DETERMINACIN CUANTITATIVA DE ACETAMINOFN POR

CROMATOGRAFA LIQUIDA DE ALTA EFICIENCIA

Gustavo Cardona, Hector Marin, Martin Prado
Departamento de Qumica, Facultad de Ciencias, Universidad del Valle, Cali, Junio de 202
RESUMEN
!n la pr"ctica se determin# el contenido de acetamino$%n en una ta&leta a trav%s de
Cromato'ra$a ()uida de *lta !$iciencia +HP(C,, para ello se reali-# una curva de cali&raci#n
con acetamino$%n patr#n. /e prepararon soluciones est"ndar de 0, 1, 2, 2 3 20 ppm, usando
como solvente metanol 'rado HP(C. (a muestra $ue preparada pulveri-ando ta&letas de
455.0 m' 3 disolviendo 20.0 m' en metanol HP(C6 se us# un HP(C de $ase de reversa para
leer el "rea de pico de cada soluci#n patr#n 3 de muestra, consi'uiendo una curva de
cali&raci#n de "rea de pico vs concentraci#n de la soluciones est"ndar, con esta 7ltima se
determin# el contenido de acetamino$%n en la ta&leta 85.1 9, lo )ue arro:# un porcenta:e de
error de ;8.05 9, $rente al valor reportado en la eti)ueta.
Pala&ras Claves< HP(C, *cetamino$%n, Metanol, Cromato'ra$a (i)uida, =rea de pico.
1. INTRODUCCIN
(a Cromato'ra$a (i)uida de *lta !$iciencia
+HP(C, es un tipo de cromato'ra$a en
columna com7nmente aplicada en an"lisis
&io)umicos de car"cter cualitativo 3
cuantitativo, esta t%cnica es utili-ada para
separar los componentes de una me-cla
&as"ndose en di$erentes tipos de
interacciones )umicas entre las sustancias
anali-adas 3 la columna cromato'r"$ica6
esta t%cnica es usada en la cuanti$icaci#n
de analtos )ue tienen actividad &iol#'ica lo
cual es un aspecto importante en la
industria $armac%utica, 3a )ue %sta de&e
controlar de manera con$ia&le las
dosi$icaciones o concentraciones )ue
estipulan sus productos.
[1]

Figura 1. Cromato'ra$o ()uido de *lta
!$iciencia.
(a $i'ura descri&e la estructura 'eneral de
un cromato'ra$o l)uido +HP(C,.
!n la cromato'ra$a de l)uidos de alta
e$iciencia el compuesto es transportado por
solventes )ue est"n conectados a una
&om&a )ue impulsa los $luidos a la columna
cromato'ra$ica, el solvente 3 la muestra
pasan a trav%s de la $ase estacionaria
+normalmente es un cilindro )ue contiene
partculas redondeadas con caractersticas
)umicas en su super$icie, a alta presi#n, el
'rado de retenci#n de los componentes de
la muestra depende de la naturale-a del
compuesto, de la composici#n de la $ase
estacionaria 3 de la $ase m#vil.
!l tiempo )ue tarda un compuesto en ser
eludido de la columna se denomina tiempo
de retenci#n 3 se considera una propiedad
caracterstica de un compuesto en una
determinada $ase m#vil 3 estacionaria. !l
uso de presi#n en este tipo de
cromato'ra$a incrementa la velocidad lineal
de los compuestos dentro de la columna 3
reduce as su di$usi#n dentro de la columna
me:orando la resoluci#n del cromato'rama,
los disolventes m"s utili-ados son el a'ua,
el metanol 3 el acetonitrilo pero de calidad
HP(C.
[]

1
Finalmente, el compuesto eludido lle'a al
detector )ue en 'eneral puede ser de dos
tipos. (os detectores )ue se &asan en la
medida de una propiedad de la disoluci#n
responden a una propiedad del e$luente, tal
como el ndice de re$racci#n, la constante
diel%ctrica, o la densidad, )ue es modi$icada
por la presencia de los analtos6 por el
contrario, los detectores &asados en una
propiedad del soluto responden a una de las
propiedades del soluto, como la
a&sor&ancia en el UV, $luorescencia o
corriente el%ctrica )ue no son in>erentes a
la $ase m#vil. (os detectores usados en esta
t%cnica son detectores de a&sor&ancia,
detectores de a&sor&ancia con $iltros,
detectores de a&sor&ancia ultravioleta con
monocromador, detector de a&sor&ancia en
el in$rarro:o, detectores de $luorescencia,
detectores de ndice de re$racci#n, detector
de lu- dispersada tras evaporaci#n,
detectores electro)umicos 3 detectores por
espectroscopia de masas.
