EVIDENCIA MOLECULAR DE LA TRANSMISIN ZOONTICA DE GIARDIA DUODENALIS ENTRE LOS TRABAJADORES DE GRANJAS LECHERAS EN BENGALA OCCIDENTAL, INDIA

INTRODUCCION

RESULTADOS Y DISCUSION
TABLA 1: La deteccin de los diferentes genotipos de Giardia duodenalis por PCR-RFLP del gen-Giardin en muestras de heces recogidas de diferentes grupos de edad ganado lechero y de los trabajadores de granjas lecheras.

Son parsitos protozoarios con distribucin mundial. Se perfilan como una de las causas ms frecuentes de diarrea en los seres humanos, tanto en pases desarrollados como en desarrollo. Adems de los seres humanos, infectan una amplia variedad de animales domsticos y salvajes. Son parsitos importantes del ganado lechero, debido a su probada patogenicidad Este estudio se realiz para comprender la importancia del parsito en la salud publica y del ganado y obtener una idea ms clara sobre la epidemiolgica, con mucha informacin sobre el potencial zoontico y los mecanismos de transmisin para los seres humanos

FUENTE Terneros no destetados Becerros destetados Novillas y vacas adultas Trabajadores de granjas lecheras

POBLACION
A 40 72 68 51 3 2 0 6

GIARDIA DUENALIS B 0 0 0 8 E 7 5 2 0 A- E 1 2 0 0

Tabla 2: conjuntos de Giardia duodenalis, subtipos A, B y E identificados en los productos lcteos del ganado y los trabajadores de granjas lecheras de la secuenciacin del ADN del gen-Giardin.

MATERIALES Y METODOS Recoleccin de muestras Deteccin del parasito

180 vacas lecheras: 40 terneros no destetados 72 terneros destetados 68 novillas adultas 51 granjeros

Tincin de yodo y Tincin tricromica ( deteccin de trofozoitos y quistes) Heces FPC ( Huevos) Prueba de ELISA

Extraccin de ADN
El ADN extrado de las muestras positivas(QIAamp DNA Stool Mini Kit ) El ADN eludido se cuantifico espectrofotomtricamente

Anlisis de PCR anidada

Amplificacin del gen de la b giardina PCR 1: 753 pb primer G7 y G759 PCR 2: 511 pb Electroforesis en gel de Agarosa 1.5%

Fig. 1. Genotipificacin de aislados de Giardia por anlisis de RFLP basado en la digestin y PCR del gen beta-giardin producido PCRpor HaeIII. Los carriles 1 y . 5: 100 pb, ms canaletas de ADN, carril2: montaje E, carril 3: montaje mixta A y E, carril 4: montaje A (fuente bovina), carril 6: montaje A (de origen humano) y el carril 7: montaje B. Giardia duodenalis se detect en el 12,2% (22/180) de las muestras fecales de las especies bovinas analizadas por microscopa, ELISA y PCR en los estudios. Infecciones por G. duodenalis es ms frecuente en terneros que en los bovinos adultos. Los resultados de este estudio proporcionan una evidencia molecular til en la transmisin zoontica de G. duodenalis entre el ganado y los trabajadores de granjas lecheras. Aportan nuevos conocimientos sobre la epidemiologa y la diversidad gentica de G. duodenalis en el ganado lechero de la India.

Anlisis de RFLP
Purificacion (kit High Pure) Digestin del producto del PCR (10 l) con endonucleasas de restriccin y 2 l de sln tampn 37 C/ 3 horas Electroforesis gel agarosa 2%se visualizo con bromuro de etidio

-Producto positivos fueronADN Secuenciacin de -secuenciacion ( ABI PRISM 3100) -Secuencias analizadas y ensambladas mediante -ClustalW -GenBank -Blastn -Alineamiento mltiple ( BioEdit)