^[_Retenido
A O^. Â n A ^ <^^ ^^ ^^ A >
0 0 oôoô wow00 owoop
Permeado \
4
Membrana \
Figura 10.1: Esquema de ultrafiltracin. j
- Gradiente de Voltaje \
Electrodilisis (ED ).
Ultrafiltracin
La ultrafiltracin utiliza membranas microporosas generalmente asi-
mtricas o anisotrpicas para separar macromolculas y partculas, de ;
molculas pequeas y solventes (Figura 10.1).
Las membranas anisotrpicas son las ms utilizadas en UF debido a
que las membranas microporosas convencionales poseen una estructura
tortuosa que provoca retencin irreversible de partculas dentro de la
matriz lo que dificulta su limpieza y reuso.
Las membranas anisotrpicas tiene dos capas caractersticas: una
pelcula delgada y densa de 0.1 a 1.5 fj , m de espesor y bajo la pelcula
una subestructura microporosa de 0.1 - 1 mm que presenta aberturas
progresivamente mayores, que facilitan el paso del solvente y los solutos
que logran pasar la pelcula (Figura 10.2).
Las membranas utilizadas en UF se caracterizan por su Peso Mole-
cular de Corte (PMC ), el cual es el peso molecular del soluto globular
FUNDAMENTOS 551
Membrana Anisotrpica
Filtro Microporoso
ira 10.2: Comparacin de membranas convencionales con
Dtrpicas. Fuente: Santos, et el, 1991.
'ducida con el permiso de Kluwer Academic Publishers. Copyright 1991. Todos los dere-
eservados.
552 CAPTULO 10. ULTRAFILTRAd
<OPartculas
Macromolculas
o Microsolutos
Alimentacin_ro-oo
mo om
o û ô
0
A
0
^ [_Retenid
Permea<
Membrana
Figura 10.3: Esquema de microfiltracin.
que es retenido en un 90 % por la membrana. El PMC vara entre 5i
1, 000, 000 para la mayora de las membranas de UF, lo cual repres<
la retencin de partculas de 1 a 10, 000 nanometros de tamao.
presiones caractersticas de la ultrafiltracin son moderadas en el re
de 100 a 500 KPa. Las capacidades caractersticas son del ordei
10 200 //m
2
h (al flujo volumtrico por unidad de rea de memb
se le conoce como flux y se utiliza para especificar equipos de UF)
Microfiltracin
La microfiltracin emplea membranas con poros ms grandes qu(
utilizados en UF, ya sean de tipo convencional o asimtricas. La mi
filtracin (Figura 10.3) se emplea generalmente para separar de ca
biolgicos partculas mayores de 1 /zm como coloides y clulas,
tualmente tiende a desplazar a la filtracin convencional y a la
trifugacin como tcnica de recuperacin celular. El rango de pre
de operacin tambin es restringido debido a las caractersticas d<
equipos que se emplean, y es del orden de 160 - 500 KPa. Un r
caracterstico de la MF es que puede manejar flujos mucho mayores
la UF del orden de 50 - 1000 l/m
2
- h.
Partculas
Macromolculas
Microsolutos
Alimentacin ro-o5
0 0 0
u
o
0
00
00
0
00 O 000000oo
^Permeado
Membrana
Figura 10.4: Esquema de osmosis inversa.
Osmosis Inversa
La osmosis inversa (Figura 10.4) utiliza membranas semipermeables
que permiten el paso slo del solvente (generalmente agua), para se-
parar ste de solutos de bajo peso molecular. La fuerza impulsora es
un gradiente de presin que debe vencer la presin osmtica normal
de las soluciones, es decir, invertir el flujo espontneo. Las presiones
utilizadas en esta operacin son relativamente altas del orden de 700 a
20, 000 KPa. Las membranas utilizadas en O son pelculas no porosas
que permiten el paso del solvente a travs de espacios entre los polmeros
que conforman la membrana. Los iones no pueden estar solvatados en
estos pequeos espacios y por lo tanto no son transportados. Los flujos
caractersticos en la O son del orden de 1 20 l/m
2
h.
DiliISIS
La dilisis (Figura 10.5) emplea membranas de poro muy pequeo
(menor que las membranas de UF). Esta operacin se utiliza para sepa-
rar solutos de sus soluciones, en base a su peso molecular y posiblemente
a su conformacin y carga. El o los solutos a separar de la solucin de
554
CAPTULO 10. ULTRAFILTRACIN
Partculas
Macromolculas
Microsolutos
A C
Al i mentado n_j-
CZ>
0
0
o
o
o
o
0
o
o o
0 0 O
o o
0 0
o
o
0
0
O0 0
0 '
oo
r
Corriente
Purificada
Dializado
Membrana
Figura 10.5: Esquema de dilisis.
alimentacin fluyen hacia la solucin de lavado o dializado a travs
de la membrana, slo por la accin de un gradiente de concentracin.
El papel fundamental de la membrana es impedir el paso de macro-
molculas o partculas de la alimentacin al dializado permitiendo e!
paso del solvente y de solutos ms pequeos.
En los procesos de electrodilisis la operacin de dilisis se efecte
bajo la accin de un campo elctrico.
10.2.2 Flujo Cruzado o Tangencial
En los procesos de separacin por membrana se producen gradientes d<
concentracin de los solutos en la proximidad de la membrana, causado
por las diferentes velocidades de transporte de cada uno de ellos. Est
efecto es conocido como "Polarizacin de la Concentracin" .
Esta polarizacin acta de dos formas:
- En los procesos de dilisis disminuye el gradiente de concentraci
efectivo, disminuyendo por lo tanto el flux de impurezas.
- En los'procesos de MF, UF y 01, produce un Incremento de la concei
tracin de solutos en la proximidad de la membrana (Figura 10.6
, 2. FUNDAMENTOS 555
Ce
Rux de Agua
Membrana
10.6: Gradiente de concentracin durante la UF. Fenmeno de
larizacin. Fuente: Tutunjian, 1985b.
>roducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985. Todos los derechos reser-
lo cual por un lado puede incrementar el flux de soluto, y por otro
disminuir el flux del solvente debido a un aumento de la resistencia
al flujo producida por esta barrera de concentracin. Asimismo,
puede ocasionar una resistencia adicional debido a que puede es-
timular la interaccin del soluto con la membrana ocasionando
que esta se incruste con soluto.
El flux de solvente a travs de la membrana puede ser incrementado
;nificativamente utilizando flujo cruzado o tangencial en lugar del
jo de extremo-cerrado convencional (Figura 10.7). En los sistemas
flujo cruzado la alimentacin fluye en forma paralela a la membrana
nimizando el efecto de la polarizacin de la concentracin, ya que el
uerzo cortante del fluido estimula el desplazamiento de las partculas
la superficie de la membrana.
K2.3 Teora de la Ultrafiltracin
teora de la ultrafiltracin est orientada a tratar de predecir el flux
un sistema dado en ^ funcin de los parmetros de operacin como
i: presin, temperatura, concentracin de la solucin y velocidad
igencial. Es importante sealar que la teora de la ul t r af i l t r aci n es
556
CAPTULO 10. ULTRAFILTRACINI
Filtracin Convencional Filtracin de FlujoCruzado
Figura 10.7: UF convencional y de flujo cruzado.
de aplicacin limitada, pero es til en la interpretacin y extrapolacin
de los datos experimentales, as como de gua para la operacin de los
equipos.
El principal parmetro de diseo de un sistema de UF para con-
centrar una solucin es el rea necesaria para lograr una concentracin
determinada en un tiempo dado, bajo limitaciones de rangos de presin
y temperatura tolerados por los equipos. La prediccin del flux o la in-
terpretacin y extrapolacin correcta de las mediciones experimentales
de ste, se enfocan a resolver este problema de diseo.
Prediccin del Flux
La fuerza impulsora de un proceso de UF es el gradiente de presin
transmembrana (APTM), el cual puede ser definido en referencia a la
Figura 10.8 como:
P 4- P
(10.1)
o bien,
APTM = P
0
- P
Pi
* * ^r
1
v
~ ~ TK
Retenido
Alimentacin
Permeado
Vlvula de
Contrapresin
Mdulo
deUF
Po
P
Bomba
Retenido
Filtrado
gura 10.8: Relacin de presiones en UF. Fuente: Tutunjian, 1985b.
roducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985. Todos los derechos reser-
donde:
PTM: Gradiente de presin transmembrana.
: Presin de entrada de la alimentacin.
, : Presin de salida del retenido.
: Presin de salida del permeado o filtrado.
P = P P
0
' - Gradiente de presin del flujo tangencial.
En este arreglo la bomba debe ser dimensionada para proveer la
)cidad de flujo cruzado necesaria a.s como la APTM. Esta ltima
ontrolada res t ri ngi endo la vlvula ;e contrapresin a la salida de la
dad de UF. Le. Figura 10.8 muestre, el hecho de que las presiones de
entrada y salida a la unidad, pueden ser moni toreadas con el empleo
de manmetros.
Ejemplo 10.1.- Clculo de APTM
La presin de alimentacin a una unidad de UF es de 1.70 Kg/crri
2
La vlvula de salida de la unidad se ajusta de tal manera que la cada de
presin del flujo tangencial es de 0.68 Kg/cm
2
y la presin del permeado
despreciable. Estimar APTM.
Solucin:
Se puede utilizar la ecuacin (10.1) para calcular APTM. Primero
es necesario calcular P
0
. Conociendo que
AP - P - P
0
entonces
P
0
= (1.70 - 0.68) Kg/cm
2
= 1.02 Kg/cm
2
1 7 4- 1 02
APTM = ' ' Kg/cm
2
= 1.36 Kg/cm
2
t
Un comportamiento tpico de un proceso de ultrafiltracin de una
macromolcula se muestra en la Figura 10.9, la cual muestra la variacin
de flux del permeado J (L
3
/L
2
) con el gradiente de presin trans-
membrana (APTM) para soluciones de concentracin en el rango de O
a 65 % en celdas de ultrafiltracin agitadas (sin flujo cruzado).
Se obtienen resultados anlogos a los anteriores cuando se utilizan
equipos operando con flujo cruzado constante (Figura 10.10). Sin em-
bargo, al aumentar la velocidad de flujo cruzado U se produce un in-
cremento en el flux J.
En UF se utiliza la variable J para describir el flux de permeado c
velocidad del permeado a travs del lecho filtrante, mientras que en la
filtracin convencional se utiliza la variable v para el mismo efecto, es
decir,
Q Gasto volumtrico
J = v = =
:
A rea
2. FUNDAMENTOS 559
'0.8 % Solucin
Salina
r
0.66 % Proteica (1830 RPM )
3.0 % Protelna (1830 RPM )
6.5 % Protelna (1830 RPM )
65% Protelna ( 880 RPM )
APTM (Atm )
'igura 10.9: UF de albmina en una celda. Fuente: Belfort, 1987.
oducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright 1987. Todos los derechos
vados.
T = 60
1.5
1.0
J
cm/h
0.5
0.0
Linea A
0 1 2 3
APTM (Kg/crn)
ura 10.10: Efecto de la presin, de la velocidad de recirculacin y
a concentracin sobre el flux. Fuente: Le y Howell, 1985.
oducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985. Todos los derechos reser-
560 CAPTULO 10. ULTRA FILTRACIN
La prediccin del flux a que hace referencia el ttulo de esta seccin
consiste en encontrar relaciones que permitan describir y predecir el
comportamiento experimental al que se hace referencia.
Para analizar los resultados experimentales (Figura 10.10) para una
solucin de una concentracin dada, es conveniente dividirlos en dos
regiones separadas por un gradiente de referencia APTM
++
:
- Regin I.- Localizada a la izquierda de APTM
++
, donde J es funcin
de APTM y U.
- Regin II.- Localizada a la derecha de APTM
++
, donde J slo es
funcin de U (independiente de APTM).
Modelo General del Flux
La descripcin fenomenolgica del flux en un proceso de ultrafiltracin,
se ha efectuado por varios caminos con resultados anlogos. Por medio
de la termodinmica de los procesos irreversibles, la ecuacin del flux
de solvente que se obtiene es:
J = L
P
(APTM - crATr) (10.2)
donde:
L
p
: Coeficiente de permeabilidad.
cr: Coeficiente de rechazo del soluto por la membrana.
ATT: Contrapresin osmtica.
J: Flux de permeado.
Por otro lado, cuando se utiliza la ecuacin de D 'arcy como se hi z<
en el caso de la filtracin convencional (Captulo 3) se obtiene la si
guente expresin:
donde:
^: Resistencia de la membrana.
;
5
: Resistencia de la capa de soluto de polarizacin.
El coeficiente de rechazo en un instante dado durante el proceso de
1
est dado por:
(10.4)
B
donde:
' p: Concentracin de soluto en el permeado.
' B. Concentracin de soluto en el seno de la solucin.
: Coeficiente de retencin del soluto por la membrana.
= 1: Retencin completa del soluto por la membrana.
= 0: Retencin nula del soluto por la membrana.
De acuerdo a las ecuaciones (10.2) y (10.3),
Dado que la presin osmtica para macromolculas en solucin y
ra dispersiones coloidales es muy baja, en dicho caso el modelo ge-
:al de flux en la forma de la ecuacin (10.3) se transforma en:
Se puede utilizar la ecuacin (10.6) para efectuar una descripcin
ilitativa de las observaciones experimentales (Figura 10.10) que se
lizan en un proceso de UF:
En soluciones diluidas la resistencia R
s
puede considerarse nula. Si
adems se considera R
m
constante, entonces J vara linealmente
con APTM (lnea A).
- Para la regin I donde APTM < APTM
++
, se puede considerar que
R
m
> R
s
, es decir la resistencia de la membrana es controlante
Es una zona donde J depende de APTM; los incrementos en
APTM producen un aumento en R
s
, de tal manera que J tiende
a un valor mximo conforme aumenta APTM.
- En la regin II donde APTM > APTM
++
, se puede considerar qu
e
R
s
> R
m
. Los slidos retenidos representan la resistencia con-
trolante, de tal manera que J es independiente de APTA/. Los
incrementos en APTM producen incrementos en R
s
tales, que
no se produce un incremento en J. Esta regin es ms sensible a
la velocidad del flujo cruzado por actuar sta directamente sobre
R
s
-
El uso del modelo general para la prediccin del flux requiere poder
expresar R
s
en trminos de parmetros medibles como se hizo en el caso
de la resistencia de la torta RT, en el captulo de filtracin convencional.
Los intentos que se han efectuado en este sentido son de uso limitado
para el caso de UF de protenas y coloides.
Modelo de polarizacin con pelcula (Regin I).- Otro en-
foque para obtener el modelo del flux propone que el fenmeno de po-
larizacin de la concentracin slo se presenta en una pelcula delgada
del fluido en la proximidades de la membrana (Teora de la capa lmite).
En esta pelcula el perfil de concentracin es funcin de APTM. Con-
siderando como nica variable la APTA/, los perfiles de concentracin
en estado estacionario se irn incrementando conforme se incremente
APTM (Figura 10.11).
Un balance de soluto en estado estacionario (UF continua) en una
pelcula diferencial en la interfase fluido-membrana puede ser expresado
como:
Movimiento Movimiento Movimiento
convectivo de difusivo del convectivo de
soluto hacia la = soluto de la -f soluto fuera
interfase interfase al de la interfase
seno del fluido
\0.2. FUNDAMENTOS 563
Flujo
Alimentacin
Flujo de Permeado
Cw
APTMi
x=o x=6
Incremento de
APTM y del
Flux
APTM
APTM
3
Figura 10.11: Variacin del perfil de concentracin en estado esta-
cionario con el gradiente de presin transmembrana. CB ' Concen-
tracin de soluto alimentacin. Cw Concentracin de soluto en la
3ared de la membrana. Cp : Concentracin de soluto en el permeado.
): Espesor de la capa lmite de concentracin.
(10.7)
donde:
* : Constantes en estado estacionario.
APTM: Constante.
DAB' - D ifusividad del soluto en la solucin.
x: Coordenada espacial.
Separando variables e integrando a lo largo de la capa lmite con:
x = O ; C = C
B
rA - C C^r
L V , O l-'M'
La ecuacin (10.7) se transforma en:
J
* AD yy p /1 n o \
= In (10.8)
Si la membrana presenta un coeficiente de rechazo total Cp = O,
entonces la ecuacin (10.8) se simplifica a:
J> =
^ B, a
(1()
_
9)
dado que el espesor de la pelcula 8 generalmente es desconocido,
el coeficiente DAB/& se sustituye por un coeficiente de transferencia de
masa k
s
, de tal manera que:
J* = k, \n^- (10.10)
.2. FUNDAMENTOS 565
El modelo de pelcula permite analizar la dependencia del flux J*
a los parmetros fsicos y geomtricos que afectan 8. El coeficiente de
insferencia de masa k
s
puede ser estimado por medio de correlaciones
perimentles de la literatura, donde los parmetros que afectan el
Desor de la capa lmite de la transferencia de masa, se agrupan en
ipos adimensionales como el Reynolds, el Schmidt y el Sherwood.
Para flujo en tubos circulares las siguientes ecuaciones son aplica-
;s:
Flujo laminar:
Y * V
/ 3
~
o bien en trminos de nmeros adimensionales,
(
i \ ^ /^
^-ReSc] (10.11)
2L/ J
Flujo turbulento:
Sh = 0.023#e-
83
Sc-
33
(10.12)
donde:
;: D imetro del tubo. [L].
UB: D ifusividad del soluto. [L/t
2
].
: Longitud del tubo. [L].
: Velocidad promedio del fluido en el tubo. [L/t].
: Viscosidad. [M/L t].
D ensidad. [M/L
3
].
.e: Nmero de Reynolds,
c: Nmero de Schmidt.
Sh: Nmero de Sherwood.
Es importante hacer notar que de acuerdo a las ecuaciones (10.11)
y (10.12):
Para flujo laminar:
t/V
/3
(10.13)
o bien cuando se usa el esfuerzo cortante definido como:
(10.14)
L,
entonces,
J ' oc f y ) (10.15)
\
lj
j
donde 7 es el esfuerzo cortante del fluido sobre la membrana.
Para Flujo Turbulento:
r oc U
0
'
83
(10.16)
El modelo de polarizacin de pelcula conjuntamente con las ecua-
ciones (10.11) y (10.12) permiten interpretar los resultados experimen-
tales de los procesos de UF:
En la regin I:
- El flux J* considerando U constante, es proporcional a In l/Cs-
- El flux J* aumenta al aumentar U .
- El flux J* vara con /3 en flujo laminar y con U
0
'
83
en flujo t urbu-
lento.
- El flux J* aumenta al aumentar C^la cual a su vez aumenta con
APTM.
En la regin II:
.2. FUNDAMENTOS 567
J* es proporcional a I nl / C ^ cuando la velocidad de recirculacin
constante.
J* aumenta al aumentar U. Vara con U* en flujo laminar y con
U
0
'
83
en flujo turbulento.
Estos resultados se muestran en forma grfica en la Figura 10.12.
Modelo de polarizacin en pelcula y capa de gel (Regin
).- De acuerdo con el modelo de polarizacin en pelcula (ecuacin
.10) el flux J puede ser incrementado aumentando la concentracin
soluto en la membrana C\v (aumentando APTM). Sin embargo, se
serva que en la regin II (Figura 10.10), existe un lmite para este
>o de correlacin.
Uno de los modelos ms empleados para la regin II propone que en
i soluciones macromoleculares, el aumento de Cw con APTM tiene
lmite CG, donde la solucin forma una "capa de gel" (Figura 10.13).
te gel acta en serie con las otras resistencias. Este modelo llamado
lodelo de capa de gel", implica que en la regin II de la UF los incre-
;ntos en APTM se contrarrestan con incrementos en la resistencia de
capa de gel, de tal manera que J se mantiene constante. De acuerdo
o anterior, la ecuacin (10.10) se transforma en:
donde CG es la concentracin lmite que es una constante para un
tema dado. k
s
es el coeficiente de transferencia de masa dado por las
relaciones ya presentadas (ecuaciones (10.11) y (10.12)).
Ejemplo 10.2: Clculo de C
G
y k
s
.
Los datos de flux en //m
2
h de la UF de una solucin proteica se
estran en la Tabla 10.2.
Estos datos se presentan en forma grfica en la Figura 10.14. Esti-
ir k
s
y CG para esta operacin.
Solucin:
En la Figura 10.15 se presentan los datos graneados en la forma de
ecuacin 10.17. Se puede observar que conforme se incrementa la
568
(b)
J
(c) A
In J
U2
lnC
t
Laminar
0.83
Turbulento
l n( ReoUoY)
Figura 10.12: Efecto de la presin, concentracin y velocidad de recir
culacin sobre el flux. Fuente: Belfort, 1987.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright 1987. Todos los derecho
reservados.
.2. FUNDAMENTOS 569
Capa Lmite de
Fluido
Pelcula
deGel
Flujo de agua
J.
Membrana
gura 10.13: Gradiente de concentracin durante la polarizacin con
1. Fuente: Tutunjian, 1985a.
producida con el permiso de Nature Publishing Co. Copyright 1985. Todos los derechos
er vados.
Tabla 10.2: Datos de UF para Ejemplo 10.2.
APTM Kg/cm
2
0.00
0.33
0.66
1.00
1.33
1.66
2.00
Concentracin % peso
1
00.00
18.00
33.00
47.00
50.00
52.00
54.00
5
00.00
17.50
30.00
36.00
36.50
37.00
37.50
10
00.00
17.00
21.80
22.20
22.60
23.00
23.40
20
0.00
7.00
7.33
7.66
8.00
8.33
8.66
570
CAPTULO 10. ULTRAFILTRACI;
1%PROTEINA
5% PROTEINA
10%PROTEINA
A PTM (Kg/cm
2
)
Figura 10.14: Variacin del flux con el gradiente de presin transmer
brana y con la concentracin. D atos Ejemplo 10.2. Fuente: Tutunjia
1985b.
vados.
2. FUNDAMENTOS 571
10
o
O
Figura 10.15: Flux vs \nC
B
. Datos Ejemplo 10.2.
entracin C# y la APTM, se llega a una regin donde la variacin
ux se comporta de acuerdo al modelo de pelcula de gel, en la cual
x J vara slo con CB y es independiente de APTM.
) Clculo de CG>-
' G puede ser obtenido grficamente de la interseccin de las curvas
Figura 10.15 con el eje de las abscisas de tal manera que,
C
G
= 30 %
Clculo de k
s
.-
es igual a la pendiente de las curvas en la zona de formacin del
puede ser estimada con dos puntos sobre la recta. ,
o
j )
L _
ft <;
28-8
3-2 m
2
-h
Flux
i
m'-h
60
50
40
30
20
10
O
1 2 3
Tiempo(h)
Figura 10.J6: Variacin del flux con el tiempo. Fuente: Brocklebank,
1990.
vados.
La expresin del flux en la regin II es por lo tanto:
= 201n
30
Se puede resumir en base a la discusin de los dos modelos anterio-
res, que en la ultrafiltracin el flux J se puede controlar por medio de
la. APTM y la velocidad de flujo cruzado. El flux aumenta linealmente
con APTM en su fase inicial, posteriormente empieza a disminuir la
rapidez de aumento, y finalmente cuando ocurre la polarizacin J se
hace independiente de APTM y permanece constante .
El flux puede mejorarse incrementado la velocidad del flujo cruzado,
lo cual implica un incremento en el esfuerzo cortante sobre la superficie
do la membrana.
El anlisis anterior tambin permite describir el comportamiento
t pi co de los procesos de UF i nt ermi t ent es (Fi gura 10.16).
EQUIPOS 573
ustacin de la Membrana
de los problemas que se observa durante la operacin de un sis-
L de UF es la reduccin progresiva en el flux manejable conforme
snta el tiempo de uso de las membranas. Este fenmeno llamado
rustacin de la Membrana" debe distinguirse del fenmeno de po-
sicin de la membrana.
11 fenmeno de incrustacin se refiere a la interaccin de algunos so-
; con la membrana que afectan la porosidad de la misma. Existen
Amiento fsicos (retrolavado) y qumicos para desincrustar mem-
as, sin embargo estos incrementan los costos de operacin y dis-
lyen la vida til de los equipos.
3 Equipos
equipos utilizados en los procesos de membrana generalmente o-
n con flujo cruzado o tangencial y presentan dos caractersticas
ntivas:
Utilizan una membrana apropiada para el tipo de proceso.
Presentan diferentes geometras en arreglos tipo modular.
]\ equipo modular conjuntamente con el equipo perifrico consti-
la unidad de ultrafiltracin. Parte importante del equipo perifrico
bomba de alimentacin y el tanque de almacenamiento. Un arreglo
o de un sistema de UF se muestra en la Figura 10.17.
3.1 Membranas
arte central de los procesos de membrana es la membrana misma.
general la membrana debe reunir algunas caractersticas impor-
na alta permeabilidad hidrulica, es decir, permi t i r altos flujos de
permeado bajo gradientes de presin razonables.
574
CAPTULO 10. ULTRAFILTRAClfi
Retenido Recirculacin
OO
Permeado
AJ mentacin =*
Figura 10. 17: Sistema de UF tpico (intermitente). Fuente: Belter e
al, 1988.
R educida < . < > i i < :l permiso de John Wiley and Sons. Copyright 1988. Todos los derech<
reservados.
Un peso molecular de corte preciso, es decir, retener especies d
determinado peso molecular, pero permitir el paso de las de menc
peso molecular.
_ Buena resistencia mecnica, qumica y trmica.
- Baja tendencia a incrustamiento.
- Facilidad de limpieza.
- Capacidad de esterilizacin.
- Larga vi da activa.
Los materiales que se utilizan en la fabricacin de membranas g
neralmcrite son derivados de polmeros naturales como la celulosa o <
polmeros sintticos. Recientemente se han desarrollado membranas <
materiales cermicos y metlicos.
El la Tabla 10.3 se presenta una lista de algunos materiales y cara
tersticas < ! < las membranas.
10.3.2 Mdulos
Los mdulos ut i l i zados en los equipos de separacin con membrana p
sentan di f e r e nt e s geometras que se pueden di vi di r en dos tipos bsio
1.3. EQUIPOS 575
Tabla 10.3: Caractersticas tpicas de las membranas.
MF UF o D
Rateriales:
Acetato de celulosa
Poli amida
Polisulfona
Politetrafluro
Etileno
Polipropileno
Cermica
Poliester
Sstructura:
$ de Porosidad
uperficial:
Tamao de poro:
X
X
X
X
X
X
X
Asimtrica
Simtrica
30-70
0.1 - 1 nm
X
X
X
X
Asimtrica
1-10
1-20 nm
X
X
X
Asimtrica
-
-
X
Simtrica
10-20
0.3 - 3 nm
3-10
2-12
1-14
1-14
1-14
1-13
-
75
.
130
140
130
140
150
Adaptada de: Brocklebank, 1990.
Droducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyriglit 1990. Todos los derechos reser-
los.
Mdulos de tubos y carcaza.
Mdulos de hojas.
Los mdulos de tubos y carcaza pueden presentar dos tipos de tubos:
Tubos de fibras huecas.
Tubos normales.
Los arreglos de hojas pueden ser de:
Hoja plana.
Hoja enrollada en espiral.
Hoja plegada.
. . A yMembrana
Macrosolutos
Retenidos
* Malla Separadora
Solvente y Microsolutos
Figura 10.18: Mdulo de UF de hoja plana. Fuente: Tutunjian, 1985b.
vados.
Mdulos de Hoja Plana
Los filtros de hoja plana (Figura 10.18), son muy similares a los filtros
convencionales de marcos y placas. Su principal ventaja es su versatili-
dad. Este tipo de mdulos pueden trabajar a presiones mayores que los
otros tipos, por lo que son empleados para manejar soluciones viscosas.
Los mdulos de hoja plana pueden ser utilizados tanto en MF como en
UF.
Los filtros de hoja plana pueden ser desmontados para su limpieza y
permiten restituir hojas defectuosas. Una desventaja es que su rea por
unidad de volumen es menor en relacin a los otros tipos de mdulos y
producen un flux moderado.
Mdulos de Hoja Enrollada en Espiral
Los mdulos de hojas enrolladas en espiral (Figura 10.19) utilizan un
diseo de membranas con espaciadores tipo malla separando la mem-
brana. Este tipo de arreglos producen un flux mayor que los de hoja
plana debido a que presentan una mayor rea por unidad de volumen.
Son ms difciles de limpiar y frecuentemente debe descartarse toda la
unidad an cuando slo parte del mdulo est daado. Como conse-
cuencia este tipo de mdulo se recomienda para caldos relativamente
limpios o en combinacin con un prefiltro.
10.3. EQUIPOS 577
* *. Macrosolutos
Retenidos
Membrana
Solvente y
Microsolutos
Malla Separadora
Cubierta Externa
Espaciadores
Flujode permeado
Flechas que indican el
flujode permeado
Figura 10.19: Mdulo de UF de hoja enrollada en espiral. Fuente:
Hanisch, 1986.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1986. Todos los deredios reser-
vados.
578
Flujo de
Permeado
Alimentacin
Material de Soporte
Membrana
Figura 10.20: Mdulo de UF de hoja plegada. Fuente: D ziezak, 1990.
Reproducida con el permiso del Institua of Food Teclmologiests. Copyright 1990. Todos los
derechos reservados.
Mdulos de Hoja Plegada
Los mdulos con membranas en forma de hoja plegada (Figura 10.20)
permiten un arreglo tubular con rea ampliada, y presentan propieda-
des similares a los de hoja enrollada en espiral.
Mdulos de Tubos y Carcaza
Este tipo de mdulos presenta una geometra similar a los intercambia-
dores de calor de tubos, con varios tubos unidos en sus extremos a un
cabezal comn (Figura 10.21).
Normalmente la alimentacin fluye a presin a travs del cabezal
de entrada por el interior de los tubos , de tal manera que el permeado
se colecta en la parte externa de los tubos a travs de la carcaza y el
retenido sale por el extremo opuesto de los tubos a travs del cabezal de
salida. El dimetro de los tubos vara entre 0.6 y 2.5 cm. Los tubos son
fabricados utilizando polmeros o cermica, lo que les confiere una alta
resistencia mecnica y trmica. Han sido recomendados para procesar
materiales viscosos y para la obtencin de concentraciones celulares
elevadas.
10.4. DISEO DE PROCESOS DE UF 579
Alimentacin
Salida de
Retenido
Salida de
Permeado
Figura 10.21: Mdulo de UF de tubo y carcaza.
Mdulos de Tubos de Fibra Hueca
Los mdulos de tubos de fibra hueca (Figura 10.22) son muy parecidos
a los de tubos y carcaza convencionales, sin embargo los dimetros de
los tubos son muy pequeos: de 0.02 a 0.11 cm. Entre ms pequeo
sea el dimetro interno, menor es su capacidad de manejo de slidos.
Las fibras grandes (0.11 cm de dimetro) son especialmente tiles para
separar clulas as como para el manejo de materiales viscosos.
Este tipo de mdulos es probablemente el ms empleado tanto en
MF como en UF, sin embargo presentan algunas limitaciones en cuanto
a su rango de operacin (presin y temperatura), as como en su faci-
lidad a la esterilizacin.
En la Tabla 10.4 se presenta un resumen de las principales carac-
tersticas de los mdulos empleados en las operaciones de membrana.
10.4 Diseo de Procesos de UF
Para el diseo de un proceso de UF se deben considerar cuatro aspectos
principales:
El objetivo de la UF.
La mecnica de fluidos del sistema.
El mtodo de operacin apropiado.
El diseo de la unidad de UF.
580
CAPTULO 10. ULTRAFILTRACIK
Alimentacin Cilindro Cabezal
Permeado m
Figura 10.22: a) Mdulo de UF de fibra hueca, b) Fibra individu;
Fuente: Dziezak, 1990.
Reproducida con el permiso del Institute of Food Technologiests. Copyright 1990. Todos 1
10A. DISEO DE PROCESOS DE UF 581
Tabla 10.4: Caractersticas de los mdulos de UF.
Caracterstica
Densidad de empaque
rea (m^/m
3
)
Tolerancia a solidos
suspendidos
Facilidad de limpieza
Remplazo
Tipo de mdulo
Hoja
plana
Moderada
200-400
Moderada
Regular
Hojas o mdulo
Hoja
enrollada
Moderada
300-900
Baja
Regular
Mdulo
Tubo y
carcaza
Baja
150-300
Buena
Buena
Tubos
Fibra
hueca
Alta
9000-30,000
Baja
Retrolavado
Mdulo
Adaptada de: Fane y Radovich, 1990.
vados.
10.4.1 Objetivo de la UF
Un sistema de UF puede ser empleado con distintos propsitos entre
los cuales se pueden mencionar los siguientes:
- Concentracin de una solucin diluida.
- Diafiltracin de una solucin con solutos indeseables pequeos.
- Purificacin de una solucin que contiene solutos indeseables grandes.
Concentracin
En la UF donde el objetivo es la concentracin de una solucin, la
solucin retenida es el producto deseado (Figura 10.23).
Diafiltracin
Cuando se desea separar macromolculas de molculas pequeas como
sales, azucares o alcoholes por medio de la UF de una solucin, el
permeado que sale del sistema es reemplazado con agua desionizada o
bufer. Esta operacin es conocida como diafiltracin (Figura 10.24).
582 CAPTULO 10. ULTRAFILTRACf

* *
1
UF

r_r
Figura 10.23: Concentracn por UF. Fuente: Tutunjian, 1985b.
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985. Todos los derechos res<
vados.
Figura 10.24: Diafiltracin por UF. Adaptada de: Tutunjian, 19851
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1985. Todos los derechos re;
vados.
Figura 10.25: Purificacin por UF. Fuente: Tutunjian, 1985b.
vados.
Purificacin
La UF donde el objetivo es recuperar el permeado que contiene un
solvente de inters o una solucin con solutos de bajo peso molecular
se conoce como purificacin (Figura 10.25).
Algunos procesos combinan las operaciones descritas anteriormente,
como es el caso de la operacin de concentracin con diafiltracin.
10.4.2 Mecnica de Fluidos
En un sistema de UF el flux es funcin de APTM y de la velocidad del
flujo cruzado. Tericamente el flux puede incrementarse tanto como
sean incrementados estos parmetros. Sin embargo, existen limitantes
en cuanto a la operacin de los equipos. La mayora de los equipos
de UF deben operar abajo de 7 Kg/cm
2
de presin, mientras que los
equipos de fibras huecas slo toleran presiones de hasta 2.7 Kg/cm
2
.
De acuerdo a la ecuacin (10.1),
APTM =
i +
-Pt
Si se supone que la presin de salida del permeado es O, entonces la
ecuacin anterior puede rearreglarse de la siguiente forma:
584 U CAPTULO 10. ULTRAFILTRACI*
'
AP
i APTAf = />- (io.i
8
;
donde: AP = P
t
- P
0
La ecuacin (10.18) permite optimizar la relacin de APTM coi
AP, cuando la P, se fija como la presin mxima de operacin de
equipo. Bajo esta condicin, al aumentar APTM, AP disminuye y p
0
lo tanto la velocidad del flujo cruzado del fluido. Por el contrario, a
disminuir APTM, AP aumenta y por lo tanto aumenta U la velocida<
del flujo cruzado. El flux ser ptimo para una cierta combinacin d<
AP y APTM ; visto de otra manera, para una combinacin de P,- y P
0
Esto ocurre generalmente donde se inicia la formacin de la pelcula d<
gel.
Ejemplo 10.3.-Mecnica de fluidos en UF.
Se desea optimizar el flux de un sistema de UF a partir de los dato
de la Figura 10.26. La presin de entrada al sistema es fija e igual
1.7 Kg/cm
2
. El flujo cruzado se correlaciona con la cada presin d
acuerdo a la siguiente expresin; -_
Q = 29.41 AP
. ,**
donde AP tiene unidade^de~J^/êm' ^y Q de l/mi n (rea fija).
Se pide:
a) Encontrar la regin de operacin factible.
b) La combinacin APTM y AP que permita el mximo flux.
Solucin:
a) Regin de operacin factible.
Al fijar la presin de entrada P
t
a un valor mximo de 1.7 Kg/cm
tanto la AP como la APTM se restringen a un rango posible de valore:
en funcin de la presin de salida P
0
la cual puede ser regulada median!
la vlvula de salida.
En la Tabla 10.5 se presentan algunos valores de este rango. L
figura 10.27 muestra la regin de operacin factible en base a este
datos.
b) Flux mximo.
JA
l/min
4j
3
2
1-1
AP =1.70Kg/cm
2
AP = 1.37 Kg/cm
2
AP = 1.02 Kg/cm
2
AP=0.68Kg/cm
2
AP =0.34Kg/cm
2
APTM (Kg/cm
2
)
Figura 10.26: Variacin del flux con APTM. Presin de entrada fija y
la velocidad de recirculacin variable. Datos Ejemplo 10.3. Adaptada
de: Tutunjian, 1985b.
vados.
JA
l/rnn
4j
3
2
1-1
AP = 170 Kg/cm
2
AP = 1.37 Kg/cm
2
AP = 1.02 Kg/cm
2
AP = 0.68 Kg/cm
2
AP= 0.34Kg/cm
2
APTM (Kg/cm
2
)
Figura 10.27: Regin de operacin factible. Ejemplo 10.3. Adaptada
de: Tutunjian, 1985b.
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc . Copyright 1985. Todos los derechos
reservados.
n
586
Tabla 10.5: Clculo de la regin de operacin factible. Datos del Ejem-
plo 10.3.
Kg/cm
2
Pi
1.70
1.70
1.70
1.70
1.70
1.70
Po
0.00
0.34
0.68
1.02
1.36
1.70
AP
1.70
1.37
1.02
0.68
0.34
0.00
APTM
0.85
1.02
1.19
1.36
1.53
1.70
1/min
Q
50
40
30
20
10
00
JA
2.30
2.80
2.90-
2.40
1.70
0.00
En la Figura 10.27 se puede observar que para cada combinacin de
P con P
0
o AP con APTM, existe un flux factible alcanzndose un
mximo cuando:
AP = 1.02 Kg/cm
2
APTM = 1.19 Kg/m
2
JA = 2.9 l/mi n
En un sistema de UF tanto la regin factible de operacin como la
combinacin P, y P
0
que optimiza el flux, son funciones de la concen-
tracin de la solucin de alimentacin.
10.4.3 Mtodos de Operacin
Los sistemas de UF pueden ser diseados para operar en forma inter-
mitente o en forma continua.
Operacin Intermitente
Las operaciones intermitentes se pueden efectuar con y sin recirculacin
interna.
En una operacin intermitente sin recirculacin (Figura 10.28), la
solucin que inicialmente est contenida en un tanque de proceso, es
bombeada a la unidad de UF y regresada al tanque hasta alcanzar
la concentracin final deseada. De esta manera la concentracin del
J0.4. DISEO DE PROCESOS DE UF 587
UF
Tanque de'
Proceso
Permeado
Bomba
I Figura 10.28: UF intermitente sin recirculacin. Fuente: Tutunjian,
1985b.
vados.
producto en el tanque aumenta gradualmente durante el proceso, a la
vez que el flux decrece proporcionalmente a sta.
La operacin intermitente con recirculacin interna (Figura 10.29)
emplea dos bombas. Una de recirculacin para proveer la velocidad
de flujo cruzado ptima y la bomba de alimentacin. La velocidad de
alimentacin debe mantenerse alta, de tal manera que la concentracn
en el circuito de recirculacin sea cercana a la concentracin del tanque
alimentador. Esto generalmente se logra manteniendo una relacin de
20 veces la velocidad de alimentacin a la de permeacin.
Cuando al tanque de proceso se le alimenta solvente para lavar la
solucin la operacin intermitente respectiva, se convierte en una ope-
racin intermitente de diafiltracin.
La desventaja principal de los sistemas intermitente es que general-
mente requieren ms tiempo de residencia (lo cual puede afectar al
producto) y tanques de proceso ms grandes.
Operacin Continua
La diferencia entre una operacin intermitente y una continua es que
en esta ltima, el retenido es retirado continuamente del sistema a la
concentracin final deseada. En estado estacionario el flux es cons-
Agua de
Diafiltracion
Permeado
Bomba de
Bomba de Recirculacion
Alimentacio'n
Figura 10.29: UF intermitente con recirculacin. Fuente: Gravatt y
Molnar, 1986.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1986. Todos los derechos reser
vados.
Alimentacin
a-*
0 1 0
Retenido
UF
0^1
Bomba Bomba de Permeado
Recirculacin
Etapa 1 Etapa 2
Etapa 3
Retenido
Bomba Permeado
Permeado Permeado
Figura 10.30: UF continua de una y varias etapas. Adaptada de: Tu-
tunjian, 1985b.
vados.
tante y mnimo. Para contrarrestar esta limitacin de la operacin
continua generalmente los sistemas utilizados son de etapas mltiples
(Figura 10.30).
10.4.4 Diseo de la Unidad de UF
El problema del diseo de la unidad de UF consiste en determinar el
rea de UF necesaria para procesar una cantidad de una solucin de
concentracin conocida en un tiempo dado, hasta una concentracin
final determinada. Generalmente para situaciones de inters prctico,
la prediccin de coeficientes de transferencia de masa y del flux es l imi-
tada, por lo que el diseo requiere de datos experimentales especficos
del sistema.
En el caso de los sistemas de diafiltracin otro parmetro importante
es la cantidad de solvente de lavado que es necesario agregar.
A continuacin se presentan las ecuaciones de diseo de algunos
arreglos tpicos de los sistemas de UF.
Concentracin Intermitente
En un sistema de concentracin intermitente el volumen inicial de
solucin V
0
con una concentracin inicial CB
O
,
se
procesa hasta alcanzar
un volumen final Vj con una concentracin final CBJ, obtenindose un
volumen de permeado Vp.
Un balance de soluto en el sistema, considerando la concentracin
de soluto en el permeado Cp constante, se puede expresar como:
(10.19)
La ecuacin anterior integrada entre los lmites
y y r* /~i
v v Q \-j B ^*Bo
V = V
conduce a:
V = V
0
exp
'C
B
CB
dC
B
(10.20)
La ecuacin (10.19) combinada con la expresin del flux dada por:
'--1%
donde A es el rea de UF,
puede ser integrada entre O y , y expresada con ayuda de la ecuacin
(10.20) de la siguiente forma:
C
BJ
exp -
C
B
s r - dC
B
Jc
Bo
c
B
-c
P
J _
J(C
B
-C
P
)
(
Cuando el rechazo es total Cp^Ô, entonces la equacin (10.22)
simplifi
ca
a:
(10.23)
La ecuacin (10.23) puede ser utilizada para calcular el rea nece-
saria para realizar una concentracin de CB
O
a
CBJ
en
un tiempo / o
para calcular dicho tiempo dada el rea de UF disponible. Este clculo
requiere la evaluacin de la parte derecha de la ecuacin (10.23), lo cual
puede realizarse calculando el rea bajo la curva de los datos experi-
mentales graneados como:
1
~J
VS
J
1
j
Para realizar estudios de escalamiento tambin puede utilizarse la
|expresin experimental de la variacin del flux con CB obtenida en
equipos de laboratorio, conjuntamente con la ecuacin 10.23.
Ejemplo 10.4.- UF intermitente.
Se desea concentrar de 2 a 10 % en peso 10 m
3
/di a de una solucin
de un polisacrido. Como el tiempo muerto (descarga, limpieza, etc.)
de la unidad es de 4 h, el tiempo de operacin es de 20 h.
Se realizan pruebas de laboratorio utilizando una unidad tubular de
0.012 x 1.2 ra, por considerarse ms conveniente este tipo de arreglo
para el flux proyectado, y por las ventajas que ofrece para su limpieza
por retrelavado.
Los datos de laboratorio muestran que para una AP =1.5 Kg/cm
2
el gasto volumtrico en la recirculacin es de 8 l/mi n y el flux en
//m
2
h est dado por la expresin:
= 81n
'B
a) Calcular el rea de UF necesaria.
b) Calcular el nmero de tubos necesarios (diseo modular).
c) El flux promedio.
