NUTRICIÓN MICROBIANA

Diseño y optimización
de medios de cultivo
Optimización de la expresión
celular

 Producción de algún producto

 Aumento de producción de biomasa
 Mejorar la velocidad o rendimiento de algún
producto
 Efectores que intervienen en el
crecimiento y formación de productos
 Efectores intracelulares se refiere a la
información genética que posee el
microorganismo. La misma puede ser
modificada por el agregado o extracción
de genes.
 Efectores extracelulares son los
factores del entorno que pueden
modificar la expresión:
físicos y químicos
Efectores extracelulares

Fisicoquímicos
son los relacionados con las
características del sistema de cultivo
agitación, aeración, formación de espuma,
nutrientes del medio de cultivo, pH,
presión osmótica, estado redox, los
parámetros físicos como T y P.
Clasificación de medios
Por naturaleza química de los componentes

 Medios sintéticos o medios químicamente definidos

 Medios complejos en cuya composición intervienen
sustancias de origen animal o vegetal
suero de leche, hidrolizados de proteínas como
peptonas, extracto de levadura, macerado de maíz,
harina de soja
Químicamente indefinidos
y de composición variable
Clasificación de medios
Por los requerimientos nutricionales

 Medios mínimos contienen unicamente los nutrientes

esenciales para el crecimiento
 Medios ricos son suplementados con nutrientes que
por lo general son intermediarios en la síntesis de
componentes celulares: amino ácidos, vitaminas
precursores de la síntesis de ácidos nucleicos.

Aumentan la velocidad de crecimiento,

Reducen la fase lag
Tipos de nutrientes
 Macronutrientes [ g/l ] > 10-4 M
Tipo I: C H O N (10-2 y 10-3 M)
Tipo II: S, P, K y Mg (10-3 y 10-4 M)
 Micronutrientes o elementos trazas [mg/l o µg/l]

Tipo III: Elementos trazas: (minerales)

Fe, Mn, Mo, Ca, Zn y Co
Tipo IV: Factores de crecimiento
Componentes orgánicos que no son sintetizados ni
metabolizados por las células
vitaminas, aminoácidos ácidos grasos no sat.
Requerimientos nutricionales
Macronutrientes Tipo I
Fuentes C (Fuente
( de C y energía)
 Hidratos de Carbono (glucosa o dextrosa, sacarosa,
lactosa)
 Lípidos
 hidrocarburos (alcanos: hexadecano, octadecano)
 Alcoholes (glicerol y manitol)
 Melaza
 Harina de arroz
 Almidón
 Suero de quesos
Requerimientos nutricionales
Fuentes N
El nitrógeno es utilizado para la biosíntesis de proteínas,
ácidos nucleicos y polímeros de la pared celular.
Puede ser de naturaleza inorgánica u orgánica
 NH4 (NH42SO4). Acidificación durante el crecimiento
 Urea, NO3, N2
 Aminoácidos dan mayores rendimientos
 Peptonas. Son hidrolizados parciales de proteínas ( H o OH)
Carne, pescado, gelatina, caseína.
 Extracto de levadura, en forma de pasta o polvo, y puede ser
obtenida mediante autólisis de la levadura
 Extracto de malta, que es el extracto soluble en H2O de la
malta de la cebada
 Cornsteep maceración de la industria del maíz
Requerimientos nutricionales
Macronutrientes Tipo II

P y el S son suministrados en forma

de P04H y S04 (o aminoácidos azufrados)

 El P se incorpora en ácidos nucleicos, y

polímeros celulares.
 El S es asimilado para la síntesis de
aminoácidos azufrados, y además se necesita
para la biotina y otros componentes.
Requerimientos nutricionales

Macronutrientes Tipo II

K y el Mg son suministrados en forma de P04 y

S04 (o aminoácidos azufrados)

 El K es un componente intracelular importante,

principal catión inorgánico.
 El Mg asociado a la función ribosómica, cofactor de
enzimas y componente de pared celular.
Requerimientos nutricionales
Micronutrientes (Tipo III)
Esenciales para el crecimiento
Fe, Mn, y Zn
Esenciales en condiciones particulares
Co, Cu, Mo, Ca
Raramente esenciales
B, Na, Al, Si, Cl, V, Cr, Ni, As, Se
 generalmente están presente en suficiente cantidad
como impureza de los componentes principales.
 Se agregan como sales solubles de Cl-, SO4=, NO3,
MoO4
Requerimientos nutricionales
Factores de crecimiento (Micronutrientes Tipo IV)
Se agregan en el orden de 10-6 a 10-12 M
Coenzimas: colina
Acido oleico ( lactobacilos)
Ácidos grasos
Biotina
Vitaminas B1,2,3,5,6