[!]
!n Cromato'ra$a (i)uida de *lta !$iciencia,
las soluciones utili-adas de&en ser de
calidad HP(C 3 se de&en $iltrar
de&idamente antes de su uso para evitar
taponamientos 3 des'astes en &om&a 3
ductos, pues a pesar de )ue se >a3an
'uardado &ien 3 se vean transparentes
estas pueden tomar partculas del am&iente,
adem"s, de&ido a )ue el detector tra&a:a
con a&sor&ancia UV estas pueden a$ectar la
se?al.
["]
!sta t%cnica de avan-ada tecnolo'a
presenta varios tipos de accionar, a
continuaci#n se e@ponen la diversidad 3 el
$undamento de cada uno.
Cr#$a%#gra&'a () &a*) +#r$a,< $ue la
primera cromato'ra$a desarrollada 3 separa
los componentes &as"ndose en su
polaridad, utili-a una $ase estacionaria polar
3 una $ase m#vil apolar 3 se usa cuando el
analito es &astante polar.
Cr#$a%#gra&'a () &a*) r)-)r*a< consiste
en una $ase estacionaria apolar 3 una $ase
m#vil de polaridad moderada, Una de las
$ases estacionarias m"s comunes de este
tipo de cromato'ra$a es la silica tratada con
AMe2/iCl, d#nde la A es una cadena al)uil
tal como C1H5B o C1HB. !l tiempo de
retenci#n es ma3or para las mol%culas de
naturale-a apolar, mientras )ue las
mol%culas de car"cter polar elu3en m"s
r"pidamente.
Cr#$a%#gra&'a () )./,u*i0+ $#,)/u,ar<
tam&i%n conocida como cromato'ra$a de
$iltraci#n en 'el, separa las partculas de la
muestra en $unci#n de su tama?o.
Generalmente se trata de una
cromato'ra$a de &a:a resoluci#n de $orma
)ue se suele utili-ar en los pasos $inales del
proceso de puri$icaci#n. Cam&i%n es mu3 7til
para la determinaci#n de la estructura
terciaria 3 estructura cuaternaria de las
protenas puri$icadas.
Cr#$a%#gra&'a () i+%)r/a$1i# i0+i/#< !n
la cromato'ra$a de intercam&io i#nico, la
retenci#n se &asa en la atracci#n
electrost"tica entre los iones en soluci#n 3
las car'as inmovili-adas a la $ase
estacionaria. (os iones de la misma car'a
son e@cluidos mientras )ue los de car'a
opuesta son retenidos por la columna.
Cr#$a%#gra&'a 1a*a(a )+ 1i#a&i+i(a(<
!ste tipo de cromato'ra$a se &asa en la
capacidad de las sustancias &iol#'icamente
activas de $ormar comple:os esta&les,
espec$icos 3 reversi&les. (a $ormaci#n de
estos comple:os implica la participaci#n de
$uer-as moleculares como las interacciones
de van der Daals, interacciones
electrost"ticas, interacciones dipolo;
dipolo, interacciones >idro$o&icas 3 puentes
de >idro'eno entre las partculas de la
muestra 3 la $ase estacionaria.
[2]
Una me:ora introducida a la t%cnica de
HP(C es la variaci#n en la composici#n de
la $ase m#vil durante el an"lisis, conocida
como elucin en gradiente. Un e:emplo de
'radiente normal en una cromato'ra$a de
$ase reversa puede empe-ar a un 49 de
acetonitrilo 3 pro'resar de $orma lineal >asta
un 409 en 24 minutos. !l 'radiente
2
utili-ado vara en $unci#n de la
>idro$o&icidad del compuesto. !l 'radiente
separa los componentes de la muestra
como una $unci#n de la a$inidad del
compuesto por la $ase m#vil utili-ada
respecto a la a$inidad por la $ase
estacionaria. !n el e:emplo, utili-ando un
'radiente a'uaEacetonitrilo los compuestos
m"s >idro$licos eluir"n a ma3or
concentraci#n de a'ua, mientras )ue los
compuestos m"s >idro$#&icos eluir"n a
concentraciones elevadas de acetonitrilo. *
menudo, >ace $alta reali-ar una serie de
prue&as previas con tal de optimi-ar el
'radiente de $orma )ue permita una &uena
separaci#n de los compuestos.