592 CAPTULO 10. ULTRAFILTRAC)
0.40
0.35
0.30
1/J
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
0.10 0.20 0.30
I/Ce
0.40
Figura 10.31: Curva de 1/J vs l/C
B
. Datos de Ejemplo 10.4
Solucin:
a) Clculo de rea:
Con los datos y la ecuacin (10.23) se obtiene la expresin:
.1/2
A = 1000
> i 15 \ n I
> l n^ \C
B
/
En la Figura 10.31 se muestra la curva que se obtiene al gr
1/J vs \CB- La integral de la expresin anterior es igual al re<
esa curva, de tal manera que:
A = 1000 x 0.04 m
2
A = 40 m
2
b) Clculo del nmero de tubos N:
rea total
rea por tubo
40 m
2
N =
N =
TT x 0.012 m x 1.2 m
N = 884 tubos
c) Clculo del flux promedio:
Mediante un balance de soluto se obtiene primero el volumen final
de la solucin:
V
0
C
0
= Vj Cf
de tal manera que,
10, 000x2/
V =
lo
v
f
= 2000 /
con estos datos se puede calcular el flux promedio:
(10,000-2000) I
prom
~ 40m
2
x20/ i
Jprom 1U
m*
Concentracin Continua
Los sistemas de UF continuos se utilizan para procesar volmenes con-
siderables o cuando se tiene una alimentacin continua.
Debido a que un sistema continuo opera todo el tiempo a la con-
centracin de salida deseada, si el sistema consta de una sola etapa, el
rea de UF necesaria es mucho mayor que si se opera en varias etapas
en cascada. Debido a esto los sistemas de multietapas continuas son
los ms utilizados.
594
F
r
i
C
0
r ^
A
.
i
i
v
r
fc 1
"
c,
r
/i
r
e .
\
\
)
r
,
* f .^ r
* t, V
r
C
2
i
\
i
r
_ .n
n
Figura 10.32: UF continua de etapas mltiples.
Si un sistema de UF presenta varias etapas de igual rea, conforme
la concentracin de soluto aumenta en cada etapa el flux de perme-
ado disminuye. Entre ms etapas presenta la cascada mayor es el flux
promedio de sta. Sin embargo, este efecto disminuye conforme au-
menta el nmero de etapas, tendiendo a alcanzar el flux promedio de
un sistema intermitente. Generalmente es ms econmico utilizar de
tres a cinco etapas (Tutunjian, 1985b).
Algunos cascadas de UF operan con reas diferentes en arreglos tipo
pirmide, donde el rea por etapa disminuye conforme la concentracin
de soluto aumenta, es decir el volumen de solucin disminuye.
En el sistema de UF continua que se muestra en la Figura 10.32,
cada etapa est constituida por una o varias unidades de UF en serie o
paralelo. El problema de diseo consiste en determinar el rea de UF
de cada etapa, para un flujo de entrada F
0
, con una concentracin de
la solucin de entrada C
0
y una concentracin de salida deseada C
n
.
Si se supone un coeficiente de rechazo a = 1 para todas las etapas,
el rea de cada etapa puede calcularse utilizando balances de masa
solamente.
El flujo F
n
puede calcularse efectuando un balance de masa de soluto
en toda la cascada, de tal manera que,
Fn = ^ (10.24)
El flux en la etapa n est dado por una expresin de la forma:
(10.25)
n
El flujo de permeado P
n
en la etapa n se puede calcular para un
rea A de diseo con,
Pn = AJ
n
(10.26)
Efectuando un balance global en la etapa n se puede calcular el flujo
de la etapa previa,
F
n
_
1 = J
P
n
+ F
n
(10.27)
Por medio de un balance de soluto en la etapa n se calcula la con-
I centracin de soluto en la etapa previa,
(10.28)
Con el sistema de ecuaciones (10.24)-(10.28), en forma iterativa des-
cendente se calcula el nmero de etapas necesarias hasta alcanzar el
valor de la concentracin de soluto de la solucin de entrada, cuando se
conoce el rea de cada etapa; o bien el rea necesaria para un nmero
de etapas prefijado.
Ejemplo 10.5.- Comparacin de UF intermitente y con-
tinua.
Se desea procesar 5000 l/h de una solucin proteica para concen-
trarla de 2 a 20% en peso. Las pruebas experimentales muestran que
el flux puede estimarse con la expresin
Calcular:
a) El rea necesaria para un procesamiento intermitente y el flux
promedio.
b) El rea necesaria para un procesamiento continuo de 5 etapas y
el flux promedio.
c) La variacin del rea total de la UF con el nmero de etapas.
Solucin:
a) rea UF intermitente. Utilizando la ecuacin (10.23) se puede
llegar a la siguiente expresin:
*
1
/
2
i
Ai ntermi tente 10,000 X
A>
ntermi ten
te = 10,000 x 0.0134 m
î ntermi tente 134 772.
El flux promedio est dado por:
c
nnn
5000x2 1 DU
~
7 _ 20 h
Jprom ,
n
, o
134 m
2
'
==
- OO.O
m
2
h
b) En la Tabla 10.6 se presentan los clculos utilizando las ecua-
ciones (10.24)-(10.28), donde la relacin rea/etapa = 32.875 m
2
sa-
tisface la condicin de diseo.
El rea total es :
= (5)(32.875) m
2
A
cont
= 164.375 m
2
El flux promedio es:
_ 4500 l/h _ I
r
""
n
~ 164.375 m
2
m
2
- h
c) Utilizando el procedimiento del inciso b) se realizan los clculo
para obtejier la Tabla 10.7.
La Figura 10.33 muestra estos resultados en forma grfica.
flO.4- DISEO DE PROCESOS DE UF 597
Tabla 10.6: rea para procesamiento continuo en 5 etapas. Datos del
Ejemplo 10.5
n
5
4
3
2
1
0
F
n
(1/h)
500.00
766.59
1314.17
2216.14
3461.69
5000.00
C
n
(% en peso)
20.00
13.04
7.61
4.51
2.89
2.00
Jn
(//m
2
- h)
8.11
16.66
27.44
37.89
46.81
Total
Pn
(l/h)
266.59
547.57
901.97
1245.55
1538.79
4,500.00
Tabla 10.7: Clculos para diferentes nmero de etapas. Datos ejemplo
10.5
Nmero de
etapas totales
1
2
3
5
10
rea por
etapa (ra
2
)
555.00
119.22
63.98
32.88
14.77
rea
total (m
2
)
555.00
238.44
191.94
164.37
147.74
Flux promedio
(//m
2
- h)
8.11
18.87
23.44
27.38
30.45
O
4 6
N (Etapas)
8 10
Figura 10.33: Variacin del rea de UF con el nmero de etapas. Datos
del Ejemplo 10.5.
10 A. DISEO DE PROCESOS DE UF 599
Diafiltracin Intermitente: Volumen Constante
En la diafiltracin intermitente a volumen constante (Figura 10.24) se
alimenta continuamente solvente de lavado al tanque de alimentacin
y se mantiene el volumen del retenido constante, de tal manera que el
flujo de alimentacin es igual al flujo de permeado.
Considerando que el soluto de inters es totalmente rechazado por la
membrana y la impureza totalmente permeable, el balance en el sistema
del soluto que se desea eliminar, est dado por:
= -PC (10.29)
al
donde:
VR: Volumen retenido en el tanque. [L
3
].
Ci \ Concentracin de impureza en el tanque. [M/L
3
].
P: Flujo de permeado. [L
3
/t].
dado que VR es constante el flujo de permeado puede igualarse al
flujo de solvente, obtenindose la siguiente expresin:
(10.30)
donde VD es el volumen de solvente de diafiltracin.
La ecuacin 10.30 puede integrarse con los lmites,
C = C
0
VD O
C, = Ci V
D
= V
D
obtenindose la siguiente expresin:
- (10.31)
La ecuacin* anterior puede ser rearreglada expresando el flux de
permeado como:
J
= -T7 (10.32)
y combinando las ecuaciones (10.31) y (10.32) para obtener:
-JAt\
C/ = C/
0
exp -TT (10.33)
V
V
R )
dado que el flux de permeado tambin puede expresarse de la si-
guiente forma:
J = k
s
\n-~ (10.34)
al combinar las ecuaciones (10.33) y (10.34) se obtiene:
Ci = C
/0
exp -* (10.35)
V
VR
J
La ecuacin (10.35) puede ser utilizada para calcular el rea de
diafiltracin necesaria para lograr un determinado grado de eliminacin
de impurezas.
Ejemplo 10.6.- Diafiltracin intermitente a volumen cons-
tante.
Se desea purificar por diafiltracin intermitente a volumen constante
5000 / de una solucin que contiene 15% en peso de protenas y 3% de
sal (O' Sullivan et a/, 1984). El flux del sistema est dado por:
C
B
[? - h
a) Calcular el efecto sobre la pureza de la solucin de la razn del
volumen de diafiltracin a volumen de retenido o ndice de lavado.
b) Calcular el rea de diafiltracin necesaria para lograr una pureza
del 99% en un tiempo de 10 h. I
c) El volumen de solvente de diafiltracin para el inciso b).
Solucin:
Tabla 10.8: Efecto del volumen de diafiltracin sobre la concentracin
de impurezas. Datos del Ejemplo 10.6
VD/VR
0
1
2
3
4
c,
3.00
1.10
0.41
0.15
0.05
C
B
15
15
15
15
15
C + CB
18.00
16.10
15.41
15.15
15.05
Pureza
= c7+fe
0.833
0.932
0.973
0.990
0.996
a) Utilizando la ecuacin (10.31) se pueden obtener los resultados
que se presentan en la Tabla 10.8.
b) Utilizando la ecuacin (10.35) y los datos se tiene:
0.05 = exp
de donde se obtiene:
5000 /
A = 108 m
2
c) La ecuacin (10.32) puede ser usada para calcular V>, de tal
manera que:
V
D
= JAt
QH
V
D
= (201n^)(108m
2
)(10/i)
15
V
D
= 15,000 /
Diafiltracin Intermitente Repetida
Una forma alternativa de diafiltracin intermitente consiste en adi-
cionar un volumen de lquido de lavado al tanque de proceso que con-
tiene un volumen VR de solucin, y lavar hasta alcanzar nuevamente el
volumen VR. Esta operacin se repite hasta alcanzar la pureza deseada.
El balance de masa para esta operacin puede ser expresado corno-
C
^
l
7T- = , , V
DT
(10.36)
C
'
l
+ rf%
}
donde:
Ci n\ Concentracin de impurezas despus de n lavados.
(7/
0
: Concentracin inicial de impurezas.
VDT'- Volumen total de lquido de lavado empleado.
n: nmero de lavados.
VR: Volumen de retenido.
Diafiltracin Continua en Cascada
En la diafiltracin continua en cascada el lquido de lavado se adiciona
continuamente en cada etapa (Figura 10.34). Este tipo de arreglo es
til para procesar volmenes considerables o cuando por inestabilidad
del producto se requieren tiempos de operacin cortos.
Cuando la concentracin de la especie retenida es constante, existe
un flux constante en cada etapa (flujo de lquido de lavado igual al
flujo de permeado). Adems, si la membrana no retiene la impureza,
la concentracin de sta a la salida de cada etapa y en el permeado es
la misma, de tal manera que el balance de masa para la primera etapa
puede ser expresado (con Q = P) como:
(10.37)
La concentracin de soluto a la salida de la etapa n puede ser ex-
presada como:
donde:
C
n
: Concentracin de impureza en la etapa n.
Q
FCk,
F Cu
Q
\\-
FC'n
Figura 10.34: Diafiltracin continua en cascada.
Q: Flujo de lquido de lavado.
F: Flujo de alimentacin (retenido).
P: Flujo de permeado.
La ecuacin (10.38) tambin puede expresarse como:
^ Co
(10.39)
donde VD es el volumen de lavado alimentado a una etapa y VR el
volumen de retenido alimentado al sistema en un tiempo dado.
Como el flux de permeado en cada etapa est dado por:
J~
VD
J
~Tt
la ecuacin (10.39) se puede rearreglar de la siguiente forma:
At =
J
(10.40)
604 CAPTULO 10. ULTRAFILTRACli
donde A es el rea de UF por etapa.
El producto At es mnimo cuando el lado derecho de la ecuaci
(10.40) es mnimo.
De acuerdo a la ecuacin (10.39) al aumentar el ndice de lavad
VD/VR se incrementa la purificacin. De acuerdo a la ecuacin (10.4(
el rea necesaria para efectuar una determinada purificacin disminu^
al incrementar el nmero de etapas, o bien el incremento del nmei
de etapas reduce la cantidad de lquido de lavado y el rea necesar
por etapa.
Ejemplo 10.7.- Comparacin entre la diafiltracin interm
tente y la continua.
Se desea efectuar un anlisis comparativo entre la diafiltracin i
termitente y la continua para determinar que operacin requiere men
volumen de lavado (menor rea) para alcanzar un mismo porcentaje (
eliminacin de impurezas.
Solucin:
Se pueden utilizar las ecuaciones (10.31) y (10.39) para efectuar es
anlisis, definiendo las siguientes expresiones del grado de eliminad
de impurezas:
Para la operacin intermitente:
C
Io
-C
In
Para la operacin continua:
Co C
n
Co
De acuerdo a lo anterior si VDT/VR 2 el % de eliminacin
impurezas es:
Operacin intermitente:
(1 - e'
2
) x 100 = 86.5 %
100
8
Figura 10.35: Comparacin de diafiltracin intermitente y continua.
Datos Ejemplo 10.7. 1:Intermitente 2: continua 1 etapa 3: continua 2
etapas 4: continua 3 etapas.
Operacin continua 1 etapa:
1
1-
Operacin continua 2 etapas:
1 -
Operacin continua 3 etapas:
1 -
f)
3
.
x 100 = 66.7%
x 100 = 75.0%
x 100 = 78.4%
En la Tabla 10.9 se presentan los clculos para otras relaciones de
l
s
cuales se muestran en forma grfica en la Figura 10.35.
Es necesario hacer notar que VDT
es g
l volumen total de lquido de
lavado, por lo que en el caso de la operacin continua dicho volumen se
reparte equitativamente entre las etapas.
606
CAPTULO 10. ULTRAFILTRACI
Tabla 10.9: Comparacin de diafiltracin intermitente y continu
Datos Ejemplo 10.7.
VDT/VR
0
2
4
6
8
10
% de eliminacin de impurezas
intermitente
0.0
86.5
98.2
99.8
100.0
100.0
Continua
1
0.0
66.7
80.0
85.7
88.9
90.9
2
0.0
75.0
88.9
93.8
96.0
97.2
3
0.0
78.4
92.1
96.3
98.0
98.8
La operacin intermitente es la que requiere menor volumen c
lavado (rea), entonces cuando sto sea el objetivo de la operacic
debe seleccionarse este tipo de operacin.
Diafiltracin a Contracorriente
En la diafiltracin a contracorriente (Figura 10.36) es posible lograr ur
mayor purificacin con menos lquido de lavado, sin embargo, esto d
pende de la concentracin alcanzable de la especie no permeable (Fai
y Radovich, 1990).
Operaciones Combinadas: Concentracin-Diafiltracin /
Algunos caldos requieren tanto ser concentrados como lavados, en e
tos casos se requiere decidir cuando efectuar la diafiltracin. Si es i-
se inicia con el caldo inicial, el flux se maximiza, sin embargo la cant
dad de lquido de lavado tambin es la mxima bajo estas condicin
(ecuaciones 10.31 o 10.39). Por otro lado, si el caldo se concentra
valor deseado y posteriormente se lava, la cantidad de lquido de lavac
disminuye, sin embargo el flux tambin disminuir dado que ste var
inversamente a la concentracin del soluto impermeable CB (ecuacic
10.34). Estos hechos conducen a un problema de optimizacin, don<
QA. DISEO DE PROCESOS DE UF 607
Agua de
Lavado
20
Alimentacin
100 t i
1
ni mi
w
t i
1
7
J
1 50 +
Retenido
Libre de
Producto
10
50 f
Perneado
(Producto)
110
Recuperacin de Producto 97%
Dilucin del Producto 868
Figura 10.36: Diafiltracin a contracorriente. Fuente: Fane y Radovich,
1990.
vados.
la diafiltracin deber efectuarse en un punto intermedio entre la con-
centracin inicial y final de retenido.
Ejemplo 10.8.- Operaciones combinadas de UF.
Se desea concentrar 10 veces 1000 / de un caldo que contiene 2% en
peso de protena y 5% en peso de sales, de tal manera que se obtenga
una concentracin final de 20% en peso de protena. Se desea tambin
reducir la concentracin de sales al 0.05%. El flux para el sistema est
dado por la relacin experimental.
[l/h]
Encontrar el tiempo de diafiltracin ptimo.
Solucin:
Emplendola ecuacin (10.31) se puede calcular la relacin del vo-
lumen de lquido de diafiltracin a volumen del caldo.
= In
VR Ci
V
D
. 5
= In
VR 0.05
Esta relacin debe ser utilizada independientemente del volumen de
caldo VR. Por otro lado, VR depende del grado de concentracin previa
a la diafiltracin. Utilizando la expresin de flux se puede calcular el
tiempo de diafiltracin de acuerdo a la siguiente expresin:
JA
o bien,
t =
500 ln^
La ecuacin anterior puede expresarse en trminos de "X" o veces
que se concentra la solucin original de 1000 / y 2% de protena.
4.6-
t =
En la Tabla 10.10 se muestra el efecto del factor de concentracin
sobre los diferentes parmetros, y la Figura 10.37 muestra la variacin
del tiempo de filtracin en el factor de concentracin, observndose un
mnimo en X = 5 con t = 1.85 h. /
Los resultados anteriores conducen a proponer el siguiente esquema
de Concentracin - Diafiltracin:
1. Concentrar 5 veces hasta 10% de protena y 5% de sales.
2. Diafiltrar hasta 0.05% de sales.
3. Concentrar 2 veces hasta 20% de protena.
Se supone que el tiempo total de concentracin no se afecta por el
esquema de diafiltracin que se adopte.
DISEO DE PROCESOS DE UF 609
Figura 10.37: Operacin de UF combinada. Datos del Ejemplo 10.8.
Tabla 10.10: Operaciones combinadas. Datos del Ejemplo 10.8.
X
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
VR(')
1000.00
500.00
333.33
250.00
200.00
166.67
142.86
125.00
111.11
100.00
90.91
M/)
4600.00
2300.00
1533.33
1150.00
920.00
766.67
657.14
575.00
511.11
460.00
418.18
C
B
(%)
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
16.00
18.00
20.00
22.00
JA ( l / h )
1301.34
954.77
752.04
608.20
496.63
405.47
328.39
261.62
202.73
150.05
102.40
t ( h )
3.53
2.41
2.04
1.89
1.85
1.89
2.00
2.20
2.52
3.07
4.08
610 CAPTULO 10. ULTRAFILTRACII
10.5 Sumario
La ultrafiltracin se utiliza para concentrar y purificar caldos biolgico;
mediante el uso de membranas especializadas para lograr la separado
deseada.
Los equipos de ultrafiltracin presentan caractersticas distintiva
en arreglos modulares de varios tipos que operan bajo la modalidad c
flujo cruzado de la alimentacin. Las operaciones pueden ser efectuado
en forma intermitente o continua ya sea para concentrar, purificar
diafiltrar una solucin.
El diseo de los equipos de ultrafiltracin est basado en una con
binacin de la teora y la experimentacin, para estimar reas de 1<
equipos, las etapas necesarias o el tiempo requerido de un proceso.
J. PROBLEMAS 611
0.6 Problemas
i-
k
fo.l.- En la concentracin de una solucin de factor VIII antihemoflico
itilizando mdulos de fibra hueca (Mitra y Ng, 1986) se obtuvieron los
siguientes datos:
Cs(m< 7/m/)
5
10
20
30
40
50
J(ml/cm
2
- s) x 10
5
15.1
12.0
11.0
8.5
7.0
6.5
J
Estimar k
s
y CG-
10.2.- Demostrar que la concentracin de un soluto impermeable a
la cual el tiempo de diafiltracin es mnimo en un proceso combinado,
est dada por:
C =
-sG
e
donde e es la base de los logaritmos naturales.
10.3.- Se desea concentrar 75,000 / de una solucin proteica del 2
al 15% en peso y reducir su contenido de sales 5 veces. El tiempo de
proceso es de 12 horas y la expresin experimental del flux es:
J = 12 In
40^
~C~B
I
m

a) Calcular el rea mnima para una operacin intermitente a volu-
men constante.
b) Calcular el rea total para una operacin continua en cascada
con 3 etapas de igual rea.
a) Resp. 321 m
2
b) Resp. 410 m
2
10.4.- Al procesar en forma intermitente 2.9 / de un caldo que con-
tiene 23.77 g/l de B. megatheri um en una unidad de fibra hueca de
0.0316 m
2
de rea, la solucin se concentra 5.3 veces en 14mm.
a) Calcular la concentracin final del caldo.
b) Calcular el flux promedio de la operacin,
a) Resp. 0.547 / b) Resp. 319 //m
2
- h
10.5.- Una planta produce Cefamicina C mediante una fermentacin
a un ritmo de 28 lotes de 57,00 / cada semana.
El caldo que contiene slidos en suspensin se procesa en un sistema
que consta de cuatro unidades de UF de 268 m
2
cada una. El flujo de
permeado promedio que produce cada unidad es de 76 l/mi n. El coefi-
ciente de retencin de la Cefamicina C en la unidad puede considerarse
igual a cero.
Para obtener una recuperacin del 98 % de Cefamicina la operacin
se efecta en dos pasos:
i) Primero se reduce el volumen del caldo a la tercera parte.
ii) Posteriormente se diafiltra a la velocidad final de permeacin del
primer paso.
Determinar:
a) El tiempo requerido para procesar cada lote considerando un
tiempo muerto de cuatro horas por dia.
b) El flujo que es procesado por unidad.
c) El tiempo necesario para el primer paso del proceso.
d) El porcentaje de recuperacin de Cefamicina C en el primer paso.
e) El volumen de diafiltracin.
f).- El flujo de permeado por unidad en la di afilt racin.
a) Resp. 5 h/lote b) Resp. 47.5 l/mi n c) Resp. 125 mi n
d) Resp. 66% e) Resp. V
D
= 53,455 / f) Resp. JA =
74.24 l/mi n
10.6.- En una unidad tubular de UF donde se concentra a razn de
2 l/mi n una solucin que contiene 30 mg/l de una protena de peso
molecular de 300,000 Da, el flux est dado por:
J = 5 x 10~
4
I n
100 cm
3
cm
s
.6. PROBLEMAS 613
La presin de entrada a la unidad es de 2 atm. El tubo presenta un
fclimetro interno de 2 cm y una longitud de 50 cm. La cada de presin
a lo largo del tubo est dada por:
o.ooiLcy
donde:
AP: Cada de presin en atmsferas.
L: Longitud del tubo en cm.
Q: Flujo cruzado en cm
3
/s.
d: Dimetro del tubo en cm
Determinar:
a) La presin a la salida del tubo.
b) La cada de presin transmembrana.
c) El flux de permeado.
a) Resp. 0.264 atm b) Resp. 1.132 atm
146 //m
2
- h
c) Resp.
10.7.- Se desea comparar dos tipos de membranas para desalar y
concentrar una solucin de proteasas (Ghose, 1990). Los coeficientes
de retencin de las membranas son los siguientes:
Membrana
PM-10
PM-30
Soluto
Proteasas
Sales
Proteasa
Sales
Coeficiente
0.99
0.00
0.80
0.00
El volumen a procesar es de 10
2
m
3
con una concentracin de
0.1 Kg/m
3
de proteasas y 4 x 10
2
mol/m
3
de NaCO?,.
Determinar para cada tipo de membrana:
a) El volumen necesario de agua destilada para eliminar el 99 % de
sales por diafiltracin a volumen constante.
b) Las prdidas de proteasas durante la diafiltracin.
c) La concentracin de proteasas al final de la diafiltracin.
d) Las prdidas de proteasas al concentrar 10 veces la solucin dia-
filtrada.
e) El porcentaje de prdidas totales de proteasas.
Respuestas para la membrana PM-10.
a) Resp. 4.6 x 1(T
2
m
3
b) Resp. 4.5 x 10~
5
m
3
c) R
esp
.
0.0955 Kg/m
3
e) Resp. 6.69 %
10,7. BIBLIOGRAFA 615
10.7 Bibliograf a
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Comprehensive Biotechnology. Murray M.Y. (Ed.). Permagon
Press. New York. 26, 411 - 437.
Captulo 11
Electroforesis
11.1 Introduccin
Electroforesis es el movimiento de las partculas cargadas contenidas en
un medio debido a la influencia de un campo elctrico. La electroforesis
constituye una de las tcnicas ms poderosas para la purificacin de
molculas biolgicas.
Gran parte de la teora y de los equipos de electroforesis han sido
desarrollados para la separacin de protenas globulares, sin embargo
pueden ser aplicados igualmente a otro tipo de protenas, as como a
cidos nucleicos, clulas o partculas coloidales.
En la separacin de protenas por medio de un campo elctrico, la
carga y la naturaleza anfotrica de stas juega un papel fundamental.
Sin embargo, existen otros factores tanto microscpicos como macrosc-
picos que afectan el movimiento de una partcula en un campo elctrico,
que han conducido al desarrollo de diferentes formas y tcnicas para
el desarrollo de las separaciones electroforticas. Estos aspectos fun-
damentales de la electroforesis se revisan en la seccin 11.2 de este
captulo.
La electroforesis no est limitada a la escala analtica. Actualmente
existen varios tipos de equipo en diversos arreglos que permiten el uso
de esta tcnica a escala preparativa. En la seccin 11.3 se presenta una
descripcin general de este tipo de equipos.
La seccin 11.4 presenta una discusin sobre los principios bsicos
617
618 CAPTULO 11. ELECTROFORES1S
y Inicio
15 minutos
(i] | 30minutos gQ
Soluto Catinico Soluto Aninico
Figura 11.1: Electroforesis de zona en una gel anticonvectiva. Fuente:
Ivory, 1990.
vados.
del diseo de equipos de electroforesis.
11.2 Fundamentos
La forma mas sencilla de realizar una operacin de electroforesis es
el mtodo de electroforesis de zona (Figura 11.1). En este mtodo
se coloca una pequea banda de muestra de la solucin que contiene
el soluto de inters, sobre una matriz generalmente rectangular, de
celulosa, almidn, agar o poliacrilamida, la cual se encuentra inmersa en
un electrolito que sirve como bufer. Dichas matrices tienen la propiedac
de constituir medios porosos altamente hidratados que proporcionar
resistencia mecnica, y disminuyen los efectos del calor generado por e
paso de corriente al aplicar el gradiente de potencial a la celda.
En la electroforesis de zona cada componente de la mezcla se muev<
a diferente velocidad, separndose los componentes de la mezcla sobn
la matriz. Cuando esta tcnica se utiliza con fines cualitativos, despu
de un tiempo apropiado para desarrollar la electroforesis, las matrice
son teidas para observar los componentes de la muestra.
En la discusin de la operacin de electroforesis es importante con
siderar cuatro aspectos fundamentales:
La naturaleza de la carga de la partcula que se mueve en el campo
elctrico. En esta seccin se hace uso del caso de las cargas que
se presentan en las protenas globulares.
El segundo aspecto lo constituye el estudio de los parmetros
ms importantes para describir la velocidad de migracin de la
partcula, que es el campo de estudio de la teora electrocintica.
Los fenmenos de dispersin de la muestra que se observan en las
operaciones electroforticas, constituyen el tercer aspecto.
El cuarto aspecto se refiere a las tcnicas y diversas formas en
que es posible realizar una operacin electrofortica.
L 1.2.1 Carga y Punto Isoelctrico de las Prote-
nas
3n las protenas su carga se origina principalmente de la ionizacin de
ms numerosos grupos amino y carboxilo. Los grupos amino 7V/ /
2
sn medio ambientes cidos son protonados produciendo grupos amo-
aio TV.///. Los grupos carboxlicos COOH en medios ambientales
bsicos son ionizados para formar grupos carboxilatos COO~.
Tal como se muestra en la Figura 11.2, la carga neta de una protema
depende entre otros factores del pH al que sta se encuentre. A un pH
relativamente bajo existen ms grupos NH^ y COOH y la protena
tiene una carga neta positiva; a un pH relativamente alto la protena
tiene ms grupos NH< y COO~ y se encuentra cargada negativa-
mente. Existe un pH particular para cada protena donde la carga neta
de sta es cero, a este pH se le conoce como punto isoelctrico.
La carga que adquiere una protena en determinado pH, as como
el punto isoelctrico de sta, son dos propiedades que se utilizan para
la correcta separacin electrofortica de protenas.
11.2.2 Teora Electrocintica
La velocidad de migracin de un soluto a travs de un lquido conductor
por la accin de un campo elctrico, despreciando efectos gravitacio-
nales y difusivos, est influenciada por algunos fenmenos fsicos mi-
620
CAPTULO 11. ELECTROFORESIS
+ 10
8.
1
-1 0
4 e
PH
Figura 11.2: Cambio de la carga neta de un protena con el pH.
croscpicos como: la carga de la partcula, la fuerza de arrastre que se
opone al movimiento de la partcula, y las fuerzas de relajacin y de re-
tardamiento que se producen en el ambiente inico que rodea al soluto.
La teora electrocintica que ha sido desarrollada para el tratamiento
de estos aspectos ha conducido a la elaboracin de varios modelos, los
cuales varan en su grado de complejidad. Dos modelos bsicos de gran
utilidad son:
I
- El modelo de una esfera cargada sumergida en un medio continuo.
- El modelo de la doble capa.
Modelo de una Esfera Cargada Sumergida en un Medio Con-
tinuo
Un modelo sencillo para el tratamiento de la electroforesis consiste en
considerar a la partcula de soluto, como si se tratara de una esfera
sumergida en un medio continuo de solvente.
Un balance de las fuerzas que actan sobre la partcula cuando sta
se mueve a una velocidad constante (en equilibrio), despreciando los
efectos difusivos y gravitacionales, establece que la fuerza que acta
sobre la partcula debida al campo elctrico, es igual a la fuerza de
arrastre de la partcula, es decir:
FK = -F
E
(11.1)
La fuerza de arrastre FK en el caso de un flujo viscoso lento alrededor
de una esfera (flujo reptante) est dada por (Bird et a/, 1964):
(11.2)
donde:
v : Velocidad de la partcula. [L/t].
i: Viscosidad lquido. [M/L t].
d: Dimetro de la esfera. [L].
La fuerza elctrica FE es proporcional tanto al campo que acta
sobre la partcula as como a su carga, de tal manera que:
(11.3)
/' o
donde:
z\\ Valencia de la partcula o carga puntual.
F\ Constante de Faraday. [96,500 Coulombio/Mol-equiv].
~
0
\ Nmero de Avogadro. [,/V'
oneJ
- ].
" iMo equiv*
E: Campo elctrico. [Voltio /cm].
Si la partcula est en equilibrio es posible combinar las ecuaciones
(11.1), (11.2) y (11.3) para obtener:
En la expresin anterior N
0
puede ser expresada en funcin de la
constante de Boltzman ks y la constante de los gases ideales R para
obtener:
622 CAPTULO 11. ELECTROFORESIS
1
De acuerdo a la ecuacin de Stokes-Eistein para un flujo reptante
alrededor de una esfera, la difusividad DAB
es
t dada por:
Combinando las ecuaciones (11.5) y (11 .6) se tiene:
La movilidad m de una partcula en un campo elctrico se defin
como la velocidad de la partcula por unidad de campo elctrico,
m=~ (11.8
En este caso particular del modelo de esfera, la movilidad est dad,
por:
Se ha observado experimentalmente que la movilidad de una part
cula no depende slo de su carga intrnseca, como predice modelo d
esfera en la forma de la ecuacin (1 1.9). El ambiente inico que s^ form
alrededor de la partcula en solucin tiene una influencia importan!
sobre la movilidad y las propiedades electrostticas de la partcula. I
modelo de la doble capa para interfases slido-lquido electrolito, h
sido empleado para explicar estos efectos.
Modelo de la Doble Capa
El modelo de la capa doble desarrollado en base a la teora de los ele
trolitos fuertes de Debye y Hckel, permite visualizar las interaccin
de una partcula slida cargada, con su microambiente inico.
Las partculas como las protenas cuando se encuentran present
en soluciones de electrolitos desarrollan cargas. Estos grupos cargad'
atraen especies de la solucin que presenten cargas contrarias (coione
contraiones, molculas polares o molculas con dipolos inducidos, coio-
nes solvatados o contraiones solvatados). El modelo de la doble capa
propone que este conjunto de cargas genera dos regiones o capas con
diferente grado de movilidad (Figura 11.3).
En la primera regin (capa de Sterm) la atraccin que ejerce la
partcula sobre las especies es ms fuerte, formando una capa altamente
hidratada, relativamente fija, de un espesor aproximado de 10 A Esta
capa que envuelve a la partcula misma constituye la superficie de corte
del complejo formado. Se considera a esta capa la responsable de la
disminucin del campo elctrico intrnseco de la partcula.
Dependiendo de la carga neta que se genere dentro de la superficie
de corte por accin del rearreglo de cargas, en las proximidades de
la superficie de corte se genera una segunda capa de carga contraria
(cuya naturaleza no es rgida), constituida por molculas del solvente
ligeramente ligadas y iones totalmente hidratados. A esta segunda capa
se le conoce como capa difusa o capa de Gody-Chapman.
El modelo de la doble capa permite interpretar el hecho que la
velocidad de migracin de una partcula cargada en un campo elctrico,
es proporcional al potencial Z de la partcula y no a su carga intrnseca.
El potencial Z es el potencial elctrico medido en la superficie de corte
de la partcula. Actualmente no existen suficientes bases tericas que
permitan calcular el potencial Z en funcin de la carga de la partcula
y su determinacin es de carcter emprico.
El radio de la capa difusa tambin tiene una influencia importante
sobre la movilidad de la partcula. Utilizando la teora de Debye-Hckel
ha sido calculado el radio medio de la capa difusa o la longitud de Debye
A. Esta longitud vara inversamente con la raz cuadrada de la fuerza
inica / (Castellan, 1971), es decir,
Aoc 4= (11.10)
\/7
donde la fuerza inica es una medida de la concentracin y valencia
de los iones que rodean la partcula, y est dada por:
= * E
c
--?
624
Superficie Cap* interna c*p* externa
cargada \ de de Helmholtz
> > Helmholtz
Capa de Stern
Superficie de
corte
Agua de
Hidratacin
Capa difusa de
Gouy-Chapman
Distancia
Figura 11.3: Esquema de la doble capa cerca de una superficie cargada.
Adaptada de: Ivory, 1990.
vados.
donde:
d'. Concentracin de la especie i.
Z{\ Valencia de la especie i.
En la mayora de los casos prcticos A es menor a 1000A. Para
analizar los efectos del espesor de la capa difusa sobre la movilidad de
la partcula, es conveniente considerar tres casos particulares:
- Para fuerzas inicas bajas, es decir a concentraciones salinas bajas,
la capa difusa es grande pero muy diluida en contra iones, de tal
manera que su presencia puede ser ignorada.
- En ambientes de fuerzas inicas altas, como los caractersticos de los
lquidos fisiolgicos (0.15M), el espesor de la capa difusa es muy
bajo (~ 2 A) y su presencia tambin puede ser ignorada.
- Entre los dos extremos anteriores, se puede considerar la situacin
en la cual el espesor de la capa difusa es intermedio.
Modelo de la doble capa: Movilidad en soluciones diluidas.-
Para soluciones diluidas la movilidad en funcin del potencial Z
puede calcularse por medio de un balance de fuerzas sencillo, tal como
el desarrollado para obtener la ecuacin (11.9), de tal manera que en
equilibrio
F
K
= -F
E
(11.12)
siendo FK la fuerza de arrastre sobre la partcula esfrica formada
por la superficie de corte, de tal manera que:
F
K
= 3 TTf d
c
v (11.13)
La fuerza elctrica FE que acta sobre la partcula es proporcional
al campo que acta sobre sta, y al potencial Z que es una medida de
la carga aparente de la misma.
De acuerdo con la Ley de Coulomb la fuerza entre dos cargas est
dada por:
r
A (11.14)
en este caso:
q\: Carga aparente de la partcula, [coulombio].
qi: Carga correspondiente al campo, [coulombio].
r: Distancia entre las cargas, [m].
e: Constante dielctrica del medio. [Coulombio
2
/new m
2
].
El potencial Z est dado por:
(11.15)
donde r
c
es el radio de corte de la partcula y q\ es la carga neta de
la partcula en la superficie de corte.
El campo aplicado a la partcula puede ser expresado como:
-
2
e r
(11.16)
combinando las ecuaciones (11.14), (11.15) y (11.16) se obtiene:
F
E
= etr
c
E (11.17)
y las ecuaciones (11.12), (11.13) y (11.17) conducen a:
6? r/t; =6Ê (11.18)
de tal manera que la movilidad m = v/E est dada por la ecuacin
conocida como de Hckel,
m =
_.
67T/
(11.19)
Esta movilidad es menor a la esperada si slo se considera la carga
real de la partcula, y es aplicable cuando la relacin de radio de corte
a longitud Debye es muy pequea (r
c
/X 1).
Ejemplo 11.1.- Clculo del campo que genera un protn.
Estimar el campo sobre la superficie de un protn utilizando los
siguientes datos:
r =
1
6
1.6 x 10
I9
coulombio
31 x 1(T
10
m
= 9 x 10
new m
coul
2
Solucin:
El campo est dado por la ecuacin siguiente:
E= ' '
sustituyendo los datos se tiene:
E = 9 x 10
- m'
coul
2
7 = 1.5 x 10*
= 1.5 x 10
e
V_
m
V_
cm
1.6 x 10~
19
(31 x 10-
10
)
2
m
2
El campo que produce el protn debido a la relacin de la carga con
la distancia es muy grande. Una batera de 100 V produce un campo
de slo 10 V/cm.
Modelo de doble capa: Movilidad en soluciones de con-
centracin intermedia y alta.- Cuando la capa difusa presenta una
longitud intermedia en el rango,
0.01 < -f < 1000
628
1.5
0.5
.01
Fuerza Inica
10 100 1000
Figura 11.4: Variacin de la movilidad con el radio de la capa difusa,
se observa experimentalmente una variacin en la movilidad predi
cha por la ecuacin (11.19), tal y como se representa en la Figura IIA
Esta variacin ha sido correlacionada utilizando modelos basados e
la ecuacin de Henry, la cual establece que la movilidad de la partcul
adems de ser funcin del potencial Z y de la fuerza de arrastre, tambi
es funcin de la relacin del radio de corte a la longitud de Debye. E
decir,
m =
67T/I
(11.2
Algunos modelos predicen reducciones en la movilidad de Hckel c
hasta 60% en el rango aproximado de
0.6 < Y < 6
A
Para relaciones de r
c
/X 1, los modelos predicen una soluci<
asinttica donde:
(i) =
3/ 2
de tal manera que:
ef
m =
*
D7T// 2
m = -^- (11.21)
47T/X
que es una movilidad 50% mayor que la predicha por la ecuacin de
Hckel.
A nivel microscpico esta variacin de la movilidad ha sido expli-
cada utilizando el modelo de doble capa para proponer otros efectos
conocidos como:
- Fuerza de relajacin.
- Fuerza de retardamiento.
Cuando la partcula emigra en direccin opuesta a su carga neta, se
presenta una distorsin de la capa difusa (Figura 11.5). Los contraiones
de la capa difusa tienden a emigrar en direccin opuesta creando un
campo que se opone al movimiento de la partcula. La fuerza opuesta
al movimiento de la partcula que se genera, se conoce como fuerza de
relajacin.
La fuerza de retardamiento se origina por el movimiento de sol-
vente provocado por el movimiento de contraiones de la capa difusa,
generndose un esfuerzo viscoso adicional sobre la superficie de corte
de la partcula.
Los modelos electrocinticos en general han presentado dificultades
para predecir con exactitud los resultados de las separaciones electro-
forticas. Sin embargo, han servido de base para generar diversos mo-
delos empricos de amplio uso.
11.2.3 Fenmenos de Dispersin
Cuando se realiza una operacin de electroforesis se requiere que los
solutos presentes en la solucin de inters se separen formando ban-
das bien definidas, es decir se obtenga una resolucin apropiada. Sin
embargo, existen varios fenmenos que provocan la dispersin de la
Carga neta +
O
Ctodo (-)
t
E
Campo
nodo (+)
R
Fuerza de
Relajacin
Figura 11.5: Representacin esquemtica del efecto de relajacin.
Adaptada de: Rudge y Ladisch, 1986.
Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. Copyright 1986. Todos los
muestra, trmino que engloba tanto los efectos de difusin molecular,
como los efectos microscpicos de mezclado que se agrupan en la lla-
mada difusividad de remolino. Algunos de estos efectos se describen a
continuacin.
Difusin
En una electroforesis generalmente existe algo de dispersin de la mez-
cla debida a la difusin molecular, sin embargo este fenmeno normal-
mente no es la causa principal de la dispersin. De acuerdo a Jorgenson
y Lukacs (Rudge y Ladisch, 1986), la desviacin estndar de una mues-
tra dispersada slo por difusin est dada por:
a = T/W
AB
t (11.22)
En el caso de protenas la difusin puede ser estimada empleando
la ecuacin de Polson (Horstmann y Chase, 1989).
D
"
= 9Axl
~
n
m&r>
(1L23)
donde:
MA> Peso molecular del soluto.
//: Viscosidad de la solucin. [Kg/m s].
Ejemplo 11.2.- Dispersin de protenas.
Para la electroforesis a 25C de ovalbimina (PM= 45,000), ImG
(PM=150,000) y colgeno (PM= 345,000), en un medio cuya viscosidad
es de 0.001 Kg/m s, se desea estimar:
a).- La variacin de la dispersin por difusin con el tiempo.
b).- El tiempo de doblado del ancho original de la banda de muestra
que es de 0.08 era.
Solucin:
632 CAPTULO 11. ELECTROFORE
Tabla 11.1: Clculo de difusividades de protenas. Ejemplo 11.2.
Protena
Ovalbmina
ImG
Colgeno
PM
45,000
150,000
345,000
Difusividad (cm
2
/ s)
7.88 x 10-
7
5.27 x 10~
7
3.99 x 1Q-
7
Tabla 11.2: Clculos de dispersin. Ejemplo 11.2.
i(h )
0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
Dispersin (cm)
Ovalblmina
0.000
0.038
0.053
0.065
0.075
0.106
0.130
0.151
0.168
ImG Colgeno
0.000
0.031
0.044
0.053
0.062
0.087
0.107
0.123
0.138
0.000
0.027
0.038
0.046
0.054
0.076
0.093
0.107
0.120
a).- Mediante las ecuaciones (11.22) y (11.23) se puede calcul
dispersin. En la Tabla 11.1 se presentan los resultados de los cl<
de difusividades de acuerdo a la ecuacin (11.23).
En la Tabla 11.2 se presentan los resultados de los clculos <
dispersin en funcin del tiempo. Estos resultados se muestran en f<
grfica en la Figura 11.6. Se puede puntualizar que conforme aurr
el tamao de la protena, el coeficiente de dispersin disminuye
dispersin es menor.
b).- De acuerdo a los resultados anteriores, si la muestra con
ImG, sta tardar alrededor de 1.8 h para doblar el ancho inicial,
muestra contiene ovalblmina el doblado de la longitud de la ban
1
0.16-
0.14-
0.12-
0.10-
0.08-
0.06-
0.04-
0.02-
0
0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5
Tiempo (h)
Figura 11.6: Dispersin de protenas por difusin en electroforesis. 1)
Ovalbmina 2) ImG 3) Colgeno.
634 CAPTULO 11. ELECTROFORESlS
efecta en una hora aproximadamente.
Una forma de disminuir el grado de dispersin en una operacin
intermitente consiste en disminuir el tiempo de operacin.
