TECNOLOGIA DE HIBRIDACION DE ACIDOS NUCLEICOS (MICROMATRICES O MICROARRAYS) EN ESTUDIOS DE ALERGIA

INTRODUCCION Los microarrays o micromatrices de alerga estan basados en la moderna tecnologa de los biochips. El ImmunoCAP ISAC es un test diagnstico in vitro muy avanzado ue emplea la tecnologa biochip. Permite medir simult!neamente en un solp test anticuerpos espec"icos "rente a componentes alerg#nicos m$ltiples% empleando $nicamente pocos &l de suero o plasma. El chip IgE espec"ico proporciona resultados para m!s de un centenar de componentes de m!s de '( alergenos. Los alergenos se seleccionan previamente e incluyen marcadores para la reactividad cruzada.

El ImmunoCAP ISAC )Immuno Solid-Phase Allergen Chip)% es una herramienta $til% en particular para los casos m!s comple*os% como los inconsistente% una respuesta insatis"actoria al ue tienen una historia clnica tratamiento o pacientes

polisensibilizados. Adem!s del chip IgE% hay chips para medir los anticuerpos Ig+ y anticuerpos Ig+,.
El InmunoCAP ISAC es una plata"orma multiple-in y de microinmunoensayos ue permite

determinar% en el panel actual% hasta .(/ componentes alergnicos, nativos y recombinantes de aeroalergenos, alimentos y drogas, pudiendo obtener un perfil de sensibilizacin del paciente alrgico de una manera ms especfica y completa.

Los componentes de alergenos puri"icados se inmovilizan en el biochip. En un ensayo de dos "ases% los anticuerpos del suero del paciente se unen a los componentes de alergenos inmovilizados. 0ras una "ase de lavado breve% se detectan los anticuerpos unidos a los alergenos mediante un anticuerpo "luorescente. Los resultados del test se calculan con un esc!ner de biochip y se eval$an empleando el so"t1are Phadia 2IA. ImmunoCAP ISAC es una prueba semicuantitativa y los resultados se e-presan en unidades ISAC Standardised 3nits )IS34

Hasta el momento actual, estas tcnicas se han utilizado en proyectos de investigacin cuyos objetivos eran valorar hipersensibilidad alrgica a cannabis, herona y morfina en grupos de pacientes consumidores de herona y otras drogas de abuso que acuden a Centros de drogodependencias y en pacientes alrgicos atendidos en los Hospitales. Se han podido diagnosticar reacciones adversas graves a morfnicos que podran haber sido evitadas. Si la deteccin de sensibilizacin a herona y mrficos (opiceos) fuera posible por estas tcnicas se abrira una va diagnstico-terapetica con importantes repercusiones sociales, legales y de salud. Tambin se tendra un nuevo mtodo para prevenir anafilaxias intraoperatorias por morfnicos y otros eventos adversos en el tratamiento del dolor, por lo que su utilidad en seguridad alcanzara a todos los pacientes que fueran intervenidos quirrgicamente o tratados con analgsicos mayores.

ImmunoCAP..ISAC

Immuno Solid-Phase Allergen Chip

Los resultados de ImmunoCAP ISAC dan un valor de extremada utilidad para: Una mejor y ms especfica definicin del patrn de sensibilizacin del paciente. Una herramienta que nos ayuda a instaurar una mas adecuada y eficaz Inmunoterapia especfica Las pruebas in vitro basadas en componentes alergnicos permiten caracterizar con gran detalle los perfiles de sensibilizacin de los pacientes.

La cuantificacin de los anticuerpos IgE tanto frente a componentes alergnicos especficos como a componentes de reactividad cruzada contribuyen a identificar la fuente alergnica sensibilizante. Aunque es una tcnica analtica, precisa para su interpretacin en el aspecto de hipersensibilidad a alimentos y frmacos, los conocimientos de la especialidad de Alergologia. No sobrecargara la elevada actividad del Servicio de Anlisis Clnicos, al ser una tcnica aplicada en investigacin, pero estara tambin a su disposicin para las aplicaciones que consideraran oportunas.