[3]
Finalmente, en el la&oratorio se cuanti$ic# la
cantidad de acetamino$%n en una ta&leta de
producto $armac%utico, dic>o an"lisis se
reali-# por medio de una curva de
cali&raci#n normal con est"ndares de
concentraciones de 0, 1, 2, 2 3 20 ppm en
el )ue la matri- $ue a'ua HP(C 3 metanol
HP(C. (a muestra se prepar# con una
muestra representativa del producto
$inamente macerado adicionando las
condiciones de los est"ndares )ue
posteriormente tras un tratamiento
minucioso con micro$iltros, se re'istraron
medidas de "rea vs concentraci#n con lo
cual mediante re'resi#n lineal se esta&leci#
la concentraci#n de acetamino$%n en el
producto $armac%utico.
. METODOLOGA
Pr#/)(i$i)+%#4
Preparacin de Solucin Patrn de
Acetaminofn.
;!n un matra- de 00.0 m( se prepar# una
soluci#n patr#n con 20.0 m' de
acetamino$%n analtico diluido con 4.0 m( de
metanol 'rado HP(C con posterior diluci#n
en a'ua HP(C.
;!n matraces de 24.0 m( se prepararon
soluciones de 0.0, 1.0, 2.0, 2.0, 20.0 ppm
partiendo de la soluci#n patr#n.
Preparacin de Muestra y Blanco.
;Con un mortero, se macer# $inamente dos
ta&leta de acetamino$%n marca Gen$ar
F
,
previo a ello se pes# cada ta&leta, del
macerado se o&tuvieron 20.0 m' de
producto $armac%utico pesado en una
&alan-a analtica Pioner GH*U/,
posteriormente se trasladaron a un matra-
de 00.0 m( 3 se solu&ili-# con metanol
'rado HP(C con a'itaci#n constante por 4
minutos $inalmente se enra-# con a'ua
'rado HP(C.
;De la soluci#n antes mencionada, se
e@tra:eron .4 m( 3 se trasvasaron a un
matra- de 24.0 m( enra-ado con a'ua
'rado HP(C.
;!n la preparaci#n del &lanco de la muestra,
se adicion# 0.4 m( de metanol HP(C a un
matra- de 0.0 m( enra-ado con a'ua
HP(C. De la soluci#n anterior se tomaron
.4 m( en un matra- de 24.0 m(
posteriormente enra-ado con a'ua HP(C.
;Cada est"ndar, muestra 3 &lanco se
micro$iltr# con laminillas microporosas
trasladando 0.0 m( de cada soluci#n a
tu&os con rosca previamente lavados 3
secados.
Preparacin de la fase mvil del
cromatografo HPLC.
;!n un e)uipo de $iltraci#n al vaco, se $iltr#
200.0 m( de a'ua HP(C 3 metanol HP(C
por separado con laminillas microporosas6
cada li)uido se traslado a em&aces de vidrio
limpios 3 secos, se denomin# reservorios al
introducir las man'ueras succionadoras )ue
contenan un micro $iltro en el e@tremo.
Condiciones Operacionales.
;/e encendi# el cromato'ra$o l)uido
HeDlett PacHard 3 se a:ust# para succionar
en proporci#n de 40<40 a'ua;metanol 3
recorrer todo el sistema menos la columna
+$ase estacionaria, lle'ando al desa'Ie,
esto dur# alrededor de 20 minutos en los
3
)ue se o&serva&a pe)ue?as &ur&u:as de
aire via:ando por los ductos pl"sticos6 al no
o&servar mas &ur&u:as de aire, se a:ust# el
$lu:o de $ase movil a 0.2 m(Eminuto.
;(a instructora, esta&leci# la escala de "rea
con lo cual se esper# por una >ora a )ue la
lnea &ase se mantuviese constante.
;Con un in3ector *'ilent Manual /3rin'e de
40.0 J( se e@tra:eron de cada est"ndar,
&lanco 3 muestra 20.0 J( sin aire 3 se
in3ect# en el (u' +c"mara de entrada de
muestra, cerrando r"pidamente despu%s de
in3ectada cada soluci#n.