Electrosmosis
Otra causa de dispersin en una operacin electroforetica es la elec-
trosmosis. Esta es el resultado del movimiento de la capa difusa de
iones en la proximidad de la superficie cargada fija de la celda por
accin del campo elctrico, lo que se traduce en el desplazamiento neto
de solvente hacia uno de los polos (en direccin opuesta al movimiento
electrofortico). Este efecto microscpico puede alterar el patrn de
flujo macroscpico dependiendo de la configuracin de la celda electro-
fortica, alterando el desplazamiento de la muestra.
Efectos Inicos Regulatorios
La diferencia de movilidad entre el soluto de inters y los iones del
bufer donde se efecta la electroforesis, puede generar dispersin du-
rante la electroforesis. Para atenuar este efecto en la interfase delantera
la muestra debe presentar una menor movilidad que el bufer, mientras
que en la posterior es conveniente que la movilidad de la muestra sea
mayor.
Gradientes de Conductividad
Si la conductividad de la muestra es mayor que la del bufer, cuando
el campo se incrementa arriba de un valor crtico, puede provocarse
una distorsin en "forma de puntas" de la interfase. El bufer puede
presentar una menor conductividad que la muestra por efecto de los
iones que contiene.
Sobrecalentamiento: Efectos Trmicos
Cuando una, corriente elctrica se hace pasar a travs de un medio con
una determinada resistencia parte de la energa se convierte en calor,
fenmeno conocido como efecto de Joule. En una operacin electro-
fortica el calor generado es proporcional al cuadrado del campo apli-
cado y al cuadrado del espesor del gel, de tal manera que la cantidad
de muestra est limitada por este espesor.
La existencia de gradientes trmicos puede desnaturalizar solutos
lbiles, daar el gel o estimular la evaporacin de solvente.
Sobrecalentamiento: Efecto de Conveccin Libre
Si la electroforesis se desarrolla en un medio lquido en ausencia del gel
de soporte, los gradientes de temperatura pueden originar movimientos
convectivos libres debido a la accin de la gravedad sobre los gradientes
de densidad que se originan. Esta es la principal causa de mezclado en
electroforesis. El grado de conveccin se caracteriza por el nmero
adimensional de Rayleigh Ra el cual est dado por:
f a \ z
donde:
/: Longitud caracterstica de la geometra del aparato de electroforesis
(en una celda es el espesor del gel). [L].
g: Aceleracin de la gravedad. [L/t
2
].
j ,: Viscosidad del medio. [M/L t].
a: Difusividad trmica del medio. [L
2
/t].
: Gradiente de densidad en la direccin z. [M/L
4
].
Entre menor sea el valor Ra menor es el efecto de la conveccin
natural. De acuerdo con la ecuacin (11.24) sto se puede lograr de
varias formas. La ms empleada a nivel laboratorio es el incremento de
la viscosidad mediante el uso de geles de soporte.
En equipos industriales que operan en forma continua se utilizan
membranas porosas para separar regiones de electroforesis de diferente
pH. Esto tiende a disminuir la conveccin al disminuir la longitud ca-
racterstica / .
11.2.4 Medios y Modos de la Electroforesis
La electroforesis ha evolucionado en forma considerable a partir de los
trabajos pioneros de Ame Tiselius en 1937 y el desarrollo de la teora de
los electrolitos fuertes de Debye y Hckel en 1923. Actualmente existen
diferentes medios y formas para efectuar una separacin electrofortica
(Ivory, 1990).
Medios Anticonvectivos
Se han utilizado diferentes medios para realizar las operaciones electro-
forticas. Inicialmente stas se realizaban en medio lquido en celdas
especiales (Lehninger, 1989). En 1939 fueron introducidos los primeros
materiales anticonvectivos como: papel filtro, fibra de vidrio y almidn
granulado.
A mediados de los cuarenta fue introducido el uso de geles cuyo
comportamiento es superior a los materiales anteriores por su menor
tamao de poro y menor carga superficial. A partir de 1959 fueron
introducidos los geles de poliacrilamida (PAG de sus siglas en ingls) y
de agarosa.
Los geles de agarosa tienen una estructura porosa altamente hidra-
tada con poca carga que asemeja un medio lquido. Este tipo de gel es
muy utilizado en anlisis de cidos nucleicos.
Los geles de poliacrilamida estn formados de polmeros ms entre-
cruzados que producen poros ms pequeos. Este gel es muy empleado
en el anlisis electrofortico de protenas, tcnica conocida como PAGE
(de las siglas en ingls de electroforesis en gel de poliacrilamida).
Una variante de la tcnica PAGE es la PAGE-SDS. En sta se agrega
sulfato de dodecil sodio a la solucin amortiguadora que provoca la
desnaturalizacin de las protenas. Las cadenas desnaturalizadas mi-
gran a una velocidad proporcional al logaritmo de su peso molecular
PM,
log(PM) = A- Bm
donde A y B son constantes y m es la movilidad.
[1.2. FUNDAMENTOS 637
Modos de la Electroforesis
En un proceso electrofortico la velocidad de migracin de las especies,
depende de su carga, tamao y forma, y de las propiedades del medio.
La resolucin que se puede lograr considerando slo estos parmetros ha
sido mejorada imponiendo a los sistemas restricciones adicionales como
el uso de geles porosos que incrementan la separacin por filtracin o la
utilizacin de gradientes de pH que orientan a las especies de acuerdo
a su punto isoelctrico. Este tipo de modificaciones ha dado origen a
una amplia gama de tcnicas electroforticas analticas y preparativas,
cuya clasificacin es difcil, pero que en trminos generales se pueden
dividir en (Bier et al, 1983):
- Electroforesis de interfase mvil (MBE).
- Electroforesis de zona (ZE).
- Isotacoforesis (ITP).
- Enfoque isoelctrico (IEF).
Electroforesis de interfase mvil.- La electroforesis de interfase
mvil o electroforesis libre fue desarrollada por Ame Tiselius en 1937,
logrando por primera vez resolver las globulinas sanguneas en los tipos
a, 3 y 7. Esta tcnica utiliza una celda en forma de tubo en U
(Figura 11.7). Inicialmente se coloca dentro de la celda la solucin
que contiene la mezcla proteica en el bufer adecuado, posteriormente
se aade una columna de solucin con bufer. Al aplicarse el campo
elctrico cada protena migra, de la muestra a la zona de bufer, for-
mando una interfase. Cada banda se detecta en funcin de la velocidad
de migracin de la protena particular, utilizando el ndice de refraccin.
La protena ms rpida se coloca al inicio del patrn de migracin en
el brazo ascendente y la ms lenta al final del brazo descendente de la
celda.
La separacin completa de los componentes de la mezcla no puede
ser alcanzada mediante este tipo de electroforesis, slo el soluto ms
rpido puede obtenerse en forma pura.
\
Buffer
Frontera
Ascendente
Frontera
Inicial
Frontera
Descendente
Figura 11.7: Representacin esquemtica de la celda de Tieselius. Elec-
troforesis de interfase mvil.
Compartimiento
.X del nodo
1-5
Electrolito de
Alta Movilidad
1-4 1-3 1-2\ / 1
Fase No.
Frontera de Fase No.
Electrolito de
Alta Movilidad
No. de Componentes
Figura 11.8: Electroforesis de interfase mvil de cinco componentes
inicos, (antes y despus). Tomada de: Ivory, 1990.
vados.
En los desarrollos recientes la electroforesis de interfase mvil acta
como una celda donde la banda de muestra aplicada es semi-infinita,
de tal manera que slo pueden separarse solutos de igual carga. La
colocacin de la muestra depende del polo hacia al que va migrar.
Para solutos con carga positiva deber colocarse en el nodo. El resto
de la celda se carga con electrolito rpido que permanezca siempre al
frente de la migracin y permita disminuir la dispersin de la muestra
(Figura 11.8).
Electroforesis de zona.- En la electroforesis de zona descrita al
inicio de la seccin 11.2, la muestra es pequea y diluida, entonces es
posible lograr la su resolucin completa. Este tipo de electroforesis
puede ser empleada para resolver mezclas de cargas diferentes.
Isotacoforesis.- En una separacin por isotacoforesis la muestra se
inserta entre un electrolito rpido y uno lento (Figura 11.9), formando
una banda finita. En estado estacionario todos los constituyentes se
mueven a la misma velocidad, en un orden impuesto por sus mov-
Electrolitode Baja
Movilidad
Electrolitode
Alta Movilidad
Frontera de Fase No. 5 4 3 2 1
Electrolito de Baja |
Movilidad
II5
4l HFl Un m Electrolito de
' ' ' ' ' ' Alta Movilidad
Componente No. 5 4 3 2 \ / 1
Fase No.
Figura 11.9: Isotacoforesis de cinco especies inicas(antes y despus).
Tomada de: Ivory, 1990.
vados.
lidades, con la ventaja de que cada banda contiene slo un tipo de
electrolito (el ancho de la banda es una medida de la concentracin de
la especie en la muestra original).
Enfoque isoelctrico.- Cuando la separacin electrofortica es por
medio de enfoque isoelctrico (IEF) se requiere un gradiente de priven
el medio donde se realiza la electroforesis (Figura 11.10). En el medio
continuo de pH las molculas como las protenas se ordenan conforme
a su punto isoelctrico, es decir al migrar llegan a un punto donde su
carga neta es cero y por lo tanto su movilidad es nula.
El enfoque isoelctrico es una operacin gobernada por el equilibrio,
mientras que las otras operaciones son controladas por la velocidad de
transporte.
11.3 Equipos
Actualmente existe un buen nmero de equipos para realizar electro-
foresis a escala preparativa, en la Tabla 11.3 se presentan las principales
11.3 . EQUIPOS 641
nodo /"p\ ^ ^ f\ Ctodo
\-S
nodo Ctodo
pl: Punto Isoelctrico
Figura 11.10: Enfoque isoelctrico de solutos polianfolticos (antes y
despus). Tomada de: Ivory, 1990.
vados.
caractersticas de algunos de ellos.
A nivel laboratorio y en algunos equipos a escala preparativa, la
forma que se ha empleado para minimizar el problema de la dispersin
de la muestra por conveccin, ha sido el uso de geles como medios
de soporte. Estas tcnicas han sido caracterizadas como tediosas y
costosas, debido que al finalizar la operacin se requiere recortar las
regiones de gel donde se localizan las bandas y extraer por electroelucin
o algn otro mtodo los solutos de inters.
Para evitar el uso de geles se han diseado equipos donde la electro-
foresis se realiza en medios lquidos, y donde la longitud caracterstica
/ del nmero de Rayleigh se reduce empleando pelculas delgadas o
mediante el uso de membranas. Otro tipo de equipos combina la elec-
troforesis con la cromatografa para eficientar las separaciones.
De manera general los diversos equipos de electroforesis existentes
se pueden dividir en tres tipos:
Equipos de flujo libre.
Equipos de flujo libre con recirculacin.
Equipos electrocronialogricos.
642
Tabla 11.3: Caractersticas de algunos equipos de electroforesis.
Tipo
1. Compaa
2. Nombre
3. I nt roducci n
4. Precio dU.
5. Tcnicas
Electroenfoque
SDS-PAGE
PAGE
A garosa
Celes
Isotacoforesis
Zona
Escaln de campo
6. Operacin
7. Estabilizacin
del flujo
Rotacin
Membranas
Pelcula
Gel
8. Dimensin de
U celda
Geometra
Seccin
transversal
Longitud de
separacin
9. Campo Tpico
10. Tiempo de
operacin tpico
11. Tamao tpico
de la muestra
12. Produccin tpica
13. Enfriamiento
14. Detector
15. Colector de fracciones
Nmero de fracciones
Proceso de coleccin
Pelcula con
flujo libre
Bender y Hobei n
El phor V aP 22
1987
80,000
Si
No
No
No
No
Si
Si
Si
Cont i nua
No
No
Si
No
Rectangular
250 mm
2
10 cm
100-300 V / cm
Cont i nuo
25 X 10
6
ce/ m
500 X 10
6
ce/ / /
Si
UV / V i s, V ariable
Si
90
Lento
Pelcula
con flujo l i bre
Hi r s chmann
AGE 710
1986
140,000
No
No
No
No
No
No
Si
No
Cont i nua
No
No
Si
No
Rectangular
60 mm
4 cm
100-150 V / cm
Cont i nuo
5 X 10
6
ce/ m
100 x 10
6
ce/ / / i
Si
UV / V i s V ar.
Si
35
Rpido
Tipo
t ambor
Bio-Rad
Rotofor Prep IEF
1987
7,000
Si
No
No
No
No
Si
No
No
I nt er mi t ent e
Si
Si
No
No
Anul ar
627 mm
2
12.5 cm
50-100 V / cm
3-5 h
100 pg - 1 g
0.2-500 mg/ da
Si
No
Si
20
Rpido
Pelcula
con recirc.
Pr ot ei n Techs
RF3
1990
30,000
Si
No
No
No
No
Si
No
No
I nt ermi t ent e
No
Si
Si
No
Rectangular
150 mm
2
4 cm
250-375 V / cm
2h \
\
mg-g protena
5-500 mg/ corr.
Si
No
SI
30
Rpido
Adaptada de: Eby, 1991.
Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co.
reservados.
Copyright 1991. Todos los derecho:
11.3 . EQUIPOS 643
11.3.1 Equipos de Flujo L ibre
En los equipos de flujo libre a diferencia de los equipos que presentan
recirculacin, el medio no se recircula. La estabilizacin de los flujos
se logra empleando distancias pequeas de migracin o estabilizacin
rotacional. Existen dos arreglos bsicos de este tipo de equipo:
- Tipo pelcula delgada.
- Tipo anular.
Pelcula Delgada
Los equipos de electroforesis de pelcula delgada han sido estudiados
desde los aos cincuenta (Hamel y Hunter, 1990). En tales sistemas se
inyecta una corriente continua y puntual de muestra sobre una pelcula
de bufer que se mueve verticalmente en flujo laminar entre dos placas
(Figura 11.11). En las partes laterales de este arreglo se sitan los
electrodos en forma de placas. La muestra emigra horizontalmente
conforme pasa por la cmara. Los solutos forman bandas discretas de
acuerdo a sus movilidades electroforticas, y son eludos continuamente
por el fondo de la cmara y colectados por medio de una bomba de canal
mltiple. El calor generado es removido por medio de refrigerantes que
enfran las paredes laterales.
Uno de los usos principales de este tipo de equipos es en la sepa-
racin de clulas y virus, partculas sub-celulares y componentes de
membrana.
Electroforesis Anular
La electroforesis de flujo libre tambin se ha conducido en arreglos anu-
lares basados en el diseo de Philpot-Harwell (Figura 11.12). En estos
sistemas el cilindro interno es fijo y funciona como ctodo, mientras
que el exterior gira a velocidades hasta de 150 rpm. Este movimiento
permite neutralizar los efectos convectivos radiales.
La muestra y el bufer son inyectados en la base del ani l l o y se mueven
axialmente hacia el colector ml t i pl e situado en la parte superior.
644
z (lateral)
' y (transversal)
x (axial)
Alimentacin
Buffer
Electrodos
Figura 11.11: Esquema de un equipo de electroforesis de flujo continuo
en una celda de electroforesis. Tomada de: Gobie y Ivory, 1986.
11.3 . EQUIPOS 645
Fracciones
Recuperadas
Anillos colectores
de fracciones
Campo elctrico
transverso
Anillo de carga
de muestras
Entrada del
Buffer
Figura 11.12: Esquema de un equipo de flujo libre en un arreglo anular.
Tomada de: Hamel y Hunter, 1990.
646
Figura 11.13: Celda de electroforesis tipo tambor rotatorio. A) Entrada
y salida de refrigerante B) nodo C) Cmara de electroenfoque D)
Ctodo E) Brazo de enfriamiento F) Venteo G) Cubierta. BioRad
11.3.2 Equipos de Flujo L ibre con Recirculacin
En los equipos de flujo libre con recirculacin el medio lquido donde se
efecta la electroforesis se recircula continuamente. Existen diferentes
tipos de arreglos para estos equipos como:
- La celda tipo tambor.
- Los equipos de pelcula delgada con recirculacin.
- Los equipos de pelcula delgada con recirculacin desplazada.
Celda Tipo Tambor
La celda tipo tambor (Figura 11.13) consta de una cmara cilndric
dividida en 20 compartimientos por medio de 19 discos de membrana
de polister, con poros de 10 /i, y gira a 1 j -pni.
Este tipo de equipo es operado con gradientes de pH, de tal maner
que la operacin es conocida como enfoque isoelctrico con recirc
lacin (RIEF de sus siglas en ingls). La rotacin de la cmara y la
membranas permiten enfocar apropiadamente las zonas. Cada cmar
posee un'a posicin para alimentar la muestra y una para descargar!;
lo cual se efecta por medio de vaco.
11.3 . EQUIPOS 647
El campo elctrico se provee por medio de dos electrodos situados
en los extremos de la cmara. El enfriamiento se realiza por medio de
un tubo de cermica por el cual fluye el lquido de enfriamiento por el
interior del tambor.
Pelcula Delgada con Recirculacin
Una variante de los equipos de enfoque isoelctrico con recirculacin
separa fsicamente las funciones de enfriamiento y estabilizacin del
fluido (Figura 11.14). En este arreglo la solucin que va a fraccionarse
es recirculada continuamente entre la celda de canales mltiples donde
se realiza la electroforesis y un intercambiador de calor de canales
mltiples. El flujo en la celda es laminar ya que est dividida por
membranas formando canales de flujo muy delgados. La operacin se
efecta utilizando un gradiente de pH sobre la cmara y slo el 6% de la
muestra permanece en la cmara en un tiempo dado. Tpicamente una
separacin se realiza despus de cientos de ciclos en aproximadamente
dos horas.
Pelcula Delgada con Recirculacin Desplazada
Una variante del arreglo fsico anterior empleado en electroforesis de
zona (Figura 11.15), es la electroforesis en pelcula delgada con recir-
culacin desplazada. En este sistema la muestra es inyectada conti-
nuamente en un canal de la celda y reinyectada en forma desplazada,
de tal manera que su migracin neta es alterada. Los solutos ms
lentos tendern a migrar en el sentido del desplazamiento de la ali-
mentacin, cuando este desplazamiento sea lo suficientemente grande;
y en direccin contraria cuando el soluto tenga una movilidad tal que lo-
gre tener un desplazamiento mayor que el provocado por el movimiento
de la recirculacin.
11.3.3 Equipos Electrocromatogrficos
Otra alternativa para disminuir los problemas convectivos en la elec-
troforesis son los sistemas que utilizan medios con partculas como las
648
CAPTULO U. ELECTROFORESIS
Figura 11.14: Esquema de un equipo electrofortico con recirculacin.
1) Bomba 2) Celda de enfoque 3) Intercambiado!
1
4) Monitor de pH 5)
Monitor UV 6) Control de la bomba 7) Interfase de datos 8) Centro de
carga 9) Control UV Adaptado de: Bier, 1986.
11.3 . EQUIPOS 649
Alimentacin
Purga
uuuuuu
Componente Seccin de Componente
de Baja cambio d
e
Alta
Movilidad Movilidad
Figura 11.15: Esquema de un equipo electrofortico de pelcula delgada
con recirculacin desplazada. Tomada de: Ivory, 1990.
vados.
usadas en cromatografa. Su desarrollo actual es a nivel de prototipos
y se pueden mencionar dos tipos:
- Los equipos de Electrocromatografa anular rotativa continua.
- Los equipos de electrocromatografa de efectos opuestos.
Electrocromatografa Anular Rotativa Continua
En los equipos de electrocromatografa anular rotativa continua (CRAE
de sus siglas en ingls) (Figura 11.16), la muestra se alimenta en forma
continua en un punto de un lecho anular, y se eluye mientras el lecho
rota. El campo es aplicado axialmente.
Electrocromatografa de Efectos Opuestos
En la electroforesis cromatogrfica de efectos opuestos (CACE de sus
siglas en ingls), el campo elctrico es antiparalelo al movimiento con-
vectivo forzado, y se desarrolla en una columna empacada de cro-
matografa por pxclusin, que presenta dos secciones de diferente re-
solucin (Figura 11.17). La parte superior de la columna se empaca
650
CA P TVLO 11. ELECTROFORESIS
Alimentacin
Multicomponente
V = reo
Figura 11.16: Esquema de un equipo de electrocromatografa anular
rotativa continua. Tomada de: Hamel y Hunter, 1990.
1L3 . EQUIPOS
651
Compartimiento
del Buffer Anin ico
Tapn de Poliacrilamida
Lecho de Gel
de Exclusin
Zona de Acumulacin
del producto
Entrada del Bufler
acarreador
Flujo del
Buffer
Migracin Movimiento
Electrofortica
Lecho de Gel
de Inclusin
Tapn de Poliacrilamida
Compartimiento
del Buffer Catinico
WW
i
-
^ Salida del Buffer

acarreador
Figura 11.17: Electrocromatografa de efectos opuestos. Tomada de:
Hamel y Hunter, 1990.
con gel excluyente del soluto de inters y la parte inferior con gel in-
cluyente, de tal manera que ste se mueva ms rpidamente en la parte
superior. Con un manejo adecuado de la intensidad del campo, el soluto
de inters puede tener un movimiento neto siempre hacia el centro de
la columna y acumularse en esa regin, mientras que los contaminantes
salen por alguno de los extremos. Este arreglo produce separaciones de
alta pureza y concentracin, pero su productividad est limitada por el
calentamiento y la cada de presin.
652 CAPTULO U. ELECTROFORESiS
11.4 Diseo
El tratamiento de la electroforesis al igual que las columnas cromato-
grficas puede ser abordado empleando:
La teora de platos.
La teora cintica.
11.4.1 Teora de Platos
La teora de platos es til para comparar el comportamiento de un
mismo equipo para diferentes aplicaciones, y entre la misma aplicacin
en equipos diferentes. Como se estableci anteriormente la desviacin
estndar en equipos electroforticos cuya principal causa de dispersin
es la difusin molecular est dada por:
(11.25)
donde:
D: Dispersin axial. [L
2
/t].
t: Tiempo. [i\.
a: Desviacin estndar. [L].
La ecuacin (11.25) se puede expresar en trminos de parmetros
electroforticos introduciendo la expresin:
u =rnE = m (11.26)
donde:
v: Velocidad del soluto. [L/t].
m: movilidad. [L
2
/ Voltio t}.
E: Campo. [Voltio/ L}.
11.4. DISEO 653
V: Voltaje. [Voltio].
L: Longitud de la celda. [L]
dimensionalmente:
t=- (11.27)
v
entonces se combinan las ecuaciones (11.25), (11.26) y (11.27) para
obtener:
De acuerdo a la teora de platos, la eficiencia de la separacin puede
definirse como la dispersin por unidad de longitud,
2
~ (11.29)
LJ
Las ecuaciones (11.28) y (11.29) conducen a:
1DL
HETP= (11.30)
mV
como:
L = (HETP)(N) (11.31)
entonces
(11-32)
De estos resultados es importante notar que TV es independiente de
L. Asimismo, /V puede incrementarse aumentando V. Por otro lado,
HETP aumenta al aumentar L. Esto implica que las distancias cortas
de migracin son las ms eficientes para la separacin.
La resolucin de dos componentes del sistema cuando su coeficiente
de dispersin es el mismo est dado por (Rudge y Ladisch, 1986):
R=-
4 V 2D
donde mi y m< son las movilidades del soluto 1 y 2, respectivamente
y: '
mi + m
2
771 =
2
De acuerdo a la expresin (11.33) el voltaje incrementa la resolucin.
Ejemplo 11.3.- Resolucin de una mezcla de protenas.
Se desea separar dos enzimas mediante una electroforesis en gel
a 4C. El coeficiente de dispersin axial es de 2 x 10~
7
cm
2
/s. La
movilidad es de 3.38 x 1(T
5
cm?/V - s y 1.33 x 10~
5
crn
2
/V -
s
,
respectivamente. Para realizar la separacin se utiliza una celda de 2
cm donde se aplica un campo de 1.8 V/cm por un lapso de 7.5 h .
Se pide estimar:
a) La distancia que viaja cada soluto.
b) La eficiencia de la separacin de cada soluto.
c) La resolucin de la separacin.
Solucin:
a).- La distancia puede ser calculada mediante la expresin
L = vt mEt
de tal manera que:
cm V . 3600 s
= 3.38 x 10~
5
-f^ x 1.8 x 7.5 h x
V s cm
= 1.64 cm
y,
2 =
1.33 x 10-* .,
cm
' x 1.8 - x 7.5 h x
V cm cm
L
2
= 0.64 cm
11.4. DISEO 655
La separacin entre los solutos es:
LI Z/ 2 = 1 era
b).- De acuerdo a la ecuacin (11.30),
HETP =
(HETPh =
mE
2 (2 x 10~
7
22!)
3.38 x 10-
5
gal x U
(HETP)i = 6.57 x 1(T
3
era
2 (2 x 10-
7
ss \
(HETP)
2
= - 2 i/
1.33
x
io-5 ^ x 1.8
(HETP)
2
= 1.67 x 10~
2
era
c) Utilizando la ecuacin (11.33) se puede calcular la resolucin.
Primero es necesario calcular la movilidad promedio,
I _ mi +
|ra =
I 2 fe, J
j _ (3.38 + 1.33) x 10-
5
&.
i m = -
4
2
2
ra = 2.334 x 1(T
5
^~-
V s
de tal manera que,
1 /2.334 x 10~
5
^ x 1.8 ^7 x 2cra
4 \ 2 x 2 x 10-
7
'
(3.38- 1.33) x 10-
5
f^-
2
2.334 x 10-
5
R = 3.18
11.4.2 Teora Cintica
En un proceso electrofortico la velocidad de migracin depende de
la carga, tamao y forma de la partcula de inters, as como de las
propiedades del medio. La resolucin puede ser incrementada mediante
gradientes de pH, filtracin molecular, o modificaciones del flujo. Esto
a dado origen a una diversidad de procedimientos para optimizar las
separaciones electroforticas.
Actualmente se cuenta con un teora unificada para tratar los diver-
sos modos electroforticos (ZE, MB, ITF e IEF) (Bier ti a/, 1983), lo
cual demuestra que las ecuaciones que rigen estos procesos son idnticas.
Las diferencias aparentes surgen de las diferentes condiciones iniciales y
de frontera de cada caso. A continuacin se presentan algunos modelos
particulares.
Pelcula Delgada con Alimentacin Continua
En el caso de la electroforesis en pelcula delgada con alimentacin
continua, el soluto est sujeto a fuerzas difusivas, convectivas y elec-
troosmticas, que determinan su patrn de elucin. En estado esta-
cionario y para E constante, el balance de masa de soluto en este tipo
de arreglos es:
de de de d^c
donde v
x
es la velocidad parablica axial y v
z
es la velocidad osm-
tica lateral. S
0
(x) es un trmino que describe la distribucin del flujo
de soluto inyectado.
La ecuacin (11.34) es una ecuacin difusiva, convectiva tridimen-
sional, cuya forma ms sencilla es su solucin asinttica (Gobie y Ivory,
1986).
Electrocromatografa
En el caso de electrocromatografa en columna si se supone que mE
es independiente de la concentracin, en ausencia de electrosmosis el
modelo empleado es:
11.5. SUMARIO 657
rearreglando,
01.36)
donde R es la acumulacin de soluto en la fase slida y v
x
es la
velocidad del flujo convectivo. Este resultado indica que las soluciones
a la ecuacin de diseo de las columnas cromatogrficas, pueden ser
aplicadas a la electrocromatografa, sustituyendo v
x
por v
x
-f mE.
11.5 Sumario
La electroforesis es una operacin que permite la purificacin de solutos
por la accin de un campo elctrico.
Uno de los problemas que se presenta normalmente en las opera-
ciones electrofcrticas es la dispersin que sufre la muestra conforme la
operacin se desarrolla. Para abordar esta dificultad se han desarrolla-
do diversas formas y medios para efectuar la operacin, lo cual se ha
traducido en una variedad de equipos disponibles a escala preparativa.
El diseo de los equipos de electroforesis se realiza mediante enfo-
ques similares a los utilizados en cromatografa de columna, y actual-
mente su desarrollo es incipiente y basado fuertemente en las pruebas
de laboratorio.
658 CAPTULO 11. ELECTROFORES1S
11.6 Problemas
11.1.- La movilidad relativa de / 2-galactosidasa respecto a la de citocro-
mo c en un gel de PAGE-SDS es de 0.2, mientras que la de actina es
de 0.6. Los pesos moleculares de estas protenas son de 130,000 para la
/3-galactosidasa y de 45,000 para la actina (Condeelis, 1977).
Estimar la movilidad relativa de ASB (albmina de suero de bovino)
en el mismo gel si su peso molecular es de 68,000.
Resp. 0.42
11.2 La electroforesis capilar de alta resolucin (HPCE) es una
poderosa tcnica analtica que maneja muestras menores de 1 j ,g (Frenz
y Hancok, 1991). Estimar el nmero de platos de una columna de
HPCE donde la movilidad del soluto es de 10~
8
m
2
/ V s, el voltaje
aplicado es de 30 KV y el coeficiente de dispersin de 10~
10
m
2
/s.
Resp. 1.5 x 10
6
platos.
11.3.- Se desea separar dos protenas en una celda electrofortica
aplicando un gradiente de potencial de 1.2 V/cm. Bajo las condiciones
de la electroforesis la movilidad de las protenas es de 1.2 x 10~
4
y
2.1 x 10~
4
cm
2
/V 5, respectivamente.
Estimar el tiempo de separacin de estas protenas si inicialmente
se colocan formando una banda de 0.4 cm de espesor.
Resp. 0.51 h
11.4.- La movilidad electrofortica de las clulas de glbulos rojos
humanos es independiente de las razas, edad, sexo y varios otros fac-
tores. Esta propiedad permite tomar a este tipo de clulas como un
patrn electrofortico (Brinton y Lauffer, 1959).
Estimar la movilidad de glbulos rojos en un medio M/ 15 de fosfatos
a pH=7.4, si la viscosidad del medio puede tomarse como la del agua,
el potencial Z es de 0.0168 Voltios y la constante dielctrica es de
9.8 x 10~
9
coulombio'
2
/N - m
2
.
Resp. 1.31 ( m cm/V s
11.7 Bibliografa
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trophoresis: Mathematical modeling and computer simulation.
Science. 219, 4590, 1281-1286.
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Brinton, C.C. y Lauffer, M.A. 1959. The electrophoresis of virues,
bacteria, and cells, and the microscope methods of electrophore-
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stream processing. En: Downstream Processing and Biosepara-
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660 CAPTULO 11. ELECTROFORESlS
Horstmann, B.J. y Chase, H.A. 1989. Modelling the affinity adsorp-
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matrices. Chem. Eng. Res. Des. 67, 243-254.
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and preparative methods. En: Separation Processes in Biotech-
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up of liquid chromatography and electrophoresis. En: Separation,
Recovery and Purification in Biotechnology. Asenjo J.A. y Hong,
J. (Eds.). ACS Symposium Series 314. ACS Washington, D.C.
10, 122-152.
Parte V
Operaciones de Acabado
663
Las operaciones finales en un proceso de bioseparacin son las o-
peraciones de acabado del producto. Estas operaciones permiten in-
crementar la pureza del producto, facilitar su manejo y mejorar su
apariencia. En esta parte, se revisan dos de las operaciones de acabado
ms utilizadas en los procesos biotecnolgicos.
En el captulo 12, se trata la operacin de cristalizacin que es
muy empleada tanto en la obtencin de productos biotecnolgicos tradi-
cionales como los antibiticos, como en la obtencin de productos prove-
nientes de la tecnologa del r-DNA como las protenas teraputicas.
En el captulo 13 se presenta la operacin de secado la cual se utiliza
como fase terminal de los procesos de cristalizacin, o bien para el
secado de caldos en la produccin masiva de algunos productos.
Captulo 12
Cristalizacin
12.1 Introduccin
La operacin de cristalizacin consiste en separar un soluto de una
solucin mediante la formacin de cristales de ste en el seno de la
solucin. Una vez formados los cristales se separan de la solucin ob-
tenindose el soluto con un alto grado de pureza.
Durante el proceso de cristalizacin los cristales deben formarse
primero y luego crecer. Al fenmeno de formacin de pequeos cristales
se le llama nucleacin y a la formacin capa por capa del cristal se le
llama crecimiento.
La sobresaturacin es la fuerza impulsora tanto de la nucleacin
como del crecimiento de los cristales. Si la solucin slo est saturada
los cristales no se transforman ni crecen, mientras que si est subsatu-
rada stos tienden a disolverse.
La cristalizacin es ampliamente utilizada a nivel industrial para
recuperar sales como cloruro de sodio y sulfato de amonio a partir de
soluciones acuosas. Algunas sustancias orgnicas como la sacarosa y la
glucosa tambin son obtenidas mediante procesos que involucran una
operacin de cristalizacin.
Varios productos biotecnolgicos de uso masivo como algunos an-
tibiticos y cidos orgnicos, as como algunos productos teraputicos,
son comercializados en forma de cristales. Esta diversidad de procesos
se traduce en una gran variabilidad en la capacidad de los cristalizadores
665
666 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
industriales que oscila de gramos a cientos de toneladas por da.
La cristalizacin es una operacin ampliamente utilizada en los pro-
cesos biotecnolgicos debido a que ofrece las siguientes ventajas:
- Se puede obtener en una sola etapa un producto de una pureza de
hasta un 99 %.
- Se puede controlar la cristalizacin de tal manera que se produzcan
cristales uniformes que faciliten su manejo, empaque y almace-
namiento.
- La cristalizacin mejora la apariencia del producto para su comer-
cializacin.
- Es una operacin que puede llevarse a cabo a temperaturas modera-
das.
Frecuentemente la operacin de cristalizacin va acompaada de un
lavado de los cristales en un equipo de separacin slido-lquido y de
un secado final, en un arreglo como el mostrado en la Figura 12.1.
El diseo apropiado del cristalizador es esencial en el funcionamiento
de todo el arreglo anterior debido a que el tamao de los cristales y
la concentracin de estos en la solucin de salida, son determinados en
gran medida en la operacin de cristalizacin; a su vez estos parmetros
determinan el diseo del separador slido-lquido y del secador.
La cristalizacin es en gran medida un arte mas que una ciencia;
sin embargo, el conocimiento actual de los mecanismos de formacin y
crecimiento de los cristales, y de la fuerza impulsora de stos, la sobre-
saturacin, permite abordar el crecimiento de cristales de una manera
ms cientfica.
La estrategia para el diseo de cristalizadores comprende el estable-
cimiento de las relaciones de equilibrio, la forma de operar del cristal-
izador (el mtodo para generar la sobresaturacin) y el estilo de cristal-
izador que se va emplear. Una vez obtenido el diseo conceptual del
cristalizador, el problema de diseo restante consiste en determinar el
diseo funcional que permita satisfacer los requerimientos de tamao
de cristal mediante el estudio cintico del sistema ( Figura 12. 2) .
12.1. INTRODUCCIN 667
Alimentacin -
Solvente
de
lavado
Producto
seco
Fase -soiw nt*
., .. H-Soluto disiMlto
liquida 1-impur.as
Solvente
Figura 12.1: Esquema de un sistema de cristalizacin. Adaptada de:
Moyers y Rousseau, 1987.
reservados.
Equilibrio
- Seleccin del solventa
- Sobresaturacin
Modos de Operacin
- Generacin de
sobresaturaci n
- Presi n
- Temperatura
- Composicin
Tipo de Cristalizador
- Flujo de vapor
- Presin de operacin
- Tratamiento dl a
suspensin
-Tamao del producto
Diseo Funcional
-Dimetro
Tiempo de residencia
-Velocidad de circulacin
-Materiales
-Equipo auxiliar
Cintica
Figura 12.2: Estrategia de diseo de un cristalizador. Adaptada de
Moyers y Rousseau, 1987.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright 1987. Todos los derecho
reservados.
Para abordar los aspectos relacionados con la cristalizacin en la
eccin 12.2 de este captulo se revisan los fundamentos de la cristali-
acin: el equilibrio, los modos como se puede efectuar una operacin
le cristalizacin y la cintica de la cristalizacin. En la seccin 12.3
e describen los equipos de cristalizacin ms empleados. El diseo de
:ristalizadores se presenta en la seccin 12.4.
12.2 Fundamentos
Para evaluar el uso de la cristalizacin como alternativa para la purifi-
cacin de un producto es necesario contar con determinada informacin
bsica relacionada con el producto y sus soluciones como:
Tipo de cristales que forma el producto.
Pureza de los cristales que forma el producto.
Equilibrio: Solubilidad y sobresaturacin de soluciones del soluto
en agua u otro solvente.
Modos de operacin posibles para generar la sobresaturacin de
la solucin del soluto.
Cintica: Velocidad con que se originan (nucleacin) y crecen los
cristales en la solucin.
Distribucin de tamaos en poblaciones de los cristales.
12.2.1 Tipos de Cristales
Un cristal es un slido compuesto por tomos, iones o molculas dis-
puestos en un arreglo tridimensional ordenado y peridico, o retcula
espacial. La distancia entre los tomos del cristal de cual quier mate-
rial es constante y caracterstica de dicho material. Los ngulos entre
las caras de los cristales tambin son caractersticos y dan origen a
cinco tipos bsicos de cristales y a siete sistemas cristalogrficos. En el
sistema ms sencillo, el sistema cristalogrfico cbico, tanto las distan-
cias caractersticas (largo, ancho y alto) como los tres ngulos carac-
tersticos son iguales. Otros tipos de sistemas difieren de este compor-
tamiento originando los sistemas tetragonal, ortorrmbico, hexagonal
monoclnico, triclnico y trigonal.
Desde el punto de vista industrial el trmino "habitat del cristal"
se refiere a los tamaos relativos de las caras del cristal. El habitat de
un cristal es de gran importancia: los cristales largos como agujas se
rompen muy fcilmente durante su centrifugacin y secado; los cristales
en forma de disco son difciles de lavar durante su centrifugacin y
difciles de filtrar. Los cristales esfricos son los ms fciles de manejar.
12.2.2 Pureza de los Cristales
La mayora de las soluciones cuando forman cristales a velocidades de
crecimiento moderadas y a condiciones constantes, los cristales forma-
dos slo contienen un componente alcanzado purezas hasta de 99.8 %.
Las impurezas de los cristales generalmente son debidas al atra-
pamiento de lquido en el cristal en pequeas bolsas u oclusiones. A-
dems de este tipo de impureza, normalmente despus de la separacin
de los cristales de la solucin, parte de la solucin queda adherida a la
superficie del cristal, lo que hace necesario lavar los cristales.
La separacin alcanzada en una cristalizacin puede ser caracteri-
zada mediante la distribuccin del soluto y las impurezas entre las fases,
de acuerdo a la siguiente ecuacin:
^=f
i
(
12J
)
donde:
masa de soluto A en el producto
masa de soluto A en la f a s e liquida
de manera similar para la impureza B,
> masa de impureza B en el producto
masa de impureza B en la fase liquida
no
(12.
El grado de separacin o selectividad del proceso es ms efectivo
conforme (3 aumenta. El factor de cristalizacin E (anlogo al factor
de extraccin) depende de la naturaleza del sistema solvente-soluto-
impurezas, de las condiciones de temperatura y presin a las que se
realice la cristalizacin, y del grado de saturacin (sobresaturacin)
con que se realice la operacin.
12.2.3 Equilibrio: Solubilidad y Sobresaturacin
Solubilidad
Las relaciones de equilibrio para los sistemas de cristalizacin se pre-
sentan en forma de curvas de solubilidad (Figura 12.3). En estas curvas
la solubilidad se expresa comnmente en porciento de peso de soluto a
peso de solvente.
Las curvas de solubilidad representan la solubilidad de soluciones
saturadas a diferentes temperaturas. Esta solubilidad es la mxima
que puede alcanzar la solucin en forma termodinmicamente estable.
La saturacin es resultado del equilibrio entre la fase slida y la fase
lquida, y consecuencia de la igualacin de sus potenciales qumicos.
Los datos experimentales de equilibrio sirven de base para la evalua-
cin de las diversas opciones que existen para llevar a cabo un proceso
de cristalizacin ya que permiten entre otras cosas:
- Determinar si el slido que se cristaliza slo contiene el soluto de
inters.
- Seleccionar el solvente.
- Establecer el rango de temperatura y presin de operacin.
- Conocer la concentracin del lquido de salida del cristalizador.
- Determinar la recuperacin mxima posible de la operacin.
Con ayuda de la Figura 12.3 se pueden describir algunos compor-
tamientos generales de la sol ubil idad de las sustancias en funcin de la
temperatura.
672
CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
150 h
Glutamato
Monosdico
% peso
Acido Adpico
90
Temperatura C
Figura 12.3: Curva de solubilidad. Tomada de: Belter ti al, 1988.
reservados.
- Existen sustancias como la hexametilentetramina cuya solubilidad
no vara apreciablemente con la temperatura.
- Otras sustancias como el cido fumrico muestran un incremento
moderado en solubilidad con respecto a la temperatura.
- Algunas sustancias como el cido adpico y el glutamato monosdico
muestran una gran dependencia de su solubilidad con la tempe-
ratura.
El conocimiento del comportamiento de la solubilidad de una sus-
tancia es bsico en la seleccin del modo para realizar su cristalizacin:
Es factible obtener cristales de cido adpico por enfriamiento de una
solucin de ste, pero no es factible obtener cristales de hexametilente-
tramina por este mismo mtodo.
Ejemplo 12.1.- Solubilidad de 1-serina.
Se determin la solubilidad de 1-serina (Charmolue y Rousseau,
1991) en agua en el rango de 35 - 50(7. Los datos experimentales
se ajustaron a la recta dada por:
S=146.13 + 80.834 T
donde T es la temperatura en grados centgrados y S es la solubili-
dad de la 1-serina en g/ lOOO g de agua.
La solubilidad de 1-serina tambin fue obtenida a partir de la teora
de las soluciones ideales que es aplicable a sistemas donde existe simi-
litud qumica entre el soluto y el solvente, y se expresa como:
donde:
X > 2' . Fraccin mol de soluto en la saturacin.
A/ / ^: Entalpia de fusin en el punto de fusin.
T
m
: Temperatura de fusin en grados K el vin.
T: Temperatura en grados Kelvin.
Para 1-serina la temperatura de fusin T
m
es de 501 K y la entalpia
de fusin A//^se ha estimado en 4,230.82 cal/ g-mol.
A partir de la informacin anterior comparar los resultados experi-
mentales con los derivados de la teora de las soluciones ideales para
1-serina.
Solucin:
Sustituyendo valores en la ecuacin de las soluciones ideales se tiene:
1 4,230.82-^-7 / sol \
i
A
' gmol I ""-
1
.. \
n
~ X ~ 2 ~ 1.987
ca
OK
x 501/\ \
7
f ~ )
gmolJ\
N
'
de tal manera que:
A
2
=exp
La solubilidad S en g/1000 g de agua puede obtenerse mediante la
expresin:
/ 1000A / X
2
S =(M
>\-.
donde MI= 18 y M
2
=105.1, son los pesos moleculares del agua y la
1-serina , respectivamente; con estos valores la expresin anterior puede
ser escrita como:
5-5,838.89
combinando ambas expresiones, la solubilidad terica de la 1-serina
es:
5,838.89
O
exp [4.25 (^- 1)] - 1
En la Figura 12.4 se muestra una comparacin de los datos experi-
mentales de solubilidad de 1-serina con los que predice la teora de las
soluciones ideales.
Temperatura * C
Figura 12.4: Solubilidad de 1-serina. Tomada de: Charmolue y
Rousseau, 1991.
Reproducida con el permiso del American Institute of Chemical Engineers. Copyright AIChE
1991. Todos los derechos reservados.
Sobresaturacin
Pudiera pensarse que una solucin con una concentracin de soluto
mayor a la de saturacin forma inmediatamente cristales pequeos o
ncleos. Sin embargo, actualmente es bien conocido que bajo diferentes
condiciones una solucin puede contener ms soluto que el correspon-
diente a la saturacin, formando lo que se conoce como solucin sobre-
saturada. El estudio del fenmeno de sobresaturacin es fundamental
en el diseo de cristalizadores.
La curva de solubilidad (Figura 12.5) separa dos regiones: la regin
de subsaturacin donde una solucin es capaz de disolver ms soluto a
las condiciones dadas, y la regin de sobresaturacin.
