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TCNICAS ANALTICAS USADAS

EN EL CONTROL DE CALIDAD DE
PRODUCTOS FARMACUTICOS
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CLASIFICACION DE LAS TCNICAS ANALTICAS
Tcnicas de separacin
Tcnicas cromatogrficas
Electroforesis capilar

Otras tcnicas instrumentales
Espectrofotometra ultravioleta-visible
Espectroscopa de infrarrojo cercano
Anlisis termogravimtrico
Anlisis trmico diferencial
Calorimetra diferencial de barrido
Volumetra
Difraccin de rayos X
RMN
Microscopa ptica
Rotacin ptica
Polarografa

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1. VOLUMETRA
Se aade un exceso conocido de reactivo estndar a la
disolucin, y luego se valora el exceso (no se valora el analito).

Es til si el punto final de la valoracin por retroceso es ms
fcil de identificar que el punto final de la valoracin normal.

Tambin se usa si la reaccin entre el analito y la sustancia
titulante es muy lenta.
Titulacin o valoracin cido-base
(anticidos)

Titulacin a valoracin por retroceso
(antibiticos)
Titulacin o valoracin por retroceso
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2. ESPECTROFOTOMETRA
Es la medida de la cantidad de
energa radiante que absorbe un
sistema qumico en funcin de la
longitud de onda de la radiacin, y
las mediciones a una determinada
longitud de onda.

Espectro ultravioleta (UV)

Espectro visible (Vis)
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CROMATOGRAFIA
Es una tcnica capaz de separar compuestos basada en
diferencias de su afinidad por una fase estacionaria y
una mvil.
Sistema Cromatografico:
Fase Mvil
Fase
Estacionaria
Soluto
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Los componentes de una mezcla se
disuelven en una fase mvil que se
desplaza a travs de una fase
estacionaria.

Cada molcula interacciona en
distinta forma con la fase mvil y la
fase estacionaria.

La interaccin depende de las
propiedades fsicas de cada
molcula (separacin).
Mikhail Tswett
1906
CROMATOGRAFIA
(chroma-color y graphein-escribir)
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PROCESO FSICOQUMICO QUE RIGE LA
SEPARACIN
-Adsorcin:
El soluto se adsorbe en la superficie de las
partculas slidas de la fase estacionaria. Es un
fenmeno superficial, aumentado con la
formacin de puentes de hidrgeno.
- Particin o Reparto:
El soluto se equilibra entre el lquido de la fase
estacionaria y la fase mvil, por diferencia de
solubilidad hasta llegar a un equilibrio
- Intercambio Inico:
Los aniones o cationes se separan en base a una
columna rellena con un intercambiador de iones
(resina).
- Exclusin Molecular, Filtracin o Permeacin
en Gel:
No existen interacciones entre la fase
estacionaria y el soluto. Se separa por tamao de
partcula.
1 2 4 5 6 7 8 9 3
r
e
s
p
u
e
s
t
a

d
e
l

d
e
t
e
c
t
o
r

fraccin
PERFIL DE ELUCIN
CROMATOGRAFA DE FILTRACIN/PERMEACIN EN GEL
Molec. GRANDES RPIDAS

* Avanzan con mayor velocidad a travs de
los espacios intersticiales (con f. mvil).
grande
Molec. PEQUEAS LENTAS

* Son retenidas por los poros de las
micropartculas y avanzan con menos
velocidad (con f. mvil).
pequea
APLICACIN
MUESTRA
ELUCIN
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Fase
estacionaria
Fase
mvil
Proceso
cromatogrfico
Capa fina
Columna
Adsorcin
Interc. Inico
Exclu. Molecular
Adsorcin Columna
Papel
Capa fina
Columna
Particin
Particin
Columna
Lquida
Lquida
Lquida
Slida
Gas
Gas
Tcnica
cromatogrfica
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TERMINOLOGA Y PARMETROS CROMATOGRFICOS
Eluente: as se denomina a la fase mvil portadora de la
muestra.