;(a columna utili-ada $ue de /ilica C;1, la
se?al re'istrada por el detector K HeDlett
PacHard 00 3 decodi$icada por el so$tDare
del cromat#'ra$o l)uido mostr# un pico
constante en primera instancia 3 un
se'undo pico a un tiempo casi constante en
aumento pro'resivo al momento de la
construcci#n de la curva de cali&raci#n.
;Mediante re'resi#n lineal al esta&lecer la
correlaci#n entre "rea de pico vs
concentraci#n de est"ndares, se esta&leci#
la concentraci#n de la muestra diluida )ue
por $actores de diluci#n se lle'# al 9PEP en
relaci#n con el peso de la ta&leta6 con los
datos de tiempo de retenci#n 3 mitad de
anc>o de pico se esta&leci# una
apro@imaci#n de los platos te#ricos de la
columna.
!. RESULTADOS 5 DISCUSIN
R)*u,%a(#*
Ta1,a 1. Datos de la muestra de
*cetamino$%n
F
ta&leta utili-ada en la
pr"ctica.
Muestra
Peso de
ta&leta
m'
*cetamino$%
n en ta&leta
m'
Ca&letas
maceradas
*cetamino$%
n ta&leta
455 400 2
Ta1,a . Datos de la curva de cali&raci#n
por patr#n e@terno para *cetamino$%n 'rado
analtico por HP(C.
ppm
*cetamino$%n
=rea
0 0B1,8
1 002,B
2 200,2
2 224,
20 225,4
Gr6&i/a 1. Curva de cali&raci#n por
est"ndar e@terno para *cetamino$%n 'rado
analtico por HP(C.
Ta1,a !. Ae'resi#n lineal de la curva de
cali&raci#n por patr#n e@terno de
*cetamino$%n 'rado analtico por HP(C.
L 50,B8 * ;45,00
/& 2,42 /a 50,05
A2 0,8818 /3E@ 52,00
(a concentraci#n del analito en soluci#n se
determina a partir de la ecuaci#n , a partir
de el "rea del pico para la muestra de
*cetamino$%nF por medio de la
interpolaci#n de estos datos en la curva
e@presada en la ta&la 2.
E/ua/i0+ 1.
4
(a desviaci#n de la determinaci#n por
medio de la interpolaci#n del area
determinada por el instrumento para la
muestra de *cetamino$%nF, donde n es el
numero de puntos so&re la curva 3 m es el
n7mero de veces )ue se reali-o la
medici#n.
E/ua/i0+ .
Ta1,a ". Mnterpolaci#n de los resultados
para la muestra de *cetamino$%n
F
ta&leta
por HP(C.
=rea
promedio
ppm
*cetamino$%n
Mncertidum&re
+7,
79
522,80 0,20 0,22 2.
Concentraci#n en porcenta:e PEP de
*cetamino$%n en ta&leta de *cetamino$%n
8 determinada por HP(C.
Concentraci#n reportada por el
medicamento en porcenta:e PEP de
*cetamino$%n en ta&leta de *cetamino$%n
F
.
!l porcenta:e de error relativo o&tenido en
las determinaciones esta dado por la
ecuaci#n.
E/ua/i0+ !.
Porcenta:e de error relativo en
determinaci#n de *cetamino$%n por HP(C.
!l limite de detecci#n 3 de cuanti$icaci#n del
m%todo esta dado por las ecuaciones 0 3 4.
E/ua/i0+ ".
E/ua/i0+ 2.
*un)ue en el caso de la pr"ctica se pueden
utili-ar datos de la re'resi#n en ve- de los
del &lanco en donde<
Donde /NEO es el error en la pendiente 3 en
la ordenada en el ori'en de la recta de
re'resi#n por lo )ue tam&i%n se le puede
identi$icar con la desviaci#n est"ndar de la
re'resi#n, 3 se o&tiene a partir de la
ecuaci#n.
E/ua/i0+ 3.
!l limite de detecci#n para la determinaci#n
de *cetamino$%n por HP(C o&tenido por
medio de la aplicaci#n de la ecuaci#n 0 es
de (DD P 0.B2 ppm 3 el limite de
cuanti$icaci#n esta dado por la ecuaci#n 4 3
para la curve de determinaci#n de
*cetamino$%n es de (DC P 2.00 ppm.
