Laboratorio de Microbiologa

Prcticas de cultivo, identificacin y tincin de microorganismos.

Marlon Cosso Vsquez
Cristian uque Vsquez
Carlos !ndr"s #mez
$uan iego Correa
!ndry %odrguez
Profesor&
'mar 'cam(o $im"nez
)acultad de *umica )armac"utica
+niversidad de !ntioquia
!,o -./0
Marco Terico.
1n los estudios biolgicos la morfologa 2ace referencia a la forma de los
organismos. La forma de las c"lulas bacterianas de(ende de la (ared celular que
les brinda rigidez y algo de elasticidad. 3ndividualmente las bacterias (ueden
a(arecer como elementos eli(soidales, esf"ricos y alargados 4cilndricos5, o en
es(iral 42elicoidales5. Cada una de estas formas es (ro(ia de una es(ecie
determinada, (or esto, las bacterias se clasifican& cocos, bacilos y espirales
(espirilos). 1l ordenamiento de las bacterias es un mecanismo (or el cual ellas
(ueden ado(tar ciertas formas cuando estn en gru(os. 1ste ordenamiento (uede
de(ender de un factor gen"tico, como ocurre en las c"lulas esf"ricas o cocos, o
bien a un (atrn aleatorio como ocurre en los bacilos.
/

Los cocos son c"lulas bacterianas cuya forma 2abitual es esf"rica, (ero,
eventualmente, a(arecen formas eli(soidales, lanceoladas u ovoides6. 7u
ordenamiento en gru(os obedece a un (atrn gen"tico (ro(io de cada es(ecie,
seg8n esto, los cocos se clasifican en& Diplococos, estreptococos, tetracocos,
estafilococos y sarcinas.
/
Los bacilos son formas bacterianas alargadas que (ueden ser cortas, rectas o
cilndricas y a veces son tan cortas y difciles de identificar que se denominan
bacilococos. Los e9tremos de los bacilos (uede variar y es esta caracterstica la
que ayuda a su identificacin. 19isten bacilos en los que sus e9tremos a(arecen
en forma de ngulo recto, afiliados, redondeados y en algunas es(ecies en forma
de mazo. Los bacilos no siguen un (atrn gen"tico de ordenamiento, sino, que
de(ende de las eta(as de desarrollo o condiciones de cultivo, (ero, se 2a logrado
identificar algunas formas de organizacin, en (are:as, cadenas o en gru(os
irregulares que forman masas entrecruzadas de c"lulas bacterianas.
/

Los es(irales o 2elicoidales son c"lulas bacterianas que no (resentan un
ordenamiento es(ecifico (orque generalmente se encuentran se(aradas (or una o
varias curvaturas. 1ntre esta forma bacteriana se encuentras& vibriones, espirilos y
espiroquetas. Los vibriones son c"lulas bacterianas que tienen una sola curvatura
y toman forma de una es(ecie de es(iral incom(leta. Los es(irilos son incurvados,
2elicoidalmente, mviles, generalmente, (or (enac2os de flagelos (olares. Las
es(iroquetas son formas alargadas que (resentan una gran cantidad de
curvaturas muy (r9imas entre ellas.
/
Como casi todas las c"lulas bacterianas son incoloras cuando se les observa (or
un microsco(io (tico estndar, una de las maneras (ara (oder observarlas
consiste en someterlos a un tincin, que es, sim(lemente colorear la bacteria con
un colorante que destaque ciertas estructuras. Los colorantes son sales
com(uestas (or un in (ositivo y un in negativo, uno de los cuales esta coloreado
y se conoce como cromforo. 1l color de los colorantes bsicos est en el in
(ositivo, mientras que el de los colorantes cidos est en el in negativo. 1n un (;
< las bacterias (resentan una carga levemente negativa. Por lo tanto, el in
(ositivo coloreado es atrado 2acia la c"lula bacteriana. Los colorantes bsicos
entre los que se encuentran el azul de metileno, el verde malaquita y la safranina,
se utilizan con ms frecuencia que los colorantes cidos. 1stos 8ltimos no son
atrados (or la mayor (arte de c"lulas bacterianas, (ues, la carga negativa de la
c"lula re(ele el in negativo del colorante, de modo que ti,e el fondo en lugar de
la estructura bacteriana. Para a(licar los colorantes cidos o bsicos se em(lean
tres clases de t"cnicas de tincin& Simple, diferencial y especial.
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!qu slo se 2ar
"nfasis en las dos (rimeras.
+na tincin sim(le es una solucin acuosa o alco2lica de un colorante bsico
8nico. !unque los diferentes colorantes se unen de forma es(ecfica a las
diferentes (artes de las c"lulas, el ob:etivo (rinci(al de una tincin sim(le es
destacar el microorganismo com(leto (ara observar las formas y las estructuras
bsicas celulares. Las tinciones sim(les utilizadas con frecuencia son con !zul de
metilo, cristal violeta y safranina.
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Las tinciones diferenciales reaccionan de manera diferente con las distintas clases
de bacterias y (or lo tanto (ueden ser utilizadas (ara establecer una distincin
entre ellas. Las tinciones utilizadas con mayor frecuencia (ara las bacterias son&
Tincin Gram y tincin cido-alcool resistente.
-
La tincin #ram es muy 8til (orque (ermite clasificar las bacterias en
Grampositivas y Gramne!ativas. e(endiendo de su interaccin con un colorante
bsico 4cristal violeta5 que :unto con yodo, se unen al cito(lasma y lo colorean de
violeta oscuro. Las bacterias que conserven este color luego de un lavado con
alco2ol (ara decolorarlas se clasifican como Grampositivas= las bacterias que
(ierdan el color violeta oscuro se clasifican como Gramnegativas.
-