LOS MICROORGANISMOS NO CRECEN SIN ELLOS

Aminoácidos
Precursores de ácidos nucleicos u otros intermediarios

INCREMENTAN LA VELOCIDAD DE CRECIMIENTO

DISMINUYEN LA FASE LAG
Disponibilidad de los nutrientes

Los nutrientes además de estar presentes en

el medio de de cultivo, deben estar disueltos
para estar disponibles para ser usados por la
célula.
¿POR QUÉ PUEDEN NO ESTAR
DISPONIBLES?
 la esterilización por calor. Se debe tener en
cuenta la temperatura, tiempo de
calentamiento, pH del medio
 reacciones entre componentes antes, durante
o después de la esterilización
Disponibilidad de los nutrientes

Los HPO4 utilizados como fuente de P y soluciones

amortiguadoras deben esterilizarse separados de las
sales de
Mg, con Na, K y NH4

NaMgPO4
NH4MgPO4 poseen baja solubilidad
KMgPO4

Los PO4 deben esterilizarse separadamente

de las sales de Mg y NH4
Disponibilidad de los nutrientes

 Los azúcares pueden descomponerse por la acción del calor en

presencia de sales inorgánicas y compuestos amínicos.

sales, H+
sacarosa hidroliza

 Los grupos carbonilos de los azúcares con los grupos amino

de las proteínas,
proteínas aminoácidos, etc., dan productos de
condensación (reacción de Maillard), los cuales disminuyen
significativamente las cantidades de carbohidratos y N amínico
disponible.
azúcares reductores + -NH2 condensación

Los carbohidratos se deben esterilizar por separado de los

compuestos nitrogenados orgánicos.
Disponibilidad de los nutrientes

Aminoácido,
Factores de crecimiento son lábiles al calor
Vitaminas

 Se los prepara disolviéndolos separadamente en pequeños volúmenes de agua, en

soluciones muy concentradas.
 Se los esteriliza por filtración.
 Se los incorpora a los medios de cultivo ya esterilizados (en general 1ml de solución
por cada litro de medio) en condiciones de asepsia.

Fuente de N

 Fuente de N utilizada son sales de NH4+

Esterilizar a un pH < 7 para evitar su volatilización como NH3.

 Si ésta es urea debe esterilizarse por filtración

Al del calor se descompone en NH3 y CO2,
Disponibilidad de los nutrientes

Es aconsejable entonces, esterilizar los componentes de los

medios de cultivo en fracciones separadas:
separadas

 Fracción 1:
1 Fte. de C, micronutrientes, sales de Mg, Ca, etc.
 Fracción 2: Fte. de N en caso que se descomponga por calor
(urea) debe esterilizarse por filtración, o en caso de que
reaccione con la fuente de C puede esterilizarse por calor
pero separadamente.
 Fracción 3: Vitaminas y factores de crecimiento. Se preparan
soluciones 1000 veces mas concentradas y se esterilizan
por filtración.
 Fracción 4:
4 Fosfatos, se esterilizan por calor.
Diseño, Formulación, Optimización
de medios de cultivo
 Diseño:
Diseño Elección de los componentes
necesarios para lograr el crecimiento y la
formación de productos

 Formulación:
Formulación Proporciones, concentraciones
de cada componente.

 Optimización:
Optimización Encontrar la mejor formulación
para lograr el objetivo (máx biomasa,
producto, etc.)
Optimización
 Para organismos aerobios generalmente se utiliza
como sistema de cultivo Erlenmeyers agitados
 Realizar experimentos, en los cuales se varía la
concentración de 1 componente manteniendo
constante las concentraciones de los demás
ingredientes
 Se varían más de un componente empleando un
diseño factorial
 Se analiza el efecto de la/ las variable escogida sobre
la velocidad de crecimiento, rendimientos yxs, yps,
etc.
Problelma

C
B
Log X
E

D
A

Tiempo