!l n7mero de platos te#ricos para la
columna se o&tiene a partir de la si'uiente
ecuaci#n
E/ua/i0+ 9.
5
Donde tR es el tiempo de retenci#n 3 W1/2 es
la mitad del anc>o del pico en unidades de
tiempo.
Qumero de platos te#ricos para la
determinaci#n de *cetamino$%n por HP(C
para el patr#n de 0 ppm.
!l numero de platos por metro para la
columna, donde L es la lon'itud de la
columna en metros.
E/ua/i0+ :.
Qumero de platos por metro para la
determinaci#n de acetamino$%n por HP(C
para el patr#n de 0 ppm.
(a altura de cada plato te#rico de la
columna esta dada por la ecuaci#n
E/ua/i0+ ;.
Donde L es la lon'itud de la columna en
milmetros 3a )ue de esta $orma es )ue se
encuentra reportada en la literatura la altura
de los platos.
Di*/u*i0+
Como se o&serva en la ta&la 5, el ndice de
correlaci#n lineal de la curva de cali&raci#n
por est"ndar e@terno es de 0.8818 lo cual
demuestra )ue la curva posee una &uena
linealidad 3 )ue se comporta de una la
manera esperada por lo )ue se puede
a$irmar )ue la t%cnica de HP(C $unciona de
&ien para la determinaci#n de *cetamino$%n
por medio de una curva de cali&raci#n por
est"ndar e@terno en este ran'o de
concentraciones, 3a )ue no se o&servan
se?ales de saturaci#n de la curva ni de
desviaci#n de la le3 de Leer en nin'uno de
los dos e@tremos.
/e puede >a&lar de desviaciones con
respecto a la le3 de Leer de&ido a )ue el
detector con el )ue se tra&a:o era UV, lo )ue
indica )ue el proceso de detecci#n esta
re'ido por las le3es de la espectroscopia
mas en esta ocasi#n no se midi# la
a&sor&ancia simplemente sino )ue se
determino el "rea de la &anda de a&sorci#n
molecular por lo )ue no se relacionan de
manera directa las concentraciones con las
a&sor&ancias como en la le3 de Leer mas
esto esta implcito en la detecci#n, por lo
)ue se pueden comen-ar a encontrar
similitudes entre esta t%cnica 3 la
espectro$otometra UV.
!l error de ;8.059 o&tenido para el
porcenta:e de *cetamino$%n en pastilla de
*cetamino$%nF determinado por HP(C, se
puede de&er a la 'ran cantidad de procesos
)ue se llevaron a ca&o con la muestra como
la maceraci#n en la cual se &usca una
distri&uci#n >omo'%nea del reactivo 3 de los
dem"s compuestos en las pastillas mas
esto no se puede 'aranti-ar, adem"s )ue se
o&servo )ue no toda la cantidad de muestra
adicionada se lo'ro disolver por lo )ue se
puede >a&er perdido parte del *cetamino$%n
al )uedar atrapado en el interior de esas
partculas )ue no se disolvieron )ue
despu%s $ueron $iltradas6 3 teniendo en
cuenta )ue se esta&a tra&a:ando con
mili'ramos esta cantidad perdida puede
marcar una di$erencia. *dem"s de posi&les
errores en las mediciones de la cantidad de
*cetamino$%n de 'rado analtico utili-ado
para la reali-aci#n de los est"ndares 3a )ue
la &alan-a varia&a muc>o 3 por el >ec>o de
tra&a:ar con mili'ramos la &alan-a solo
da&a una ci$ra si'ni$icativa lo )ue aumenta
la incertidum&re so&re las cantidades
utili-adas en la pr"ctica.
6
(a incertidum&re relativa de la
determinaci#n es del 2.29 la cual se
reporta en la ta&la 0, esta indica )ue la
determinaci#n posee una &uena precisi#n
so&re los valores determinados adem"s )ue
la curva de cali&raci#n por patr#n e@terno
posee una &uena linealidad 3 )ue el valor
del "rea de la se?al para la muestra es
cercano al centroide de la curva.