'tra tincin diferencial im(ortante es la de cido>alco2ol resistencia que se fi:a de
modo firme sobre las bacterias que (osean l(idos en las (aredes de sus c"lulas.
1n el (rocedimiento se a(lica colorante ro:o carbolfucsina, luego se 2ace un
lavado con cido>alco2ol que elimina el colorante de las bacterias que no son
cido>alco2ol resistentes. Las bacterias cido>alco2ol resistentes retienen el color
ro:o (orque la carbolfucsina es muy soluble con los l(idos de la (ared celular, a
diferencia de las bacterias no cido>alco2ol resistentes donde sus (aredes
celulares carecen de l(idos y (or lo tanto se elimina la carbolfucsina.
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Resultados y anlisis.
/. 1n la (rimera (rctica se recolectaron muestras diversas, tanto biolgicas como
ambientales, las cuales se (usieron a cultivar en (lacas de Petri (ara
(osteriormente determinar el ti(o de colonia que formaban estos microorganismos.
"i!ura #. $uestras biol!icas
1n estas muestras biolgicas se observaron en su mayora, microorganismos
(untiformes y circulares, con su su(erficie redondeada.
"i!ura %. $uestra de ob&etos de uso cotidiano
1n estas muestras de ob:etos de uso cotidiano se observaron colonias circulares,
(untiformes y otras irregulares= sor(rendentemente no encontramos un cultivo
bacteriano en el teclado ni en la fuente, lugares que (or sim(le intuicin se (iensa
que son muy sucios y que deberan de contener una alta cantidad de
microorganismos.
"i!ura '. $uestra ambiental dentro del laboratorio
entro del laboratorio no se encontraron grandes colonias de microorganismos,
las (ocas que 2aban eran irregulares con su su(erficie es(iculada, esto se (uede
e9(licar debido a que, como el laboratorio es un recinto cerrado que no
(ermanece e9(uesto a todas las condiciones ambientales e9ternas, no es un lugar
muy (ro(icio (ara que los microorganismos crezcan, adems no 2ay muc2o
alimento dis(onible (ara estos.
"i!ura (. $uestra de ob&etos personales
1stos ob:etos no tuvieron grandes cultivos bacterianos, solo las gafas (rodu:eron
colonias (untiformes= el billete de /... (esos que es un ob:eto de alto contacto
con las manos y (or lo tanto de alto contacto con bacterias, no (rodu:o ning8n ti(o
de colonia, lo mismo que con el ?lac@?erry y las llaves.
"i!ura ). $uestra fuera del laboratorio
1n esta muestra tomada fuera del laboratorio, se observ gran cantidad de
colonias bacterianas, (rinci(almente circulares e irregulares, y tambi"n se observa
una (eque,a colonia de color naran:a, esto se debe a que en el e9terior, e9isten
todas las condiciones necesarias (ara que las bacterias crezcan y sobrevivan de
manera adecuada.
!qu una imagen sobre la tincin sim(le que se realiz con el azul de metileno con
la cual (odemos observar la diversidad de bacterias coloradas en las cuales se
(uede ver cocos y bacilos y algunos c8mulos (eque,os de bacterias unidas.
!qu en la imagen vemos una muestra con tincin sim(le en la cual se
(uede observar algunas bacterias 4cocos5, en estas tambi"n es a(reciable
ver (untos sin tincin dentro de las bacterias lo cual nos indica la (resencia
de una es(ora.

