Inhibición enzimática

Alfonso Bettin, PhD

bettinc@uninorte.edu.co
@teambettin

1
 Inhibidor
• Cualquier sustancia que disminuye la actividad enzimática a través
de interacciones con el centro activo u otros centros específicos
(alostéricos).
• Esta definición excluye todos aquellos agentes que inactivan a la
enzima a través de desnaturalización

• De esta forma, habrá dos tipos de inhibidores:

• I. Isostéricos: ejercen su acción sobre el centro activo
• II. Alostéricos: ejercen su acción sobre otra parte de la molécula,
causando un cambio conformacional con repercusión negativa en la
actividad enzimática
2
 Inhibidores isostéricos
• Los inhibidores isostéricos pueden ser de dos tipos:
• 1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre, con
el complejo enzima-substrato o con ambos:

E+I EI
ES + I ESI
• 2. Inhibidor irreversible: modifica químicamente la enzima

E+I E’

3
 Inhibición reversible
• El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre, impidiendo la fijación del
substrato: Inhibición Competitiva

• El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo haga o no el

substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la fijación del substrato a la enzima,
pero sí impide la acción catalítica: Inhibición No Competitiva

• El inhibidor se fija únicamente al complejo enzima-substrato una vez formado,

impidiendo la acción catalítica; este tipo se conoce como Inhibición
Acompetitiva

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 Inhibición reversible: competitiva

S
E ES E+P
I [E] [I]
Inhibición Ki =
[EI]
Competitiva

EI
Características:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de sustrato desaparece la inhibición
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un análogo químico del substrato.
- El inhibidor es tan específico como el sustrato
 Inhibición reversible: competitiva
• Por tanto, en la inhibición competitiva:

• El efecto cinético del inhibidor es el aumento aparente de la K

m

• La V no aparece modificada; para concentraciones muy altas

max
del substrato:
• V=V max , igual que en ausencia de inhibidor
• Cuanto más pequeño sea el valor de K , mayor será la potencia
i
del inhibidor competitivo
Inhibición reversible: competitiva
• 1. pertenecen a una clase
• Oxido – reductadasa (NADPH)

• 2. poseen una cinética específica

• Síntesis de mevalonato dependiente de sustrato.

• 3. pueden tener un uso clínico.

• Para descender los niveles plasmáticos de
colesterol

• 4. Pueden ser inhibidas

• Por fármacos estatinas (lovastatina, simvastatina)
inhibidor COMP…

• 4. hacen parte de una ruta metabólica

• Síntesis de colesterol en el hígado
 Dihidrofolato reductasa
(síntesis de purinas: adenina y guanina)

H 2N N N H 2N N N
H CH3
N N N N
N CO OH N CO OH

OH CH2 CH2

CH2 CH2

C NH C H Methotrexate C NH C H
Ácido Fólico O - O COO-
COO
n
n
Inhibición reversible: No competitiva
Inhibición reversible: No competitiva

S
E ES E+P
I I
S Esta Inhibición
Es reversible
EI ESI

El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E

y al complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI
ni el complejo ESI son productivos
Inhibición reversible: no competitiva

Aumentar [S] no disminuye la inhibición

Inhibición reversible: No competitiva
 Análogos del estado de transición
• Unpaso más allá en el desarrollo de inhibidores potentes es el
concepto de Análogo de Estado de Transición (AET)

• El inhibidor no es estrictamente análogo del substrato, sino del

Estado de Transición de la reacción

• La afinidad de las enzimas por los AET es enorme, del orden nM o

pM, con lo que la fijación es tan fuerte que puede considerarse
“irreversible”
 O H3C
C N+ CH3 Susbtrato
O2N O O
CH3

-
O O- H3C
C N+ CH3 Estado de transición
O2N O O
CH3

O H3C
O2N OH + C N+ CH3
HO O Productos
CH3

-
O O- H3C
P N+ CH3
O2N O O Análogo de
CH3 estado de transición
 Angiotensinógeno
Hipotensión,
hipovolemia, Renina
ortostatismo
Angiotensina I
DRVYIHPFHL

Enzima convertidora HL
de Angiotensina, ECA

Angiotensina II
DRVYIHPF

Aumento de la presión arterial

 Análogos del estado de transición: Captopril
R
Estado de transición CH COO-
HN
de la ECA CH COO-
C O + N
R' C H C O +
NH H 3C C H
HO C H C
-
O C - H
S

Zn2+
Zn2+
Captopril
Tienen la potencia de inhibidores de tipo irreversible y la
selectividad de inhibidores competitivos.
Inhibición reversible: Acompetitiva
Inhibición reversible: Acompetitiva

S
E ES E+P
I
Esta Inhibición
Es reversible
ESI
El inhibidor sólo puede fijarse al complejo ES;
el complejo ESI no es productivo
 Inhibición reversible: Acompetitiva

S
E ES E+P
I

ESI
Sin inhibidor
El inhibidor sólo puede fijarse al Con inhibidor
complejo ES;
el complejo ESI no es productivo
Aumentar [S] no disminuye la inhibición
Ejercicio
El siguiente gráfico muestra los datos cinéticos obtenidos para la actividad
neuraminidasa viral (medida como la liberación de ácido siálico a partir de un
sustrato modelo) en función de la concentración del sustrato en presencia y ausencia
de Relenza y Tamiflu.