!l limite de detecci#n para la determinaci#n
de *cetamino$%n por HP(C o&tenido por
medio de la aplicaci#n de la ecuaci#n 0 es
de (DD P 0.B22BB8022 ppm 3 el limite de
cuanti$icaci#n esta dado por la ecuaci#n 4 3
para la curva de cali&raci#n en la
determinaci#n de *cetamino$%n es de (DC
P 2.00B248108 ppm, lo &ueno es )ue el
(DC es menor al primer punto de la curva
de cali&raci#n por lo )ue se posee una
ma3or certidum&re a la >ora de reali-ar
determinaciones de muestras por este
m%todo.
[9]
(a t%cnica de HP(C es una t%cnica &astante
precisa para la determinaci#n de cantidades
de analito por curva por est"ndar e@terno
como la reali-ada en la practica, lo )ue
ocurre es )ue en primer lu'ar en el
cromato'rama no solo se da&a un pico
positivo sino tam&i%n uno ne'ativo, se cree
)ue este 7ltimo se da de&ido a la
composici#n de la $ase m#vil 3a )ue el
e)uipo opero con una soluci#n 40<40
metanol HP(C< a'ua HP(C como $ase
m#vil, mas los est"ndares al i'ual )ue las
soluciones muestra conta&an con una
soluci#n de proporciones menores de
metanol HP(C )ue de a'ua HP(C, por lo
)ue se considera )ue esta es la ra-#n de la
disminuci#n de la lnea &ase )ue esta se
de&e a la detecci#n de la cantidad de
metanol en la $ase m#vil, lo )ue di$iculta&a
la determinaci#n de el "rea del pico 3a
todos los est"ndares utili-ados no posean
la misma concentraci#n de metanol por lo
)ue se re)uiri# reali-ar una determinaci#n
manual del "rea de la curva lo cual pudo
inducir a un error.
*un)ue el coe$iciente de correlaci#n para
HP(C sea de 0.8818 ca&e recordar )ue
t%cnicas como la cromato'ra$a de 'ases
arro:o resultados con ndices de correlaci#n
de 0.888 3 )ue los posi&les errores
inducidos e@puestos anteriormente pueden
ser el causal de esta disminuci#n en el
ndice de correlaci#n lineal o&tenido para
HP(C.
!l ensanc>amiento de las &andas 3 por
tanto la disminuci#n en el numero de platos
te#ricos se da por $en#menos de $lu:os no
laminares de la muestra por la columna, lo
)ue ocasiona di$erentes velocidades por lo
)ue la soluci#n via:a de manera mas r"pida
por la parte central de la columna )ue por
los laterales6 este $en#meno se >ace mas
importante a medida )ue se disminu3e el
di"metro de la columna, adem"s el
ensanc>amiento es proporcional a la
velocidad lineal del $lu:o, por lo )ue un $lu:o
r"pido puede ocasionar el $en#meno 3 3a
)ue en la practica se tra&a:o con un $lu:o de
0.1 m(Emin en ve- de los 0.4 m(Emin )ue se
menciona en la 'ua se puede sospec>ar de
este >ec>o. *dem"s )ue entre mas
pe)ue?a sea la mol%cula ma3or ser" la
e$icacia de la t%cnica por lo )ue este es un
$actor )ue a$ecta la aplicaci#n del m%todo a
diversos compuestos mas no es de$initivo ni
constante para cual)uier mol%cula.
[:]
/i se compara las t%cnicas de HP(C con la
cromato'ra$a de 'ases, se de&en tener en
cuenta el n7mero de platos, el n7mero de
platos por metro 3 la altura de platos, los
cuales se calcularon a partir de las
ecuaciones B, 1 3 8 arro:ando los si'uientes
valores< el numero de platos para la el
primer est"ndar de la curva de cali&raci#n
en HP(C es de 400, el numero de platos
por metro es de 2400 3 la altura de los
platos es de 0.0 mm6 para cromato'ra$a de
'ases, tomando los valores del primer
est"ndar de la curva de cali&raci#n el
numero de platos es de 50000, el numero
de platos por metro es de 000 3 la altura
de los platos es de 0.8 mm, tal como se
o&serva el numero de platos por metro as
como la altura de los platos demuestran )ue
7
la t%cnica de HP(C es una t%cnica de ma3or
e$icacia aun)ue ca&e decir )ue el numero
de platos es menor en HP(C en
comparaci#n con la cromato'ra$a de 'ases
lo cual se de&e a )ue las &andas en HP(C
se pueden ensanc>ar de&ido a los
$en#menos mencionados anteriormente,
adem"s )ue el n7mero de platos es
inversamente proporcional a la anc>ura del
pico 3 la anc>ura de los picos esta
directamente relacionada con la cantidad de
analito por lo )ue es de esperarse )ue 3a
)ue en HP(C se tra&a:a con muc>a mas
cantidad de muestra )ue en cromato'ra$a
de 'ases el numero de platos totales de&e
ser menor.
