CRISPR/Cas9: an RNA-guided highly

precise synthetic tool for plant genome

editing.
Yeliz Demirci, Baohong Zhang, Turgay Unver

“CRISPR/Cas9: Una herramienta sintética

altamente precisa para la edición genómica
en plantas”.
Presenta:
* Alexis Chino
* Luis Carlos Ballesteros

Materia : Temas Selectos de Bioingeniería

2
Modo de
vida

Tasas Desarrollo
poblacionales industrial

Uso irracional,
Cambios en degradación y
Impactos la calidad de Desequilibrio agotamiento de
vida los recursos
naturales
3

Prioridad en
el uso y
Guiando Necesidades
desarrollo hacia específicas
de nuevas
tecnologías

Satisfacer las necesidades alimentarias y la sostenibilidad de la producción agrícola.

Calidad y Cantidad
4 CRISPR = The Clustered Regularly Interspaced Short
Palindromic Repeats (CRISPR)-Cas (CRISPR-associated protein)

 CRISPR = Agrupamiento corto regularmente inter espaciado de repeticiones

palíndromicas.
 CRISPR/Cas 9 = Herramienta de edición de genoma.
 Utilizado en plantas y animales.
 En comparación con las nucleasas de dedo de cinc (ZFNs) y las nucleasas
efectoras tipo activador de la transcripción (TALEN), CRISPR / Cas 9 tiene
muchas ventajas, incluyendo más fácil de diseñar e implementar, una mayor
eficacia de focalización y menos costosa.
5 CRISPR

En 2011, se identificaron los CRRNA trans- El sistema CRISPREn la /actualidad

Cas se convierten
! en una
La
Al defensa
mismo inmune se
tiempo, deutilizó
la la tecnología
activadores (tracrRNAs) (Deltcheva CRISPR et al., ARNs (CRRNAs)
herramienta deEspecies
edición de genoma/ Cas9:
CRISPR dirigida mediante la
interferencia
CRISPR de CRISPR
/ Cas9 para limita
la edición
2011) y el sistema CRISPR / Cas de
se genomas
desempeñan
transfirió el papel de guía endelalas funciones de tracrRNA, crRNA y
demostración
la vegetales
transferencia horizontal
utilizando de
diferentes métodos
primero entre diferentes organismos, comodeE. CRISPR
intervención (Brounsque
Cas9 proteína et generan una ruptura de doble hebra
Hordeumoleracea
Nicotiana
Brassica vulgareDespués
atenuan Barrangou da
genes en estafilococos
transformación como la agroinfiltración y la al., 2008).
coli a S. thermophilus (Sapranauskas et al., (DSB) en la secuencia
(Lawrenson
(Woo etde ADN
et
al., al., Se
2015),(Jinek etdeal.,
identificó
2015),evidencia
este2012)
un gran
En 2005, tres grupos
dirigiéndose
transfección de investigación
dealprotoplastos
ADN independientes demostraron que
con diferentes informe, se
2011). Lactuva
N. tabacum
Citrus sativa
sinensisinformaron1987
número
experimental
La disposición de
de de
que
diferentes
algunos espaciadores
(Marraffini
mecanismos CRISPR
y Sontheimer, se originaron
de reparación (NHEJ y HDR a partir de fagos y ADN repeticiones
CRISPR proporciona
repeticiones es
Ishino
Eucariotas
para crear Virus Como
inserciones y plasmídico
2008); deleciones) en parte Bacterias
del sistema (Baltes(Woo
(Jia et al.,
etyal.,
Wang, familias
2015),
2014), Papaver
2014), de proteínas
laregularmente
adquisición
consecutiva de
a través
Cas y múltiples
Producto del gen
(Bolotin
especiesetdeal., 2005,modelo
plantas et al.,inmunológico
Mojica Arabidopsis2005, Pourcelbacteriano, las
et al., 2005). Lotus japonicus
somniferum
Cucumis sativus espaciadas
resistencia con una
contra
del genoma
subtipos CRISPR /
un
proteínas Cas abrendel elADN (Wang
(Alagoz
(Chandrasekaran et
et al., función
et2016),
al., 2016),
al., 2016),
Cas iap
relacionada
virus
(Haft
en
bacteriano
et al.,
CRISPR / Cas9 ymediada
thaliana Nicotianaporbenthamiana
sitios específicos mutagénesis se informó por primera
(Mojica vez en
et al., 2000)
Streptococcus
mamíferosSin embargo,
genomashasta 2007, su
incluyendo bacteriófago
función
humanos aún no
(Cong yetel ADN
estaba
al., plasmídico
Mali Marchantia
clara.
2013, et al., 2013).polymorpha
Petunia
Glycine hybrida 2005).
max thermophilus
en sitios
2000, cuatro CRISPR(Cas1-4) fueron identificados en precisos (Garneau et al., (Sugano
(Subburaj
(Jacobs et etetal.,
al., 2014),
al.,2015),
2016),
CRISPR - positivo procariotas (Jansen et al.,2002) 2010). Medicago
Gossypiumtruncatula
Physcomitrella patens
hirsutum
(Michno
(Collonnier etetal.,
(Li et al., al.,2015)
2017) 2016)
 6 Propiedaddes estructurales del sistema
CRISPR/Cas9
Reconocimiento del objetivo Cas
Mecanismo de mediante efectos integradores de
Juegande
Implica la adquisición unnuevos
papel crítico en el sistema inmune
Defensa adaptativo procariota en las arqueas y bacterias
CRISPR proteínas.
contra
espaciadores en la losCRISPR
matriz ataques de fagos y virus (Bhaya et al., 2011; Terns and Terns, 2011)
en arreglos cronológicos

