SANGRE AGAR BASE

Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de

numerosos microorganismos.
Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y
cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente
exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la
observacin de reacciones de hemlisis.
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base
para preparar el medio agar chocolate.
Fundamento
La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un
alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad
de microorganismos, an de aquellos nutricionalmente exigentes. El
cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de
5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite
detectar hemlisis.
Instrucciones
Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar
5 minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una suspensin
homognea. Calentar con agitacin frecuente y hervir 1 minuto.
Esterilizar 20 minutos a 121C. Enfriar a 45-50C agregar sangre
desfibrinada al 5%. Homogeneizar y distribuir en placas.

Preparacin de la placa de Agar Sangre: aadir en forma asptica un
5% de sangre estril desfibrinada a temperatura ambiente, el agar
debe estar a 45C.
Preparacin de Agar Chocolate: despus de aadir la sangre y
agitando frecuentemente se mantiene el medio de cultivo a 80C por
10 minutos hasta que adquiera un color pardo chocolatado.

TCBS MEDIO

Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae,
Vibrio parahemolyticus y otras especies de Vibrio a partir de heces,
agua y alimentos contaminados. Tambin es conocido como Agar
Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa, o como Agar Selectivo para Vibrios.

Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y
la triptena aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. Es este,
el medio selectivo ms adecuado para el aislamiento de las especies
de Vibrio, e inhibidor para la mayora de las enterobacterias. Esta
inhibicin se basa en las altas concentraciones de tiosulfato y citrato,
la presencia de bilis y un pH fuertemente alcalino. La degradacin de
la sacarosa es variable entre las especies de Vibrio y las colonias son
verdes para las cepas que no la utilizan y amarillas para aquellas que
producen cido a partir de este azcar. Esto es debido al viraje del
color de los indicadores de pH azul de timol y azul de bromotimol, del
color azul al amarillo en medio cido. Es importante tener en cuenta,
que la proporcin de sacarosa en el medio est equilibrada de forma
tal que no inhiba el crecimiento bacteriano por exceso de cido.
El cloruro de sodio favorece el crecimiento de microorganismos. El
tiosulfato de sodio aporta azufre y junto con el citrato frrico
permiten la deteccin de produccin de cido sulfhdrico.
Aumentando la concentracin de cloruro de sodio y disminuyendo la
temperatura de incubacin, pueden aislarse especies marinas sin
importancia sanitaria.

Calentar hasta ebullicin y hervir de 1 a 2 minutos. NO AUTOCLAVAR.
Distribuir en placas de Petri estriles.



MAC CONKEY AGAR.

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos
de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite
diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas,
de agua y alimentos. Todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes
necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de
carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta
son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de
la flora Gram positiva. Por fermentacin de la lactosa, disminuye el
pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del
indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la
precipitacin de las sales biliares. Los microorganismos no
fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

SABOURAUD GLUCOSADO AGAR

Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de
hongos patgenos y saprfitos. Tambin es til para el cultivo de
levaduras.
Fundamento
Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de
hongos, particularmente los asociados con infecciones cutneas (piel,
pelo, etc.). En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son
los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto
contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH cido,
favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias.
Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes
selectivos de crecimiento.

SIM MEDIO

Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin
de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es til para
diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.
Fundamento
El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y
particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas
bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de
enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el
aldehido del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un
compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en
este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de
siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se
distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de
hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un
pH mayor a 7.2.
Siembra Es importante que la siembra se realice en lnea recta.
Incubacin
Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de
Erlich.
Resultados
Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas
all de la lnea de siembra.
Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de
siembra.
Cepas SH
2
positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de
siembra o en todo el medio.
Cepas SH
2
negativas: el medio permanece sin cambio de color.
Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el
reactivo de Kovacs o de Erlich.
Cepas indol negativas: sin cambio de color.
SIMMONS CITRATO AGAR

Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a
la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa.

Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de
nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos
componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales
de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor
enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el
azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en
medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los
microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de
carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con
la consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias
poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido
tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente,
oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio
alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como
fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El
medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de
citrato permeasa.

AGAR CROMOGNICO PARA SALMONELLA

Los medios de cultivo usados tradicionalmente para diferenciar los
fenotipos de Salmonella del resto de las enterobacterias se basan en
su capacidad de producir cido sulfhdrico asociado con su
incapacidad de fermentar la lactosa, no son realmente adecuados ya
que hay ms de 2000 serotipos de Salmonella, los cuales no tienen
estas caractersticas. Para identificar los fenotipos de Salmonella,
este agente cromognico est basado en la combinacin de dos
sustratos cromognicos que facilitan la identificacin presuntiva.
Estos dos cromgenos son X-gal y magenta- caprilato. X-gal es un
sustrato incorporado para visualizar a los microorganismos
productores de la enzima -D galactosidasa como colonias azules. Las
colonias magenta son el resultado de la hidrlisis del magenta-
caprilato por los fenotipos de Salmonella. De esta manera
microorganismos diferentes a Salmonella aparecen azules o no
teidos por ninguno de los cromgenos del medio.