El comportamiento de las soluciones en la regin de sobresaturacin
fue descrito por H.A. Miers a fines de los aos veinte. Estos estudios
han conducido a dividir la regin de sobresaturacin en tres zonas cuya
delimitacin no es muy precisa.
- La regin metaestable, donde el soluto en exceso a la concentracin
de equilibrio se deposita en cristales ya existentes (sembrados o
formados por nucleacin) pero no forma cristales nuevos o ncleos.
Peso de
soluto
Regin
sobresaturada
Regin
subsaturada
Solubilidad
Regin de operacin
intermitente
Regin de operacin
continua
Temperatura
Figura 12.5: Zonas de sobresaturacin, a) Metaestable b) Intermedia
c) Lbil.
- La regin intermedia, donde el soluto en exceso a la concentracin
de equilibrio se deposita en cristales existentes y forma nuevos
cristales o ncleos .
- La regin lbil, donde la formacin de cristales nuevos o ncleo ocurre
en forma espontanea a partir de una solucin que no contiene
cristales o semillas.
A diferencia de la solubilidad de equilibrio, los limites de estas
tres zonas se controlan no slo por el equilibrio, sino tambin por los
parmetros del proceso como el grado de agitacin.
El conocimiento de la regin de sobresaturacin permite determinar
regiones de operacin.
En el caso de una operacin intermitente, con el propsito de lograr
un tamao de cristal lo ms uniforme posible, el grado de sobresa-
turacin se mantiene en la regin metaestable, de tal manera que la
sobresaturacin generada sirva para el crecimiento de los cristales ya
existentes (sembrados) y no exista formacin de cristales nuevos.
En una cristalizacin continua la sobresaturacin debe ser man-
tenida en el limite inferior de la regin intermedia, de tal manera que
el nmero de cristales que se retiran en la corriente de salida sea igual
al nmero de cristales generados por nucleacin. Adems es necesario
proveer un mecanismo de clasificacin de cristales, de tal manera que
slo se retiren cristales de un mismo tamao. Esto se logra utilizando
un lecho fluidizado de cristales, el cual proporciona una rea adecuada
para remover la sobresaturacin mediante el crecimiento de los cristales.
12.2.4 Seleccin del Modo de Operacin
El modo de operacin en una cristalizacin es la tcnica empleada para
generar la sobresaturacin de la solucin. La seleccin del modo de
operacin est fuertemente influenciada por las caractersticas de la
solubilidad en equilibrio del sistema. Una vez que se ha seleccionado el
modo de operacin del cristalizador es posible desarrollar los balances
de masa y energa del sistema.
Los principales modos para generar la sobresaturacin (Figura 12.6)
son los siguientes:
- Sobresaturacin por enfiamiento.
- Sobresaturacin por enfriamiento evaporativo.
- Sobresaturacin por evaporacin trmica.
- Sobresaturacin por evaporacin trmica al vaco.
Sobresaturacin por Enfriamiento
Cuando la solubilidad del soluto vara sensiblemente con la tempera-
tura, el enfriamiento de la solucin a tratar permite la formacin de
cristales con altos rendimientos y bajo consumo energtico. Este enfri-
amiento puede realizarse en forma externa mediante un intercambia-
dor, o directamente utilizando un lquido refrigerante inmiscible con la
solucin y con propiedades termodinmicas que minimicen el trabajo
de compresin necesario. En este tipo de operacin la evaporacin de
solvente es mnima.
Alimentacin
Refrigerante
Producto
-
1
V
t
V
Y
(
<
/
y
Alimentacin
_
f
*
k,
i
f~
\
V
\
k
1
-V.
(
/
i
/
/
n
1 I Refrigerante
r j V ^- Vacio
Condnsado
Alimentacin
Vapor
Producto
Figura 12.6: Modos para generar sobresaturacin. A) Enfriamiento
B) Enfriamiento evaporativo C) Evaporacin trmica D) Evaporacin
trmica al vaco. Adaptada de: Moyers y Rousseau, 1987.
reservados.
Sobresaturacin por Enfriamiento Evaporativo
En este modo el enfriamiento se produce con auxilio de un sistema de
vaco. La alimentacin entra a una temperatura mayor que la man-
tenida en el cristalizador enfrindose adiabticamente dentro de ste.
Este modo tambin es aplicable cuando la solubilidad del soluto es muy
sensible a la temperatura.
Sobresaturacin por Evaporacin Trmica
En este modo se transfiere calor al sistema para evaporar solvente y
generar la formacin de cristales por "salting out". Este modo se em-
plea slo cuando la solubilidad del soluto es insensible a la temperatura.
Sobresaturacin por Evaporacin Trmica al Vaco
En este modo la alimentacin tiene una temperatura mayor que la man-
tenida en el cristalizador y al entrar se enfra adiabticamente. Parale-
lamente se transfiere calor al sistema para evaporar solvente con auxilio
de un sistema de vaco. Este modo es empleado para la cristalizacin
de solutos cuya solubilidad tiene una dependencia intermedia respecto
a la temperatura.
12.2.5 Cintica de la Cristalizacin
Los fenmenos cinticos asociados a la cristalizacin son la nucleacin
o formacin de cristales nuevos, y el crecimiento de stos. La fuerza
impulsora de ambos fenmenos es la sobresaturacin. A niveles elevados
de sobresaturacin ambos fenmenos compiten por el soluto disponible.
Nucleacin
La velocidad de nucleacin afecta el tamao que los cristales pueden
alcanzar en un cristalizador intermitente. Conforme mayor sea la ve-
locidad de nucleacin menor es el tamao de los cristales obtenidos.
En el caso de una cristalizacin continua el aumento de la velocidad de
nucleacin se traduce en un mayor tiempo de residencia de los cristales.
Existen dos mecanismos de formacin de cristales:
- Nucleacin primaria. En la nucleacin primaria el cristal nuevo se
origina espontneamente a partir de la solucin sobresaturada
(nucleacin homognea) o bien se origina a partir de un mate-
rial insoluble, ya sean impurezas o cristales del mismo material
previamente sembrados.
- Nucleacin secundaria. Es la formacin de cristales nuevos como
resultado de la presencia de cristales ya crecidos de soluto, y puede
originarse por medio de varios mecanismos:
- Sembrado. Al colocarse cristales del material en una solucin
sobresaturada, se piensa que el cristal libera pequeos cris-
tales que se formaron durante el proceso de secado y que dan
origen a nuevos cristales.
- Contacto. Consiste en la produccin de cristales nuevos me-
diante el rompimiento de los cristales por choques entre s
o con las diferentes partes del equipo: tanque, bombas y
agitadores.
- Esfuerzo cortante. Cuando la solucin sobresaturada fluye so-
bre la superficie de los cristales se considera que puede des-
pegar segmentos de cristal, que pueden a su vez originar
nuevos cristales.
La velocidad de nucleacin es funcin de la sobresaturacin y del
mecanismo que la origina. En general se observa que la dependencia de
la velocidad de nucleacin primaria con la sobresaturacin es de mayor
orden que la de la velocidad de nucleacin secundaria. Esto se muestra
en la Figura 12.7 en forma cualitativa.
La mayora de los cristalizadores operan en la regin de baja sobre-
saturacin para que el crecimiento del cristal sea regular y el producto
puro. Por tal motivo la nucleacin secundaria es la ms empleada
a nivel industrial. Por otro lado, los mecanismos para controlar la
nucleacin secundaria pueden establecerse con relativa facilidad a ese
nivel.
Ante la carencia de una descripcin matemtica detallada que en-
globe los diferentes mecanismos de nucleacin posibles, la velocidad
Nmero
Tiempo
Velocidad de
nudeacin
primaria
Velocidad de
nudeacin
secundaria
Sobresaturacin
Figura 12.7: Influencia de la sobresaturacin sobre la velocidad de nu-
cleacin. Adaptada de: Moyers y Rousseau, 1987.
reservados.
de nucleacin generalmente se expresa por medio de una correlacin
emprica de la siguiente forma:
dN
B= =k
n
(c-c*)
1
(12.4)
donde:
B: Velocidad de nucleacin. [Ncleos/- volumen de solvente].
k
n
: Parmetro emprico.
i: Parmetro emprico.
c c*: Sobresaturacin. [M/L
3
].
c: Concentracin de soluto en la solucin. [M/L
3
].
c*: Concentracin de saturacin del soluto. [M/L
3
].
N: Nmero de ncleos por unidad de volumen de solvente. [M/L
3
].
Crecimiento
El crecimiento de cristales es un fenmeno cuya fuerza impulsora tam-
bin es la sobresaturacin. El crecimiento de un cristal es un proceso de
adicin capa por capa. En la Figura 12.8 se muestra el proceso donde
un cristal cbico ideal crece por adicin de pequeos cubos sobre su
superficie.
El crecimiento slo puede ocurrir en la superficie del cristal y las re-
sistencias involucradas en el crecimiento son la de la difusin del soluto
hasta la superficie del cristal y la resistencia a la integracin del soluto
a la superficie del cristal; dado que estas resistencias actan en serie,
la velocidad de crecimiento de un cristal se puede expresar en forma
emprica como:
=K
c
A(c-c' ) (12.5)
en la ecuacin anterior K
c
est dada por:
Figura 12.8: Crecimiento de un cristal. Tomada de: Bennett, 1973.
JL
k
L
J_
ks
(12.6)
donde:
M
c
: Masa de un cristal. [M].
t: Tiempo, [t].
K
c
: Coeficiente global de transferencia de masa. [L/.t],
ki,: Coeficiente transferencia de masa en la pelcula. [L/t].
ks: Velocidad especfica de integracin del soluto a la superficie del
cristal. [L/t].
c c*: Sobresaturacin. [M/L
3
].
A: rea del cristal. [L
2
].
Es importante hacer notar que la expresin de la cintica del creci-
miento es de primer orden, a diferencia de la expresin de la velocidad
de nucleacin cuyo orden es variable.
En sistemas no agitados la velocidad de crecimiento est contro-
lada por la difusin y el trmino l/ks se cancela de la ecuacin (12.6).
Cuando la velocidad de agitacin es alta el trmino I/ & L
es e
l que puede
ser despreciado.
El coeficiente &/, es funcin de algunos parmetros como la agitacin
y la viscosidad del medio, mientras que ks no lo es. Por otro lado, ki
vara ligeramente con la temperatura, mientras que k$ generalmente
es un funcin exponencial de sta, y puede cambiar dramticamente
durante un proceso de enfriamiento.
Uno de los objetivos de la cristalizacin es producir cristales de
tamao uniforme, por tal motivo la velocidad de crecimiento de un
cristal generalmente se asocia a una longitud caracterstica medible.
Esta longitud puede ser determinada por varios mtodos, siendo el ms
utilizado el del tamizado de los cristales bajo estudio.
Se puede asociar la velocidad de crecimiento de un cristal expre-
sada en unidades de masa por unidad de tiempo, con una velocidad
expresada en longitud por unidad de tiempo, partiendo de la siguiente
relacin conocida:
M
c
=
Pc
V
c
(12.7)
donde p
c
y V
c
son la densidad y el volumen de un cristal, respecti-
vamente.
Si se supone que el cristal mantiene una similitud geomtrica du-
rante su crecimiento, una longitud caracterstica del cristal que sea
seleccionada mantendr un proporcin constante con las otras dimen-
siones. En base a lo anterior la ecuacin (12.7) puede ser expresada en
funcin de esta longitud caracterstica de la siguiente manera:
M
c
=p
c
(< f> v l
3
) (12.8)
donde (f> y es un factor geomtrico que relaciona la longitud carac-
terstica / del cristal, con su volumen.
De igual manera el rea del cristal puede relacionarse con la longitud
caracterstica mediante:
A =< ]>
A
l
2
(12.9)
donde ês un factor geomtrico de rea.
Ejemplo 12.2.- Longitud caracterstica y factores geomtri-
cos.
Determinar la longitud caracterstica y los fatores geomtricos de
volumen y rea para:
a) Una esfera.
b) Un cubo.
Solucin:
a) El rea de la esfera de dimetro d es:
A =xd
2
el volumen,
de tal manera que:
V =~
o
b) En el caso de un cubo de lado L,
A =6L*
V =L
3
de tal manera que:
< > A - 6
tv =1
/ =
Se puede combinar la ecuacin (12.5) con las ecuaciones (12.8) y
(12.9) para obtener una expresin de la velocidad del crecimiento de un
cristal en funcin de una longitud caracterstica,
r)(c-c*) (12.10)
UrC/
o bien,
(12.11)
PcJ \$Vj\ '
La ecuacin (12.11) puede escribirse en forma simplificada de la
siguiente manera:
donde k
g
es la constante cintica de crecimiento de un cristal.
La velocidad de crecimiento expresada en funcin de una longitud
caracterstica se simboliza como (7, de tal manera que:
G =k
g
(c-c
f
) (12.13)
Las ecuaciones (12.4) y (12.13) describen la velocidad de formacin y
crecimiento de cristales, respectivamente. Ambos fenmenos dependen
de la sobresaturacin pero son independiente del tamao de los cristales
ya formados.
Ley Delta L: AL
Se ha demostrado experimentalmente que todos los cristales de un ma-
terial que son geomtricamente similares, cuando crecen en una misma
solucin crecen a una velocidad constante e igual para todos los tamaos
de cristal, cuando la velocidad es medida en funcin de una longitud
caracterstica. Es decir este tipo de cristales cumplen con la ecuacin
(12.13).
12.2. FUNDAMENTOS
Nmero
Volumen
N
Tamao de cri stal, I
Figura 12.9: Curva de densidad poblacional. Adaptada de: Belter et
al, 1988.
reservados.
12.2.6 Distribucin de Tamao en Poblaciones de
Cristales
Para caracterizar una operacin de cristalizacin tambin es necesario
describir la distribucin del tamao de los cristales en una suspensin
o "magma". Este tipo de distribucin es necesaria para realizar los
balances de masa y energa en los cristalizadores.
La distribucin de tamaos de una pobl acin de cristal es, general -
mente se describe por medio de una curva de densidad pobl acional como
la que se muestra en la Figura 12.9. Un punto sobre la curva relaciona
a i con yV
t
-, donde l
t
es una l ongitud dada de cristal y N
r
es el nmero
ce cristales por unidad de volumen de solvente con una l ongitud entre
O y I i.
La pendiente de l a curva permite obtener l a densidad pobl acional / /
que es u na medida del n mero de cristal es pur u ni d< t d de v ol u men en
u n i nt erv al o di f erenci al de l ong i t u d: es decir.
lim ATV dN
n =
A/ ÔA/ di
(12
'
14
'
El uso apropiado de la variable densidad de poblacin n permite
estimar importantes caractersticas de una poblacin de cristales, me-
diante los momentos fraccionarios de esta distribucin.
De acuerdo a la definicin de momentos de una distribucin, el
momento fraccionario k de la distribucin de tamas de cristales est
dado por:
f
l
l
k
n(l)dl
* (12-15)
o.
f c
Jo l
k
n(l)dl
donde n(l] es la densidad poblacional para el tamao /. Los casos
particulares de inters son:
Para k = O, el momento fraccionario //o representa la fraccin del
nmero de cristales de una poblacin que tiene un tamao entre
O y/ ,
f
l
n(l)dl
*> =r~ \
yu/
J
0
n
(
l
)
dl
Para k =1, el momento fraccionarioJL\ es la fraccin que representa
la suma de las longitudes de los cristales de tamao entre O y / ,
de la longitud total de los cristales de una poblacin.
Para k =2, el momento fraccionario ^
2
es
1
a
fraccin que representa
la suma del rea de los cristales de tamao entre O y /, del rea
total de una poblacin de cristales.
.
,
f
oo
/ 2
. (12.18J
< />
A
J
o
I
2
n ( l ) d l
12.3. EQUIPO DE CRISTALIZACIN 689
Para k =3, el momento f raccionario ;/
3
es la fraccin que representa
la masa de los cristales de tamao entre O y /, de la. masa total
de una poblacin de cristales .
p
c
< t>
v
f
l
l
3
n(l)dl
,/ '
Jo v
' (19 1Q ^
f-
3
~ I roo
n
,
n
,, ( JZ. iy j
p
c
(l)v J
0
I
3
n(l)dl
12.3 Equipo de Cristalizacin
La seleccin del tipo de cristalizador est inf l uenciada tanto por el vo-
lumen de produccin como por el modo de operacin seleccionado. En
general los equipos de cristalizacin pueden operar en dos formas:
Intermitente
Continua.
12.3.1 Cristalizadores Intermitentes
Los cristalizadores intermitentes son tanques agitados con sistemas de
vaco y enfriamiento (Figura 12.10). El ciclo de la cristalizacin dura
entre 2 y 8 horas. Al final del ciclo, el material cristalizado se retira del
cristalizador para lavarse y secarse.
La mayora de los productos biotecnolgicos que invol ucran una
cristalizacin se obtienen en forma intermitente.
12.3.2 Cristalizadores Continuos
Existen tres tipos bsicos de cristalizadores continuos:
Cristalizador-Evaporador con circul acin de l quido ( tambin l l amado
cristal izador con cl asif icarin de l a suspensin o tipo Osl o) .
Condensador
baromtrico"
Vapor Agua
Vapor
Eyector
de dos
etapas
Alimentacin
Agitador de
propela
Vlvula de
descarga
Figura 12.10: Cristalizador intermitente. Adaptada de: Bennett, 1988.
12.3. EQ UlPO DE CRISTA LIZA ClON 691
Alimentacin
Figura 12.11: Cristalizador-Evaporador con circulacin de lquido.
Adaptada de: Bennett, 1988.
Cristalizador-Evaporador con Circulacin de Lquido
En el cristalizador-evaporador con circulacin de lquido (Figura 12.11)
la sobresaturacin se produce por evaporacin. La al imentacin concen-
trada y caliente se mezcla con la corriente de recirculacin y se bombea a
la cmara de evaporacin donde el solvente se evapora adiabticamente
con ayuda de un sistema de vaco. El lquido sobresalurado fluye ha-
cia la parte inferior del cristalizador a travs de un tubo de bajada y
despus hacia arriba a travs de un lecho fluidizado de cristales que
permite una liberacin efectiva de la sobresaturacin. Los cristales ms
grandes sedimentan y son retirados por el fondo del cristal izador. Los
cristales ms finos pueden ser retirados por la parte superior para in-
crementar el tamao de los cristales.
Cristalizador al Vaco y Circulacin Forzada de Magma
'J cnsta. ii/ ador al vaco v circu l aci n ( orzada de- n a en- a i l ' i i' u ra l ' . il :
f ai bi'
1
! ! conocido r( M i ) u cn. M. aii/ ador con Remoci n < ! ' Prod^c n Me
" ado v Snspcnsii > : ! Mc/ ej ^, i; h' l ' MS \! ' a. i- - ' ' O < ' < ! ; ; cu * : ; . . ; m >
692
Enfrxted*
V*p<K
I
Intercambiado?
No condontabtos
Figura 12.12: Cristalizador al vaco y circulacin forzada de magma .
Adaptada de: Bennett, 1988.
apropiado para retener los cristales en crecimiento.
La alimentacin se mezcla con la corriente de salida del cuerpo prin-
cipal y se hace pasar por un intercambiador donde se eleva su tempe-
ratura entre 2 y 6 C. La suspensin en la superficie del cristalizador
libera parte ;del solvente producindose la sobresaturacin.
Cristalizador con Tubo de Tiro y Mampara
En el cristalizador con tubo de tiro y mampara (Figura 12.13), los
cristales de mayor tamao que sedimentan en el fondo del cristalizador
son impulsados hacia la regin superior donde se efecta la evapora-
cin y se origina la sobresaturacin, mediante un impulsor grande que
se mueve a bajas velocidades. Una mampara externa al tubo de tiro
permite formar una zona de sedimentacin externa, a partir de la cual
los cristales finos pueden ser retirados para incrementar el tamao del
cristal. La alimentacin mezclada con la corriente de finos se hace pasar
por un intercambiador de calor y se introduce por la parte inferior del
cristalizador.
12.4. DISEO DE CIUSTALIZAUItM
Figura 12.13: Cristal izador con tubo de tiro y mampara. Adaptada de:
Bennett, 1988.
Reproducida con el permiso de Me Gravv Hill Inc. Copyright 1988. Todos los derechos reservados.
12.4 Diseo de Cristalizadores
Actualmente se han logrado avances importantes en la modelacin de
cristalizadores para su anl isis, diseo y optimizacin, en apl icaciones
a situaciones de importancia industrial . Sin embargo, existen an
varias limitaciones debido a lo complejo que resul ta describir de manera
racional la forma como se rel acionan los fenmenos de nucleacin y cre-
cimiento de cristales, con las variabl es de operacin y la configuracin
de los cristal izadores.
En esta, seccin se describe como se combinan los bal ances pobl a-
cionales de cristal es, los bal ances de masa y los bal ances de energa, en
el diseo de tres sistemas de inters en cristal iz aci n:
* ( Y i sta. bz adu r c
694
Q *
Figura 12.14: Esquema de un cristalizador continuo.
12.4.1 Cristalizador Continuo
La Figura 12.14 muestra un esquema de un cristalizador continuo per-
fectamente agitado operando en modo "cristalizacin por enfriamien-
to".
El cristalizador es alimentado continuamente con un flujo volumtri-
co de solvente Fque presenta una concentracin y A de soluto disuelto
por volumen de solvente. La distribucin del tamao de los cristales a
la entrada est dada por n^.
El cristalizador contiene un volumen V de solvente, con una concen-
tracin de soluto disuelto por volumen de solvente y y una distribucin
de tamao de cristales caracterizada como n. Como el cristalizador
est perfectamente agitado el flujo volumtrico de solvente a la salida
F tambin est caracterizado por y y n.
Balance Poblacional
Los balances poblacionales de cristales consideran que el nmero de
cristales es una cantidad balanceable. En estos balances se supone
que los cristales son lo suficientemente numerosos y pequeos, de tal
manera que su distribucin de tamao puede considerarse una funcin
continua de la longitud caracterstica o tamao del cristal. Se supone
adems en el siguiente caso que no ocurre rompimiento ni aglomeracin
12.4. DISEO DE CRISTALIZADORES (> 95
de cristal es.
El bal ance pobl acional de cristal es en el cristal izador continuo con-
siderando slo los cristales en un rango de tamao di l / i, puede
expresarse en palabras como:
[La variacin con el tiempo, al interior del cristal izador, del nmero
de cristales de tamao en el rango di.}
es igual a
[La velocidad de entrada de cristal es de tamao en el rango di en la
al iment acin. ]
menos
[La, velocidad de salida de cristal es de tamao en el rango di del
cristalizador.]
ms
[El nmero de cristales por unidad de tiempo que al crecer en el
cristalizador entran al rango de tamao di.}
menos
[El nmero de cristales por unidad de tiempo que al crecer en el
cristalizador salen del rango de tamao di.}
lo cual se expresa matemticamente como:
j-
t
(Vn) =F
A
n
A
-Fu- V^^- (12.20)
La ecuacin anterior ha sido resuelta para algunos casos de inters
particular como el que se describe a continuacin.
Cristalizador Continuo con Remocin de Producto Mez-
clado - Suspensin Mezclada. (RPMSM).- La ecuacin (12. 20)
ha sido resuelta para un caso particul ar de cristal izador continuo bien
agitado llamado: Remocin de Producto Mezclado - Suspensin Mez-
clada ( RPMSM) . que est suj eto a las siguientes restricciones:
- El cristal izador opera en estado estacionario, por lo que:
n
A
=0 (12.22)
- El crecimiento de cristales al interior del cristalizador sigue la ley de
A/ , es decir
dG
aT = (12.23)
en base a lo anterior, el ltimo trmino de la ecuacin (12.20)
puede expresarse de la siguiente manera:
d(nG) dG ^dn fin
-~ ~ =n-T + G =G (12.24)
o o o o '
- El cristalizador est perfectamente agitado y no existen prdidas de
solvente.
- El volumen es constante.
- No existe variacin del nmero de cristales por aglomeracin o rom-
pimiento.
Si estas restricciones se aplican la ecuacin (12.20) con las ecua-
ciones (12.21) - (12.24) se transforma en :
0 (1,25)
como el tiempo de residencia promedio en el cristalizador est dado
por:
r =- (12.26)
r
entonces la ecuacin (12.25) puede ser expresada como:
G^+
U
- =O (12.27)
al r
Cuando / es muy pequea (tiende a cero) la densidad poblacional
n(0) se deriva preferentemente de la nucleacin de nuevos cristales,
entonces,
12.4. DISEO DE CRISTALIZADORES 697
E fo
n(0) =n =-j|- = (12.28)
71
La ecuacin (12.28) puede utilizarse como condicin de frontera para
la integracin de la, ecuacin (12.27), obtenindose la ecuacin:
n =nexp( ~ - ) (12.29)
\GT )
o bien,
_ ~
vri
/ i n 9 Ifh
/" "xp i ^j i î^. oui
Como todo modelo la ecuacin (12.30) puede ser utilizada para:
- Estimacin de parmetros en un cristalizador RPMSM.
- Diseo de cristalizadores RPMSM.
Estimacin de parmetros en un cristalizador RPMSM.- La
ecuacin (12.30) puede ser utilizada para obtener velocidades de nu-
cleacin y crecimiento de cristales, mediante datos de densidad pobla-
cional obtenidos en un cristalizador RPMSM. Para tal efecto, la ecua-
cin (12.30) puede rearreglarse para ser expresarse como:
(12.31)
De acuerdo con la ecuacin anterior los datos experimentales de
Inra vs / ajustados a una linea recta, presentarn una pendiente m =
(l/Gr) y una ordenada en el origen igual a \n(B/G).
El tiempo de residencia en el cristalizador y la pendiente permiten
determinar G. La ordenada en el origen conjuntamente con el valor de
G permiten determinar B.
Existen varias tcnicas para obtener la distribucin de tamao de
partculas de una poblacin. Los procedimientos para determinar n a
partir de los datos que se generan con las tcnicas, vara con cada una
de ellas. Dos tcnicas son de particular inters:
- El analizador electrnico de partculas.
- El analizador de malla.
Analizador electrnico de partculas.- El analizador electrnico de
partculas, para determinar el tamao de las mismas mide el cambio de
alguna propiedad como difraccin de la luz, dispersin de la luz, bloqueo
de luz o conductividad elctrica, conforme la poblacin de partculas
fluye por el sensor. El cambio de tales propiedades es funcin del vo-
lumen de la partcula, de tal manera que ste es el parmetro que se
correlaciona con las mediciones del instrumento. La dimensin caracte-
rstica que se le asigna a cada partcula es la correspondiente al dimetro
de una esfera equivalente al volumen medido.
Mediante estas determinaciones es posible obtener densidades po-
blacionales en forma directa o indirecta, dependiendo del equipo.
Analizador de mallas.- Los analizadores de mallas consisten en un
conjunto de cilindros cortos sin tapa superior y con una malla en el
fondo, arreglados verticalmente de mayor a menor tamao de malla.
Una vez que se coloca la muestra en el cilindro superior, el sistema
se somete a movimiento mecnico, de tal manera que se genere un
fenmeno de cribado. Funcionan en seco o en hmedo y proporcionan
una distribucin acumulativa de peso.
Los cristales del magma bajo estudio requieren cierto tratamiento
previo: deben ser filtrados, lavados, secados y durante su manejo debe
evitarse su rompimiento.
Una vez que se ha cribado la muestra es necesario determinar n a
partir de los datos de la masa de cristales acumulada en cada malla,
lo cual puede realizarse de acuerdo a la ecuacin (12.14) mediante la
siguiente expresin:
n = - (\.6)
A/ / 9
C
< M
3
donde:
T' - Densidad de cristales en el magma (masa de cristales por unidad
de volumen de solvente en la suspensin).
: Fraccin de la masa total de cristales retenida en una malla.
/: Longitud de la abertura de la malla.
A/: Intervalo de abertura de malla donde se retienen los cristales.
p
c
\ Densidad de los cristales.
< f)v ' - Factor geomtrico de volumen.
El numerador de la ecuacin (12.32) representa la masa de cristales
de tamao promedio /. El denominador contempla la masa de un cristal
de tamao promedio / y el intervalo A/ .
Ejemplo 12.3.- Anlisis de la cristalizacin de urea.
Se desea calcular la velocidad de nucleacin y crecimiento en una
cristalizacin a partir de una muestra de cristales de urea obtenida en
un cristalizador RPMSM, donde la masa de cristales en la suspensin
es de 450 g/dm
3
, la densidad de la urea es de 1.335 g/cm
3
y el tiempo
de residencia de 3.38 h. El factor geomtrico de volumen < j> v puede
considerarse igual a la unidad.
En la Tabla 12.1 se presentan los datos del anlisis de mallas prac-
ticado a la muestra: en la columna (1) el tamao nominal de la malla,
en la columna (2) el porcentaje de masa acumulada en la malla respec-
tiva, en la columna (3) la fraccin masa acumulada entre mallas y en
la columna (4) la abertura de la malla en mm.
Solucin:
De acuerdo con la ecuacin (12.31) es necesario generar una grfica
de Inn vs /, para lo cual es necesario utilizar la ecuacin (12.32).
Entre la malla 14 y la malla 20 los clculos a realizar son:
A/ = 1.19 mm-0.841 mm
A/ = 0.349 mm
- _ 1.19 mm +0.841 mm
2
/ = 1.016 mm
de tal manera que mediante la ecuacin (12.32) se obtiene:
Tabla 12.1: Datos y clculos del Ejemplo 12.3.
(1)
Malla
14
20
28
35
48
65
100
Fondo
(2)
%de
masa
acumulada
4.4
14.4
24.2
31.6
15.5
7.4
2.5
(3)
Frac,
masa
AW
0.044
0.144
0.242
0.316
0.155
0.074
0.025
(4)
Tamao
abertura
malla
(mm)
1.190
0.841
0.595
0.420
0.297
0.210
0.149
(5)
Longitud
promedio
7 (mm)
1.016
0.718
0.508
0.359
0.254
0.180
(6)
Incremento
A/ (mm)
0.349
0.246
0.175
0.123
0.087
0.061
(?)
n
40,581
533,070
3,566,200
18,795,000
36,865,000
70,703,000
(8) "
Inn
10.61
13.19
15.09
16.75
17.42
18.07
Fuente: Bennett, 1973.
(450 :r)(0.044)
(0.349 mm)(1.335 ^)(1)(1,016 mm)'
Vl oo0mm3
nmero de cristales
= 40,581 -
)
mm dm
3
=10.61
Los clculos para las otras mallas aparecen en la Tabla 12.1 en las
columnas (5), (6), (7) y (8).
Los datos de In n vs / se presentan en la forma grfica en la Figu-
ra 12.15. Los parmetros de la recta ajustada son:
Pendiente =9.05 mm
:
ordenanda en el origen = 19.765
ln(n)
22-
20-
18 -
16 -
14 -
12 -
10
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
I (mm)
Figura 12.15: Cristalizacin de urea.
i.o
Con estos datos es posible calcular la velocidad de crecimiento y
nucleacin de los cristales.
a) Velocidad de crecimiento. De acuerdo a la ecuacin (12.31),
_ _ 1
m- --
de tal manera que:
G =--_ '
(3.38
h
)
\ '
b) Velocidad de nucleacin. De acuerdo a la ecuacin (12.28),
B =nG
como:
l nn =19.765
entonces,
=3.838 x 10
8 nmer
d C
"*
ta
'
eS
mm dm
3
y la velocidad de nucleacin es:
.
=
( 3 . 83 8x 10 . o.0327
mm c/77?,
3
\ k /
B
= l . 25 5 xl O
Tni i
"
ter
J
k
Ejemplo 12.4.- Orden de nucleacin.
Combinando estudios de laboratorio y estudios piloto, se obtuvieron
valores de \& velocidad de crecimiento y nucleacin mediante anlisis con
mallas a diferentes tiempos de residencia, manteniendo la masa total
12:4. DISEO DE CRISTALIZADORES 703
Tabla 12.2: Datos del Ejemplo 12.4.
Corrida
1
2
3
T (min)
315
630
1,260
r< ( M \
0
ImtJ
0.092
0.042
0.019
DO / num. \
^ ^cm
3
min i
13,993
9,960
6,729
Fuente: Moyers y Rousseau, 1987.
reservados.
de cristales por unidad de volumen constante e igual a 0.84 g/cm
3
. La
densidad de los cristales es de 1.23 g/cm
3
y el factor geomtrico de
volumen < f> y =1.
Los datos obtenidos se presentan en la Tabla 12.2.
Considerando los datos anteriores, derivar una expresin de la va-
riacin de la velocidad de nucleacin con la velocidad de crecimiento.
Solucin:
De acuerdo con las ecuaciones (12.4) y (12.13),
G = k
g
(c-c*)
B = k
n
(c-
c
*y
combinando estas expresiones se obtiene
B = k
N
(G)'
donde:
k
/ir
(12.33)
N
La expresin obtenida en forma logartmica se expresa como:
9.6-
9.5-
9.4-
In(B')
Q3
_
9.2-
9.1-
9.0-
8.9-
8.8-
-4 - 3.8 - 3.6 - 3.4 - 3.2
ln(G)
- 3.0
-2.8 -2.6 -2.4
Figura 12.16: Orden de nucleacin del Ejemplo 12.4.
ln B ln kjy -f i ln G
de tal manera que los datos de ln B v s ln G se pueden ajustar a
una recta de pendiente i y ordenada en el origen ln & / v-
En la Figura 12.16 se presenta la grfica correspondiente a los datos
de la Tabla 12.2, de la cual se obtiene:
=0.46
10.66
de tal manera que,
El valor de 0.46 indica una dependencia moderada de la velocidad de
nucleacin respecto a G (o a la sobresaturacin). Esto es caracterstico
de molculas grandes e indica que el mecanismo de nucleacin no es
muy sensible a la sobresaturacin y que la nucleacin secundaria es la
dominante.
Dado que i es especfico del sistema se supone que este valor no
cambia con la escala y puede determinarse mediante experimentos de
laboratorio (cristalizador de 4 a 8 dm
3
).
El parmetro &/v es necesario determinarlo en una corrida a nivel
piloto o a escala real, ya que es dependiente de la escala. Esto se realiza
efectuando un anlisis de mallas a la escala de inters para obtener G
y B. Con estos valores y la i determinada en el laboratorio se obtiene
UN mediante la ecuacin (12.33).
Diseo de cristalizadores RPMSM.- En un RPMSM el tiempo
de residencia r es constante y la relacin BG tambin es constante,
de tal manera que la densidad poblacional dada por la ecuacin (12.29)
est completamente determinada a las condiciones de operacin dadas.
Varias caractersticas de diseo de un cristalizador se derivan del
uso de la distribucin poblacional dada por la ecuacin (12.29) y de
los parmetros G y B que se obtienen mediante experimentacin. A
continuacin se presentan algunas de ellas:
1) Momentos.
Contando con la expresin de la densidad poblacional y en con-
juncin con las expresiones de momentos, se pueden determinan
los momentos O, 1, 2 y 3 de la poblacin de cristales. A continua-
cin se ejemplifica lo anterior mediante el clculo del momento
0.
Momento Cero: Fraccin del nmero total de cristales de tamao
entre O y /.
De acuerdo a la ecuacin (12.16) y la ecuacin (12.29) el nmero
total de cristales por unidad de volumen est dado por la ex-
presin:
N
T
= I n exp ( ) di
Li T
la cual puede resolverse para obtener,
N
T
=nGr (12.34)
El nmero de cristales por unidad de volumen de tamao entre O
y / es:
./
Ni =
Ni = nG> (12.35)
de tal manera que la fraccin del total de la poblacin es:
fraccin =
J
nGr
fraccin 1 ex p( X ) (12.36)
donde X es una longitud adimensional dada por:
X =
Empleando un procedimiento simil ar al anterior se pueden obte-
ner los otros momentos. En la Tabla 12.3 se presentan las expre-
siones de los momentos restantes.
2) Tamao de cristal dominante.
La l ongitud de cristal a la cual la densidad de la masa de cristales
es mxima se l l ama tamao de cristal dominante / / >
La masa de cristales por unidad de vol umen de solvente en un
rango de tamao de los cristales est dada por:
Tabla 12.3: Momentos de un cristalizador RPMSM (X = l/Gr).
Momento I Significado I Total I Fraccin
0
1
2
3
nmero de
cristales
longitud de
los cristales
rea de los
cristales
masa de los
cristales
nGr
n(Gr}
2^n(Gr)
3
^v p
c
n(GrY
\-e~
A
l - ( l + X)e-
A
l - ( l + X+X' ) e-
A
l - O +X + ^+ p^Je-*
dM =p
c
< j>
v
l
3
ndl (12.37)
de la Tabla 12.3 la masa total de cristal por unidad de volumen
es:
MT 6(j> v pc
n
(GT^ (12.38)
combinando las dos expresiones anteriores se tiene:
dW n
di 6(< 7r)
4
n<
(12.39)
donde W es la fraccin masa de cristales. Las ecuaciones (12.29)
y la (12.39) conducen a:
dW /
di
(12.40)
derivando con respecto a / la ecuacin (12.40) e igualando a O se
obtiene:
ID
(12.41)
Este tamao caracterstico de los cristales frecuentemente es uti-
lizado como base para el diseo de cristalizadores.
3) Coeficiente de variacin.
El coeficiente de variacin es una medida de la dispersin de la
densidad de masa alrededor del valor ID y est dado por:
En el caso de la distribucin para el RPMSM este valor es aproxi-
madamente del 50%. Tal dispersin es muy amplia para ser acept-
able para algunos productos cristalinos como el azcar comn.
4) Densidad del magma.
La masa de cristales por unidad de volumen de solvente MT
es funcin de los parmetros cinticos n y G (Tabla 12.3), y
adems puede ser medida independientemente de la distribucin
de tamao de cristales. Debido a lo anterior MT puede ser uti-
lizada para corroborar velocidades de nucleacin y crecimiento
estimadas mediante anlisis de mallas. Este procedimiento se
muestra en el Ejemplo 12.5.
Ejemplo 12.5.- Evaluacin de G y B.
En un cristalizador experimental la densidad medida de cristales
en el magma es de 450 g/dm
3
. Los resultados de los anlisis de ma-
llas generan los valores de G =0.0327 mm/h y B = 1.255 x 10
7
nmero/dm? h. (Datos del Ejemplo 12.3). La densidad de los cristales
es de 1.335 g/cm
3
y el tiempo de residencia es de 3.38 h.
Comparar la densidad experimental del magma con la estimada a
partir del anlisis de mallas.
Solucin:
De acuerdo a la Tabla 12.3,
M
T
= 6
o bien,
a cm
3
1.255 x 10
7
M
T
=6 x 1 x 1.335 x - x
cm
3
10
3
mm
3
0.0327 ^
n
mm \
4
(0.0327 ^p x3.38 h\
M
T
= 458
9
dm
3
El valor experimental de M
T
=450 g/dm
3
y el calculado de
458 g/dm
3
sugieren consistencia de los datos.
El siguiente ejemplo muestra como una vez obtenidos los parmetros
cinticos, stos pueden ser utilizados para caracterizar una cristaliza-
cin.
Ejemplo 12.6.- Cristalizacin de sulfato de amonio.
Un cristalizador RPMSM de 100 dm
3
es alimentado a 50 dm
3
/h con
una solucin sobresaturada de sulfato de amonio.
La suspensin de cristales es retirada a un flujo de 50 dm
3
/h. Los
estudios cinticos indican que la velocidad de nucleacin es de de 1.88 x
10
7
nmero/' dm
3
h y la velocidad de crecimiento G es 0.056 mm/h.
Los cristales presentan una densidad p
c
de 1.769 g/cm
3
y de acuerdo a
su forma < f> y =1.
Estimar :
a) El tamao de cristal dominante.
b) El nmero de cristales con un tamao menor o igual al tamao
dominante.
c) La fraccin del nmero de cristales totales con un tamao igual o
menor que el tamao dominante.
d) La densidad de la suspensin .
e) Predecir la fraccin masa de cristales por tamao (utilizar tamaos
de mallas estndares).
Solucin:
a) De acuerdo a la ecuacin (12.41) el tamao de cristal dominante
es:
ID = 3Gr
/ = (3)10.056 '
10
dm3
(o.
x
50
^r
ID = 0.336 mm
b) El nmero de cristales TV de tamao igual o menor a ID es:
N = ndl
. -f.
o 6en,
TV = (total de cristales)(fraccin en el rango)
de acuerdo a la Tabla 12.3,
TV = (n
0
GT)(l-e~
x
)
con n = B/G y X =-^=3
A^ = (B
0
T)(\-e~
x
)
/
7
nurn 100 dm
3
\ . ,.
N = 1.88 x 10
7
- x -5- 1 - e~
3
\ dm
3
- h 50 Î
N = 3.57 x 10
7
""'"
c) De acuerdo a la Tabla 12.3 la fraccin de cristales de tamao en
el rango O < / < / D es:
(1 - e~
3
) =0.95
d) De acuerdo a la Tabla 12.3 la densidad de la suspensin est
dada por:
M
T
=6< />
v
p
c
n(GT)
4
sustituyendo valores con n B/G,
,
w x
/ <7 \ / ero- \ / 1-88 x 10
7
3^
fr = (6)(1) (1.769
1000 mm
3
; \ 0.056 =
mm
h
X
50 4s
M
T
=560 -p-
am-
3
e) De acuerdo a la Tabla 12.3, la fraccin masa de cristales con
tamao menor o igual a / es:
Fraccin masa =1 - (1 -f X + -X
2
+ -X
3
)e~
x
2 6
de tal manera que la fraccin de masa retenida en la malla de tamao
/ es
/ v-2 Y
3
\
Frac, masa retenida = ( 1 -f X -\ 1 1 e~
\ 2 6 /
En la Tabla 12.4 se presentan los resultados obtenidos al utilizar la
expresin anterior.
12.4.2 Cristalizadores Continuos con Remocin
Selectiva
En un cristalizador RPMSM el control de la distribucin de tamao
de los cristales es muy limitada. Las velocidades de crecimiento y nu-
cleacin, estn determinadas por las variables de operacin y la geome-
tra del cristalizador.
Tabla 12.4: Resultados Ejemplo 12.6 inciso e).
Malla
20
28
35
48
100
Tamao
( mm)
0.841
0.595
0.420
0.297
0.149
Y
l
A
~ Gr
7.51
5.31
3.75
2.65
1.33
Masa
retenida. %
5.4
22.3
48.3
72.6
95.4
Los cristalizadores continuos pueden hacerse ms flexibles mediante
el uso de dispositivos para la remocin selectiva de cristales, lo cual
altera el tiempo de residencia de los materiales que salen del cristaliza-
dor. La funcin de estos dispositivos puede visualizarse ms fcilmente
en trminos de los modelos idealizados:
- Modelo de extraccin de lquido.
- Modelo de remocin de finos.
- Modelo de remocin de gruesos.
La extraccin de lquido consiste en la remocin de lquido libre
de cristales del cristalizador. Esto provoca un aumento de la densidad
de cristales al interior del cristalizador y un aumento en el tiempo de
residencia de stos.
El objetivo principal en la remocin de finos es la remocin continua
de cristales cuyo tamao sea menor al especificado. Despus de ser
retirados los cristales se redisuelven y alimentan nuevamente al crista-
lizador. Esto permite obtener cristales de mayor tamao.
La remocin de gruesos consiste en remover los cristales cuyo tama-
o sea mayor al especificado.
Los efectos de cada dispositivo de remocin pueden ser descritos en
trminos de la funcin de densidad poblacional n.
En el caso de un modelo combinado de remocin ideal de finos
y gruesos llamado modelo R-Z , los balances poblacionales conducen
(Moyers y Rousseau, 1987) a las tres expresiones de intervalo siguientes:
12. 4. DISEO DE CRISTALIZADORES 713
1.- Para/ < //:
2.- Para // < / < l
-1 (12.43)
Gr
3.- Para / > l
c
- -
donde:
//: Tamao mnimo aceptable de los cristales.
l
c
: Tamao mximo aceptable de los cristales.
R: ndice de remocin de finos.
Z: ndice de remocin de gruesos.