Eluato: es el trmino con el que se define la salida del
solvente y el analito.
ELUENTE

columna
ELUATO
(entra) (sale)
Proceso de elucin
Flujo: mide la velocidad de la fase mvil, se expresa como
gasto en volumen (mL/min) o gasto lineal (cm/min).

Cromatograma: Grfica que expresa la respuesta del
detector en funcin del tiempo de elucin.
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ANLISIS CROMATOGRFICO
Anlisis cualitativo: se basa en la medida de parmetros
cromatogrficos como tiempos y volmenes de retencin
(identificacin).

Anlisis cuantitativo: se basa en la medida de alturas o
reas de picos que se relacionan con la concentracin
(cuantificacin).
Muestra
Estndar
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Los parmetros cromatogrficos en anlisis cualitativo:
tiempo de retencin(t
R
) y volumen de retencin (v
R
).

Tiempo de retencin - T
R
: tiempo transcurrido desde el
instante de inyeccin de la muestra al mximo de pico.

Tiempo ajustado T
R:
(T
R
- t
M
): tiempo que va desde el
pico en el que no se retiene la sustancia hasta el mximo
de elucin.

Tiempo muerto t
M
: tiempo necesario para que la fase
mvil atraviese la columna.
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TIEMPO DE RETENCIN
tiempo de retencin ajustado = t
r
= t
r
- t
m

CROMATOGRAFIA PLANA
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a - distancia recorrida por
el analito.
b - distancia recorrida por
el frente del solvente.
a
b
Es muy semejante a la cromatografa lquida tanto en
aplicaciones como en funcionamiento.
La fase mvil se mueve por capilaridad, gravedad o bajo
la accin de un campo elctrico (electro-cromatografa).
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Cromatografa en Capa Fina (TLC)
Sembrado:
Puntiforme Banda
Forma de sembrado: Manual (capilares jeringas)
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x
Cualitativa
x x x x
x
Identificacin Pureza Ausencia
Cuantitativa
x x x x
Preparativa
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Exclusin molecular
Tierras de Diatomea
Sephadex (geles)
Adsorcin:
Silica Gel (Oxido de Silicio).
Alumina (Oxido de Aluminio).
Celulosa.
Florisil (Silicato de Magnesio).
Sulfato de Calcio.
Fase Estacionaria:
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Intercambio Inico:
Resinas
Catinicas
Aninicas
Acido sulfnico

RSO
2
-
H
+

Acido carbxilico

In amonio cuaternario

Grupo amina

RCO
2
-
H
+
R
3
NR
+
OH
-
R
3
NH3
+
OH
-
Fase Estacionaria:
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Fase Mvil
COOH
OH
NH
2

SH
CHO
CO
COOR
OCH
3

Hidrocarburos No Saturados
Hidrocarburos Saturados
Acidos carboxlicos
Alcoholes
Aminas
Tioles
Aldehdos
Cetonas
Esteres
Eteres
Alta
Baja
Polaridad
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Cromatografa en Capa Fina
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El revelado difiere de acuerdo al objetivo planteado.
Clasificacin de reveladores
H
2
SO
4

I
2


Lmpara ultravioleta
No Destructivo
Destructivo
Tcnica de baado
Aplicacin
Tcnica de pulverizacin
Revelado
23
H
2
SO
4


Lmpara ultravioleta
I
2

Ftalato de anilina (azcares)
Ninhidrina (Amino-cidos)
Resorcina (Cetosas)
Difenilamina + U.V. 254 (Clorados)
Generales
Selectivo
Especfico
Revelado
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Estimacin del rea de la mancha (por medida, pesada)
Determinacin indirecta (raspado y valoracin)
Determinacin directa (Densitmetro)
Detector
Fuente de luz
Placa
cromatogrfica
Cromatografa Cuantitativa
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Agua
Metanol
Etanol
Acetona
Piridina
Eter dietil.
Cloroformo
Benceno
Tetracloruro
de Carbono
Ciclohexano
Eter de
petrleo
Polaridad
Compuesto a
Cromatografiar
Tcnica
Compuestos
inicos
Acidos
Fenoles
Alcoholes
Aminas
Esteres
Aldehdos
Cetonas
Nitro deriv.
Halogeno deriv.
Hidrocarburos
alinfticos
Disolventes
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CROMATOGRAFA SOBRE COLUMNA
Cromatografa Gas - Lquido
Cromatografa Lquida de Alta Resolucin
(HPLC)
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CROMATOGRAFA SOBRE COLUMNA
Cromatografa de Gases (sustancias voltiles).

Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (HPLC)
cualquier tipo de sustancias.
Fundamento
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Todo el proceso de separacin se lleva a cabo en la
columna.

A la salida de la columna existe un detector que detecta
cada componente eludo.

La respuesta adopta la forma de un pico ms o menos
Gaussiano.

Entre ms resueltos aparezcan los picos es ms eficaz la
separacin.
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CROMATOGRAFA DE GASES
CROMATOGRAFA LQUIDA
(HPLC)
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PICOS CROMATOGRFICOS
Cuando se desea cuantificar se debe garantizar que los
picos estn bien resueltos.

Debe distinguirse muy bien el inicio y el final de cada pico
y su mximo.
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ANLISIS CROMATOGRFICO
Separa
Identifica
Cuantifica

Anlisis cualitativo:
Factor de reparto
Tiempo de retencin
Volmenes de retencin

Anlisis cuantitativo:
Altura de pico
rea de pico
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ANLISIS CUANTITATIVO
Todos los detectores de cromatografa producen seales
que son medidas, registradas e integradas.

Para HPLC y GC se usan los mismos mtodos de
cuantificacin.

En ambas cromatografas, la respuesta depende del tipo
de sustancia por lo que siempre se requieren
estndares.

Los detectores cromatogrficos de una respuesta/unidad
de concentracin.
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INSTRUMENTACIN
EQUIPO DE HPLC
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FASE ESTACIONARIA
Todos los tipos de cromatografa: modo de alta resolucin.
Soporte comn: partculas microporosas de slice (dimetro
de 5 a 10 m.
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SOLVENTES
Los solventes utilizados deben ser muy puros (grado
cromatogrfico).
Se puede utilizar un solo solvente (eleccin isocrtica).
Se puede cambiar continuamente de composicin del
disolvente (eleccin por gradiente).
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BOMBAS
La calidad de una bomba es
determinada por el grado de
estabilidad y reproducibilidad del
flujo que genera.
Se trabaja hasta 10 mL/min a
presiones hasta de 40 Mpa (400
atm).
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Inyector Manual (Rheodyne): Vlvula de Inyeccin
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DETECTORES PARA HPLC
Se usan dispositivos que sean capaces de medir una
propiedad que responda a la concentracin de la
sustancia a analizar.


TIPOS DE DETECTORES

Universales: miden cualquier cambio producido en la
fase mvil.

Otros: miden una propiedad de los solutos.
DETECTOR ULTRAVIOLETA
Es el detector ms utilizado (muchos solutos absorben
luz UV).

El sistema ms simple emplea la emisin a 254 nm de
una lmpara de mercurio y deteccin a una sola longitud
de onda.

Tambin se utilizan una lmpara de deuterio y un
monocromador para mediciones a longitud de onda
variable.

El intervalo lineal comprende cinco rdenes de
magnitud de concentracin de soluto.
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DETECTOR DE NDICE DE REFRACCIN
Es casi universal, responde a casi cualquier soluto.
La sensibilidad es unas mil veces menor que la de un
detector ultravioleta, y no es til en gradiente.
DETECTOR ELECTROQUMICO
Es bastante selectivo, porque slo ciertos analitos se
oxidan o se reducen con facilidad.
Pueden detectarse por oxidacin: fenoles, aminas
aromticas, perxido y mercaptanos. Y por reduccin:
cetonas, aldehdos y nitrilos.
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OTROS DETECTORES
ultravioleta 0.1 - 1 si
ndice de refraccin 100 - 1000 no
elctroqumico 0.01 - 1 no
fluorescencia 0.001 - 0.01 si
conductividad 0.5 - 1 no
espectrofotometra de masa 0.1 - 1 si
infrarrojo de tranformada de Fourier 1000 si
Detector
Lmite de
deteccin
Util con
gradiente?