Electroforesis capilar en gel

Principio
La electroforesis capilar (CE) es una técnica de separación basada en la diferente
velocidad de migración de las distintas especies cargadas bajo la acción de un campo
eléctrico. La separación se lleva a cabo en un capilar de sílice fundida de diámetro
muy pequeño ( 10-200 µm). El uso de estos capilares tiene múltiples ventajas: a) los
capilares son anticonvectivos en sí mismos, por lo tanto, no es necesaria la utilización
de un gel soporte como medio; b) el calor generado al pasar la corriente eléctrica
(efecto Joule), que daría lugar a problemas de gradientes de temperatura no
uniformes ( cambios locales de viscosidad ), es fuertemente reducido, ya que la
disipación de calor es muy efectiva; c) pueden aplicarse altos voltajes consiguiendo
una reducción del tiempo de análisis y altas eficiencias. Se la considera una técnica
intermedia entre la clásica electroforesis de zona (ZE) y la cromatografía (HPLC)
líquida.Utiliza el principio de la electroforesis capilar en solución libre (1).
(9)
 Fundamento:
El capilar y los viales se llenan con una solución buffer. La muestra está formada por
un conjunto de aniones y cationes que se introduce dentro del sistema ocupando una
única zona. Al someterlo a la influencia de un campo eléctrico, migran hacia el
electrodo correspondiente, estableciéndose un movimiento de iones que forman parte
del sistema. Permite la separación de moléculas cargadas en función de su movilidad
electroforética, en un buffer a un pH determinado, según el punto isoeléctrico (pI) de
la molécula y de un flujo electrosmótico (EOF) más o menos importante. El EOF es el
flujo del líquido en el interior del capilar originado por la carga eléctrica negativa
existente en la pared interna del capilar. En el caso de los capilares de sílice fundida
ésta superficie de carga es generado por la ionización de los grupos silanol. La carga
de la superficie interna del capilar atrae hacia los iones positivos que forman una capa
adyacente fija por adsorción ( capa de Stern ), y una capa difusa y móvil, también
positiva ( capa de Gouy – Chapman ). Los iones de la capa difusa experimentan una
fuerza paralela a la superficie y migran hacia el cátodo al aplicarse una diferencia de
potencial entre los extremos del capilar.
Éstos iones, al estar sulfatados, generan un movimiento global del flúido hacia el
cátodo. Éste movimiento del flúido constituye la fuerza electrosmótica (EOF) (2,3)

(7)

Principios de separación del flujo electroosmótico (EOF).-

En la CE, se desplazan por el capilar bajo la influencia de la corriente eléctrica, las

moléculas de soluto y la solución buffer. Éste es un fenómeno conocido como flujo
electroosmótico. El polo positivo o ánodo se encuentra en el extremo del capilar donde
se realiza la inyección de la muestra. El EOF va del polo positivo al negativo, de
manera que el buffer se mueve del vial que lo contiene ( el de entrada) hacia el
detector, en el vial de salida. La pared del capilar está constituida por un entramado
de grupos silanol , por lo tanto al trabajar con buffers básicos se encuentra cargada
negativamente con grupos sialonatos, y hace que las otras cargas positivas libres se
situen cerca de las cargas negativas de la pared formando una doble capa. Al aplicar
una diferencia de potencial las cargas libres (positivas y negativas) se moverán hacia
los polos contrarios. Las cargas negativas de la pared no pueden moverse dando
como resultado un flujo de cargas positivas hacia el polo negativo (1).
 Diagrama de Separación

(5)

Aplicaciones:

Esta técnica es empleada en el área biomédica, en el campo de las proteínas péptidos

ADN, análisis de líquidos de percusión, monitoreo de drogas, marcadores genéticos
tumorales y neuroquímica, químicos, drogas xenobióticas goma de abuso, y pericias
forenses. En el área farmacéutica para el control de calidad de productos
farmacéuticos y biotecnológicos, quimioterapéuticos de estructura tirada.
tirada.es se le a fraccionamiento cuantifica cuantificación hidratos de carbono forman
ácidos orgánicos, aditivos y contaminantes en el de ambiental, pero permite la
identificación de contaminantes y sus metabolitos, pesticidas meta y hidrocarburos.
Como todo desarrollo de una área analítica nueva, la incorporación de técnicas
acopladas como la espectroscopía de masa, fluorescencia inducida por láser y otras
variantes permiten augurar un futuro promisorio (6).

Ventajas
 1. Alta eficiencia, debido a que la aplicación del campo eléctrico sobre el capilar genera
el flujo electroosmótico (feo), que permite la separación con un perfil casi plano,
obteniendo picos más angostos y simétricos comparados con los obtenidos con el
flujo laminar que se obtiene al usar presión, como en HPLC.
2. Excelente resolución, obteniendo platos teóricos mayores a 10.5.
3. Límites de detección de hasta ppm, dependiendo del analito y detector utilizado.
4. Mínimo tratamiento de muestras.
5. Mínimo consumo de muestras (nL) y reactivos.
6. Tiempos de análisis rápidos que oscilan de 5 a 60 min.}

Desventajas

1. Los resultados obtenidos en electroforesis capilar con fines diagnósticos pueden

presentar ciertas anomalías que dificultan su interpretación.
2. Si intenta disminuir el tiempo de análisis mediante el aumento del voltaje o la
disminución de la longitud del capilar se puede afectar la resolución.
3. celulosa absorción de agua y conductividad eléctrica.
4. Efecto electro osmótico ánodo-cátodo (7).
5. Son técnicas lentas y laboriosas.
6. Tienen tendencia de ser poco reproducibles.