1n esta imagen igual vemos la tincion sim(le de una muestra bacteriana de
los cultivos realizados en la cual (odemos observar formas circulares lo que
nos 2ace intuir que son cocos, en estos cocos a diferencia de los otros no
se ve o a(recia a sim(le vista la (osible (resencia de es(oras.
1n este imagen se (uede obser en la (arte su(erior la tincion diferencial de
#ram en los cuales (odemos ver varias ti(os de bacterias claramente
marcados con una coloracion morada son #ram negativas y las de
coloracion ro:itaArosacea son #ram Positivas, donde siendo ms es(ecificos
(odemos observar bacilos y algunos cocos #ram negativos y el resto cocos
#ram (ositivos.
1n esta imagen (odemos observar una tincion diferencial de #ram en la
cual (odemos observar cocos #ram negativos que (arecen ser
sta(2ylococos (ero es muy difuso afirmar esto aunque si se (uede
asegurar con certeza que son cocos, tambi"n (odemos observar
claramente stre(tococcus #ram (ositivos algunos montones de cocos que
2arian (ensar que son sta(2ylococos y algunos cocos solitarios.
!dems de estas imagenes las cuales no (udimos ca(turar fueron las
imgenes en las cuales 2icimos una tincion diferencial y luego te,imos las
endos(oras las cuales (udimos a(reciar de coloracion verde y que tambi"n
(udimos observar dentro y fuera de las bacterias dic2as estructuras.
Bambien 2icimos una tincion en la cual se te,ia todo de coloracion oscura y
lo unico que no se te,ia eran las bacterias las cuales quedaban con su
forma original (ero translucida, 2icimos la observacion de estas mismas
bacterias.
Observacin de bacterias al microscopio
MUESTRA FORMA MUESTRA FORMA
?asura ?acilos Muestra 3nterior Cocos
)uente Cocos #afas Cocos
Pene Cocos Vagina 4Cigrosina5 Coco
?lac@?erry Cocos ?ocina telefnica Coco
Vagina 1stafilococos 'do Coco
Coloracin de ram.
!ACTER"A T"#C"$# %E RAM E#%OES&ORAS
7. aureus D >
?. subtilis D D
?. Cereus D D
1. Coli > >
Mezcla D, > D, >
CO#C'US"O#ES.
7e distingui las diferentes formas de crecimiento de microorganismos en
los medios de cultivo, dando a conocer algunas de las t"cnicas utilizadas
(ara demostrar la e9istencia microbiana.
7e conocieron algunos de los m"todos de observacin de las bacterias,
logrando diferenciar las formas de accin de los diferentes colorantes
utilizados, sobre la c"lula, teniendo en cuenta su carcter cido o bsico.
La observacin al microsco(io nos (ermiti diferenciar las formas t(icas
que (resentan las bacterias= como cocos, bacilos y es(irales entre otras.
7e logr diferenciar las caractersticas morfolgicas y de tincin observadas
al microsco(io de las distintas bacterias recolectadas.
7e adquiri destreza en la t"cnica de coloracin de #ram, logrando
diferenciar en base a la a(licacin de esta t"cnica las bacterias gram
(ositivas de las gram negativas.
!iblio(ra)*a.
/. Montoya, ;ugo ;. Microbiologa bsica (ara el rea de la salud y afines.
-..E. 1ditorial +niversidad de !ntioquia.
-. Bortora, #erard $. 3ntroduccin a la Microbiologa. -..<. 1ditorial M"dica
Panamericana.