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UNIVERSIDAD NACIONAL DE ENTRE ROS
FACULTAD DE
CIENCIAS AGROPECUARIAS


Unidad Temtica 5
Taxonoma bacteriana
(Gua de estudio)

B Be en ni in nt te en nd de e, , S S; ; S S n nc ch he ez z, , C C. ., , S St te er rr re en n, , M M. . Y Y M Mu us sa an nt te e, , C C
Objetivo
El objetivo de la Taxonoma bacteriana es dar un ordenamiento de las unidades taxonmicas
bsicas (especies).

Especie bacteriana: Es un conjunto de poblaciones clonales que presentan un
elevado grado de similitud fenotpica entre s y que a su vez difieren de otros
conjuntos de poblaciones clonales.


Caracterizacin
Ideal: caracterizacin completa del genotipo (es decir de su constitucin gentica).
Real: caracterizacin parcial del fenotipo (apariencia).

Pero adems de utilizar propiedades estructurales, se debe recurrir a las propiedades
bioqumicas y fisiolgicas para la caracterizacin de especies; es decir que las bacterias se
clasifican no solo por su apariencia sino tambin por lo que pueden hacer.


Denominacin: uso del sistema binomial de nomenclatura: formado por 2 palabras.
Ejemplos: Bacillus subtilis
Bradyrhizobium japonicum














Manual Bergey de Bacteriologa

Volumen I Bacterias gram (-) de importancia mdica e industrial
Volumen II Bacterias gram (+) de importancia mdica e industrial
Volumen III Bacterias gram (-) restantes
Volumen IV Actinomicetes y bacterias relacionadas



Bacillus subtilis


La primer palabra indica el rango
taxonmico inmediato superior, el
Gnero

La segunda palabra cita la
especie
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Taxonoma clsica

La taxonoma clsica est basada en la caracterizacin: morfolgica, fisiolgica y
bioqumica.

Entre los caracteres taxonmicos morfolgicos:

Coloracin de gram
Negativo: se observan bacilos aislados de
color rosado (coloracin dada por la
safranina).












Positivo: se observan cocos agrupados en
estafilos (estafilococos) de color violeta,
tpico de una coloracin de Gram (+).


Agrupamientos













Estructuras especiales
Esporas












Cpsulas




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Entre los caracteres bioqumicos y fisiolgicos
Pruebas de: Rojo de metilo, Voges Proskauer, Catalasa.

Rojo de Metilo

Principio: fermentadores cido-mixtos que
producen una descenso de pH por debajo
de 4,3.
Se agrega el indicador Rojo de Metilo al
medio de cultivo, luego de la incubacin. Si
ocurre un descenso de pH por debajo de 5,
se produce un viraje al color rojo y la prueba
se considera (+). Resultados (-) se observan
por lo general de color amarillo.

Se utiliza para diferenciar Escherichia sp. (+)
de Enterobacter sp. o Klebsiella sp. (-)


Voges-Proskauer

Principio: produccin de 2 2 3 3 b bu ut ta an no od di io ol l
( (f fe er rm me en nt ta ad do or re es s b bu ut ta an no od di i l li ic co os s) ). .
Reactivo: -naftol.
Resultados: reaccin color rojo (+)
reaccin color amarillo (-)

Se utiliza: para separar bacterias de los
gneros Klebsiella y Enterobacter (+) de
Escherichia (-).



Catalasa

Principio: propiedad de la enzima catalasa
de descomponer el perxido de hidrgeno
(H
2
O
2
).

Se aade al cultivo unas gotas de H
2
O
2

para observar la formacin de burbujas. La
observacin de burbujas (tubo +) indica la
presencia de la catalasa.

Se utiliza para diferenciar los gneros
Bacillus (+) de Clostridium (-),
Stresptococcus (-) de Staphylococcus (+)










+
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Existen sistemas comerciales que permiten la rpida identificacin de una bacteria en base
a la capacidad de utilizacin de determinados sustratos, presencia de determinadas
enzimas, etc.























Tcnicas






















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Tcnicas serolgicas

Utilizacin in vitro de las reacciones antgeno-anticuerpo para la identificacin de un
microorganismo (virus, bacterias, hongos).







Placas de
inmunodifusin


















Test de ELISA


































Antisuero
T Te es st ti ig go o
T Te es st ti ig go o
A An nt t g ge en no o
(cepas de rizobio)
A An nt t g ge en no o
( cepas de rizobio)
Agar
Enzima



Anticuerpo




Microorganismo



Sustrato
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Anticuerpos
fluorescentes



































Aplicaciones de la biologa molecular a la identificacin bacteriana

1.- Composicin de bases del ADN: Determinado por la cantidad de G+C respecto del total
de bases.

2.- Tcnicas basadas
- en la hibridacin del ADN-ADN y ADN-ARN: Permite evaluar el grado de homologa
gentica entre bacterias

- en la amplificacin de sectores del ADN (por ejemplo PCR): Permite ver si existe o
no homologa entre sectores del genforo bacteriano aumentando del nmero de copias de
un determinado sector de ADN.