Codifican endonucleasas guiadas por ARN, repeticiones palindrómicas idénticas y ARNs

cortos no codificantes únicos

Los espaciadores se utilizan como componentes de reconocimiento que hacen posible a la

célula invadida recordar y destruir fragmentos de ADN extraños.

Existe tanto enSe expresan

genomas los genes
arcaicos Casbacterianos,
como y el los archaea tienen más sistemas CRISPR /
ARN CRISPR
Cas en sus genomas precursor(Makarova
que en bacterias (pre- et al., 2011b, Westra et al ., 2014).
CRRNA)
 7 Diferencias entre el fitomejoramiento clásico  
y las nuevas técnicas de fitomejoramiento (NPBT).

Manipular los rasgos que afectan el rendimiento de las plantas

=Tolerancia al estrés del medio abiótico

  y biótico.=

Basados en la recombinación homóloga

Técnicas Tradicionales

Selección y planeación de cruzamiento

8

Heterocigosidad

Limitaciones
Poloploidia

Auto
Incompatibilidad

Largos
Periodos
De Generación

Evaluación
Gran área de
continua crecimiento
 9 Década Pasada

Zinc-Finger nucleases (ZFNs)

ZF y TALE
Transcription activator-like effector nucleases (TALENs )

ZFNs primer enzima que edita Son proteínas quiméricas

genoma en arroz, tabaco y maíz. compuestas de una secuencia de
DNA modificado
10 Secuencia deseada

ZNF Usan proteínas de

interacción con DNA
TALEN

Usa base simple DNA-RNA como una interacción de

Cas 9 emparejamiento entre el DNA objetivo y el RNA guía

CRISPR/CAS9 no es sensible a la metilación

11 Aplicación de CRISPR/Cas en modelo
y en especies de plantas de cultivo.

Primeros estudios  Optimización para plantar genomas

Actualmente  Incrementar la eficiencia de diversas plantas

Arabidopsis Thaliana Nicotina Benthamiana Oryza Sativa

12 Sistema CRISP/Cas

Elimina genes individuales

Adiciona un gen, incluso remplazo de genes

Genera larga supresión cromosómica (Arroz, 3 DCG)

Modifica regiones genómicas no codificantes (mRNA &

lncRNA) en plantas
13 Publicaciones

En maíz Genera arroz

Elimina MIR169α
modificaron gen resistente a los
y MIR827α con
ARGOS8, herbicida mediante
Zhao
20-24%

Sun
Shi
incrementa homólogos
efectividad 
rendimiento del recombinantes del
Mayor tolerancia a
grano bajo estrés Acetolactato
la sequia.
de sequía. Sintasa I.
14 Conclusión

El sistema CRISP/Cas9 es una poderosa herramienta para manipular

elementos genéticos en un genoma individual, puede ser utilizado para
manipular (regiones y/o secuencias de DNA) especificas
 CRISPR/Cas9: an RNA-guided highly
precise synthetic tool for plant genome
editing.
Gracias. Yeliz Demirci, Baohong Zhang, Turgay Unver

“CRISPR/Cas9: Una herramienta sintética

altamente precisa para la edición genómica
en plantas”.
Presenta:
* Alexis Chino
* Luis Carlos Ballesteros

Materia : Temas Selectos de Bioingeniería