Cuando R = 1 no existe remocin de finos, cuando Z = 1 no existe
remocin de gruesos. Un cristalizador con remocin tanto de finos como
de gruesos, produce una distribucin de cristales con tamao de cristal
dominante alto y bajo coeficiente de variacin.
12.4.3 Balances de Masa y Energa en Cristaliza-
dores Continuos
En la optimizacin de un proceso de separacin es necesario calcular la
eficiencia en la recuperacin de producto como funcin de las variables
de diseo.
De acuerdo con la Figura 12.17 en un proceso de cristalizacin el
rendimiento estar dado por:
Vapor
ntacin
Q <
- ?
1
R
Suspensin:
Solucin S
Rc
Cristales C
Figura 12.17: cristalizador continuo general.
Rend. =
a ~S R
c
F f
* s
1
*-a
(12.46)
donde:
F
s
: Flujo msico de solvente en la alimentacin. [M/i\.
R
a
: Masa de soluto por masa de solvente en la alimentacin. [M/Mj.
5: Flujo msico de solvente en la suspensin de salida. [M/t].
R
c
: Masa de soluto disuelto por masa de solvente en la solucin de
salida. [M/M].
R
se
: Masa de solvente evaporada por masa de solvente alimentada.
[M/M].
C: Flujo msico de cristales en la suspensin de salida. [M/i\.
El flujo de solvente F
s
y la fraccin masa libre de soluto /?
a
, ge-
neralmente se fijan por las operaciones previas a la cristalizacin. La
fraccin masa libre de soluto del soluto disuelto f
c
, es la solubilidad
del soluto en el solvente a la temperatura de operacin. Por lo tanto, el
rendimiento puede ser controlado en cierto grado, mediante un control
de la temperatura o cambiando el tipo de solvente. Otra variable que
puede ser controlada en una cristalizacin es el flujo msico de solvente
a la salida 5*, mediante los diferentes modos de operacin de los crista-
lizadores:
- En los sistemas con evaporacin S disminuye debido a la corriente
de vapor producido y el rendimiento se incrementa.
- En el modo de enfriamiento adiabtico la cantidad de vapor liberada
est fijada por los balances de energa.
- En los sistemas con evaporacin o en los sistemas combinados de
enfriamiento adiabtico con evaporacin, el diseador puede con-
trolar la presin para fijar la temperatura y por lo tanto /?
c
, as
como administrar calor externo para controlar 5, de tal manera
que ambos efectos contribuyen a incrementar el rendimiento de
la operacin.
- Cuando la cristalizacin es slo por enfriamiento, el nico control
sobre el rendimiento es la temperatura.
La conclusin de la discusin anterior es que para una F
s
y R
a
dados, y una relacin de solubilidad dada, el modo de la cristalizacin
determina la recuperacin mxima de soluto alcanzable.
Para sistemas binarios es posible desarrollar expresiones para el
rendimiento y las composiciones de las corrientes en funcin de: las
condiciones de entrada, la cantidad de solvente evaporado y las condi-
ciones dentro del cristalizador. A continuacin se presenta este proce-
dimiento.
De acuerdo a la Figura 12.17 el balance de masa total est dado
por:
F
s
+ F
s
R
a
= F
s
R
se
+ 5 + C/+ SRc (12.47)
El balance de soluto est dado por:
(12.48)
y el balance de solvente por:
F
s
= F
s
R
se
+ S (12.49)
Combinando las ecuaciones (12.47) y (12.48) se puede obtener la
ecuacin para el flujo de solvente,
S =
1 -\- ri
c
Combinando las ecuaciones (12.48) y (12.49) se puede obtener una
ecuacin para el flujo msico de cristales,
C = F
s
[R
a
- (1 - R
ae
)Rc] (12.51)
El rendimiento dado por la ecuacin (12.46) puede tambin ser ex-
presado como:
C
Rend. = - (12.52)
rafia
sustituyendo la ecuacin (12.51) en la (12.52),
end
.
=
ft. -(l-ft.)* .
(12 53)
Ra
La ecuacin (12.53) permite calcular el rendimiento mediante los
datos de diseo R
a
, de equilibrio R
c
y de operacin R
ae
.
La fraccin masa de cristales en la suspensin de salida ST es:
combinando (12.51) y (12.54) se obtiene:
i + fi. - R~
Las ecuaciones (12.53) y (12.55) se simplifican para los modos de
operacin particulares que se describen a continuacin.
1.- Cristalizacin por Enfriamiento Indirecto
En este caso no existe evaporacin de solvente por lo que:
fl = 0 (12.56)
y las ecuaciones (12.53) y (12.55) se expresan como:
12A. DISEO DE CRISTALIZADORES 717
Rend. =
Ra
D
Rc
(12.57)
R
a
(1258)
2.- Cristalizacin Slo por Evaporacin
En este caso la fraccin masa de soluto en la alimentacin es igual a la
fraccin masa en la solucin de salida,
Ra = R
c
(12.59)
y las ecuaciones (12.53) y (12.55) se expresan como:
Rend. = R
se
(12.60)
ST = -
R
"
Rse
p
(12.61)
1 + R
a
R
se
3.- Cristalizacin por Evaporacin Adiabtica sin Reflujo
En este caso a diferencia de los dos casos anteriores, adems de los
balances de masa se requiere efectuar un balance de energa para de-
terminar la cantidad de solvente evaporado en el cristalizador. Este
balance puede ser expresado en palabras como:
[La velocidad de salida de calor por evaporacin del solvente.]
es igual a \
[El calor liberado por la cristalizacin de enfriamiento.]
ms
[Entrada convectiva de calor.]
ms
[Calor liberado por cristalizacin por "salting out"]
y mediante la ecuacin:
F
s
R
se
\
v
= F
s
(R
a
-
+F
s
R
c
R
se
X
}
(12.62)
donde:
AT: Temperatura de alimentacin menos temperatura del cristaliza-
dor. [grados].
Cp: Capacidad calorfica de la alimentacin. [cal/M grado].
\
v
: Calor de evaporacin del solvente. [cal/M].
A/: Calor de cristalizacin del soluto. [cal/M].
de tal manera que las ecuaciones de enfriamiento adiabtico son:
_ \(R
a
- Re) + C
P
AT(l +R
a
)
" ~ A. - A/ + R
c
(12
'
63)
R
a
- (1 - R
sf
)R
c
tta
ST = "~ "

c
(12.65)
1 + H
c
ti
ae
Las ecuaciones anteriores pueden ser resueltas si se conoce la concen-
tracin de soluto disuelto en la suspensin de salida R
c
. Generalmente
es aceptable suponer que esta concentracin corresponde a la de satu-
racin. Los sistemas en los cuales sto ocurre se llaman sistema tipo
II o de rpido crecimiento, en oposicin a los sistemas tipo I donde
la concentracin de salida R
c
es mayor que la de saturacin debido al
lento crecimiento en estos sistemas.
Ejemplo 12.7.- Balances de masa y energa en un cristali-
zador adiabtico.
Se desea analizar la variacin con la presin de operacin del ren-
dimiento y la concentracin de slidos en la corriente de salida de un
cristalizador.
En las columnas (1), (2) y (3) de la Tabla 12.5 se muestran los datos
de equilibrio para el sistema a cuatro presiones absolutas diferentes.
La solucin alimentada al cristalizador contiene 0.379 g de soluto
por g de solvente y se alimenta a una temperatura de \00
U
C. El calor de
Tabla 12.5: Datos y solucin del Ejemplo 12.7.
(1)
Presin
mm de Hg
160
135
90
60
(2)
T
C
65
60
50
40
(3)
RC
g soluto
g solvente
0.100
0.072
0.043
0.028
(4)
Rse
g solv. evap.
g solv. alim.
0.374
0.419
0.502
0.582
(5)
Rend.
g cristales
g soluto alim.
0.835
0.890
0.944
0.969
(6)
ST
g cristales
g totales
0.316
0.347
0.400
0.453
reservados.
vaporizacin del solvente es de 100 cal/g, el calor de fusin del cristal es
de 33.3 cal/g y la capacidad calorfica de la solucin de 0.556 cal/gC.
Calcular la fraccin masa de cristales a la salida del cristalizador y
el rendimiento bajo cada una de las presiones de operacin.
Solucin:
Considerando un sistema de cristalizacin tipo II, el flujo msico
de evaporacin adiabtica de solvente puede calcularse utilizando la
ecuacin (12.63) y aparece en la columna (4) de la Tabla 12.5. El
rendimiento y la fraccin masa se calculan utilizando las ecuaciones
(12.64) y (12.65), respectivamente. Estos valores aparecen en las colum-
nas (5) y (6) de la Tabla 12.5.
Tanto la fraccin masa de cristales como el rendimiento aumentan
al disminuir la presin de operacin.
Balances y Cintica
En el diseo de un cristalizador es necesario combinar las expresiones
de la cintica de la cristalizacin con los balances de masa y energa.
El uso de la cintica de la cristalizacin para el anlisis y diseo provee
una nueva dimensin a las tcnicas de diseo disponible. Contando
con la cintica de la cristalizacin es posible evaluar la sensibilidad de
la distribucin de tamao de cristales a las diferentes parmetros de
operacin:
- Tiempo de residencia.
- Remocin de finos.
- Remocin de gruesos.
- Densidad de la suspensin.
- Temperatura.
- Sembrado.
- Operacin en serie.
Ejemplo 12.8.- Diseo de un cristalizador continuo.
Se desea disear un cristalizador para producir 455 kg/h de un
compuesto. Los criterios de diseo son los siguientes:
- 75% de la masa de los cristales debe tener un tamao mayor a
100
- La fraccin de masa de cristales ST a la salida debe ser de 0.5.
- El rendimiento debe ser mayor a 0.95.
Los datos y condiciones de operacin se presentan en la Tabla 12.6
y los datos de equilibrio se presentan en la Tabla 12.7.
Los estudios realizados a nivel laboratorio y a nivel piloto en un
cristalizador RPMSM, manteniendo constante M
T
en 0.84 g/cm
3
gene-
raron la expresin cintica siguiente:
= 42,699(6')
46
num
cm
3
min
donde G est en unidades de mirain y k^ en
Tabla 12.6: Datos y condiciones de operacin del Ejemplo 12.8.
Composicin alimentacin
Temperatura alimentacin
Calor especfico de la suspensin y solucin
Calor de evaporacin del solvente
Calor de cristalizacin
Gravedad especfica de los cristales
Gravedad especfica del lquido
Factor volumtrico del cristal
n O7Q
g solvente '
100C.
0.556 cal/g o.
100 cal/g.
33.3 cal/g.
1.23.
0.84.
1.
reservados.
Tabla 12.7: Datos de equilibrio del Ejemplo 12.8.
Presin
mmHg
160
135
90
60
40
T Cristalizador
C
65
60
50
40
30
R
c
masa soluto
masa solvente
0.100
0.072
0.043
0.028
0.018
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons . Copyright 1987. Todos los derechos
reservados.
cm
0
mtn
,0.46
Solucin:
El diseo del cristalizador se efecta mediante los siguientes pasos:
a) Elaboracin de los balances de masa y energa.
b) Estudio cintico: Efecto del tiempo de residencia, punto de corte de
finos // y proporcin de remocin de finos, sobre la distribucin
de tamao de cristales.
c) Dimensionamiento y especificacin de equipo.
a) Balances de masa y energa.
Los datos de equilibrio de la Tabla 12.7 sugieren una alta sensibili-
dad de la solubilidad del soluto a la temperatura, de tal manera que es
factible la cristalizacin por enfriamiento.
Considerando un sistema de cristalizacin tipo II y dos modos de
cristalizacin: enfriamiento indirecto y enfriamiento adiabtico, los
clculos de rendimiento y fraccin masa de los cristales a la salida
del cristalizador, se pueden realizar mediante las ecuaciones (12.57) y
(12.58) para enfriamiento indirecto, y mediante las ecuaciones (12.63),
(12.64) y (12.65) para enfriamiento adiabtico. Los resultados corre-
spondientes se presentan en la Tabla 12.8.
De acuerdo a los balances de la Tabla 12.8 el modo de cristalizacin
por enfriamiento indirecto, no permite cumplir con la especificacin de
diseo que establece una fraccin masa de cristales a la salida ST = 0.5,
an cuando se alcanza el rendimiento deseado.
El modo de operacin de enfriamiento adiabtico tambin alcanza
el rendimiento deseado, pero ni an a 40C (60 mm de Hg) satisface 1?
condicin de ST 0.5.
En base a lo anterior se selecciona el modo de operacin adiabticc
con adicin de calor externo para producir una solucin ms concen-
trada.
Tabla 12.8: Balances de masa y energa para Ejemplo 12.8.
TC
65
60
50
40
30
Enfriamiento Indirecto
Rend.
0.74
0.81
0.89
0.93
0.95
ST
0.20
0.22
0.24
0.25
0.26
Enfriamiento Adiabtico
Rend.
0.83
0.89
0.94
0.97
0.98
ST
0.32
0.35
0.40
0.45
0.51
Considerando la conveniencia de una temperatura de operacin in-
termedia que permita operar el condesador sin el uso de un agente con-
densante refrigerado, se sugiere emplear una temperatura de operacin
de 50C, en un cristalizador con calentamiento externo. La presin de
operacin ser entonces de 90 mm de Hg (Tabla 12.7).
Una vez tomada la decisin anterior se puede calcular R
se
mediante
la ecuacin general (12.55),
ST =
R
a
(1 R
se
)R
c
1 + R
a
R
se
0.5 =
0.379 - (1 - R
se
) x 0.043
1 + 0.379 - R
se
se obtiene:
R,
f
= 0.65
Este resultado indica que es necesario remover el 65% del solvente
que entra para cumplir con ST = 0.5.
El balance de masa del sistema de acuerdo a la Figura 12.18 puede
desarrollarse de la siguiente manera:
En la corriente de salida,
0.5 =
masa de cristales
masa total
724
SO'C
\
Alimentacin
100*C *
F,
R =0.379 g/g
/
, V -
Q
-b-
1
So
k
=0.65 g/g
Rc=0.043 g/g
Suspensin * C =455 Kg/h
Figura 12.18: Diagrama de flujo Ejemplo 12.8.
455
O 5
(5 + Sfe) + 455 f
como f
c
= 0.043 (Tabla 12.7, T= 50
0
C) entonces ,
= 436.24
kg de solvente
_
SR
r
= 18.76
kg de soluto disuelto
h
El balance global de soluto es:
F
s
R
a
=
de tal manera que:
455 ^+ 18.76
p _ _ li
s
~ 0.379 ^
kg
F
s
= 1250 ^
//
F
s
R
a
= 473.76
El flujo de solvente evaporado es:
F
s
R*r = 812.5
h
El rendimiento de acuerdo a la ecuacin general (12.53) es:
Rend. =
Rend.
Rg (1 ~R
S
e)Rc
RO.
0.379 - (1 - 0.65) x0.043
0.379
Rend. = 0.96
El balance de energa permite calcular el calor adicional necesario,
y est dado por:
Salida de calor por evaporacin del solvente = Calor liberado durante la cristalizacin
- f - Entrada de calor por conveccin
+ Calor liberado por Saling Out
+ Calor suministrado
y en f orma de ecuacin como:
F
s
R
se
\
v
=
de tal manera que:
F
s
R
c
R
se
\
f
Q = 1250^
hr
n* ,nn
0.65 -~- x 100
kg
Cal 100
9
- -
kg
x
g
(0.379 - 0.043) x33.3 x
%
g
kg
l + 0.379 x0.556
k
9j
x
kg
x (100 -
kq ka cal 1000 q
0.043 7^ x0.65 -r- x33.3 x -
kg kg g kg
Q = 1.818 x10
7
cal
Los balances de masa y energa permiten determinar los requeri-
mientos para cumplir con dos criterios de diseo:
1) Rend. > 0.95
2) ST = 0.5
El problema de diseo restante consiste en determinar como cumplir
con la distribucin de tamao de cristales,
b) Estudio Cintico.
El tamao de cristal vara con tiempo de residencia y con el sistema
de remocin de gruesos y finos.
Para explorar la influencia del tiempo de residencia en el tamao de
cristal deseado, que de acuerdo al criterio de diseo al menos el 75%de
la masa de cristales debe tener un tamao mayor a 100 /m, se pueden
combinar las expresiones siguientes:
B = k
N
(G?
*-
M
T
=
para obtener la siguiente ecuacin que permite relacionar r con G,
/
M T
\$<
De acuerdo a los balances de masa, la masa de cristales por unidad
de volumen de solvente en la suspensin est dada por:
M T = -nr-rr-
455
[1250-(1250xO.G5)]
0.84 -^r
M
T
= 0.87 -^-
La fraccin masa de cristales menores a / = 100 /m (Tabla 12.3)
est dada por:
/ 1 o 1 -A Y
Frac, masa - 1 - 1 + X -f -X
2
+ -X
3
} e~
x
\
Para r = 107 mzn,
(
i
3. 46
87 x """
X~r __
/ \ 0.46
6x1. 23 x42,699 ( y". ) (z aa)
x
(107 min)
' Vcrn. "
3
min/ V w /
v
'
G = 0.328 '""
mzn
la longitud adimensional es:
v
100
A =
(0.328 -?- x 107 mn)
V mtn /
^ = 2.85
La fraccin de masa menor a 100 fm es:
(2.85)
2
, (2.85)
:
. _.
2
.
85
Frac, masa = 1 - 1 + 2.85 + ^-^- + ^^- I e
V o /
Frac, masa = 0.32
En la Tabla 12.9 se muestran los resultados del resto de los clculos
del efecto de la variacin del tiempo de residencia sobre la velocidad de
crecimiento, el parmetro X y la fraccin masa de cristales de longitud
menor a 100 /im
De acuerdo a estos resultados el tamao de los cristales disminuye al
aumentar el tiempo de residencia. Esto se debe al mayor impacto de la
sobresaturacin sobre la velocidad de nucleacin que sobre la velocidad
de crecimiento.
Se selecciona el tiempo de residencia de 315 min para continuar el
diseo. Una disminucin mayor del tiempo de residencia podra evitar
728
Tabla 12.9: Efecto del tiempo de residencia sobre la fraccin masa de
cristales menor a 100 um.
T
min
107
315
630
1260
2520
G
um/min
0.328
0.094
0.042
0.019
0.009
X
Adim
2.8
3.4
3.8
4.2
4.7
Frac, masa
< 100 nm
0.32
0.44
0.52
0.60
0.68
el consumo de la sobresaturacin, provocando que este sistema de tipo
II se conviertiera en un tipo I.
Una vez analizado el impacto del tiempo de residencia sobre el
tamao de los cristales, se debe analizar el impacto del sistema de
remocin de finos sobre ese parmetro de diseo.
Existen varias opciones para remocin de finos que se derivan de
las posibles combinaciones entre el tamao de corte lj y el ndice de
remocin R. Es obvio que conforme // aumenta a R constante, la
fraccin de cristales menor a 100 /m disminuye. Asimismo conforme R
aumenta a // constante, la fraccin de cristales menor a 100 //ra tambin
disminuye. Este comportamiento se muestra en la Figura 12.19. La
figura tambin muestra tres combinaciones de // y R que permiten
cumplir con la tercer condicin de diseo que establece que el 75 %de
la fraccin masa de cristales tenga una longitud mayor a 100 fim.
Una R = 1.8 y una // = 60 /m son seleccionadas para el diseo
final.
c) Dimensionamiento.
La masa de cristales en el interior del cristalizador se puede obtener
a partir del flujo y el tiempo de residencia en el cristalizador, de tal
manera que:
M asa de cristales = (315 mm)
mi
ka
455 -
n
. DISEO DE CRISTALIZADORES 729
Frac, masa
de
cristales
l< 100Jim
Tamao de corte
de la trampa de
finos
_______ 20 H
m
40im
60 H
m
igura 12.19: Sensibilidad del tamao del producto al tamao de corte
e finos. Tomada de: Moyers y Rousseau, 1987.
eproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright 1987. Todos los derechos
servados.
730 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN '
j
M asa de cristales 2,388.75 kg
i
La masa de la suspensin en el interior del cristalizador es: f
., . 2388.75 kg
M asa de suspensin = r
0.5 4a
kg
M asa de suspensin = 4, 777.5 kg
El volumen de la suspensin es:
(2388.75 kg)
* s;
susp. _9_ v 1000 cm
3
v
kg
1
'
ZO
cm
3 X
dm
3
*1000 g
2388.75 kg
+
0.84 -*- x l^fni
x
^_
cm.3 arn-
5
1000 g
= 4786 dm
3
455
Productividad
4786 dm
3
kg
Productividad 0.095
El rea de la seccin transversal del cristalizador deber considerar
el tamao de corte de finos que se desea separar. La Figura 12.20
muestra el diseo conceptual del cristalizador.
12.4.4 Cristalizadores Intermitentes
La cristalizacin intermitente es muy utilizada en la fase de acabado de
la produccin de antibiticos, cido ctrico y varios otros productos de
peso molecular intermedio, cuyos volmenes de produccin son bajos
(menores a 50 tons/dia) y la alimentacin disponible es intermitente.
Al igual que en la cristalizcicin continua, la forma de generar la
sobresaturacin o modo de operacin determina en gran medida el
rendimiento y la distribucin del tamao de cristales en la operacin
intermitente. Sin embargo, la operacin i nt ermi t ent e tiene una mayor
'2.4. DISEO DE CRISTALIZADORES 731
Vapor
Flecha
Cuerpo del
cristalizador
Tubo de
tiro
Mampara
Alimentacin
Condensado
Producto Condensado
Tubo de
circulacin
Figura 12.20: Diseo conceptual que satisface las condiciones de diseo
del Ejemplo 12.8. Tomada de: Moyers y Rousseau, 1987.
reservados.
732 CAPTULO 12, CRISTALIZACIN
dependencia de la forma como se genera la sobresaturacin. Cuando
sta se genera por enfriamiento existen varias formas de realizarlo:
- Enfriamiento con una fuente externa de temperatura constante.
- Enfriamiento a velocidad de transferencia de calor constante.
- Enfriamiento a sobresaturacin constante.
- Enfriamiento a velocidad controlada para optimizar el tamao de
cristal y la pureza.
El desarrollo de modelos y el anlisis de los cristalizadores intermi-
tentes est limitado por la disponibilidad de datos cinticos de velocidad
de crecimiento de cristales y de de nucleacin. En trminos generales
los mtodos de diseo y anlisis de cristalizadores intermitentes estn
menos desarrollados que los de los cristalizadores continuos. Por otro
lado, existe un creciente inters en los experimentos intermitentes dado
que se puede obtener ms informacin en un solo experimento y de
cierta forma son ms fciles que los RPMSM. 1
>
\
Uno de los principales problemas de los cristalizadores intermitentes
es mantener la distribucin de tamao de cristales entre una corrida y
otra. Esto se evita mediante el sembrado de cristales, y mediante el
control de las condiciones de mezclado y enfriamiento.
Los experimentos con cristalizadores intermitentes sembrados per-
miten generar expresiones cinticas de crecimiento cuando se suprime
la nucleacin. Para obtener la informacin relativa a la nucleacin, se
requiere efectuar mediciones de distribucin de tamao. Debido a lo an-
terior, el diseo de operaciones de cristalizacin intermitente requiere
la generacin de informacin experimental para determinar aspectos
como:
- Rendimiento potencial de la operacin.
- Pureza de los cristales.
- Permeabilidad del lecho de cristales.
- Curva de solubilidacl-temperatura.
- Distribucin de tamao de cristales.
mediante experimentos donde se vara: la concentracin inicial de
soluto, la temperatura final o el tiempo de operacin.
Una de las desventajas de la cristalizacin intermitente sin control
de la velocidad de enfriamiento, consiste en que este modo de operacin
produce generalmente un producto de baja pureza y baja uniformidad.
Esto se debe a que las velocidades de enfriamiento son ms altas al
inicio del proceso, generando un exceso de nucleacin con la conse-
cuente disminucin de tamao de cristal dominante, as como efectos
de incrustamiento sobre las paredes de enfriamiento que reducen la
transferencia de calor. Esto puede ser minimizado mediante un control
de temperatura que permita una velocidad de enfriamiento variable.
Cristalizacin Intermitente: Enfriamiento Controlado y Nu-
cleacin Suprimida
Los balances poblacionales para cristalizadores intermitentes son ms
complejos debido a que tanto la velocidad de crecimiento de los cristales
6
?
, como la velocidad de nucleacin #, son funcin de la sobresatu-
racin que es variable en el proceso intermitente, disminuyendo conti-
nuamente desde su valor inicial hasta su valor al final del proceso. Por
esta razn el enfoque de diseo utilizado en los cristalizadores continuos
es poco til para los cristalizadores intermitentes.
En la cristalizacin intermitente con enfriamiento controlado, ini-
cialmente la generacin de sobresaturacin por enfriamiento es lenta
debido a que los cristales son an pequeos. Conforme aumenta el
rea de los cristales la velocidad de generacin de sobresaturacin por
enfriamiento tambin se aumenta.
En los cristalizadores con control de temperatura se ha utilizado un
enfoque emprico para determinar la curva de enfriamiento del sistema
(la variacin de la temperatura con el tiempo dentro del cristalizador)
debido a que es difcil establecer la cintica del sistema. Esta curva es
empleada para disear el sistema de control.
En enfoque emrico se supone que al i ni ci o de la cristalizacin tocios
los cristales tienen el mismo tamao y se busca determinar le dinmica
que debe seguir la temperatura para mantener una velocidad de creci-
miento constante. Con este propsito es necesario realizar un balance
de la cantidad de soluto de sobresaturacin dentro del cristalizador el
cual puede ser descrito en palabras como:
[La variacin de la masa de soluto de sobresaturacin]
es igual a
[La variacin de la masa de soluto de sobresaturacin por efecto de
la temperatura]
ms
[La velocidad de consumo de soluto por crecimiento del cristal]
ms
[La velocidad de consumo de soluto por nucleacin]
Las cristalizaciones intermitentes generalmente se desarrollan en la
regin metaestable para controlar el tamao del cristal minimizando la
nucleacin. Esto requiere que los cristales sean sembrados para iniciar
el crecimiento. En este caso la variacin de la masa de soluto de sobresa-
turacin y el consumo de masa por nucleacin pueden ser despreciados,
simplificndose el balance anterior a los dos primeros trminos del lado
derecho. Este balance puede ser expresado con ayuda de las ecuaciones
(12.5) y (12.6) de la siguiente forma: ^
donde T es el rea de todos los cristales, variable que depende de
la velocidad de crecimiento, por lo tanto, *

(
fjf f> fi \
: I (12.67)
cristal/
T
= J-
M
l
s + G
tf (12.68)
donde:
M S- Mas< ?i total de los cristales sembrados.
l
s
: Longitud de los cristales sembrados.
en la ecuacin (12.68) G es la velocidad lineal de crecimiento del
cristal dada por la ecuacin (12.11), es decir;
/~i _
~dt
1
(c-c*) (12.69)
sustituyendo las ecuaciones (12.68) y (12.69) en la ecuacin (12.66
) se obtiene :
de'
dado que c* es funcin de la temperatura,
de* _ de* dT
~dt ~ ~dT~dt
combinando (12.70) y (12.71),
dt
(12.70)
(12.71)
(12.72)
dT
La ecuacin anterior permite obtener la variacin de temperatura
para mantener una velocidad de crecimiento de cristales constante.
Esta expresin puede simplificarse si se considera un intervalo corto
de temperatura donde la variacin de la solubilidad sea constante; en
este caso la ecuacin (12.72) puede ser integrada para obtener:
M
V
de*
dT
Gt Gt
(12.73)
donde T
0
es la temperatura a la cual los cristales inician su creci-
miento.
La ecuacin anterior puede expresarse adimensionalmente utilizan-
do la expresin de la longitud final del cristal,
l
f
= l, + Gtj (12.74)
donde tf e el tiempo necesario para alcanzar l. A part i r de la
ecuacin (12.74) se define un tiempo adimensional T dado por:
736
Gt
T =
(12.75)
y se define una longitud adimensional 77 que caracteriza las veces
que se incrementa la longitud del cristal respecto a su tamao inicial
dada por:
I
If-ls
1.
(12.76)
sustituyendo (12.75) y (12.76) en (12.73) se obtiene:
T=Tn-
M.
V
de*
dT
(12.77)
de acuerdo a la ecuacin (12.77) la masa final de los cristales menos
la masa sembrada de los cristales est dada por:
(12.78)
combinando las expresiones (12.77) y (12.78) se obtiene la expresin
adimensional:
T T
J- -lo
1+r/ r +-(7? r)
2
(12.79)
suponiendo que la densidad de cristales p
c
permanece constante se
puede derivar la siguiente expresin:
M ,
M ,
(12.80
la cual puede ser simplificada para ls bajos, de acuerdo a la ecuacio
(12.76) como:
1
M f T/
3
y la ecuacin (12.79) se puede aproximar a:
(12.81
T T
fc^r
r3 (12
-
82)
que es la expresin de la curva de enfriamiento que permite mantener
un crecimiento constante y evitar la nucleacin inicial excesiva.
Escalamiento de Cristalizadores Intermitentes
Para realizar el escalamiento de cristalizadores intermitentes se requiere
desarrollar una expresin de la velocidad de nucleacin como funcin
de la velocidad de enfriamiento, de la agitacin y de la geometra del
cristalizador.
Dado que generalmente el mecanismo de nucleacin controlante
a escala industrial es la nucleacin secundaria, varios criterios de es-
calamiento se fundamentan en los aspectos de mezclado. Estos crite-
rios plantean mantener constante entre las escalas algunos parmetros
como:
- La potencia por unidad de volumen.
- La agitacin.
- La velocidad de punta del agitador.
- La velocidad mnima del agitador que permita mantener la suspen-
sin.
Ejemplo 12.9.- Cristalizacin intermitente de cido succni-
co.
Obtener la curva de enfriamiento para cido succnico en el intervalo
de enfriamiento de 30 a 20(7 y un tiempo de operacin de 120 min.
Solucin:
Utilizando la ecuacin (12.82),
738
T-C 26-
20 40 60 80
Figura 12.21: Curva de enfriamiento del Ejemplo 12.9.
30 -T
30-20
T
En la Figura 12.21 se presenta la curva de enfriamiento que genera la
expresin anterior . Inicialmente la temperatura permanece constante
luego baja abruptamente. Este comportamiento es caracterstico de
de la cristalizacin intermitente con control de temperatura (Qiu y
Rasmuson, 1991).
12.5 Sumario
La cristalizacin es una operacin de acabado ampliamente utilizada a
nivel industrial, que permite purificar un soluto mediante la formacin
de cristales. La fuerza impulsora de la cristalizacin es la sobresatu-
racin de la solucin. Existen varias formas para generar la sobre-
12.5. SUM ARIO 739
saturacin en la solucin de inters, las cuales se basan ya sea en el
enfriamiento de la solucin o en su calentamiento al vaco.
La sobresaturacin que se logra en el cristalizador es la fuerza im-
pulsora tanto de la nucleacin (origen de los cristales) como de su creci-
miento. Ambos fenmenos se asocian con la cintica de la cristalizacin.
Existen varios tipos de cristalizadores que pueden ser operados ya
sea en forma continua o intermitente. El diseo de los cristalizadores
continuos est apoyado por los balances de masa, energa y pobla-
cionales que se realizan en este tipo de equipos. El diseo de los cris-
talizadores intermitentes se ha desarrollado en forma ms emprica que
el de los continuos.
740
12.6 Problemas
12.1.- En el estudio cintico de la cristalizacin por enfriamiento de
NaiSOH<2O (Graber y Taboada, 1991) en un cristalizador RPMSM
de forma cilindrica de 15.2 era de dimetro y 39 era de altura, cuando
el cristalizador operaba en estado estacionario, se obtuvo una muestra
de cristales contenidos en 2.04 / de solvente, con las siguientes carac-
tersticas:
Malla No.
16
18
20
30
40
50
70
100
140
Fondo
Tamao de
abertura de
malla
(rara)
1.180
1.000
0.850
0.600
0.425
0.300
0.212
0.150
0.106
Masa en la
malla
(9)
9.12
32.12
39.82
235.42
89.14
54.42
22.02
7.22
1.22
0.50
Los cristales tienen una densidad de 1.464 g/crn
3
y un factor geo-
mtrico de volumen de 0.553. El tiempo de residencia fue de 0.622 h.
Calcular:
a) La masa total de cristales en la muestra.
b) La variacin del nmero de cristales con el tama de cristal.
c) La velocidad de crecimiento de cristales.
d) La velocidad de nucleacin de cristales.
e) La densidad experimental de cristales.
f) La densidad estimada de cristales.
a) Resp. 491 g c) Resp. 0.322 mm/h d) Resp. 1.045 x
10
7
num/l -h e) Resp. 240.68 g / l f) Resp. 253.8 g/l
12.2.- Se realiza una cristalizacin intermitente enfriando una solu-
cin de cido ctrico de 60 a 40C. En esta regin la variacin de la
12.6. PROBLEM AS 741
solubilidad de equilbrio del cido ctrico es de 0.006 g/cm
3
C (Bohlin
y Rasmuson, 1992).
Los cristales al sembrarse tienen una longitud caracterstica inicial
de 90 //m, con factores geomtricos de rea y volumen de 3.1 y 0.52,
respectivamente. La densidad de los cristales es de 1.54 g/cm
3
. La
concentracin de cristales sembrados es de 7.7 x10~
5
g/cm
3
. El tamao
final del cristal es de 1,000 /m. La sobresaturacin esperada durante
la cristalizacin es de 0.2 g/cm
3
. El crecimiento de los cristales est
controlado por la difusin con un coeficiente de transferencia de masa
de 4.5 x 10~
5
cm/s
Calcular:
a) El incremento adimensional del tamao de cristal 77.
b) La velocidad de crecimiento de los cristales.
c) El tiempo necesario del proceso.
d) La expresin de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuacin
(12.77).
e) La expresin de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuacin
(12.82)
a) Resp. 10.11 b) Resp. 0.042 cm/h c) Resp. 2.18 h
12.3.- Una solucin salina que pesa 10,000 Kg con 30%en peso de
Na^COs se cristaliza en forma intermitente por enfriamiento hasta una
temperatura de 20C. La sal cristaliza como decahidrato y presenta
una solubilidad a la temperatura final de 21.5 Kg de Na^COs anhidro
por 100 Kg de agua.
a) Estimar el rendimiento de la operacin cuando no existe evapo-
racin de agua.
b) Estimar el rendimiento de la operacin cuando se evapora el 3 %
del peso total de la solucin.
a) Resp. 78.5 % b) Resp. 81.9 %
12.4.- En una cristalizacin intermitente se procesan 4,546 Kg de
una solucin acuosa que contiene 47 Kg de FeSO* por cada 100 Kg
de agua, enfrindose de 54.4C hasta 26.6c para obtener cristales de
FeS4 77/20. La solubilidad del sulfato a la temperatura final es
de 30.5 Kg de FeSOânhidro por cada 100 Kg de agua. La capaci-
dad calorfica promedio de la alimentacin es de 0.7 cal/gC. El calor
de cristalizacin de los cristales hidratados puede considerarse igual a
4.4 Kcal/gmol.
Calcular:
a) La masa anhidra de cristales.
b) El rendimiento de la operacin.
c) El calor removido cuando no hay evaporacin de agua.
a) Resp. 683.2 Kg b) Resp. 47 % c) Resp. -108,258 Kcal
12.5.- Estimar la masa de cristales que se requiere sembrar en un
cristalizador intermitente para alcanzar una densidad de cristales de
250 g/l, cuando se desea incrementar la longitud caracterstica del
cristal de 100 a 1000 /?n, suponiendo que no existe nucleacin y que la
densidad del cristal permanece constante.
Resp. 0.25 g/l
12.6.- Obtener la distribucin terica de cristales de la corrida 2 del
Ejemplo 12.4, para las mallas 20, 28, 35, 48, 65, 100, 115, 150 y 200.
Resp. 4.42 %de masa retenida en la malla 65.
12.7.- Una solucin que contiene 200 g de cido ctrico por cada
100 g de agua, se somete a un proceso de cristalizacin intermitente al
vaco, a una temperatura de 20C. A esta temperatura la solubilidad
del cido es de 0.59 g/g de agua.
Estimar la cantidad de agua que es necesario evaporar para obtener
una recuperacin del 90%en esta operacin.
Resp. 33.89 %
12.7 Bibliograf a
York. 10, 273-305
Bennett, R.C. 1973. Miscellaneous Separation Processes. En: Che-
mical Enginner's Handbook. Perry, R.H. y Chilton, C.H. (Eds.).
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Bohlin, M. y Rasmuson, A.C. 1992. Application of controlled cooling
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Charmolue, H. y Rousseau, R.W. 1991. L- Serine obtained by me-
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Graber, T.A. y Tabeada, M.E. 1991. Crystallization: An interesting
experience in the Ch.E. laboratory. Chem. Eng. Education.
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Moyers, C.G. y Rousseau, R.W. 1987. Crystallization operations. En:
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Qiu, Y. y Rasmuson, A.C. 1991. Nucleation and growth of succinic
acid in batch cooling crystallizer. AIChE Journal 37, 9, 1293-
1304.
Captulo 13
Secado
13.1 Introduccin
El secado es el ltimo paso en la recuperacin de ciertos productos
biotecnolgicos. Consiste bsicamente en la reduccin del contenido de
solvente del producto por medio de una evaporacin o una sublimacin.
Tiene como propsito estabilizar el producto, preservar su actividad,
reducir su volumen o recuperar el solvente.
Existen varias formas de secar un material. En el caso de produc-
tos biolgicos una limitante en la seleccin del mtodo de secado, es
la temperatura que puede soportar el material de inters sin perder
actividad, de tal manera que las alternativas para estos materiales son
ms limitadas.
En la prctica de secado el solvente generalmente es agua y el medio
hacia donde sta se elimina es aire. Por esta razn, el anlisis del secado
se basa fundamentalmente en los sistemas aire-agua, sin embargo los
resultados que se logran pueden ser generalizados a otros sistemas.
Siendo el secado una operacin limitada por el equilibrio en la
seccin 13.2 sobre fundamentos, se revisan los conceptos bsicos del
equilibrio (de los sistemas agua-aire. Asimismo, se revisan las formas
de efectuar una operacin de secado y, las expresiones bsicas para el
clculo de la velocidad de secado y la velocidad de desactivacin de
compuestos trmicamente lbiles. En la seccin 13.3 sobre equipo, se
presentan los principales tipos de secadores utilizados en los procesos
745
746 CAPTULO 13. SECADO
biotecnolgicos. Los principios de diseo de algunos tipos de secadores
se presentan en la seccin 13.4.
13.2 Fundamentos
El anlisis de la operacin de secado requiere conocer las relaciones de
equilibrio que implica la distribucin de agua entre dos fases: la slida
del material a secar y la gaseosa del aire seco que sirve como medio
para tal efecto. Adems, es necesario conocer las diferentes formas
en que puede ser conducida una operacin de secado. Asimismo, se
requiere el conocimiento de la cintica de secado que depende de la
velocidad de transferencia de calor y de la velocidad de evaporacin.
Una cintica necesaria de considerar en esta operacin que no tiene
paralelo en otras, es la velocidad de desactivacin del material de inters
por efectos trmicos.
De acuerdo a lo anterior en esta seccin se revisan los siguientes
aspectos de la operacin de secado:
Las relaciones de equilibrio que limitan la operacin.
Los mtodos diponibles para realizar la operacin.
La velocidad de secado que determina el tiempo para llevar a cabo
la operacin.
Los efectos colaterales del secado.
13.2.1 Equilibrio y Propiedades Trmicas
Si un slido hmedo se expone a una corriente continua de aire, pued
ganar o perder humedad dependiendo de la presin de vapor que ejerz
el agua del slido, y de la presin de vapor de la corriente del air<
Si la presin de vapor del agua del slido es mayor que la presin d
vapor del aire, entonces el slido pierde humedad, en el caso centran
su humedad aumenta. Cuando la presin de vapor del agua del solio
iguale la presin de vapor de la corriente de aire, entonces el sisterr
estar en equilibrio.
Curva de humedad en et equilibrio
ligada /
/
Humedad ,/
el equilibrio /
ligada
w w
Contenido de humedad. Kg humedad / Kg slido seco
Figura 13.1: Curva de equilibrio para secado de un slido.
La presin de vapor que ejerce la humedad contenida en un slido
depende de la forma de la humedad, el tipo de slido y la temperatura.
En la mayora de los materiales biolgicos se pueden distinguir dos
formas del agua contenida en el slido: agua libre y agua ligada.
El agua libre se caracteriza por ejercer una presin de vapor igual
a la del agua pura. Este tipo de agua se localiza en los espacios entre
las clulas de los materiales o en los capilares de precipitados porosos.
El agua ligada se caracteriza por ejercer una presin de vapor menor
a la del agua pura. Este comportamiento lo presenta el agua cuando
est contenida en el interior de clulas, en algunos caldos los solutos
alteran sus propiedades o forma enlaces con sustancias orgnicas.
En la Figura 13.1 se presenta una curva de equilibrio tpica de un
material biolgico a una temperatura dada. Se distinguen dos zonas
caractersticas: la zona de humedad no ligada y la zona de humedad
ligada. En el eje de las ordenadas se grfica la humedad relativa del
aire definida como:
Hr =
presin parcial del agua en el aire.
presin de vapor del agua pura.
y en el eje de las abscisas la humedad del slido defi ni da como:
( 13.1
masa agua
masa seca de slido
esta definicin es til cuando la masa de slido es constante.
La zona de humedad no ligada que se muestra en la Figura 13.1
comprende desde cero humedad hasta una humedad tal que la presin
de vapor del slido es igual a la del agua pura. Un slido con tal
humedad estar en equilibrio con aire cuya presin parcial de vapor sea
igual a la del agua pura, es decir, cuya humedad relativa sea igual a
la unidad. En la zona de humedad no ligada, la humedad del slido
puede ser mayor pero su presin de vapor es constante e igual a la del
agua pura. De tal manera que la Hr permanece constante e igual a la
unidad.
En la operacin de secado se requiere conocer, a diferentes tempera-
turas y presiones, las propiedades trmicas y las relaciones de equilibrio
del solvente en el slido y del aire que se utilice para secar. Debido a
que el agua no ligada se comporta como agua pura, las relaciones de
equilibrio de los sistemas aire-agua pueden ser utilizados para tal efecto.
Asimismo, estas relaciones de equilibrio agua-aire son requeridas para
describir el comportamiento del aire que se utiliza en la operacin de
secado, dado que ste generalmente es calentado antes de usarse. Las
relaciones de equilibrio vapor de agua-aire se presentan en forma de car-
tas psicomtricas como la de la Figura 13.2, la cual ha sido desarrollada
a la presin de una atmsfera.
Para utilizar adecuadamente la carta psicomtrica es necesario ma-
nejar varios trminos, algunos de ellos referidos a la masa de aire seco,
ya que en un proceso de secado esta cantidad puede considerarse cons-
tante. A continuacin se describen diez de estos trminos.
1. -Humedad. La humedad H de una mezcla aire-agua se define
como la masa de vapor de agua por unidad de masa de aire seco.
_ masa agua ( 13 3V
masa a'e seco
Utilizando la ecuacin general de los gases ideales se puede expresar
la ecuacin (13.3) como:
a
=
P-r-P \M
0.12
0.10
0.04
0.02
O 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Figura 13.2: Carta psicomtrica agua-aire. Presin de una atmsfera.
donde:
PA' Presin parcial del agua en el aire.
PT\ Fresn total de la mezcla aire- agua.
MA'- Peso molecular del agua (18 g/mol).
MB'- Peso molecular del aire ( 29 g/mol).
Se puede deducir de la ecuacin anterior que la humedad slo de-
pende de la presin parcial del agua y de la presin total del sistema.
2. -Humedad de saturacin. Una mezcla aire-agua est saturada
a cierta temperatura y presin, cuando la presin parcial del agua en
la mezcla es igual a la presin de vapor del agua pura , de tal manera
que:
donde P es la presin de vapor del agua pura a la temperatura y
presin dadas y HS es la humedad de saturacin..
