ELECTROFORSIS

Illn Morales Becerril

ELECTROFORESIS
La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de estas en un campo elctrico a travs de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaos moleculares y carga elctrica, dependiendo de la tcnica que se use.

La tcnica clsica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un electrolito. Sus extremos se sumergen en dos depsitos independientes que contienen ambos al electrolito y estn unidos a los electrodos del generador de corriente. La muestra se deposita en forma de un pequeo trazo transversal en la tira. La distancia de migracin se mide en relacin un marcador interno. Las placas son reveladas con sales de plata, azul de Coomassie, o reactivos en particular.

Fundamentos y Conceptos Bsicos

La electroforesis capilar (CE) es una tcnica de separacin que se ha desarrollado gracias a los avances de la cromatografa lquida de alta eficacia junto con los procedimientos ms tradicionales de electroforesis. Esta tcnica permite separar bastante bien biomolculas, donde la cromatografa lquida se muestra menos eficaz, y compuestos de pequea masa molecular, difciles de estudiar por los procedimientos clsicos de electromigracin en soporte.

La electroforesis capilar constituye una adaptacin particular de la tcnica de electroforesis. Esta tcnica separativa se basa en la migracin de las especies de la muestra en disolucin, portadoras

ELECTROFORSIS

Illn Morales Becerril

de una carga elctrica global, bajo el efecto de un campo elctrico y en contacto con un soporte (medio de desplazamiento) adecuado.

En electroforesis capilar la tira se reemplaza por un tubo capilar abierto en sus extremos, fabricado con un dimetro pequeo (15 a 150m). El capilar oscila entre 20 y 80cm, y est lleno de una solucin buffer. Un detector se encuentra ubicado en un extremo del capilar, cerca del compartimiento catdico. La seal obtenida es la base de la obtencin del electroferograma, que muestra el registro de la composicin de la muestra. Solo las especies que se dirigen hacia el ctodo sern detectadas.

Mtodos de Deteccin
En la deteccin UV-Vis se mide la intensidad de la luz que pasa a travs del capilar en una pequea zona en la que se ha eliminado el revestimiento opaco.

La deteccin por fluorescencia resulta ms sensible si se emplea una fuente lser muy intensa, asociada a menudo a un procedimiento de preformacin de derivados de los analitos portadores de un fluorforo.

Tcnicas Electroforticas
Electroforesis capilar en zona o en disolucin libre (CZE) Es el procedimiento de electroforesis ms habitual, en el cual el capilar es recorrido por el electrolito a travs de un medio buffer que puede ser cido (fosfato o citrato), bsico (borato), o anftero (carcter cido y bsico). El flujo electroosmtico crece con el pH del medio electrofortico.

ELECTROFORSIS

Illn Morales Becerril

Electroforesis capilar electrocintica micelar (MEKC) En esta variante del procedimiento anterior se aade a la fase mvil un compuesto catinico o aninico para formar micelas cargadas. Estas pequesimas gotitas inmiscibles con la disolucin retienen a los compuestos neutros de un modo ms o menos eficaz, por afinidad hidrfilahidrfoba. Se puede utilizar este tipo de electroforesis para molculas que tienen tendencia a migrar sin separacin, como es el caso de algunos enantiomeros. Electroforesis capilar en gel (CGE) Esta es la transposicin de la electroforesis en egel de poliacrilamida o de agarosa. El capilar est relleno con un electrolito que contiene al gel. Se produce un efecto de filtracin que ralentiza a las grandes molculas y que minimiza los fenmenos de conveccin o de difusin. Los oligonucletidos, poco frgiles, se pueden separar de este modo. Isoelectroenfoque capilar (CIEF) Esta tcnica, tambin conocida como electroforesis en soporte, consiste en crear un gradiente de pH lineal en un capilar con pared tratada que contiene un anftero. Cada compuesto migra y se enfoca al pH que tenga igual valor que su punto isoelctrico (al pI su carga neta es nula). Seguidamente, bajo el efecto de una presin hidrosttica y manteniendo el campo elctrico, se desplazan las especies separadas hacia el detector. Las altas eficiencias obtenidas con este procedimiento permiten separar pptidos con pI que apenas difieren entre s 0.02 unidades de pH.

Electrocromatografa Capilar
Este tipo de separacin asocia la electromigracin de los iones, propio de la electroforesis, y los efectos de separacin entre fases presentes en la cromatografa. La tcnica consiste en la utilizacin de un capilar relleno con una fase estacionaria, cuyo papel es doble: acta como material selectivo que debe, por otro lado, participar en la migracin del electrolito.

El factor de separacin es muy elevado, pero existen un cierto nmero de problemas que limitan su aplicacin, como el efecto de los modificadores orgnicos sobre el flujo electroosmtico y la dificultad de un control preciso del volumen de muestra introducido en el capilar.

ELECTROFORSIS

Illn Morales Becerril

Referencia
Castellan, G. (1998) Fisicoqumica, 2 ed. Mxico, Pearson-Adisson Wesley. Pgs. 461-462 Rouessac, F. (2003) Anlisis Qumico: Mtodos y Tcnicas Instrumentales Modernas. Espaa, McGraw Hill. Pgs. 121-133 Nelson, D. (2001) Lehninger Principios de Bioqumica, 3 ed. Espaa, Omega. Pgs. 123125

Mesografa
Wikipedia (2008) Electrophoresis en http://en.wikipedia.org/wiki/Electrophoresis revisado el viernes 19 de septiembre de 2008. Wikipedia (2008) Capillary Electrophoresis en http://en.wikipedia.org/wiki/Capillary_ electrophoresis revisado el sbado 20 de septiembre de 2008. Qumica Orgnica (2008) Aminocidos: Punto isoelctrico en http://www.quimica organica.net/quimica-organica/aminoacidos/ph-isoelectrico/aminoacidos-pH-isoelectrico.htm revisado el viernes 19 de septiembre de 2008. Pontfica Universidad Javeriana (2008) Electroforesis en http://www.javeriana.edu.co /Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/electroforesis.html revisado el sbado 20 de septiembre de 2008.