Según los datos cinéticos, ¿cuál de

las siguientes afirmaciones es
correcta?
A. Ambas drogas son inhibidores competitivos de la
neuraminidasa viral.
B. Ambas drogas son inhibidores no competitivos de
la neuraminidasa viral.
C. Tamiflu aumenta el valor de Km para el sustrato en
comparación con Relenza
D. Relenza aumenta el valor de Vmax para el sustrato
en comparación con Tamiflu
E. Relenza no es un inhibidor de la neuraminidasa,
pero inhibe otra enzima viral.
Inhibición irreversible
 Inhibición irreversible
• Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo químico de la
enzima, modificándola covalentemente
• Su acción no se describe por una constante de equilibrio K , sino por i
una constante de velocidad ki

E+I E’

• Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente tóxicos

Aspirin, a nonprescription drug, irreversibly inhibits
prostaglandin and thromboxane synthesis by inhibiting cyclooxygenase
 Inhibición irreversible
• Algunos tipos de inhibidores irreversibles:

• Reactivos de grupos –SH

• Organofosfóricos
• Ligandos de metales
• Metales pesados
 Organofosfóricos

H 3C CH3
Ser CH CH2 OH CH
Ser CH CH2 O P O
CH
H 3C CH3
H 3C CH3
CH
DFP: F P O
diisopropil CH - Actúan sobre enzimas serínicas
fluorofosfato H3C CH3 - Únicamente sobre la Ser activa
- Insecticidas: Parathion, Malathion
- Inhibidores de la Acetilcolinesterasa
 Sustratos suicidas
• Inhibidores activados enzimáticamente:
• Se trata de moléculas que se unen al centro activo de manera
específica, igual que el substrato o los inhibidores competitivos
• Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la molécula
en una especie química muy reactiva que modifica
covalentemente a la enzima, inactivándola
• Tienen por tanto: (a) la especificidad del inhibidor competitivo y (b)
la potencia de los inhibidores irreversibles
 Sustratos suicidas
• 1. El inhibidor se fija a la enzima igual que el substrato o un
inhibidor competitivo convencional
• 2. La acción catalítica de la enzima convierte al inhibidor I en una
especie altamente reactiva I*
• 3. I* modifica covalentemente a la enzima, inactivándola de forma
definitiva al igual que un inhibidor irreversible

1 2 3
E+I EI EI* E’ + I*
 Sustratos suicidas: Ejemplo 1
• 1. Sistema de la b-lactamasa bacteriana

• La utilización masiva de antibióticos b-lactámicos (penicilinas, sus

derivados semisintéticos y cefalosporinas) ha conducido a la
aparición de resistencias a los mismos
• Los microorganismos resistentes a estos antibióticos lo son por
producir una enzima, la b-lactamasa, que inactiva a los
antibióticos b-lactámicos.
 Penicilina (activa)
S
R CO NH CH3
N CH3
O
COO-

b-Lactamasa

S
R CO NH CH3
O C HN CH3
O-
COO-
Ác.peniciloico (inactivo)
 Muy a menudo los preparados de penicilinas o penicilinas
semisintéticas se formulan añadiendo un inhibidor suicida
de la b-lactamasa, el ácido clavulánico

O CH2OH O
O CH2OH
C b-Lactamasa C
N H C
O- HN H
O
-
COO
COO-
Ác.clavulánico
Esta molécula
reacciona con la
O serina activa de la
O CH2OH
C b-lactamasa,
C
CH CH2 O HN produciendo su
H
Ser inactivación
COO-
Otras formas de regular a las enzimas
 Bioquímica Humana

REGULACIÓN ALOSTÉRICA
Alostérico = otra estructura
Sitios alostéricos: Sitios distintos del sitio catalítico de la enzima
blanco.

Las enzimas alostéricas: aquellas cuya actividad en el sitio activo se

podría modular con la presencia de efectores en un sitio diferente

Las estructuras reguladoras no deben

parecerse al sustrato o al producto
directo.
las enzimas alostéricas con frecuencia catalizan el paso
comprometido, a menudo el paso limitante, temprano en una
vía.

• Las enzimas alostéricas están reguladas por moléculas llamadas efectores

que se unen de forma no covalente en un sitio distinto del sitio activo.
• Estas enzimas casi siempre están compuestas por múltiples subunidades, y el
sitio regulador (alostérico) que une el efector es distinto del sitio de unión al
sustrato y puede ubicarse en una subunidad que no es catalítica.
• Los efectores que inhiben la actividad enzimática se denominan efectores
negativos, mientras que los que aumentan la actividad enzimática se
denominan efectores positivos.
• Los efectores positivos y negativos pueden afectar la afinidad de la enzima
por su sustrato (K0.5), modificar la actividad catalítica máxima de la enzima
(Vmax) o ambas.
 Bibliografía

• Rodwellet al. (2012). Harper: Bioquímica ilustrada.

McGraw Hill (México)
• Capítulo 8

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