3.-Porcentaje de humedad. El porcentaje de humedad se define
como la relacin porcentual de la humedad con respecto a la humedad
de saturacin, es decir
%H = -^- x 100 (13.6)
Hs
4.-Relacin entre % H y Hr. Es necesario advertir que el por-
centaje de humedad no es igual al porcentaje de humedad relativa.
Esto puede ser demostrado combinando las ecuaciones ( 13.4), ( 13.5) y
( 13.6),

y comparar este resultado con la ecuacin ( 13.1).
Ejemplo 13.1.- Clculo de humedad a partir de datos de
presin de vapor.
El aire de una habitacin tiene una temperatura de 20( 7 y la presin
es de una atmsfera. La presin parcial del agua en el aire es de 12 mm
de Hg. Calcular:
( a) La humedad, H.
( b) La humedad de saturacin, HS.
( c) El porcentaje de humedad, % H.
( d) El porcentaje de humedad relativa, % Hr.
Solucin:
( a) La humedad H puede calcularse.aplicando la ecuacin ( 13.4),
H =
H = 0.01
12 mm de Hg
( 760 - 12) mm de Hg
Kg de agua
Kg de aire seco
18
Kc
Kmol
29
Kg
Kmol
( b) En tablas de vapor puede encontrarse que a 20C la presin de
vapor de agua es de 17.5 mm de Hg. Aplicando la ecuacin ( 13.5),
17.5 mm de Hg
H
s
= 0.0146
( 760- 17.5) mmde Hg
Kg de agua
18
Kc
Kmol
29
Kmol
Kg de aire seco
( c) Mediante la ecuacin ( 13.6) y los resultados anteriores,
%H = 68.4%
( d) Aplicando la ecuacin ( 13.1),
752
CAPTULO 13. SECADO
Tabla 13.1: Datos y solucin del Ejemplo 13.2.
T(C)
3
18
33
60
75
90
95
PAS (KPa)
0.7577
2.0640
5.0340
19.9400
38.5800
70.1400
84.5500
r r ( Kg de agua \
"
d
\Kg aire seco J
0.0047
0.0129
0.0324
0.1521
0.3816
1.3958
3.1275
%Hr = ^
e
,
17.5 mm de tig
%Hr = 68.57%
x 100
Ejemplo 13.2.- Curva de 100 % de humedad.
Construir una grfica de la humedad de una mezcla aire-agua en el
rango de O a 100 C, considerando una presin total de una atmsfera
y la presin parcial del agua en la mezcla como la correspondiente a la
presin del agua pura a cada temperatura.
Solucin:
En las columnas ( 1) y ( 2) de la Tabla 13.1 se presenta la presin de
vapor para el agua pura a varias temperaturas en el rango considerado.
Estos valores son obtenidos de tablas de vapor.
En la columna ( 3) de la Tabla 13.1 se encuentran los datos de
HS calculados mediante la ecuacin ( 13.5) a una presin total de una
atmsfera (101.33 KPa). El valor de H
s
tiende a infinito conforme la
presin de vapor se aproxima a la temperatura de ebullicin del agua.
La curva de 100 % de humedad ce la carta psicomtrica ( Figura
13.2) representa la solucin grfica de este ejemplo. La curva de 50
% de humedad de la carta psicomtrica puede trazarse tomando la
mitad de la distancia vertical entre la curva de saturacin y el eje de la
temperatura, a cada temperatura.
5.-Punto de roco. El punto de roco de una mezcla aire-agua es
la tempertura a la cual dicha mezcla ( sin estar en contacto con agua)
se satura al ser enfriada a presin total constante. Cuando una mezcla
en su punto de roco se enfra ms alia de este punto, el vapor de agua
condensa formando una neblina o roco. En este proceso la humedad
de la mezcla no cambia, de tal manera que se puede calcular el punto
de roco de una mezcla utilizando la carta psicomtrica.
Ejemplo 13.3.- Clculo del punto de roco de una mezcla
aire-agua.
Estimar el punto de roco de una mezcla aire-agua con 20 % de
humedad que se encuentra a 55C y a una atmsfera de presin.
Solucin:
Sobre la carta psicomtrica ( Figura 13.2) se localiza el punto 55C
y 20 % humedad, horizontalmente se avanza hacia la curva de 100 %
humedad y se lee la temperatura de roco de 26.5C en el eje T. Todas
las mezclas con humedad de 0.023 tendrn el mismo punto de roco.
6.-Calor hmedo de una mezcla aire-vapor de agua. El calor
hmedo es la capacidad calorfica de la mezcla aire-vapor de agua, y es
el calor necesario para incrementar un grado centgrado la temperatura
de una mezcla aire-vapor de agua, por Kg de aire seco de la mezcla, o
C
s
= C
B
+ HC
A
( 13.7)
donde:
Cs'- Calor hmedo de la mezcla en KJ/Kg aire seco K.
CB'- Capacidad calorfica del aire seco. 1.005 KJ/Kg aire seco K.
C A'- Capacidad calorfica del vapor de agua. 1.88KJ/ Kg vapor K.
KJ: Kiloj oules, unidad de energa.
Dado que las capacidades calorficas pueden considerarse constan-
tes en el intervalo normal de temperaturas, la ecuacin ( 13.7) puede
expresarse como:
C
s
= 1.005 + 1.884//
KJ
(13.8)
Kg aire seco K
Cuando no existe cambio de estado ( evaporacin o condesacin)
el calor necesario para incrementar la temperatura AT grados de una
masa mjg de aire y su vapor acompaante, puede ser calculada con la
siguiente expresin:
Q = m
B
C
s
&T ( 13.9)
Ejemplo 13.4.- Clculo del calor hmedo de una mezcla
aire-agua.
Calcular el calor hmedo de una mezcla aire-vapor de agua que se
encuentra a 55C y presenta una humedad //=0.08 Kg de agua /Kg
de aire seco. Utilizar el valor calculado para estimar el calor necesario
para incrementar 15 grados la temperatura de 5 Kg de aire seco y su
vapor acompaante.
Solucin:
a) El calor hmedo puede calcularse utilizando la ecuacin ( 13.8),
C
s
= 1.005+ ( 1.884)( 0.08)
Kg aire seco K
C
S
= 1.156 .
KJ

A g aire seco A
b) El calor necesario puede calcularse utilizando la ecuacin ( 13.9),
Q = 5 Kg de aire seco x 1.156
:
x 15 K
Kg aire seco K
Q = 86.7 KJ
Q = 363 Kcal
7.- Volumen hmedo. El volumen hmedo es el volumen total de
una mezcla aire-vapor de agua por Kg de aire seco a la presin de una
atmsfera. De acuerdo a la ley de los gases ideales el volumen hmedo
puede calcularse mediante:
V
H
= (0.00283 + 0.0045677) (T + 273)
m
3
mezcla
Kg aire seco
( 13.10)
8.- Entalpia total. La entalpia total de un Kg de aire seco y su
vapor acompaante referida a una temperatura T
0
, est dada por el
calor sensible de la mezcla aire-vapor de agua ms el calor latente del
vapor de agua a la temperatura T
0
, esto puede expresarse como:
Ent. =C
S
(T - T
0
) + H\
0
(13.11)
Cuando T
0
QC el calor latente \
0
=2,502 KJ/Kg y la ecuacin
(13.11) se expresa como:
f kJ 1
Ent. = ( 1.005 + 1.884#)T + 2502#
:
( 13.12)
[Kg aire seco]
en la ecuacin anterior T est en C.
9.-Curvas de saturacin adiabtica. Considrese un proceso
como el que se muestra en la Figura 13.3. En ste, una mezcla aire-
vapor de agua a una temperatura T y una humedad //, se pone en
contacto con agua a una temperatura TS ( menor que T), de tal manera
que la mezcla aire-vapor al alcanzar el estado estable sale con una
humedad saturada HS a una temperatura TS ( el aire cede calor sensible
para evaporar el lquido). No fluye calor hacia dentro o hacia fuera del
sistema y al fenmeno se le denomina proceso adiabtico.
Efectuando un balance de energa en la mezcla aire-vapor se obtiene,
entalpia a la entrada =entalpia a la salida.
si se toma como temperatura de referencia TS este balance se expresa
como:
756
CAPTULO 13. SECADO
Entrada del gas \
_ J
r
H, T
Agua de
reposicin H2 0
T
s
^
I
A
x '', \**N
/ ' X
; m ) i ~n i )
\
Salida del
gas fri
HS- TS
Figura 13.3: Proceso adiabtico.
C
S
(T - T
s
) + H\
s
=C
S
(T
S
- T
s
) + H
s
\s
combinado las ecuaciones ( 13.8) y ( 13.13) se tiene:
H-Hs _ _Cs_ _ ( 1.005+ 1.884#)
T - T
s
~ ~X
s
~ ~ \s
(13.13)
( 13.14)
Las curvas de saturacin adiabtica de la carta psicomtrica ( Figura
13.2) han sido construidas utilizando la ecuacin ( 13.14).
En el caso que el contacto no sea suficiente para alcanzar H$ y TS a
la salida, la mezcla presentar una temperatura y una humedad menor,
localizadas sobre la misma linea de saturacin adiabtica.
Ejemplo 13.5.- Saturacin adiabtica.
Se tiene una mezcla aire-vapor a 80C con una humedad de 0.032
Kg de agua / Kg aire seco. Si este aire se enfria y humidifica adiabti-
camente, estimar:
a) La temperatura y humedad final si la mezcla alcanza un 90 % de
humedad.
b) La temperatura y humedad final si la mezcla sale saturada.
Solucin:
a) Sobre la carta psicomtrica se localiza la temperatura y humedad
que representa a la mezcla original. Entonces esta mezcla se humidifica
y enfra adiabticamente, siguiendo una curva de saturacin adiabtica,
hasta el cruce con la curva de 90 % de humedad donde se lee:
T = 43C
Kg de agua
H = 0.049
Kg de aire seco
b) Continuando sobre la misma linea de saturacin adiabtica hasta
la interseccin con la curva del 100 %, se puede leer:
T
s
= 4QC
Kg de agua
H
s
= 0.05
Kg de aire seco
10.- Temperatura de bulbo hmedo. La temperatura de bulbo
hmedo es la temperatura de estado estable que alcanza una pequea
masa de agua cuando se pone en contacto con una corriente de aire en
condiciones adiabticas.
Para determinar temperaturas de bulbo hmedo se puede utilizar
un termmetro cuyo bulbo se recubre con una tela impregnada de agua.
El termmetro se sujeta mediante una cuerda y se hace girar en el aire.
Si el aire no est saturado se produce un descenso en la lectura del
termmetro debido a la evaporacin de agua de la tela. La lectura final
de estado estacionario es la temperatura de bulbo hmedo ( en contra-
posicin, a la lectura normal del termmetro se le llama temperatura
de bulbo seco).
Para sistemas aire-agua ( nicamente) la descripcin del proceso
adiabtico del bulbo hmedo puede realizarse en forma satisfactoria
mediante la ecuacin de saturacin adiabtica.
La importancia prctica del anlisis anterior, es que mediante me-
diciones de temperaturas de bulbo hmedo y bulbo seco, y con auxilio
de la carta psicomtrica, es posible determinar con relativa facilidad la
humedad de mezclas aire-vapor de agua.
Ejemplo 13.6.- Determinacin de humedad.
Una mezcla de aire-vapor de agua tiene una temperatura de 70C.
La temperatura de bulbo hmedo de esta mezcla es de 30C. Calcular
la humedad de la mezcla.
Solucin:
Se puede suponer que la temperatura de bulbo hmedo es igual
a la temperatura de saturacin adiabtica. Recorriendo la curva de
saturacin adiabtica de 30C hasta la temperatura de bulbo seco de
70C, se puede leer la humedad de 0.01 Kg agua/Kg aire seco.
13.2.2 Mtodos de Secado
El mtodo de secado que debe ser utilizado en un bioproceso depende
del tipo de producto, sus propiedades fsicas, su tolerancia a la tempera-
tura y los requerimientos de proceso en cuanto a la forma de operacin
ya sea intermintente o continua.
Los mtodos de secado se pueden clasificar de acuerdo a la forma
de transferir calor y eliminar el solvente en dos tipos:
- Mtodo adiabtico.
- Mtodo no adiabtico.
Mtodo Adiabtico
Este mtodo consiste en adicionar calor por medio de aire caliente. Los
secadores por aspersin y los secadores de tipo instantneo operan de
acuerdo a este mtodo. Son utilizados para secar partculas que no
toleran altas temperaturas como protenas unicelulares y enzimas.
Mtodos no Adiabticos o por Conduccin
En el secado no adiabtico el calor se proporciona en forma indirecta por
conduccin a travs de una pared metlica. Generalmente los secadores
no adiabticos operan a presin reducida y se emplean para el secado
de cristales y precipitados, donde las temperaturas de secado deben ser
menores a 60 C.
El secado por congelamiento, un caso de secado no adiabtico, se
efecta por sublimacin de agua congelada empleando bajas presiones
y temperaturas. Se emplea para secar protenas teraputicas que no
toleran temperaturas arriba de las ambientales.
13.2.3 Velocidad de Secado
En el diseo de secadores, adems de las relaciones de equilibrio, es
necesario establecer relaciones que permitan determinar la velocidad
del secado o el tiempo de secado. Debido a que el conocimiento de
los mecanismos bsicos del secado no es completo, frecuentemente es
necesario efectuar mediciones experimentales de la velocidad de secado.
Cuando se seca un slido ocurren dos procesos fundamentales y en
forma simultnea:
- Se transfiere calor para evaporar un lquido.
- Se transfiere masa: como lquido o vapor al interior de slido, y como
vapor del slido al aire.
Los factores que controlan la velocidad de estos procesos determinan
la velocidad del secado. Los mecanismos de transferencia de masa estn
intimamente relacionados con el tipo de slido a secar ( homogneo,
granular, etc), mientras que la forma de transferir calor depende del
mtodo de secado ( adiabtico o no adiabtico).
13.2.4 Efectos Colaterales del Secado
Cuando el secado de un material no se realiza apropiadamente, se pre-
sentan daos que afectan la calidad del producto. En el caso de pro-
ductos biotecnolgicos los daos tpicos que se presentan en el secado
son: endurecimiento, deshidratacin qumica y desnaturalizacin.
El fenmeno de endurecimiento se presenta cuando la velocidad de
secado es muy alta y el slido forma una capa interior hmeda y una,
capa exterior'seca e impermeable, que i mpi de la evaporacin y el secado
apropiado. Este fenmeno puede evitarse desminuyendo la velocidad
de secado.
La deshidratacin qumica consiste en la eliminacin de agua de la
estructura molecular del producto y tambin se origina por una veloci-
dad de secado alta.
El tercer tipo de dao es la desnaturalizacin que sufren las pro-
tenas en el secado. Este proceso generalmente sigue una cintica de
primer orden que depende de la concentracin de agua, la temperatura
y el tiempo, de acuerdo a la siguiente expresin:
---) Pr ( 13.15)
ai "-"- ^
RT
J
donde:
Pr: Medida de la concentracin de la protena no desnaturalizada.
k
0
: constante caracterstica del material. [t~
1
].
E: Energa de activacin del material, [cal /mol].
R: constante de los gases ideales, [cal mol K].
T: Temperatura absoluta. [K].
La integracin de la ecuacin ( 13.15) entre los lmites:
t = t
0
Pr = Pr
0
t =t Pr =Pr
produce la expresin:
( 13.16)
que indica que entre menor sea la temperatura y el tiempo de secado
menor es el grado de desnaturalizacin. Generalmente es ms conve-
niente utilizar una combinacin de una temperatura baja con un tiempo
alto de secado, para evitar una desnaturalizacin excesiva.
Ejemplo 13.7.- Desnaturalizacin de catalasa.
Cuando se seca a 37C por 10 min una pasta concentrada de la
enzima catalasa, , se desnaturaliza 63 % de la enzima. Cuando se seca
a 20(7 por 30 min, se desnaturaliza en un 28 %.
Estimar el grado de desnaturalizacin si el material se seca por 90
min a 4C.
Solucin:
Utilizando la ecuacin ( 13.16) se pueden obtener dos ecuaciones que
permiten determinar los parmetros k
0
y E.
i
Pr
o , i -E .
In ^ = o exp I ; I 10 min
Pr
0
- 0.63 Pr, F I , mi . . , \
E
In = &
0
exp | 1 30 min
Pr
0
- 0.28 Pr
0
v
\1.99
l

n
"
T
' '
mo-A' '
resolviendo las expresiones anteriores se obtiene:
E = 23,453 .
mol
k
0
= 3.22 x 10
15
min~
l
Con estos parmetros se puede estimar el grado de desnaturaliza-
cin, utilizando la misma ecuacin, con T = 4(7 y t=90 min.
Pr I 23453
ca
\
In 2- = 3.22 x 10
15
min~
l
exp , ^ 90 min
Pr \1.99
mo
^
oK
x 277 K I
Pr
0
-ET = 1-10
Pr
Pr
= 0.91
Pr
1
i o
se desnaturaliza slo el 9 % de la enzima.
13.3 Equipo de Secado
El equipo de secado es muy variado. Los empleados en los procesos
biotecnolgicos se pueden clasificar de acuerdo al mtodo de secado
empleado en:
Secadores adiabticos.
Secadores no adiabticos.
13.3.1 Secadores Adiabticos
Los principales tipos de secadores adiabticos ( Quinn, 1983) son:
- El secador por aspersin.
- El secador instantneo.
- El secador de lecho fluidizado.
Secador por Aspersin
En los equipos de secado por aspersin ( Figura 13.4) es posible secar
soluciones o suspensiones de slidos, rociando stas en un recipiente a
travs del cual se hace pasar una corriente de aire caliente.
Los secadores por aspersin son utilizados para la produccin de
grandes volmenes de productos termolbiles como enzimas, levaduras
y protenas.
Uno de los componentes claves del secador por aspersin es el ato-
mizador que permite formar pequeas gotitas de la mezcla, incremen-
tando notablemente el rea de secado, de tal manera que el tiempo del
secado sea menor que el tiempo que dura la gota en alczar la pared
del recipiente.
Existen dos tipos bsicos de atomizadores: Los tipos disco giratorio
( 15,000 a 24,000 rpm) y los tipos de eyector a presin. El primero es
ms empleado en los procesos biotecnolgicos debido a que presentan
menos problemas de taponamiento y ofrece la posibilidad de controlar
el tamao de la gota controlando la velocidad del disco.
13.3. EQUIPO DE SECADO 763
Alimentacin
X*Xx' ~
N
vO
V\
Calentador
de aire
Figura 13.4: Secado por aspersin. Tomada de: Brocklebank, 1990.
vados.
Salida de aire
Calentador de aire
Figura 13.5: Secador instantneo.
Las capacidades de los secadores por aspersin son muy variadas.
Las capacidades de evaporacin varan de 1 Kg/h hasta 2 Ton/h de
agua, con dimensiones tpicas de 2 x2 x3.5 m para los modelos pequeos
y de 10 x 5 x 12 ra para los modelos intermedios.
Secador Instantneo
Los secadores instantneos o flash ( Figura 13.5) son utilizados para
secar slidos de baja humedad o slidos difciles de manejar por formar
partculas muy pequeas o ser muy pegajosos en forma seca ( protenas
y almidn).
En un secador instantneo el material slido que se va a secar se
alimenta conjuntamente con aire caliente a un ducto, a travs del cual el
slido viaj a y se seca por accin del aire. Al final del ducto la corriente
de aire-slido se separa por accin de un cicln. Parte de la corriente
es recirculada para secar las partculas grandes que son ms difciles
de secar. Si debido a su tamao las partculas de la alimentacin no
pueden ser transportadas por el secador, el secador puede incorporar
un molino desintegrador a la entrada del ducto de secado.
Secador de Lecho Fluidizado
El secador de lecho fluidizado ( Figura 13.6) puede ser utilizado para
secar rpidamente materiales slidos que permitan su fluidizacin por
medio de una corriente de aire caliente ( Treybal, 1980). El material
se alimenta a un lecho soportado por una malla inferior y se le hace
pasar una corriente de aire caliente, de tal manera que las partculas
del slido se separan y forman una suspensin fluida, que permite su
transporte hasta el punto de descarga. Los secadores de lecho fluidi-
zado continuos pueden ser circulares, cuadrados o rectangulares en su
seccin de flujo. Pueden alcanzar capacidades de hasta 10 Ton/h de
producto seco, mientras que los intermitentes son utilizados en escalas
ms pequeas del orden de 500 Kg/carga.
13.3.2 Secadores no Adiabticos
Los secadores no adiabticos requieren un sistema de calentamiento y
generalmente trabajan con sistemas de vaco. Los principales secadores
no adiabticos utilizados en biotecnologa son: el tipo charola, el de
doble cono, el tambor rotatorio y el liofilizador ( De Vivo, 1983).
Secador de Charola
Los secadores de charola ( Figura 13.7), son utilizados a escala piloto o
para producciones bajas de productos de alto valor econmico, sucep-
tibles a temperaturas elevadas o a dao por manejo mecnico excesivo.
En el secador de charola la muestra se coloca en las charolas y
stas dentro de una cmara. Las charolas son calentadas por medio de
chaquetas de vapor y la cmara cuenta con un sistema de vaco, lo cual
permite el secado de la muestra a condiciones moderadas.
766
CAPTULO 13. SECADO
Alimentacin de los slidos
Salida de los
slidos secos
Figura 13.6: Secador de lecho fluidizado.
Conexin de vado
Puerta
Charolas
(Conexiones para
_T~ calentamiento
JJ, J,
Figura 13.7: Secador de charola.
Secador de Doble Cono
El secador de doble cono es un secador giratorio al vaco ( Figura 13.8),
que tiene dos conos unidos por sus bases por medio de un cilindro corto.
Este recipiente gira sobre un eje para inducir el movimiento del material
y evitar zonas de sobrecalentamiento. El secador cuenta con un sistema
de vaco para facilitar el secado.
Este tipo de secador es ampliamente utilizado en la obtencin de
productos biotecnolgicos a escala industrial.
Secador Tipo Tambor Rotatorio
El secador tipo tambor rotatorio ( Figura 13.8b) es un recipiente cilin-
drico horizontal que no gira y el movimiento del material se realiza por
accin de agitadores internos que remueven el material de las paredes
calientes del tambor.
Liofilizadores
Los liofilizadores son utilizados para obtener slidos secos de alto valor
comercial. Se emplean cuando los slidos muy lbiles o frgiles para
ser tratados por un mtodo convencional de secado o una filtracin, o
bien son muy solubles ( sales de sodio) de tal manera que no pueden ser
obtenidos por precipitacin o cristalizacin. La liofilizacin ha sido em-
pleada para la obtencin de enzimas, hormonas y otro tipo de protenas
de uso farmacutico.
En un proceso de liofilizacin ( Figura 13.9) la solucin a secar con
una concentracin entre 5-25 % peso/volumen se alimenta a un sistema
de filtrado ( 0.2 (m) para ser esterilizada y entrar al secador que opera
en forma estril. En el proceso de secado la solucin primero se congela,
y posteriormente se deshidrata mendiante un sistema de calentamiento
y un sistema de vaco, acoplados de tal manera que el agua de la muestra
siempre est en forma slida y su prdida sea slo por sublimacin.
conexin de
vaco
( a)
vlvula de
descarga
conexiones para
calentamiento
motor
conexin
agitador alimentacin
de vacjo
\
vlvula de
descarga
motor
( b)
Figura 13.8: a) Secador de doble cono b) Secador de tambor rotatorio.
13.4. DISEO DE SECADORES 769
chaqueta
refrigerada
placa de
P--" calentamiento
muestra congelada
cubierta seca
ndeo congelado
producto seco
Figura 13.9: Proceso de liofilizacin.
13.4 Diseo de Secadores
Los mtodos para el diseo de equipos de secado estn ntimamente
relacionados con la forma en que se transfiere el calor en el equipo y
con el grado de complejidad de la descripcin del mismo. Dos tipos de
diseo de secadores son de particular importancia:
Diseo de secadores adiabticos.
Diseo de secadores no adiabticos.
13.4.1 Diseo de Secadores Adiabticos
El diseo de un secador requiere de la determinacin de valores expe-
rimentales. Para obtener experimentalmente la velocidad de secado de
un material slido, se procede a colocar una muestra en una charola,
de tal menera que slo se exponga la superficie del slido a la corriente
de aire que se utilice para secar. La variacin de la humedad del slido
puede medirse por medio de una balanza. Las condiciones de secado
deben ser constantes y aproximadamente iguales a las que se utilizarn
a gran escala.
La Figura 13.10 muestra una curva tpica de un secado experimen-
tal. La Figura 13.10a muestra la variacin del contenido de humedad de
770
CAPTULO 13. SECADO
Tiempo
Contenido de agua
Figura 13.10: Curva de secado experimental. Tomada de: Porter ti a/,
1973.
Reproducida con el permiso de Me Graw Hill inc. Copyright 1973. Todos los derechos reservados.
slido (W) con el tiempo. Diferenciando estos datos se puede obtener la
velocidad de secado y granearla contra el contenido de humedad como
aparece en la Figura 13.10b, o contra el tiempo.
Revisando la forma de las curvas de la Figura 13.10 se observan dos
regiones: La regin A-B de las curvas, donde la humedad del slido
desciende linealmente y la velocidad de secado se mantiene constante,
llamada regin de velocidad de secado constante; y la regin B-C de las
curvas donde la humedad decrece en forma ms lenta y la velocidad de
secado desminuye con el tiempo, llamada regin de velocidad de secado
decreciente.
Las regiones caractersticas del secado pueden ser racionalizadas en
funcin de los conceptos:
- Agua libre en el slido.
- Agua ligada en el slido.
En la regin de velocidad de secado constante, se presenta la e-
vaporacin del agua libre, de tal manera que su movimiento a travs
del slido por capilaridad o difusin es ms rpido que su velocidad
de evaporacin. El secado se efecta por evaporacin de agua de la
superficie saturada del slido a travs de la pelcula estancada de aire
localizada sobre ste. Cuando esta superficie empieza a perder el 100
% de saturacin la velocidad de secado desminuye. El agua ligada
empieza a evaporarse dentro del slido, y el vapor a difundirse a travs
del slido hasta el aire. Este proceso es ms lento y por lo tanto retarda
la velocidad de secado. Debido a la situacin descrita anteriormente, el
tiempo de secado de un proceso debe ser calculado sumando los tiempos
de los perodos de secado constante y de secado decreciente.
Velocidad de Secado constante
Cuando el calor de evaporacin en el perodo de velocidad de secado
constante es proporcionado por aire caliente, se establece un equilibrio
dinmico entre la velocidad de transferencia de calor del aire al slido
y la velocidad de evaporacin. Bajo estas condiciones la superficie del
slido alcanza la temperatura de saturacin adiabtica o temperatura
de bulbo hmedo.
De acuerdo a la Figura 13.11 la velocidad de transferencia convectiva
de calor q ( energa / tiempo) est dada por:
q = \\A(T-Ti) ( 13.17)
donde:
h: Coeficiente de transferencia de calor entre la superficie del slido y
la pelcula estancada de aire sobre sta ( anlogo a los coeficientes
de transferencia de masa), [cal/L
2
t}.
A: rea expuesta al secado. [ Z /
2
] .
gas
T. H,C
Cj. Tj. Hj
Humedad hada la superficie
Figura 13.11: Transferencia convectiva de calor.
T: Temperatura en el seno del aire. [].
T: Temperatura en la superficie del slido.
El flux msico de agua puede ser expresado como:
J = k(d -C)
J = kp(Hi-H)
donde:
(13.18)
(13.19)
J: Flux de agua. [ M/L2 - t].
C{\ Concentracin de agua en la superficie del slido. [ M/L
3
] .
C: Concentracin de agua en el seno del aire. [M/L
3
].
k: Coeficiente de transferencia de masa en la pelcula estancada de
aire sobre el slido. [L/t].
p : Densidad de aire seco. [ M aire seco/L
3
de mezcla] .
p: l/V
H
El balance de agua en el sistema puede expresarse como:
dW
m
dt
= -JA
(13.20
donde m es la masa de slido seco utilizado y W la humedad del
slido.
Combinando las ecuaciones ( 13.19) y ( 13.20) se obtiene:
(13.21)
dt m
este resultado es difcil de utilizar debido a que generalmente las
humedades no son medidas directamente. Entonces las humedades de
la ecuacin (13.21) se expresan en funcin de temperaturas combinando
esa ecuacin con el balance de energa.
En un proceso adiabtico la transferencia de calor del aire al slido
es igual al total del calor latente de evaporacin, de tal manera que:
Calor transferido = ( Calor latente de evaporacin) ( Masa evapo-
rada)
o bien,
q =XJA ( 13.22)
Combiando las ecuaciones (13.17), (13.21) y ( 13.22) se puede obte-
ner la siguiente expresin:
esta ecuacin es equivalente a la ecuacin ( 13.21), pero est expre-
sada en funcin de dos temperaturas fcilmente medibles: la tempera-
tura de bulbo seco del aire T y la temperatura de saturacin adiabtica
o temperatura de bulbo hmedo T
t
.
Se puede calcular el tiempo de secado en el perodo de velocidad
de secado constante integrando la ecuacin ( 13.23) entre los limites
siguientes:
t = O W = W
0
t = t
c
W=W
C
obtenindose:
( 13.24) ,,
\\A(T -
donde t
c
es el tiempo para alcanzar la humedad crtica del slido
que es la humedad a la cual termina el perodo de velocidad de secado
constante.
Para el clculo de t
c
es necesario calcular h. Este coeficiente depende
de la geometra del secador:
En el caso de secado con flujo de aire paralelo a la superficie de un
slido y una temperatura entre 45 150C, el coeficiente de transferen-
cia de calor puede ser evaluado con la ecuacin,
h = 0.0204 G-
8
( 13.25)
donde:
G: Flux msico de aire. [Kg/h m
2
)] .
h: Coeficiente de transferencia calor. [Wattsm
2
A'] .
En el caso de gases en flujo turbulento y sistemas aire-agua, tambin
puede ser utilizada la analoga de Reynolds la cual establece una rela-
cin directa entre el coeficiente de transferencia de masa y el coeficiente
de transferencia calor de la siguiente forma:
k = -^ (13.26)
pCp
donde:
k: Coeficiente de transferencia de masa dado por la ecuacin (13.18).
p: Densidad msica total del gas.
Cp: Capacidad calorfica. [cal/M
0
].
La ecuacin ( 13.24) puede ser utilizada en forma combinada con la
ecuacin ( 13.25) o con la ( 13.26).
Velocidad de Secado Decreciente
En el perodo de secado de velocidad constante generalmente se evapora
la mayor parte del agua contenida en el slido, pero puede implicar
slo una pequea fraccin del tiempo total de secado. Por otro lado,
el perodo de velocidad de secado decreciente puede involucrar una
evaporacin menor de agua pero una mayor fraccin del tiempo total
de secado.
En el perodo de velocidad de secado decreciente la evaporacin del
agua ( ligada) es ms difcil, la velocidad de evaporacin depende de su
movimiento por difusin o capilaridad al interior del slido en forma de
vapor o en forma de lquido.
El anlisis detallado del perodo de velocidad de secado decreciente
es complejo y su descripcin se realiza en forma aproximada. Uno de los
modelos ms sencillos para describir este perodo establece una relacin
lineal de la velocidad de secado con la humedad, de la siguiente forma:
= -aW ( 13.27)
v ;
dt
donde a es una constante.
La ecuacin (13.27) puede integrarse entre los lmites:
t = t
e
W =W
C
t = t W = W
obtenindose la ecuacin siguiente:
1 W
*-* = -ln^ ( 13.28)
El tiempo total de una operacin de secado puede calcularse suman-
do las ecuaciones ( 13.24) y ( 13.28):
En el diseo de secadores el clculo del tiempo de secado permite su
dimensionamiento adecuado. En el caso de los secadores por aspersin,
el tiempo de secado debe ser menor al tiempo que dura la partcula en
alcanzar la pared del secador, de tal manera que cuando esto ocurra la
partcula ya este seca y deslice suavemente por la pared del secador.
Es decir, el tiempo de secado determina el dimetro del secador.
Ejemplo 13.8 .- Secado en la regin de velocidad constante.
Un material granular insoluble se va a secar en una charola de 45.7 x
45.7 x 2.54 cm. El material ocupa completamente la charola y se puede
considerar que los lados y el fondo de la bandeja estn aislados, de tal
manera que el calor slo se transmite por conveccin desde una corriente
de aire que fluye paralela a la superficie a una velocidad de 6.1 m/s. El
aire est a una temperatura de 65.6 C y tiene una humedad de 0.010
Kg de agua/Kg de aire seco.
Estimar la velocidad de secado del slido.
Solucin:
Para el clculo de la velocidad de secado se utiliza la ecuacin
(13.23):
m dW h
El empleo de esta ecuacin requiere calcular T
t
, h y A.
a) Clculo de T.
Para una humedad de H = 0.010 y una temperatura de bulbo
seco de 65.6
0
C, mediante la carta psicomtrica y utilizando la linea
de saturacin adiabtica se puede encontrar,
T = 28.9C
b) Clculo de h.
Se puede utilizar la ecuacin ( 13.25) con G = vp.
Para el clculo de la densidad del aire se necesita calcular el volumer
hmedo del aire. Utilizando la ecuacin ( 13.10),
, m
3
de mezcla
V
H
= ( 0.00283 + 0.00456//)( T + 273)
Kg de aire seco
m
3
de mezcla
V
H
= ( 0.00283 + 0.00456 x0.01)( 65.6 +273) ; :
v M
[Kg de aire seco
m
3
de mezcla
V
H
= 0.974
Kg de aire seco
La densidad de 1.0 Kg de aire seco y 0.01 Kg de agua acompaant
es:
_ 1_+0.01
El flujo msico es:
G =
s / \ m
G = 22,770
h m
2
El coeficiente de transferencia de calor es:
h = 0.0204( 22,770)'
8
Watts
h =62.45
m
2
- K
c) Clculo de A
El calor de evaporacin se obtiene de tablas de vapor a T, = 28.9
0
C,
este valor es:
A = 2,433^
Kg
y de acuerdo a la ecuacin (13.23),
m
dW 62.45 x x ^x (65.6 - 28.9)A'
dt
1000 J
2 , 4 3 3 x
m c?VF /^de agua
A dt ' h m
2
el rea de transferencia de acuerdo a las dimensiones de la charola
es:
A = 0.457 m x 0.457 m
/I = 0.209 m
2
F- (Kg/h)
25% (Kg/Kg)
75
8
C
Aire
T=15
8
C
H- 50 % Calentador
G
de aire
316 JSSL de antibitico
h
T= 60C, H= 5 %
Figura 13.12: Secador por aspersin.
de tal manera que la velocidad de secado es:
dW Kg de agua
m = 0.709 -
dt h
Ejemplo 13.9.- Secado de un antibitico.
Se requiere utilizar un secador por aspersin, en un arreglo como el
que se muestra en la Figura 13.12, para secar una solucin de antibitico
que contiene 25 % ( Kg/Kg) de slidos y se encuentra a una temperatura
de 20C. El aire que entra al secador es tomado de la atmsfera a 15 ( 7 y
con 50 % de humedad, y es calentado hasta 150C en un intercambiador
de calor utilizando vapor en forma indirecta. El aire de salida tiene una
temperatura de 75
0
C.
La capacidad calorfica de los slidos es de 0.4 Kcal/Kg C y la
temperatura de referencia es de 0C.
Si se desea producir 316 Kg/h de antibitico, el cual sale con 5 %
de humedad y a 60C, estimar:
a) El flujo de alimentacin.
b) La cantidad de agua evaporada en el proceso.
c) El flujo de aire necesario y la humedad de aire a la salida.
Solucin:
a) El flujo de alimentacin puede ser calculado mediante un balance
de slidos.
Entrada de slidos = Salida de slidos
( F} f) 9* " ^~~ ~ 'i / 01,- " ^\f r> r\r ^^
SO
^
aOS
\
Kg totales J \ h J \ Kg totales J
I<9
F = 1200
h
b) La cantidad de agua evaporada puede calcularse mediante un
balance de agua en los slidos.
Agua evaporada = Agua a la entrada Agua en el producto
Agua evaporada = 1200 - 0.75
h ) V Kg
Kg\ f
n
, Kg _
r- .05
h J \ Kg )
Agua evaporada = 884 -r
h
c) La humedad del aire a la salida y el flujo de aire, pueden calcularse
mediante un balance de masa y un balance de energa.
67( #
2
-#i) = 884
n
HI puede encontrarse con los datos del aire de entrada y la carta
pisicomtrica de la Figura 13.2,
#1 - 0.005
Kg de aire seco
El balance de energa est dado por:
[ Entalpia de la alimentacin] + [ Entalpia del aire a la entrada] :
[ Entalpia del producto] -f [ Entalpia del aire a la salida]
La entalpia de la alimentacin est dada por:
{a de slido
- K
9
0.4
Kg slido -
KQ\ ( Ka de aqua\
1200 - 0.75
h ) \ Kg )
\Kg de agua C
= 15,300
I<Cal
Kcal
l5-0)'g
h
La entalpia del producto es:
316 . o.95
deshdo
]
I
o.4 ( 6o -ore
Kg solido-
0
C J
316 o.05
,,
Kg de agua L
=
8,152.8^
h
( 60 - 0)'C
La entalpia del aire a la entrada puede calcularse utilizando la
ecuacin ( 13.12),
{[ 1.005 + ( 1.884)( 0.005)] ( 150)
KJ
( 2502)( 0.005)} -
Kg de aire seco J \4.187 KJ
Kcal
= 39.33 G
h
de igual manera la entalpia de aire a la salida es:
{[1.005 + ( 1.884)( //
2
)] ( 75)+
= 18 G + 631.3 GH-2
Kg de aire secoJ y4.187 KJ
Kcal
h
El balance de energa puede ser expresado como:
(15,300) + (39.33 G) = (8152.8) + ( 18 G + 631.3 GH
2
)
resolviendo simultneamente las ecuaciones de balance de masa y
energa se obtiene:
G = 30,320
2
= 0.0341
Kg de aire seco
13.4.2 Diseo de Secadores no Adiabticos
En los secadores no adiabticos la velocidad de secado depende de la
velocidad de transferencia de calor, a travs de una pared, hacia el
slido que se desea secar. Este tipo de secado se efecta al vaco para
remover rpidamente el vapor formado. La velocidad de secado debe
ser tal que evite la formacin de zonas de sobrecalentamiento que daen
el material.
Dos tipos de secadores no adiabticos son de particular importancia:
- Secadores no adiabticos de torta estacionaria.
- Secadores no adiabticos giratorios.
lmite del slido
slido hmedo
M
Calor
Figura 13.13: Secado de tortas estacionarias.
Secado de Tortas Estacionarias
Para calcular el tiempo de secado de slidos en charolas o en liofili-
zadores se puede utilizar un modelo aproximado. De acuerdo con la
Figura 13.13, el calor para producir la evaporacin ( o la sublimacin)
del agua, se transfiere por la pared del recipiente y a travs del slido.
Este calor permite que el agua se evapore a partir de una superficie
mvil localizada a una distancia Z. Arriba de esta superficie el slido
est seco y abajo de ella hmedo. Conforme el slido se seca el frente
desciende, aumentando la zona seca. Este modelo implica que tanto el
agua lquida ligada como la no ligada, no se transportan en el interior
del slido.
De acuerdo con el modelo el secado del slido se logra cuando la
distancia Z es igual a cero. El tiempo para lograr lo anterior se puede
obtener realizando balances de energa.
Suponiendo que la velocidad de secado es lenta, de tal manera que
el calor transferido de la pared hacia el slido es igual al valor de estado
estacionario ( constante) dado por:
q = \iA(T
0
-T
z
) ( 13.30)
que para el caso de slidos puede ser expresada como:
donde:
13A. DISEO DE SECADORES 783
h: Coeficiente de transferencia de masa, [cal/ L
2
t].
K: Conductividad trmica. [cal/L t].
T
0
: Temperatura en la base de la charola. [].
TZ' Temperatura en el frente de secado. [ j.
q: Flujo de calor, [cal/t].
El calor transferido puede ser relacionado con el movimiento del
frente de secado por medio del balance de calor en estado estacionario:
[Calor transferido] = ( Agua e vaporada) ( Calor de evaporacin)
o en forma de ecuacin:
(13.32)
donde:
A: rea de la seccin transversal de la charola. [L
2
].
A: Calor de evaporacin. [cal/M].
p
0
: Concentracin de agua ligada y no ligada por volumen de slido
mojado. [M/L
3
].
Combinando las ecuaciones (13.31) y ( 13.32) e integrando entre los
limites,
t = t Z= Z
se obtiene:
( 13.33)
al final de la operacin cuando t = t j , todo el slido est seco y
Z O, la ecuacin ( 13.33) se puede expresar como:
( 13.34)
[
K
(T
0
-T
Z
)\
Este resultado indica que el espesor de la torta es un factor impor-
tante en el tiempo de secado. Si el espesor se dobla el tiempo de secado
se incrementa cuatro veces.
La ecuacin ( 13.33) tambin puede utilizarse para calcular la evo-
lucin del secado con el tiempo, como porcentaje o fraccin de la zona
seca 0, expresndola de la siguiente manera:
Z [ (2
K
(T.-T
Z
)\Y
0
- T
=
i
1
- I p.w )']
( 13
'
35)
El anlisis anterior es sencillo y til como punto de partida en el
diseo de secadores no adiabticos.
Secado Giratorio
La descripcin del secado en equipos giratorios como los secadores de
tipo tambor o los de doble cono, es ms compleja. La carga de materia
se mueve constantemente, de tal manera que las partculas contactan h
superficie caliente en forma intermitente y en repetidas veces, durant
su residencia en el equipo de secado.
El diseo de este tipo de secadores se basa en determinaciones ex
perimentales a nivel piloto y un escalamiento considerando que el pro
ducto del tiempo de secado, por el rea de secado por unidad de volu
men, se mantiene constante al cambiar de escala, es decir:
A
3
Piloto V / Industrial
Esta ecuacin supone que las condiciones a nivel piloto son iguak
a las de nivel industrial: Las temperaturas, los niveles de vaco, y '
porcentaje del volumen total que es ocupado por el slido.
13.5. SUMARIO 785
13.5 Sumario
El secado es una operacin empleada en la preparacin final de los
productos. Consiste en una reduccin del contenido de humedad de los
slidos con el propsito de mejorar su estabilidad, reducir su volumen
y preservar su actividad.
Las formas de realizar una operacin de secado se clasifican en
adiabticos y no adiabticos. En el secado adiabtico se agrega aire
caliente directamente sobre el material que se desea secar. El secado
no adiabtico se realiza mediante un calentamiento indirecto del mate-
rial de inters.
Existen diversos equipos de secado, los cuales se pueden clasificar
mediante la forma en que se realiza el secado. Los secadores adiabticos
ms utilizados son el de aspersin, el secador instantneo y el de lecho
fluidizado. Entre los no adiabticos se pueden citar los secadores tipo
charola, de doble cono, tambor rotatorio y los liofilizadores.
El diseo de los secadores est basado en una combinacin de la
teora de secado y datos experimentales obtenidos directamente con el
material de inters.
13.6 Problemas
13.1.- El aire de una habitacin tiene una humedad H de 0.021 Kg de
agua Kg aire seco, se encuentra a 32.2 C y a una atmsfera de presin.
Calcular:
a) El porcentaje de humedad del aire de la habitacin.
b) El porcentaje de humedad relativa.
Resp. ( a) 67.5 % ( b) 68.9 %
13.2.- Una mezcla ai re-vapor de agua tiene una temperatura de
bulbo seco de 65.6C y una temperatura de bulbo hmedo de 32.2
C. Calcular la humedad de la mezcla.
Resp. H = 0.0175 Kg de agua/Kg de aire seco
13.3.- Se desea secar aire con temperatura de bulbo seco de 37.8 C
y temperatura de bulbo hmedo de 26.7 C, enfriando primero a 15.6
C para condensar vapor de agua y despus calentndolo a 23.9 C.
( a) Calcular la humedad y porcentaje de humedad iniciales.
