UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ

FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN

FACULTAD DE BROMATOLOGÍA Y NUTRICIÓN

INTEGRANTES
CURSO: SOPORTE GIRALDO ZARZOSA, CINTHYA
FARMACOLÒGICO Y NUTRICIONAL SUSANIBAR PIZARRO, FLOR ELISA
VILLANUEVA RÍOS, BELI
DOCENTE: Orcòn Aliaga, Gloria GARCÍA ANGULO,
JENNIFER(COORDINADORA)
JIMENEZ ATANACIO, ELAIZA
LA NOBILETINA , LA SINESTINA Y LA TANGERETINA SON LOS PRINCIPALES
RESPONSABLES DE LAS CLEMENTINAS QUE PROVOCAN INTERACCIONES
ENTRE ALIMENTOS Y MEDICAMENTOS .

AÑO
●
Departame
 Johanna FECHA
nto de
Weiss. RECIBIDA
Farmacolo
 David gía 23/11/2018
Barreca Clínica . FECHA
Universida REVISADA:
 Giuseppe ●

d de 18/02/2017
Gattuso .
Heidelberg FECHA
 Walter Emil
. ACEPTADA
08/03/2020
PALABRAS CLAVES

FLAVONOIDES
CLEMENTINA

CYP
El Citocromo es una familia de homoproteínas
presentes en una gran variedad de especies,
desde bacterias hasta mamíferos. (Rev Hosp Jua
Mex 2014; 81(4): 250-256) Jaimes-Santoyo
 ABSTRACTO
CYP450 (CYP3A4 CYP1A2)

Sin embargo, se desconocen qué compuestos en el jugo de clementina son responsables de estos efectos.

OBJETIVO

 Identificar los compuestos que

provocan la inhibición o
inducción de enzimas
metabólicas.
ABSTRACTO
METODOLOGIA

MEDIOS DE CULTIVO LINEAS HPLC-Ms

CELULARES
RESULTADOS LS180

Es muy probable que la inhibición e inducción de CYP1A2

se atribuya a la nobiletina, sinensetina y tangeretina .
ABSTRACTO
CONCLUSION

Por lo tanto, la relevancia clínica de las interacciones de las clementinas. , se debe

informar el contenido de flavonoides porque podrían explicar las diferencias entre
cultivares y cosechas.
INTRODUCCIÓN
Los flavonoides… (Rodríguez-Fragoso et al., 2011).

ST
N

La inhibición de las enzimas metabolizadoras de fármacos (Guengerich, 1997; Lund, Petersen y Dalhoff,
2017).
 La inducción está mediada
principalmente por factores
de transcripción, el
receptor X de pregnano
(PXR) y el receptor de
hidrocarburos arilo (AhR),
que aumentan la
transcripción de sus genes
diana cuando se activan
con fármacos o alimentos.

Por el contrario, la inducción de estas proteínas podría

provocar el fracaso del tratamiento (Guengerich, 1997; Lund
y col., 2017 ).
 En nuestro estudio anterior, se revelaron fuertes efectos
inductores y / o inhibidores para varios genes regulados
por PXR (Guengerich, 1997; Lund y col., 2017;
Para las clementinas / jugo Rodríguez-Fragoso et al., 2011).
de clementina, fuimos los
primeros en informar una
CYP450 CYP3A4 ABCB1
posible interacción (Theile
et al., 2017).

Paciente con trasplante

renal con alto consumo de
clementinas (> 1 kg / d),
analizamos el potencial de
interacción entre FA (Theile
et al., 2017).
Dado que las clementinas no contienen furanocumarinas (CYP3A4), (Ho, Saville y
Wanwimolruk, 2001; Pan et al., 2011), es necesaria la identificación de los
compuestos responsables.
Furanocumarinas Hesperidina y
narirutina

OBJETIVO
Identificar compuestos en el jugo de clementina que provocaron los
efectos observados.
Aislamos la fracción flavonoide total y, luego de verificar que se
preservaron los efectos de inducción / inhibición, analizamos las
subfracciones y flavonoides individuales no solo para la inhibición de
CYP1A1 y CYP3A4, sino también para la inducción de genes impulsados
por AhR (CYP1A1 y CYP1A2) y PXR(CYP3A4 y ABCB1).
 MATERIALES
Medios de cultivo celular
Cristal violeta

DMSO (Dimetilsulfóxido)
Penicilina

α naftoflavona
suero fetal de ternera (FCS)
GenElute
sulfato de estreptomicina
Narirutina
aminoácidos no esenciales
Hesperidina
Glutamina
solución salina tamponada
con fosfato (PBS)
 METODOLOGÍA
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES STOCK
SOLUCIÓN MADRE DE
SOLUCIÓN MADRE DE RIFAMPICINA EN
FLAVONOIDES DIMETILSULFÓXIDO (DMSO)