Antgeno

Clula bacteriana
Anticuerpo antibacteriano
marcado
fluorescentemente
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Amplificacin de sector de ADN (PCR) (Ver movie pcwin en material complementario)

















































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Complemento Terico Prctico
Identificacin de Bacterias

El trabajo en microbiologa se basa en el estudio de poblaciones microbianas debido a la
dificultad en la manipulacin y la limitada informacin que se puede obtener a partir de los
individuos microbianos.
Los pasos que se siguen para determinar la identidad de un microorganismo es la
IDENTIFICACIN. Un microorganismo se identifica adecuadamente cuando se encuentra
que la descripcin de una especie es idntica a las caractersticas observadas en dicho
microorganismo.
La unidad taxonmica de clasificacin que comnmente se utiliza es la especie. Esta
categora sistemtica se define como el conjunto de poblaciones clonales
1
de elevada
similitud fenotpica
2
que a su vez difieren de otras poblaciones clonales.
Una caracterstica de los microorganismos es que en un corto perodo de tiempo ocurren
considerables aumentos de las poblaciones, lo que determina que se puedan establecer
cambios genticos que adquieren continuidad. Ello hace problemtico diferenciar especies
sobre la base de un pequeo nmero de caracteres.
La esencia de la identificacin la integran dos clases de operaciones:
Aislamiento, que es el tipo de siembra que permite la separacin de microorganismos a
partir de una poblacin mixta (constituida por ms de una clase de microorganismos)
Cultivo, que es el crecimiento de la poblacin microbiana en ambientes artificiales
(medios de cultivo), bajo condiciones de laboratorio.
Estas operaciones son las mismas independientemente de los microorganismos con los que
se trabaje.
Para comenzar la identificacin se parte de un cultivo puro
3
, lo que previamente ha implicado
el aislamiento del microorganismo a partir de una poblacin microbiana natural mixta (leche,
suelo, etc.). Para obtener un cultivo puro se utilizan tcnicas como el enriquecimiento
selectivo y la siembra en placas.
El aislamiento para la obtencin de un cultivo puro por mtodos de siembra en placa implica
la separacin e inmovilizacin de las clulas individuales sobre un medio nutritivo solidificado
con agar. Cada viable da origen, al crecer, a una colonia cuya transferencia puede hacerse
fcilmente con ansa. La siembra en estra para la purificacin de cultivos es el mtodo
empleado.
El inculo
4
tomado con el ansa se va agotando progresivamente con cada sucesiva estra.
As las estras iniciales proporcionan un crecimiento confluente y a lo largo de las ltimas
estras se van desarrollando colonias aisladas.
Pero, si toma material de una de estas colonias y se transfiere a un medio apropiado a esto
no se le puede denominar un cultivo puro, ya que por cada colonia visible en la primera
placa puede haber clulas de otros microorganismos que quedaron depositadas en el agar y
no lograron dar un crecimiento macroscpico a pesar que son viables. Por lo tanto nunca se
debe tomar la colonia de la primera placa para preparar un cultivo puro, sino que a partir de
esta se hace una segunda siembra denominada purificacin. Si todas las colonias de esta

1
Un clon es una poblacin de clulas bacterianas derivadas del crecimiento de una sola clula parental convenientemente
aislada.

2
Fenotipo es el conjunto de caracteres hereditarios que se expresan, mientras que se conoce como genotipo a toda la
informacin contenida en el genoma de los individuos de una determinada especie, y que no necesariamente siempre se
expresa.

3
Cultivo que contiene una sola clase de microorganismos

4
Material microbiano utilizado para sembrar
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segunda placa resultan idnticas, una colonia bien aislada puede utilizarse para establecer
un cultivo puro.
Es necesario que una vez que se logr el aislamiento se mantenga al microorganismo y a
su descendencia en un ambiente artificial que impida el acceso de otros microorganismos.
Este ambiente se puede crear en la caja de petri o en el tubo de ensayo.
Obtenido el cultivo puro es posible hacer la identificacin del microorganismo utilizando los
caracteres morfolgicos y bioqumicos y fisiolgicos.
Lo ideal sera una descripcin completa de su fenotipo (expresin de los caracteres), o mejor
an por su genotipo (informacin gentica).
Como metodologa habitual se utilizan criterios de fcil determinacin como los morfolgicos,
por su practicidad. Algunos de ellos son forma, tamao, movilidad, reproduccin, tincin a
colorantes especiales como la de Gram, presencia o ausencia de estructuras como esporas,
cpsulas y flagelos, crecimiento en medios geleficados en los que se puede observar forma,
tamao, color y aspecto de las colonias producidas. Sin embargo este criterio ofrece
elementos de juicio insuficientes para la caracterizacin definitiva y por lo tanto se tienen en
cuenta otros criterios como son los mecanismos fisiolgicos y bioqumicos, entre los cuales
se incluyen informacin sobre crecimiento, muerte y supervivencia en diferentes condiciones
de cultivo (temperatura de crecimiento, pH, concentracin de sales, etc.), ausencia o
presencia de enzimas (catalasa, amilasa, etc.), como toman, utilizan y /o almacenan la
energa.

Prueba
diagnstica
P Pr ri in nc ci ip pi io o
Crecimiento a
diferentes
temperaturas
Detectar la habilidad para crecer a distintas temperaturas determinando la
ptima para el crecimiento. Tambin permite verificar la plasticidad para
crecer a diferentes temperaturas
Crecimiento
anaerbico
Intenta comprobar los requerimientos de oxgeno de los microorganismos
Produccin de
cidos a
partir de
carbohidratos
Se fundamenta en la produccin de cido durante el crecimiento por la
fermentacin de azcares o alcoholes azucarados del medio de cultivo
Reduccin de
nitrato a nitrito
Se fundamente en que algunas bacterias utilizan el NO
3
-
como aceptor
alterno de electrones, reducindolo a NO
2
-
o N
2

Hidrlisis de
almidn
Detecta la presencia de la enzima amilasa, por la formacin de un
complejo azul en el medio de cultivo al combinarse el yodo con el almidn

Utilizacin de
citrato
Se basa en la capacidad de las bacterias para utilizar el citrato como nica
fuente de carbono, pudiendo adems utilizar el N de la sal de amonio del
medio, con la produccin de amonaco. Este ltimo compuesto se
convierte OHNH
4
que alcaliniza el medio por arriba de pH 6.7 virando el
indicador de medio de verde a azul