( b) Calcular la humedad y el porcentaje de humedad finales.
Resp. ( b) H = 0.0115 Kg de agua/Kg de aire seco.%H = 60%
13.4.- Una torta de filtrado se coloca en una charola de 30.5 x 30.5 x
2.54 cm. Se seca por la parte superior con aire cuya temperatura de
bulbo hmedo es de 26.6 C y su temperatura de bulbo seco es 48.9
C. El aire fluye en forma paralela a la superficie con una velocidad de
45.75 m/min.
Estimar el tiempo para pasar el slido de una humedad inicial de
0.2 Kg de agua/Kg de slido seco, hasta su humedad crtica de 0.09 Kg
de agua/Kg slido seco.
Resp. t = 13.3 h
13.5.- En el secado de una muestra de 3.765 Kg de un alimento
mediante.un flujo de aire sobre la superficie superior de una charola d<
0.186 m
2
de rea, se obt uvi eron los siguientes datos:
13.6. PROBLEMAS 787
Tiempo ( h)
0.0
0.4
0.8
1.4
2.2
3.0
4.2
5.0
7.0
9.0
12.0
Peso ( Kg)
4.944
4.885
4.808
4.699
4.554
4.404
4.241
4.150
4.019
3.978
3.955
a) Granear los datos de humedad del slido W contra el tiempo.
b) Obtener la velocidad de secado en cada punto y granearla contra
la humedad del slido.
c) Estimar la velocidad de secado en el perodo de velocidad cons-
tante.
d) Estimar la humedad crtica.
e) Estimar la humedad de equilibrio.
f) Estimar el tiempo para disminuir la humedad del slido de 0.25
a 0.09 Kg/Kg.
c) Resp. 0.996 Kg/h - m
2
; d) Resp. 0.17 Kg/Kg] e) Resp.
0.05 Kg/Kg] f) Resp. 4.1 h
13.7 Bibliografa
York. 11, 307-333.
Brocklebank, M.P. 1990. Downstream processing plant and equip-
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chemical Engineering Handbook. Principies, Process Design, and
Equipment. Vogel, H.C. ( Ed.). Noyes Publications. New Jersey.
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Treybal, R.E. 1980. Operaciones de Transferencia de Masa. Me Graw
Hill. 2 ed. Mxico. 12, 723-791.
Apndice A
Material Biolgico
A.l Introduccin
En los procesos de bioseparacin los productos finales pueden ser clulas
enteras, compuestos extracelulares o compuestos intracelulares. El
conocimiento de las caractersticas bsicas de estos productos es funda-
mental para el diseo, seleccin y manejo de las operaciones de biospa-
racin. En las operaciones de liberacin de producto es muy importante
la naturaleza de la membrana y pared celular; en la adsorcin, preci-
pitacin, electroforsis es necesario conocer las cargas externas de los
productos, slo para citar algunos ejemplos. Con el propsito de re-
saltar algunas caractersticas bsicas de los productos biotecnolgicos,
en este apndice se presenta una descripcin general de la estructura y
funcin de las clulas y sus principales compuestos.
En la seccin A.2 de este apndice se abordan algunos conceptos
bsicos sobre la estructura celular, en la seccin A.3 se presentan las
principales molculas biolgicas: protenas, lpidos, azcares y cidos
nucleicos. Finalmente en la seccin A.4 se establece la forma como
puede describirse el crecimiento celular.
A.2 Clulas y Virus
En 1938 Matthias Schleiden y en 1939 Theodor Schw ann establecieron
que las plantas y los animales estn compuestos de clulas, las cuales
789
790 APNDICE A. MATERIAL BIOLGICO
son la unidad bsica de los seres vivos (Brachet, 1961). En la actualidad
la teora celular comprende dos ideas bsicas:
1. Todos los seres vivos estn compuestos de clulas y productos
celulares.
2. Slo se forman clulas nuevas a partir de clulas preexistentes.
El conocimiento actual de los organismos vivos, desde los unicelu-
lares hasta los vegetales y mamferos, permite afirmar que un orga-
nismo vivo es un sistema abierto, isotrmico, de molculas orgnicas
autoensamblables, autorregulables y autoreplicables; operando bajo el
principio de mxima economa en cuanto a partes y procesos, el cual
promueve mltiples reacciones secuenciales para la transferencia de e-
nerga y para la sntesis de sus componentes, por medio de catalizadores
orgnicos que ellos mismos producen (Lehininger, 1989).
Los organismos vivos pueden clasificarse dependiendo de la estruc-
tura y complejidad de sus clulas en procariotes y eucariotes. Dentro
de estas categoras se han agrupado desde los ms simples hasta los
ms complejos.
Recientemente el hombre ha sido capaz de modificar el contenido
gentico de las clulas mediante la transferencia controlada de genes,
creando las clulas recombinantes.
Los virus constituyen tambin una entidad biolgica de gran impor-
tancia biotecnolgica, a pesar de no constituir propiamente organiza-
ciones celulares.
En esta seccin se revisan las caractersticas bsicas de cuatro tipc
de organizaciones biolgicas que participan en las bioseparaciones:
Clulas procariticas
Clulas eucariticas
Clulas recombinantes
Virus
A.2. CLULAS Y VIRUS 791
A.2.1 Clulas procariticas
Las clulas procariticas son las primeras clulas que surgieron de la
evolucin biolgica, son tan sencillas que poseen nicamente una mem-
brana celular y no contienen ncleo. Las dimensiones tpicas de estas
clulas van de 0.5 a 3 fin.
Dentro de los organismos procariotes se encuentran las bacterias y
las algas cianfitas. La Figura A.l muestra la estructura de una clula
de Escherichia coli (E. coli) que es una procariote tpica, as como
sus principales componentes: pared celular, membrana, zona nuclear,
ribosomas y granulos.
La pared celular o membrana externa, es una estructura que encierra
a toda la clula incluyendo la membrana plamtica y aparece en algu-
nas clulas procariticas. Est compuesta de polisacridos, pptidos y
lipoprotenas, y su funcin es darle proteccin a la clula
La membrana plasmtica de las clulas procariticas delimita a la
clula y est compuesta por un 45% de lpidos y un 55% de protenas.
Esta membrana es una caracterstica comn a todas las clulas y tiene
funciones nicas, entre las que destaca su papel como barrera altamente
selectiva en la regulacin del transporte de molculas hacia adentro y
hacia afuera de la clula.
La regin nuclear est desprovista de membrana, razn por la cual
en ocasiones el material nuclear (cido desoxirribonucleico o DNA)
puede agruparse en ms de una regin. Es en las molculas de DNA
donde se almacena la informacin gentica que le permite a la clula
reproducirse y vivir.
Los ribosomas son estructuras supramoleculares conformadas por
dos subunidades, en ellas se lleva a cabo la traduccin del mensaje
gentico para realizar la sntesis de protenas.
Los granulos estn compuestos de polisacridos y funcionan como
almacenes de combustible.
El citosol es todo el material celular contenido por la membrana.
Bacterias
Las bacterias son los organismos procariticos de gran importancia
biotecnolgca. An cuando existen miles de especies diferentes de
Figura A.l: Estructura tpica de una clula procariote (E. coli). a)
pared celular b) membrana plasmtica c) zona nuclear d) ribosomas e)
granulos f) citosol.
bacterias, las clulas de estos organismos se caracterizan por presen-
tarse solamente en una de tres formas diferentes: esfrica o elipsoidal,
cilindrica o de bastn y helicoidal o de espiral. En particular, a las que
presentan forma esfrica se les llama cocos y presentan un dimetro del
orden de 1 fim. A las que tienen forma de bastn se les llama bacilos
y tienen dimensiones del orden de 0.5 a 1.0 firn de ancho por 2 a 3 //ra
de largo.
Las diferencias morfolgicas entre las bacterias no son muchas, sin
embargo presentan una gran diversidad fisiolgica que les ha permitido
desarrollarse en una gran variedad de habitats, soportando pH' s en el
rango de 1 a 11, y temperaturas entre O y 92C'; siendo capaces de
desarrollarse tanto en condiciones aerbicas como anaerbicas (Millis,
1985).
Los productos que se obtienen mediante la fermentacin con clulas
procariotes pueden ser:
Biomasa o protema unicelular;
Productos finales como solventes y cidos.
Metabolitos primarios como aminocidos, protenas y nucletidos.
Metabolitos secundarios como antibiticos, pigmentos y polisacridos.
En la Tabla A.l se presentan algunas de las clulas procariticas
que se utilizan para producir productos finales y metabolitos.
Al utilizarse una bacteria para obtener un producto biotecnolgico,
se pueden presentar dos casos: que la bacteria excrete el producto como
parte de su metabolismo, o que el producto permanezca dentro de la
bacteria. En el segundo caso cobra especial importancia el conocimiento
que se tenga sobre las estructura de la pared y de la membrana celular,
as como el de la ubicacin del producto, ya que el proceso de biosepa-
racin que se disee debe contemplar la ruptura de la clula.
En el estudio de la pared celular de bacterias se ha empleado la
tcnica de tincin de Gram que ha permi t i do clasificar a las bacterias en
bacterias Gram positivas (Gram-(-) y bacterias Gram negativas ( Gram-
). En la Tabla A.2 se presenta una comparacin de las principales
caractersticas de estas bacterias(Tortora et a/, 1989).
Tabla A.l: Productos obtenidos de organismos procarioticos
Producto Organismo Producto Organismo
cidos (orgnicos)
Actico A. aceti
Glucnico P. ovalis
Lctico L. delbrueckii
2-Oxoglucnico P. fluorescens
cidos (amino)
Glutmico C. gluiamicum
Isoleucina "
Leucina "
Lisina "
Valina "
Antibiticos de Bacilos
Colistina B. polymyxa
Gramicidina S. B. brevis
Bacitracin B. lich.eniform.is
Antibiticos de
Estreptomices
Cloranfenicol 5. venezuelae
Eritromicina 5. eriytkreus
Kanamicina 5. canamyceticus
Lincomicina S. lincolnensis
Estreptomicina 5. griseus
Tetraciclina S. aureojaciens
Enzimas
Amilasa
Asparagiiiasa
Catalasa
Fumarasa
(3 - Glucanasa
Glucosa isomerasa
Lactasa
Penicilin acilasa
Peuiciliiiase
Nucletidos
Acido guanlico
Acido Xantlico
Polisacridos
Dextran
Xantana
B. subtilis
E. coli
E. carotovora
M. lysodeikticus
B. ammoniagenes
B. subtilis
B. circulara
A. mussouriensis
B. coagulants
E. coli
E. coli, B. megaterium
B. subtilis
B. subtillis
B. ammoniagenes
B. subtillis
B. ammoniagenes
L. mesenteroides
X. campestris
Solventes/combustibles
Acetona
Etanol
C. acetobutylicum
Z. mobilis
Fuente: Millis, 1985.
vados.
Tabla A.2: Caractersticas comparativas de las Bacterias Gram-f y
Gram-.
Caracterstica
Reaccin Gram
Capa de peptidoglucano
Contenido de
lipopolisacridos
Contenido de lpidos
y lipoprotenas
cidos teicoicos
Espacio periplsmico
Membrana exterior
Produccin de
toxinas
Resistencia a
rompimiento fsico
Rompimiento de la
pared celular por
lisozima
Suceptibilidad a
detergentes
amnicos
Resistencia a secado
Gram-Positiva
Retiene el cristal
violeta y permanece
de color prpura
Gruesa (multicapa)
Virtualmente no
tiene
Bajo
Abundantes
Ausente
Ausente
Exotoxinas
primarias
Alta
Alta
Marcada
Alta
Gram-Negativa
Puede ser decolorada
y permanece roja
Delgada (simple)
Alto
Alto
Ausentes
Presente
Presente
Endotoxinas
primarias
Baja
Baja (requiere
pretratamiento)
Mucho menos
marcada
Baja
Las paredes celulares de las bacterias Gram-f y Gram- (Figura A.2)
poseen una caracterstica molecular comn, en ambas existe un rgido
esqueleto que est constituido por cadenas polisacridas paralelas, en-
trecruzadas covalentemente por medio de cadenas peptdicas. Este
rgido armazn, recibe el nombre de peptidoglucano o murena. La
unidad bsica que se repite en la estructura del peptidoglucano es
la de disacrido constituido por N-acetil-D-glucosamina y el cido N-
acetilmurmico.
En las paredes de las clulas Gram-positivas la capa de peptidoglu-
cano es mucho ms gruesa que en las clulas Gram-negativas. En estas
ltimas la capa de peptidoglucano se encuentra localizada en el espa-
cio periplsmico enlazndose covalentemente a las lipoprotenas de la
capa exterior de la pared celular. El espacio periplsmico esta cons-
tituido por una sustancia semejante a un gel, que contiene una alta
concentracin de enzimas degradativas y protenas de transporte.
La estructura del peptidoglucano de la pared celular bacteriana es
resistente a la accin de las enzimas que hidrolizan los pptidos, las
cuales no atacan a los pptidos que contienen D-aminocidos como
los que se encuentran en la estructura de la pared (D-alanina, D-
glutamina).
A.2.2 Clulas Eucariticas
La clula eucaritica tiene un alto nivel de organizacin y presenta une
estructura muy compleja. Son clulas de mayor tamao que las proca
riotes alcanzando dimetros hasta de 20 jum. En las clulas eucariotica:
las funciones se llevan a cabo en organelos, cada uno de los cuale
realiza una funcin especfica y est limitado por una membrana propia
Son clulas que tienen un ncleo verdadero, ya que ste esta confinad-
por la membrana nuclear. Los microorganismos constituidos de clula
eucariotes son: algas, protozoarios y hongos. De este tipo de clula
estn constituidos adems, los organismos superiores como los vegetak
y los animales.
En la Figura A.3 se presentan esquemas de clulas eucaritic
tpicas: .clula animal y clula vegetal; puede verse en la figura qi
existen algunas diferencias esenciales entre las clulas vegetales y 1;
animales, algunas de las ms relevantes son las siguientes:
pared
celular
(a)
fosfolpido
capas de
peptidoglucano
proteina
capa de lipoprotena
peptidoglucano
pared
celular S
(b)
lipopolisacarido
fosfolfpido
membrana
plasmtica
fosfolpido
Figura A.2: Estructura de la pared celular bacteriana, a) bacterias
Grarn-)- b) bacterias Gram-.
En las clulas vegetales existe una rgida pared celular, constituida por
celulosa, cuya funcin es similar a la de las clulas procariticas:
brindar proteccin a la clula.
Las clulas animales no presentan pared celular.
Las clulas vegetales presentan cloroplastos, que son los organelos en
los cuales se lleva a cabo la captura de la energa solar y la con-
versin de la misma en energa qumica durante el proceso foto-
sinttico.
Los cloroplastos estn ausentes de las clulas animales.
En la Tabla A.3 se presenta una descripcin de las estructuras celu-
lares comunes a todas las clulas eucariticas, y sus funciones.
En la seccin anterior se prest atencin especial a las bacterias pues
este tipo de microorganismos es de particular inters en la biotecnologa.
En el caso de las clulas eucariotes adems de las clulas de organismos
superiores, interesan particularmente los hongos.
Los hongos son microorganismos de dos tipos: mohos y levaduras.
Los mohos son hongos superiores con estructuras vegetativas llamadas
miscelios, presentan un dimetro entre 5 15 fim y una longitud en-
tre 50 5000 /ira. Las levaduras tienen forma elipsoidal y miden de
1 a 5 fj,m. Las levaduras son ampliamente usadas, por ejemplo en \
produccin de bebidas y pan, mientras que los mohos se utilizan en le
produccin de cido ctrico y antibiticos. En la Tabla A.4 se presen
tan algunos productos obtenidos a partir de algunas clula eucariote:
(levaduras y mohos).
Recientemente tambin las clulas eucariticas animales han sid(
utilizadas en los procesos biotecnolgicos. Las clulas animales presen
tan varias formas dependiendo del tipo de tejido al cual pertenecen ^
su dimetro aproximado es de 20 //m. A diferencia de las clulas mi
crobianas, la velocidad de crecimiento en las clulas animales es baja
Su crecimiento presenta inhibicin por contacto. Con frecuencia la
clulas animales se cultivan o crecen formando tumores y actualment
se estn desarrollando nuevas tcnicas tanto para su cultivo como par
su cosecha. El cultivo de clulas animales presenta problemas que a:
no se solucionan del todo y se encuentra en una etapa de desarrolle
Cuerpo de
inclusin
Citoplasma
Vacuola
Tilacoides
Membrana celular
Cloroplasto
Figura A.3: Clulas eucariotes tpicas: a), clula ani mal ; b) clula
vegetal.
Tabla A.3: Estructuras comunes de las clulas eucariticas y sus fun-
ciones.
Estructura Descripcin Funcin
Ncleo Celular
Ncleo
Nuclolo
Cromosomas
Gran estructura rodeada por
una doble membrana, contiene
nuclolo y cromosomas
Cuerpo granular dentro del
ncleo, consta de RNA y
protenas.
Compuestos de un complejo
de DNA y protenas lla-
mado cromatina.
Control de la clula
Lugar de sntesis
ribosmica; ensamble
de subunidades del
ribosoma
Contienen genes (unida-
des de informacin
hereditaria que gobiernan
la estructura y actividad
celular).
Sistema de Membranas de la Clula
Membrana Celular
Retculo endo-
plasmtico (RE)
Ribosomas
Aparato de Golgi
Lisosomas
Vacuolas
Membrana limitante de la
Clula viva
Red de membranas internas
que se extienden a
travs del citoplasma
Granulos compuestos de
RNA y protenas, algu-
nos unidos al RE, otros
libres en el citoplasma
Compuesto de saculacioiies
membranosas planas
Sacos membranosos
(en animales)
Sacos membranosos
(en plantas, hongos y algas)
Contiene al citoplasma,
regula el paso de materiales
haca dentro y fuera de la
clula; ayuda a mantener la
forma celular; comunica a la
clula con otras.
Sitio de sntesis de
lpidos y de protenas
de membrana; origen de
vesculas intracelulares de
transporte, que acarrean
protenas en proceso
de secrecin.
Sntesis de polipptidos
(protenas)
Modifica, empaca (para
secrecin) y distribuye
protenas a vacuolas y a
otros organelos.
Contiene enzimas que
degradan material ingerido,
las secreciones y desperdicios
celulares.
Transporta y almacena
material ingerido,
desperdicios y agua.
Tabla A.4: Productos obtenidos de organismos eucariotes
Organismos
cidos
Ctrico
Furnrico
Glucnico
Antibiticos
Cefalosporina (C y P)
Zeranol
Penicilinas
Enzimas
a Amilasa
Catalasa
Glucosa oxidasa
Invertasa
Lipasa
Proteasa
- Acida
- Alcalina
- Neutra
Solvente/combustible
Etanol
A. niger
R. nigricus
A. niger
C. acremonium
F. graminearum
P. chrosogenum
A. oryzae; A. niger
A. oryzae, A. niger
A. oryzae; A. niger
S. cereviseae
A. oryzeae; A. niger
M. rn.ieh.ei
A. oryzae; A. niger
A. oryzae
A. niger; A. oryzae
S. cereviseae
Conversin de esteroides
Deshidrogenacin en 1 y 2 C. radicla
Hidroxilacin en
6, 7, 9, 11 y 15
F. javanicum
C. lunata,
R. nigricans, A. ochraceus,
A. niger
Vitaminas
Riboflavina A. gossypii
Adaptada de: Millis, 1985.
vados.
Tabla A.5: Productos obtenidos de clulas animales
Producto
Interfern
Urokinasa
Vacunas virales:
Influenza
Enfermedad de Newcastle
Rubola
Fiebre amarilla
Linea celular
Leucocitos humanos
Rion humano
Fluido de embrin de pollo
Fluido de embrin de pato
Adaptada de: Millis, 1985.
vados.
En la Tabla A.5 se presentan algunos productos obtenidos a partir de
este tipo de clulas.
A.2.3 Clulas Recombinantes
La manipulacin de la molcula de DNA utilizando tcnicas de inge
niera gentica ha permitido transformar clulas silvestres en clula
recombinantes. La organizacin celular de la recombinante es la mism
que la de la clula natural, slo que a las clulas recombinantes se le
ha transferido o adicionado uno o ms genes, con el propsito que 1
clula exprese la informacin que est codificada en tales genes. De est
manera, por medio del cultivo de clulas recombinantes ha sido posibl
la obtencin de productos tales como hormona de crecimiento, insulin
humana, interferones, activador del plasmingeno tisular, vacunas,
anticuerpos monoclonales, entre otros.
Los microorganismos ms utilizados para producir clulas recomb
nantes son las bacterias y en particular la E. coli. Debido a la simp
cidad de las clulas procariticas y a su alta velocidad de crecimient
ha sido posible aplicar exitosamente en estas clulas las tcnicas de
ingeniera gentica.
A.3 . BIOMOLECULAS. 803
A.2.4 Virus.
Los virus constituyen un material biolgico cuya nica funcin es la au-
toreplicacin, lo cual ocurre nicamente cuando parasitan a una clula.
El virus carece de membrana y no tiene citoplasma. Su genoma puede
estar constituido por DNA o RNA pero nunca por ambos y constar de
una o dos cadenas. El genoma se encuentra encerrado dentro de una
cpsula constituida de protena. Su tamao vara entre 0.03 0.1 //m
y su importancia radica en que son ampliamente utilizados en la pro-
duccin de vacunas. En general los virus se clasifican por sus carac-
tersticas morfolgicas.
A. 3 Biomolculas.
En esta seccin se estudia la estructura y principales propiedades de
cuatro tipos de molculas constituyentes de las clulas:
Protenas
Carbohidratos
Lpidos
cidos nucleicos
A.3.1 Protenas
Las protenas son polmeros de alto peso molecular formadas por sub-
unidades llamadas aminocidos. Son las molculas orgnicas ms abun-
dantes en la clula, constituyen el 50% o ms de su peso seco. El peso
molecular de stas oscila entre 5,000 y 40,000,000 daltons. Existen
muchas clases diferentes de protenas y cada una de ellas se especializa
en una funcin biolgica diferente.
Cada protema tiene en su forma nativa una forma tridimensional
caracterstica llamada conformacin. De acuerdo a su conformacin las
protenas pueden clasificarse en fibrosas y globulares. En la Tabla A.6
se listan algunas protenas de estos tipos y se especifican sus funciones.
Tabla A.6: Clasificacin de las protenas por su funcin biolgica
Tipos y ejemplos Localizacin o funcin
Enzimas:
Hexoquinasa
Citocromo c
DNA-polimerasa
Protenas de reserva:
Ovoalbmina
Casena
Ferritina
Protenas de transporte:
Hemoglobina
Mioglobina
Seroalbmina
/?i-Lipoprotena
Protenas contrctiles:
Miosina
Dinena
Protenas protectoras en la
sangre de los vertebrados:
Anticuerpos
Fibringeno
Trombina
Toxinas:
Toxina diftrica
Venenos de serpiente
Gosipina
Hormonas:
Insulina
Hormona adrenocorticotrpica
Hormona del crecimiento
Protenas estructurales:
Protenas de recubrimiento
viral
Glucoproteiias
a-Queratina
Colgeno
Elastina
Mucoproteiias
Fosforila glucosa
Transfiere electrones
Replica y repara DNA
Proteiia de la clara de huevo
Protena de la leche
Reserva de hierro en el bazo
Transporta O- en la sangre de los
vertebrados
Transporta O- en el msculo
Transporta cidos grasos en
la sangre
Transporta I/pidos en
la sangre
Filamentos estacionarios en las
miofibrillas
Cilios y Bjelos
Forman complejos con protenas extraas
Precursor de la fibrina en la coagulacin
sangunea
Componente del mecanismo de coagulacin
Toxina bacteriana
Enzimas que hidrolizan los fosfoglicridos
Protena txica de la semilla de algodn
Regula el metabolismo de la glucosa
Regula la sntesis de corticoesteroides
Estimula el crecimiento de los huesos
Cubierta alrededor del cromosoma
Recubrimientos celulares y paredes
Piel plumas uas pezuas
Tejido conectivo fibroso (tendones, carflago)
Tejido conectivo elstico (ligamentos)
Secreciones mucosas, fluido sinovia!
Tabla A.7: Clasificacin de las protenas conjugadas
Protena Conjugada
Nucleoprotena
Lipoprotena
Glicoprote/na
Hemoprotena
Flavoprotena
Metaloprotena
Grupo Prosttico
Acido nucleico
Lpido
Oligosacrido
Hierro
Nucletido de flavina
Metal
Las protenas fibrosas son insolubles en agua y en soluciones salinas
diluidas, fsicamente son muy resistentes y constituyen los elementos
estructurales bsicos del tejido conjuntivo de los animales superiores.
Ejemplos de esta clase de protenas son el colgeno, la aqueratina y
la elastina.
Las protenas globulares por regla general son solubles en agua
y tienen una funcin activa dentro de la clula. Todas las enzimas
son protenas globulares, tambin los anticuerpos, algunas hormonas y
muchas protenas de transporte como la hemoglobina.
Dependiendo de su composicin, las protenas se dividen en sim-
ples y conjugadas. Las simples son aquellas que por hidrlisis pro-
ducen solamente aminocidos y contienen generalmente 50% de car-
bono, 23% de oxgeno, 7% de hidrgeno, 16% de nitrgeno y de O a
3% de azufre. Las conjugadas son aquellas que por hidrlisis producen
no solamente aminocidos, sino tambin algunos componente orgnicos
o inorgnicos. La porcin no aminocida de la protena conjugada se
denomina grupo prosttico. De acuerdo a la naturaleza qumica de este
grupo las protenas conjugadas se clasifican en los seis grupos que se
muestran en la Tabla A.7 (Palmer, 1991).
Todas las protenas que se conocen tienen funciones diferentes den-
tro de la clula y estn constituidas por nicamente 20 tipos de amino-
cidos, lo que sugiere que la funcin de cada una de ellas puede estar de-
terminada por la secuencia de aminocidos de su cadena polipptidica.
En consecuencia es importante conocer la estructura de los aminocidos
que las constituyen.
H
I
R-C-COOH
I
NHa
Figura A.4: Frmula de la estructura general de los a aminocidos
encontrados en las protenas
Aminocidos
La Figura A.4 muestra la estructura general de los 20 aminocidos que
se encuentran en las protenas. Todos ellos tienen un grupo carboxilo
libre y un grupo amino libre, excepto la prolina. Todos los aminocidos
encontrados en las protenas son a aminocidos, puesto que el grupo
amino est sobre el tomo de carbono a. Los aminocidos se caracteri-
zan adems por una cadena lateral o grupo R sustituido en su carbono
a.
Los a aminocidos se han clasificado en base a la polaridad de sus
grupos R. De acuerdo a esta clasificacin existen dos clases principales
de aminocidos: con grupos R no polares y con grupos R polares.
Aminocidos con grupos R no polares: Un grupo no polar e;
enteramente covalente y es hidrofobia), es decir, es relativamente in
soluble en soluciones acuosas y soluble en solventes orgnicos com<
el hexno. Los aminocidos no polares o hidrofbicos son: alanina
leucina, isoleucina, valina, prolina, fenilalanina, triptofano y metionina
Los grupos R de los primeros cinco son hidrocarburos alifticos, el grup>
R del ltimo contiene azufre y los dos restantes contienen un anill
aromtico dentro del grupo R.
Aminocidos con grupos R polares: Un grupo R polar tieri
carcter inico y es hidroflico, es ms soluble en agua que un n
polar debido a que en soluciones acuosas su estructura puede ser e;
tabilizada por puentes de hidrgeno. Los grupos polares pueden s<
neutros, bsicos o cidos.
1. Polares sin carga : En este grupo se encuentran los aminocidos:
serina, treonina y tirosina que deben su polaridad a sus grupos
hidroxilo; la asparagina y la glutamina cuya polaridad proviene
de sus grupos amdicos; la cistena cuya polaridad proviene de la
presencia de un grupo sulfhidrilo y finalmente la glicocola, que
en muchos casos se considera como no polar. Dentro de estos
aminocidos, la cistena y la tirosina son los que presentan una
polaridad ms marcada.
2. Polares con carga positiva (bsicos): En este grupo se encuentran
los aminocidos que poseen carga neta positiva a pH 7. Todos
ellos tienen seis tomos de carbono y son: lisina, arginina e his-
tidina. La histidina presenta un grupo funcional imidazol y posee
propiedades lmites. A pH 6 ms del 50% de las molculas de
histidina poseen un grupo R cargado positivamente, pero a pH 7
menos del 10% de ellas poseen carga positiva.
3. Polares con carga negativa (cidos): Los aminocidos que pre-
sentan carga neta negativa a pH 7 son los cidos asprtico y
glutmico. Presentan carga negativa debido a que cada uno de
ellos posee en el grupo R un segundo grupo carboxilo que se en-
cuentra completamente ionizado y, por lo tanto, cargado negati-
vamente.
Propiedades cido-bsicas de los aminocidos. En gran medida
la comprensin del comportamiento de las protenas est basada en el
conocimiento de las propiedades cido-base de los aminocidos que la
constituyen.
Los aminocidos tanto en forma cristalina como en solucin, presen-
tan una estructura ionizada que genera considerables momentos dipo-
lares. Esto se traduce en altas constantes dielctricas y altos puntos de
fusin. En la Figura A.5 se muestran las formas: no ionizada y de ion
hbrido de los aminocidos.
El comportamiento cido-base de los aminocidos se formula en
trminos de la teora de Brnsted-Lowry. De acuerdo con esta teora,
cuando un aminocido en forma de ion hbrido cristalizado se disuelve
808 APNDICE A, MATERIAL BIOLGICO
H H
I |
R C COOH R c COO
NH
2
Figura A. 5: Formas de un aminocido: a) no disociada b) de ion
hbrido.
en agua, puede actuar como un cido (donador de protones) o como
una base (aceptor de electrones). Por ejemplo, si se disuelve alanina en
agua sta puede actuar en alguna de las siguientes formas (Lehninger,
1989):
como cido:
H
3
N
+
CH(CH
3
)COO~ < - * H+ + H
2
NCH(CH)
3
COQ-
como base:
H
+
+ H
3
N
+
CH(CH
3
)COQ- -> H
3
N
+
CH(CH
3
)COOH
las sustancias que poseen esta propiedad son anfteras y se denominar
anflitos.
Niveles Estructurales de la Protena
Comnmente se emplean cuatro trminos para designar los diferente;
niveles estructurales de la protena: estructura primaria, estructura
secundaria, estructura terciaria y estructura cuaternaria.
Estructura Primaria. Los aminocidos que forman las protenas, s<
encuentran unidos entre s formando las llamadas cadenas peptdicas
La estructura primaria como se muestra en la Figura A. 6 a), es la s
cuencia de aminocidos que forma el esqueleto covalente de dichas ca
denas. Un enlace peptdico une el grupo a carboxilo de un aminocid.
con el grupo a animo de el siguiente aminocido de la cadena. Est
a) Estructura primara: scuncfa d* aminocidos
R R* R R
H H O H H O H H O H H O
b) Estructura secundaria: hlice y laminar
aminocido
c) Estructura terciaria.
d) Estructura cuaternaria.
Figura A.6: Niveles estructurales de la protena: a) Estructura pri-
maria b) Estructura secundaria c) Estructura terciaria d) Estructura
cuaternaria.
es un enlace covalente altamente estable en el cual el grupo imino (-
NH-) del enlace no posee tendencia significativa a ionizarse o a captar
protones en el intervalo de pH entre O y 14 y el enlace C-N (que posee
40% de carcter de enlace covalente doble) del enlace peptdico es rela-
tivamente rgido y no puede girar libremente. Cuando dos aminocidos
se unen por medio de este enlace se pierde una molcula de agua, por
lo que se comunmente se dice que slo se unen los residuos. En esta
estructura los grupos R quedan fuera de la cadena y cada cadena pre-
senta en un extremo un grupo aamino libre y en el otro extremo un
grupo carboxilo libre.
Existe una amplia evidencia experimental que indica que el enlace
peptdico es el nico enlace covalente que existe entre los aminocidos
que forman la cadena. Sin embargo, puede presentarse otro tipo de
enlace covalente que es el enlace disulfuro de la cisteina. Este acta en
algunas protenas como enlace transversal entre dos cadenas polipep-
tdicas separadas o entre curvaturas de una misma cadena.
Estructura Secundaria: La estructura secundaria de una protena
(Figura A.6 b) se refiere al ordenamiento regular y peridico que pre-
senta al menos parte de una cadena polipeptdica a lo largo de una
direccin, el cual es estabilizado por puentes de hidrgeno entre los gru-
pos R de la misma cadena. La estructura secundaria es caracterstica
en las protenas fibrosas. La direccionalidad del ordenamiento se pierde
con la presencia de ciertos aminocidos en este arreglo regular y se pasa
a otro nivel estructural.
Estructura Terciaria: El hecho de que existen aminocidos que
pueden ocasionar el cambio de direccin de la cadena, conduce a que
exista un gran nmero de diferentes posibles estructuras de la ca-
dena originadas por la libre rotacin alrededor de los enlaces en ese
punto de doblamiento. Sin embargo, se ha encontrado que cada cadena
polipeptdica tiene solamente una forma caracterstica de doblamiento
en esos puntos, a este arreglo especfico se le llama estructura terciaria.
Este tipo de estructura es estabilizada por los enlaces que se presentan
entre los residuos aminocidos de diferentes partes de la cadena. Debe
notarse que debido al giro de la cadena peptdica, dos aminocidos que
estn muy separados entre s en la estructura primaria, pueden quedar
espacialmente juntos en la estructura terciaria.
Estructura Cuaternaria: La estructura cuaternaria se refiere a la
estructura tridimensional completa de una protena. Esto es, la forma
en que se disponen en el espacio las cadenas polipeptdicas individua-
les de una protena que posee ms de una cadena. La mayora de
las protenas grandes, ya sean globulares o fibrosas poseen dos o ms
cadenas polipeptdicas.
Conformacin: A la estructura combinada secundaria, terciana y
cuaternaria de una protena se le llama conformacin. Las cadenas
polipeptdicas de una protema poseen solamente una conformacin en
condiciones normales de temperatura y pH. Se denomina conformacin
nativa y es la que le confiere actividad biolgica y estabilidad a la
protena.
Las protenas mantienen su actividad biolgica slo en un estrecho
rango de temperatura y pH. Cuando las protenas globulares se expo-
nen a pH extremos o a altas temperaturas pierden su conformacin
y consecuentemente su actividad. En estas condiciones se dice que la
protena est desnaturalizada, siendo el efecto ms visible de esto un
descenso en su solubilidad. Se ha encontrado que la desnaturalizacin
no afecta los enlaces covalentes de la secuencia peptdica (estructura
primaria), y que es posible que la protena recupere su conformacin
nativa mediante un proceso llamado renaturalizacin. Ese hecho sugie-
re que la secuencia de aminocidos de la cadena polipeptdica contiene
la informacin necesaria para especificar su conformacin nativa.
Enlaces que Mantienen la Estructura de la Protena
Debido a los aminocidos que conforman las protenas, stas presentan
caractersticas anfotricas, de tal manera que en su superficie existen
regiones cargadas positivamente, negativamente, regiones neutras y re-
giones no polares. Por lo tanto las interacciones que mantienen la
conformacin de la protena son diversas y complejas, entre stas se
encuentran: enlaces covalentes (simples y dobles), interacciones elec-
trostticas, efectos dipolares (puentes de hidrgeno), interacciones de
van der Waals e interacciones hidrofbicas. Las caractersticas ms
importantes de estas interacciones son las siguientes:
Enlaces Covalentes. Cuando un par de electrones es compartido
por dos tomos se forma un enlace covalente, en este enlace cada tomo
aporta un electrn. La distribucin de los electrones entre los tomos
produce una fuerza neta de atraccin electrosttica que mantiene unidos
a los tomos y les proporciona una gran estabilidad. Por otra parte,
el enlace covalente permite que los tomos unidos por l puedan girar
libremente en torno al enlace. La distancia entre los tomos que estn
involucrados en este enlace es de 2 a 4 A (Angstroms). Si dos tomos
comparten dos pares de electrones entre ellos entonces se forma un
enlace covalente doble. En este caso, la fuerza electrosttica es mucho
mayor, la distancia es menor y el enlace es mucho ms rgido, lo que
ocasiona que las molculas no puedan rotar alrededor del enlace.
Por lo antes mencionado puede esperarse que la estructura primaria
de la protena, la cual est constituida de residuos de aminocidos
unidos entre si por enlaces covalentes peptdicos, sea bastante estable.
Otros enlaces covalentes que se presentan son los enlaces disulfuro (-
S-S-) de la cistina, stos estn involucrados en el mantenimiento de la
estructura terciaria de la protena.
Interacciones Electrostticas. Otro mecanismo que contribuye a
la estabilidad de las molculas de protena, son las interacciones elec-
trostticas que se presentan entre los grupos cargados de stas. La in-
teraccin electrosttica ocurre entre pares de grupos en el mismo medio.
La fuerza (F
1
) entre dos grupos (A y B) en una solucin diluida est
dada por la Ley de Coulomb:
Z
A
Z
B
e
2
Dr*
donde Z y Zg son los nmeros de unidades de carga acarreados
por el grupo A y B respectivamente, e es la carga elctrica del electrn,
r es la distancia entre los grupos y D es la constante dielctrica del
medio .
Las estructuras terciaria y cuaternaria de la protena pueden involu-
crar interacciones electrostticas entre aminocidos con grupos R que
tengan cargas opuestas, por ejemplo entre lisina y cido glutmico. Sin
embargo, cabe mencionar que en un medio acuoso un grupo cargado
establece enlaces con el agua ms fcilmente que con cualquier otro
grupo cargado de la protena.
Efectos Dipolares En la formacin de enlaces covalentes ocurre con
frecuencia que el par de electrones no est igualmente compartido entre
los dos tomos, sino que los electrones pueden asociarse ms con uno
de ellos que con el otro, producindose as una distribucin asimtrica
de carga entre los tomos llamada efecto dipolar. Este efecto origina
que el tomo con mayor densidad electrnica tenga una carga parcial
negativa y pueda formar enlaces electrostticos dbiles con otro tomo
que tenga una carga parcial positiva. El enlace ms importante de este
tipo es el enlace de hidrgeno o puente de hidrgeno, el cual se forma
entre tomos de oxgeno (carga parcial negativa) de un grupo, y tomos
de hidrgeno (carga parcial positiva) en el otro. La distancia a la cual
ocurren este tipo de enlaces est entre 1.5 y 5 A.
Los enlaces de hidrgeno son relativamente dbiles comparados con
los covalentes. Los enlaces de hidrgeno en agua lquida poseen una
energa de enlace de aproximadamente 4.5 Kcal/mol, mientras que los
enlaces covalentes H-O de la misma poseen una energa de enlace de
110 Kcal/mol. En contraparte a su baja energa de enlace, el puente de
hidrgeno presenta un efecto coligativo, ocasionando que se intensifique
la fuerza de atraccin entre las molculas de agua. Debido a este efecto
las molculas de agua presentan una alta estabilidad ya que todas ellas
se unen por puentes de hidrgeno. Cuando la protena se encuentra
en solucin acuosa se pueden establecer enlaces de hidrgeno entre los
diferentes pptidos de sta y el medio, as como tambin entre los dife-
rentes residuos aminocidos de una misma cadena, lo cual contribuye
a incrementar la estabilidad de las estructuras secundaria, terciaria y
cuaternaria de la protena.
Enlaces de van der Waals. Hay muchas molculas que tienen un
momento dipolar elctrico permanente, en particular, como ya se dijo
antes, la molcula de agua. Una molcula polar es capaz de atraer a
otras molculas que normalmente no presentan momento dipolar. El
campo elctrico de la molcula polar produce una distribucin asim-
trica de densidad de cargas en la otra molcula, de tal manera que se
crea un dipolo inducido en el mismo sentido al de aquella. El resultado
es una fuerza de atraccin entre ellas. Los enlaces que resultan de estos
efectos dipolares son llamados enlaces de van der Waals. Estos enlaces
juegan un importante papel en el tipo de estructura tridimensional que
adopta la protena. Son mucho ms dbiles que los enlaces covalentes
y de ellos depende adems, la tensin superficial, los cambios de fase,
la adherencia, la cohesin y la viscosidad. Su radio de accin va de 10
a 1000 A.
Enlaces no polares o Hidrofbicos Los enlaces hidrofbicos se
realizan estre especies no polares y se explican mejor en el marco de
los sistemas protena-solvente. Las molculas de agua se unen entre s
por medio de enlaces de hidrgeno y son muy estables. Consecuente-
mente, la~ estructura ms estable para una protena en solucin acuosa
ser aquella que posibilite la formacin del mayor nmero de enlaces
de hidrgeno entre sta y el medio acuoso que la rodea. Ahora bien,
los aminocidos que presentan grupos R no polares (hidrofbicos) no
pueden establecer puentes de hidrgeno con el agua y con frecuencia
forman regiones hidrofbicas constituidas por varios aminocidos no po-
lares, las cuales normalmente se encuentran en el interior de la estruc-
tura proteica. Esto hace que este tipo de enlaces sea muy importante
en la estabilidad de la estructura terciaria de la protena.
A.3.2 Carbohidratos
Los carbohidratos o sacridos son compuestos que se encuentran en to-
dos los seres vivos. Los carbohidratos se dividen en: monosacridos,
disacridos, oligosaccridos y polisacridos. Funcionan como elemen-
tos estructurales y en particular los polisacridos funcionan como al-
macenes de combustible. La frmula general de los carbohidratos es
((7//20)
n
, con n > 3.
A.3 . BIOMOLECULAS, 815
Figura A.7: Estructura qumica de la D- glucosa
5
CHjOH CH
2
OH
)H
OH
Figura A.8: Estructura qumica de: a) Ribosa b) Desoxirribosa
Monosacridos: D- glucosa
Los monosacridos o azcares simples son los carbohidratos ms pe-
queos y contienen de tres a nueve carbonos. Los monosacridos de
tres carbonos son llamados triosas, los de cinco pentosas y los de seis
carbonos se denominan hexosas. En la Tabla A.8 se presentan los mo-
nosacridos ms comunmente encontrados en la naturaleza.
Uno de los monosacridos ms importantes es la D- glucosa. La
D-glucosa puede existir en dos formas isomricas diferentes: a D-
glucosa y la (3 D- glucosa. En solucin la D- glucosa se presenta
comunmente con una estructura en forma de anillo como la que se
muestra en la Figura A.7.
Otro monosacrido de inters es el azcar de cinco carbonos llamado
D- Ribosa (Figura A.8), debido a que es el principal componente de los
cidos nucleicos tanto en su forma natural como oxidada (desoxiribosa).
Un derivado importante de los monosacridos es el cido N - acetil-
Tabla A.8: Monosacridos presentes en los sistemas biolgicos
Clase
Triosa
(tres carbonos)
Pentosa
(cinco carbonos)
Hexosa
(seis carbonos)
HC
HO
HC
HC
Aldosas
derivadas de aldehido
CHO
HCOH
CH
2
OH
D-Gliceraldehido
CHO
HCOH
HCOH
HCOH
CHÔH
D-Ribosa
Cetosas
derivadas de ke tonas
CHiOH
C = O
\
\
CH- zOH
Dihiroxiacetona
CH- OH
C = 0
HCOH
HCOH
CH
2
OH
D-Flibulosa
7//0 CHO CHO CH
2
OH
\ \ \
1 OH HOCH HCOH C = O
i i
1
7// HOCH HO
\
\
1 OH HCOH HO
i
1
1 OH HCOH HC
i
1
7W HOCH
i
1
7// HCOH
i
1
1 OH HCOH
1 1
CH?OH CH
2
OH CH
2
OH CH?OH
D-Glucosa D-Manosa D-Galactosa D-Fructuosa
murmico que es la unidad estructural ms importante del esqueleto
polisacrido de las paredes celulares bacterianas. Est constituido por
el aminoazcar N - acetil-D-glucosamina unido mediante enlace ster
al cido D-lctico.
Los monosacridos pueden unirse entre s mediante enlaces llama-
dos glucosdicos. Mediante este tipo de enlaces los monosacridos dan
origen a los disacridos, trisacridos y, en forma general a polisacridos.