Propiedad de los capilares:

Los capilares Sean de diámetro pequeño superiores a 150 mm dificultan la utilización

de Campos eléctricos lo suficientemente Grandes como para mover las especies
iónicas en la dirección del electrodo correspondiente.

El material que constituye el capilar ha de tener una serie de propiedades: ha de

ser químicamente y eléctricamente estable gomá transparente a la luz ultravioleta y
flexible desde el punto de vista práctico, la sílice fundida es el material que más se
utiliza para fabricar estos capilares. Esto aumenta la flexibilidad de los capilares y se
encuentran protegidos por poliamida punto pero este recubrimiento no es
transparente a la luz ultravioleta, lo cual provoca que se tenga que eliminar unos
milímetros de la parte del capilar y actuará como celda de detección.

En ese también se usan capilares que contienen recubrimientos internos, sobretodo

para analizar compuestos con tendencias a interaccionar con la sílice fundida punto
básicamente los recubrimientos se clasifican en dos grandes grupos dinámicos y
permanentes: En los primeros el recubrimiento se consigue adicionando al capilar
sustancias como surfactantes o polímeros hidrofílicos lineales (6).

El sistema de electroforesis y cuenta con los siguientes elementos:

1. Capilar: comparte separación.

2. Reservorios con solución amortiguadora dos puntos donde se sumergen los
electrodos y el capilar.
3. Reservorios: donde se colocan las muestras.
4. El electrodos: ánodo y cátodo.
5. Fuente de alto voltaje: campo eléctrico.
6. Sistema de inyección de la muestra: hidrodinámica y electrocinética.
7. sistema temperatura: por convección de aire o líquido.
8. Detector: conectado a un sistema de adquisición de datos (9).
 Tipos de detección:
La detección de los analitos se realiza dentro del capilar, removiendo una sección
del polímero permitiendo el paso de luz hacia el detector junto a los factores
principales que pueden afectar la eficiencia de la separación de los analitos son el
calor en joules generado, la absorción de la muestra a las paredes, la concentración
de los analitos de la muestra, la fuerza iónica, el pH de las soluciones
amortiguadoras, la temperatura (9).

Tipos de electroforesis capilar

● Isotachophoresis capilar (CITP) ...

● Concentración isoeléctrica capilar (CIEF) ...
● Cromatografía capilar electrocinética micelar (MEKC) ...
● Electroforesis capilar de la zona (CZE) ...
● Electrochromatography capilar (CEC) ...
● Electroforesis capilar del gel (CGE)
El sistema de electroforesis y cuenta con los siguientes elementos:

9. Capilar: comparte separación.

10. Reservorios: con solución amortiguadora dos puntos donde se sumergen los
electrodos y el capilar.
11. reservorios: donde se colocan las muestras.
12. El electrodos: ánodo y cátodo.
13. Fuente de alto voltaje: campo eléctrico.
14. Sistema de inyección de la muestra: hidrodinámica y electrocinética.
15. sistema temperatura: por convección de aire o líquido.
16. Detector: conectado a un sistema de adquisición de datos (9).

Bibliografía

1. Osatinsky, R. (2007). ¿Qué es la electroforesis? Redalyc Sistema de

Información Científica. https://docplayer.es/17154688-Redalyc-osatinsky-
raquel.html.
2. Schwartz H E, Ulfeder K J, Chen F T A and Pentoeny S R. Utility of laser-
induced fluorescence detection in applications of capillary electrophoresis. J
Cap Electroph. 1994; 3: 89-110. 15.
3. Zhu M, Rodriguez R, Hansen P and Wehr T. Capillary electrophoresis under
alkaline conditions.- J Chromatograph. 1990; 516: 123- 131.
4. Jenkins M.A. (1999) Serum Protein Electrophoresis. In: Palfrey S.M. (eds)
Clinical Applications of Capillary Electrophoresis. Methods in Molecular
Medicine™, vol 27. Humana Press. https://doi.org/10.1385/1-59259-689-4:11
5. Química, U.-F. (2008, 18 septiembre). UNAM - ADMYD // Administración de
Manuales y Documentos - Facultad de Química. Departamento de
fisicoquímica UNAM. http://depa.fquim.unam.mx/amyd/
6. Castagnino, J. M. (1997). Electroforesis capilar. Bioquímica y fisicoquímica,
20(10), 13–32. https://doi.org/10.1089/glre.1997.201011
7. Liza, J. (2010, 6 agosto). Electroforesis [Diapositivas]. Electroforesis.
https://es.slideshare.net/angelito290184/electroforesis
8. Sánchez, C. (2013, 28 enero). Electroforesis capilar [Diapositivas].
Electroforesis capilar.
https://es.slideshare.net/ChristopherSnchez1/electroforesis-capilar-16217661
9. Chopin Doroteo, M. (2012). Principios básicos de electroforesis capilar: técnica
analítica de separación de anali. Principios básicos de electroforesis capilar:
técnica analítica de separación de anali, 1(2), 87–89.
https://www.medigraphic.com/rid