CALDO M-ENDO

Desarrollado para el recuento de coliformes totales en agua, bebidas
y otras muestras por medio de la tcnica de filtracin por membrana.

Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona junto con la peptona, la
triptena y el extracto de levadura, aportan los nutrientes necesarios
para el adecuado desarrollo bacteriano. La lactosa es el hidrato de
carbono fermentable. El fosfato dipotsico y el fosfato monopotsico
otorgan la capacidad buffer, y el cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico.
Es un medio selectivo debido al lauril sulfato de sodio y al
desoxicolato de sodio que inhiben el desarrollo de la flora
acompaante, y es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa.
Las bacterias fermentadoras de lactosa producen durante la
fermentacin aldehdos, que en combinacin con la fucsina y el
sulfito presentes en el medio le confieren a la colonia un brillo
metlico, mientras que las colonias de las no fermentadoras son
rosadas.

DNASA AGAR

Medio de cultivo utilizado para la deteccin de enzimas
desoxirribonucleasas.
Es especialmente til para la diferenciacin entre especies de
estafilococos, as como para la diferenciacin
de Serratia spp. de especies de Klebsiella y Enterobacter.
Fundamento

En el medio de cultivo, la triptena es la fuente de nitrgeno,
aminocidos, y aporta los nutrientes necesarios para el adecuado
desarrollo bacteriano.
El cido desoxirribonucleico (ADN), se encuentra en grado altamente
polimerizado, y es el sustrato de la enzima desoxirribonucleasa
(DNAsa), la cual lo hidroliza. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico y el agar es el agente solidificante.
Este medio de cultivo, permite diferenciar bacterias que poseen la
enzima desoxirribonucleasa de aquellas que no la poseen.
La presencia de la enzima, se puede detectar mediante el agregado
de cido clorhdrico 1N.
El cido desoxirribonucleico hidrolizado presenta transparencia,
mientras que el cido desoxirribonucleico polimerizado, precipita y
torna opacidad al medio de cultivo.

Incubacin
En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 C.
Cubrir la placa con cido clorhdrico 1N, y observar dentro de los
primeros 5 minutos.

Resultados
Positivo: halo claro, transparente alrededor del crecimiento
bacteriano.
Negativo: el medio se observa opaco.


BAIRD PARKER MEDIO BASE

Medio de alta especificidad diagnstica, selectivo y diferencial para el
aislamiento y recuento de estafilococos coagulasa positiva en
alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento
En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el extracto
de carne constituyen la fuente de carbono y nitrgeno, el extracto de
levadura aporta vitaminas del complejo B, la glicina y el piruvato
estimulan el crecimiento de los estafilococos.
Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de
potasio y al cloruro de litio, los cuales inhiben el desarrollo de la flora
acompaante. La yema de huevo permite demostrar la actividad
lecitinsica.
Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y
originan colonias de color grisceo-negro, y dan reaccin sobre la
yema de huevo produciendo alrededor de la colonia una zona opaca
que a menudo tiene una zona clara mas externa.
Se pueden encontrar cepas no lipolticas, que presentan igual
caractersticas de colonias pero sin la zona opaca y clara.
Se debe confirmar la presencia de S. aureus mediante pruebas
bioqumicas.
Instrucciones
Suspender 60 g del medio deshidratado en 940ml de agua destilada.
Dejar en reposo 5 a 10 minutos. Calentar agitando frecuentemente y
hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar en autoclave a 121C
(15 libras) durante 15 minutos. Enfriar a 45-50C y agregar 50 ml de
la emulsin de yema de huevo y 10ml de la solucin de telurito de
potasio. Homogeneizar y distribuir en cajas de Petri.


MUELLER HINTON AGAR

Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la
prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Adems es til con el
agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos
nutricionalmente exigentes.
Fundamento
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National
Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), recomend su
uso en forma rutinaria para la realizacin del antibiograma en medio
slido, debido a una serie de factores que se detallan a continuacin:
presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de
sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas,
trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayora de los patgenos crece
satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y
avalados usando este medio de cultivo.
Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es til para
realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies
de estreptococos.

MANITOL SALADO AGAR.
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento
y diferenciacin de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a
partir de muestras clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros
materiales de importancia sanitaria.
Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies
halfilas de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS
Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no
desarrollar.
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta
concentracin salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan
el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de
una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos,
presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias
sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio
para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona,
constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales,
el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio
(que se encuentra en alta concentracin) es el agente selectivo que
inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el
indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y
fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH
del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o
no fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se
visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo
color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como
colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o prpura.