UTILIDAD DE LA TECNICA Estamos asistiendo a un incremento de las enfermedades alrgicas en la poblacin joven. La prevalencia aumenta en los consumidores de tabaco y en las ciudades. En la Comunidad Autonoma de Castilla y Len se estima que existen ms de 500.000 alrgicos. Los alrgenos ms importantes son los vegetales y los frmacos. Nunca se ha hablado de la posible sensibilizacin alrgica a drogas, al considerar que las reacciones a las mismas se deberan a causas txicas y la hipersensibilidad alrgica a causas inmunolgicas, entendiendo ambas causas como excluyentes. Sin embargo, no hay ninguna publicacin que demuestre que ambos mecanismos sean independientes. Todos los clnicos utilizan medicamentos, drogas en s, que pueden causar efectos txicos y reacciones de hipersensibilidad en pacientes susceptibles. La seguridad en su aplicacin es una de nuestras mayores responsabilidades. Nuestro primer propsito era lograr nuevos mtodos que permitan el diagnstico de la hipersensibilidad a drogas incluso en momentos en que no se estn consumiendo, que es la limitacin de las tcnicas actuales. Al utilizar esta tecnologa, esto se consigue. Si se demostrara alergia a drogas, se abrirn nuevas vas de deteccin de consumo en laboratorio sin necesidad de que el paciente hubiera consumido la droga en el momento del anlisis, al ser la respuesta alrgica perdurable en el tiempo y evidenciable por la deteccin de anticuerpos especficos. La aplicacin de los ensayos de hibridacin de cidos nucleicos a gran escala (micromatrices o microarrays) mediante el ISAC, har posible que podamos disponer de biochips o paneles de alrgenos o eptopos, pegados a placas de slice, pudindose utilizar miles en un solo ensayo. Esto nos permitir saber el mapa de sensibilizacin de cada paciente a las drogas implicadas, valorar su relevancia clnica, las posibles reactividades cruzadas y el pronstico de su enfermedad. Tambin servir para prevenir eventos adversos por medicacin analgsica y

anestsica. Aunque la interpretacin de sus resultados dependa de un especialista, se cuenta con otras especialidades hospitalarias implicadas.

ImmunoCAP ISAC
Prepare Prepare serum serum Incubate Incubate sample sample Stain Stain with with SAb SAb

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Duration: Duration: 3 3 hours hours

Scan Scan biochip biochip

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Esto pretende colaborar en la obtencin de los siguientes objetivos: - Impulsar la investigacin en los profesionales sanitarios como proceso de generacin, gestin e intercambio de conocimiento, en un sistema de salud moderno. - Mejorar la efectividad de la prctica clnica y disminuir los efectos adversos en los pacientes.

e!erencias .. 5I6. +uidelines "or the 7iagnosis and 2anagement o" Asthma% 8((9. 5I6 publication (:;,('.. 8. 5iemeier 5<% de 2onchy =+. Age;dependency o" sensitization to aero;allergens in asthmatics. Allergy .>>8?,9@,/.;'. /. 7aniel Aervloet% 2ichel Pradal. 7rug Allergy. Sundbyberg@ S;2 E1ert AB% .>>8@,% ''. ,. 5elson 6S. Aariables in allergy sCin testing. Allergy Proc .>>,?.')D4@8D';: '. Sampson 6A. 0he role o" "ood allergy and mediator release in atopic dermatitis. = Allergy Clin Immunol .>::?:.@D/';D,'. D. <ing =. 5ahrungsmittelallergie und atopische ECzem. Allergologie .>:,?9@/((; /(D. 9. Liappis% 5? Berdel% B. 7etermination o" total IgE and o" speci"ic IgE in the serum o" capillary blood. Allergologie?.>>:?..@.(;.8. :. Lil*a% +? 2agnusson C +? et al. 5eonatal IgE levels and three di""erent blood sampling techni ues. Allergy?.>>8?,9@'88;'8D. >. Bauer% C? Atopy screening in children@ 0otal IgE% Phadiatop% and <AS0 multiple "ood allergen disc per"ormed on capillary blood samples. Allergologia e Immunologia Clinica? .>:9? 8@>'.