Ca&e aclarar )ue en el p"rra$o anterior se
compara las t%cnicas cromato'ra$cas mas
estas est"n aplicadas a analtos di$erentes
por lo )ue la comparaci#n de las t%cnicas
no es mu3 si'ni$icativa en tanto la e$icacia
de cada una sino )ue se >ace como para
dar una idea de la di$erencia entre estas dos
t%cnicas cromato'ra$icas 3 de la e$ectividad
de las mismas.
!l n7mero de platos calculados para HP(C
es de mas de 000 3 los coe$icientes de
simetra son menores de 2 por lo las
determinaciones reali-adas en la practica
demuestran un comportamiento esperado 3
)ue la t%cnica de HP(C es e$ectiva para la
separaci#n 3 cuanti$icaci#n de *cetamino$%n
se'un lo reportado en literatura consultada
'enerada por una universidad en
Guatemala.
[;]
!.1 SOLUCIN A PREGUNTAS
1. RCual es la composici#n de la columna
C;1 usada en la practicaS !@pli)ue.
R< Composici#n< partculas de slica
)umicamente modi$icadas con
>idrocar&uros saturados, insaturados o
arom"ticos de di$erentes tipos.
T/iG2T;+CH2,B;CH5
Dada la composici#n de la columna la
t%cnica de HP(C )ue se reali-# es llamada
de $ase reversa 3 se $undamenta en las
interacciones >idro$o&icas del compuesto el
cual tendr" un ma3or tiempo de retenci#n
como lo ocurrido en la practica donde el
pico del metanol sale primero 3 lue'o el pico
de acetamino$%n +mol%cula con 'rupos
apolares, sale despu%s.
Figura . !s)uema de las interacciones en
una columna C;1 HP(C.
[1=]
. R/i usted posee la opci#n de reali-ar un
an"lisis por HP(C o cromato'ra$a de
'ases, cual de los dos m%todos
recomiendaS RPor )ueS
R< /e recomienda HP(C 3a )ue posee una
alta sensi&ilidad, separaci#n de especies
termol"&iles, separaci#n de compuestos no
vol"tiles por lo )ue es aplica&le a una 'ran
cantidad de compuestos, adaptaci#n a
determinaciones cuantitativas, adem"s )ue
muc>as condiciones de la determinaci#n se
pueden lo'rar adaptar la t%cnica a muc>as
muestras de caractersticas di$erentes as
como a las caractersticas de e$icacia
deseada.
8
!. !@pli)ue por )ue en HP(C reali-ar la
cuanti$icaci#n con curva de cali&raci#n es
precisa mientras )ue en cromato'ra$a
'aseosa es aconse:a&le reali-arla con el
uso de un patr#n interno.
R< (a t%cnica de HP(C posee un sistema
)ue re'ula la in3ecci#n de muestra por lo
)ue este $actor de error se minimi-a
adem"s )ue se puede alentar el $lu:o para
)ue el detector pueda determinar de una
$orma mas precisa la cantidad de analito.
". CONCLUSIONES
(a t%cnica de HP(C demuestra
poseer una mu3 &uena e$icacia para
las separaciones de compuestos as
como para la cuanti$icaci#n de
analito en muestras por medio de la
curva de cali&raci#n por est"ndar
e@terno.
HP(C re)uiere conocer los e$ectos
de modi$icar las principales varia&les
del proceso para no a$ectar la
e$iciencia de la t%cnica as como el
conocimiento previo de los analtos
para los cuales es me:or la
aplicaci#n de esta u otras t%cnicas
cromato'r"$icas.
(a t%cnica de HP(C es e$ectiva 3
aplica&le a la determinaci#n de
*cetamino$%n 3a )ue presenta para
este compuesto una &uena
linealidad, sensi&ilidad adem"s de
una e$icacia considera&le.
2. REFERENCIAS
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4
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9