Se diluyeron con
soluciones
Amortiguadoras.
100ml 100ml
PREPARACIÓN DE JUGO DE CLEMENTINA

pH ajustado
a 7.0 con
NaOH (10M)

100% Puro Almacenado a -80°C

hasta el fraccionamiento
 AISLAMIENTO DE FRACCIONES DE FLAVONOIDES POR HPLC
PREPARATIVA
HPLC Se recogieron
las
Dilución ml
2 fracciones
1:1 (v/v) tó
yec rudo entre 23 y 41
in c minutos.
Se jugo Se combinaron
1m
l
Jugo de El análisis se llevó
clementina acabo a 278 nm.
l
1m
Se disolvieron en 2,0
ml de H2O/MDF 1:1
HPLC acoplado
v/v Se evaporaron a sequedad
a análisis de
espectrometría

DMF(dimetilformamida)

Reanálisis
 LINEAS UTILIZADAS
Suplementado

células s Células AZ-AhR

Cu a da

M
LS180 ltiv tiv

m
a l
Cu

2
Una línea celular da Receptor que

a
s

in
co %
de l 10 contiene varios

m
n a

ta
adenocarcinoma FCS sitios de unión de

lu
G
de colon humano AhR

Aminoácidos
DMEM
(Cultivo Higromicina 0.2
no esenciales
mg/ml
0.1 mM celular)

Pe
ni
cil
in
a
10
0U
/ m
l
Sustituto del intestino. Sulfato de
estreptomicina
100ug/ml
 INHIBICIÓN DE CYP3A4 CYP1A2

Fracciones de Flavonoides
Didimina, hesperidina,
flavonoides individuales
nobiletina, sinensetina.

Los
experimentos
se realizaron

0.125uM

0.25uM

1.25uM

12.5uM

250uM
125uM
2.5uM
por

25uM
0.025%

0.125%

12.5%
0.25%

1.25%

2.5%

25%
triplicado.
Tangeretina

Debido a la
baja

0.0125uM

0.025uM

0.125uM

0.25uM

1.25uM

12.5uM
solubilidad

2.5uM

25uM
se aplicaron
diferentes
 ENSAYO DE INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO

células Flavonoides individuales

LS180 Didimina, hesperidina, nobiletina,
sinensetina.

0.125uM
Se cuantificó

0.25uM

1.25uM

12.5uM

250uM
125uM
2.5uM

25uM
Violeta cristal
Tangeretina

Efecto anti
Los
proliferativo

0.0125uM
experimentos

0.125uM
0.025uM

0.25uM

1.25uM

12.5uM
de las

2.5uM

25uM
0.025%

0.125%

se realizaron
12.5%
0.25%

1.25%

2.5%

fracciones de 25% por

clementina.
cuadriplicado.
Efecto anti proliferativo de los
flavonoides.
FLAVONOIDES Concentraciones
Máximas
Fracción 10%
Flavonoide
Tangeretina 10uM
Nobiletina 50uM
didimina 100uM
hesperidina, 100uM
Narirutina 100uM
Sinensetina 100uM
Para mantener la Supervivencia celular de al menos del 80%
las concentraciones deben ser< IC20.
 ENSAYO DE INDUCCIÓN Didimina,
Fracciones de hesperidina,
flavonoides Tratadas durante 4 días narirutina y
con
sinensetina
ó Flavonoides 10uM 50uM 100uM
células individuales
LS180
1% 5% 10% Tangeretina Nobiletina

Control positivo
Para genes dirigidos
por AhR
β-Naftoflavona 10uM
2uM 10uM 20uM 5uM 10uM 50uM El ARN se
Células AZ-AhR extrajo
Control
positivo
después de
Para genes recolectar
dirigidos por Medio libre de compuestos sirvió
las células.
PXR como control negativo para todos
Rifampicina 20uM
los genes.
 ARN Aislado Kit Genenlute

ADN Sintetizado Kit revertAid

CYP1A1,
CYP1A2, Se
CYP3A4 y determinaron
ABC1
 Más estable bajo
tratamiento con:
glucuronidasa β (GU) Fracciones de flavonoides
y didimin
glucosa-6-fosfato deshidrogenasa Narirutina, hesperidina y
(G6PDH) nobiletina.
hipoxantina-guanina fosforribosil sinensetina
transferasa (hPRT)
β2-microglobulina (β2 mg) Tangeretina
 ENSAYO DEL GEN INFORMADOR PXR
FRACCIONES
Flavonoide total
(0.05-10%) Indujeron
ENSAYO CYP3A4 y
(activación de
DE ABCB1
PxR)
LUCIFERASA Tangeretina (0.1-
20 µM)
 ENSAYO DEL GEN INFORMADOR AhR
FRACCIONES
Flavonoide total
(0.05-10%) Indujeron
ENSAYO CYP3A4 y
(activación de
DE ABCB1
PxR)
LUCIFERASA
SUB FRACCIONES
Tangeretina (0.1-20
µM)