Los enlaces glucosdicos ms comunes son: el o;(l > 4), el 3 (1 > 4) y
el a(l -> 6)
Polisacridos
En la sntesis de la mayora de los polisacridos como el almidn, la
celulosa y el glucgeno, interviene el monosacrido D-glucosa.
El almidn es la forma principal de almacenamiento de energa
en muchas plantas, se encuentra en dos formas: la a amilasa y la
amilopectina. La a amilasa son cadenas largas no ramificadas del
monosacrido D- glucosa, unidas entre s por enlaces a(l > 4) glu-
cosdicos. La amilopectina forma cadenas ramificadas constituidas por
unidades de D- glucosa unidas entre si por enlaces a(l > 4) glu-
cosdicos, excepto en los puntos de ramificacin donde el enlace que
se presenta es a(l > 6) glucosdico.
La celulosa es componente estructural de las paredes celulares y
es el polisacrido ms abundante en el reino vegetal. Es el principal
componente de la madera y el algodn. La celulosa es un polmero
lineal de la D- glucosa que posee enlaces /?(! * 4) glucosdicos.
El glucgeno, parecido al almidn en estructura, es el principal
polisacrido de reserva de las clulas animales. Se encuentra en canti-
dades importantes en el hgado (10% de su peso hmedo). En las clulas
hepticas el glucgeno aparece en forma de granulos. Se presenta en
forma de cadenas mucho ms ramificadas que las de la amilopectina.
Tambin es un polisacrido de la D- glucosa con enlaces a(\ * 4)
glucosdicos y en los puntos de ramificacin los enlaces son a (I > 6)
glucosdicos.
Tabla A.9: Clasificacin de los lpidos
Tipo de L'pido Esqueleto
Complejos (saponifcables)
- Acilglicridos
- Fosfoglicridos
- Esfingolpidos
- Ceras
Simples (insapouificables)
- Terpenos
- Esteroides
- Prostraglandinas
- Glicerina
- 3 fosfato de glicerilo
- Esfingosina
- Alcoholes no polares de
elevado peso molecular
A.3.3 Lpidos
Los lpidos son molculas biolgicas prcticamente insolubles en el agua
y pueden extraerse de sus fuentes mediante solventes no polares como el
benceno, el cloroformo y el ter. Debido a esta caracterstica los lpidos
se encuentran presentes en fases biolgicas no acuosas. Desempean
importantes funciones biolgicas como:
a) Componentes estructurales de las membranas.
b) Formas de transporte y almacenamiento del combustible catab-
lico
c) Componentes de la superficie celular relacionados con el recono-
cimiento de las clulas, la especificidad de especie y la inmunidad de
los tejidos.
Dentro de las lpidos se encuentran las hormonas y las vitamina
que son sustancias que presentan una alta actividad biolgica, as come
tambin las grasas, las cuales sirven como almacenes de combustible
Los lpidos adems se presentan formando parte de molculas ms com
plejas como las lipoprotenas y los glucolpidos.
Los lpidos se clasifican, de acuerdo a su estructura, en lpidos com
piejos y lpidos simples (Tabla A.9). Los primeros se caracteriza]
CH
3
( CH
2
) C
Figura A.9: Frmula general de los cidos grasos saturados
porque contienen cidos grasos como componentes y tambin reciben
el nombre de lpidos saponificables porque pueden producir jabones al
reaccionar con lcalis. Los segundos no contienen cidos grasos en su
estructura y por lo tanto son no saponificables.
cidos Grasos
Los cidos grasos se encuentran en grandes cantidades en los sistemas
biolgicos como componentes de los lpidos complejos. Los cidos grasos
ms abundantes encontrados en las plantas y en los animales poseen un
nmero par de tomos de carbono, las cadenas hidrocarbonadas tienen
entre 14 y 22 tomos de carbono.
Dependiendo de su cadena hidocarbonada, los cidos grasos pueden
ser saturados o insaturados. La Figura A.9 muestra la frmula general
de los cidos grasos saturados. Un cido graso insaturado se forma
cuando se reemplaza un enlace saturado (- C C} por un enlace
doble (C = C). Entre los cidos grasos saturados ms comunes se
encuentran el cido palmtico (C\o) y el cido esterico (Cis), y entre
los insaturados est el cido oleico (Cis)-
Los cidos grasos saturados e insaturados difieren en sus configu-
raciones estructurales. Los cidos grasos saturados presentan cadenas
hidrocarbonadas que pueden existir en un nmero infinito de conforma-
ciones debido a que los enlaces simples que unen los tomos de carbono
pueden girar libremente. La forma de cadena extendida que adopta
este tipo de cidos grasos es la de mnima energa. Este no es el caso de
los cidos grasos insaturados. En este tipo de cidos, los sitios donde se
unen los tomos de carbono por medio de un enlace doble presentan un
doblamiento rgido en la cadena, lo que provoca que la cadena hidrocar-
bonada slo presente dos tipos de configuraciones en sus enlaces dobles:
la configuracin cis y la configuracin trans.
Monocapas, bicapas y micelas lipdicas: Los lpidos son biomo-
lculas prcticamente insolubles en el agua, sto se debe a que su larga
cadena hidrocarbonada no es soluble en soluciones acuosas, sin embargo
el grupo carboxilo que presentan es hidroflico. Debido a lo anterior,
cuando un lpido polar (por ejemplo un fosfoglicrido) es colocado en
una interfase aire - agua, o en agua, las cabezas polares y las colas
hidrofficas dan lugar a diversos arreglos (Figura A. 10).
En la Figura A. 10a se observa como se forman en agua los agrega-
dos llamados micelas. En este tipo de estructuras las colas hidrocar-
bonadas se orientan en forma opuesta al medio acuoso y forman una
fase hidrofbica interna, mientras que las cabezas polares (hidroflicas)
estn expuestas en la superficie. Los fosfoglicridos forman tambin bi-
capas para separar dos compartimentos acuosos, como se muestra en la
Figura A.lOb. En la interfase aire - agua (Figura A.lOc) se forma una
monocapa con el grupo polar hidratado y la cola orientada hacia el aire.
Los liposomas (Figura A.lOd) son estructuras vesiculares formadas por
bicapas completamente cerradas, que se forman por exposicin de sus-
pensiones de fosfoglicridos en agua con oscilacin snica. Este tipo de
sistemas de bicapas tienen algunas propiedades fsicas similares a las de
las membranas protoplasmticas y son objeto de estudio como modelos
de membranas naturales.
Lpidos Simples
Los lpidos sencillos no contienen cidos grasos como componentes es-
tructurales, aparecen en las clulas y en los tejidos en cantidades me-
nores que los lpidos complejos y algunos de ellos tienen una intensa
actividad biolgicas. Hay dos clases de lpidos sencillos: los terpenos y
los esteroides. Dentro de los primeros se encuentran algunas vitaminas
y dentro de los segundos algunas hormonas. Tanto las vitaminas como
las hormonas son muy importantes en el funcionamiento normal de la
clula y son requeridas por sta en cantidades muy pequeas.
Los esteroides son lpidos que presentan una estructura bsica gene-
ral que se muestra en la Figura A. 11 a. Todos los esteroides se originan
del escualeno (Figura A. l l b) . Dentro de stos se encuentran las hor-
Agua
Aire
WLULLILUM
Agua
Pared
Agua
Figura A. 10: Sistemas estables fosfoglicrido-agua. a) Micelas formadas
en el agua, b) Bicapa de fosfoglicrido que separa dos compartimentos
acuosos, c) Monocapa en la interfase aire-agua d) Seccin transversal
de un liposoma.
<?H, CH, CH,
C-CHCH2-CH1--CH-CH2-CH2-C-CH-CH2-CH2-CH=C-CH2-CH-CH-C-CH2
CH, CH, CH,
b
Cf
C
Cl
CH,
I
HC(CH2)3-CH-(CH,)2
CH,'
Figura A.11: Estructura de algunos esteroides: a) Estructura bsic
general b) Estructura del escualeno c) Estructura del colesterol
monas, las cuales son controladores extremadamente potentes de las ve-
locidades de reaccin en los sistemas biolgicos. Las hormonas pueden
ser efectivas a niveles de 10~
18
M en tejidos humanos. El colesterol
(Figura A.lie) es un esteroide muy importante, es el precursor de mu-
chos otros esteroides dentro de los cuales se incluyen: los andrgenos
( hormonas sexuales masculinas), los estrgenos (hormonas sexuales
femeninas), la progesterona y las hormonas adrenocorticales.
Sistemas de Lipoprotenas
Los sistemas de lipoprotenas son sistemas que se forman de la aso-
ciacin de lpidos y protenas especficas, en los cuales se fusionan
las propiedades fsicas de las dos biomolculas. Los principales tipos
de lipoprotenas son: lipoprotenas de transporte y sistemas de mem-
branas. En estos sistemas los lpidos y las protenas se mantienen unidos
mediante enlaces hidrofbicos que se establecen entre las componentes
no polares de estas biomolculas.
Los sistemas de membranas pueden llegar a constituir hasta el 80%
de la masa celular seca total en algunas clulas eucariticas.
El modelo mas usado de la estructura de membrana es el mode-
lo del mozaico fluido de S.J. Singer y G. L. Nicolson. Este modelo
establece que los fosfolpidos de las membranas se hallan ordenados
en bicapas formando una matriz fluida de cristales lquidos y postula
que las protenas de la membrana son globulares. Este modelo explica
satisfactoriamente muchas de las propiedades y caractersticas de las
membranas, en particular su alta resistencia elctrica y su relativa im-
permeabilidad respecto de molculas muy polares.
Las lipoprotenas de transporte son complejos caractersticos del
plasma sanguneo. Este tipo de lipoprotenas transportan lpidos in-
solubles en agua entre los diferentes rganos por medio de la sangre,
en forma de partculas muy pequeas cuyo dimetro y peso permanece
constante.
A.3.4 cidos Nucleicos
Los cidos nucleicos son macromolctilas en forma de cadena cuya
funcin esencial es el almacenamiento y la transferencia de la infor-
OH OH
HO
HOP-0CH, .0
Base
H H
Figura A. 12: Estructura general de los nucletidos: a) Ribonucletido
b) Desoxirribonucletido
macin gentica. Son componentes fundamentales de la clula y cons-
tituyen entre el 5 y el 15% de su peso seco. Existen dos tipos de cidos
nucleicos: el cido desoxirribonucleico ( DNA) y el cido ribonucleico
(RNA).
Al igual que los aminocidos son los componentes estructurales de
las protenas, los nucletidos son los componentes estructurales de los
cidos nucleicos.
Nucletidos
Las unidades estructurales del DNA se denominan desoxirribonucleti-
dos y las del RNA se llaman ribonucletidos. Como puede observarse en
la Figura A.12, cada nuclotido est constituido por tres componentes:
una base nitrogenada heterocclica que es un derivado de purina o de
pirimidina; una pentosa y, una molcula de cido fosfrico.
El nombre de desoxirribonucletidos deriva de que la base esta unida
a la pentosa 2- desoxi- D- ribosa (Figura A. 12). Las diferencias qumicas
y fsicas entre desoxirribonucletidos radican en las diferentes bases que
los constituyen. En los ribonucletidos la base esta unida a la pentosa
D- ribosa. De igual manera, la diferencia entre los ribonucletidos es-
triba en la base que los conforma.
Hay cinco bases nitrogenadas (Figura A. 13) que pueden formar
parte de un nuclotido: adenina, guanina, ti mi na, citosina y uracilo.
Las primeras dos son purinas y las tres restantes son pirimidinas.
El grupo fosfato que constituye los nucletidos (Figura A. 12) se une
Purinas Pirimidinas
NH, O
Nf^C^\ HNlT>CH
N ^N'
H H
1
O
U o
HNf^cA 1
I I ,CH
- C, >, /
NH2
r
f
V
'Cî^CH
H
5
Figura A. 13: Estructura de las bases de los nucletidos. (1) Adenina
(2) Guanina (3) Uracilo (4) Timina (5) Citosina
mediante un enlace ster al tomo de carbono 5 de la pentosa. Cuando
el grupo fosfato de un nucletido se separa por hidrlisis, la estructura
residual recibe el nombre de nuclesido.
Todos los ribonuclesidos y desoxirribonuclesidos aparecen en las
clulas no solamente en forma de monofosfatos, sino tambin en forma
de difosfatos o trifosfatos. En particular, para la adenosina se tiene el
5'-monofosfato de adenosina (AMP), el 5'-difosfato de adenosina (ADP)
y el 5'-trifosfato de adenosina (ATP). El ADP y el ATP son cidos rela-
tivamente fuertes que en su disociacin producen tres o cuatro protones
respectivamente, producto de sus grupos fosfricos. El sistema ATP-
ADP es el sistema principal para la transferencia de energa qumica
en la clula.
DNA
En 1953 J. D. Watson y F. H. C. Crick postularon una estructura
para el cido desoxirribonucleico. Propusieron que dicha estructura
est constituida por dos cadenas helicoidales antiparalelas, cada una de
ellas enrrollada alrededor del mismo eje. Cada cadena consiste de gru-
pos fosfato di-ester unidos a residuos de 3 D- desoxirribofuranosa (D-
desoxirribosa), por medio de enlaces 3'-5' (Figura A. 14). Propusieron
adems que las cadenas se mantienen unidas entre si por medio de
puentes de hidrgeno entre las bases purinas y pirimidinas en sus for-
mas tautmericas (Figura A.14b y Figura A.14c), mediante los pares
de bases: adenina (purina) con timina (pirimidina) y guanina (purina)
con citosina (pirimidina). El dimetro de la doble hlice es de 20 A y
una vuelta se completa cada 34 A. Cada vuelta de la cadena consta de
aproximadamente 10 nucletidos.
De la complementaridad de la unin de las bases, Watson y Crick
concluyeron que si la secuencia de bases de una cadena est dada, en-
tonces la secuencia de la otra cadena se determina automticamente.
Consecuentemente estaba planteado un mecanismo de copiado para la
transferencia del material gentico.
Se ha considerado que la estructura del DNA propuesta por Watson
y Crick, es uno de los hechos ms sobresalientes en el campo de la ciencia
hasta nuestros das.
El desarrollo ce los postulados anteriores ha conducido a lo que se ha
(a)
BaM
(b)
(c)
Pares de bases
complementaras
Esqueleto de
azcar-fosfto
Puente de
\ M hidrgeno
"--.</ /
\ x~ / x
8
Timina ~c^
H
^-N Adenina
n-^fS \ t
Desoxirribosa
Figura A. 14: Esquema del Acido Desoxirribonuleico: a) Estructura de
una sola cadena, b) Estructura de la doble hlice c) Bases puri nas y
pirimidinas unidas por puentes de hidrgeno.
denominado dogma central de la gentica molecular, que establece que
la informacin gentica fluye del DNA al RNA y de ste a la protena.
El dogma central establece tres procesos:
Replicacin: Es el primer proceso y es el proceso mediante el cual
el DNA produce molculas hijas idnticas a la progenitura.
Transcripcin: Es el proceso mediante el cual se realiza el copiado
del mensaje gentico contenido en el DNA al RNA mensajero.
Traduccin: Es el proceso que permite traducir las unidades de
informacin gentica o codones a secuencias de aminocidos en
una cadena peptdica. Esta traduccin se lleva a cabo en los
ribosomas. La traduccin del mensaje gentico da origen a la
sntesis de protenas.
Replicacin del DNA: El proceso de replicacin del DNA permite
que la informacin gentica sea perpetuada mediante su paso de una
generacin a otra. El inicio de la replicacin del DNA es un proceso que
antecede al fenmeno de la divisin celular y consiste en la separacin
de las dos cadenas de DNA, mismas que actan como moldes de dos
cadenas nuevas (Figura A. 15). La sntesis de las cadenas nuevas ocurre
por la adicin de nucletidos complementarios a las cadenas que sirven
de molde. La adicin de cada nucletido se realiza en la direccin 5' >
3'. La replicacin del DNA produce dos dobles hlices, cada una de las
cuales tiene una cadena de la doble hlice original y una cadena nueva.
A este tipo de replicacin se le llama replicacin semiconservativa.
El proceso de replicacin del DNA es esencialmente el mismo en
todos los organismos vivos, siendo ms complejo en los organismos su-
periores.
La replicacin completa del DNA slo ocurre durante la divisin
celular, pero existen con mucha frecuencia otros momentos de la ac-
tividad celular en los cuales se copia slo una parte de la informacin
gentica. Esto sucede cuando se transcribe por ejemplo, el gene que
tiene codificada la informacin para sintetizar una determinada prote-
na.
Figura A. 15: Replicacin semiconservativa de la molcula de DNA:
Cada cadena de la doble hlice progenitora sirve como molde para
generar dos cadenas hijas idnticas a ella. Fuente: Watson et a/, 1983
Reproducida con el permiso de W.H. Freeman and Co. Copyright 1983. Todos los derechos
reservados.
La Transcripcin del Mensaje Gentico: El RNA
Los genes estructurales que almacenan la informacin para la sntesis de
protenas, se copiarn de acuerdo a la demanda de protenas que tenga
el organismo. Sin embargo, el DNA no es el molde directo que se usa
en la sntesis de protenas sino que la informacin codificada en el DNA
se trascribe al RNA y es ste el que acta como molde para la sntesis
proteica. Este mecanismo ha permitido explicar cmo la sntesis de
protenas que se efecta en el protoplasma puede ser controlada por el
DNA localizado en el ncleo.
La Figura A. 16 muestra la estructura de un segmento de cido ri-
bonucleico (RNA). Este a diferencia del DNA, est constituido por una
sola cadena de nuclotidos. En la figura se puede observar adems que
la pentosa que forma parte del esqueleto de la cadena es una ribosa.
La informacin gentica codificada en el DNA en su secuencia de
nuclotidos, se trascribe a una molcula intermediaria que puede mo-
verse en el citoplasma: el mRNA o mensajero. El proceso por el cual
se lleva a cabo esta transcripcin se muestra en la Figura A. 17.
Las bases que constituyen la cadena de mRNA son dos purinas:
adenina y guanina y dos pirimidinas: citosina y uracilo. Es importante
hacer notar que existe una base en el RNA que no aparece en la cadena
de DNA. Esta base es el uracilo (U), el cual es qumicamente muy
similar a la timina y en el apareamiento de bases para la sntesis del
RNA ocupa el lugar de sta. Esto es, cuando en la cadena de DNA
aparece una adenina en la cadena de RNA se agrega un uracilo.
El proceso de transcripcin se realiza observando las siguientes dos
reglas: siempre ocurre, al igual que la replicacin del DNA, en la di-
reccin 5' > 3' y solamente una de las cadenas del DNA es copiada en
una molcula de RNA mensajero en un tiempo dado.
El orden en el cual aparecen los nucltidos en la cadena de mRNA
sintetizada, indica el orden o secuencia de los aminocidos en la ca-
dena peptdica. La informacin para la sntesis de un aminocido est
codificada en tres nuclotidos. A este grupo de tres nuclotidos se le
llama codn o triplete. Ahora bien, por una parte existen solamente
4 diferentes nuclotidos y por otra, se tiene que las protenas estn
constituidas por 20 tipos de aminocidos diferentes. Por lo tanto e-
xisten 64 codones (permutaciones) de tres bases cada uno para los 20
Base
Base
RNA
Figura A. 16: Estructura de un segmento de cido ribonucleico RNA
Cadenas
Cadena de RNA
Figura A. 17: Transcripcin del mensaje gentico por medio de la
sntesis de una cadena de mRNA
Tabla A. 10: Cdigo gentico
Codn Amino-
cido
TTT Fen
TTC
TTA Leu
TTG "
CTT Leu
CTC
CTA
CTG
ATT He
ATO
ATA
ATG Met
GTT Val
GTA
GTA
GTG
Codn Amino-
cido
TCT Ser
TCC
TCA
TCG
CCT Pro
CCC
CCA
CCG
ACT Tre
ACC
AC
ACG
GCT Ala
GCC
GCA
GCG
Codn Amino-
cido
TAT Tir
TAC
TAA Term*
TAG
CAT His
CAC
CA Gln
CAG
AAT Asii
AAC
AAA Lis
AAG
GAT Asp
GAC
GAA Glu
GAG
Codn Amino-
cido
TGT Gis
TGC
TGA Term
TGG Trp
CGT Arg
CGC
CGA
CGG
AGT Ser
AGC
AGA Arg
AGG
GGT Gli
GGC
GGA
GGG
Term. es un codn de terminacin del mensaje
aminocidos, de tal manera que existen aminocidos que son codifica-
dos por ms de un codn. Tambin existen codones que actan como
seales de terminacin del mensaje gentico. El conjunto de codones
constituye el cdigo gentico universal y se muestra en la Tabla A. 10.
En la Tabla A. 11 se muestran los significados de las abreviaturas
para los aminocidos y para las bases nitrogenadas.
Traduccin del Mensaje Gentico: Sntesis de Protenas
Cada molcula de mRNA da origen a una o varias cadenas peptdicas.
El proceso de traduccin del mensaje del mRNA se realiza en los riboso-
mas. En este proceso intervienen adems otros tipos de RNA: el rRNA
y el tRNA. El primero es un cido ribonucleico que se encuentra locali-
zado en los ribosomas y el segundo es un RNA de trasferencia ( t RNA)
que acta como adaptador en el ordenamiento lineal de los aminocidos
especficos conforme a la secuencia del ni RNA. La Figura A. 18 muestra
A.3. BIOMOLECULAS. 833
Tabla A.ll: Especificacin de las bases y los aminocidos
Nucletidos
G
A
T
C
= Guanina
= Alanina
= Timina
Citosina
Aminocidos
Ala =
Asn =
Asp =
Arg =
Gis =
Fen =
Gli =
Gln =
Glu =
His =
Alanina
Asparagina
Acido asprtico
Arginina
Cistena
Fenilalanina
Glicina
Glutamina
Acido glutmico
Histidina
Ile =
Leu =
Lis =
Met =
Pro =
Ser ^
Tir =
Tre =
Trp =
Val =
Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
Prolina
Serina
Tirosiia
Treonina
Triptofano
Val na
como se realiza este proceso y la forma estructural del t RNA. Como
puede verse en la Figura A.18a la estructura del tRNA presenta tres
lazos. En la parte inferior del segundo lazo se localiza un triplete deno-
minado anticodn. Este anticodn esta formado por las tres bases com-
plementarias al codn especfico que aparece en la cadena de mRNA.
La traduccin del mensaje consta de tres fases: iniciacin, elon-
gacin y terminacin. Prcticamente todas las protenas inician con el
codn AUG que codifica para metionina. A este triplete se le llama
codn de iniciacin y con frecuencia es eliminado despus de la sntesis.
Una vez que se inicia la sntesis ocurre la elongacin. En este pro-
ceso se van agregando sucesiva y ordenadamente (va los t RNA) los
aminocidos correspondientes a cada codn presente en la cadena de
mRNA. La sntesis de la cadena polipeptdica ocurre en la direccin:
extremo amino (NH^) a extremo carboxilo (COOH}. La traduccin
concluye cuando aparece un codn de terminacin en el mRNA. En
este momento termina la sntesis y la cadena peptclica es liberada.
Los mRNA pueden ser traducidos simultneamente por muchos ri-
bosomas. Por esta razn, una sola molcula de mRNA sirve para
generar varias copias de la misma cadena peptdica (Balbs y Bolvar,
1989).
(a)
Aminocido
( b )
< D
Subunidades
ribosomales
Ribosoma
Aminocido
de inicio segundo codon
( C)
trr
( d )
Figura A.18: a). Estructura del t RNA y sntesis de una cadena
peptdica. a) Estructura del t RNA. b) Iniciacin del proceso de sntesis,
c) Elongacin de la cadena peptdica. d) Terminacin del proceso de
sntesis.
DNA Recombinante: Recombinacin in vitro
Las molculas de DNA recombinante ( rDNA) son construidas en el
laboratorio por medio de la ingeniera gentica. Para llevar a cabo la
recombinacin in vitro de una molcula de DNA, la ingeniera gentica
requiere de los siguientes elementos:
1. Un mtodo que permitas romper y unir enlaces fosfodister de
molculas de DNA.
Existen cuatro mtodos para generar fragmentos de DNA:
La digestin de la molcula de DNA con enzimas de restriccin.
Ruptura mecnica del DNA en condiciones controladas.
A partir de molculas de RNA.
Sntesis qumica a partir de desoxirribonucletidos.
En ingeniera gentica el mtodo ms comn para fragmentar el
DNA es la digestin por enzimas de restriccin. La mayora de
estas enzimas reconocen secuencias de bases simtricas o palin-
drmicas en el DNA.
2. Una molcula de DNA capaz de autoreplicarse, y capaz de replicar
tambin el DNA que se le haya unido.
A este tipo de molculas se les llama vehculos moleculares de
clonacin o vectores. Dentro de los vectores ms usados se en-
cuentran los plsmidos y algunos DNAs virales. Para que el vector
de clonacin sea fcil de manejar (Balbs y Bolvar, 1989) debe
poseer las siguientes caractersticas :
Adecuada caracterizacin funcional.
Caracterizacin estructural completa. Esto es, debe conocerse
la ubicacin de sus genes y su secuencia nucleotdica.
El tamao del vector debe ser pequeo con el fin de aumentar
la eficiencia de entrada a la clula husped
Presentar estabilidad dentro del husped. Esto es, no debe ser
degradado.
Es muy conveniente que el vector contenga genes que puedan
usarse como marcadores para seleccionar las clulas recom-
binantes de las silvestres.
Presentar mltiple sitios nicos de restriccin dentro de los genes
que se utilizan como marcadores.
Debe ser capaz de incrementar (amplificar) su nmero de copias,
con el fin de obtener grandes cantidades del vehculo por
clula.
Los vectores ms usados por su simplicidad y facilidad de manejo
son los plsmidos. Los plsmidos son pequeos DNAs circulares
que se encuentran en forma natural fuera del genoma de algunas
clulas y que se replican autnomamente.
3. Un proceso mediante el cual se pueda introducir la molcula de
rDNA a la clula receptora.
Existen tres mecanismos mediante los cuales una molcula de
rDNA puede ser introducido a la clula receptora:
La conjugacin.
La transfeccin.
La transformacin.
Un proceso muy usado en la ingeniera gentica es la transfor-
macin. Este proceso conlleva la entrada del vector a la clula
a travs de la pared y membrana celulares. Una vez dentro la
molcula de rDNA puede replicarse autnomamente o recombi-
narse con el genoma de la clula receptora.
4. Un mtodo que permita seleccionar de un gran nmero de clulas
a aquellas que han adquirido la molcula de rDNA.
En la Figura A. 19 se presenta un esquema de el proceso mediante
el cual se produce un DNA recombinante, mismo que a su vez da lugai
a una clula recombinante.
En la "Figura A.19 se observan dos caminos paralelos que se unei
para formar la molcula recombinante. Por una parte se extrae ui
plasmido fragmentado
con enzimas d
restriocio'n
DNA pasajero
\ DNA
^/fragmentado
X /
/~~~?~^
con enzimas
de restriccin
marcador
'(resistencia a antibiticos)
Figura A. 19: Representacin esquemtica de la clonacin molecular del
DNA utilizando un plsmido como vector. Fuente: Watson et a/, 1983
Reproducida con el permiso de W.H. Freeman and Co. Copyright 1983. Todos los derechos
reservados.
plsmido de la clula seleccionada y se fracciona especficamente uti-
lizando endonucleasas de restriccin. Por otra parte, del DNA frac-
cionado de la clula de inters, se toma el DNA que se desea insertar
o clonar. A este DNA se le llama DNA pasajero o exgeno, este DNA
se rompe de la misma manera que el plsmido. Enseguida tanto el
plsmido como el DNA fragmentados se ponen en contacto y ocurre
la recombinacin. En este punto se obtiene una molcula de DNA re-
combinante o (rDNA). La molcula de rDNA se introduce dentro de la
clula husped y ocurre la transformacin. La clula as obtenida es una
clula recombinante, misma que se replicar y contendr la informacin
clonada.
A.4 Crecimiento Celular.
Independientemente de que el producto de inters sea intracelular (poi
ejemplo una protena), extracelular (metabolitos secundarios) o la ce
lula misma, es necesario cultivar las clulas con el fin de obtener e
producto deseado.
En un cultivo de clulas microbianas de tipo intermitente, todas la
clulas estn sujetas a las mismas condiciones de temperatura (T), pH
concentracin de sustrato ( S ] , concentracin de oxgeno (O), etc. E
crecimiento celular en este tipo de cultivo depende de las condicione
mencionadas y puede ser expresado en trminos del cambio con respect
al tiempo de la concentracin de clulas; lo anterior puede expresare
como:
dx
= f(T,
P
H,S,0,...) (A.:
En la Figura A.20 se muestra un esquema del comportamiento tpi<
que sigue el crecimiento celular en un cultivo intermitente sujeto a L
condiciones dadas por la ecuacin (A.l). En esta figura se observa
varias fases en la curva de crecimiento. Las fases se originan por 1
cambios que experimenta la poblacin celular debido a cambios en
medio.
En la fase lag se observa un crecimiento casi nulo de las clulas,
tiempo que dura esta fase se interpreta como el tiempo que tardan ]
A A. CRECIMIENTO CELULAR. 839
(c)
Figura A.20: Representacin esquemtica del crecimiento celular en
cultivo intermitente, a) Fase lag b) Fase exponencial c) Fase esta-
cionaria d) Fase de declinacin o muerte
clulas en adaptarse al medio de cultivo. Despus de esta fase se tiene
la fase exponencial en la cual se observa un crecimiento muy rpido
de la biomasa hasta un determinado tiempo. Se considera que en esta
fase las clulas ya adaptadas crecen rpidamente debido a que en el
medio encuentran todos los requerimientos nutricionales y ambientales
para reproducirse. La fase exponencial es la de mximo crecimiento y
la biomasa alcanza su valor ms alto; la terminacin de la misma se
considera que sucede por la carencia de algn nutriente o porque alguno
de los productos que la clula secreta al medio inhibe el crecimiento
poblacional. En la fase estacionaria el crecimiento celular cesa y la
biomasa permanece constante. Finalmente en la fase de declinacin o
muerte las clulas empiezan a morir y la biomasa disminuye. En este
momento se considera que las clulas mueren debido a que no pueden
mantener su metabolismo o por autolisis.
Cabe mencionar que en la segunda fase (exponencial) la clulas sin-
tetizan compuestos que les permiten crecer (duplicarse) y mantenerse
vivas en el medio de cultivo. A este tipo de compuestos se le llaman
metabolitos primarios. En la fase estacionaria la clula excreta al medio
productos llamados metabolitos secundarios, este tipo de compuestos
no esta asociado al crecimiento celular y muchos de ellos tienen impor-
tancia comercial.
Cuando el crecimiento celular en un cultivo intermitente est limi-
tado slo por la cantidad de sustrato inicial, la curva de crecimiento
puede expresarse con auxilio de la ecuacin de Monocl que describe la
relacin entre la velocidad especia fica de crecimiento y la concentracin
de sustrato, establecindose la siguiente expresin para el crecimiento
celular:
donde:
x: Concentracin de biomasa. [M/L
3
]
t: Tiempo, [t]
fj,: Velocidad especfica de crecimiento.^ "
1
]
y la ecuacin de Monod:
; (A.3
J\ "|~ J
donde:
lmax' Velocidad mxima de crecimiento. [t~
l
]
S: Concentracin de sustrato limitante. [M/L
3
]
K
a
: Concentracin de sustrato para / = 0.5 fJ >
max
En la Figura A.21 muestra la representacin grfica de la ecuaci
(A.3) para un caso particular. Puede observarse en la figura que la J
velocidad mxima de crecimiento /
mar
es el valor asinttico de la curv.
y K
s
es el valor de S cuando /z = fi
ma
x/2-
Con frecuencia la velocidad del crecimiento celular se describe e
trminos del tiempo de doblado esto es, del tiempo en el cual la ma
celular se duplica. La expresin para /u se obtiene integrando la ecuacic
(A.2) de la siguiente forma:
dx r
td
'Xl
donde:
f '
=
/
JO
A.4. CRECIMIENTO CELULAR. 84
0 .0
Ks0.22 1
Figura A.21: Representacin esquemtica de la variacin de la veloc
dad especfica de crecimiento (/u) con el sustrato (S).
Xi =: Masa celular al tiempo t = O
t: Tiempo de doblado
para obtener:
In2
por lo tanto el tiempo requerido para que la masa celular se dupliqi
esta dado por:
A,
V-
El cultivo de las clulas se lleva a cabo en dispositivos llamad
biorreactores los cuales deben disearse con el fin de proporcionar
stas las mejores condiciones fsicas para su desarrollo. Una vez qi
se ha realizado el cultivo de la clula y se tiene el producto de nter
dentro de la clula misma o en el caldo de cultivo, el paso siguiente es
realizacin del mejor proceso para obtener el producto con la activid
y pureza deseada, con el menor costo posible. El establecimiento (
dicho proceso es el objetivo del estudio de las Bioseparaciones.
A. 5 Bibliografa
Brachet, J. 1961. La clula viva. En: La Clula Viva. Selecciones de
Scientific American. Editorial Blume. Mxico.
Lehninger, A. L. 1989. Bioqumica. Ediciones Omega. Espaa.
Millis, N. F. 1985. The organisms of biotechnology. En: Comprenhen-
sive Biotechnology. Murray, M.Y. (Ed. ). Permagon Press. New
York. 1, 7-18.
Palmer, T. 1991. - Understanding Enzymes. Ellis Horwood Ltd. Ingla-
terra. 31-35
Tortora, G.J., Funke, B.R. y Case, C.L. 1989. Microbiology: An
Introduction. 3ra Edicin. The Benjamin/Cummings Publishing
Co. New York.
Watson,-J. D. y Crick, H. C. 1953. Molecular Structure of Nucleic
Acids: A structure for deoxyribose nucleic acid. Nature. 737.
Watson, J. D., Tooze, J; y Kurtz, D. 1983. Recombinant DNA a short
course. Scientific American.Books. New York. 2, 11-30.
USUARIO:
ESTE EJEMPLAR ES NUEVO, NO LO MALTRATES
POR FAVOR
U. R I. B, L
BIBLIOTECA
O A. Tejeda O R. M. Montesinos O R. Guzmn
Bioseparaciones
Armando Tejeda M.
Centro de Investigaciones Cientficas y Tecnolgicas
Universidad de Sonora
Hermosillo, Sonora. Mxico.
Rosa Ma. Montesinos C.
Depto. de Matemticas
Universidad de Sonora
Hermosillo, Sonora, Mxico.
<
c " -
Roberto Guzmn Z.
Department of Chemical Eng.
University of Arizona
Tucson, Arizona. USA.
Editorial Unisn
Hermosillo, Sonora. Mxico.
Contenido
I El Proceso de Bioseparacin
1 Introduccin
1.1 Evolucin de los Bioprocesos . . . .
1.2 Caractersticas de los Bioprocesos .
1.3 Sumario
1.4 Problemas
1.5 Bibliografa
2 Seleccin del Proceso
2.1 Introduccin
2.2 Fundamentos
2.2.1 Mercado y Especificacin del Producto
2.2.2 El Proceso
2.3 Equipo
2.4 Diseo
2.4.1 Desarrollo de un Caso Base
2.4.2 Sntesis de Proceso
2.5 Sumario
2.6 Problemas
2.7 Bibliografa
vi CONTENIDO
II Remocin de Insolubles y Ruptura Celu-
lar. 65
3 Filtracin 69
3.1 Introduccin 69
3.2 Fundamentos 71
3.2.1 La Filtracin como parte de los Sistemas de BSL 72
3.2.2 Pretratamiento de Caldos para BSL 74
3.2.3 Teora de la Filtracin 77
3.3 Equipo de Filtracin 80
3.3.1 Filtros Intermitentes a Presin 80
3.3.2 Filtros Continuos al Vaco 81
3.4 Diseo de Equipo de Filtracin 84
3.4.1 Filtracin Intermitente 85
3.4.2 Filtracin Continua 98
3.5 Sumario 105
3.6 Problemas .106
3.7 Bibligrafa 110
4 Centrifugacin 111
4.1 Introduccin 111
4.2 Fundamentos de la Centrifugacin 112
4.2.1 Ley de Stokes 112
4.2.2 Sedimentacin por Accin de la Gravedad . . . .115
4.2.3 Sedimentacin Centrfuga 116
4.2.4 Factor G 119
4.3 Equipo de Centrifugacin 120
4.3.1 Equipos de Filtracin-Centrfuga 120
4.3.2 Equipos de Sedimentacin Centrfuga 121
4.4 Diseo de Equipo de Centrifugacin 132
4.4.1 Diseo de Centrfugas Tubulares 132
4.4.2 Centrfuga de Discos 141
4.4.3 Escalamiento 148
4.4.4 Filtracin Centrfuga 153
4.5 Sumario 157
4.6 Problemas 158
CONTENIDO vii
4.7 Bibliografa 1 162
5 Rompimiento de Clulas 165
5.1 Introduccin 165
5.2 Fundamentos 166
5.2.1 Estructura de la Pared Celular 167
5.2.2 Sistemas Celulares de Secrecin 168
5.2.3 Mtodos de Rompimiento Celular 169
5.2.4 Mtodos de Permeabilizacin 174
5.3 Equipo de Rompimiento Celular 178
5.3.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad 178
5.3.2 Homogeneizador de Alta Presin 190
5.3.3 Microfluidizador 196
5.4 Diseo de Equipo de Rompimiento 199
5.4.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad 200
5.4.2 homogeneizador de Alta Presin 212
5.5 Sumario 215
5.6 Problemas 218
5.7 Bibliografa 221
III Concentracin del Producto 223
6 Extraccin 227
6.1 Introduccin 227
6.2 Fundamentos de la Extraccin 228
6.2.1 Tipos de Sistemas de Extraccin Lquido-Lquido 229
6.2.2 Qumica de la Extraccin Lquido-Lquido . . . . 229
6.2.3 Seleccin del solvente 242
6.2.4 Extraccin en Dos Fases Acuosas Inmiscibles . . . 243
6.3 Equipo de Extraccin 256
6.3.1 Equipo de Extraccin Intermitente 257
6.3.2 Equipo de Extraccin Continua 258
6.4 Diseo de Equipo de Extraccin 263
6.4.1 Extraccin Intermitente 264
6.4.2 Extraccin Continua 273
vni CONTENIDO
6.4.3 Extraccin Fraccionaria 292
6.5 Sumario 298
6.6 Problemas 299
6.7 Bibliografa 304
7 Adsorcin. 307
7.1 Introduccin 307
7.2 Fundamentos 309
7.2.1 Tipos de Adsorcin Segn el Tipo de Interaccin
Soluto-Adsorbente 310
7.2.2 Tipos de Adsorbentes 310
7.2.3 Relaciones de Equilibrio 319
7.2.4 Cintica de la Adsorcin 324
7.3 Equipos de Adsorcin 338
7.4 Diseo de Adsorbedores 342
7.4.1 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Intermitentes 342
7.4.2 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Continuo . . 358
7.4.3 Adsorcin en Lecho Fijo 363
7.5 Sumario 407
7.6 Problemas 408
7.7 Bibliografa 413
IV Purificacin del Producto 415
8 Cromatografa por Elucin. 419
8.1 Introduccin 419
8.2 Fundamentos 420
8.2.1 Tipos de Cromatografa Lquida segn el Princi-
pio de Separacin . . 422
8.2.2 Matrices 424
8.2.3 Tipo de Cromatografa de Acuerdo a la Presin
de Operacin 431
8.2.4 Relaciones de Equilibrio 431
8.2.5 Cintica de la Adsorcin 432
8.3 Equipo Cromatogrfico 432
1C
CONTENIDO ix
8.4 Diseo de Columnas Cromatogrficas 434
8.4.1 Modelos Cromatogrficos 434
8.4.2 Criterios de Evaluacin Tcnica del Comporta-
miento de las Columnas: Resolucin, Pureza y
Rendimiento 463
8.4.3 Escalamiento y Optimizacin 471
8.5 Sumario 482
8.6 Problemas 483
8.7 Bibliografa 490
9 Precipitacin 493
9.1 Introduccin 493
9.2 Fundamentos 494
9.2.1 Precipitacin por Disminucin de la Solubilidad . 495
9.2.2 Precipitacin de Protenas por Desnaturalizacin
Selectiva 516
9.2.3 Precipitacin por Afinidad 522
9.3 Equipo de Precipitacin 525
9.4 Diseo de Precipitadores 525
9.4.1 Cintica de la Precipitacin 527
9.4.2 Diseo de Precipitadores 533
9.5 Sumario 543
9.6 Problemas 544
9.7 Bibliografa 545
10 Ultrafiltracin 547
10.1 Introduccin 547
10.2 Fundamentos 548
10.2.1 Procesos de Membrana 548
10.2.2 Flujo Cruzado o Tangencial 554
10.2.3 Teora de la Ultrafiltracin 555
10.3 Equipos 573
10.3.1 Membranas 573
10.3.2 Mdulos 574
10.4 Diseo de Procesos de UF 579
10.4.1 Objetivo de la UF 581
x CONTENIDO
10.4.2 Mecnica de Fluidos 583
10.4.3 Mtodos de Operacin 586
10.4.4 Diseo de la Unidad de UF .589
10.5 Sumario 610
10.6 Problemas 611
10.7 Bibliografa 615
11 Electroforesis 617
11.1 Introduccin 617
11.2.1 Carga y Punto Isoelctrico de las Protenas . . . . 619
11.2.2 Teora Electrocintica 619
11.2.3 Fenmenos de Dispersin 629
11.2.4 Medios y Modos de la Electroforesis 636
11.3 Equipos 640
11.3.1 Equipos de Flujo Libre 643
11.3.2 Equipos de Flujo Libre con Recirculacin 646
11.3.3 Equipos Electrocromatogrficos 647
11.4 Diseo 652
11.4.1 Teora de Platos 652
11.4.2 Teora Cintica 656
11.5 Sumario 657
11.6 Problemas 658
V Operaciones de Acabado 661
12 Cristalizacin 665
12.1 Introduccin . 665
12.2.1 Tipos de Cristales 669
12.2.2 Pureza de los Cristales 670
12.2.3 Equilibrio: Solubilidad y Sobresaturacin 671
12.2A Seleccin del Modo de Operacin 677
12.2.5 Cintica de la Cristalizacin 679
CONTENIDO xi
12.2.6 Distribucin de Tamao en Poblaciones de Cristales687
12.3 Equipo de Cristalizacin 689
12.3.1 Cristalizadores Intermitentes 689
12.3.2 Cristalizadores Continuos .. 689
12.4 Diseo de Cristalizadores 693
12.4.1 Cristalizador Continuo 694
12.4.2 Cristalizadores Continuos con Remocin Selectiva 711
12.4.3 Balances de Masa y Energa en Cristalizadores
Continuos 713
12.4.4 Cristalizadores Intermitentes 730
12.5 Sumario 738
12.6 Problemas 740
13 Secado 745
13.1 Introduccin . . . 745
13.2.1 Equilibrio y Propiedades Trmicas 746
13.2.2 Mtodos de Secado 758
13.2.3 Velocidad de Secado 759
13.2.4 Efectos Colaterales del Secado . 759
13.3 Equipo de Secado 762
13.3.1 Secadores Adiabticos 762
13.3.2 Secadores no Adiabticos 765
13.4 Diseo de Secadores 769
13.4.1 Diseo de Secadores Adiabticos 769
13.4.2 Diseo de Secadores no Adiabticos 781
13.5 Sumario i . 785
13.6 Problemas 786
A Material Biolgico 789
A.l Introduccin 789
A.2 Clulas y Virus 789
A.2.1 Clulas procariticas 791
A.2.2 Clulas Eucariticas 796
xii CONTENIDO
A.2.3 Clulas Recombinantes 802
A.2.4 Virus 803
A.3 Biomolculas 803
A.3.1 Protenas 803
A.3.2 Carbohidratos 814
A.3.3 Lpidos 818
A.3.4 cidos Nucleicos 823
A.4 Crecimiento Celular 838
A.5 Bibliografa 842

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