Nobiletina 0.1-20uM

Sinensetina 0.5.20uM

Sub fracción de
flavonoide I (0.5-10%)
 Preparación de la fracción flavonoide total y subfracciones
flavonoides del jugo de clementina
Mas abundantes pero
de cc muy bajas ( <
1mg/dl)

Compuesto Se excluyo
no flavonoide por no tener
(acido actividad
fenólico) inductora
(PXR)
Inhibición de CYP1A2 por fracciones de flavonoides y flavonoides individuales

Mayor inhibición

No se observo
inhibición con la
subfracciones I-III

0.025 %
 Flavonoides individuales
Mayor inhibición
Mayor inhibición

0.25 uM
0.25 uM
 Mayor inhibición

0.0125 uM
Inhibición de CYP3A4 por fracciones de flavonoides y
flavonoides individuales

Mayor inhibición

0.025 %
 FLAVONOIDES INDIVIDUALES

Mayor inhibición

0.125 uM
Inducción de ARNm de CYP3A4, ABCB1, CYP1A1 y CYP1A2 por fracciones de flavonoides y flavonoides
individuales
Inducción de ARNm de CYP3A4, ABCB1, CYP1A1 y CYP1A2 por fracciones de flavonoides y flavonoides
individuales
Activación de PXR por fracciones de flavonoides y
flavonoides individuales

Cc = 0.1 uM
Cc = 10% Cc = 20 uM
Cc = 0.005%
Activación de AhR por fracciones de flavonoides y
flavonoides individuales

Cc = 0.1 uM
Cc = 0.5 uM Cc = 20 uM
Cc = 20 uM
Nobiletina
20 uM
 DISCUSIÓN
(Obermeier, White y Yang, 1995; Pan y col., 2011; Siess,
(Obermeier, White y Yang, 1995; Rat
PanyySuschetet,
col., 2011;1995)
Siess, (Weiss, Barreca, Gatusso, Emil 2020)
Leclerc, Canivenc-Lavier, (Weiss, Barreca, Gatusso, Emil 2020)
Leclerc, Canivenc-Lavier, Rat y Suschetet, 1995)

Tangeretina y sinensetina

INHIBICION
MAS POTENTE
Nobilentina Primer informe que evalúa la
interacción con CYP1A2.
FT
S
T
SUB-FRACCION I SUB-FRACCION III N

Inhibidores Contribuyen o causan la inhibición de CYP1A2

potentes de observada con el jugo de clementina y su fracción
CYP1A2. SUBFRACCION IV flavonoide.
Los flavonoides individuales, la
subfraccion 1 y los flavonoides Activaron los receptores Ahr logrando así
individuales nobiletina, sinensetina y inducción de CYP1A1 Y CYP1A2.
tangeritina.

Resultados concordaron con los de Canivenc

1996 en el cual describían a la tangeritina como
inductor de CYP1A1/A2.
Tangeritina
Activo PXR e indujo CYP3A4

Estos resultados coinciden con los datos

obtenidos de Satsu et al 2008 en el por medio de
un ensayo de gen informador en células LS180
demostraron que la tangeritina activaba PXR
Kumar y col, 2012
Hung et al., 2018;
encontraron que:

Sin embargo
la concentraciones (3-5 µM)
biodisponibi
lidad de
nobiletina y
Compuestos en jugo de clementina
tangeritina
no fueron
altas. Estas CC. pueden ser lo suficiente
alta para inhibir o inducir el Intestino
CYP450.
Pero nunca a sido medido en el
plasma, por ende solo
Bolli y col 2010

UNEN

Por lo tanto parece poco probable que las concentraciones sistémicas de

estos flavonoides después de la ingestión de jugos de clementina, alcancen
concentraciones lo suficientemente altas como para ejercer interacciones
entre alimento y medicamento.
En Nuestro paciente renal sustrato
inmunosupresor del
CYP3A4
INTERACCIÓN

De Castro, Mertens-Talcott (2006)

La probabilidad de la interacción Hohmann et al, 2019

depende de la cantidad de la fruta Realizaron un análisis de clementinas en
ingerida otro lote y no encontraron nobiletina,
y su composición, que varía de lotes sinencetina ni tangeritina y tampoco
y cosechas. inhibía el CYP450.
 LIMITACIONES DEL ESTUDIO

No investigamos todos los Por lo tanto, podríamos haber pasado por alto
otros que contribuyen a los efectos observados
compuestos flavonoides presentes para el jugo de clementina nativa.
en la fracción flavonoide total.

No investigamos todos los

posibles efectos aditivos y
sinérgicos.
 CONCLUSION
PXR
INHIBEN

Ah
CYP1A2 INDUCEN R

Hasta que se disponga de estudios

clínico, los pacientes que toman
sustratos de CYP3A o CYP1A
,deben considerar restringir al
mínimo el consumo de clementinas
o jugo de clementina.
Gracias